CN114645019A - 一种逆境诱导表达的基因启动子kt626及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明为一种逆境诱导表达的基因启动子KT626及其应用，公开了一种在植物体中调控异源核苷酸序列表达的方法和DNA载体，该DNA载体包含一个新的植物逆境诱导表达启动子的核苷酸序列，并提供了使用本文所公开的逆境诱导表达启动子序列在植物中表达异源核苷酸序列的方法。

Description

一种逆境诱导表达的基因启动子KT626及其应用

技术领域

本发明属于植物生物工程和植物改良基因工程技术领域，具体涉及一种植物逆境诱导表达启动子的分离鉴定和应用。

背景技术

植物的生长速度除了有其固有的遗传基础外，往往还会受到诸多环境因素的影响，其中一些不利的植物逆境往往限制了植物正常生长，从而造成作物减产。 植物逆境是指对植物的正常生长发育有不利影响的环境因素。研究发现，对植物产生重要影响的逆境主要有干旱、低温、盐碱、高温等非生物逆境，以及病原体侵害等生物逆境。无论非生物逆境还是生物逆境都会造成各种农作物产量和质量的下降。植物逆境在许多地区是农业发展的瓶颈，因此，培育和推广抗逆品种是保证作物稳产高产的有效途径。利用植物自身的抗逆基因，通过常规育种和分子标记辅助育种方法可以培育抗逆新品种，然而，抗性基因在种属间的利用具有一定的局限性，而转基因方法可以克服上述局限，为作物抗逆育种开辟一条新的途径。

植物基因调控主要是在转录水平上进行的，受多种顺式作用元件和反式作用因子的相互协调。启动子是重要的顺式作用元件，是基因表达调控因子中最重要的因子，它基本决定一个基因是否表达、何时表达和何处表达，它一般位于功能基因的5’侧翼区域，能够与RNA聚合酶以及其他蛋白辅助因子等反式元件相结合，从而控制基因转录的起始和速度。根据其驱动基因表达的不同特点，启动子分为组成型启动子和特异性启动子。组成型启动子能在所有细胞或组织中，不分时间和空间地启动转录；特异性启动子又可分为组织特异性启动子和诱导型启动子。

诱导型启动子是指其控制的基因在某些特定的物理、化学和生物信号（统称为“诱导子”或“诱导因子”）的刺激下，可以大幅度地增加转录水平。其特征为，该类型启动子控制的基因在没有诱导因子存在的条件下不表达或者只有非常低的表达（也称为“本底表达”），但一旦受到诱导因子的诱导，基因的表达量迅速并且大幅度增加。诱导性启动子具有广阔的应用前景。与其它类型启动子相比，诱导型启动子有着独特的优点：它可根据需要在植物特定的发育阶段、组织器官或生长环境下，快速诱导基因转录的“开”与“关”。

外源DNA序列通过连接到特定的启动子从而启动在植物宿主中的表达，启动子类型的选择决定基因的表达时间和部位。目前在农业生物技术领域广泛应用的主要是一些组成型的强启动子，比如CaMV 35S启动子和玉米Ubiquitin-1启动子（Battraw and Hall，1990; Christensen et al. 1992），然而在利用这些启动子诱导目的基因转化水稻等作物以期改良作物的品质时，往往会由于目的基因表达的时间（发育阶段特异性）或空间（组织器官特异性）不能很好地控制而导致改良效果不明显，或者由于这些组成型启动子诱导基因表达量太高而对植物的生长发育造成影响，这些都是目前利用组成型强启动子结合功能基因来改良作物品质时遇到的障碍。因此，利用逆境诱导型启动子或组织特异型启动子来控制基因特异性表达越来越受到重视，利用逆境诱导型启动子来控制抗逆基因的表达越来越受到重视，一些逆境应答的启动子，如SalT启动子（Garcia等，The epression of thesalt-responsive gene salt from rie is regulated by hormonal and developmentalcues，Planta.207:172-180,1998）等也已经鉴定出来并尝试了在一些作物的抗逆改良中应用。

发明内容

本发明内容给出了本发明的一些实施方式，以及在多种情况中给出了这些实施方式的变动和变更。本发明内容只是很多的和不同的实施方式的示例，所提及的给定实施方式示例也是一个或多个代表性的特点。这样一个实施方式通常可以具有或不具有所提及的特点；同样，这些特点也可以被施用于本发明的其他实施方式中。为了避免过多的重复，本发明内容没有罗列或提及这些特点的所有可能的组合。

