CN114636695A - 一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法 - Google Patents

一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：步骤a，选取待测样品；步骤b，待测样液制备；步骤c，第一待测样液检测；步骤d，第一标准曲线制备；步骤e，第二待测样液检测；步骤f，第二标准曲线制备；步骤g，结果判定。本检测方法分析手段简便、快速、专属性强，灵敏度高，现象明显，不需要大型的分析仪器，不需要使用剧毒或致癌等危险试剂，对实验环境及人员的危害低，用于鉴别预包装鱼肉制品所采用的原料是否合格，是否为氨氮中毒的鱼肉或腐败不新鲜的鱼肉，便于追溯问题产品的源头，利于对预包装鱼肉制品的日常监督管理。

Description

一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法
技术领域
本发明涉及农产品检测领域，特别是涉及一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法。
背景技术
众所周知，与水产养殖产业相关的检测指标中有2项的关注度是比较高的，分别为氨氮含量及挥发性盐基氮含量。
氨氮是指以氨或铵离子形式存在的化合氮，即水中以游离氨（NH3）和铵离子（NH4 +）形式存在的氮。水体中的氨氮以分子氨和离子氨存在时，分子氨是有很大的毒性的，而离子氨是无毒，氨氮高通常都是分子氨含量升高，而此时水体的pH值一般也是比较高的。水体中的pH值过高会抑制水体中的微生物生长，有机物得不到分解。水体中的分子氨浓度过高时会使鱼虾产生毒血症，长期高氨氮则将压制鱼虾的成长、繁殖，并造成鱼虾严重性的中毒甚至大量死亡。
挥发性盐基氮是鱼肉类食品卫生质量检测的重要化学指标。它代表了动物性食品在腐败变质过程中由于酶和细菌的作用，蛋白质分解产生的碱性挥发性含氮物质（如氨、胺类）的总量。腐败变质越严重，蛋白质分解越多，挥发性盐基氮的值越高。
目前，针对预包装鱼肉制品的鱼肉原料还没有完善的检测机制与追溯手段，现有的检测方法不能有效判断预包装食品的鱼肉原料是否为氨氮中毒的死鱼，如何建立简便快速、成本低廉的检测溯源判断手段是当前食品安全分析的重点和难点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法。
根据本发明的一个方面，提供了一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内生产的样品为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质或粉碎后的待测样品于离心管中，进行匀浆处理，加入正乙烷，振荡混匀后，加入水震荡后，离心处理，取上层溶液，得到第一待测样液，取下层溶液，得到第二待测样液；
匀浆处理待测样品，便于待测样品中的挥发性盐基氮或氨氮溶出，利于后续提取；加入正己烷将待测样品中的挥发性盐基氮中的高级胺，提取到第一待测样液中；加入水将待测样品中的挥发性盐基氮中的低级胺以及氨氮，提取到第二待测样液中；挥发性盐基氮物质包括较多的高级胺、较少的低级胺和分子氨，因氨氮中毒而死的鱼中含氨氮物质，包括很少的高级胺、很多的分子氨和低级胺，挥发性盐基氮物质的构成、比例均与氨氮物质的构成、比例不同，本步骤中，将待测样品中的高级胺和低级胺（包含分子氨）进行分别提取，通过后续反应对提取出的高级胺和低级胺（包含分子氨）进行定量测定，然后通过计算高级胺与低级胺（包含分子氨）的比值，来判定该待测样品的鱼肉原料是否为氨氮中毒的鱼肉；
步骤c，第一待测样液检测：
将第一待测样液吹干浓缩，加入稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，加热5min后，观察第一混合液颜色是否变化，若第一混合液的颜色不变为阴性反应，则判定待测样品的原料为新鲜鱼肉，且不是氨氮中毒的鱼肉；若第一混合液的颜色发生变化，为阳性反应，则取显色后的第一混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，并将吸光度值记为A1，第一显色剂为对二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液；
加入第一显色剂，若第一待测样液中无高级胺存在，则对二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液无法发生显色反应，第一混合液的颜色无变化，即待测样品中无挥发性盐基氮以及氨氮的存在，则判定待测样品的原料为新鲜鱼肉，既不是腐败的鱼肉，也不是氨氮中毒的鱼肉；若第一待测样液中有高级胺存在，则二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液与高级胺发生显色反应，第一混合液的颜色有变化，即待测样品中有挥发性盐基氮或氨氮物质存在，需要通过后续步骤进行检测；
步骤d，第一标准曲线制备：
