CN114630905A

CN114630905A - 萜烯化合物受控降解的生物催化方法

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Publication number: CN114630905A
Application number: CN202080063163.8A
Authority: CN
Inventors: M·沙尔克; F·德古利; D·索利斯艾斯卡兰特; S·贝库奇; P·安吉亚尼
Original assignee: Firmenich SA
Current assignee: Firmenich SA
Priority date: 2019-07-10
Filing date: 2020-07-08
Publication date: 2022-06-14
Also published as: WO2021005097A1; US20230183761A1; JP2022539510A; MX2021015192A; BR112021025663A2; WO2021005097A9; EP3997215A1

Abstract

本文提供了产生萜烯降解产物的生物催化方法，该萜烯降解产物可用作产生香料成分例如降龙涎香醚的起始材料。特别是提供了新的萜烯降解多肽(烯醛裂解多肽)和将萜烯化合物转化为氧化衍生物的新肽(氧化酶)以及由其衍生的突变体和变体，它们可以应用于新型的完全酶促多步降解途径，允许直链或环状萜烯底物的受控的、逐步的转化和降解。所述新的生物合成策略允许有价值的萜烯衍生化合物例如迈诺醇氧基或γ‑ambrol的完全生物化学合成。本发明还提供了重组宿主生物体，其携带所需的一组遗传信息，用于催化酶促转化和降解步骤的组合所必需的一组酶的功能表达。

Description

萜烯化合物受控降解的生物催化方法

技术领域

本文提供了产生萜烯降解产物的生物催化方法，该萜烯降解产物可用作产生香料成分例如降龙涎香醚(ambrox)的起始材料。特别是提供了新的萜烯降解多肽(烯醛裂解多肽)和将萜烯化合物转化为氧化衍生物的新肽(氧化酶)以及由其衍生的突变体和变体，它们可以应用于新型的完全酶促多步降解途径，允许直链或环状萜烯底物的受控的、逐步的转化和降解。所述新的生物合成策略允许有价值的萜烯衍生化合物例如迈诺醇氧基(manooloxy)或γ-ambrol的完全生物化学合成。本发明还提供了重组宿主生物体，其携带所需的一组遗传信息，用于催化酶促转化和降解步骤的组合所必需的一组酶的功能表达。

背景技术

萜烯存在于大多数生物体(微生物、动物和植物)中。这些化合物由称为异戊二烯单元的五碳单元构成并且通过存在于它们结构中的这些单元的数目进行分类。因此，单萜、倍半萜和二萜是分别含有10、15和20个碳原子(即1、2、3和4个异戊二烯单元)的萜烯。例如，在植物界中广泛地存在有倍半萜。许多倍半萜分子因为它们的风味和芳香特性以及它们的美容、医疗和抗菌效果而众所周知。已经鉴定出许多倍半萜烃和倍半萜类化合物。

萜烯的生物合成产生涉及称为萜合酶的酶。这些酶将无环萜烯前体转化成一种或多种萜烯产物。具体而言，二萜合酶通过前体香叶基香叶基二磷酸(GGPP)的环化产生二萜。GGPP的环化通常需要两种酶多肽，即在两个连续的酶促反应中组合起作用的I型和II型二萜合酶。II型二萜合酶催化由GGPP的末端双键质子化引发的GGPP的环化/重排，导致环状二萜二磷酸中间体。然后该中间体被催化电离引发的环化的I型二萜合酶进一步转化。

二萜合酶存在于植物和其他生物体中，并使用底物如GGPP，但它们具有不同的产物特征。已经克隆了编码二萜合酶的基因和cDNA，并表征了相应的重组酶。

催化从萜烯二磷酸中间体，特别是从环状萜烯二磷酸中间体，如二萜柯巴基(copalyl)二磷酸(酯)(CPP)或半日花烯二醇(labdendiol)二磷酸(酯)(LPP)特异性或优先裂解或去除二磷酸(酯)基团的酶最近才在较早的欧洲专利中有所描述应用(EP申请号18182783.3)。通过所述酶，萜烯二磷酸的数目或碳原子保持不变。

然而，需要萜烯衍生的化合物，其可以被认为是萜烯前体例如非环状或环状倍半萜或二萜的降解产物，其进而可以进一步化学和/或酶促转化为终产物，例如用作香料成分。

本发明要解决的问题是提供显示酶促萜烯降解活性的多肽或将此类萜烯转化为可降解衍生物的多肽。

本发明要解决的另一个问题是建立新的完全生物催化降解途径以产生确定的萜烯降解产物。

发明内容

上述问题可以通过提供一类新的具有烯醛裂解活性的多肽而出人意料地得到解决，该类多肽首次允许将羰基官能化的萜烯化合物特异性缩短2个碳原子和各自的生物催化过程。例如，该类新的酶允许将包含二萜碳骨架并带有末端醛基的半日花烷(labdane，赖百当)型化合物柯巴醛转化为缩短2个碳原子的相应的去二甲基(dinor)-半日花烷化合物迈诺醇氧基，即保留由18个碳原子组成的碳骨架。

上述问题还可以以替代方式，通过提供具有拜耳-维利格(Baeyer-Villiger)单加氧酶(BVMO)活性的新型多肽，使萜类化合物特异性氧化成酯(拜耳-维利格氧合作用)和相应的生物催化过程出人意料地得到解决。例如，该类新的BVMO允许将包含二萜碳骨架并带有末端醛基的半日花烷型化合物柯巴醛转化为相应的去甲基半日花烷甲酸酯。通过所述拜耳-维利格氧合作用，可以通过具有酯酶活性的多肽的作用将半日花烷化合物容易地转化为相应的去甲基半日花烷。该步骤因此导致缩短一个碳原子。在末端醛基被末端酮基取代的情况下，以相同的方式缩短但现在缩短多于一个碳酸酯是可能的。重复进行BVMO催化的氧合步骤和酯酶催化的裂解步骤的组合，可以逐步缩短萜烯分子的烃链。

由上述烯醛裂解酶和BVMO酶催化的降解步骤的组合允许构建全新的生化降解途径，适用于更多种类的羰基官能化化合物，特别是环状或非环状的萜烯或萜类化合物。

所述生物催化步骤可以与几个其他的在前(上游)或接续(下游)酶促步骤结合，并允许提供生物催化多步骤方法，用于从它们各自的前体完全酶促合成许多有价值的复合萜烯分子。

随后的路线说明了本发明的两种特定实施方案，其为允许将半日花烷醛柯巴醛降解为迈诺醇氧基的两条替代途径(“烯醛裂解多肽途径”和“BMVO途径)”，在本说明书随后的部分中更详细地解释了这些途径。该路线还说明了通过应用进一步的基于BMVO的降解步骤将迈诺醇氧基降解为γ-ambrol。

与所述示例性反应顺序完全类似，这种基本的生物合成策略可应用于柯巴醇的任何其他异构体或任何其他半日花烷型醛，以提供迈诺醇氧基、γ-ambryl乙酸酯或γ-ambrol的结构相关异构体。

如下文更详细地说明，其也可以应用于结构不同的单环或非环羰基化合物。

附图说明

图1.编码甲羟戊酸途径酶的基因的染色体整合和两个合成基因操纵子的组织的示意图。mvaK1，一种编码来自肺炎链球菌(S.pneumoniae)的甲羟戊酸激酶的基因；mvaD，一种编码来自肺炎链球菌的磷酸甲羟戊酸脱羧酶的基因；mvaK2，一种编码来自肺炎链球菌的磷酸甲羟戊酸激酶的基因；fni，一种编码来自肺炎链球菌的异戊烯基二磷酸异构酶的基因；mvaA，一种编码来自金黄色葡萄球菌(S.aureus)的HMG-CoA合酶的基因；mvaS，一种编码来自金黄色葡萄球菌的HMG-CoA还原酶的基因；atoB，一种编码来自大肠杆菌(E.coli)的乙酰乙酰辅酶A硫解酶的基因；ERG20，一种编码来自酿酒酵母(S.cerevisiae)的FPP合酶的基因。

图2.在全细胞生物转化试验中使用BVMO将迈诺醇氧基转化为γ-ambryl乙酸酯。通过不同BVMO：SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1、SCH46-BVMO1在迈诺醇氧基的生物转化期间形成的产物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了迈诺醇氧基的GC-MS分析。下部的色谱图显示了使用不表达重组BVMO的对照细胞对生物转化进行的GC-MS分析。

图3.在全细胞生物转化试验中使用BVMO进行的柯巴醛的转化。通过不同BVMO：SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1、SCH46-BVMO1在对顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的生物转化期间形成的产物(如实验部分所述的化合物3a、3b、4a、4b)的GC-MS分析。上部的色谱图显示了使用不表达重组BVMO的对照细胞对生物转化进行的GC-MS分析。

图4.在全细胞生物转化试验中使用SCH23-BVMO1进行的柯巴醛转化的动力学。在温育0、18和42小时后通过SCH23-BVMO1进行的顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛de生物转化期间形成的产物(如实验部分所述的化合物1a、1b、3a、3b、4a、4b)的GC-MS分析。

图5.使用BVMO对迈诺醇氧基进行的体外转化。通过SCH23-BVMO1和SCH24-BVMO1对迈诺醇氧基进行的转化的GC-MS分析显示了γ-ambrol乙酸酯的形成。上部的色谱图显示了使用不含重组BVMO的对照蛋白对转化进行的GC-MS分析。

图6.使用BVMO和酯酶对迈诺醇氧基进行的体外转化。通过SCH23-BVMO1、SCH23-EST以及SCH23-BVMO1与SCH23-EST组合对迈诺醇氧基进行的转化的GC-MS分析显示了γ-ambrol的形成。上部的色谱图显示了使用不含重组酶的对照蛋白对转化进行的GC-MS分析。

图7.使用BVMO和酯酶对迈诺醇氧基进行的体外转化。通过SCH24-BVMO1、SCH24-EST以及SCH24-BVMO1与SCH24-EST组合对迈诺醇氧基进行的转化的GC-MS分析显示了γ-ambrol的形成。上部的色谱图显示了使用不含重组酶的对照蛋白对转化进行的GC-MS分析。

图8.使用酯酶将化合物4a和4b体外转化为化合物5a和5b。化合物4a和4b通过SCH23-EST1、SCH24-EST1和SCH25-EST1的体外转化的GC-MS分析显示了化合物5a和5b的形成。

图9.使用SCH23-BVMO1和酯酶将柯巴醛体外转化为化合物5a和5b。通过SCH23-BVMO与SCH23-EST1、SCH24-EST1和SCH25-EST1组合对顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的体外转化的GCMS分析显示了化合物5a和5b的形成。标有*且保留时间为11.95分钟的峰对应于γ-ambryl乙酸酯；在用BVMO单独温育的样品中观察到这种化合物是由于在这些测定中使用的柯巴醛混合物中存在少量迈诺醇氧基。

图10.使用SCH24-BVMO1和酯酶将柯巴醛体外转化为化合物5a和5b。通过SCH23-BVMO与SCH23-EST1和SCH25-EST1组合对顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的体外转化的GCMS分析显示了化合物5a和5b的形成。标有*的保留时间为11.95分钟的峰对应于γ-ambryl乙酸酯；在用BVMO单独温育的样品中观察到这种化合物是由于在这些测定中使用的柯巴醛混合物中存在少量迈诺醇氧基。

图11.表达BVMO和酯酶的工程细菌细胞中14,15-去二甲基半日花烷化合物5a和5b和生物合成中间体的生化产生。上部的色谱图显示了通过大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，该细胞用pJ401-CPAL-1质粒转化，允许表达柯巴醛生物合成途径的酶。接下来的色谱图显示了细胞的GC-MS分析，该细胞用带有编码BVMO酶或BVMO酶和酯酶的核苷酸序列的第二质粒进一步转化。

图12.通过表达各种醇脱氢酶的大肠杆菌细胞对化合物5a和5b进行的生物转化产物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了使用不表达重组醇脱氢酶的对照细胞进行的生物转化的GC-MS分析。接下来的色谱图显示了使用表达重组RrhSecADH、SCH80-00043、SCH80-04254、SCH80-06135或SCH80-06582蛋白的细胞进行的转化的GC-MS分析。

图13.表达BVMO、酯酶和醇脱氢酶的工程细菌细胞中的γ-ambryl乙酸酯和生物合成中间体的生化产生。上部的色谱图显示了通过大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，该细胞用pJ401-CPAL-1质粒转化，允许表达柯巴醛生物合成途径的酶。中间的色谱图显示了细胞的GC-MS分析，该细胞用带有编码SCH-BVMO1和SCH24-EST的核苷酸序列的第二质粒进一步转化。底部的色谱图显示了细胞的GC-MS分析，该细胞用pJ401-CPAL-1和质粒pJ423-secADH-23BVMO-EST转化，允许RrhSecADH、SCH23-BVMO1和SCH23-EST蛋白的表达。

图14.A)使用表达GGPP合酶carG、CPP合酶SmCPS2、CPP磷酸酶TalVeTPP和要么SCH23-ADH1、SCH23-BVMO1、SCH23-EST1和SCH23-ADH2(YST120使用质粒)要么SCH24-ADH1a、SCH24-BVMO1、SCH24-EST1和SCH24-ADH2a(YST121使用质粒)的改性酿酒酵母菌株产生的萜烯和衍生物的GC-MS分析。对照菌株是仅表达柯巴醇生物合成途径的YST075。B)鉴定出法呢醛的区域的GC-MS分析，显示了法呢醛的质谱。C)鉴定出迈诺醇氧基的区域的GC-MS分析，显示了迈诺醇氧基的质谱。

图15.使用表达GGPP合酶carG、CPP合酶SmCPS2、CPP磷酸酶TalVeTPP和要么SCH23-ADH1、SCH23-BVMO1和SCH23-EST1(YST177)要么SCH24-ADH1a、SCH24-BVMO1和SCH24-EST1(YST178)的改性酿酒酵母菌株产生的迈诺醇氧基的GC-MS分析。对照菌株是仅表达柯巴醇生物合成途径的YST075。显示了迈诺醇氧基的质谱。