本发明提供了一种植物逆境诱导型启动子的核苷酸序列，及克隆并应用该启动子的方法。在一些实施方式中，方法包括（a）将基因核苷酸序列可操作地连接于包括序列SEQID No：1的启动子KT626P，以产生表达盒；和（b）生成包括该表达盒的转基因植物，由此在植物中表达所述基因核苷酸。在一些实施方式中，所述“生成”包括用表达盒转化植物细胞并从所转化的转基因植物细胞中再生出转基因植物。

本发明中所述“表达盒”是指由一个或多个基因及调控其表达的元件所组成，主要含有三种组分：启动子序列、开放阅读框和终止子。表达盒通常是DNA载体用于克隆和转化的组成部分，不同的表达盒在使用正确的调控序列的前提下，可以被转入不同的物种，如细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞等。在每一个成果的转化体中，表达盒可以通过调控宿主细胞的代谢运行机制来产生相应的目的RNA和蛋白质，实现基因的过表达或表达抑制等调控结果。

本文中“启动子”一词指DNA调控序列，其中通常含有一个TATA盒，该序列能够指导RNA聚合酶II在合适的转录起始位点上起始特定编码序列的转录。启动子也可另外含有其他识别序列，它们通常位于TATA盒的上游或5’端，被称作上游启动子元件，这些元件能够影响转录速率。应认识到当鉴别了本文所公开的启动子区域的核苷酸序列后，分离并鉴定位于本文所鉴别的特定启动子区域上游的其它调控元件就属于现有技术范围了。因此，本文公开的启动子区域可另外包含上游调控元件，如负责组织特异性和时间特异性表达的元件、调控组成型表达的元件和增强子等。

本发明所提供的植物逆境诱导表达启动子KT626P，含有序列表中SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。本领域技术人员应知道，在已知一个启动子序列的功能后，通过缺失、突变或增加几个核苷酸或一段核苷酸，一般都不会影响启动子的原有功能。因此，本发明中来源于水稻的逆境诱导型启动子可为所述序列表中SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，也可为与所述核苷酸序列具有95％以上相似性且具有相同功能的DNA序列。

本发明中的启动子核苷酸序列可用于从其它生物中分离相应序列，如其它植物（单子叶或双子叶植物等）。根据这些相应序列与本文所列序列间的序列同源性，使用如PCR、杂交等技术来鉴别分离这些相应序列。因此，根据它们与本发明所示启动子序列（或其片段）间的序列相似性而分离的相应片段，也包括在实施方案中。实施方案的启动子区域可从任何植物中分离，包括（但不限于）水稻、芸苔属、玉米、小麦、高粱、两节荠属、白芥、蓖麻子、芝麻、棉籽、亚麻子、大豆、拟南芥属、菜豆属、花生、苜蓿、燕麦、油菜籽、大麦、燕麦、黑麦（Rye）、粟、蜀黍、小黑麦、单粒小麦、斯佩尔特小麦（Spelt）、双粒小麦、亚麻、格兰马草（Gramma grass）、摩擦禾、假蜀黍、羊茅、多年生麦草、甘蔗、红莓苔子、番木瓜、香蕉、红花、油棕、香瓜、苹果、黄瓜、石斛、剑兰、菊花、百合科、棉花、桉、向日葵、芸苔、甜菜、咖啡、薯蓣、观赏植物和松类等。

本发明的实施例中也包括DNA构建体，该DNA构建体含有操作性连接于基因编码序列或核苷酸片段上的启动子，该启动子含有本发明公开的全部序列或部分序列，并可在植物细胞中驱动上述基因编码序列或核苷酸片段进行表达。本发明的实施方案还提供了表达载体，以及在基因组中稳定包含上述DNA构建体的植物或植物细胞。“操作性连接”指使异源核苷酸序列处于启动子作用下的连接方式，也指将两个核苷酸序列连接起来从而使每个DNA片段的编码序列都保持在适当的阅读框内。“异源核苷酸序列”指天然状态下没有与本文所述启动子序列操作性连接的序列，对于植物宿主来说可以是同源的，或是异源的。