向水中添加不同量的高级胺，得到浓度梯度为0、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的高级胺溶液，逐滴加入第一显色剂，加热5min后，得到高级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到高级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第一标准曲线，将A1代入所述第一标准曲线，计算得到第一待测样液中高级胺的含量值C1，高级胺为N-十二烷基-β-氨基丙酸；
以N-十二烷基-β-氨基丙酸作为高级胺的代表物质，用于配制高级胺梯度浓度溶液，并加入第一显色剂，使N-十二烷基-β-氨基丙酸与第一显色剂发生显色反应，形成高级胺显色标准溶液，并利用其吸光度值，绘制第一标准曲线，得到吸光度值与高级胺浓度的对应关系。通过第一标准曲线，对第一待测样液中的高级胺的含量进行定量计算，得到C1值，后续将C1值与低级胺（包含分子氨）的含量值进行比较，进而判定该待测样品是否使用了氨氮中毒的鱼肉作为原料，N-十二烷基-β-氨基丙酸为表面活性剂，易溶于水或乙醇，其水溶液为浅色或无色的透明液体，不会对显色反应后的吸光度值有影响；
步骤e，第二待测样液检测：
向第二待测样液中加入碘化汞钾溶液和氢氧化钾溶液，得到第二混合液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入柠檬酸钠溶液，混匀，加入硝酸银溶液，观察第二混合液的颜色是否变化，若颜色发生变化则取显色后的第二混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，并将吸光度值记为A2，第二混合液的颜色无变化或显浅红色为阳性反应，颜色显深红色为阴性反应；
加入氢氧化钾，调节第二混合液为碱性环境，将第二混合液中的氨氮（主要以分子氨的形式存在）转化为铵根离子，便于进行后续显色反应；加入碘化汞钾与铵根离子发生式（1）反应：
Figure 519007DEST_PATH_IMAGE001
（1）
碘化汞钾、铵根离子以及氢氧根离子发生反应，生成沉淀，再加入硝酸银溶液，硝酸银与碘化汞钾发生以下反应：
Figure 576962DEST_PATH_IMAGE002
（2）
加入柠檬酸钠溶液，调节溶液的pH值，为后续反应提供碱性溶液环境；在50℃的加热条件下，硝酸银与碘化汞钾发生式（2）所示的反应，生成碘化汞银沉淀，碘化汞银沉淀微溶于水，在碱性溶液环境中，可以促进碘化汞银沉淀部分溶解，使溶液颜色呈红色。挥发性盐基氮或氨氮中均含有一定量的分子氨，只要待测样品中含有分子氨，该步骤就会发生阴性反应，第二混合液的颜色呈现深红色；
本步骤中，加入的碘化汞钾是定量的，第二待测液中的低级胺以及分子氨在碱性环境下与碘化汞钾发生式（1）的反应，分子氨含量越高，式（1）的反应中消耗的碘化汞钾越多，在溶液中剩余的碘化汞钾含量越少，加入硝酸银后，发生式（2）反应，对应生成的碘化汞银沉淀也会较少，对应溶解到第二混合液中的碘化汞银的量也越少，第二混合溶液的颜色变化越少，所以，第二混合液的颜色无变化或者显浅红色为阳性反应，即第二待测样液中分子氨含量较高。当第二待测液中不含有低级胺以及分子氨时，碘化汞钾与硝酸银发生式（2）反应，因为没有低级胺和分子氨消耗碘化汞钾，加入的碘化汞钾全部与硝酸银反应，生成的碘化汞银沉淀较多，对应溶解在第二待测液中的碘化汞银也较多，使第二混合溶液的颜色变化较深，第二混合液的颜色显深红色为阴性反应；
步骤f，第二标准曲线制备：
向水中添加不同量的低级胺，得到浓度梯度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L的低级胺溶液，加入碘化汞钾溶液和氢氧化钾溶液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入柠檬酸钠溶液，混匀，加入硝酸银溶液，得到低级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到低级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第二标准曲线，将A2代入、第二标准曲线，计算得到第二待测样液中低级胺的含量值C2，低级胺为二乙胺；
以二乙胺作为低级胺的代表物质，用于配制低级胺溶液，并加入碘化汞钾溶液和氢氧化钾溶液，使二乙胺与碘化汞钾发生式（Ⅰ）反应生成沉淀，再加入硝酸银溶液，硝酸银与碘化汞钾发生式（Ⅱ）反应生成碘化汞银红色沉淀，在碱性环境下，碘化汞银沉淀的溶解量增加，使溶液颜色显色更加明显，形成低级胺显色标准溶液，并利用其吸光度值，绘制第二标准曲线，得到吸光度值与低级胺浓度的对应关系。通过第二标准曲线，对第二待测样液中的低级胺的含量进行定量计算，得到C2值，后续将C2值与高级胺的含量C1值进行比较，进而判定该待测样品是否使用了氨氮中毒的鱼肉作为原料；
步骤g，结果判定：
若C1/C2≥1，则判定待测样品的原料为腐败的鱼肉，但不是氨氮中毒的鱼；
若C2/C1＞1，则判定待测样品的原料为氨氮中毒的鱼肉。
本发明的有益效果：本发明建立一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，挥发性盐基氮物质包括较多的高级胺、较少的低级胺和分子氨，因氨氮中毒而死的鱼中含氨氮物质，包括很少的高级胺、很多的分子氨和低级胺，利用挥发性盐基氮物质的构成、比例均与氨氮物质的构成、比例不同，将待测样品中的高级胺和低级胺（包含分子氨）进行分别提取，通过后续反应对提取出的高级胺和低级胺（包含分子氨）进行定量测定，然后通过计算高级胺与低级胺（包含分子氨）的比值，来鉴别待测样品的鱼肉原料是否为氨氮中毒的鱼肉。本方法分析手段简便、快速、专属性强，灵敏度高，现象明显，不需要大型的分析仪器，不需要使用剧毒或致癌等危险试剂，对实验环境及人员的危害低，用于鉴别预包装鱼肉制品所采用的原料是否合格，是否为氨氮中毒的鱼肉或腐败不新鲜的鱼肉，便于追溯问题产品的源头，利于对预包装鱼肉制品的日常监督管理。
