CN114656540B - 蛋白质cyca3-1在提高玉米抗盐碱性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了蛋白质CYCA3‑1在提高玉米抗盐碱性中的应用。本发明公开的蛋白质CYCA3‑1为氨基酸序列是序列2的蛋白质；其编码基因为序列表中序列1所示的DNA分子，在玉米中的基因组序列为序列表中序列3。本发明的实验证明，在100mM NaHCO₃处理的条件下，CYCA3‑1过表达株系OX‑1、OX‑2、OX‑13表现出比野生型B73‑329更强的耐盐碱性，叶片较绿，株高更高。表明，CYCA3‑1可以正调控玉米的抗盐碱性。

Description

蛋白质CYCA3-1在提高玉米抗盐碱性中的应用

技术领域

本发明涉及蛋白质CYCA3-1在提高玉米抗盐碱性中的应用。

背景技术

玉米(Zea mays L.)是禾本科的一年生草本植物，原产于中美洲和南美洲，它是世界重要的粮食作物，广泛分布于美国、中国、巴西和其他国家。玉米与传统的水稻、小麦等粮食作物相比，玉米具有很强的耐旱性、耐寒性、耐贫瘠性以及极好的环境适应性。玉米的营养价值较高，是优良的粮食作物。作为中国的高产粮食作物，玉米是畜牧业、养殖业、水产养殖业等的重要饲料来源，也是食品、医疗卫生、轻工业、化工业等的不可或缺的原料之一。由于玉米资源极为丰富、廉价且易于获得，它们还具有许多生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、降血糖、提高免疫力和抑菌杀菌等，其具有广阔的开发及应用前景。

中国盐渍土或称盐碱土主要发生在干旱、半干旱和半湿润地区。盐碱土的可溶性盐主要包括钠、钾、钙、镁等的硫酸盐、氯化物、碳酸盐和重碳酸盐。硫酸盐和氯化物一般为中性盐，碳酸盐和重碳酸盐为碱性盐。许多新的基因或蛋白参与调控盐碱胁迫响应过程中，探索新的抵抗盐碱胁迫的基因，在提高作物抵抗盐碱胁迫中具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高玉米的抗盐碱性。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种来源于玉米的抗盐碱蛋白质，其名称为CYCA3-1，为如下A1)、A2)或A3)：

A1)氨基酸序列是序列2的蛋白质；

A2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有抗盐碱功能的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

上述A2)中的蛋白质，为与序列2所示蛋白质的氨基酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。所述具有75％或75％以上同一性为具有75％、具有80％、具有85％、具有90％、具有95％、具有96％、具有97％、具有98％或具有99％的同一性。

上述A2)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述A2)中的蛋白质的编码基因可通过将序列1所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上上表所示的标签的编码序列得到。其中，序列1所示的DNA分子编码序列2所示的蛋白质。

本发明还提供了与CYCA3-1相关的生物材料，为下述B1)至B7)中的任一种：

B1)编码CYCA3-1的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；

B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；

B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官。

上述生物材料中，B1)所核酸分子可为如下b11)或b12)或b13)或b14)或b15)：

b11)编码序列是序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子；

b12)序列表中序列1所示的cDNA分子或DNA分子；

b13)序列表中序列3所示的DNA分子；

b14)与b11)或b12)或b13)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1中CYCA3-1的cDNA分子或DNA分子；

b15)在严格条件下与b11)或b12)或b13)或b14)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中CYCA3-1的cDNA分子或DNA分子。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

上述生物材料中，所述严格条件可为如下：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mMEDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5MNaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M NaPO₄和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交,然后用2×SSC,0.1％SDS和1×SSC,0.1％SDS各洗膜一次；也可为：2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；也可为：0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

上述生物材料中，B2)所述的含有编码CYCA3-1的核酸分子的表达盒，是指能够在宿主细胞中表达CYCA3-1的DNA，该DNA不但可包括启动其基因转录的启动子，还可包括终止其基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。

可用现有的表达载体构建含有CYCA3-1编码基因表达盒的重组载体。

上述生物材料中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。所述载体具体可为pBCXUN载体。

上述生物材料中，所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。其中，细菌可为农杆菌，如农杆菌EHA105。