图16.使用表达CPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶和/或SCH94-3944的大肠杆菌细胞产生的二萜和衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了二萜区域，对使用大肠杆菌细胞产生的化合物进行了GC-MS分析，该细胞用pJ401-CPOL-4质粒转化，允许表达柯巴醇生物合成途径的酶。接下来的色谱图显示了由相同的大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用质粒pJ423-SCH94-3945、pJ423-SCH94-3944或pJ423-SCH94-3944-3945进一步转化，允许SCH94-3945、SCH94-3944或者SCH94-3944与SCH94-3945组合的表达。

图17.使用表达磷酸酶、醇脱氢酶和SCH94-3944的大肠杆菌细胞产生的倍半萜和衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了对大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用pJ401-FAL-1质粒转化，允许法呢醛生物合成途径的酶的表达。下部的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用质粒pJ423-SCH94-3944进一步转化，允许表达SCH94-3944蛋白。

图18.通过表达SCH94-3944的大肠杆菌细胞生物转化柠檬醛、香茅醛和(E)-2-十二醛的产物的GC-MS分析。对于每种化合物，显示了使用对照大肠杆菌细胞和经转化以表达SCH94-3944蛋白的细胞进行的转化的GC-MS分析。

图19.使用表达CPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶的大肠杆菌细胞产生的倍半萜和二萜的GC-MS分析。色谱图显示了对用pJ401-CPAL-1质粒转化以允许表达柯巴醛生物合成途径的酶的大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析。

图20.使用表达CPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶和SCH80-05241、SCH94-3944、PdigitDUF4334、PitalDUF4334-1或AspWeDUF4334的大肠杆菌细胞产生的二萜和衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了对由pJ401-CPAL-1质粒转化以允许表达柯巴醛生物合成途径的酶的大肠杆菌DP1205细胞产生的化合物的GC-MS分析中的二萜区域。接下来的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用表达SCH80-05241、SCH94-3944、PdigitDUF4334、PitalDUF4334-1或AspWeDUF4334重组蛋白的第二质粒进一步转化。

图21.使用表达CPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶和CnecaDUF4334、Rins-DUF4334、RhoagDUF4334-2、RhoagDUF4334-3、RhoagDUF4334-4、CgatDUF4334、GclavDUF4334、TcurvaDUF4334或PprotDUF4334的大肠杆菌细胞产生的二萜和衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了用pJ401-CPAL-1质粒转化以允许表达柯巴醛生物合成途径的酶的大肠杆菌DP1205细胞产生的化合物的GC-MS分析的二萜区域。接下来的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用表达CnecaDUF4334、Rins-DUF4334、RhoagDUF4334-2、RhoagDUF4334-3、RhoagDUF4334-4、CgatDUF4334、GclavDUF4334、TcurvaDUF4334或PprotDUF4334重组蛋白的第二质粒进一步转化。

图22.使用表达磷酸酶、醇脱氢酶和SCH80-05241、SCH94-3944、PdigitDUF4334、PitalDUF4334-1或AspWeDUF4334的大肠杆菌细胞产生的倍半萜和衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了由pJ401-CPAL-1质粒转化以允许表达柯巴醛生物合成途径的酶的大肠杆菌DP1205细胞产生的化合物的GC-MS分析中的倍半萜区域。接下来的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用表达SCH80-05241、SCH94-3944、PdigitDUF4334、PitalDUF4334-1或AspWeDUF4334重组蛋白的第二质粒进一步转化。

图23.使用表达磷酸酶、醇脱氢酶和CnecaDUF4334、Rins-DUF4334、RhoagDUF4334-2、RhoagDUF4334-3、RhoagDUF4334-4、CgatDUF4334、GclavDUF4334、TcurvaDUF4334或PprotDUF4334的大肠杆菌细胞产生的倍半萜和衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了由pJ401-CPAL-1质粒转化以允许表达柯巴醛生物合成途径的酶的大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析的倍半萜区域。接下来的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用表达CnecaDUF4334、Rins-DUF4334、RhoagDUF4334-2、RhoagDUF4334-3、RhoagDUF4334-4、CgatDUF4334、GclavDUF4334、TcurvaDUF4334或PprotDUF4334重组蛋白的第二质粒进一步转化。

图24.包含催化酶促烯醛裂解的蛋白质的GXWXG和DUF4334结构域的比对和保守氨基酸。方框显示了相应蛋白质家族域的预测定位。

图25.通过SCH94-3944的单个氨基酸变体进行的法呢醛和柯巴醛转化活性。活性表示为所产生的迈诺醇氧基和香叶基丙酮的总量，以相对于野生型酶活性的百分比表示。

图26.表达CPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶、烯醛裂解酶和BVMO的大肠杆菌细胞对迈诺醇氧基和γ-ambryl乙酸酯的生化产生的GC-MS分析。上部的色谱图显示了用pJ401-CPAL-1质粒转化以允许表达柯巴醛生物合成途径的酶的大肠杆菌DP1205细胞产生的化合物的GC-MS分析的二萜区域。接下来的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用表达AspWeBVMO、SCH94-3944、SCH94-3944连同AspWeBVMO、SCH94-3944连同SCH23-BVMO1、SCH94-3944连同SCH24-BVMO1、SCH94-3944连同SCH46-BVMO1的第二质粒进一步转化。

图27.使用表达GGPP合酶carG、CPP合酶SmCPS2、CPP磷酸酶TalVeTPP、醇脱氢酶SCH23-ADH1和AspWeDUF4334(YST184)、CnecaDUF4334(YST185)、Pdigit7033(YST186)、SCH94-3944(YST187)或SCH80-05241(YST188)的改性酿酒酵母菌株产生的萜烯和衍生物的GC-MS分析。

图28.A)通过YST184、YST185、YST186、YST187和YST188产生的已鉴定萜烯的百分比。B)相对于对照中已鉴定萜烯的量(SumT-C)，通过YST184、YST185、YST186、YST187和YST188产生的已鉴定萜烯的总量(SumT)。对照菌株是表达柯巴醇生物合成途径的YST075。

图29.使用表达GGPP合酶carG、CPP合酶SmCPS2、CPP磷酸酶TalVeTPP、醇脱氢酶SCH23-ADH、烯醛裂解多肽Asp4WeDUF43和SCH23-BVMO1(YST190)、SCH24-BVMO1(YST191)或AspWeBVMO(YST192)的改性酿酒酵母菌株产生的萜烯和衍生物的GC-MS分析。

图30.A)相对于YST184中已鉴定萜烯的量(SumT-C)，通过YST190、YST191和YST192产生的已鉴定萜烯的总量(SumT)。B)通过YST190、YST191和YST192产生的已鉴定萜烯的百分比。

图31.使用表达LPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶和烯醛裂解多肽的大肠杆菌细胞产生的二萜和二萜衍生物的GC-MS分析。上部的色谱图显示了由大肠杆菌DP1205细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用pJ401-LOH-2载体转化，以允许表达半日花烯二醇生物合成途径的酶。接下来的色谱图显示了由相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析，这些细胞用表达AzeTolADH1醇脱氢酶或SCH94-3945醇脱氢酶以及SCH94-3944烯醛裂解多肽的第二质粒进一步转化。

图32.含有具有BVMO活性的蛋白质的FMO样结构域的比对和保守氨基酸。方框显示了相应蛋白质家族域的预测定位。

图33.使用表达双功能PvCPS、CPP磷酸酶TalVeTPP、醇脱氢酶SCH23-ADH、烯醛裂解多肽AspWeDUF4334、拜耳-维利格单加氧酶SCH23-BVMO1以及要么酯酶SCH23-EST(YST257)要么酯酶SCH24-EST(YST258)的改性酿酒酵母菌株产生的萜烯和衍生物的GC-MS/FID分析。

图34.通过表达CPP合酶、磷酸酶、醇脱氢酶、烯醛裂解酶、BVMO和酯酶的大肠杆菌细胞进行的γ-ambrol生化产生的GC-MS分析。A.用pJ401-Mnoxy质粒转化以允许表达迈诺醇氧基生物合成途径的酶的大肠杆菌DP1205细胞产生的化合物的GC-MS分析。B.通过进一步表达BVMO(SCH24-BVMO)的相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析。C.通过进一步表达BVMO(SCH24-BVMO)和酯酶(SCH24-EST)的相同大肠杆菌细胞产生的化合物的GC-MS分析。

具体实施方式

所使用的缩写

ADH 醇脱氢酶

BVMO 拜耳-维利格(Baeyer-Villiger)单加氧酶

bp 碱基对

kb 千碱基

CPP 柯巴基二磷酸(酯)

CPS 柯巴基二磷酸合酶

DNA 脱氧核糖核酸

cDNA 互补DNA

DMAPP 二甲基烯丙基二磷酸(酯)

DTT 二硫苏糖醇

FMO 黄素单加氧酶

FPP 法呢基二磷酸(酯)

GPP 香叶基二磷酸(酯)

GGPP 香叶基香叶基二磷酸(酯)

GGPS 香叶基香叶基二磷酸合酶

GC 气相色谱

IPP 异戊烯基二磷酸(酯)

LPP 半日花烯二醇二磷酸(酯)

LPS 半日花烯二醇二磷酸合酶

MS 质谱仪/质谱法

MVA 甲羟戊酸

PP 二磷酸(酯)，焦磷酸(酯)

PCR 聚合酶链反应

RNA 核糖核酸

mRNA 信使核糖核酸

miRNA 微RNA

siRNA 小干扰RNA

rRNA 核糖体RNA

tRNA 转移RNA

TPP 萜烯基二磷酸(酯)

定义

a)通用术语：

对于本文的说明书和所附权利要求，除非另有说明，否则“或”的使用意味着“和/或”。类似地，各种时态的“含”、“含有”、“包含”和“包括”是可互换的而不是限制性的。

应进一步理解，在各种实施方案的描述使用术语“包含”的情况下，本领域技术人员将理解，在一些特定情况下，可以使用“基本上由……组成”或“由……组成”的语言来替代地描述实施方案。

本文所用的术语“纯化的”、“基本上纯化的”和“分离的”是指不含其他不同化合物(本发明化合物通常以其天然状态与其缔合)的状态，因此“纯化的”、“基本上纯化的”和“分离的”物品占给定样品质量按重量计至少0.5％、1％、5％、10％或20％，或至少50％或75％。在一个实施方案中，这些术语是指本发明的化合物占给定样品质量按重量计至少95％、96％、97％、98％、99％或100％。如本文所用，当提及核酸或蛋白质时，核酸或蛋白质的术语“纯化的”、“基本上纯化的”和“分离的”也指一种纯化或浓缩状态，其不同于天然存在于例如原核或真核环境中，例如在细菌或真菌细胞中，或哺乳动物特别是人体中的状态。任何纯化程度或浓度，只要大于天然存在的纯化或浓缩程度，包括(1)从其他相关结构或化合物中的纯化，或(2)与在所述原核或真核环境中通常不相关的结构或化合物的缔合，都在“分离的”含义内。根据本领域技术人员已知的各种方法和工艺，本文所述的核酸、蛋白质或核酸或蛋白质的类别可以是分离的，或如若不然与它们通常在性质上不相关的结构或化合物相缔合。

术语“约”表示所述值的±25％的可能变化，特别是±15％、±10％、更特别是±5％、±2％或±1％。

术语“基本上”描述的值范围为约80至100％，例如85至99.9％，特别是90至99.9％，更特别是95至99.9％，或98至99.9％，尤其是99至99.9％。

“主要地”是指大于50％的范围内的比例，例如在51％至100％的范围内，特别是在75％至99.9％的范围内；尤其是85至98.5％，例如95至99％。

在本发明的上下文中，“主要产物”表示单一化合物或一组至少2种化合物，例如2、3、4、5或更多种，特别是2或3种化合物，该单一化合物或一组化合物“主要”是通过本文所述的反应制备的，并且基于由所述反应形成的产物的成分的总量，以主要比例包含在所述反应中。所述比例可以是摩尔比例，重量比例，或者优选基于色谱分析，由反应产物的相应色谱图计算的面积比例。

在本发明的上下文中，“副产物”表示单一化合物或一组至少2种化合物，例如2、3、4、5或更多种，特别是2或3种化合物，该单一化合物或一组化合物并非“主要”是通过本文所述的反应制备的。

由于酶促反应的可逆性，除非另有说明，否则本发明涉及在两个反应方向上本文所述的酶促或生物催化反应。

本文描述的多肽的“功能突变体”包括如下定义的此类多肽的“功能等同物”。

术语“立体异构体”包括构象异构体，特别是构型异构体。

根据本发明，通常包括本文所述化合物的所有“立体异构形式”，例如“结构异构体”和“立体异构体”。

“立体异构形式”特别地包括“立体异构体”及其混合物，例如。构型异构体(光学异构体)，例如对映异构体，或几何异构体(非对映异构体)，例如E-和Z-异构体，以及它们的组合。如果在一个分子中存在一个或多个不对称中心，则本发明包括这些不对称中心的不同构象的所有组合，例如对映异构体对。

“立体选择性”描述了产生立体异构纯形式的化合物的特定立体异构体的能力或以本文所述的酶催化方法从多种立体异构体中特异性转化特定立体异构体的能力。更具体而言，这意味着本发明的产物相对于特定的立体异构体富集，或者离析物相对于特定的立体异构体可以贫化。这可以通过根据下式计算的纯度％ee参数进行量化：

％ee＝[X_A-X_B]/[X_A+X_B]*100，

其中X_A和X_B代表立体异构体A和B的摩尔比(Molenbruch)。

术语“有选择地转化”或“增加选择性”通常是指，在所述反应的整个过程期间(即在反应的起始和终止之间)，在所述反应的某个时间点，或在所述反应的“一段”期间，特定的立体异构形式例如E-形式的不饱和烃以比相应的其他立体异构体形式例如Z-形式更高的比例或量(以摩尔为基准对比)被转化。特别地，在“一段”期间可以观察到所述选择性对应于底物初始量的1至99％，2至95％，3至90％，5至85％，10至80％，15至75％，20至70％，25至65％，30至60％，或40至50％的转化率。所述更高的比例或量可以例如以以下方式表示：