在一些实施方式中，样品是预包装鱼肉制品的成品、预包装鱼肉制品的待封装半成品或冻鱼原料中的一种。
在一些实施方式中，步骤c中稀盐酸溶液是摩尔浓度为0.05mol/L的稀盐酸溶液。
在一些实施方式中，步骤e中氢氧化钠溶液是摩尔浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液。
在一些实施方式中，碘化汞钾溶液是摩尔浓度为0.09mol/L的碘化汞钾溶液。
在一些实施方式中，氢氧化钾溶液是摩尔浓度为2.5mol/L的氢氧化钾溶液。
在一些实施方式中，柠檬酸钠溶液是摩尔浓度为2mol/L的柠檬酸钠溶液。
在一些实施方式中，硝酸银溶液是摩尔浓度为0.1mol/L的硝酸银溶液。
在一些实施方式中，步骤g中，若C1/C2≥1且C1+C2≥350mg/kg，则判定待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
在一些实施方式中，步骤g中，若C1/C2≥1且C1+C2＜350mg/kg，则判定待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量未超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
在一些实施方式中，预包装制品包括鱼肉罐头、鱼肉肠、鱼肉丸、鱼糕、鱼肉松或鱼片。
附图说明
图1为本发明的一种实施方案的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法的第一标准曲线图。
图2为本发明的一种实施方案的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法的第二标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
本实施例中正己烷选择国药集团化学试剂有限公司供应的光学纯正己烷，盐酸溶液选择国药集团化学试剂有限公司供应的化学纯36%盐酸溶液，氢氧化钠选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯氢氧化钠，对二甲氨基苯甲醛选择上海麦克林生化科技有限公司供应的分析纯对二甲氨基苯甲醛，甲醇选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯甲醇，碘化汞钾选择国药集团化学试剂有限公司供应的化学纯碘化汞钾，氢氧化钾选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯氢氧化钾，硝酸银选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯硝酸银；柠檬酸钠选择国药集团化学试剂有限公司供应的98%无水柠檬酸钠；
0.05 mol/L盐酸溶液：用量筒量取2.15ml 36%盐酸倒入烧杯中，用去离子水溶解后，用玻璃棒引流注入500ml容量瓶，然后定容至刻度线；
1mol/L的氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠倒入烧杯中，用去离子水溶解后，用玻璃棒引流注入500ml容量瓶，然后定容至刻度线；
0.09mol/L的碘化汞钾溶液：称取35.39g碘化汞钾，加入到烧杯中，用去离子水溶解后，用玻璃棒引流注入500ml容量瓶，然后定容至刻度线；
2.5mol/L的氢氧化钾溶液：称取70g氢氧化钾，加入到烧杯中，用去离子水溶解后，用玻璃棒引流注入500ml容量瓶，然后定容至刻度线；
2mol/L的柠檬酸钠溶液：258.07g柠檬酸钠，加入到烧杯中，用去离子水溶解后，用玻璃棒引流注入500ml容量瓶，然后定容至刻度线；
以下实施例2-6均采用本实施例1中的试剂。
实施例2
本发明的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内生产的鱼肉罐头的成品为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质后的5g±0.5g待测样品于50ml离心管中，进行匀浆处理，加入5ml正乙烷，振荡混匀2min后，加入10ml水震荡1min后，以4000rpm离心处理3min，取上层正己烷溶液层，得到第一待测样液，取下层水溶液层，得到第二待测样液；
步骤c，第一待测样液检测：
取1g对二甲氨基苯甲醛溶于25m1盐酸溶液中，加入75ml甲醇混合均匀，得到第一显色剂，将第一待测样液在65℃条件下浓缩吹干，加入4ml 0.05mol/L的稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，在60℃条件下加热5min后，观察第一混合液颜色，第一混合液的颜色变为紫红色，为阳性反应，取显色后的第一混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A1为2.31；