本文所公开的逆境诱导表达启动子KT626P的启动子序列及其变异体和片段可用于植物基因工程，例如制备转化或转基因植物，以产生目的表型。“转化植物”或“转基因植物”指在基因组内含有异源核苷酸序列的植物。通常转化植物或转基因植物基因组稳定含有这些异源核苷酸序列，可将该异源核苷酸序列稳定地遗传给下一代。这些异源核苷酸序列可单独或与重组DNA 构建体一起存在于基因组中。这里所述的“转基因事件”包括任何细胞、细胞系、愈伤组织、组织、植物体部分或完整植物体，只要它们的基因型被外源核酸的存在而改变，包括通过转基因操作而改变的起始宿主，以及通过这些起始宿主进行有性或无性繁殖所得的后代。这里所用的“转基因事件”并不包括通过传统植物种植方法或天然事件（例如随机杂交、非重组病毒感染、非重组细菌转化、非重组转座或自发突变）改变了基因组（染色体或染色体外）的植物。

“转基因事件”通过以下步骤获得，使用外源DNA构建体（含有核酸表达盒，其中又含有目的基因）转化植物细胞，用基因组插入了外源DNA构建体的植物细胞再培养获得大量植物体，根据插入的外源基因进行筛选获得所需的阳性转基因系。转基因事件的典型表型特征是目的基因的表达。在遗传水平上，“目的基因”是植物基因组组成的一部分。“转基因事件”也指转基因植物体与其它植物体进行杂交所得的含有外源DNA的后代。

本文的“植物”包括整株植物、植物组织器官（如叶、根、茎等）、种子、植物细胞，以及它们的后代。实施方案中转基因植物的部分植株应理解为包括转基因植物或其后代的植物细胞、原生质体、组织、愈伤组织、胚，及从转基因植物或其后代长出的花、茎、果实、胚珠、叶或根等。

这里所用的“植物细胞”包括但不限于种子悬浮培养物、胚芽、分生组织区域、愈伤组织、叶、根、芽、配子、花粉、孢子体和小孢子。可用于本文所公开方法的植物种类包括所有可进行转化的高等植物，包括单子叶植物和双子叶植物。

本文所公开的启动子序列可在宿主植物中调控任何异源核苷酸序列的表达。因此，所述的异源核苷酸序列可以是操作性连接于本文所公开的启动子之上的结构基因（编码目的蛋白）。实施方案中的目的基因包括参与信号传导调控的基因如转录因子、激酶等，持家基因如热休克蛋白基因。更具体地说，转基因的种类包括如，所编码蛋白赋予植物耐受非生物逆境的抗性基因，所述非生物逆境包括干旱、温度、盐和毒素（杀虫剂和除草剂）等。或是所编码蛋白赋予植物耐受生物逆境的抗性基因，如真菌、病毒、细菌、昆虫和线虫的侵害，以及由这些胁迫引起的疾病。表型的编码包括改变植物中某个基因的表达，从而改变植物对病原体或昆虫等的防御机制，或是提高植物对除草剂的抗性，根据环境改变植物的生长发育过程等。这些改变可通过在植物体内表达外源基因或提高内源特定基因的表达来获得。或者是通过降低植物体内一个或多个内源基因的表达产物，如酶、转运蛋白、辅因子等，通过影响植物的代谢机制来获得相应的表型。

由上可见，可将任何目的基因操作性连接到实施方案中的启动子序列上，并在植物体中进行表达，优选在经受逆境诱导处理的植物中表达。

根据RNA干扰技术（RNA interference，RNAi），操作性连接于本文所公开的KT626P逆境诱导表达启动子上的异源核苷酸序列，可以是某些靶基因的反义序列。“反义核苷酸序列”指一段与靶基因核苷酸序列互补的双链RNA分子。当导入到植物细胞中后，反义DNA序列的转录能阻止靶基因DNA序列的正常表达。反义核苷酸序列编码的RNA转录产物可与靶基因转录生成的内源 mRNA 互补，并可与其杂交，由此，靶基因编码的天然蛋白的合成就受到限制，从而获得相应的表型。

下面通过具体实施方式，结合附图对本发明做进一步详细描述，但不以任何方式限制本发明的范围。

附图说明

图1 是KT626::GUS基因的逆境诱导表达谱。其中GUS基因的序列如SEQ ID No：2所示，长度为1812bp 。KT626::GUS为GUS基因的扩增产物；ACTIN为水稻内参基因ACTIN的扩增产物；CK为正常生长对照；D1为干旱处理至叶片微卷时；D2为干旱处理至叶片半卷时；D3为干旱处理至叶片全卷时；S1为盐处理至叶片微卷时；S2为盐处理至叶片半卷时；S3为盐处理至叶片全卷时。