-在整个反应过程或其所述一段期间观察到的较高的异构体最大收率；

-在确定的底物转化率值百分比下，较高的异构体相对含量；和/或

-在较高的转化率值百分比下，相同的异构体相对含量；

其中的每一种优选相对于参考方法来观察，所述参考方法在其他相同条件下用已知化学或生物化学方法进行。

根据本发明，通常包括本文描述的化合物的所有“异构体形式”，例如结构异构体，尤其是立体异构体及其混合物，例如旋光异构体或几何异构体，例如E和Z异构体，以及它们的组合。如果在一个分子中存在几个不对称中心，则本发明包括这些不对称中心的不同构象的所有组合，例如对映异构体对，或立体异构体形式的任何混合形式。

根据本发明的反应的“收率”和/或“转化率”是在例如4、6、8、10、12、16、20、24、36或48小时的规定时间段内(反应在该段时间内进行)确定的。特别地，反应在精确定义的条件下进行，例如在本文定义的“标准条件”下进行。

不同的收率参数(“收率”或YP/S；“比生产率收率”；或时空收率(STY))在本领域中是众所周知的，并且如文献所述进行测定。

“收率”和“YP/S”(均以所生产的产品质量/所消耗的材料质量表示)在本文中用作同义词。

比生产率收率(specific productivity-yield)描述了每小时每L发酵液每克生物质所生产的产物的量。用WCW表示的湿细胞重量描述了生化反应中具有生物活性的微生物的数量。该值以每g WCW每小时的产品g数给出(即g/gWCW^-1h^-1)。可替代地，生物质的数量也可以表示为干的细胞重量的量，表示为DCW。此外，通过测量600nm(OD₆₀₀)处的光密度和使用实验确定的相关因子分别估算相应的湿细胞或干的细胞重量，可以更轻松地确定生物质浓度。

如果本公开涉及不同优先程度的特征、参数及其范围(包括上位的，非明确优选的特征、参数及其范围)，则除非另有说明，否则这些特征、参数和范围中的两个或更多个的任意组合与它们各自的优选程度无关地涵盖在本发明的公开内容中。

b)生化术语

术语“结构域”是指沿演化相关蛋白质序列的比对在特定位置保守的一组氨基酸或者氨基酸残基的部分序列。虽然其他位置的氨基酸可能因蛋白质同源物而异，但在此类结构域的特定位置高度保守的氨基酸表示可能对蛋白质的结构、稳定性或功能至关重要的氨基酸。通过它们在蛋白质同源物家族的比对序列中的高度保守性进行鉴定，它们可以用作标识符来确定所讨论的任何多肽是否属于先前鉴定的多肽家族。

术语“基序”或共有序列或“特征(signature)”是指演化相关蛋白质序列中的一个短保守区域。基序通常是结构域的高度保守部分，但也可能仅包括结构域的一部分。

“蛋白质家族”被定义为一组蛋白质，它们具有共同的演化起源，反映在它们的相关功能、序列相似性或相似的一级、二级或三级结构上。蛋白质家族中的蛋白质通常是同源的，并且具有相似的保守功能结构域和基序结构。

存在用于鉴定结构域的专业数据库，例如，SMART(Schultz等，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95,5857-5864；Letunic等，(2002)Nucleic Acids Res 30,242-244)、InterPro(Mulder等，(2003)Nucl.Acids.Res.31,315-318)、Prosite(Bucher andBairoch(1994)，生物分子序列基序的通用概要句法及其在自动序列解释中的功能。(In)ISMB-94；Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems forMolecular Biology.Altman R.,Brutlag D.,Karp P.,Lathrop R.,Searls D.,Eds.,pp53-61,AAAI Press,Menlo Park；Hulo等，Nucl.Acids.Res.32:D134-D137,(2004))，或Pfam(Bateman等，Nucleic Acids Research 30(1):276-280(2002))。结构域或基序也可以使用常规技术例如通过序列比对来鉴定。

术语“Pfam”是指由Pfam联盟维护的蛋白质结构域和蛋白质家族大型集合，可在多个赞助的万维网站点上获得，例如http://pfam.xfam.org//(欧洲分子生物学实验室-欧洲生物信息学研究所(EMBL_EBI)。Pfam的最新版本是Pfam 32.0(2018年9月)，基于UniProtReference Proteomes(El-Gebali S.et al,2019,Nucleic Acids Res.47,Databaseissue D427–D432)。Pfam结构域和家族通过使用多个序列比对和隐马尔可夫模型(HMM)来鉴定。Pfam-A家族或结构域分配是使用蛋白质家族的代表性成员通过策划的种子比对和基于种子比对的特征谱(profile)隐马尔可夫模型产生的高质量分配(除非另有说明，否则所查询的蛋白质与Pfam结构域或家族的匹配为Pfam-A匹配)。然后使用属于该家族的所有已鉴定序列自动生成该家族的完全比对(Sonnhammer(1998)Nucleic Acids Research 26,320-322；Bateman(2000)Nucleic Acids Research 26,263-266；Bateman(2004)NucleicAcids Research 32,Database Issue,D138-D141；Finn(2006)Nucleic Acids ResearchDatabase Issue 34,D247-251；Finn(2010)Nucleic Acids Research Database Issue38,D211-222)。例如，通过使用任何上述参考网站访问Pfam数据库，可以使用HMMER同源性搜索软件(例如HMMER2，HMMER3或更高版本hmmer.janelia.org/)针对HMM查询蛋白质序列。将所查询的蛋白质标识为pfam家族(或具有特定的Pfam结构域)的重要匹配是位得分(bitscore)大于或等于Pfam结构域的收集阈值的匹配。期望值(e值)也可以用作在Pfam中包含所查询的蛋白质或确定所查询的蛋白质是否具有特定的Pfam结构域的标准，其中e值低，远小于1.0，例如小于0.1或更小。

“E值”(期望值)是指仅凭偶然机会预期得分等于或高于该值的命中数。这意味着能给出可靠预测的良好E值远小于1。E值在1附近是偶然的期望。因此，E值越低，对域的搜索就越具体。只允许使用正数(由Pfam定义)。

本文所述的目标化合物的“前体”分子优选通过对所述前体分子进行至少一个结构改变的合适多肽的酶促作用而转化为所述目标化合物。例如，借助磷酸酶，通过酶促去除二磷酸部分，例如通过去除单磷酸酯或二磷酸酯基团，将“二磷酸酯前体”(例如“萜烯基二磷酸酯前体”)转化为所述目标化合物(例如萜烯醇)。例如，可以通过环化酶或合酶的作用，以一个或多个步骤，将“非环状前体”(如非环状萜烯前体”)转化为环状目标分子(如环状萜烯化合物)，而与这种酶的特定的酶促机理无关。

术语“蛋白质酪氨酸磷酸酶”表示通常已知从蛋白质上的磷酸化酪氨酸残基去除磷酸基团的一组酶。本文所述的所述家族的特定亚组是用于使磷酸化的萜烯分子去磷酸化的酶。

“萜烯合酶”表示一种多肽，其将萜烯前体分子转化为相应的萜烯目标分子，例如特别是经加工的目标萜烯醇。此类萜烯前体分子的非限制性例子为例如非环化合物，其选自法呢基焦磷酸(FPP)，香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)，或者异戊烯基焦磷酸(IPP)与二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)的混合物。在所获得的萜烯含有二磷酸部分的情况下，合酶被称为“萜烯基二磷酸合酶”。

术语“萜烯基二磷酸合酶”或“具有萜烯基二磷酸合酶活性的多肽”或“萜烯基二磷酸合酶蛋白(质)”或“具有产生萜烯基二磷酸的能力”涉及一种多肽，其能够催化任何立体异构体或其混合物的形式的萜烯基二磷酸的合成，该合成从无环萜烯焦磷酸，特别是GPP、FPP或GGPP或IPP开始与DMAPP一起进行。萜烯基二磷酸可能是唯一的产物，或者可能是萜烯基磷酸酯混合物的一部分。所述混合物可以包含萜烯基单磷酸酯和/或萜烯醇。上面的定义也适用于“双环二萜烯基二磷酸合酶”，它可产生双环萜烯基二磷酸，如CPP或LPP。作为此类“萜烯基二磷酸合酶”的例子，可以提及柯巴基二磷酸合酶(CPS)。柯巴基二磷酸可能是唯一的产物，或者可能是柯巴基磷酸酯混合物的一部分。所述混合物可以包含柯巴基单磷酸酯和/或其他萜烯基二磷酸。作为此类“二萜烯基二磷酸合酶”酶的另一个例子，可以提及半日花烯二醇二磷酸合酶(LPS)。半日花烯二醇二磷酸可能是唯一的产物，或者可能是半日花烯二醇磷酸酯混合物的一部分。所述混合物可以包含半日花烯二醇单磷酸酯和/或萜烯基二磷酸。

术语“萜烯基二磷酸磷酸酶”或“具有萜烯基二磷酸磷酸酶活性的多肽”或“萜烯基二磷酸磷酸酶蛋白(质)”或“具有产生萜烯醇的能力”涉及一种多肽，其能够催化二磷酸部分或单磷酸部分的去除(无论特定酶促机理如何)，以形成去磷酸化的化合物，特别是所述萜烯基部分的相应醇化合物。萜烯醇可以其任何立体异构体或其混合物的形式存在于产物中。萜烯醇可能是唯一的产物，或者可能是与其他萜烯化合物(例如所述萜烯基二磷酸的各个(例如非环状)萜烯基二磷酸酯前体的去磷酸化类似物)的混合物的一部分。上面的定义也适用于“双环萜烯基二磷酸磷酸酶”，其产生双环萜烯醇，如柯巴醇或半日花烯二醇。

作为此类“萜烯基二磷酸磷酸酶”的例子，可以提及柯巴基二磷酸磷酸酶(CPP磷酸酶)。柯巴醇可能是唯一的产品，或者可能是与去磷酸化前体(例如法呢醇和/或香叶基香叶醇)的混合物的一部分；和/或由反应混合物中的酶促副反应产生的副产物，例如此类醇或其他环状或非环状二萜的酯或醛。作为此类“萜烯基二磷酸磷酸酶”的酶的另一个例子，可以提及的是半日花烯二醇二磷酸磷酸酶(LPP磷酸酶)。半日花烯二醇可能是唯一的产品，或者可能是与去磷酸化前体(例如法呢醇和/或香叶基香叶醇)的混合物的一部分；和/或由反应混合物中的酶促副反应产生的副产物，例如此类醇或其他环状或非环状二萜的酯或醛。

本发明上下文中的“烯醛裂解酶”或“烯醛裂解蛋白”或“烯醛裂解多肽”是指“α,β-不饱和醛碳-碳双键裂解酶”，其也可以称为“α,β-不饱和醛C＝C键裂解酶”或“α,β-不饱和醛C＝C裂解酶”或“烯醛C＝C裂解酶”。基于蛋白结构域组织，本发明的烯醛裂解蛋白也可以被描述为“DUF4334蛋白质家族”的成员和/或“GXWXG蛋白质家族”的成员。

更特别地，本发明的烯醛裂解酶具有将半日花烷型羰基化合物例如半日花烷醛特别是柯巴醛裂解为相应的去二甲基半日花烷羰基化合物的能力。“拜耳-维利格单加氧酶”(BVMO)是黄素酶并且属于具有氧化还原酶活性的多肽类(EC 1.14.13.X)。它们催化直链、环状(芳香或非芳香)醛或酮氧化成相应的酯或内酯，与化学拜耳-维利格氧化作用非常相似。在酶促氧化过程中，分子氧的一个原子结合到未活化的羰基化合物的碳-碳键中。BVMO需要NADPH或NADH作为辅因子或接受两者。它们还需要分子氧作为共底物。更特别的是，本发明的BVMO能够将萜烯衍生的醛或酮例如半日花烷型羰基化合物如半日花烷醛特别是柯巴醛和/或迈诺醇氧基氧化成相应的羰基酯。

“酯酶”是指具有水解酶活性的多肽，其在与水的化学反应(水解)中将酯分解为酸和醇。本发明上下文中的酯酶选自羧酸酯水解酶类(EC 3.1.1.-)，其从相应的酯底物分裂出酰基，如乙酰基或甲酰基。更特别的是，本发明的酯酶具有将半日花烷型酯化合物如γ-ambryl乙酸酯裂解以形成相应的半日花烷型醇如γ-ambrol的能力。

本发明上下文中的“醇脱氢酶”(ADH)是指一种多肽，其在NAD⁺或NADP⁺作为辅因子存在下具有将醇氧化成相应醛的能力。这样的酶是E.C.家族1.1.1.1(NAD⁺依赖性)或1.1.1.2(NADP⁺依赖性)的成员。更特别的是，本发明的ADH具有将半日花烷型醇氧化成相应的半日花烷型羰基化合物(醛或酮)的能力，例如将柯巴醇氧化成柯巴醛和/或半日花烯二醇氧化成相应的醛或者柯巴醇、半日花烯二醇的其他半日花烷醇型衍生物，例如柯巴醇、半日花烯二醇的相应去甲基或去二甲基半日花烷衍生物。本文所用的ADH可以是内源性存在于相应的生物催化过程中，也可以是外源性的。

“烯醛裂解活性”在如下文所述的“标准条件”下测定：可以使用重组烯醛裂解多肽表达宿主细胞，经破坏的烯醛裂解多肽表达细胞，它们的级分，或富集或纯化的烯醛裂解多肽来确定，条件是在大约20至45℃，例如大约25至40℃，优选25至32℃的温度下，在pH值为6至11，优选为7至9的培养基或反应介质(优选经缓冲的)中，并在存在参考底物(此处特别是柯巴醛)的情况下，以1至100μM，优选5至50μM，尤其是30至40μM的初始浓度添加，或由细胞宿主内源产生。形成相应裂解产物例如迈诺醇氧基的转化反应进行10分钟至5小时，优选约1至2小时。然后可以用常规方法，例如在用有机溶剂如乙酸乙酯萃取后确定裂解产物。