步骤d，第一标准曲线制备：
向水中添加不同量的N-十二烷基-β-氨基丙酸，得到浓度梯度为0、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的N-十二烷基-β-氨基丙酸溶液，逐滴加入第一显色剂，加热5min后，得到高级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到高级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第一标准曲线，第一标准曲线方程为：y=0.0368x+0.2557，R2=0.9969，将A1=2.31代入第一标准曲线，计算得到第一待测样液中高级胺的含量值C1为55.82mg/L；
步骤e，第二待测样液检测：
向第二待测样液中加入1ml 0.09mol/L的碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L的氢氧化钾溶液，得到第二混合液，100℃加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L的硝酸银溶液，观察第二混合液的颜色，第二混合液的颜色显深红色，为阴性反应，取显色后的第二混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A2为3.25；
步骤f，第二标准曲线制备：
向水中添加不同量的二乙胺，得到浓度梯度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L的二乙胺溶液，加入1ml 0.09mol/L碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L氢氧化钾溶液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml 2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，得到低级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到低级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第二标准曲线，第二标准曲线方程为：y=0.0003x2-0.0845x+5.6502，R2=0.9911，将A2=3.25代入第二标准曲线，计算得到第二待测样液中低级胺的含量值C2为32.05mg/L；
步骤g，结果判定：
C1/C2的比值为1.74＞1，且C1+C2的数值为87.87mg/L＜350mg/kg，
则判定该待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量未超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
实施例3
本发明的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内生产的待封装的鱼丸半成品为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质后的5g±0.5g待测样品于50ml离心管中，进行匀浆处理，加入5ml正乙烷，振荡混匀2min后，加入10ml水震荡1min后，以5000rpm离心处理3min，取上层正己烷溶液层，得到第一待测样液，取下层水溶液层，得到第二待测样液；
步骤c，第一待测样液检测：
取1g对二甲氨基苯甲醛溶于25m1盐酸溶液中，加入75ml甲醇混合均匀，得到第一显色剂，将第一待测样液在65℃条件下浓缩吹干，加入4ml 0.05mol/L的稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，在60℃条件下加热5min后，观察第一混合液颜色，第一混合液的颜色无变化，为阴性反应，判定第一待测样液中没有高级胺存在，该待测样品的原料为新鲜鱼肉，且不是氨氮中毒的鱼肉。
实施例4
本发明的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内生产的预包装鱼肉松的成品为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质后的5g±0.5g待测样品于50ml离心管中，进行匀浆处理，加入5ml正乙烷，振荡混匀2min后，加入10ml水震荡1min后，以4000rpm离心处理3min，取上层正己烷溶液层，得到第一待测样液，取下层水溶液层，得到第二待测样液；
步骤c，第一待测样液检测：
取1g对二甲氨基苯甲醛溶于25m1盐酸溶液中，加入75ml甲醇混合均匀，得到第一显色剂，将第一待测样液在65℃条件下浓缩吹干，加入4ml 0.05mol/L的稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，在60℃条件下加热5min后，观察第一混合液颜色，第一混合液的颜色变为青紫色，为阳性反应，取显色后的第一混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A1为1.77；
