CN114660193A

CN114660193A - 一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法

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Publication number: CN114660193A
Application number: CN202210205332.8A
Authority: CN
Inventors: 孟芫茹
Original assignee: Beijing Asrl Technology Co ltd
Current assignee: Beijing Asrl Technology Co ltd
Priority date: 2022-03-02
Filing date: 2022-03-02
Publication date: 2022-06-24
Anticipated expiration: 2042-03-02
Also published as: CN114660193B

Abstract

本申请涉及分析化学的技术领域，具体公开了一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。该方法包括以下步骤：配置样品溶液，设置液相色谱仪参数，采用梯度洗脱方法对样品溶液进行分离；所用的色谱柱为十八烷基键合硅胶填料的色谱柱；所述样品溶液包括二羧酸单酯及其相关物；所述相关物选自二羧酸和二羧酸二酯。本申请能够快速、准确分离测定二羧酸单酯及其相关物，从而有效控制二羧酸单酯的质量。

Description

一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法

技术领域

本申请涉及分析化学的技术领域，具体涉及一种液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

背景技术

二羧酸单酯作为一种医药和农药中间体、尼龙、纤维、润滑油、增塑剂等主要的起始原料或添加剂，具有广泛的应用前景。但目前对于二羧酸单酯的制备过程反应条件苛刻，较难控制，从而导致反应不完全或反应过程中会产生较多副产物。而目前对于二羧酸单酯的反应监测主要是采取酸碱滴定的方法，该方法利用二羧酸单酯化合物中含有一个羧基，可以发生酸碱中和反应的原理，对物料中的羧基进行测定，最终计算杂质含量。

然而，当以二羧酸或二羧酸二酯为原料制备二羧酸单酯时，反应体系可能会同时存在二羧酸、二羧酸二酯及二羧酸单酯。同时，二羧酸单酯具有一定的不稳定性，在其储存过程中，二羧酸单酯会自发的变为二羧酸和二羧酸二酯。故利用酸碱滴定的方法测定计算的结果并不能反映体系的真实情况，尤其是当体系中二羧酸含量较高时，其结果偏差很大，故上述检测方法存在局限性。因此，目前急需一种在生产中能够快速、准确测定二羧酸单酯物料质量的方法。

发明内容

为了快速、准确分离测定二羧酸单酯及其相关物，有效控制二羧酸单酯的质量，本申请提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

本申请提供的一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，采用如下的技术方案：

一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，具体包括以下步骤：

(1)溶解待测样品，配置成样品溶液；

(2)设置液相色谱仪的参数；

(3)将步骤(1)配置的样品溶液注入液相色谱仪中，采用流动相梯度洗脱方法对所述样品溶液进行分离；所用的色谱柱为十八烷基键合硅胶填料的色谱柱；

所述流动相梯度洗脱方法为：0min时，流动相A为10％，流动相B为90％；0-3min，流动相A线性增加至10％-30％，流动相B线性减少至90％-70％；3-10min，流动相A为30％，流动相B为70％；10-10.5min，流动相A线性增加至30％-50％，流动相B线性减少至70％-50％；10.5-15min，流动相A为50％，流动相B为50％；15-15.5min，流动相A线性减少至50％-10％，流动相B线性增加至50％-90％；15.5min时，流动相A为10％，流动相B为90％；流动相A和流动相B均以体积百分比计。

本申请利用液相色谱法能够简单、快速、准确地分离与测定二羧酸单酯及其相关物，从而有效控制二羧酸单酯的质量。

本申请中，采用流动相梯度洗脱方法分离测定二羧酸单酯及其相关物，通过在一定时间内，改变流动相的极性，将二羧酸单酯及其相关物从色谱柱上逐一洗脱下来，从而达到物质分离的目的。

优选的，所述流动相A为有机相；所述流动相B为缓冲溶液。

优选的，所述流动相A为乙腈；所述流动相B为磷酸二氢钾。

优选的，所述磷酸二氢钾的浓度为0.05-0.15M。

在一个具体的实施方案中，所述磷酸二氢钾的浓度可以为0.05M、0.1M或0.15M。

在一些具体的实施方案中，所述磷酸二氢钾的浓度还可以为0.05-0.1M或0.1-0.15M优选的，所述磷酸二氢钾的pH为2-4。

在一个具体的实施方案中，所述磷酸二氢钾的pH可以为2、3或4。

在一些具体的实施方案中，所述磷酸二氢钾的pH还可以为2-3或3-4。

本申请中，选择乙腈与磷酸二氢钾作为流动相，并将磷酸二氢钾的浓度与pH调节在上述范围内，既能够使流动相带动样品在色谱柱中移动，同时流动相还能增加样品中各物质之间的分离度、确保较高的柱效，进而实现物质的有效分离。

