CN102175673A - 一种总硒含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测富硒酵母中的总硒含量的方法。本发明以亚硒酸钠为标样测定酵母硒中的总硒含量。与现有检测酵母硒中的总硒含量的方法相比，本发明的检测方法标样制备简单，不易导致误差，测量结果准确。

Description

一种总硒含量的检测方法

技术领域

本发明涉及理化检测技术领域，具体的说，涉及一种检测酵母硒中总硒含量的方法。

背景技术

硒是人体内不可缺少的重要元素之一。人体内的硒分布在肝、肾、脾及胰脏。硒可维护细胞的正常功能，并能与维生素E相互协调，预防细胞组织的氧化，具有消除自由基、抗肿瘤、抗氧化作用。食物中的硒含量与其种植的土壤中含硒量有直接关系。人类膳食中天然食物的硒含量普遍较低，且易受环境的影响，因而构成富硒酵母食品巨大的发展空间。

富硒酵母是利用酵母开发出来的一种有机硒源，它是通过硒富集在生长酵母的细胞蛋白结构内生产的，富硒酵母已证明远比无机硒安全、稳定、易吸收、有效且少污染，并具有多方面的保健功能，故近年来在动物营养中的作用逐渐被人们所认识，在畜牧业和渔业生产的应用日趋广泛。

目前，检测酵母硒中的总硒含量时，常常以硒为标样，但单质硒需要加入强酸-浓硫酸和高氯酸进行消化反应，将单质硒氧化成Se⁴⁺后才能与DAB进一步发生显色反应，标样制备复杂，易导致误差。

基于上述缺点，本发明提供一种简单易行的检测酵母硒中的总硒含量的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种简单易行的检测富硒酵母中的总硒含量的方法。

本发明所述的检测总硒含量的方法是以亚硒酸钠为标样进行测定，与现有的以硒为标样相比，由于不需要经过消化反应这一步骤，简单易行，不易导致测量误差。

具体的说，本发明所述的检测方法包括以下步骤：

1)准确称取亚硒酸钠，然后加入48％的HBr，然后加水定容，制备Se⁴⁺含量为0.5-2mg/l的硒标准工作液；其中每1克亚硒酸钠加入35-40ml 48％的HBr；

2)称取3，3-二氨基联苯氨(DAB)，每100ml的四氯甲烷中溶解0.10-1.0g 3，3-二氨基联苯氨，配制质量体积百分比为0.1-1.0％的DAB溶液；

需要注意的是，DAB溶液要现配现用；

3)取不同体积的硒标准工作液，分别用甲酸调节pH为2，然后加入3，3-二氨基联苯氨溶液；暗反应显色30min，然后用1-5％的氢氧化钠溶液调节pH为8，通过甲苯萃取，利用分光光度计测定甲苯萃取物在420nm处的吸光值，做标准曲线；其中硒标准工作液与3，3-二氨基联苯氨溶液的体积比为0.4-2∶1。

步骤1)中，所述亚硒酸钠为干燥的亚硒酸钠，所述干燥是将亚硒酸钠放入烘箱中烘干至恒重。

所述硒标准工作液也可如下制备：准确称取亚硒酸钠，然后加入48％的HBr(每1克亚硒酸钠加入35-40ml 48％的HBr，先制备Se⁴⁺含量为500-2000mg/l的硒标准贮备液备用，需要使用时，取硒标准贮备液稀释1000倍，得到浓度0.5-2mg/l的硒标准工作液。