“BVMO活性”在如下文所述的“标准条件”下测定：可以使用重组BVMO表达宿主细胞，经破坏的BVMO表达细胞，它们的级分，或富集或纯化的BVMO酶来确定，条件是在大约20至45℃，例如大约25至40℃，优选25至32℃的温度下，在pH值为6至11，优选为7至9的培养基或反应介质(优选经缓冲的)中，并在存在参考底物(此处特别是柯巴醛和/或迈诺醇氧基)的情况下，以1至100μM，优选5至50μM，尤其是30至40μM的初始浓度添加，或在分子氧的存在下由细胞宿主内源产生。对于体外测定，必须以合适的易于确定的浓度范围添加选自NADH和NADPH的辅因子。形成相应裂解产物例如在柯巴醛的情况下形成甲基酯1a和/或1b，或者在迈诺醇氧基的情况下形成γ-ambryl乙酸酯的转化反应进行10分钟至5小时，优选约1至2小时。然后可以用常规方法，例如在用有机溶剂如乙酸乙酯萃取后确定氧化产物。

“萜烯基二磷酸合酶活性”(如CPS或LPS活性)在如下文所述的“标准条件”下测定：可以使用重组萜烯基二磷酸合酶表达宿主细胞，经破坏的萜烯基二磷酸合酶表达细胞，它们的级分，或富集或纯化的萜烯基二磷酸合酶来确定它们，条件是在大约20至45℃，例如大约25至40℃，优选25至32℃的温度下，在pH值为6至11，优选为7至9的培养基或反应介质(优选经缓冲的)中，并在存在参考底物(此处特别是GGPP)的情况下，以1至100μM，优选5至50μM，尤其是30至40μM的初始浓度添加，或由细胞宿主内源产生。形成萜烯基二磷酸的转化反应进行10分钟至5小时，优选约1至2小时。如果不存在内源性磷酸酶，则向反应混合物中加入一种或多种外源性磷酸酶，例如碱性磷酸酶，以将合酶形成的萜烯基二磷酸转化为相应的萜烯醇。然后可以用常规方法，例如在用有机溶剂如乙酸乙酯萃取后确定萜烯醇。

“萜烯基二磷酸磷酸酶活性”(如CPP或LPP磷酸酶活性)在如下文所述的“标准条件”下测定：可以使用重组萜烯基二磷酸磷酸酶表达宿主细胞，经破坏的萜烯基二磷酸磷酸酶表达细胞，它们的级分，或富集或纯化的萜烯基二磷酸磷酸酶来确定它们，条件是在大约20至45℃，例如大约25至40℃，优选25至32℃的温度下，在pH值为6至11，优选为7至9的培养基或反应介质(优选经缓冲的)中，并在存在参考底物(此处例如是CPP或LPP)的情况下，以1至100μM，优选5至50μM，尤其是30至40μM的初始浓度添加，或由细胞宿主内源产生。形成萜烯基二磷酸的转化反应进行10分钟至5小时，优选约1至2小时。然后可以用常规方法，例如在用有机溶剂如乙酸乙酯萃取后确定萜烯醇。

对于上述酶活性中的每一种，合适的标准条件的具体例子可以从下面的实验部分中获得。

萜烯合酶的术语“生物学功能”、“功能”、“生物学活性”或“活性”是指本文所述的萜烯基二磷酸合酶催化从相应的前体萜烯形成至少一种萜烯基二磷酸的能力。

萜烯基二磷酸磷酸酶的术语“生物学功能”、“功能”、“生物学活性”或“活性”是指本文所述的萜烯基二磷酸磷酸酶催化从所述萜烯基化合物中去除二磷酸基团以形成相应的萜烯醇的能力。

“甲羟戊酸途径”也称为“类异戊二烯途径”或“HMG-CoA还原酶途径”，是存在于真核生物、古菌和一些细菌中的必不可少的代谢途径。甲羟戊酸途径从乙酰辅酶A开始，产生两个五碳结构单元，称为异戊烯基焦磷酸(IPP)和二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)。关键酶是乙酰乙酰-CoA硫解酶(atoB)、HMG-CoA合酶(mvaS)、HMG-CoA还原酶(mvaA)、甲羟戊酸激酶(MvaK1)、磷酸甲羟戊酸激酶(MvaK2)、甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MvaD)和异戊烯基二磷酸异构酶(idi)。将甲羟戊酸途径与酶活性相结合以产生萜烯前体GPP、FPP或GGPP，例如特别是FPP合酶(ERG20)，允许萜烯的重组细胞产生。

如本文所用，术语“宿主细胞”或“经转化的细胞”是指一种细胞(或生物)，其被改变以携带(harbor)至少一个核酸分子，例如，编码所需蛋白质或核酸序列的重组基因，其在转录时产生本发明的功能性多肽，即，上文定义的萜烯基二磷酸合酶蛋白或萜烯基二磷酸磷酸酶。宿主细胞特别是细菌细胞、真菌细胞或植物细胞或植物。宿主细胞可含有已整合到宿主细胞的核或细胞器基因组中的重组基因或几个基因，例如被组织为操纵子的基因。或者，宿主可以在染色体外含有重组基因。

术语“生物体”是指任何非人的多细胞或单细胞生物体，例如植物或微生物。特别地，微生物是细菌、酵母、藻类或真菌。

术语“植物”可互换使用以包括植物细胞，包括植物原生质体、植物组织、产生再生植物的植物细胞组织培养物，或植物的一部分，或植物器官诸如根、茎、叶、花、花粉、胚珠、胚、果实等。任何植物均可用于实施本文实施方案的方法。

当特定的生物体或细胞天然地产生FPP或当其不天然地产生FPP但是用本文所述的核酸转化以产生FPP时意味着“能够产生FPP”。经转化以比天然存在的生物体或细胞产生更高量的FPP的生物体或细胞也被“能够产生FPP的生物体或细胞”所涵盖。

当特定的生物体或细胞天然地产生GGPP或当其不天然地产生GGPP但是用本文所述的核酸转化以产生GGPP时意味着“能够产生GGPP”。经转化以比天然存在的生物体或细胞产生更高量的GGPP的生物体或细胞也被“能够产生GGPP的生物体或细胞”所涵盖。

当特定的生物体或细胞天然地产生如本文所定义的萜烯基二磷酸或当其不天然地产生所述二磷酸酯但是用本文所述的核酸转化以产生所述二磷酸酯时意味着“能够产生萜烯基二磷酸”。经转化以比天然存在的生物体或细胞产生更高量的萜烯基二磷酸的生物体或细胞也被“能够产生萜烯基二磷酸的生物体或细胞”所涵盖。

当特定的生物体或细胞天然地产生本文所定义的萜烯醇或当其不天然地产生所述醇但是用本文所述的核酸转化以产生所述醇时意味着“能够产生萜烯醇”。经转化以比天然存在的生物体或细胞产生更高量的萜烯醇的生物体或细胞也被“能够产生萜烯醇的生物体或细胞”所涵盖。这同样适用于“能够产生半日花烷型醇”的特定生物体。

当特定的生物体或细胞天然地产生本文所定义的酯或当其不天然地产生所述酯但是用本文所述的核酸转化以产生所述酯时意味着“能够产生酯”。经转化以比天然存在的生物体或细胞产生更高量的酯的生物体或细胞也被“能够产生酯的生物体或细胞”所涵盖。

当特定的生物体或细胞天然地产生本文所定义的目标产物(例如酯、醇或羰基化合物或更特别地半日花烷型化合物)或当其不天然地产生所述目标产物但是用本文所述的核酸转化以产生所述目标产物时意味着“能够产生目标产物”。经转化以比天然存在的生物体或细胞产生更高量的目标产物的生物体或细胞也被“能够产生目标产物的生物体或细胞”所涵盖。

术语“发酵产生”或“发酵”是指微生物(由所述微生物所包含或由其产生的酶活性辅助)在细胞培养物中利用添加到温育中的至少一种碳源产生化合物的能力。

术语“发酵液”应理解为是指一种液体，特别是水性溶液或水性/有机溶液，其基于发酵工艺并且未进行或进行了例如本文所述的后处理(work up)。

“酶促催化”或“生物催化”方法是指所述方法在酶(包括本文所定义的酶突变体)的催化作用下进行。因此，该方法可以在分离形式的(纯化的、富集的)或粗制形式的所述酶的存在下，或者在细胞系统的存在下进行，特别是包含活性形式的所述酶并具有如本文所公开的催化转化反应能力的天然或重组微生物细胞。

c)化学术语：

术语“α,β-不饱和羰基”化合物描述了含有通式R^aR^bC＝C(R^c)-C＝O的醛或酮基团的有机分子，其中C＝C键可以是任何立体异构构型并且其中残基R^a、R^b和R^c可以相同或不同，并且对于特定的α,β不饱和羰基化合物可以具有如下所述的含义。

本发明上下文中的“半日花烷(labdane，赖百当)”化合物将显示其由20个碳原子组成的碳骨架的以下基本结构。将应用所描绘的碳原子编号以进一步限定所述碳骨架内的某些位置。

术语“半日花烷”涵盖任何立体异构形式的这种基本C₂₀-结构的任何化合物，并涵盖这种结构的任何变体，该结构包含位于碳环和/或侧链任何位置的一个或多个不饱和C-C键，特别是一个或多个C＝C键。还涵盖其变体，该变体在任何指定的伯、仲或叔C原子上含有一个或多个取代基，例如选自-OH、＝O、-O-CO_R(其中R可以是直链或支链烷基，特别是低级烷基，更特别是C₁-C₄烷基，如甲基、乙基、正或异丙基，或正、异或叔丁基)和-COOH的取代基。

此类“半日花烷”的“半日花烷衍生”化合物涵盖这样的化学化合物，其中基本C₂₀-碳骨架通过消除一个或多个碳原子而改性。作为例子，可以提及：

去甲基(失碳)半日花烷(C₁₉-骨架)、去二甲基(失二碳)半日花烷(C₁₈-骨架)、去三甲基(失三碳)半日花烷(C₁₇-骨架)和去四甲基(失四碳)半日花烷(C₁₆-骨架)。所消除的碳原子的位置通过说明碳数来表示。例如，在去甲基半日花烷中，其中15位的碳根缺失的情况称为“15-去甲基半日花烷”。

此类“半日花烷”的“半日花烷衍生”化合物还涵盖这样的化学化合物，其中基本C₂₀-碳骨架通过在半日花烷骨架的两个C-原子之间插入一个杂原子而改性。例如，在位置14和15之间插入醚桥会将半日花烷转化为去甲基半日花烷，特别是转化为去甲基半日花烷酯。

取代的半日花烷或取代的半日花烷衍生结构的非限制性例子如下：

如本文所用，“二磷酸(酯)”与“焦磷酸(酯)”是同义词。

“萜(烯)”是一大类多样的有机化合物，由多种植物尤其是针叶树和一些昆虫产生。萜烯是碳氢化合物。虽然有时与“萜烯”互换使用，但“萜类化合物”或“类异戊二烯”是经过修饰的萜烯，因为它们含有额外的官能团，通常是含氧的。

“萜类化合物”(“类异戊二烯”)是一大类多样的来自萜烯的天然有机化学物质。虽然有时与术语“萜烯”互换使用，但“萜类化合物”包含额外的官能团，通常是含O的基团，例如羟基、羰基或羧基。大多数是具有含氧官能团的多环结构。除非另有说明，在本说明书的上下文中，术语“萜烯”和术语“萜类化合物”可以互换使用。

萜烯(和萜类化合物)可以根据分子中异戊二烯单元的数量进行分类；名称中的前缀表示组成分子所需的萜烯单元数。半萜由单个异戊二烯单元组成。单萜由两个异戊二烯单元组成，分子式为C₁₀H₁₆。倍半萜由三个异戊二烯单元组成，分子式为C₁₅H₂₄。二萜由四个异戊二烯单元组成，分子式为C₂₀H₃₂。

“萜烯基”表示衍生自C5结构单元异戊二烯的非环状和环状化学烃基残基，并且特别地含有一个或更多个这样的结构单元。

“环状萜烯”或“环状萜烯基”或“环状二萜”或“环状二萜烯基”涉及在其结构中包含至少例如1、2、3、4或5个碳环稠合的和/或非稠合的环，优选两个碳环稠合环的萜烯化合物或萜烯基残基。

“双环萜烯”或“双环萜烯基”或“双环二萜烯”或“双环二萜烯基”是指在其结构中包含两个碳环，优选两个碳环稠合环的萜烯化合物或萜烯基残基。

本发明上下文中的“萜烯衍生物”或“萜类化合物衍生物”特别是指通过化学和/或酶促修饰从萜烯或萜类化合物获得的此类化合物。更具体而言，此类衍生物涵盖“烃链降解”衍生物。

“烃链降解”萜烯或萜类化合物与未降解前体的不同之处在于前体碳骨架的碳数量减少。

“烃基”残基是基本上由碳和氢原子组成的化学基团，并且可以是非环状、直链或支链的饱和或不饱和部分(片段)，或环状的饱和或不饱和部分，芳香或非芳香部分。在非环状结构的情况下，烃基残基包含1至30个、1至25个、1至20个、1至15个或1至10个或1至5个碳原子。在环状结构的情况下，其包含4至30个、4至25个、4至20个、4至15个、4至10个或尤其是4、5、6或7个碳原子。

所述烃基残基可以是未取代的，或可以带有至少一个，例如1至5个，优选0、1或2个取代基。

此类烃基残基的具体例子是如下定义的非环状直链或支链的烷基或烯基残基；或单环或多环，特别是单环或双环、饱和或不饱和的非芳族部分，例如在环状(例如双环)或非环状萜烯类化合物和本文定义的半日花烷类化合物中发现的。