上述生物材料中，所述转基因植物细胞系、转基因植物组织和转基因植物器官均不包括繁殖材料。

CYCA3-1或所述生物材料在提高植物抗盐碱性性中的应用，也属于本发明的保护范围。

CYCA3-1或所述生物材料在植物育种中的应用，也属于本发明的保护范围。

上文中，所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。

进一步，所述单子叶植物可为禾本科植物。

更进一步，所述禾本科植物可为玉米。

本发明还提供了一种培育抗盐碱植物的方法，所述方法包括提高受体植物中CYCA3-1的含量，得到与所述受体植物相比盐碱抗性提高的目的植物。

本发明还提供了一种提高植物盐碱抗性的方法，所述方法包括提高受体植物中CYCA3-1的含量，得到与所述受体植物相比盐碱抗性提高的目的植物，实现植物盐碱抗性的提高。

上述方法中，提高受体植物中抗盐碱蛋白质的含量可通过向所述受体植物中导入CYCA3-1的编码基因并使所述编码基因表达实现。

所述编码基因可为B1)所述核酸分子。

上述方法中，所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。

进一步，所述单子叶植物可为禾本科植物。

更进一步，所述禾本科植物可为玉米。

所述目的植物理解为不仅包含所述抗盐碱蛋白质或其编码基因被改变的第一代植物，也包括其子代。对于所述目的植物，可以在该物种中繁殖该基因，也可用常规育种技术将该基因转移进入相同物种的其它品种，特别包括商业品种中。所述目的植物包括种子、愈伤组织、完整植株和细胞。

本发明的实验证明，在100mM NaHCO₃处理的条件下，CYCA3-1过表达株系OX-1、OX-2、OX-13表现出比野生型B73-329更强的耐盐碱性，叶片较绿，株高更高。与野生型B73-329相比，OX-1、OX-2、OX-13的株高分别提高了26％、27％和24％。表明，CYCA3-1可以正调控玉米的抗盐碱性。

附图说明

图1为NaHCO₃处理后的植株表型的照片。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。

下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA/RNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA/RNA的3′末端核苷酸。

下述实施例中的pBCXUN载体是将pCXUN载体(GenBank:FJ905215.1，06-JUL-2009)的HYG基因(hptII，潮霉素抗性基因)替换为Bar基因(编码膦丝菌素乙酰转移酶)(其序列为序列表中序列4)，保持pCXUN的其它核苷酸不变得到的表达载体。

下述实施例中的玉米(Zea mays L.)B73-329记载于“王芳,崔鹏娟,黄芸,王志文,王海峰,陈益芳.玉米磷吸收和再分配的分子机制,2018全国植物生物学大会论文集,2018年”一文中，公众可从申请人处获得该生物材料，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

实施例1、转基因玉米的构建

本实施例发现一个来源于玉米的蛋白质可以提高玉米的抗盐碱性，将该蛋白质记为抗盐碱蛋白质CYCA3-1，其氨基酸序列如序列表中序列2所示，在玉米中，CYCA3-1的基因组序列为序列表中序列3，其CDS序列为序列表中序列1。

1、重组载体的构建

将序列表的序列2所示的CYCA3-1编码基因插入pBCXUN载体中，得到重组载体pBCXUN-CYCA3-1，经测序验证所得重组载体序列的正确性。重组载体pBCXUN-CYCA3-1中，由Ubi启动子驱动外源DNA分子表达以得到CYCA3-1蛋白。

2、转基因玉米的构建

将步骤1得到的pBCXUN-CYCA3-1导入农杆菌EHA105菌株中，得到重组菌EHA105/pBCXUN-CYCA3-1。将重组菌EHA105/pBCXUN-CYCA3-1接种于含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL利福平的液体培养基中，28℃振荡培养过夜，第二天转接大量含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL利福平的液体培养基中震荡培养，转接几次后收集菌体，重新悬浮至OD₆₀₀在0.8-1.0之间，得到重组农杆菌悬浮液。采用获得的重组农杆菌菌悬液侵染无菌条件下扒出的玉米B73-329幼胚后，经诱导愈伤、除草剂草丁膦筛选得到幼苗，移入温室后在苗期进行标记基因BAR鉴定来选择转基因植株移入大田。T1代田间种植中会通过喷洒农药草丁膦来选择留下转基因植株，另外T1代后期设计CYCA3-1基因的特异引物进行表达量和拷贝数检测，进而获得可以稳定遗传的过表达转基因材料。其中，三个转基因株系分别为OX-1、OX-2、OX-13。过表达转基因植株经自交繁种后获得T3代进行后续实验。