图2是表达载体pHPG的T-DNA区图谱。LB和RB分别为T-DNA的左边界和右边界；hpt表示潮霉素抗性基因；Pnos表示nos基因的启动子；Tnos表示nos基因的终止子；GUS表示gus蛋白基因；T35s表示35s基因的终止子；HindIII和 BamHI分别表示限制性内切酶HindIII和BamHI的酶切位点；诱导型启动子即为本发明所分离鉴定的逆境诱导表达启动子。

图3是KT626P转基因水稻的组织器官GUS染色。A为幼苗期水稻GUS染色；B为幼苗期水稻干旱处理后的GUS染色；C为花干旱和盐处理后的GUS染色；D为幼苗期水稻盐处理后的GUS染色。

图4是KT626P转基因水稻成苗期的组织器官GUS染色。A：正常水稻成苗的组织器官的GUS染色；B：干旱处理后水稻成苗的组织器官GUS染色。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所用引物均由上海英骏生物技术公司合成，测序由北京华大基因完成，PCR试剂盒、载体构建过程中的核酸内切酶购自宝生物工程有限公司，pEASY-T1连接试剂盒购自北京全式金生物技术公司，T4 DNA连接酶购自Promega公司，方法均参照试剂盒提供的方法进行。实验中所用的载体pHPG由本实验改造所得，基本骨架来自于CAMBIA公司的pCAMBIA1303。

1．KT626P驱动的GUS基因的逆境表达谱分析

选取两叶期的水稻中花11材料进行逆境处理。其中干旱处理的材料和样品在以下阶段收集：期1（D1）：叶轻微卷，相对含水量（RWC）在90%-95%；期2（D2）：叶半卷，相对含水量（RWC）在80%-85%；期3（D3）：叶完全卷，相对含水量在70%-75%。D1、D2和D3代表干旱处理的三个阶段。对每个处理阶段，取样三份。采样完毕，样品立即用液氮冷冻保存于-80℃。200mM高盐处理的材料和样品也分以上三个时期进行收集和保存。

分别提取以上各时期干旱和盐处理材料的总RNA，通过反转录得到cDNA，具体反应为：取约2μg的总RNA，加入1μL10×DNase buffer，1μL的DNase，补DEPC处理过的水至10μL体系，混匀，37℃温育30min后，加入1μL的RQ DNase stop solution，65℃温育10min以终止反应后，加入2μL Oligo(dT)18 primer(0.1μg/μL)，4μL 5× First-strand buffer，1μLRibonuclease inhibitor(40U/μL)，2μL 4×dNTP(各10mM)，1μL MMLV ReverseTranscriptase (200U/μL)，小心混匀，37℃保温1小时。然后70℃处理5分钟，冰上冷却，离心收集即获得相应的反转录产物cDNA。将得到的cDNA均稀释10倍，作为RT-PCR的扩增模板。

其中，GUS基因的RT-PCR检测引物是：

引物1：5' TAATGTTCTGCGACGCTCAC 3'

引物2：5' CGGCGAAATTCCATACCTG 3'

GUS基因的RT-PCR扩增片段是317bp。

Actin基因的RT-PCR引物：

引物3：5’- TGTTCCTGCCATGTATGT -3’

引物4：5’- ATGTCCCTCACAATTTCC -3’

ACTIN基因的RT-PCR扩增片段是252bp。

以上引物分别以经过上述干旱和200mM盐处理后的水稻幼苗cDNA为模板，阴性对照模板为正常生长的中花11幼苗cDNA，检测这些基因在盐处理和干旱处理中的表达变化，PCR检测体系和程序为：10×buffer，2μl；10mM dNTP，0.4μl；10 μM引物F，0.4μl ；10μM引物R，0.4μl；Taq polymerase，0.4μl；cDNA，1μl；ddH₂O，15.4μl。

PCR反应条件为：预变性：95℃,5分钟；变性：94℃，30秒，退火：55℃，30秒，延伸：72℃，30秒，28个循环；72℃，10分钟。

反应结束后，对PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，PCR检测结果见图1，其中：D表示干旱处理； S表示盐处理；字母后的数字1、2和3分别指干旱处理和盐处理的三个程度。KT626::GUS指GUS基因的扩增产物；Actin指水稻 actin 基因的扩增产物。可见，KT626P启动子驱动的GUS基因在水稻幼苗中呈干旱和高盐诱导性。

2．KT626P启动子的分离和鉴定

设计克隆启动子KT626P所需引物：

引物5：5'-CGaagcttGAGGGCACTTTAATTTTTCAT-3'

引物6：5'-CGggatccATTGCCAGCGAGTTCGCGCG-3'