优选的，所述硒标准工作液为Se⁴⁺含量为1mg/l的硒标准工作液；所述DAB溶液的质量体积百分比为0.5％。

优选的，所述氢氧化钠溶液的浓度为5％；

步骤3)中，所述甲酸可选用本领域常用的甲酸或甲酸溶液，如1-2mol/L的甲酸溶液；优选2mol/L的甲酸溶液。

所述显色是由于样品中的硒与3，3-二氨基联苯氨(DAB)反应，形成了稳定的Se-DAB复合物；

随后，本发明所述的检测方法还包括：将待测样品制成待试品溶液；测定待试品溶液在420nm处的吸光度，根据标准曲线得到硒含量。

其中，所述待试品溶液由包括以下步骤的方法制备：

①称取干燥的待试样品，加入消化液，冷凝回流消化至无色，得到消化完毕的待试样品；其中，消化液的用量为每0.1g待试样品采用50ml消化液；

②取10ml消化完毕的待试样品，加去离子水至40ml，再加入5ml的5％EDTA-2Na，加入2ml、5％的DAB，摇匀，用5％的NaOH调至中性；随后加入4ml甲苯；

③静置分层后，去除水相，甲苯相为待试品溶液；

其中消化液的制备方法为：称取10g钼酸钠，加入150ml去离子水溶解，缓慢加入150ml浓硫酸，冷却至室温，加入200ml的高氯酸。

具体的说，本发明所述的检测方法包括以下步骤：

1)将亚硒酸钠放入烘箱中烘干至恒重，准确称取2.19g已经干燥的亚硒酸钠，加入80ml的48％的HBr，加水定容至1000ml，制备含Se⁴⁺1g/l的标准硒储备液，用硒标准液时，用储备液稀释成1000倍，为1mg/l的硒标准工作液；

2)配制0.5％的DAB，称取0.5克的DAB，溶解于100ml的四氯甲烷中；

3)取0-10ml 1mg/L的硒标准工作液，分别用2mol/L的甲酸调节pH为2，然后分别加入5ml 0.5％的DAB溶液，暗反应显色30min，然后用5％的氢氧化钠溶液调节pH为8，通过甲苯萃取，利用分光光度计测定甲苯萃取物在420nm处的吸光值，做标准曲线；

4)待测样品的测定过程：

①称取干燥的待试样品)0.1g置于烧瓶中，加入50ml消化液，冷凝回流消化至无色，将消化完的样品移入烧杯，并用少量水冲洗烧瓶瓶，冲洗液一并移入烧杯中，得到消化完毕的待试样品；其中消化液的制备方法为：称取10g钼酸钠，加入150ml去离子水溶解，缓慢加入150ml浓硫酸，冷却至室温，加入200ml的高氯酸；

②取10ml的得到消化完毕的待试样品，加去离子水至40ml，加入5ml的5％EDTA-2Na，加入2ml、5％的DAB，摇匀，用5％的NaOH调至中性，再加入4ml甲苯；同样方法做空白溶液；

③静置分层后，去除水相，甲苯相为待试品溶液；

④然后吸取甲苯相1ml放入比色皿，进行测定其在420nm处光密度值；然后对照标准曲线，得到样品中的总硒含量。

本发明的方法特别适用于检测富硒酵母中的总硒含量。

与现有检测酵母硒中的总硒含量的方法相比，本发明的检测方法标样制备简单，不易导致误差，测量结果准确。

附图说明

图1为实施例1制备的标准曲线。

图2为实施例2制备的标准曲线。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。如无特别指明，本实施例所用的试剂均为分析纯；所用的分光光度计为UV-5100型紫外/可见分光光度计。

实施例1

实验室所用玻璃器皿均经过(1+1)HCl浸泡4h以上，蒸馏水冲洗，然后把器皿置于烘箱烘干待用。

将0ml(不加硒盐，用甲苯作为对照)，2ml，4ml，6ml，8ml和10ml硒标准工作液于分液漏斗中，加入1ml的EDTA-2Na，用5％的NaOH调至中性，滴加2mol/L的甲酸，调至pH为2，加水至35ml，然后各加入5ml的0.5％的3，3-二氨基联苯氨(DAB)，摇匀，暗反应30min，反应形成稳定的Se-DAB复合物，然后用5％的NaOH调至pH为8，加入10ml的甲苯，振荡萃取1min，静置分层后，取甲苯层，在该体系络合物中测其在420nm处的吸光值，以甲苯为空白，结果见表1，同时做标准曲线(详见图1)，得到曲线的R²＝0.9912＞0.99，显然该曲线可以作为硒含量的测定，同时证明本方法切实可行。

