CN114652629B - 一种具有酪氨酸酶抑制活性的植物源成分组合物及用于制备祛斑美白化妆品的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有酪氨酸酶抑制活性的植物源成分组合物及用于制备祛斑美白化妆品的用途，该植物源成分组合物由鞣花酸和甘草素组成；其中，鞣花酸和甘草素的摩尔比为1:2。鞣花酸和甘草素在抑制酪氨酸酶活性方面存在明显的协同联合作用，可以有效抑制黑色素。因此，该植物源成分组合物可以作为美白活性成分用于制备包括面霜、精华液和面膜在内的祛斑美白的化妆品。

Description

一种具有酪氨酸酶抑制活性的植物源成分组合物及用于制备 祛斑美白化妆品的用途
技术领域
本发明属于化妆品领域，涉及一种具有酪氨酸酶抑制活性的植物源成分组合物及用于制备祛斑美白化妆品的用途。
背景技术
酪氨酸酶广泛存在于微生物、动植物和人体中，是参与黑色素生成过程的重要限速酶，其表达水平和活性决定着黑色素合成的速度和产量。抑制酪氨酸酶的活性，可改善皮肤中色素细胞的酪氨酸酶代谢，阻止色素沉着的形成，起到预防雀斑、黄褐斑、老年斑等的形成和美白等作用。目前常用的酪氨酸酶抑制剂，如曲酸、氢醌具有良好的抑制能力。寻找更有效的酪氨酸酶抑制剂的脚步从未停止。
鞣花酸最早提取自南美的塔拉树，是一种天然植物精华，具有较强的抗氧化活性，目前其主要来源于草莓和绿茶。鞣花酸具有抗黑色素的活性，具有美白祛斑用途。甘草素是甘草中的一种黄酮化合物，研究表明其具有较弱的酪氨酸酶抑制活性。
为了提高化学物质的药效，联合用药是一种重要的研究方向。
发明内容
本发明一是为了提供一种具有酪氨酸酶抑制活性的植物源成分组合物，二是为了提供该组合物用于制备祛斑美白化妆品的用途。
本发明技术方案如下：
一种具有酪氨酸酶抑制活性的组合物，由鞣花酸和甘草素组成；其中，鞣花酸和甘草素的摩尔比为1:2。
上述组合物用于制备祛斑美白的化妆品的用途。
进一步地，所述化妆品包括面霜、精华液和面膜。
更进一步地，所述面霜的配方如下：
Figure BDA0003576807990000011
Figure BDA0003576807990000021
有益技术效果：
联合用药的目的是为了实现1+1＞2的效果，本发明通过酪氨酸酶抑制试验证明鞣花酸和甘草素在抑制酪氨酸酶活性方面确实存在协同联合的作用。进一步地，本发明通过细胞试验证明了该组合物确实具有明显地抑制黑色素的作用。因此，该组合物可以用于制备包括面霜、精华液和面膜在内的祛斑美白的化妆品。
附图说明
图1中A为各组黑色素相对含量，B为western blot检测结果。
具体实施方式
实施例1：蛋白水平
蛋白水平试验设计参考南京中医药大学姜东生申请的专利CN110420129A。具体如下：
1、按文献方法配制磷酸钠缓冲液(1/15M，pH＝6.8)，4℃保存；
2、按文献方法配制L-酪氨酸溶液(7.5mmol/L)，4℃保存；
3、受试液：使用含有5％DMSO的水溶液(体积百分浓度，去离子水)按如下表格配制不同浓度的受试液，4℃保存；
Figure BDA0003576807990000022
4、按文献方法制备酪氨酸酶液，4℃保存。
5、酪氨酸酶抑制活性测定和协同作用评价
按照文献试验体系，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度的受试液和酪氨酸酶液，于30℃水浴10min。然后加入L-酪氨酸溶液，立即开始计时。测定反应20min时475nm波长下的吸光值。测定时以相应的阴性对照为参比，按公式计算受试液对酪氨酸酶的抑制率。
协同作用评价采用金正均q值法。
不同浓度的受试液对酪氨酸酶的抑制率和金正均q值计算结果见下表。
Figure BDA0003576807990000031
上述结果表明，鞣花酸和甘草素对酪氨酸酶均具有一定的抑制活性，甘草素比鞣花酸对酪氨酸酶的抑制活性弱；根据协同判别模型(金正均q值≥1.15)，二者联用存在明显的协同作用，在抑制酪氨酸酶活性方面显示了1+1＞2的技术效果。
