CN114656676A - 一种聚醚砜微球、制备方法及应用 - Google Patents

一种聚醚砜微球、制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114656676A
CN114656676A CN202210177541.6A CN202210177541A CN114656676A CN 114656676 A CN114656676 A CN 114656676A CN 202210177541 A CN202210177541 A CN 202210177541A CN 114656676 A CN114656676 A CN 114656676A
Authority
CN
China
Prior art keywords
microspheres
polyether sulfone
polyethersulfone
preparation
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210177541.6A
Other languages
English (en)
Inventor
魏强
肖锷
苏姗
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Meibai Biomedical Co ltd
Original Assignee
Hunan Meibai Biomedical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan Meibai Biomedical Co ltd filed Critical Hunan Meibai Biomedical Co ltd
Priority to CN202210177541.6A priority Critical patent/CN114656676A/zh
Publication of CN114656676A publication Critical patent/CN114656676A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
    • C08J9/26—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof by elimination of a solid phase from a macromolecular composition or article, e.g. leaching out
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/12—Powdering or granulating
    • C08J3/14—Powdering or granulating by precipitation from solutions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0656—Adult fibroblasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2381/00—Characterised by the use of macromolecular compounds obtained by reactions forming in the main chain of the macromolecule a linkage containing sulfur with or without nitrogen, oxygen, or carbon only; Polysulfones; Derivatives of such polymers
    • C08J2381/06—Polysulfones; Polyethersulfones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2513/00—3D culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/30—Synthetic polymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Manufacture Of Porous Articles, And Recovery And Treatment Of Waste Products (AREA)

Abstract