“烷基”残基代表直链或支链的饱和烃残基。其包含1至30个、1至25个、1至20个、1至15个或1至10个或1至7个、1至6个、1至5个或1至4个碳原子。

“烯基”残基代表直链或支链、单或多不饱和烃残基。其包含2至30个、2至25个、2至20个、2至15个或2至10个或2至7个、2至6个、2至5个或2至4个碳原子。其可能有多至10个，例如1、2、3、4或5个C＝C双键。

术语“低级烷基”或“短链烷基”代表具有1至4个、1至5个、1至6个或1至7个，特别是1至4个碳原子的饱和的、直链或支链的烃基。例如，可以提及的是：甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基、正丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、正己基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1,1,2-三甲基丙基、1,2,2-三甲基丙基、1-乙基-1-甲基丙基和1-乙基-2-甲基丙基；以及正庚基，以及它们的单支链或多支链的类似物。

“长链烷基”代表例如具有8至30个，例如8至20个或8至15个碳原子的饱和的直链或支链的烃基，例如辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基(hencosyl)、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基、二十五烷基、二十六烷基、二十七烷基、二十八烷基、二十九烷基、角鲨烷基、结构异构体，尤其是它们的单支链或多支链的异构体。

“长链烯基”代表上述“长链烷基”基团的单不饱和或多不饱和类似物，

“短链烯基”(或“低级烯基”)代表具有2至4个、2至6个或2至7个碳原子且在任何位置具有一个双键的单不饱和或多不饱和的，尤其是单不饱和的直链或支链的烃基，例如C₂-C₆烯基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基乙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、3-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1,2-二甲基-1-丙烯基、1,2-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基，1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、4-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、2-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、4-甲基-2-戊烯基、1-甲基-3-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、3-甲基-3-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、2-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、4-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-2-丁烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基，1,2-二甲基-1-丁烯基，1,2-二甲基-2-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-1-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、1,3-二甲基-3-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-3-丁烯基、3,3-二甲基-1-丁烯基、3,3-二甲基-2-丁烯基、1-乙基-1-丁烯基、1-乙基-2-丁烯基、1-乙基-3-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-2-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基、1,1,2-三甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-甲基-1-丙烯基和1-乙基-2-甲基-2-丙烯基。

“亚烷基(alkylene，烷叉基)”代表具有1至10个碳原子的直链或单支链或多支链的烃桥连基团，例如选自-CH₂-、-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-、-(CH₂)₄-、-(CH₂)₂-CH(CH₃)-、-CH₂-CH(CH₃)-CH₂-、-(CH₂)₄-、-(CH₂)₅-、-(CH₂)₆-、-(CH₂)₇-、-CH(CH₃)-CH₂-CH₂-CH(CH₃)-或-CH(CH₃)-CH₂-CH₂-CH₂-CH(CH₃)-的C₁-C₇亚烷基，特别是选自-CH₂-、-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-、-(CH₂)₄-、-(CH₂)₂-CH(CH₃)-、-CH₂-CH(CH₃)-CH₂-的C₁-C₄亚烷基。

“烷亚基(alkylidene)”基团代表通过双键连接至分子主体的直链或支链烃取代基。其包含1至6个碳原子。作为此类“C₁-C₆烷亚基”的例子，可以提及的是甲亚基(＝CH₂)、乙亚基(＝CH-CH₂)、正丙亚基、正丁亚基、正戊亚基、正己亚基以及它们的结构异构体例如异丙亚基。

“烯亚基(alkenylidene)”代表具有超过2个碳原子的上述烷亚基的单不饱和类似物，并且可以称为“C₃-C₆烯亚基”。作为例子，可以提及正丙烯基、正丁烯基、正戊烯基和正己烯基。

上述残基的“取代基”包含一个杂原子，如O或N。优选地，取代基独立地选自-OH、C＝O或-COOH。最优选地，所述取代基是-OH。

“单环或多环烃基残基”包含1、2或3个稠合的(稠环化anellated)或非稠合的，可选有取代基的、饱和或不饱和烃环基团(或“碳环”基团)。每个环可彼此独立地包含3至8个，特别是5至7个，更特别地6个环碳原子。作为单环残基的例子，可以提及的是具有3至7个环碳原子的碳环基团的“环烷基”，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基；和相应的“环烯基”基团。“环烯基”(或“单或多不饱和环烷基”)特别代表具有5至8个，优选至多6个碳环成员的单环的单或多不饱和碳环基团，例如单不饱和环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。

作为多环残基的例子，可以提及的基团是这样的基团，其中，1、2或3个这样的环烷基和/或环烯基连接在一起，例如稠环化，以形成多环环烷基或环烯基环。作为非限制性例子，可提及由两个稠环化6元碳环组成的双环十氢化萘基(decalinyl)残基。

这样的单环或多环烃基残基中的取代基的数目可以为1至10个，特别是1至5个取代基。这种环状残基的合适的取代基选自低级烷基，低级烯基，烷亚基(alkylidene)，烯亚基(alkenylidene)，或含有一个杂原子如O或N的残基，例如-OH或-COOH。特别地，取代基独立地选自-OH、-COOH、甲基和甲亚基(methylidene)。

不饱和环状基团可包含1个或多个，例如1、2或3个C＝C键并且是芳族的或者特别是非芳族的。

上述单环或多环的饱和或不饱和基团还可含有至少一个，例如1、2、3或4个环杂原子，如O、N或S。

特定化合物名称及其结构式的概述

详细说明

a.本发明的特定实施方案

i)本发明涉及以下包括使用具有BMVO活性的多肽的生物催化方法的特定实施方案：

1.一种制备酯化合物的生物催化方法，包括：

(1)使通式I的羰基前体化合物与具有拜尔-维利格单加氧酶(BVMO)(EC1.13.14.-)活性的天然或重组多肽接触，特别是通过在羰基与前体的α-碳原子之间引入氧原子，以形成相应的羰基酯产物，

其中

“a”表示单键或双键，

如果“a”表示双键，则“x”为整数1，如果“a”表示单键，则“x”为整数2，

R¹彼此独立地代表H或低级烷基，如C₁-C₄烷基，特别是H或甲基，

R²代表H、直链或支链的饱和或不饱和的可选取代的特别是具有2至20个更特别是5至15个碳原子的烃基残基，或基团Cyc-A-，

其中

Cyc表示可选取代的饱和或不饱和的单环或多环的烃基残基，并且

A代表化学键或可选取代的直链或支链的亚烷基桥，特别是亚甲基，

R³彼此独立地代表H或C₁-C₃₀、C₁-C₂₀或特别是C₁-C₁₅烃基，或低级烷基，如C₁-C₄烷基，特别是H或甲基，更特别是每个都为H，

并且

当“a”表示单键时，Z代表含有羰基特别是醛或酮基的烃基残基，或者，

当“a”表示双键时，则Z与其连接的碳原子一起形成羰基(C＝O，特别是醛或酮基，或者带有末端羰基特别是醛或酮基的烷亚基残基，特别是C₁-C₆烷亚基残基，而

当“a”表示双键，并且Z与其所连接的碳原子一起形成羰基(C＝O)时，则R²和R¹与它们所连接的碳原子一起也可以形成环状的特别是单环的饱和或不饱和的可选取代的碳环基团，特别是5～7元环；

其中所述通式I的羰基化合物以立体异构纯的形式或作为立体异构体的混合物来提供；

(2)和可选地，将步骤(1)中形成的羰基酯分离，其中所述羰基酯化合物以立体异构体的形式或作为立体异构体的混合物获得。

2.实施方案1的生物催化方法，其中在通式I的羰基化合物中，

“a”代表化学双键，并且Z代表＝O(参见迈诺醇氧基)或＝C(R⁴)-C(R⁵)＝O(参见柯巴醛)；或者

“a”代表化学单键，并且Z代表-C(R⁵)＝O(参见去甲基半日花烷化合物3a、3b)；

其中

R⁴和R⁵彼此独立地代表H或低级烷基，如C₁-C₄烷基，特别是H或甲基。

3.前述实施方案中任一项的生物催化方法，其中通式I的羰基化合物具有半日花烷型结构，特别是半日花烷、去甲基半日花烷或去二甲基半日花烷结构。

4.前述实施方案中任一项的生物催化方法，其中所形成的羰基酯满足式II：

其中

R²和R³如上所定义，并且

E代表含有所述羰基酯基团的烃基残基，或者其中E和R²与它们所连接的碳原子一起形成环状酯基团。

5.实施方案4的生物催化方法，其中该羰基酯基团E选自：

-O-C(O)-R¹，

-C(R¹)₂-O-C(O)R⁵，

-C(R¹)＝C(R⁴)-O-C(R⁵)＝O；和

由E和R²与它们所连接的碳原子一起形成的环状酯基团，其中环状酯环代表5至7元环特别是6元环，例如式IIa和IIb的酯中的环：

其中R¹、R³、R⁴和R⁵如上所定义。

6.前述实施方案中任一项的生物催化方法，其中

R²代表基团Cyc-A-，其中A代表直链或支链的C₁-C₄亚烷基桥，特别是亚甲基，并且Cyc代表单环或多环的特别是双环的饱和或不饱和的烃基残基，特别是每个环包含5～7个，特别是6个环原子的双环稠环化烃基残基；其中Cyc可选地取代有1至10个，特别是1至5个取代基，其中所述取代基特别地可以独立地选自C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷亚基、C₃-C₆烯亚基、C₂-C₄烯基、氧代(＝O)、羟基或氨基；特别是C₁-C₄烷基如甲基，以及C₁-C₄烷亚基如甲亚基。

7.前述实施方案中任一项的方法，其中R²的Cyc残基形成可选取代的十氢萘基残基，特别是例如可通过萜烯环化获得的双环残基。

8.实施方案7的方法，其中Cyc-A代表式IIIa、IIIb或IIIc的具有15个碳原子的双环残基：

9.前述实施方案中任一项的方法，其中具有BVMO活性的多肽选自：

(1)一组多肽，在其氨基酸序列中含有Pfam ID号为PF00743的含黄素单加氧酶(FMO)蛋白质家族结构域，或与PF00743保持至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的结构域；

特别地，如果本发明的具有BVMO活性的多肽与所述结构域匹配的e值小于1x10^-5或小于1x10^-10，或小于或等于1x10^-15，或小于或等于1x10^-18，特别是在1x10^-10到1x10^-18的范围内，更特别是在1x10^-14到1x10^-17的范围内，则其被鉴定为包含所述结构域PF00743的FMO蛋白质家族的成员。

请求具有BVMO活性的多肽的序列作为查询序列。

例如，可以请求以下网站来检索并计算此类e值：

http://pfam.xfam.org/、

http://www.ebi.ac.uk/Tools/hmmer/search/hmmscan或

http://www.ebi.ac.uk/Tools/pfa/pfamscan/。

和/或

(2)一组多肽，其包含至少1、2、3、4、5、6、7个或所有的选自以下的序列基序/结构域：

SEQ ID NO:197中所示的GAGxSGL；

SEQ ID NO:198中所示的EKNxxxxGTWxENRYPGCACDVPxHxYXXSFE

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:198的位置1～10、11～20或21～32中的残基；

SEQ ID NO:199中所示的LxNAxGILNxWxxPxIPG

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:199的位置1～10或11～18中的残基；

SEQ ID NO:200中所示的LxxKxVxxIGxGSSGIQIxPxI

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:200的位置1～10或11～18中的残基；

SEQ ID NO:201中所示的GCRRxTPGxxYLExL

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:201的位置1～10、11～15中的残基；

SEQ ID NO:202中所示的CAGFDxxxxPRFxxxG

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:202的位置1～10或11～17中的残基；

SEQ ID NO:203中所示的PNxFxxxGPNxPxxNGxV

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:203的位置1～10或11～18中的残基；

SEQ ID NO:204中所示的AxWPGSxLHYxEAxxxPRxED

或其包含至多15个、至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:204的位置1～10或11～21中的残基；

其中

在以上基序中，残基x彼此独立地代表任何天然氨基酸残基，并且其中可选地在以上基序的每一个中，1至5个，如1、2、3、4或5个保守氨基酸残基(即不同于x残基)可以被修饰，例如通过氨基酸置换，特别是通过保守置换，条件是酶至少以分析可检测的程度保留BVMO酶活性。

和/或

(3)由以下组成的一组多肽：

(a)包含SEQ ID NO:2中所示的SCH23-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(b)包含SEQ ID NO:6中所示的SCH24-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(c)包含SEQ ID NO:10中所示的SCH25-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(d)包含SEQ ID NO:13中所示的SCH46-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(e)包含SEQ ID NO:16中所示的AspWeBVMO氨基酸序列的多肽(优先底物迈诺醇氧基及其异构体)；

(f)包含与a)至e)的任一氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽。

在上面提到的五种特定的BVMO多肽中，具有Pfam ID号PF00743的蛋白质家族结构域可以位于下表中给出的氨基酸残基位置(也参见图32中描绘的比对和其中框出的序列部分)

蛋白质序列	从	至	E值	登记ID	蛋白质结构域
						SCH23-BVMO1	23	388	2.9e-16	Pf00743	黄素结合单加氧酶样
SCH24-BVMO2	67	283	6.8e-15	Pf00743	黄素结合单加氧酶样
						SCH25-BVMO1	23	246	1.2e-15	Pf00743	黄素结合单加氧酶样
SCH46-BVMO1	23	388	1.8e-16	Pf00743	黄素结合单加氧酶样
						AspWe BVMO	20	249	1.7e-16	Pf00743	黄素结合单加氧酶样

氨基酸残基编号是指所附序列表中相应蛋白质序列的相应SEQ ID NO中的残基编号

另一个特定实施方案是指具有如上文由SEQ ID NO:2、6、10和13的任何特定氨基酸序列所鉴定的BVMO活性的本发明新多肽的多肽变体，并且其中多肽变体选自与SEQ IDNO:2、6、10、13和16中任何一个具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，并且含有相对于未修饰的SEQ ID NO:2、6、10、13和16中任何一个而言的至少一个置换修饰。