标记基因BAR鉴定：在BAR基因的5’和3’端分别设计特异引物，合成该引物对，对植株的基因组DNA进行PCR扩增，能得到特异性扩增产物的植株为转基因植株，不能得到特异性扩增产物的植株为非转基因植株。

实施例2、转基因玉米的表型鉴定

待测玉米：实施例1的OX-1、OX-2、OX-13、玉米B73-329。设置五次重复实验，结果取平均值。

将待测玉米的种子种植于不含营养土的纯蛭石中，用1/2Hoagland’s营养液浇灌。玉米生长约7-10天后(三叶期)浇灌含100mM NaHCO₃的1/2Hoagland’s营养液，每7-10天浇灌一次，继续培养28天观察玉米长势以及叶片黄化程度，并测量株高。每种玉米设置5个重复。

结果如图1所示，在100mM NaHCO₃处理的条件下，CYCA3-1过表达株系OX-1、OX-2、OX-13表现出比野生型B73-329更强的耐盐碱性，叶片较绿，株高更高。与野生型B73-329相比，OX-1、OX-2、OX-13的株高分别提高了26％、27％和24％。

上述结果表明，CYCA3-1可以正调控玉米的抗盐碱性。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国农业大学

<120> 蛋白质CYCA3-1在提高玉米抗盐碱性中的应用

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1119

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 1

atggagaact ctgccgccgc cgccgccgaa cggccgcgcc tcacccgcgc agccgccaag 60

cgctcagccg tcgtcacggc tgtggccgtc gccgccaagc gcaagcgcgt cgcgctcagc 120

cagctgccca cgctccccaa cgccgtgctc ggcgcgcacg acgacgacga cgacaagccc 180

gtcaggaagc agcgcctcct ccccgccgcc aagcccaagc ccaagcccaa ggcagcgccc 240

gcgcctgccg cgcccgccgc cgcggatgac acggatgacg acattcagct ctgcaagccc 300

tacgcttccg acatctactc ctacctccgc tccatggagt cgcaggccaa gcgccgcctc 360

gctgttgact acatcgcggc ggtgcagatc gacgtcacgc ccaacatgcg tggcatcctc 420

atcgactggc tcgtcgaggt cgccgaggag tacaagctcg tctccgacac gctctacctc 480

accgtctcct acatcgaccg cttcctctct gccaaagttc tcaacaggca gaagctgcag 540

ctcctcggcg tctccgccat gctcatcgca tccaagtatg aggagatcag cccgcccaac 600

gtggaggatt tctgctacat caccgataac acctacacca agcaggaggt agttaagatg 660

gagagtgata tactgaatgt cctcaagttt gaggtgggca gtcctaccgc caagacgttc 720

ctgaggatgt tcatcagatc tgcccaagaa gacaacaaga agtatcctag cctccagttg 780

gagttcctgg ggagctacct ttctgagctg agcttgctgg attatggctt gattcgctcc 840

ttgccgtcac ttgttgcagc ctcagccgtc tttgttgcaa ggctgaccct ggatccacac 900

acccatccct ggagcaagaa ggtgcaaacg ctaacaggct ataagccatc tgagttgaag 960

gactgtgttg ctgccataca taatttgcag ctcaaccgga catgtcaatc catggtggcg 1020

atccgggaga aatacaggca acaccgattc aagggtgtat cagctttgct acctcctgtt 1080

gagatccctg catcatactt caatacactg aaggagtag 1119

<210> 2

<211> 372

<212> PRT

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 2

Met Glu Asn Ser Ala Ala Ala Ala Ala Glu Arg Pro Arg Leu Thr Arg

1 5 10 15

Ala Ala Ala Lys Arg Ser Ala Val Val Thr Ala Val Ala Val Ala Ala

20 25 30

Lys Arg Lys Arg Val Ala Leu Ser Gln Leu Pro Thr Leu Pro Asn Ala

35 40 45

Val Leu Gly Ala His Asp Asp Asp Asp Asp Lys Pro Val Arg Lys Gln

50 55 60

Arg Leu Leu Pro Ala Ala Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Ala Ala Pro