实施例2：细胞水平
1、细胞培养
B16F10细胞为小鼠黑色素瘤细胞，黑色素含量高，是黑色素抑制试验的理想和常用模型细胞。将B16F10细胞接种在含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基中，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养，1～2d更换培养基，当细胞汇合度达到85％左右时，消化、传代。
2、待测样品溶液的配制
以含有5％DMSO的水溶液为溶剂配制含有鞣花酸和甘草素的待测样品母液。
3、对黑色素的抑制作用和机理研究
取对数生长期B16F10细胞，消化制成细胞悬液，接种于6孔板中，每孔2×105个细胞，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养；24h后，实验组更换为含有2.5μM鞣花酸+5μM甘草素、5μM鞣花酸+10μM甘草素的完全培养基，对照组更换为含有等体积溶剂的完全培养基，各设4个复孔(2块6孔板)，继续培养72h后，弃去上清液，PBS洗涤3次，使用细胞刮收集细胞后每孔加入细胞裂解液200μL，4℃充分裂解40min后，12000rpm离心20min，转移上清至EP管测定蛋白浓度。沉淀物中加入190μL 1mol/L的NaOH(含10％DMSO)裂解液，并于80℃水浴1h充分溶解后，在405nm处测定吸光值，最终的黑色素含量按公式使用相对蛋白浓度归一化处理：黑色素相对含量＝(OD405实验组/蛋白浓度)/(OD405对照组/蛋白浓度)×100％。
取对数生长期B16F10细胞，消化制成细胞悬液，接种于6孔板中，每孔2×105个细胞，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养；24h后，实验组更换为含有2.5μM鞣花酸+5μM甘草素、5μM鞣花酸+10μM甘草素的完全培养基，对照组更换为含有等体积溶剂的完全培养基，各设2个复孔，继续培养72h后，弃去上清液，PBS洗涤收集细胞，裂解，BCA法测定蛋白浓度，取等量蛋白进行SDS-PAGE电泳，浓缩胶80V、30min，分离胶90min，将凝胶湿转到PVDF膜，5％脱脂牛奶常温封闭2h，4℃下一抗TYR、GAPDH孵育过夜，PBST洗膜3次，每次约15min，取相应的二抗常温孵育1.5h，PBST洗膜3次，每次15min，PVDF膜采用碧云天ECL发光液，用发光仪进行显影，拍照分析。
4、试验结果
各组B16F10细胞中黑色素相对含量如下表和图1，与对照组相比，实验组B16F10细胞中黑色素含量显著降低，且呈现剂量效应。
Figure BDA0003576807990000041
Western blot结果如图1，与对照组相比，实验组TYR蛋白(酪氨酸酶)的表达水平显著下调。这说明抑制酪氨酸酶表达是鞣花酸和甘草素的组合物抑制黑色素合成的机制之一。
实施例3：化妆品应用
可以以鞣花酸和甘草素的组合物作为祛斑美白的活性成分用于制备面霜、精华液和面膜等祛斑美白的化妆品，以如下配方的面霜为例：
Figure BDA0003576807990000042
上述实施例说明，鞣花酸和甘草素在抑制酪氨酸酶活性方面存在明显的协同联合作用，可以有效抑制黑色素。因此，该植物源成分组合物可以作为美白活性成分用于制备包括面霜、精华液和面膜在内的祛斑美白的化妆品。

Claims (4)

1.一种具有酪氨酸酶抑制活性的组合物，其特征在于：由鞣花酸和甘草素组成；其中，鞣花酸和甘草素的摩尔比为1:2。
2.权利要求1所述的组合物用于制备祛斑美白的化妆品的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，所述化妆品包括面霜、精华液和面膜。
4.根据权利要求3所述的用途，所述面霜的配方如下：
Figure FDA0003576807980000011
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