10.前述实施方案中任一项的方法，其在体外或试管内进行。

11.在体内进行的实施方案10的方法，其包括在步骤(1)之前，特别是在非人宿主细胞中，重组表达一种或多种具有进行BVMO催化酶促步骤所需酶活性的多肽。

12.实施方案11的方法，其中用编码至少一种具有BVMO活性的多肽的核酸来转化非人宿主细胞。

13.实施方案11或12的方法，其中所述非人宿主细胞是真核或原核细胞，特别是植物细胞、细菌或真菌细胞，特别是酵母细胞。

14.实施方案11至13中任一项的方法，其中所述非人宿主细胞是单细胞生物，源自多细胞生物的培养细胞，存在于源自多细胞生物的培养组织中的细胞，或存在于活的多细胞生物中的细胞。

15.实施方案10至13之一的方法，其中所述非人宿主细胞是埃希氏菌(Escherichia)属的细菌，特别是大肠杆菌(E.coli)，并且所述酵母是酵母(Saccharomyces)属或毕赤酵母(Pichia)属，特别是酿酒酵母(S.cerevisiae)，或植物细胞。

16.前述实施方案之一的方法，其中通式I的羰基化合物是半日花烷型化合物，选自：

a)半日花烷醛，特别是柯巴醛(或其任何立体异构不同的形式，例如包含顺式或反式形式，或顺式和反式形式的混合物)，其被所述BVMO转化为相应的去甲基半日花烷甲酸酯，特别是甲酸(5S,9S,10S)-15-去甲基半日花-8(20),13-二烯-14-基酯或其任何立体异构不同的形式；

b)去二甲基半日花烷酮，特别是迈诺醇氧基或其任何立体异构不同的形式，其被所述BVMO转化为γ-ambryl乙酸酯或其任何立体异构不同的形式；或者

c)去甲基半日花烷醛，特别是柯巴醛的C₁-降解类似物或其任何立体异构不同的形式，特别是下式

或其任何立体异构不同的形式，其被所述BVMO转化为相应的去二甲基半日花烷甲酸酯，特别是下式

或其任何立体异构不同的形式，

并且其中可选地将所获得的产物分离为立体异构基本纯的形式或作为立体异构体的混合物。

BVMO催化的羰基化合物向相应酯的转化的其他特定发明例子总结在以下示意性概览中：

其中参数“n”是1至20、1至15、1至10或1、2、3、4或5的整数。

17.实施方案16a的方法，其包括在步骤(1)之前，将半日花烷醇生物催化氧化为半日花烷醛，特别是将柯巴醇生物催化氧化为柯巴醛，

其中半日花烷醇可选地通过至少一种选自IPP、DMAPP、FPP和GGPP的萜烯基二磷酸前体的生物催化转化形成，特别是以现有技术中已知的单一步骤或至少两个步骤的组合进行。

所述半日花烷醇可以例如通过生物催化以如下方式产生：

a)从香叶基香叶基二磷酸(GGPP)以环化反应/去磷酸化反应的一步产生；

b)从GGPP分两步通过环化反应形成半日花烷二磷酸，例如柯巴基二磷酸(CPP)，然后将其去磷酸化为半日花烷醇；

c)从IPP和DMAPP，其通过双功能GGPP合酶/CPP合酶的作用直接转化为半日花烷二磷酸，例如CPP，然后去磷酸化；

这些步骤中使用的GGPP也可以由不同的生物催化步骤提供：

d)可以使用GGPP合酶直接从IPP和DMAPP产生GGPP；或者

e)GGPP可以通过FPP合酶的作用从IPP和DMAPP经由FPP，随后通过GGPP合酶的作用将FPP转化为GGPP来提供。

18.实施方案17的方法，其中

半日花烷醇的所述生物催化氧化，特别是柯巴醇至柯巴醛的生物催化氧化是由具有醇脱氢酶(ADH)(EC 1.1.1.-)活性的外源性或内源性多肽催化的；并且/或者

半日花烷醇的所述生物催化形成包括选自以下的至少一个步骤：

i)半日花烷二磷酸至半日花烷醇，特别是柯巴基二磷酸(CPP)至柯巴醇的生物催化去磷酸化，其由具有萜烯基二磷酸(TPP)磷酸酶活性的多肽催化，和/或

ii)萜烯基二磷酸前体例如香叶基香叶基二磷酸(GGPP)至CPP的生物催化环化，其由具有CPP合酶活性的多肽如SmCPS2(SEQ ID NO:185)催化；或例如IPP和DMAPP至CPP的生物催化环化，其由具有异戊二烯转移酶和柯巴基二磷酸合酶活性的双功能多肽如PvCPS催化，和/或

iii)从FPP至GGPP的生物催化形成，或从IPP和DMAPP的生物催化形成，每一种都由具有GGPP合酶活性的多肽催化。

19.实施方案18的方法，其中

所述生物催化氧化，特别是柯巴醇至柯巴醛的生物催化氧化由具有醇脱氢酶(ADH)活性的多肽催化，所述多肽选自

a)包含SEQ ID NO:134中所示的SCH23-ADH1_wt氨基酸序列的多肽，

b)包含SEQ ID NO:140中所示的SCH24-ADH1_wt氨基酸序列的多肽，

c)包含SEQ ID NO:161中所示的SCH94-3945_wt氨基酸序列的多肽，

d)包含SEQ ID NO:164中所示的SCH80-0540_wt氨基酸序列的多肽，

e)包含SEQ ID NO:167中所示的AzTolADH1_wt氨基酸序列的多肽，

f)包含SEQ ID NO:179中所示的CdGeoA_wt氨基酸序列的多肽，

g)包含与a)至f)的任一氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列并具有ADH活性的多肽。

和/或

所述生物催化去磷酸化，特别是从柯巴基二磷酸(CPP)至柯巴醇的生物催化去磷酸化由具有萜烯基二磷酸(TPP)磷酸酶活性的多肽催化，所述多肽选自：

a)包含SEQ ID NO:170中所示的AspWE TPP氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

b)包含SEQ ID NO:176中所示的TalCeTPP氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；和

c)包含SEQ ID NO:194中所示的TalVeTPP氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

其他合适的磷酸酶也公开于本申请人较早的EP申请18182783.3号中，该申请通过引用并入。

和/或

所述生物催化环化，特别是香叶基香叶基二磷酸(GGPP)至CPP的生物催化环化由选自以下的多肽催化：

包含SEQ ID NO:185中所示的SmCPS2氨基酸序列的具有柯巴基二磷酸合酶活性的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

所述生物催化环化，特别是IPP和DNMAPP至CPP的生物催化环化由选自以下的多肽催化：

包含SEQ ID NO:173中所示的PvCPS氨基酸序列的具有异戊二烯基转移酶和柯巴基二磷酸合酶活性的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

和/或

GGPP的所述生物催化形成由具有GGPP合酶活性且选自以下的多肽催化：

a)包含SEQ ID NO:182中所示的carG氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

b)包含SEQ ID NO:191中所示的CrtE氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

c)包含SEQ ID NO:173中所示的PvCPS氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽。

20.前述实施方案中任一项的方法，还包括如下步骤作为步骤(3)：使用化学或生物催化合成或两者的组合来处理在步骤(1)中形成的或在步骤(2)中分离的羰基酯以获得其衍生物，其中所述衍生物可特别地选自烃、醇、二醇、三醇、缩醛、缩酮、醛、酸、醚、酰胺、酮、内酯、环氧化物、乙酸酯、糖苷和/或酯，以及可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

21.实施方案20的方法，其中步骤(3)包括用具有酯酶活性EC 3.1.1(羧酸酯水解酶)的将羰基酯化合物水解成相应的脱酯化产物(其可以是醇或其异构化产物)，以及可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

22.实施方案21的方法，其中在进一步的步骤(4)中使步骤(3)的脱酯化产物进行酶促氧化还原反应，其中特别是该氧化还原反应包括通过外源性或内源性醇脱氢酶(ADH)(EC 1.1.1.-)的酶促作用，将步骤(3)中形成的醇基团氧化为相应的酮基团。

23.实施方案21的方法，其中该酯酶从由以下构成的群组中选出：

a)包含SEQ ID NO:20中所示的SCH23-酯酶氨基酸序列的多肽；

b)包含SEQ ID NO:24中所示的SCH24-酯酶氨基酸序列的多肽；

c)包含SEQ ID NO:28中所示的SCH25-酯酶的氨基酸序列的多肽；

d)包含SEQ ID NO:31中所示的SCH46-酯酶氨基酸序列的多肽；或者

e)包含与a)至d)的任一氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列并具有酯酶活性的多肽。

24.实施方案23的方法，其中

a)去甲基半日花烷酯，特别是去甲基半日花烷甲酸酯被所述酯酶脱酯化成去甲基半日花烷羰基化合物，特别是下式的羰基化合物

或其相应的烯醇，其通过异构化转化为所述羰基化合物；

或者

b)去四甲基半日花烷酯，特别是γ-ambryl乙酸酯被所述酯酶脱酯化为去四甲基半日花烷，特别是γ-ambrol；或者

c)去二甲基半日花烷甲酸酯，特别是下式的甲酸酯

或其任何立体异构不同的形式被所述酯酶脱酯化为相应的去二甲基半日花烷醇，特别是下式的醇化合物

或其任何立体异构不同的形式，

并且其中可选地将所获得的产物以立体异构基本纯的形式或作为立体异构体的混合物分离。

25.实施方案22的方法，其中该ADH从由以下构成的群组中选出：

a)包含SEQ ID NO:137中所示的SCH23-ADH2_wt氨基酸序列的多肽，

b)包含SEQ ID NO:143中所示的SCH24-ADH2_wt氨基酸序列的多肽，

c)包含SEQ ID NO:146中所示的RrhSecADH_wt氨基酸序列的多肽，

d)包含SEQ ID NO:155中所示的SCH80-06135_wt氨基酸序列的多肽，

e)包含与a)至d)的任一氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列并具有ADH活性的多肽。

26.实施方案24的方法，其中所获得的去二甲基半日花烷醇，特别是下式的醇

或其任何立体异构不同的形式被所述ADH氧化成相应的去二甲基半日花烷羰基化合物，特别是迈诺醇氧基，

ii)本发明涉及以下包括使用具有烯醛裂解活性的多肽的生物催化方法的特定实施方案：

27.一种制备通式IV化合物的生物催化方法：

其中

R¹代表H或低级烷基，特别是甲基，

R²代表H，直链或支链的饱和或不饱和的可选取代的烃基，特别是烷基或烯基，特别是具有至多30个、至多20个、至多15个或至多10个碳原子的基团，或残基Cyc-A-，

其中

Cyc代表可选取代的饱和或不饱和的特别是非芳族的、单环或多环的、特别是单环或双环的烃基残基，特别是具有5至7个环碳原子的基团，并且

并且

R³彼此独立地代表H或低级烷基，如C₁-C₄烷基，特别是H或甲基，更特别是每个都为H，

该方法包括以下步骤：

(1)使通式V的相应未降解前体与具有烯醛裂解活性的天然或重组多肽特别是具有α,β-不饱和醛C＝C键裂解的多肽接触：

其中

R¹、R²和R³定义同上；并且

R⁴代表H或低级烷基，特别是H或甲基，

R⁵代表H或低级烷基，特别是H，

并且其中所述化合物可以立体异构基本纯的形式(例如以E-或Z-形式)或作为立体异构体的混合物存在，

以及

(2)可选地，将步骤(1)中获得的式IV的降解产物分离，其中所述通式IV的化合物可以立体异构纯的形式或作为立体异构体的混合物获得。

28.实施方案27的方法，其中

具有所述烯醛裂解活性的所述多肽从包含以下的一组多肽中选出：

a)至少一个DUF4334蛋白质家族结构域，其Pfam ID号为PF14232(特别是在其氨基酸序列的C端区域内)；和/或

b)至少一个GXWXG蛋白质家族结构域，其Pfam ID号为PF14231(特别是在其氨基酸序列的N端区域内)；或者

c)与PF14232或PF14231保持至少90％序列同一性的结构域；

特别地，如果本发明的具有烯醛裂解活性的多肽与所述结构域匹配的e值小于1x10^-5，或小于1x10^-10，或小于1x10^-15，或小于1x10^-20，或小于1x10^-25，或小于1x10^-30，或小于或等于1x10^-35，特别是在1x10^-20到1x10^-32的范围内，更特别是在1x10^-25到1x10^-31的范围内，则其被鉴定为包含所述结构域PF14232的DUF4334蛋白质家族的成员。

例如，可以请求以下网站来检索并计算此类e值：

http://pfam.xfam.org/、

http://www.ebi.ac.uk/Tools/hmmer/search/hmmscan或

http://www.ebi.ac.uk/Tools/pfa/pfamscan/

特别地，如果本发明的具有烯醛裂解活性的多肽匹配的e值小于1x10^-5，或小于1x10^-10，或小于1x10^-15，或小于1x10^-20，或小于1x10^-25，或小于1x10^-30，或小于或等于1x10^-35，特别是在1x10^-20到1x10^-30的范围内，则其被鉴定为包含所述结构域PF14231的GXWXG蛋白质家族的成员。

请求具有烯醛裂解活性的多肽的序列作为查询序列。

例如，可以请求以下网站来检索并计算此类e值：

http://pfam.xfam.org/、

http://www.ebi.ac.uk/Tools/hmmer/search/hmmscan或

http://www.ebi.ac.uk/Tools/pfa/pfamscan/

和/或

其中具有所述烯醛裂解活性的所述多肽选自一组多肽，该多肽包含至少一个选自以下的序列基序/结构域：

SEQ ID NO:205中所示的G-[Y或“-”]-x-W-x-G-x-x-[F、L或I]-x-[T、S或R]-G-[H或D]，

或其包含至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQID NO:205的位置1～8或9～13中的残基；

SEQ ID NO:206中所示的W-[Y、A或V]-G-K-x-[F或Y]-x-[S或D]，

或其包含至多4个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQ ID NO:206的位置1～4或5～8中的残基；