65 70 75 80

Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Ala Asp Asp Thr Asp Asp Asp Ile Gln

85 90 95

Leu Cys Lys Pro Tyr Ala Ser Asp Ile Tyr Ser Tyr Leu Arg Ser Met

100 105 110

Glu Ser Gln Ala Lys Arg Arg Leu Ala Val Asp Tyr Ile Ala Ala Val

115 120 125

Gln Ile Asp Val Thr Pro Asn Met Arg Gly Ile Leu Ile Asp Trp Leu

130 135 140

Val Glu Val Ala Glu Glu Tyr Lys Leu Val Ser Asp Thr Leu Tyr Leu

145 150 155 160

Thr Val Ser Tyr Ile Asp Arg Phe Leu Ser Ala Lys Val Leu Asn Arg

165 170 175

Gln Lys Leu Gln Leu Leu Gly Val Ser Ala Met Leu Ile Ala Ser Lys

180 185 190

Tyr Glu Glu Ile Ser Pro Pro Asn Val Glu Asp Phe Cys Tyr Ile Thr

195 200 205

Asp Asn Thr Tyr Thr Lys Gln Glu Val Val Lys Met Glu Ser Asp Ile

210 215 220

Leu Asn Val Leu Lys Phe Glu Val Gly Ser Pro Thr Ala Lys Thr Phe

225 230 235 240

Leu Arg Met Phe Ile Arg Ser Ala Gln Glu Asp Asn Lys Lys Tyr Pro

245 250 255

Ser Leu Gln Leu Glu Phe Leu Gly Ser Tyr Leu Ser Glu Leu Ser Leu

260 265 270

Leu Asp Tyr Gly Leu Ile Arg Ser Leu Pro Ser Leu Val Ala Ala Ser

275 280 285

Ala Val Phe Val Ala Arg Leu Thr Leu Asp Pro His Thr His Pro Trp

290 295 300

Ser Lys Lys Val Gln Thr Leu Thr Gly Tyr Lys Pro Ser Glu Leu Lys

305 310 315 320

Asp Cys Val Ala Ala Ile His Asn Leu Gln Leu Asn Arg Thr Cys Gln

325 330 335

Ser Met Val Ala Ile Arg Glu Lys Tyr Arg Gln His Arg Phe Lys Gly

340 345 350

Val Ser Ala Leu Leu Pro Pro Val Glu Ile Pro Ala Ser Tyr Phe Asn

355 360 365

Thr Leu Lys Glu

370

<210> 3

<211> 3289

<212> DNA

<213> 玉米（Zea mays L.）

<400> 3

ctgtctttct tcatgtgatt agtttgtaca tttgtcctag gactcattta cctgtaaagc 60

aacggcacac aaaaacagag agggaaacgc gtgcgcgcac acacaaaaaa aattgaaaaa 120

gagaaataaa gccctggtgc cagcttgcca ggtcagccac gaggcgccgg cgtccggcga 180

cgtgacgagc cagaacagaa accgaacgcc agcgccacgc acgcagcagc cactgaaatc 240

tcaaatacaa aaaatcaact cacggccccc gaaaactccc gcgctctccg caggcgggtg 300

gacgccgcgg cgcgtttgcg gcctcgcgcc aacactccca atttttttaa aaagaaaaat 360

tttttcccca atctttccct cgctccctcc ccctccacgg agtgtcgctg ccaaaactcg 420

aacgaatttc caaatcgagg ccgccgcgat cgaaaccggg aacccaaagc acccgaggct 480

cttccctcca accggagctc tcccaaatcc ttcgaatcca aaaataatgg cggcctcctc 540

tccctcccat tccccccgcc cccgtccgct acttaaccgc gcgcccgcca ccgcagcccc 600

aatcccctcc tccgccctcc gcctcctcag tgctccggcg cctagcgacc tgctcctgcc 660

cccgccgccg ccgtgcacgc acagccggag caggagcagc gctgcccgcc tttaccgttg 720

cccatggaga actctgccgc cgccgccgcc gaacggccgc gcctcacccg cgcagccgcc 780

aagcgctcag ccgtcgtcac ggctgtggcc gtcgccgcca agcgcaagcg cgtcgcgctc 840

agccagctgc ccacgctccc caacgccgtg ctcggcgcgc acgacgacga cgacgacaag 900