本发明公开一种聚醚砜微球、制备方法及应用。聚醚砜微球的制备方法包括：将聚醚砜或聚砜加入到良溶剂中搅拌溶解，得质量分数为1‑30wt％的聚醚砜溶液；将所述聚醚砜溶液滴入聚醚砜的非良溶剂中进行相分离，得微球；将所述微球加入到所述良溶剂中超声，二次溶解并去除所述微球的表皮层，得到聚醚砜微球。聚醚砜微球由所述方法制成，该方法或聚醚砜微球可用于3D细胞培养、细胞或细胞外基质的提取。本发明提供的制备方法成本低，工艺简单易实现，可提高培养细胞的效率，并保证细胞的良好生长；聚醚砜微球具有良好的生物相容性和机械性能，能使细胞能进入孔内，有利于细胞黏附，作为3D培养细胞的培养基具有很好的应用前景。

Description

一种聚醚砜微球、制备方法及应用
技术领域
本发明涉及用于3D细胞培养的生物材料技术领域，尤其涉及一种聚醚砜微球、制备方法及应用。
背景技术
3D细胞培养是能在细胞培养过程中为细胞提供一个更加接近体内生存条件的微环境的培养技术。其原理为利用多孔微球载体密度与水相近使贴有细胞的微球载体悬浮在培养液中，确保高质量、高密度的细胞繁殖，突破了传统有盖培养皿、培养瓶或微孔板细胞培养耗时繁琐，细胞产量微小等局限性。
聚醚砜微球是3D细胞培养中常用的载体，相分离是制备聚醚砜微球常用的方法，已被广泛应用于生物、医药和环境等领域。其制备原理为采用聚醚砜的非良溶剂作为凝固浴，基于聚醚砜的非良溶剂对聚醚砜的良溶剂可以互溶，但对聚醚砜的溶解度低的原理，当聚醚砜溶液的液滴滴入聚醚砜的非良溶剂中时，聚醚砜的不良溶剂能和聚醚砜的良溶剂快速交换发生液-液相分离，随着交换的完成，得到聚醚砜微球。但是由该方法制备出的聚醚砜微球表面致密，有效黏附面积小，待培养的细胞只能黏附在微球的表面，培养效率低。
发明内容
本发明的目的之一在于克服现有技术中所述的缺陷，从而提供一种聚醚砜微球的制备方法，采用该方法所得的聚醚砜微球具有良好的生物相容性和机械性能，能使细胞进入微球的孔内，实现细胞的3D培养和良好的生长；
本发明的另一目的在于提供一种由上述制备方法获得的聚醚砜微球，该聚醚砜微球比表面积大，可提高细胞的培养效率；
本发明的再一目的在于将所述制备方法或所述聚醚砜微球用于制备3D培养基以生产人源细胞外基质(ECM)，同时通过溶解该3D培养基实现细胞或ECM的提取。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种聚醚砜微球的制备方法，包括以下步骤：
将聚醚砜或聚砜加入到良溶剂中搅拌溶解，得质量分数为1-30wt％的聚醚砜溶液；
将所述聚醚砜溶液滴入聚醚砜的非良溶剂中进行相分离，得微球；
将所述微球加入到所述良溶剂中超声，二次溶解并去除所述微球的表皮层，得到聚醚砜微球。
本申请采用液液相分离技术，将聚醚砜或聚砜等原料溶解在良溶剂中，再将溶液滴加到原料的非良溶剂却与原料的良溶剂互溶的液体中，从而可以获得微球，该微球具有可吸附细胞等物质的致密表皮层，本申请还进一步将该微球置入良溶剂中进行了超声处理，实现二次溶解，从而去掉微球表面的皮层，得到互穿多孔、比表面积大的聚醚砜微球，该聚醚砜微球具有良好的生物相容性和机械性能，能使细胞能进入孔内，有利于细胞黏附，提高培养细胞的效率，从而实现细胞的3D培养并保证细胞的良好生长。
在一些实施例中，所述微球去除表皮层后还进行了清洗烘干的步骤。
在一些实施例中，所述良溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二乙基甲酰胺、二甲基亚砜和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种；优选地，所述良溶剂为N,N-二甲基乙酰胺；所述聚醚砜的非良溶剂选自水、乙醇和甲醇中的一种或几种。
在一些实施例中，所述搅拌溶解后还进行静置除气泡的步骤，所述静置的时间为12-36h。
在一些实施例中，所述聚醚砜溶液采用注射器滴入聚醚砜的非良溶剂中，所述注射器的针头直径为0.4-4.5mm；当针头直径小于0.4mm时，所形成的微球过小，有效吸附面积不足，当针头直径大于4.5mm时，无法顺利形成微球。本申请中所述微球的直径为0.5-10mm；可选地，所述微球的直径为2mm。
在一些实施例中，所述微球在超声处理前先进行干燥处理直至含水量为1-10wt％；所述超声的时间为1-600s。
一种聚醚砜微球，采用上述制备方法制成。
在一些实施例中，所述聚醚砜微球，用作3D细胞培养的载体；优选地，所述聚醚砜微球的直径为0.5-10mm；进一步地，所述聚醚砜微球的直径为2mm。
本发明还提供所述制备方法，或者所述聚醚砜微球在3D细胞培养、细胞或细胞外基质提取中的应用。
在一些实施例中，所述3D细胞培养的步骤包括对所述聚醚砜微球进行去除残余溶剂、灭菌和烘干处理的步骤，然后加入细胞悬浮液中进行培养，获取载有细胞的聚醚砜微球。本申请中去除残余溶剂的方法为将聚醚砜微球置于聚醚砜的非良溶剂(如去离子水)中浸泡，从而置换出残余溶剂。
在一些实施例中，所述灭菌处理为采用72-75wt％的酒精进行灭菌，并在无菌环境下用PBS缓冲液清洗10次以上。
在一些实施例中，所述烘干处理包括采用鼓风干燥箱在50-100℃的温度下将所述聚醚砜微球烘干至水含量低于1wt％的步骤。