SEQ ID NO:207中所示的[G或S]-x-[A或G]-x-[L或V]-x-x-x-x-[F、Y或L]-R-G-x-V，

或其包含至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQID NO:207的位置1～8或9～14中的残基；

SEQ ID NO:208中所示的[M或L]-[V或I]-Y-D-x-x-P-[I或V]-x-D-[H或S]-[F或L]，

或其包含至多10个或至多5个连续氨基酸残基的任何部分基序，例如对应于SEQID NO:208的位置1～6或7～12中的残基；

其中

在以上基序中，残基x彼此独立地代表任何天然氨基酸残基，并且其中可选地在以上基序的每一个中，1至5个，如1、2、3、4或5个与x残基不同的氨基酸残基可以被修饰，例如通过氨基酸置换，特别是通过保守置换，条件是酶至少以分析可检测的程度保留烯醛裂解酶活性。

和/或

具有所述烯醛裂解活性的所述多肽从由下列包含相应氨基酸序列的多肽构成的群组中选出：

a)SEQ ID NO:34中所示的SCH94-3944

b)SEQ ID NO:38中所示的SCH80-05241

c)SEQ ID NO:42中所示的Pdigit7033

d)SEQ ID NO:46中所示的PitalDUF4334-1

e)SEQ ID NO:49中所示的AspWeDUF4334

f)SEQ ID NO:53中所示的RhoagDUF4334-2，

g)SEQ ID NO:56中所示的RhoagDUF4334-3，

h)SEQ ID NO:59中所示的RhoagDUF4334-4，

i)SEQ ID NO:62中所示的CnecaDUF4334，

j)SEQ ID NO:69中所示的Rins-DUF4334，

k)SEQ ID NO:72中所示的CgatDUF4334，

l)SEQ ID NO:75中所示的GclavDUF4334

m)SEQ ID NO:81中所示的TcurvaDUF4334，

n)SEQ ID NO:87中所示的PprotDUF4334，和

o)包含与a)至n)的任一氨基酸序列具有至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列并且保留降解式(1)的萜烯前体的所述酶活性的多肽。

另一个特定实施方案是指本发明的新多肽的多肽变体，其具有如上文由SEQ IDNO:34、38、42、46、49、53、56、59、62、69、72、75、81和87的特定氨基酸序列鉴定出的烯醛裂解活性，并且其中多肽变体选自与SEQ ID NO:34、38、42、46、49、53、56、59、62、69、72、75、81和87中任何一个具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，并且含有相对于SEQ ID NO:34、38、42、46、49、53、56、59、62、69、72、75、81和87中任何一个而言的至少一个置换修饰。

在上面引用的14种特定的烯醛裂解多肽中，具有Pfam ID号PF14232和PF14231的蛋白质家族结构域可以位于下表中给出的氨基酸残基位置(也参见图31中描述的比对和其中框出的序列部分)

29.实施方案28的方法，其中所述烯醛裂解多肽选自以下一组突变体，该组突变体由以下多肽组成并包含相应的氨基酸序列：

a)SEQ ID NO:91中所示的SCH94-3944-T51A_变体

b)SEQ ID NO:93中所示的SCH94-3944-H53A_变体

c)SEQ ID NO:95中所示的SCH94-3944-L59A_变体

d)SEQ ID NO:97中所示的SCH94-3944-W64A_变体

e)SEQ ID NO:101中所示的SCH94-3944-S71A_变体

f)SEQ ID NO:103中所示的SCH94-3944-R106A_变体

g)SEQ ID NO:105中所示的SCH94-3944-Y115A_变体

h)SEQ ID NO:107中所示的SCH94-3944-D116A_变体

i)SEQ ID NO:111中所示的SCH94-3944-M136A_变体

j)SEQ ID NO:113中所示的SCH94-3944-K139A_变体

k)SEQ ID NO:119中所示的SCH94-3944-R156A_变体和

l)包含与a)至l)的任一氨基酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列并保留降解式(1)萜烯前体的所述酶活性并保留所述突变的氨基酸序列位置的多肽。

30.实施方案27至29中任一项的方法，其中应用式V的化合物，例如萜烯型化合物，其中

R¹代表H或甲基，

R²代表H或

a)具有1至20个，特别是1至10个、1至15个或1至20个碳原子的非环状的直链或支链的饱和或不饱和的烃基残基；或者

b)基团Cyc-A-，其中A代表直链或支链的C₁-C₄亚烷基桥，特别是亚甲基，并且Cyc代表单环或多环的特别是双环的饱和或不饱和的烃基残基，特别是每个环包含5～7个，特别是6个环原子的双环稠合化烃基残基，可选地取代有1～10个、1～5个取代基，它们独立地选自C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷亚基、C₂-C₄烯基、氧代、羟基或氨基，特别是C₁-C₄烷基如甲基，以及C₁-C₄烷亚基如甲亚基，

每个R³代表H，

R⁴代表H或甲基，并且

R⁵代表H或甲基。

31.实施方案30的方法，其中通式V的化合物具有半日花烷型结构，并且/或者Cyc-A代表式IIIa、IIIb或IIIc的残基：

32.实施方案27至31中任一项的方法，其中式(V)的前体选自法呢醛、香叶基香叶醛、柠檬醛、十二醛、半日花烷型化合物如8-羟基-半日花-13-烯-15-醛和柯巴醛，

各自为其立体异构体的混合物形式或立体异构纯的形式。

33.实施方案27至32之一的方法，其中式(IV)的降解产物选自香叶基丙酮、法呢基丙酮、甲基庚烯酮、癸醛；或迈诺醇氧基，或8-羟基-14,15-去二甲基半日花烷-13-酮，各自为其立体异构体的混合物形式或立体异构纯的形式。

羰基化合物向相应裂解产物的烯醛裂解酶催化转化的其他具体发明例子总结在以下示意性概览中：

其中参数“n”是1至20、1至15、1至10或1、2、3、4或5的整数。

34.实施方案27至33中任一项的方法，其在体外或试管内进行。

35.在体内进行的实施方案34的方法，其包括在步骤(1)之前，特别是在非人宿主细胞中，重组表达一种或多种具有进行链降解步骤所需酶活性的多肽。

36.实施方案35的方法，其中用编码至少一种具有烯醛裂解活性的多肽的核酸来转化所述非人宿主细胞。

37.实施方案35或36的方法，其中所述非人宿主细胞是真核或原核细胞，特别是植物细胞、细菌或真菌细胞，特别是酵母细胞。

38.实施方案35至37中任一项的方法，其中所述非人宿主细胞是单细胞生物，源自多细胞生物的培养细胞，存在于源自多细胞生物的培养组织中的细胞，或存在于活的多细胞生物中的细胞。

39.实施方案35至38之一的方法，其中所述非人宿主细胞是埃希氏菌(Escherichia)属的细菌，特别是大肠杆菌(E.coli)，并且所述酵母是酵母(Saccharomyces)属或毕赤酵母(Pichia)属，特别是酿酒酵母(S.cerevisiae)，或植物细胞。

40.实施方案27至39中任一项的方法，还包括如下步骤作为步骤(3)：使用化学或生物催化合成或两者的组合来处理在步骤(1)中形成的或在步骤(2)中分离的式IV化合物以获得其衍生物，其中所述衍生物可特别地选自烃、醇、二醇、三醇、缩醛、缩酮、醛、酸、醚、酰胺、酮、内酯、环氧化物、乙酸酯、糖苷和/或酯，以及步骤(4)：可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

41.实施方案40的方法，其中步骤(3)包括用具有拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)活性的多肽来处理在步骤(1)中形成的或在步骤(2)中分离的式IV化合物，以形成相应的羰基酯。

42.实施方案41的方法，还包括用酯酶将羰基酯化合物水解成相应的脱酯产物，其可以是醇或其异构化产物，以及可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

43.实施方案41的方法，其中具有BVMO活性的多肽如以上实施方案9中所定义。

44.实施方案42的方法，其中该酯酶从由以下构成的群组中选出：

a)包含SEQ ID NO:20中所示的SCH23-酯酶氨基酸序列的多肽；

b)包含SEQ ID NO:24中所示的SCH24-酯酶氨基酸序列的多肽；

c)包含SEQ ID NO:28中所示的SCH25-酯酶氨基酸序列的多肽；

d)包含SEQ ID NO:31中所示的SCH46-酯酶氨基酸序列的多肽；或者

45.实施方案41至44的方法，其中羰基化合物是去二甲基半日花烷酮，特别是迈诺醇氧基，其被所述BVMO转化为相应的去四甲基半日花烷乙酸酯，特别是γ-ambryl乙酸酯。

46.实施方案45的方法，其中去四甲基半日花烷乙酸酯特别是γ-ambryl乙酸酯被所述酯酶脱酯化为相应的去四甲基半日花烷，特别是γ-ambrol。

47.前述实施方案27至46之一的方法，该方法包括在步骤(1)之前，将半日花烷醇生物催化氧化为半日花烷醛，特别是将柯巴醇生物催化氧化为柯巴醛，

所述半日花烷醇可以例如通过生物催化以如下方式产生：

这些步骤中使用的GGPP也可以由不同的生物催化步骤提供：

d)可以使用GGPP合酶直接从IPP和DMAPP产生GGPP；或者

48.实施方案47的方法，其中

i)半日花烷二磷酸至半日花烷醛，特别是柯巴基二磷酸(CPP)至柯巴醇的生物催化去磷酸化，其由具有萜烯基二磷酸(TPP)磷酸酶活性的多肽催化，和/或

49.实施方案48的方法，其中

a)包含SEQ ID NO:134中所示的SCH23-ADH1_wt氨基酸序列的多肽，

b)包含SEQ ID NO:140中所示的SCH24-ADH1_wt氨基酸序列的多肽，

c)包含SEQ ID NO:161中所示的SCH94-3945_wt氨基酸序列的多肽，

d)包含SEQ ID NO:164中所示的SCH80-0540_wt氨基酸序列的多肽，

e)包含SEQ ID NO:167中所示的AzTolADH1_wt氨基酸序列的多肽，

f)包含SEQ ID NO:179中所示的CdGeoA_wt氨基酸序列的多肽，

和/或

d)包含SEQ ID NO:170中所示的AspWE TPP氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

e)包含SEQ ID NO:176中所示的TalCeTPP氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；和

f)包含SEQ ID NO:194中所示的TalVeTPP氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

和/或

d)包含SEQ ID NO:182中所示的carG氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

e)包含SEQ ID NO:191中所示的CrtE氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽；

f)包含SEQ ID NO:173中所示的PvCPS氨基酸序列的多肽或包含与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的多肽。

iii)本发明涉及以下与烯醛裂解酶和相应编码序列有关的特定实施方案

50.一种分离的多肽，其具有烯醛裂解活性，特别是α,β-不饱和醛C＝C键裂解酶活性，如实施方案28和29中任一项所定义。

本发明的多肽包括具有烯醛裂解活性的酶的所有活性形式，包括活性亚序列，例如催化结构域或活性位点。

51.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案50的多肽的核酸序列，特别是选自SEQ ID NO:33、35、36、37、39、40、41、43、44、45、47、48、50、51、52、54、55、57、58、60、61、63、64、68、70、71、73、74、76、80、82、86、88、92、94、96、98、102、104、106、108、112和120的核酸序列，以及与SEQ ID NO:33、35、36、37、39、40、41、43、44、45、47、48、50、51、52、54、55、57、58、60、61、63、64、68、70、71、73、74、76、80、82、86、88、92、94、96、98、102、104、106、108、112和120的任一所述序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性程度的核酸序列。

52.一种表达盒，其包含实施方案50的至少一种核酸分子的核苷酸序列。

53.一种表达载体，其包含实施方案51的至少一种核酸分子的核苷酸序列，或实施方案52的至少一种表达盒。

54.实施方案53的表达载体，其中该载体是原核载体、病毒载体或真核载体。

55.实施方案53至54中任一项的表达载体，其为质粒，或两种或更多种质粒的组合。

56.一种重组非人宿主细胞，其包含实施方案51中定义的至少一种核酸分子，或实施方案52的至少一种表达盒，或实施方案53至55中任一项的至少一种表达载体。

57.实施方案56的宿主细胞，其中至少一种核酸分子或至少一种表达盒稳定地整合到细胞的基因组中。

58.实施方案56或57的宿主细胞，其是原核或真核细胞，特别是植物细胞、细菌或真菌细胞，特别是酵母。

59.实施方案56至58中任一项的宿主细胞，其是单细胞生物，源自多细胞生物的培养细胞，存在于源自多细胞生物的培养组织中的细胞，或存在于活的多细胞生物中的细胞。

60.实施方案59的宿主细胞，其是埃希氏菌(Escherichia)属的细菌，优选大肠杆菌(E.coli)，或酵母(Saccharomyces)属的酵母细胞，优选酿酒酵母(S.cerevisiae)，或毕赤酵母(Pichia)属的酵母细胞，优选巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。

61.一种产生根据实施方案51的至少一种具有烯醛裂解活性的多肽的方法，该方法包括：

(i)在实施方案57至60中任一项的非人宿主细胞中表达所述至少一种多肽；和

(ii)可选地，从步骤(i)中使用的非人宿主细胞中分离出所述至少一种多肽。

62.实施方案61的方法，在步骤(i)之前还包括：通过将实施方案51中定义的至少一种核酸分子，或实施方案52的至少一种表达盒，或实施方案53至55中任一项的至少一种表达载体引入到非人细胞中来制备用于步骤(i)的非人宿主细胞，从而产生能够表达或过表达根据实施方案50的至少一种具有烯醛裂解活性的多肽的宿主细胞。