步骤d，第一标准曲线制备：
向水中添加不同量的N-十二烷基-β-氨基丙酸，得到浓度梯度为0、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的N-十二烷基-β-氨基丙酸溶液，逐滴加入第一显色剂，加热5min后，得到高级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到高级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第一标准曲线，第一标准曲线方程为：y=0.0368x+0.2557，R2=0.9969，将A1=1.77代入第一标准曲线，计算得到第一待测样液中高级胺的含量值C1为41.15mg/L；
步骤e，第二待测样液检测：
向第二待测样液中加入1ml 0.09mol/L的碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L的氢氧化钾溶液，得到第二混合液，100℃加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L的硝酸银溶液，观察第二混合液的颜色，第二混合液的颜色显深红色，为阴性反应，取显色后的第二混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A2为1.16；
步骤f，第二标准曲线制备：
向水中添加不同量的二乙胺，得到浓度梯度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L的二乙胺溶液，加入1ml 0.09mol/L碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L氢氧化钾溶液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml 2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，得到低级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到低级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第二标准曲线，第二标准曲线方程为：y=0.0003x2-0.0845x+5.6502，R2=0.9911，将A2=1.16代入第二标准曲线，计算得到第二待测样液中低级胺的含量值C2为71.07mg/L；
步骤g，结果判定：
C2/C1的比值为1.73＞1，则判定该待测样品的原料为氨氮中毒的鱼肉。
实施例5
本发明的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内生产的待封装鱼肉肠的半成品为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质后的5g±0.5g待测样品于50ml离心管中，进行匀浆处理，加入5ml正乙烷，振荡混匀2min后，加入10ml水震荡1min后，以5000rpm离心处理3min，取上层正己烷溶液层，得到第一待测样液，取下层水溶液层，得到第二待测样液；
步骤c，第一待测样液检测：
取1g对二甲氨基苯甲醛溶于25m1盐酸溶液中，加入75ml甲醇混合均匀，得到第一显色剂，将第一待测样液在65℃条件下浓缩吹干，加入4ml 0.05mol/L的稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，在60℃条件下加热5min后，观察第一混合液颜色，第一混合液的颜色变为青紫色，为阳性反应，取显色后的第一混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A1为12.18；
步骤d，第一标准曲线制备：
向水中添加不同量的N-十二烷基-β-氨基丙酸，得到浓度梯度为0、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的N-十二烷基-β-氨基丙酸溶液，逐滴加入第一显色剂，加热5min后，得到高级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到高级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第一标准曲线，第一标准曲线方程：y=0.0368x+0.2557，R2=0.9969，将A1=12.18代入第一标准曲线，计算得到第一待测样液中高级胺的含量值C1为324.03mg/L；
步骤e，第二待测样液检测：
向第二待测样液中加入1ml 0.09mol/L的碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L的氢氧化钾溶液，得到第二混合液，100℃加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L的硝酸银溶液，观察第二混合液的颜色，第二混合液的颜色显深红色，为阴性反应，取显色后的第二混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A2为3.39；