在一些实施例中，所述细胞或细胞外基质提取的步骤包括对所述载有细胞的聚醚砜微球进行培养，使细胞增殖并分泌细胞外基质，然后加入所述良溶剂溶解所述载有细胞的聚醚砜微球并过滤，实现细胞或细胞外基质的提取；可选地，所述良溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本申请采用液液相分离技术，将聚醚砜或聚砜等原料溶解在良溶剂中，再将溶液滴加到原料的非良溶剂却与原料的溶剂互溶的液体中，从而可以获得微球，该微球具有可吸附细胞等物质的致密表皮层，本申请还进一步将该微球置入良溶剂中进行了超声处理，实现二次溶解，从而去掉微球表面的皮层，得到互穿多孔、比表面积大的聚醚砜微球，该制备方法成本低，工艺简单易实现；
采用上述方法制得的聚醚砜微球具有良好的生物相容性和机械性能，能使细胞能进入孔内，有利于细胞黏附，作为3D培养细胞的培养基具有很好的应用前景；
本发明所提供的制备方法，或者聚醚砜微球可用于3D细胞培养、细胞或细胞外基质的提取，提高培养细胞的效率，并保证细胞的良好生长，而细胞和细胞外基质的提取操作非常简单，可通过置换实现溶剂的重复利用。
附图说明
图1为本发明实施例1所提供的微球的扫描电子显微镜图；
图2为图1中微球截面的扫描电子显微镜图；
图3为本发明实施例1所提供的聚醚砜微球的扫描电子显微镜图；
图4为图3中聚醚砜微球截面的扫描电子显微镜图；
图5为在实施例1所提供的聚醚砜微球上培养人的脂肪干细胞(hASC)五天的肌动蛋白激光共聚焦显微镜图；
图6为在实施例1所提供的聚醚砜微球上培养人的脂肪干细胞(hASC)十天的肌动蛋白激光共聚焦显微镜图；
图7为在实施例6所提供的聚醚砜微球上培养纤维细胞(L929)三天的扫描电镜图；
图8为为在实施例6所提供的聚醚砜微球上培养纤维细胞(L929)七天的扫描电镜图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例
本发明提供了一种聚醚砜微球的制备方法，包括以下步骤：
S1、将原料加入到良溶剂中，搅拌溶解后静置12h以上排除气泡得到质量分数为5-30wt％的聚醚砜溶液(简称PES溶液)；
在本申请中所用到的原料为聚醚砜(简称PES)或聚砜(简称PSf)，聚醚砜是由4，4'-双磺酰氯二苯醚在无水氯化铁催化下，与二苯醚缩合制得。聚砜又称聚砜树脂，英文名称为Polysulfone resin，分子式为(C27H22O4S)n。
所用到的良溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(简称DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(简称DMAC)、二甲基亚砜(简称DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(简称NMP)等或其混合溶液；
N,N-二甲基甲酰胺又称N-甲酰二甲胺或二甲基甲酰胺，N,N-二甲基甲酰胺为极性惰性溶剂。微有氯的气味，有吸湿性，能与水、乙醇、氯仿和乙醚等多数有机溶剂混溶，微溶于苯。
N,N-二甲基乙酰胺又称二甲基乙酰胺、二甲替乙酰胺、乙酰二甲胺、N-乙酰二甲胺、二甲基醯胺或N,N-二甲基乙酰胺/光谱级，能与水、醇、醚、酯、苯、三氯甲烷和芳香化合物等有机溶剂任意混合。
二甲基亚砜是一种含硫有机化合物，分子式为(CH3)2SO，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为“万能溶剂”。
N-甲基吡咯烷酮中文别名NMP、1-甲基-2吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮。能与水、醇、醚、酯、酮、卤代烃、芳烃和蓖麻油互溶。
S2、将所述PES溶液装入针头直径为0.4-4.5mm的注射器中，滴入PES的非良溶剂中，实现相分离，得到直径约0.5-10mm且表面致密的微球；在本申请中选择针头直径为0.4-4.5mm的注射器，当针头直径小于0.4mm时，所形成的微球过小，有效吸附面积不足，当针头直径大于4.5mm时，无法顺利形成微球，当针头直径为0.4-4.5mm时，所形成的微球的直径约为0.5-10mm。
在本申请中所用到的非良溶剂为水、乙醇、甲醇等或其混合溶剂，将PES溶液注入到期非良溶液中可以获得微球形态；
S3、将所述微球干燥至含水量为1-10wt％后加入DMF、DMAC、DMSO、NMP等良溶剂中超声1-600秒，实现二次溶解，以去掉表面皮层，清洗烘干后得到互穿多孔、比表面积大的聚醚砜微球。在该步骤中，所用到的良溶剂可选择与步骤S1中的一致，便于二次溶解，在超声之间先进行干燥，可提高微球与良溶剂的接触面，提高超声效率，具体超声的时间可根据实际需求设置，当然只要进行超声处理便会形成二次溶解，但若超声时间过短，二次溶解效果不好，若超声时间大于600s，则会影响微球的结构和强度。
本申请采用液液相分离技术，将聚醚砜或聚砜等原料溶解在良溶剂中，再将溶液滴加到原料的非良溶剂却与原料的良溶剂互溶的液体中，从而可以获得微球，该微球具有可吸附细胞等物质的致密表皮层，本申请还进一步将该微球置入良溶剂中进行了超声处理，实现二次溶解，从而去掉微球表面的皮层，得到互穿多孔、比表面积大的聚醚砜微球，该制备方法成本低，工艺简单易实现。