图1波长420nm时的比色结果

得到曲线方程式y＝0.0807x-0.0314，b＝-0.0314，R²＝0.9912。R²＞0.99，说明在已确定的实验条件下，严格按操作规程进行，测定硒含量的结果较理想，方法是可行的。

实施例2

将0ml(不加硒盐，用甲苯作为对照)，1.2ml，2.4ml，3.6ml，4.8ml和6ml硒标准工作液于分液漏斗中，加入1ml的EDTA-2Na，用5％的NaOH调至中性，滴加90％的甲酸，调至pH为2，加水至35ml，然后各加入3ml的0.5％的3，3-二氨基联苯氨(DAB)，摇匀，暗反应30min，反应形成稳定的Se-DAB复合物，然后用5％的NaOH调至pH为8，加入10ml的甲苯，振荡萃取1min，静置分层后，取甲苯层，在该体系络合物中测其在420nm处的吸光值，以甲苯为空白，结果见表1，同时做标准曲线(详见图2)，得到曲线的R²＝0.9909＞0.99，显然该曲线可以作为硒含量的测定，同时证明本方法切实可行。

图2波长420nm时的比色结果

得到曲线方程式y＝0.0715x+0.0108，b＝0.0108，R²＝0.9909。R²＞0.99，说明在已确定的实验条件下，严格按操作规程进行，测定硒含量的结果较理想，方法是可行的。

实施例3

消化液的制备：称取10g钼酸钠，加入150ml去离子水溶解，缓慢加入150ml浓硫酸，冷却至室温，加入200ml的高氯酸。

①：称取样品酵母硒样品(烘干)0.1g置于烧瓶中，加入5ml消化液，接上冷凝装置，电炉上冷凝回流消化至无色，将消化完的样品移入200ml的烧杯，并用少量水冲洗烧瓶瓶，冲洗液一并移入烧杯中定容至50。

②：取10ml的消化液，加去离子水至40，加入5ml的5％EDTA-2Na，加入2ml、5％的DAB，摇匀，用5％的NaOH调至中性。加入4ml甲苯，同样方法做空白溶液。

③：静置分层后，分别把梨型漏斗中的水相放入烧杯，然后分别从上口处倒出甲苯相置于试管1号，2号，3号，4号，5号，6号。试管中的甲苯相为待测溶液。

④：然后吸取试管1号中的甲苯相1ml放入比色皿，依次吸取试管2号中的甲苯相1ml放入比色皿......，进行测定其在420nm处光密度值。

测定光密度值：x1＝0.759；x2＝0.771；x3＝0.764.代入公式y＝0.0807x-0.0314得到y1＝9.974；y2＝9.943；y3＝9.831。

所以取消化液10ml测定光密度值，对应公式得总硒含量y＝(y1+y2+y3)/3＝(9.974+9.943+9.831)/3＝9.856。

因为硒标准样浓度稀释为1mg/kg，并测定干酵母硒样品为0.1g，所以测得酵母硒样品中总硒含量为98.56mg/kg。

Claims (10)

1.一种检测硒含量的方法，其特征在于，以亚硒酸钠为标样进行测定。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)准确称取亚硒酸钠，然后加入48％的HBr，然后加水定容，制备Se⁴⁺含量为0.5-2mg/l的硒标准工作液；或者按如下方法制备所述硒标准工作液：准确称取亚硒酸钠，加入48％的HBr，然后加水定容制备Se⁴⁺含量为500-2000mg/l的硒标准贮备液备用，需要使用时，取硒标准贮备液稀释1000倍，得到浓度0.5-2mg/l的硒标准工作液；其中每1克亚硒酸钠加入35-40ml 48％的HBr；