步骤f，第二标准曲线制备：
向水中添加不同量的二乙胺，得到浓度梯度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L的二乙胺溶液，加入1ml 0.09mol/L碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L氢氧化钾溶液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml 2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，得到低级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到低级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第二标准曲线，第二标准曲线方程：y=0.0003x2-0.0845x+5.6502，R2=0.9911，将A2=3.39代入第二标准曲线，计算得到第二待测样液中低级胺的含量值C2为29.93 mg/L；
步骤g，结果判定：
C1/C2的比值为10.83＞1，且C1+C2的数值为353.96 mg/L＞350mg/kg，则判定该待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
实施例6
本发明的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内入库的冻鱼原料为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质后的5g±0.5g待测样品于50ml离心管中，进行匀浆处理，加入5ml正乙烷，振荡混匀2min后，加入10ml水震荡1min后，以4000rpm离心处理3min，取上层正己烷溶液层，得到第一待测样液，取下层水溶液层，得到第二待测样液；
步骤c，第一待测样液检测：
取1g对二甲氨基苯甲醛溶于25m1盐酸溶液中，加入75ml甲醇混合均匀，得到第一显色剂，将第一待测样液在65℃条件下浓缩吹干，加入4ml 0.05mol/L的稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，在60℃条件下加热5min后，观察第一混合液颜色，第一混合液的颜色变为青紫色，为阳性反应，取显色后的第一混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A1为1.27；
步骤d，第一标准曲线制备：
向水中添加不同量的N-十二烷基-β-氨基丙酸，得到浓度梯度为0、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的N-十二烷基-β-氨基丙酸溶液，逐滴加入第一显色剂，加热5min后，得到高级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到高级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第一标准曲线，第一标准曲线方程：y=0.0368x+0.2557，R2=0.9969，将A1=1.27代入第一标准曲线，计算得到第一待测样液中高级胺的含量值C1为27.56 mg/L；
步骤e，第二待测样液检测：
向第二待测样液中加入1ml 0.09mol/L的碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L的氢氧化钾溶液，得到第二混合液，100℃加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L的硝酸银溶液，观察第二混合液的颜色，第二混合液的颜色显深红色，为阴性反应，取显色后的第二混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，得到吸光度值A2为3.55；
步骤f，第二标准曲线制备：
向水中添加不同量的二乙胺，得到浓度梯度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L的二乙胺溶液，加入1ml 0.09mol/L碘化汞钾溶液和0.5ml 2.5mol/L氢氧化钾溶液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入1ml 2mol/L的柠檬酸钠溶液，混匀，加入0.1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，得到低级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到低级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第二标准曲线，第二标准曲线方程：y=0.0003x2-0.0845x+5.6502，R2=0.9911，将A2=3.55代入第二标准曲线，计算得到第二待测样液中低级胺的含量值C2为27.56 mg/L；
步骤g，结果判定：