cccgtcagga agcagcgcct cctccccgcc gccaagccca agcccaagcc caaggcagcg 960

cccgcgcctg ccgcgcccgc cgccgcggat gacacggatg acgacattca gctctgcaag 1020

ccctacgctt ccgacatcta ctcctacctc cgctccatgg agtcgcaggc caagcgccgc 1080

ctcgctgttg actacatcgc ggcggtgcag atcgacgtca cgcccaacat gcgtggcatc 1140

ctcatcgact ggctcgtcga ggtcgccgag gagtacaagc tcgtctccga cacgctctac 1200

ctcaccgtct cctacatcga ccgcttcctc tctgccaaag ttctcaacag gcagaagctg 1260

cagctcctcg gcgtctccgc catgctcatc gcatcgtaag cagccgatcc gttaatctga 1320

ctcacccatt ttgcatgaat ggtgttccat ttctcatttg ctgggtccga ttcaaatcga 1380

tgcagcaagt atgaggagat cagcccgccc aacgtggagg atttctgcta catcaccgat 1440

aacacctaca ccaagcagga ggtgcgtgtt cctcctcctt tctgtatgct atcaacgcga 1500

tttgtctctg gatcttgcca ctggttgatt actaaatgtt aactggtccg tgcttgggga 1560

tctgtaggta gttaagatgg agagtgatat actgaatgtc ctcaagtttg aggtgggcag 1620

tcctaccgcc aagacgttcc tgaggtagat cacaaaccaa atcaatctga attggtcctg 1680

caatccttgt ctaccagaat gatcccattt ctaaattttg tgcgcccttt accttttgtt 1740

tcctaggatg ttcatcagat ctgcccaaga agacaacaag aaggtgagaa agatttgttg 1800

catttcaaca atgaaatctg ttcttgttcc aaatgcctgc tgcttgttta tgatgttgtc 1860

tgatttgtta tgttgtgatg catattgcag tatcctagcc tccagttgga gttcctgggg 1920

agctaccttt ctgagctgag cttgctggat tatggcttga ttcgctcctt gccgtcactt 1980

gttgcagcct cagccgtctt tgttgcaagg ctgaccctgg atccacacac ccatccctgg 2040

gtataatctc gatctgtttg atctctatac attcctgtct catcaaatac aaaccaccaa 2100

ctcattttgt tatgaacggg ttgcagagca agaaggtgca aacgctaaca ggctataagc 2160

catctgagtt gaaggactgt gttgctgcca tacataattt gcagctcaac cggacatgtc 2220

aatccatggt ggcgatccgg gagaaataca ggcaacaccg agtaagcttg ggctttgaca 2280

gctgtacatg gttgttagat tgtttgcata actctagtgt actaactgtg gaaaaatctt 2340

tgaacagttc aagggtgtat cagctttgct acctcctgtt gagatccctg catcatactt 2400

caatacactg aaggagtagg tgttccttga taatctagga gagccaagca cacagctttc 2460

ctcaagcaag atgtgcaatg ctaaggttgt tagggtactg aggttcttgg atgctgcatc 2520

taggctcggc ttggagcatt cagagttgat ttgtttgaag ttcaagctca atagaaagtt 2580

cggtgtatca aatcttgtac ttgtgtatca taattataca ttacaaccag gtgcctttat 2640

ttattggggg cacaattcca aagttttcat tcattgcctc ttactacata ttctcctttt 2700

ttattcatgt agttctagta cagaacacag tatttagtgt tcagttatat cagagggtag 2760

cttagggatg tattagacct tgctaccttg tcttggtaaa cacatgcaga aagccagaaa 2820

gtgatatgtt cttgacacaa gaaatgtgtc ctggaaagac tagatacttg gaacagttgt 2880

gaatgataat tatagcacaa tgtgcacctt taacgttaat tggaaaattg gccatgtgaa 2940

tgatcaaaat ttctaacaca atacatacat ttaaaaactg ttctcttttg tgtggcatgg 3000

accaataacc atttgaggct ctcttcaatc attcctctca aatccattca tactttctat 3060

tcacatttaa atacccctca actattctct ttcactccaa ctattcttcc tatttggctc 3120