除此之外，本申请还提出了一种聚醚微球，该聚醚砜微球由上述制备方法制成。该聚醚砜微球可用作3D细胞培养的载体，优选地，所述聚醚砜微球的直径为0.5-4mm；进一步地，所述聚醚砜微球的直径为2mm。采用上述方法制得的聚醚砜微球具有良好的生物相容性和机械性能，能使细胞能进入孔内，有利于细胞黏附，作为3D培养细胞的培养基具有很好的应用前景。
本申请的实施例所提供的制备方法或者聚醚砜微球可用于3D细胞培养、细胞或细胞外基质提取。当用于3D细胞培养时，可先采用72-75wt％的酒精对聚醚砜微球进行灭菌，并在无菌环境下用PBS缓冲液清洗10次以上，烘干至含水量低于1wt％，然后加入到高浓度的细胞悬浮液中进行培养，获取载有细胞的聚醚砜微球，通常对细胞进行培养是为了获取细胞外基质或者细胞本体，此时，可以继续地对载有细胞的聚醚砜微球进行培养，鉴于各个步骤的反应条件可以根据现有的培养条件来合理选择，在此不作赘述，从而使聚醚砜微球上负载的大量细胞增殖并分泌细胞外基质，然后加入所述良溶剂溶解所述载有细胞的聚醚砜微球并过滤。采用本发明所提供的制备方法，或者聚醚砜微球可用于3D细胞培养、细胞或细胞外基质的提取，提高培养细胞的效率，并保证细胞的良好生长，而细胞会细胞外基质的提取操作非常简单，可通过置换实现溶剂的重复利用。
以下将通过具体实施例进一步地描述本发明。在以下具体实施例中，所涉及的操作未注明条件者，均按照常规条件或者制造商建议的条件进行。所用原料未注明生产厂商及规格者均为可以通过市购获得的常规产品。
实验例现有技术中聚醚砜微球的制备
将聚醚砜(PES)加入到N,N-二甲基乙酰胺(DMAC)中，搅拌溶解后静置12h排除气泡得到质量分数为20wt％的PES溶液，将所述PES溶液装入针头直径为1mm的注射器中滴入水中，实现相分离，清洗烘干后得到直径约2mm的聚醚砜微球。
如图1所示，采用现有技术制得的聚醚砜微球，其表面致密，观察微球的截面，如图2所示，具有孔结构形貌。
实施例1本发明聚醚砜微球的制备
将聚醚砜(PES)加入到N,N-二甲基乙酰胺(DMAC)中，搅拌溶解后静置12h排除气泡得到质量分数为20wt％的PES溶液，将所述PES溶液装入针头直径为1mm的注射器中滴入水中，实现相分离，清洗烘干后得到直径约2mm且表面致密的微球。
将所述微球干燥至含水量为5wt％后加入DMAC中超声200秒，实现二次溶解，获得聚醚砜微球。如图3所示，超声后微球的表面呈多孔网络结构形貌，而微球截面如图4所示，呈多孔结构形貌。
由实施例1与对比例可以看出，将微球置入良溶剂中进行超声处理，能够去掉微球的表皮层，得到互穿多孔、比表面积大的聚醚砜微球。
实施例2本发明聚醚砜微球的制备
将聚砜加入到等比例混合的DMF与DMSO中，搅拌溶解后静置24h排除气泡得到质量分数为10wt％的PES溶液，将所述PES溶液装入针头直径为0.4mm的注射器中滴入乙醇中，实现相分离，得到直径约0.5mm且表面致密的微球。
将所述微球干燥至含水量为5wt％后加入等比例混合的DMF与DMSO中超声1s，实现二次溶解，获得聚醚砜微球。
实施例3本发明聚醚砜微球的制备
将PES加入到NMP中，搅拌溶解后静置36h排除气泡得到质量分数为5wt％的PES溶液，将所述PES溶液装入针头直径为4.5mm的注射器中滴入甲醇中，实现相分离，得到直径约10mm且表面致密的微球。
将所述微球干燥至含水量为10wt％后加入NMP中超声600秒，实现二次溶解，获得聚醚砜微球。
实施例4采用聚醚砜微球培养并提取人的脂肪干细胞或其分泌物
将实施例1中的聚醚砜微球置于去离子水中浸泡，从而置换出残余溶剂，然后加入75wt％的酒精中灭菌，然后无菌PBS清洗10次，然后采用鼓风干燥箱在50℃的温度下烘干至水含量低于1wt％，再添加高浓度人的脂肪干细胞(hASC)悬浮液进行细胞培养，使细胞增殖并分泌细胞外基质，培养一段时间后得到载有大量细胞的聚醚砜微球。
图5为培养五天人的脂肪干细胞(hASC)的肌动蛋白激光共聚焦显微镜图，图6为培养十天人的脂肪干细胞(hASC)的肌动蛋白激光共聚焦显微镜图，由图5-6可以看出，人的脂肪干细胞(hASC)可以进入孔内且生长良好。
向该载有大量细胞的聚醚砜微球中加入DMAC进行溶解过滤，实现人的脂肪干细胞或人的脂肪干细胞的细胞外基质的提取。
实施例5采用聚醚砜微球培养并提取高浓度纤维细胞及其分泌物
将实施例1中的聚醚砜微球置于去离子水中浸泡，从而置换出残余溶剂，然后加入72wt％的酒精中灭菌，然后无菌PBS清洗10次，然后采用鼓风干燥箱在100℃的温度下烘干至水含量低于1wt％，再添加高浓度纤维细胞(L929)悬浮液进行细胞培养，使细胞增殖并分泌细胞外基质，培养一段时间后得到载有大量细胞的聚醚砜微球。如图7所示为培养三天纤维细胞(L929)的扫描电镜图，图8为培养七天纤维细胞(L929)的扫描电镜图，由图7-8可以看出，纤维细胞(L929)可以进入孔内且生长良好。