引物5中序列aagctt为HindIII的酶切位点，引物6中序列ggatcc为BamHI的酶切位点。

利用启动子的正反向引物（其中带下划线部分的序列为启动子序列），以植物基因组DNA提取试剂盒（天根生化科技（北京）有限公司）提取的水稻(中花11)基因组DNA作为模板，进行扩增，反应条件是：95℃预变性5分钟；94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1分钟；30个循环；72℃延伸10分钟。反应结束后，PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测回收，产物连入pEASY-T1，筛选阳性克隆并进行测序验证，结果表明：所扩增序列为预期的KT626P启动子序列。

3．构建表达载体

将测序验证已经插入KT626P启动子序列的质粒用HindIII和 BamHI 双酶切，连入同样用HindIII和 BamHI 双酶切的载体pHPG，挑取菌落PCR结果为阳性的菌落进行测序，测序验证正确后，提取相应阳性克隆质粒，命名为pHPG-KT626P。

菌落PCR检测所需引物：

引物7：5'- TCTCCGCTCATGACGATAAT -3'

引物8：5'- GACGTAACATGGTGAAGGGG -3'

引物7和引物8为pHPG载体上引物，位于所克隆的启动子片段两侧，扩增片段约为启动子的长度，以菌液为模板，扩增检测，PCR反应条件为：95℃预变性5分钟；94℃变性30秒；55℃退火30秒；72℃延伸1分钟；34个循环；72℃延伸10分钟。

所构建的表达载体的T-DNA区的图谱如图2所示，其中：LB和RB分别为T-DNA的左边界和右边界；hpt表示潮霉素抗性基因；Pnos表示nos基因的启动子；Tnos表示nos基因的终止子；GUS表示gus蛋白基因；T35S表示35S基因的终止子；HindIII和 BamHI分别表示内切HindIII和 BamHI的酶切位点；逆境诱导启动子即为本发明所述的启动子。

4．农杆菌共转化

利用热激法将质粒pHPG-KT626P转入农杆菌AGL0菌株，利用农杆菌介导法对水稻进行共转化，同时利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥植株。

5．启动子功能鉴定

将转基因植株进行干旱和200mM盐处理后，进行GUS活性检测，将处理过的材料置于含有GUS染色缓冲液的EP管中，放于37℃温箱温育过夜，然后室温条件下在无水乙醇中脱色保存。

将苗进行200mM NaCl处理后，剪取叶片、茎和根等组织器官进行染色，结果如图3和图4所示，其中CK为正常处理的苗染色结果，Salt为盐处理后的染色结果。从图中可以清楚看出，经过盐处理后，叶片和茎的染色程度明显加深。

将苗置于空气中进行干旱处理后，剪取叶片、茎和根等组织器官进行染色，结果如图3C所示，干旱处理后，叶片和茎的染色程度加深，其中CK为正常处理的苗染色结果，Drought为干旱处理的苗染色结果。

SEQUENCE LISTING

<110> 未名生物农业集团有限公司

<120> 一种逆境诱导表达的基因启动子KT626及其应用

<130>

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1000

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)

<400> 1

gagggcactt taatttttca tcctcaccac taatatttct cgtgatacgg tttggcttat 60

tttagaaaaa aaaaattatc tccatttcaa aataagttaa tcaagaatat atcaaattcc 120

gtattagatt aatttattct gaaacggata ggacgaatgg agtagtaagt ctaaaatttt 180

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tgctagttaa aggcgagaca gctacttagg aaaaggagga taaaaacata aaatggaatt 420

tcaaaaggga aagggaaaag gaaatgaaac tagacccagt cctccgcacg agtccactgg 480

attaagcgcc tccctcccac gccacggcta caccaaaatt tgcccccact ctaactctcg 540

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cttttctgct cccagctgcc agctacgttg caaccccacc accggaaagc tacaccgtgc 840

gtttcatata agcagcgccc agtcgagcga gctcgaccgg caatagcaat agcgccaaga 900

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gcaagttggc cggtgataag cgcgcgaact cgctggcaat 1000

<210> 2

<211> 1812

<212> DNA

<213> 大肠杆菌(Escherchia coli)

<400> 2

atgttacgtc ctgtagaaac cccaacccgt gaaatcaaaa aactcgacgg cctgtgggca 60

ttcagtctgg atcgcgaaaa ctgtggaatt gatcagcgtt ggtgggaaag cgcgttacaa 120

gaaagccggg caattgctgt gccaggcagt tttaacgatc agttcgccga tgcagatttt 180

cgtaattatg cgggcaacgt ctggtatcag cgcgaagtct ttataccgaa aggttgggca 240

ggccagcgta tcgtgctgcg tttcgatgcg gtcactcatt acggcaaagt gtgggtcaat 300

aatcaggaag tgatggagca tcagggcggc tatacgccat ttgaagccga tgtcacgccg 360

tatgttattg ccgggaaaag tgtacgtatc accgtttgcg tgaacaacga actgaactgg 420

cagactatcc cgccgggaat ggtgattacc gacgaaaacg gcaagaaaaa gcagtcttac 480

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caacaggtgg ttgcaactgg acaaggcact agcgggactt tgcaagtggt gaatccgcac 720

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attggggcca actcctaccg tacctcgcat tacccttacg ctgaagagat gctcgactgg 1020

gcagatgaac atggcatcgt ggtgattgat gaaactgctg ctgtcggctt taacctctct 1080

ttaggcattg gtttcgaagc gggcaacaag ccgaaagaac tgtacagcga agaggcagtc 1140

aacggggaaa ctcagcaagc gcacttacag gcgattaaag agctgatagc gcgtgacaaa 1200

aaccacccaa gcgtggtgat gtggagtatt gccaacgaac cggatacccg tccgcaaggt 1260

gcacgggaat atttcgcgcc actggcggaa gcaacgcgta aactcgaccc gacgcgtccg 1320

atcacctgcg tcaatgtaat gttctgcgac gctcacaccg ataccatcag cgatctcttt 1380

gatgtgctgt gcctgaaccg ttattacgga tggtatgtcc aaagcggcga tttggaaacg 1440

gcagagaagg tactggaaaa agaacttctg gcctggcagg agaaactgca tcagccgatt 1500

atcatcaccg aatacggcgt ggatacgtta gccgggctgc actcaatgta caccgacatg 1560

tggagtgaag agtatcagtg tgcatggctg gatatgtatc accgcgtctt tgatcgcgtc 1620

agcgccgtcg tcggtgaaca ggtatggaat ttcgccgatt ttgcgacctc gcaaggcata 1680

ttgcgcgttg gcggtaacaa gaaagggatc ttcactcgcg accgcaaacc gaagtcggcg 1740

gcttttctgc tgcaaaaacg ctggactggc atgaacttcg gtgaaaaacc gcagcaggga 1800

ggcaaacaat ga 1812

Claims (14)

1.一种转化的植物细胞，其特征是含有一种启动子核酸分子，所述启动子核酸分子具有选自SEQ ID NO：1或其互补链的核酸序列。

2.权利要求1所述转化的植物细胞，其中所含的启动子核酸分子可与异源核苷酸序列操作性相连。

3.权利要求2所述转化的植物细胞，其中所含的异源核苷酸序列指天然状态下没有与所述启动子序列连接的序列，对于植物宿主来说可以是同源或是异源的。

4.权利要求2所述转化的植物细胞，其中所含的异源核苷酸序列编码的基因产物可赋予植物对除草剂、盐、低温、干旱、病原体或昆虫的抗性，或是调控植物的生长发育。

5.权利要求2所述转化的植物细胞，其中所含的异源核苷酸序列为靶基因的部分同源序列，以RNA干扰技术的方式抑制植物内源或外源基因的表达。

6.权利要求1所述转化的植物细胞，其中所述转化的植物细胞来自单子叶植物。

7.权利要求6所述转化的植物细胞，其中所述单子叶植物细胞来自禾本科植物，优选为水稻。

8.一种在植物中表达异源核苷酸序列的方法，所述方法包括向植物体导入特定表达盒，所述特定表达盒含有启动子及操作性连接于所述启动子的目的异源核苷酸序列，其中所述启动子含有的核苷酸序列选自：

a) SEQ ID NO：1所示的启动子核苷酸序列；

b）序列与SEQ ID NO：1所示序列至少有95%序列相似性的启动子核苷酸序列，其中所述启动子核苷酸序列可以在植物中呈现逆境诱导性表达。

9.一种启动子核酸分子，包含选自SEQ ID NO：1的分离的启动子。

10.一种植物表达载体，它含有权利要求9所述的启动子核酸分子。

11.一种细胞，它含有权利要求10所述的载体。

12.权利要求11所述细胞，其中所述细胞包括细菌细胞，哺乳动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或真菌细胞。

13.权利要求12所述细胞，其中所述细菌细胞来自根癌土壤杆菌或大肠杆菌。

14.权利要求12的细胞，其中所述植物细胞为水稻细胞。

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