液相色谱分析法的原理是基于待测样品中多种物质的极性不同，因此在流动相中的溶解度不同，从而实现物质间的有效分离。本申请采用乙腈作为流动相A，乙腈作为有机溶剂能将物质从色谱柱上洗脱下来；磷酸二氢钾作为流动相B，磷酸二氢钾作为缓冲溶液，能够延长物质在色谱柱上的保留时间，抑制样品解离，使样品始终保持分子状态。因此，采用乙腈-磷酸二氢钾作为流动相，可以快速、准确地实现样品的有效分离，并检测呈现出的色谱图具有良好的峰形。

优选的，所述参数包括色谱柱柱温，所述色谱柱柱温为20-30℃。

在一个具体的实施方案中，所述色谱柱柱温可以为20℃、25℃或30℃。

在一些具体的实施方案中，所述色谱柱柱温还可以为20-25℃或25-30℃。

优选的，所述参数还包括流动相的流速，所述流动相的流速为0.8-1.2mL/min。

在一个具体的实施方案中，所述流动相的流速可以为0.8mL/min、1mL/min或1.2mL/min。

在一些具体的实施方案中，所述流动相的流速还可以为0.8-1mL/min或1-1.2mL/min。

优选的，所述参数还包括进样量，所述进样量为10-20μL。

优选的，所述参数还包括检测波长，所述检测波长为200-220nm。

在一个具体的实施方案中，所述进样量可以为10μL，所述检测的波长可以为210nm。

本申请中，将液相色谱仪的参数设置在上述范围内，能够快速、准确地分离检测出二羧酸单酯及其相关物，且检测后呈现的色谱图中各峰的对称性好、峰高适宜、出峰位置居中、各物质间的出峰位置相差较远，分离效果明显。

优选的，所述样品溶液中包括二羧酸单酯及其相关物；所述相关物选自二羧酸和二羧酸二酯。

相关物为二羧酸单酯合成后体系残留的原料或生成的副产物，或二羧酸单酯储存过程中自发转变生成的杂质，包括二羧酸和二羧酸二酯。本申请提供的方法可以有效分离测定二羧酸单酯、二羧酸和二羧酸二酯，且分离测定的方法快速、准确。

优选的，所述十八烷基键合硅胶填料的色谱柱选自Silgreen C18色谱柱，规格为250×4.6mm，5μm。

本申请采用Silgreen C18色谱柱的色谱柱，该色谱柱为十八烷基键合120A°孔径的硅胶填料的色谱柱，具有高理论塔板数，优异的分离性能及重现性好等优势，可以有效分离测定二羧酸单酯及其相关物。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

1.本申请提供了一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，该方法利用十八烷基键合硅胶填料的色谱柱，并采用梯度洗脱的方法对二羧酸单酯及其相关物进行分离测定，上述方法具有简单、快速、准确的特点，可以有效分离测定二羧酸单酯及其相关物。

2.本申请提供的用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法中，将乙腈与磷酸二氢钾的混合溶液作为流动相，既延长了物质在色谱柱上的保留时间，又能改善各物质之间的分离度，因此可以快速、准确地实现二羧酸单酯与相关物之间的有效分离。

3.本申请采用液相色谱法对二羧酸单酯及其相关物进行分离测定，并通过紫外光谱图扫描，扫描呈现的色谱图中各峰的对称性好、峰高适宜、出峰位置居中、各物质的出峰位置相差较远，分离效果明显。

4.本申请提供的方法能够简单、快速、准确分离测定二羧酸单酯及其相关物，解决了相关技术中二羧酸单酯及其相关物分离与测定较为困难的问题，从而有效控制二羧酸单酯的质量。

附图说明

图1是实施例3提供的用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法流程图。

具体实施方式

本申请提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，如图1所示，具体包括以下步骤：

(1)用溶剂对待测样品进行溶解，配置成浓度为8-12mg/mL的样品溶液。所述溶剂为乙腈或10％乙腈与90％磷酸二氢钾的混合溶液。

(2)设置液相色谱仪中的参数为：色谱柱柱温为20-40℃；进样量为10-20μL；检测的波长为200-220nm；流动相的流速为0.8-1.2mL/min。

(3)然后将步骤(1)配置的样品溶液注入液相色谱仪中，采用流动相梯度洗脱方法对样品溶液进行分离；所用的色谱柱为十八烷基键合120A°孔径的硅胶填料的SilgreenC18色谱柱，规格为250×4.6mm，5μm。