cacttttatc ttccataggg gttgtaggca tgctcctgag tgtgaggggg cttggttgga 3180

ggcttggagc agctagggag agggaggaac atacactgaa acatgtaagg agaagtcgat 3240

agaaggaatc gttgaagacc agactgattc caaccatttc ccctcgtct 3289

<210> 4

<211> 735

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial sequence）

<400> 4

atgagacaga atggcgcggt gatgattcag tttggccatc agatgcctga ttacgactcc 60

ccggctaccc agtcaaccag tgagacgagc catcaagaag cgtctggaat gagcgaaggg 120

agcctcaacg agcataataa tgaccattca ggcaaccttg atgggtactc gaagagtgac 180

gaaaacaaga tgatgtcagc gttatccctg ggcaatccgg aaacagctta cgcacataat 240

ccgaagcctg accgtactca gtccttcgcc atatcatacc catatgccga tccatactac 300

ggtggcgcgg tggcagcagc ttatggcccg catgctatca tgcaccctca gctggttggc 360

atggttccgt cctctcgagt gccactgccg atcgagccag ccgctgaaga gcccatctat 420

gtcaacgcga agcagtacca cgctattctc cggaggagac agctccgtgc aaagctagag 480

gcggaaaaca agctcgtgaa aagccgcaag ccgtacctcc acgagtctcg gcacctgcac 540

gcgatgaaga gagctcgggg aacaggcggg cggttcctga acacgaagca gcagccggag 600

tcccccggca gcggcggctc ctcggacgcg caacgcgtgc ccgcgaccgc gagcggcggc 660

ctgttcacga agcatgagca cagcctgccg cccggcggtc gccaccacta tcacgcgaga 720

gggggcggtg agtag 735

Claims (9)

1.抗盐碱蛋白质或与所述抗盐碱蛋白质相关的生物材料在提高植物抗碱性中的应用；所述植物为单子叶植物；

所述抗盐碱蛋白质，为如下A1）或A2）：

A1）氨基酸序列是序列2的蛋白质；

A2）在A1）的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述生物材料，为下述B1）至B7）中的任一种：

B1）编码所述抗盐碱蛋白质的核酸分子；

B2）含有B1）所述核酸分子的表达盒；

B3）含有B1）所述核酸分子的重组载体、或含有B2）所述表达盒的重组载体；

B4）含有B1）所述核酸分子的重组微生物、或含有B2）所述表达盒的重组微生物、或含有B3）所述重组载体的重组微生物；

B5）含有B1）所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2）所述表达盒的转基因植物细胞系；

B6）含有B1）所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2）所述表达盒的转基因植物组织；

B7）含有B1）所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2）所述表达盒的转基因植物器官。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：B1）所核酸分子为如下b11）或b12）或b13）或b14）：

b11）编码序列是序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子；

b12）序列表中序列1所示的cDNA分子或DNA分子；

b13）序列表中序列3所示的DNA分子；

b14）与b11）或b12）或b13）限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且编码权利要求1中所述抗盐碱蛋白质的cDNA分子或DNA分子。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述单子叶植物为禾本科植物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述禾本科植物为玉米。

5.一种培育抗碱植物的方法，包括提高受体植物中权利要求1中所述抗盐碱蛋白质的含量，得到与所述受体植物相比碱抗性提高的目的植物；

所述受体植物为单子叶植物。

6.一种提高植物碱抗性的方法，包括提高受体植物中权利要求1中所述抗盐碱蛋白质的含量，得到与所述受体植物相比碱抗性提高的目的植物，实现植物碱抗性的提高；

所述受体植物为单子叶植物。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：提高受体植物中抗盐碱蛋白质的含量通过向所述受体植物中导入所述抗盐碱蛋白质的编码基因并使所述编码基因表达实现。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述单子叶植物为禾本科植物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述禾本科植物为玉米。

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