2)称取3，3-二氨基联苯氨，每100ml的四氯甲烷中溶解0.10-1.0g3，3-二氨基联苯氨，配制质量体积百分比为0.1-1.0％的DAB溶液；

3)取不同体积的硒标准工作液，分别用甲酸调节pH为2，然后加入3，3-二氨基联苯氨溶液；暗反应显色30min，然后用1-5％的氢氧化钠溶液调节pH为8，通过甲苯萃取，利用分光光度计测定甲苯萃取物在420nm处的吸光值，做标准曲线；其中硒标准工作液与3，3-二氨基联苯氨溶液的体积比为0.4-2∶1。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述亚硒酸钠为干燥的亚硒酸钠，所述干燥是将亚硒酸钠放入烘箱中烘干至恒重。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述甲酸为1-2mol/L的甲酸溶液。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述硒标准工作液为Se⁴⁺含量为1mg/l的硒标准工作液；所述DAB溶液的质量体积百分比为0.5％。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氢氧化钠溶液的浓度为5％；所述甲酸溶液为2mol/L的甲酸溶液。

7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的检测方法还包括：将待测样品制成待试品溶液；测定待试品溶液在420nm处的吸光度，根据标准曲线得到硒含量。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述待试品溶液由包括以下步骤的方法制备：

①称取干燥的待试样品，加入消化液，冷凝回流消化至无色，得到消化完毕的待试样品；其中，消化液的用量为每0.1g待试样品采用50ml消化液；

②取10ml消化完毕的待试样品，加去离子水至40ml，再加入5ml的5％EDTA-2Na，加入2ml、5％的DAB，摇匀，用5％的NaOH调至中性；随后加入4ml甲苯；

③静置分层后，去除水相，甲苯相为待试品溶液；

其中消化液的制备方法为：称取10g钼酸钠，加入150ml去离子水溶解，缓慢加入150ml浓硫酸，冷却至室温，加入200ml的高氯酸。

9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将亚硒酸钠放入烘箱中烘干至恒重，准确称取2.19g已经干燥的亚硒酸钠，加入80ml的48％的HBr，加水定容至1000ml，制备含Se⁴⁺1g/l的标准硒储备液，用硒标准液时，用储备液稀释成1000倍，为1mg/l的硒标准工作液；

2)配制0.5％的DAB，称取0.5克的DAB，溶解于100ml的四氯甲烷中；

3)取0-10ml 1mg/L的硒标准工作液，分别用2mol/L的甲酸调节pH为2，然后分别加入5ml 0.5％的DAB溶液，暗反应显色30min，然后用5％的氢氧化钠溶液调节pH为8，通过甲苯萃取，利用分光光度计测定甲苯萃取物在420nm处的吸光值，做标准曲线；

4)待测样品的测定过程：

①称取干燥的待试样品0.1g置于烧瓶中，加入50ml消化液，冷凝回流消化至无色，将消化完的样品移入烧杯，并用少量水冲洗烧瓶瓶，冲洗液一并移入烧杯中，得到消化完毕的待试样品；其中消化液的制备方法为：称取10g钼酸钠，加入150ml去离子水溶解，缓慢加入150ml浓硫酸，冷却至室温，加入200ml的高氯酸；

②取10ml的得到消化完毕的待试样品，加去离子水至40ml，加入5ml的5％EDTA-2Na，加入2ml、5％的DAB，摇匀，用5％的NaOH调至中性，再加入4ml甲苯；同样方法做空白溶液；

③静置分层后，去除水相，甲苯相为待试品溶液；

④然后吸取甲苯相1ml放入比色皿，进行测定其在420nm处光密度值；然后对照标准曲线，得到样品中的总硒含量。

10.如权利要求1-9任一所述的方法的应用，其特征在于，用于检测富硒酵母中的总硒含量。

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