所述流动相A为有机相；所述流动相B为缓冲溶液。进一步的，所述流动相A为乙腈；所述流动相B为磷酸二氢钾。所述磷酸二氢钾的浓度为0.05-0.15M；所述磷酸二氢钾的pH为2-4。

Silgreen C18色谱柱购自北京绿百草科技发展有限公司；其余原料、试剂、溶剂等均可通过商购获得。

以下结合实施例1-17、对比例1-3及检测结果对本申请作进一步详细说明。

实施例

实施例1-5

实施例1-5分别提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述实施例的不同之处在于：流动相中磷酸二氢钾的浓度；具体如表1所示。

上述实施例的具体步骤如下：

(1)利用乙腈对待测样品进行溶解，配置成浓度为10mg/mL的样品溶液。

(2)设置液相色谱仪的参数为：色谱柱柱温为25℃；进样量为10μL；检测的波长为210nm；流动相的流速为1mL/min。

(3)然后将步骤(1)配置的样品溶液注入液相色谱仪中，采用流动相梯度洗脱方法对所述样品溶液进行分离；所用的色谱柱为十八烷基键合120A°孔径的硅胶填料的Silgreen C18色谱柱，规格为250×4.6mm，5μm。

流动相梯度洗脱方法为：0min时，乙腈为10％，磷酸二氢钾为90％；0-3min，乙腈线性增加至10％-30％，磷酸二氢钾线性减少至90％-70％；3-10min，乙腈为30％，磷酸二氢钾为70％；10-10.5min，乙腈线性增加至30％-50％，磷酸二氢钾线性减少至70％-50％；10.5-15min，乙腈为50％，磷酸二氢钾为50％；15-15.5min，乙腈线性减少至50％-10％，磷酸二氢钾线性增加至50％-90％；15.5min时，乙腈为10％，磷酸二氢钾为90％；乙腈和磷酸二氢钾均以体积百分比计；其中，磷酸二氢钾的浓度为0.1M，pH为3。

表1实施例1-5提供的方法中磷酸二氢钾的浓度

实施例	磷酸二氢钾浓度(M)
		1	0.02
2	0.05
		3	0.10
4	0.15
		5	0.18

实施例6-9

实施例6-9分别提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述实施例与实施例3的不同之处在于：流动相中磷酸二氢钾的pH；具体如表2所示。

表2实施例3、实施例6-9提供的方法中磷酸二氢钾的pH

实施例10-13

实施例10-13分别提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述实施例与实施例3的不同之处在于：色谱柱的柱温；具体如表3所示。

表3实施例3、实施例10-13提供的方法中色谱柱的柱温

实施例	色谱柱的柱温(℃)
		3	25
10	15
		11	20
12	30
		13	35

实施例14-17

实施例14-17分别提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述实施例与实施例3的不同之处在于：流动相的流速；具体如表4所示。

表4实施例3、实施例14-17提供的方法中流动相的流速

实施例	流动相的流速(mL/min)
		3	1.0
14	0.5
		15	0.8
16	1.2
		17	1.5

对比例

对比例1

对比例1提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述对比例与实施例3的不同之处在于：流动相A为甲醇。

对比例2

对比例2提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述对比例与实施例3的不同之处在于：流动相B为醋酸钠缓冲溶液。

对比例3

对比例3提供一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法。

上述对比例与实施例3的不同之处在于：分离鉴定所用的色谱柱为Symmetry C8(MOS)的色谱柱。

检测结果

通过以上实施例1-17提供的方法对二羧酸单酯及其相关物进行分离测定，并通过紫外光谱图判定二羧酸单酯及其相关物的分离情况，分离情况结果如5所示：

表5实施例1-17中二羧酸单酯及其相关物的分离情况

根据表5中实施例1-17、对比例3分离情况结果可以看出，实施例1-17提供的采用Silgreen C18色谱柱的方法均可以分离测定二羧酸单酯及其相关物；而对比例3提供的采用Symmetry C8(MOS)色谱柱的方法并不能分离测定二羧酸单酯及其相关物。因此，本申请采用十八烷基键合硅胶填料的色谱柱，可以有效地分离二羧酸单酯及其相关物，且分离效果好、分离速度快。对比实施例1-5的分离情况可知，随着磷酸二氢钾浓度的升高，二羧酸单酯及其相关物分离效果逐渐变好，呈现的紫外谱图中各峰的吸收逐渐变强，但当磷酸二氢钾浓度＞0.15M时，容易导致系统堵塞，。因此说明，本申请将磷酸二氢钾的浓度控制在0.05-0.15M范围内，能够快速、有效的分离二羧酸单酯及其相关物。尤其实施实施例3提供的方法，对于二羧酸单酯及其相关物的分离效果最好，其紫外谱图中各物质的出峰位置相差较远，且分离检测用时较短。