向该载有大量细胞的聚醚砜微球中加入DMAC进行溶解过滤，实现纤维细胞或纤维细胞的细胞外基质的提取。
由实施例4和实施例5可以看出，聚醚砜微球可使不同的细胞都进入到孔内，有利于细胞黏附，作为3D培养细胞的培养基具有很好的应用前景。使用多孔聚醚砜微球培养细胞，可以提高单位体积培养细胞的数目并增加细胞外基质的产量。通过简单的溶解获得细胞外基质，减小了细胞外基质提取的难度，增加了提取的效率。
以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种聚醚砜微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将聚醚砜或聚砜加入到良溶剂中搅拌溶解，得质量分数为1-30wt％的聚醚砜溶液；
将所述聚醚砜溶液滴入聚醚砜的非良溶剂中进行相分离，得微球；
将所述微球加入到所述良溶剂中超声，二次溶解并去除所述微球的表皮层，得到聚醚砜微球。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述良溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种；
所述聚醚砜的非良溶剂选自水、乙醇和甲醇中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌溶解后还进行静置除气泡的步骤，所述静置的时间为12-36h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚醚砜溶液采用注射器滴入聚醚砜的非良溶剂中，所述注射器的针头直径为0.4-4.5mm；所述微球的直径为0.5-10mm。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述微球在超声处理前先进行干燥处理直至含水量为1-10wt％；优选地，所述超声的时间为1-600s。
6.一种聚醚砜微球，其特征在于，采用如权利要求1-7中任一项所述的制备方法制成。
7.根据权利要求6所述的聚醚砜微球，其特征在于，用作3D细胞培养的载体；
优选地，所述聚醚砜微球的直径为0.5-10mm。
8.一种如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，或者权利要求6-7所述的聚醚砜微球，其在3D细胞培养、细胞或细胞外基质的提取中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述3D细胞培养的步骤包括对所述聚醚砜微球进行去除残余溶剂、灭菌和烘干处理的步骤，然后加入细胞悬浮液中进行培养，获取载有细胞的聚醚砜微球；
优选地，所述灭菌处理为采用72-75wt％的酒精进行灭菌，并在无菌环境下用PBS缓冲液清洗10次以上；
优选地，所述烘干处理包括采用鼓风干燥箱在50-100℃的温度下将所述聚醚砜微球烘干至水含量低于1wt％的步骤。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述细胞或细胞外基质提取的步骤包括对所述载有细胞的聚醚砜微球进行培养，使细胞增殖并分泌细胞外基质，然后加入所述良溶剂溶解所述载有细胞的聚醚砜微球并过滤，实现细胞或细胞外基质的提取；
优选地，所述良溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种。
CN202210177541.6A 2022-02-25 2022-02-25 一种聚醚砜微球、制备方法及应用 Pending CN114656676A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210177541.6A CN114656676A (zh) 2022-02-25 2022-02-25 一种聚醚砜微球、制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210177541.6A CN114656676A (zh) 2022-02-25 2022-02-25 一种聚醚砜微球、制备方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114656676A true CN114656676A (zh) 2022-06-24

Family

ID=82026599

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210177541.6A Pending CN114656676A (zh) 2022-02-25 2022-02-25 一种聚醚砜微球、制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114656676A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115386226A (zh) * 2022-08-25 2022-11-25 四川大学 一种聚醚砜抗氧化微球、其制备方法及用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1546660A (zh) * 2003-12-01 2004-11-17 四川大学 固定微生物的通孔膜微囊载体及其制备方法