C2/C1的比值为1，且C1+C2的数值为55.12mg/L＜350mg/kg，则判定该待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量未超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，包括以下：
步骤a，选取待测样品：
选取抽样日前五个自然日内生产的样品为待测样品；
步骤b，待测样液制备：
称取均质或粉碎后的所述待测样品于离心管中，进行匀浆处理，加入正乙烷，振荡混匀后，加入水震荡后，离心处理，取上层溶液，得到第一待测样液，取下层溶液，得到第二待测样液；
步骤c，第一待测样液检测：
将所述第一待测样液吹干浓缩，加入稀盐酸溶液，混匀，逐滴加入第一显色剂，得到第一混合液，加热5min后，观察所述第一混合液颜色是否变化，若所述第一混合液的颜色不变为阴性反应，则判定所述待测样品的原料为新鲜鱼肉，且不是氨氮中毒的鱼肉；若所述第一混合液的颜色发生变化，为阳性反应，则取显色后的所述第一混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，并将吸光度值记为A1，所述第一显色剂为对二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液；
步骤d，第一标准曲线制备：
向水中添加不同量的高级胺，得到浓度梯度为0、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L的高级胺溶液，逐滴加入所述第一显色剂，加热5min后，得到高级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到所述高级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第一标准曲线，将所述A1代入所述第一标准曲线，计算得到所述第一待测样液中高级胺的含量值C1，所述高级胺为N-十二烷基-β-氨基丙酸；
步骤e，第二待测样液检测：
向所述第二待测样液中加入碘化汞钾溶液和氢氧化钾溶液，得到第二混合液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入柠檬酸钠溶液，混匀，加入硝酸银溶液，观察所述第二混合液的颜色是否变化，若颜色发生变化则取显色后的所述第二混合液于比色皿中，在625nm波长下进行分光光度测量，并将吸光度值记为A2，所述第二混合液的颜色无变化或显浅红色为阳性反应，颜色显深红色为阴性反应；
步骤f，第二标准曲线制备：
向水中添加不同量的低级胺，得到浓度梯度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L的低级胺溶液，加入所述碘化汞钾溶液和所述氢氧化钾溶液，加热煮沸后，降温至50℃±5℃，并保持恒温，加入所述柠檬酸钠溶液，混匀，加入所述硝酸银溶液，得到低级胺显色标准溶液，在625nm波长下进行分光光度测量，得到所述低级胺显色标准溶液的吸光度值，绘制第二标准曲线，将所述A2代入所述第二标准曲线，计算得到所述第二待测样液中低级胺的含量值C2，所述低级胺为二乙胺；
步骤g，结果判定：
若C1/C2≥1，则判定所述待测样品的原料为腐败的鱼肉，但不是氨氮中毒的鱼肉；
若C2/C1＞1，则判定所述待测样品的原料为氨氮中毒的鱼肉。
2.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述样品是预包装鱼肉制品的成品、预包装鱼肉制品的待封装半成品或冻鱼原料中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述步骤c中稀盐酸溶液是摩尔浓度为0.05mol/L的稀盐酸溶液。
4.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述碘化汞钾溶液是摩尔浓度为0.09mol/L的碘化汞钾溶液。
5.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述氢氧化钾溶液是摩尔浓度为2.5mol/L的氢氧化钾溶液。
6.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述柠檬酸钠溶液是摩尔浓度为2mol/L的柠檬酸钠溶液。
7.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述硝酸银溶液是摩尔浓度为0.1mol/L的硝酸银溶液。
8.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述步骤g中，若C1/C2≥1且C1+C2≥350mg/kg，则判定所述待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
9.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述步骤g中，若C1/C2≥1且C1+C2＜350mg/kg，则判定所述待测样品的原料为腐败的鱼肉，且挥发性盐基氮含量未超标，但不是氨氮中毒的鱼肉。
10.根据权利要求1所述的一种预包装制品使用不合格鱼肉原料的检测方法，其特征在于，所述预包装制品包括鱼肉罐头、鱼肉肠、鱼肉丸、鱼糕、鱼肉松或鱼片。
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