结合实施例6-9的分离情况，通过对比发现，当流动相中磷酸二氢钾的pH＜2时，虽然能够分离二羧酸单酯及其相关物，但由于磷酸二氢钾的pH较低，会对色谱柱的使用寿命造成严重影响；当流动相中磷酸二氢钾的pH＞4时，二羧酸单酯及其相关物在紫外光谱图中呈现的谱图出现了明显的拖尾现象；因此，本申请将磷酸二氢钾的pH控制在2-4之间时，二羧酸单酯及其相关物在紫外光谱图中的出峰位置相差较远，峰形良好，可以有效分离二羧酸单酯及其相关物。

对比实施例10-13的分离情况可知，随着色谱柱柱温的增加，分离测定二羧酸单酯及其相关物的速度加快，分离检测的用时变短；但当色谱柱的温度＞30℃时，对于物质的分离效果略有影响。因此，本申请将色谱柱柱温控制在20-30℃之间，能够快速、有效分离二羧酸单酯及其相关物。

对比实施例14-17的分离情况可知，随着流动相流速的增加，分离测定二羧酸单酯及其相关物的速度加快，分离检测的用时变短；但当流动相的流速＞1.2mL/min时，对于物质的分离效果略有影响。因此，本申请将流动相流速控制在0.8-1.2mL/min之间，可以快速、有效分离二羧酸单酯及其相关物。

对比实施例3、对比例1-2的分离情况可知，实施例3提供的采用乙腈作为流动相A，磷酸二氢钾作为流动相B的方法，能够将二羧酸单酯及其相关物从色谱柱上依次洗脱下来，从而实现二羧酸单酯及其相关物的有效分离；而对比例1提供以甲醇作为流动相A来分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，分离检测时间长，且检测呈现的谱图吸收太强，出峰位置很高，因此不适合用于分离二羧酸单酯及其相关物；对比例2提供的以醋酸钠缓冲溶液作为流动相B来分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，虽然能够分离二羧酸单酯及其相关物，但是检测呈现的谱图吸收很弱，所以也不适合用于分离测定二羧酸单酯及其相关物。因此，本申请提供的方法中采用乙腈-磷酸二氢钾作为流动相，能够快速、有效分离二羧酸单酯及其相关物。

综上所述，本申请提供的用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法能够简单、快速、准确分离测定二羧酸单酯及其相关物，并且检测出的谱图的峰形对称性好，峰高适宜，各物质之间的分离较明显；有效解决了相关技术中二羧酸单酯及其相关物分离与测定较为困难的问题，保证了二羧酸单酯的质量可控。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种用液相色谱法分离测定二羧酸单酯及其相关物的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

（1）溶解待测样品，配置成样品溶液；

（2）设置液相色谱仪的参数；

（3）将步骤（1）配置的样品溶液注入液相色谱仪中，采用流动相梯度洗脱方法对所述样品溶液进行分离；所用的色谱柱为十八烷基键合硅胶填料的色谱柱；

所述流动相梯度洗脱方法为：0min时，流动相A为10%，流动相B为90%；0-3min，流动相A线性增加至10%-30%，流动相B线性减少至90%-70%；3-10min，流动相A为30%，流动相B为70%；10-10.5min，流动相A线性增加至30%-50%，流动相B线性减少至70%-50%；10.5-15min，流动相A为50%，流动相B为50%；15-15.5min，流动相A线性减少至50%-10%，流动相B线性增加至50%-90%；15.5min时，流动相A为10%，流动相B为90%；流动相A和流动相B均以体积百分比计。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为有机相；所述流动相B为缓冲溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为乙腈；所述流动相B为磷酸二氢钾。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾的浓度为0.05-0.15M。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾的pH为2-4。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述参数包括色谱柱柱温，所述色谱柱柱温为20-30℃。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述参数还包括流动相的流速，所述流动相的流速为0.8-1.2mL/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述参数还包括进样量，所述进样量为10-20μL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品溶液中包括二羧酸单酯及其相关物；所述相关物选自二羧酸和二羧酸二酯。

10. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述十八烷基键合硅胶填料的色谱柱为Silgreen C18色谱柱，规格为250×4.6mm，5μm。