CN105086454A (zh) * 2015-09-16 2015-11-25 苏州大学 一种耐高温聚醚砜纳米多孔微球及其制备方法
CN106282088A (zh) * 2016-08-30 2017-01-04 中国科学院长春应用化学研究所 一种微载体的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1546660A (zh) * 2003-12-01 2004-11-17 四川大学 固定微生物的通孔膜微囊载体及其制备方法
CN105086454A (zh) * 2015-09-16 2015-11-25 苏州大学 一种耐高温聚醚砜纳米多孔微球及其制备方法
CN106282088A (zh) * 2016-08-30 2017-01-04 中国科学院长春应用化学研究所 一种微载体的制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115386226A (zh) * 2022-08-25 2022-11-25 四川大学 一种聚醚砜抗氧化微球、其制备方法及用途
CN115386226B (zh) * 2022-08-25 2023-08-18 四川大学 一种聚醚砜抗氧化微球、其制备方法及用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bettahalli et al. Development of poly (l-lactic acid) hollow fiber membranes for artificial vasculature in tissue engineering scaffolds
EP2329010B1 (en) Device for renal cell expansion
WO2012069841A1 (en) Bioreactor
US11439727B2 (en) 3D printable bio gel and method of use
CN108567992B (zh) 一种用于脊椎损伤血管快速修复的3d打印生物墨水及其制备方法
CN114656676A (zh) 一种聚醚砜微球、制备方法及应用
CN105647860A (zh) 临床治疗级人胎盘底蜕膜来源的间充质干细胞(PDB-MSCs)无血清体外提取制备方法
CN104399130B (zh) 一种多孔脱细胞的组织工程软骨支架及制备方法
CN106924817B (zh) 一种超薄载体细胞片及其制备方法
KR102185580B1 (ko) 전기수력학 기반 3d 프린팅 공정을 이용한 다공성 3차원 섬유구조체 제조방법 및 이의 용도
CN113846016B (zh) 一种高通量多孔阵列芯片、装置、制备方法及应用
WO2017104558A1 (ja) 細胞培養用の中空糸膜および中空糸モジュール
CN108452378B (zh) 一种3d生物打印成型方法
CN101716381A (zh) 一种用于组织修复的纳米复合材料及其制备方法
CN206934376U (zh) 一种基质化去细胞神经支架
CN108553689B (zh) 一种具有纳米纤维微结构的丝素多孔微球及其制备方法
CN103159977A (zh) 一种聚乳酸多孔支架材料的制备方法
CN113508807B (zh) 一种卵巢常温保存液及其保存方法
CN114540275A (zh) 一种皮肤生物打印墨水及其制备方法与应用
CN114540293A (zh) 一种毛囊干细胞外泌体的分离方法及应用
Oh et al. Fabrication and characterization of epithelial scaffolds for hair follicle regeneration
Asadi et al. Retinoic acid-loaded core-shell fibrous scaffold for neuronal differentiation of trabecular mesenchymal stem cells.
CN106754673A (zh) 一种培养基底的修饰方法及间充质干细胞分离扩增方法
CN111643731A (zh) 全氟十四酸修饰的多孔支架材料及其制备方法
CN109880152A (zh) 取向连通多孔生物医用支架的制备方法及其制备的支架和该支架在制备医疗产品中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination