CN114644686A - 一种用于dna疫苗递送系统及其应用和dna疫苗 - Google Patents

一种用于dna疫苗递送系统及其应用和dna疫苗 Download PDF

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Abstract

本发明属于疫苗领域，具体涉及一种疫苗递送系统、疫苗递送系统的应用和制备的DNA疫苗。本发明首先提供了一种多肽，所述多肽与多聚物形成递送系统能够与表达病毒抗原的DNA结合，并在生物体内递送，递送效率高、安全性好，能实现病毒抗原的DNA的高效表达，全面均衡的诱导体液及粘膜免疫应答，对DNA疫苗的研发和应用具有重要的意义；其次，以新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的Spike蛋白为抗原，制备了新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的DNA疫苗，实现了新型冠状病毒SARS‑CoV‑2DNA疫苗的体内递送，同时能够诱导血清中IgG抗体和肺部sIgA抗体的产生，在肺部形成效应记忆T细胞，用于DNA疫苗的制备。

Description

一种用于DNA疫苗递送系统及其应用和DNA疫苗
技术领域
本发明属于疫苗领域，具体涉及一种疫苗递送系统、疫苗递送系统的应用和制备的DNA疫苗。
背景技术
DNA疫苗(nucleic acid vaccine)被称为疫苗史上的第三次革命，包括DNA疫苗和mR NA疫苗，也称基因疫苗(genetic vaccine)。即将含有编码的蛋白基因序列的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。与传统的亚单位疫苗相比，DNA疫苗具有更多的优势，包括其具有超强的稳定性，设计灵活，利于大规模生产，以及不需要昂贵而繁琐的“冷链”存储运输。经DNA疫苗免后，抗原基因在一定时限内的持续表达，不断刺激机体免疫系统，产生持久的体液和细胞免疫。近年来，越来越受到研究者的重视，且在防治病毒/细菌感染等显示出了巨大的潜力。
E.J.Gowans通过设计编码寨卡病毒抗原NS1的DNA疫苗，实现了在小鼠体内诱导特异性体液免疫和T细胞免疫应答，且无抗体依赖性增强效应(antibody-dependentenhanceme nt，ADE)，显示了良好保护效果。Kate E.Broderick在新冠疫情爆发后数月内，设计编码新冠全长Spike蛋白的DNA疫苗，通过动物实验证实了该疫苗安全性好、保护率高，能够同时介导体液和细胞免疫，实现对机体长久的保护，目前该DNA疫苗正在进行临床II期实验。可见DNA疫苗对于病原体感染的防治具有极大的优势。David B Weiner研究指出，通过吸入性的DNA疫苗，能够诱导体液和细胞免疫，对于预防和治疗肺部疾病具有较好的应用潜力。
然而，若想DNA疫苗在机体中成功的发挥作用，必须克服体内的各种生理屏障，被靶细胞识别和摄取。这也成为限制DNA疫苗发展和应用的重要技术瓶颈。近年来，使用安全的药物递送系统将DNA疫苗高效而精准地递送至目标组织及靶细胞、最大程度提升其表达效率，是DNA疫苗发挥作用的重要因素。腺病毒载体基因转染效率高，但是腺病毒感染范围广泛、缺乏靶向性，使腺病毒载体在感染靶器官和靶细胞的同时可能导致其他正常组织细胞感染从而产生不良反应。现常用于DNA递送的非病毒载体如LNP、PEI或者电转染等方式仍存在很多不足，且在诱导粘膜免疫应答方面也能力较弱。因此开发新型、安全、高效的D NA疫苗递送体系对于DNA疫苗的研发和应用具有重要的意义。
发明内容
针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种疫苗递送系统、疫苗递送系统的应用和制备的DNA疫苗，具体包括以下内容：
第一方面，本发明提供了一种多肽，所述多肽为氨基酸序列如下P1-P6任一所示的多肽，或如下P1-P6任一氨基酸序列经缺失、插入或置换得到的与P1-P6序列所示多肽具有相同生物学功能的多肽衍生物：
P1：NH2-VETPHTEWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKACEAGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH；
P2：NH2-GETARETLARLARALARHLARALARALRACEAGSGTITHFQFGPTVY-COOH；
P3：NH2-IDTFKEYPRXRRBRRXRYQFLIRXRBRXRBGSGFAEKFKEAVKDYFAKFWD-COOH，其中B＝β-丙氨酸；X＝氨基己酸；
P4：NH2-FETAKESVGLFGAIAGFIENGWEGMIDGGSGFYPSYHSTPQRP-COOH；
P5：NH2-LEYGKDTPAGYLLGKLLOOLAAAALOOLLGSGCYTYQGKLC-COOH；
P6：NH2-VDTIKENPRQIKIWFQNRRMKWKKGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH。
第二方面，本发明提供了一种疫苗递送系统，所述疫苗递送系统包括多聚物和上述第一方所述的任一多肽；所述多聚物的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure BDA0003562120460000021
其中，4≤x≤30，2≤y≤114。
优选地，所述x＝14，y＝13。
优选地，所述多肽为氨基酸序列P1所示的多肽，
P1：NH2-VETPHTEWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKACEAGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH。
优选地，所述多聚物与所述多肽的质量浓度为比为1:10。
优选地，所述疫苗递送系统由浓度为1μg/μL-10μg/μL的多聚物溶液与浓度为0.1μg/μL-2μg/μL的多肽溶液混合获得。
优选地，所述多聚物溶液与所述多肽溶液的体积比为1:1。
第三方面，本发明提供了上述第二方面所述的疫苗递送系统在制备疫苗中的应用。
优选地，所述疫苗包括DNA疫苗、RNA疫苗。
第四方面，本发明提供了一种DNA疫苗，所述DNA疫苗包括上述第二方面所述的疫苗递送系统、表达抗原的基因片段/质粒。
优选地，所述抗原为冠状病毒Spike蛋白。
优选地，所述冠状病毒为新型冠状病毒SARS-CoV-2，所述冠状病毒Spike蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
优选地，所述DNA疫苗由上述第二方面所述的疫苗递送系统中的多聚物、多肽和表达抗原的基因片段/质粒溶液混合而成。
优选地，所述DNA疫苗中多聚物、多肽和表达抗原的基因片段/质粒的浓度比为1μg/μL-10μg/μL：0.1μg/μL-2μg/μL：0.1μg/μL-1μg/μL。
本发明的有益效果是：本发明首先提供了一种多肽，所述多肽与多聚物形成的递送系统能够与表达病毒抗原的DNA结合，并在生物体内递送，递送效率高、安全性好，能实现病毒抗原的DNA在肺部的高效表达，全面均衡的诱导体液及粘膜免疫应答；其次，本发明提供了一种用于DNA疫苗递送系统，所述DNA疫苗递送系统能够实现DNA疫苗的递送与表达，可用于制备DNA疫苗；最后，本发明以新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白为抗原，制备了新型冠状病毒SARS-CoV-2的DNA疫苗，实现了新型冠状病毒SARS-CoV-2DNA疫苗的体内递送，同时能够诱导血清中IgG抗体和肺部sIgA抗体的产生，同时在肺部形成效应记忆T细胞，因此可以制备DNA疫苗。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1DNA与多聚物和多肽自组装形成的纳米粒的粒径、Zeta电位、透射电镜、扫描电镜的结果图，其中，A为粒径/Zeta电位结果，B为TEM，C为SEM；
图2不同多肽制备的自组装DNA纳米粒以及Lipofectamine2000及brPEI对照制剂在DC2.4细胞中的转染情况；
图3DNA疫苗(P1-PP-sNP)对293T细胞、16HB细胞、DC2.4细胞活力影响检测结果；
图4DNA疫苗(P1-PP-sNP)经呼吸道途径对小鼠给药后，在小鼠体内的蛋白表达动力曲线；
图5DNA疫苗(P1-PP-sNP)、裸pSpike质粒及PEI对照制剂转染小鼠肺组织内的新冠病毒S蛋白基因特异性mRNA的相对水平；
图6流式细胞术考察DNA疫苗(P1-PP-sNP)在小鼠肺部DC细胞中的摄取情况；
图7免疫荧光考察DNA疫苗(P1-PP-sNP)在小鼠肺部DC细胞中的表达情况；
图8DNA疫苗(P1-PP-sNP)诱导小鼠IgG抗体水平；
图9DNA疫苗(P1-PP-sNP)诱导小鼠肺泡灌洗液IgA抗体水平；
图10DNA疫苗(P1-PP-sNP)诱导小鼠肺部及脾脏细胞亚群分化情况；
图11DNA疫苗(P1-PP-sNP)诱导小鼠肺部及脾脏记忆性T细胞产生情况；
图12DNA疫苗(P1-PP-sNP)诱导小鼠肺部驻留型记忆性T细胞产生情况。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1 DNA疫苗(PP-sNP)的制备
本实施例以新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白为抗原，制备DNA疫苗，具体如下：
1.多聚物
本实施例所述多聚物的结构式如下：
Figure BDA0003562120460000041
Figure BDA0003562120460000042
2.多肽
本发明实施例所述多肽的氨基酸序列分别为
P1：NH2-VETPHTEWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKACEAGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH；
P2：NH2-GETARETLARLARALARHLARALARALRACEAGSGTITHFQFGPTVY-COOH；
P3：NH2-IDTFKEYPRXRRBRRXRYQFLIRXRBRXRBGSGFAEKFKEAVKDYFAKFWD-COOH；其中B＝β-丙氨酸；X＝氨基己酸；
P4：NH2-FETAKESVGLFGAIAGFIENGWEGMIDGGSGFYPSYHSTPQRP-COOH；
P5：NH2-LEYGKDTPAGYLLGKLLOOLAAAALOOLLGSGCYTYQGKLC-COOH；
P6：NH2-VDTIKENPRQIKIWFQNRRMKWKKGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH。
P7:NH2-KETWWETWWTEWWTEWKKKKRRRRRKKKKGACSERSMNFCG-COOH；3.DNA疫苗的制备
(1)以将多聚物T704为例，将其配置成浓度为1μg/μL-10μg/μL的溶液；
(2)取本发明所述的多肽P1-P6，以及现有技术已经公开的多肽P7，分别配置成浓度为0.1μg/μl-2μg/μl的多肽溶液，所述多肽P1-P7的氨基酸序列如下：
P1：NH2-VETPHTEWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKACEAGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH；
P2：NH2-GETARETLARLARALARHLARALARALRACEAGSGTITHFQFGPTVY-COOH；
P3：NH2-IDTFKEYPRXRRBRRXRYQFLIRXRBRXRBGSGFAEKFKEAVKDYFAKFWD-COOH；其中B＝β-丙氨酸；X＝氨基己酸；
P4：NH2-FETAKESVGLFGAIAGFIENGWEGMIDGGSGFYPSYHSTPQRP-COOH；
P5：NH2-LEYGKDTPAGYLLGKLLOOLAAAALOOLLGSGCYTYQGKLC-COOH；
P6：NH2-VDTIKENPRQIKIWFQNRRMKWKKGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH。
P7:NH2-KETWWETWWTEWWTEWKKKKRRRRRKKKKGACSERSMNFCG-COOH。
(3)编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白抗原的质粒pSpike：以真核系统表达载体pVAX1为载体，连入编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的基因序列，其中所述新型冠状病毒SARS-CoV-2的Spike蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
(4)DNA疫苗的制备
将步骤(1)所述多聚物T704溶液、步骤(2)所述多肽P1-P7溶液与步骤(3)所述的pSpike溶液(浓度为0.1μg/μL-1μg/μL)，按照体积比1:1:2均匀混合，即得DNA疫苗PP-sNP(P1 PP-sNP、P2 PP-sNP、P3 PP-sNP、P4 PP-sNP、P5 PP-sNP、P6 PP-sNP、P7 PP-sNP)。
将制备的DNA疫苗，在室温下进行DLS的测定，以及TEM和SEM观察，结果如附图1所示，结果表明，本实施例制备的DNA疫苗粒径均约为110nm。
实施例2 DNA疫苗的体外转染
构建编码Metrida Luciferase的报告基因质粒(pMetLuc)；
将pMetLuc构建入实施例1制备的DNA疫苗PP-sNP(所述多肽P1-P7分别与T704和DNA在N/P比为5)中；同时采用Lipofectamine 2000以及25K Da branchedpolyethyleneimine(brPEI)作为对照制剂，观察不同多肽配制的DNA疫苗制剂在16HBE细胞中的转染情况。
结果如图2所示，转染后第2天，多肽P1-P7制备的DNA疫苗PP-sNP的转染效率均高于同条件下商品化的Lipofectamine 2000以及brPEI转染试剂的DNA疫苗；其中，多肽P1、P2、P3、P6对应的DNA疫苗PP-sNP的转染效率显著高于多肽P7对应的DNA疫苗，而且，多肽P1对应的DNA疫苗P1 PP-sNP的转染效率最高。
实施例3 DNA疫苗的毒性检测
将293T细胞、DC2.4细胞16HBE细胞计数并以完全培养基调整浓度后铺入平底96孔板中，每孔100μL含1×104个细胞，于37℃，含5％二氧化碳细胞培养箱中培养24小时。随后每孔加入10μL不同浓度的实施例1中的DNA疫苗P1 PP-sNP(pSpike/PP-sNP)，最后每孔加入10μL CCK-8溶液，于37℃孵育1小时后以iMark微孔板酶标仪检测其450nm吸光度值。细胞活性计算：细胞活性(cell viability，％)＝(处理组OD450/对照组OD450)×100％。
结果如图3所示，表明，本发明制备的DNA疫苗对293T细胞、DC2.4细胞16HBE细胞均无毒性，作为疫苗使用安全性良好。
实施例4 DNA疫苗的体内蛋白表达
构建表达Firefly Luciferase的报告基因质粒(pLUC)，制备含有pLUC的DNA疫苗P1PP-sNP(pSpike/PP-sNP)，经肺给予小鼠15μg/只后，通过活体成像检测小鼠肺部生物发光强度来反应小鼠肺部蛋白表达水平。
结果如图4所示，表明，本发明制备的递送系统能够实现DNA疫苗在体内高效递送，且能够促进抗原蛋白表达，在给药后48h达到最高水平，在给药1周之后缓慢下降至背景水平。
选用编码新型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突蛋白Spike的DNA疫苗(pSpike)作为模型，与多肽P1及T704制备PP-sNP制剂，采用qPCR法对比裸pSpike质粒、PP-sNp制剂及brPEI制剂经呼吸道给药48h后在小鼠肺部产生的基因转录效果。
结果如图5所示，PP-sNp制剂相较于其他实验组可介导pSpike在小鼠肺部高效表达，相比之下，在裸质粒组及PEI制剂给药组几乎无法检测到新冠病毒S蛋白的mRNA的转录。
实施例5 DNA疫苗的免疫评价
(1)用cy5荧光染料标记pSpike，制备PP-sNP疫苗制剂后，经肺给药6h后，取出小鼠肺组织，提取其单细胞悬液，通过FITC-CD11c和percp/cy5.5-CD11b标记肺组织DC细胞，考察肺部DC细胞对DNA疫苗、裸质粒的摄取情况。
结果如图6所示，表明，以本发明所述的DNA疫苗递送系统制备的DNA疫苗(pSpike/PP-sNP)在肺部DC细胞中的摄取量明显高于未使用该递送系统的裸质粒组。
(2)用pSpike制备PP-sNP制剂后，经肺给药48h后，取出小鼠肺组织，制备组织切片，通过FITC-CD11c以及Cy5-spike抗体分别标记肺组织内的DC细胞以及编码的spike蛋白，同时采用DAPI染色标记细胞核。
结果如图7所示，以本发明所述的DNA疫苗递送系统制备的DNA疫苗(pSpike/PP-sNP)能够靶向小鼠肺部DC细胞中，并实现Spike蛋白的高效表达。
(3)构建编码新冠Spike蛋白的质粒(pSpike)，制备DNA疫苗(pSpike/PP-sNP)，分别在第0天，第14天，第28天对小鼠进行肺部给药，分别收集第28天、35天的血清，进行IgG抗体检测。
结果如图8所示，表明，经DNA疫苗(pSpike/PP-sNP)免疫后，血清中IgG抗体水平较高，在28天时IgG抗体滴度均值约为4000-6000，在第35天时IgG抗体滴度能达到10000-12000。
(4)在上述免疫后，在第35天收集肺泡灌洗液，检测sIgA抗体水平，并通过ELISPOT方法考察肺部及脾脏中IFN-γ、IL-4分泌情况；通过流试细胞术考察肺部及脾脏Th1、Th2、Tc细胞亚群分化情况，以及肺部记忆性T细胞和驻留型T细胞的分化情况。
sIgA抗体水平检测结果如图9所示，在经DNA疫苗(pSpike/PP-sNP)免疫后，其肺泡灌洗液中的sIgA抗体滴度均值约为100。IFN-γ、IL-4分泌情况、Th1、Th2、Tc细胞亚群分化以及肺部记忆性T细胞和驻留型T细胞的分化情况结果如图10-12所示，表明，经DNA疫苗(pSpike/PP-sNP)免疫后能诱导较强的细胞因子分泌和T细胞免疫应答，同时还能诱导肺部记忆性T细胞和驻留型T细胞的产生。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 中国人民解放军陆军军医大学
<120> 一种用于DNA疫苗递送系统及其应用和DNA疫苗
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1273
<212> PRT
<213> 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)
<400> 1
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu
1010 1015 1020
Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val
1025 1030 1035 1040
Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala
1045 1050 1055
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu
1060 1065 1070
Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His
1075 1080 1085
Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val
1090 1095 1100
Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr
1105 1110 1115 1120
Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr
1125 1130 1135
Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu
1140 1145 1150
Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp
1155 1160 1165
Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp
1170 1175 1180
Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu
1185 1190 1195 1200
Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile
1205 1210 1215
Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile
1220 1225 1230
Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val
1250 1255 1260
Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270

Claims (10)

1.一种多肽，所述多肽为氨基酸序列如下P1-P6任一所示的多肽，或如下P1-P6任一氨基酸序列经缺失、插入或置换得到的与P1-P6序列所示多肽具有相同生物学功能的多肽衍生物：
P1：NH2-VETPHTEWEAKLAKALAKALAKHLAKALAKALKACEAGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH；
P2：NH2-GETARETLARLARALARHLARALARALRACEAGSGTITHFQFGPTVY-COOH；
P3：NH2-IDTFKEYPRXRRBRRXRYQFLIRXRBRXRBGSGFAEKFKEAVKDYFAKFWD-COOH，其中，B＝β-丙氨酸；X＝氨基己酸；
P4：NH2-FETAKESVGLFGAIAGFIENGWEGMIDGGSGFYPSYHSTPQRP-COOH；
P5：NH2-LEYGKDTPAGYLLGKLLOOLAAAALOOLLGSGCYTYQGKLC-COOH；
P6：NH2-VDTIKENPRQIKIWFQNRRMKWKKGSGINNNLQRVRELAVQSANSTNSQSDLDS-COOH。
2.一种疫苗递送系统，其特征在于，所述疫苗递送系统包括多聚物和权利要求1所述的任一多肽；所述多聚物的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0003562120450000011
其中4≤x≤30，2≤y≤114。
3.如权利要求2所述的疫苗递送系统，其特征在于，所述x＝14，y＝13。
4.如权利要求2所述的疫苗递送系统，其特征在于，所述多聚物与所述多肽的质量浓度为比为1:10。
5.如权利要求2所述的疫苗递送系统，其特征在于，所述疫苗递送系统由浓度为1μg/μL-10μg/μL的多聚物溶液与浓度为0.1μg/μL-2μg/μL的多肽溶液混合获得。
6.如权利要求5所述的疫苗递送系统，其特征在于，所述多聚物溶液与所述多肽溶液的体积比为1:1。
7.如权利要求1-6任一项所述的疫苗递送系统在制备DNA疫苗或RNA疫苗中的应用。
8.一种DNA疫苗，其特征在于，所述DNA疫苗包括权利要求1-6任一项所述的疫苗递送系统及表达抗原的基因片段/质粒。
9.如权利要求8所述的DNA疫苗，其特征在于，所述抗原为冠状病毒Spike蛋白，所述冠状病毒Spike蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
10.如权利要求9所述的DNA疫苗，其特征在于，所述DNA疫苗由浓度比为1μg/μL-10μg/μL：0.1μg/μL-2μg/μL：0.1μg/μL-1μg/μL的多聚物、多肽和表达抗原的基因片段/质粒组成。
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