63.一种制备具有烯醛裂解活性的突变多肽的方法，该方法包括以下步骤：

(i)提供根据实施方案51的核酸分子；

(ii)修饰所述核酸分子的核苷酸序列，特别是编码实施方案50的多肽的核苷酸序列，以获得至少一种突变核酸分子；

(iii)在非人宿主细胞中重组表达所述突变核酸分子；

(iv)筛选步骤(iii)中获得的表达产物中至少一种具有烯醛裂解活性的突变多肽；和

(v)可选地，用该突变核酸分子重复步骤(ii)至(iv)，直到表达产物包含具有所需烯醛裂解活性的突变多肽；和

(vi)可选地，分离具有所需烯醛裂解活性的突变多肽。

iv)本发明涉及以下与BVMO酶和相应编码序列相关的特定实施方案

64.一种具有BVMO活性的分离的多肽，如实施方案9中所定义。

本发明的多肽包括具有BVMO活性的酶的所有活性形式，包括活性亚序列，例如催化结构域或活性位点。

65.一种分离的核酸分子，其包含编码实施方案64的多肽的核酸序列，特别是选自SEQ ID NO:1、3、4、5、7、8、9、11、12、14、15、17和18的核酸序列，以及与SEQ ID NO:1、3、4、5、7、8、9、11、12、14、15、17和18的任一所述序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性程度的核酸序列。

66.一种表达盒，其包含实施与方案65的至少一种核酸分子的核苷酸序列。

67.一种表达载体，其包含实施方案65的至少一种核酸分子的核苷酸序列，或实施方案66的至少一种表达盒。

68.实施方案67的表达载体，其中该载体是原核载体、病毒载体或真核载体。

69.实施方案67至68中任一项的表达载体，其为质粒，或两种或更多种质粒的组合。

70.一种重组非人宿主细胞，其包含实施方案65中定义的至少一种核酸分子，或实施方案66的至少一种表达盒，或实施方案67至69中任一项的至少一种表达载体。

71.实施方案70的宿主细胞，其中至少一种核酸分子或至少一种表达盒稳定地整合到细胞的基因组中。

72.实施方案70或71的宿主细胞，其是原核或真核细胞，特别是植物细胞、细菌或真菌细胞，特别是酵母。

73.实施方案70至72中任一项的宿主细胞，其是单细胞生物，源自多细胞生物的培养细胞，存在于源自多细胞生物的培养组织中的细胞，或存在于活的多细胞生物中的细胞。

74.实施方案72的宿主细胞，其是埃希氏菌(Escherichia)属的细菌，优选大肠杆菌(E.coli)，或酵母(Saccharomyces)属的酵母细胞，优选酿酒酵母(S.cerevisiae)，或毕赤酵母(Pichia)属的酵母细胞，优选巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。

75.一种产生根据实施方案64的至少一种具有BVMO活性的多肽的方法，该方法包括：

(i)在实施方案70至74中任一项的非人宿主细胞中表达所述至少一种多肽；和

76.实施方案75的方法，在步骤(i)之前还包括：通过将实施方案65中定义的至少一种核酸分子，或实施方案66的至少一个表达盒，或实施方案67至69中任一项的至少一种表达载体引入到非人细胞中来制备用于步骤(i)的非人宿主细胞，从而产生能够表达或过表达根据实施方案64的至少一种具有BVMO活性的多肽的宿主细胞。

77.一种制备具有BVMO活性的突变多肽的方法，该方法包括以下步骤：

(i)提供根据实施方案65的核酸分子；

(ii)修饰所述核酸分子的核苷酸序列，特别是编码实施方案64的多肽的核苷酸序列，以获得至少一种突变核酸分子；

(iii)在非人宿主细胞中重组表达所述突变核酸分子；

(iv)筛选步骤(iii)中获得的表达产物中至少一种具有BVMO活性的突变多肽；和

(v)可选地，用该突变核酸分子重复步骤(ii)至(iv)，直到表达产物包含具有所需BVMO活性的突变多肽；和

(vi)可选地，分离具有所需BVMO活性的突变多肽。

v)本发明涉及以下特定实施方案，这些实施方案涉及通过应用具有烯醛裂解活性和/或BVMO活性的多肽来转化半日花烷化合物的体内生物催化多步方法

78.一种制备半日花烷型萜烯的体内方法，该方法包括提供表达一组多肽的重组宿主，所述多肽具有催化如下顺序的反应步骤所需的酶活性：

(1)可选地，通过外源性或内源性ADH多肽特别是实施方案19或49中任一项所定义的ADH的酶促作用，将半日花烷醇特别是柯巴醇转化为相应的半日花烷醛特别是柯巴醛；

(2)通过具有烯醛裂解活性的多肽特别是实施方案28和29中任一项所定义的多肽的作用，将步骤(1)的所述半日花烷醛特别是柯巴醛转化为相应的去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基；

(3)可选地，通过具有BVMO活性的多肽特别是实施方案9中定义的BVMO的作用，将步骤(2)的所述去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基转化为相应的去四甲基半日花烷基乙酸酯特别是γ-ambryl乙酸酯；

(4)可选地，通过具有酯酶活性的多肽特别是实施方案23和44中任一项所定义的酯酶的作用，将步骤(3)的所述去四甲基半日花烷基乙酸酯特别是γ-ambryl乙酸酯转化为相应的去四甲基半日花烷醇特别是γ-ambrol；和可选地，

(5)将步骤(2)、(3)或(4)的产物分离。

79.一种制备半日花烷型环萜烯的体内方法，该方法包括提供表达一组多肽的重组宿主，所述多肽具有催化如下顺序的反应步骤所需的酶活性：

(2)通过具有BVMO活性的多肽特别是实施方案9中任一项定义的BVMO的作用，将步骤(1)的所述半日花烷醛特别是柯巴醛转化为相应的去甲基半日花烷酯化合物特别是[4-[(1S,4aS,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]-2-甲基-丁-1-烯基]甲酸酯(化合物1a、1b)；

(3)将步骤(2)的所述半日花烷酯化合物特别是[4-[(1S,4aS,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]-2-甲基-丁-1-烯基]甲酸酯(化合物1a、1b)转化为相应的去甲基半日花烷醛特别是4-[(1S,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]-2-甲基-丁醛(化合物3a、3b)，该步骤可选地通过具有酯酶活性的多肽特别是实施方案23或44中任一项所定义的酯酶的作用进行；

(4)通过具有BVMO活性的多肽特别是实施方案9中任一项所定义的BVMO的作用，将步骤(3)的所述去甲基半日花烷醛特别是4-[(1S,4aS,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]-2-甲基-丁醛(化合物3a、3b)转化为相应的去二甲基半日花烷酯特别是[3-[(1S,4aS,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]-1-甲基-丙基]甲酸酯(化合物4a、4b)；

(5)通过具有酯酶活性的多肽特别是实施方案23或44中任一项所定义的酯酶的作用，将步骤(4)的所述去二甲基半日花烷酯特别是[3-[(1S,4aS,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]-1-甲基-丙基]甲酸酯(化合物4a、4b)转化为相应的去二甲基半日花烷醇特别是4-[(1S,4aS,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]丁-2-醇(化合物5a、5b)；

(6)可选地，通过具有ADH活性的外源性或内源性多肽特别是实施方案19或49中任一项所定义的ADH的作用，将步骤(5)的所述去二甲基半日花烷醇特别是4-[(1S,8aS)-5,5,8a-三甲基-2-亚甲基-十氢萘-1-基]丁-2-醇(化合物5a、5b)转化为相应的去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基；

(7)可选地，通过具有BVMO活性的多肽特别是实施方案9中任一项所定义的BVMO的作用，将步骤(6)的所述去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基转化为相应的四去甲基半日花烷基乙酸酯特别是γ-ambryl乙酸酯；

(8)通过具有酯酶活性的多肽特别是实施方案23或44中任一项所定义的酯酶的作用，将步骤(7)的所述去四甲基半日花烷基乙酸酯特别是γ-ambryl乙酸酯转化为相应的去四甲基半日花烷醇特别是γ-ambrol；和可选地，

(9)将步骤(5)、(6)、(7)或(8)的产物分离。

80.实施方案79的方法，其中

步骤(1)和(6)中应用的ADH相同或不同；是外源性或内源性的，并且/或者

步骤(2)、(4)和(7)中应用的BVMO相同或不同；并且/或者

步骤(3)、(5)和(8)中使用的酯酶相同或不同。

81.实施方案78至80中任一项的方法，其中

应用重组宿主额外表达一组多肽，该多肽具有在步骤(1)之前催化以下顺序的反应步骤所需的酶活性：

(i)通过具有GGPP合酶活性的多肽特别是实施方案19和49中任一项所定义的GGPP合酶的作用进行的香叶基香叶基二磷酸(GGPP)的生物催化形成；

(ii)通过具有半日花烷二磷酸合酶活性的多肽特别是包含实施方案19和49中任一项所定义的CPP合酶活性的多肽的作用进行的由GGPP至所述半日花烷二磷酸特别是柯巴基二磷酸(CPP)的生物催化环；

(iii)通过具有半日花烷二磷酸磷酸酶活性的多肽特别是包含实施方案19和49中任一项所定义的TPP磷酸酶活性的多肽的作用进行的由所述半日花烷二磷酸至所述半日花烷醇特别是由CPP至柯巴醇的生物催化去磷酸化。

82.实施方案78至81中任一项的方法，其中应用重组宿主额外表达催化甲羟戊酸途径或MEP途径的酶促步骤的至少一种多肽。

83.实施方案78至82之一的方法，其中应用重组宿主，其在一种或多种表达载体上携带各自催化活性多肽的编码序列和/或该编码序列稳定地整合到宿主基因组中。

84.实施方案1至49和78至83中任一项的方法，其在体内进行，该方法包括在步骤(1)之前，将编码一种或多种多肽的一种或多种核酸分子引入到非人宿主生物体或细胞中并可选地稳定地整合到相应的基因组中，该多肽具有进行相应的一个或多个生物催化转化步骤所需的酶活性。

85.实施方案1至49和78至83中任一项的方法，其通过应用内源性产生FPP和/或GGPP或者IPP与DMAPP的混合物的非人宿主生物体或细胞进行；或通过应用经过遗传修饰以产生增加量的FPP和/或GGPP和/或IPP与DMAPP的混合物的非人宿主生物体进行。

适用于本发明的这些宿主细胞或生物体中的一些不天然产生FPP或GGPP或者IPP与DMAPP的混合物。不产生无环萜烯焦磷酸前体例如FPP或GGPP或者IPP与DMAPP的混合物的此类生物体或细胞可以天然地被遗传修饰以产生所述前体。例如，它们可以在用本文所述的核酸修饰之前如此转化。转化生物体以使其产生无环萜烯焦磷酸前体例如FPP或GGPP或者IPP与DMAPP的混合物的方法在本领域中是已知的。例如，引入甲羟戊酸途径的酶活性是使生物体产生FPP或GGPP或者IPP与DMAPP的混合物的合适策略。

86.实施方案78至85中任一项所定义的重组微生物。

vi)本发明涉及以下特定实施方案，这些实施方案涉及将通过本文所述的生物催化方法获得的化学中间体化合物进一步转化为特别感兴趣的其他最终产品

87.一种制备环氧-去四甲基半日花烷化合物特别是降龙涎香醚的方法，该方法包括：

(1)通过应用包括权利要求1至49或78至83中任一项所定义的一个或多个方法步骤的生物催化方法，来提供去四甲基半日花烷醇特别是γ-ambrol，或去四甲基半日花烷乙酸酯特别是γ-ambryl乙酸酯，或去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基，并且可选地将所述产物分离；和

(2)通过应用一个或多个化学和/或生化转化步骤，将步骤(1)的所述产物转化为环氧-去四甲基半日花烷特别是降龙涎香醚。

88.一种制备双环氧-去二甲基半日花烷特别是Z11的方法，该方法包括：

(1)通过应用导致形成所述去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基并且包括权利要求1至49或78至84中任一项所定义的一个或多个方法步骤的方法，来提供所述去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基，并且可选地将所述去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基分离；和

(2)通过应用一个或多个化学和/或生化转化步骤，将步骤(1)的所述去二甲基半日花烷羰基化合物特别是迈诺醇氧基转化为所述二环氧-去二甲基半日花烷特别是Z-11。

b.根据本发明适用的多肽

在本文语境中，以下定义适用：

可以互换使用的通用术语“多肽”或“肽”是指天然的或合成的，连续的、肽方式连接的氨基酸残基的线性链或序列，其包含约10个至多于1000个残基。具有最多30个残基的短链多肽也被称为“寡肽”。

术语“蛋白(质)”是指由一种或多种多肽组成的大分子结构。其多肽的氨基酸序列代表蛋白质的“一级结构”。氨基酸序列还通过形成特殊的结构元素(例如在多肽链中形成的α-螺旋和β-折叠结构)来预先确定蛋白质的“二级结构”。多个这样的二级结构元件的排列定义了蛋白质的“三级结构”或空间排列。如果蛋白质包含多于一个的多肽链，则所述链在空间上排列形成蛋白质的“四级结构”。蛋白质正确的空间排列或“折叠”是蛋白质功能的前提。变性或展开会破坏蛋白质功能。如果这种破坏是可逆的，则可以通过重新折叠来恢复蛋白质功能。

本文所指的典型的蛋白质功能是“酶功能”，即蛋白质在底物例如化合物上充当生物催化剂，并催化所述底物向产物的转化。酶可以显示高或低程度的底物和/或产物特异性。

因此，本文中被称为具有特定“活性”的“多肽”隐含地是指正确折叠的蛋白质，其显示出所指示的活性，例如特定的酶活性。

因此，除非另有说明，否则术语“多肽”也涵盖术语“蛋白质”和“酶”。

类似地，术语“多肽片段”涵盖术语“蛋白质片段”和“酶片段”。

术语“分离的多肽”是指通过本领域已知的任何方法或这些方法(包括重组、生物化学和合成法)的组合从其天然环境中取出的氨基酸序列。

“靶肽”是指一种氨基酸序列，其将蛋白质或多肽靶向细胞内细胞器(即，线粒体或质体)或细胞外空间(分泌信号肽)。编码靶肽的核酸序列可以被融合到编码蛋白或多肽的氨基末端(例如N-末端)的核酸序列，或者可以被用来替换天然靶向多肽。

本发明还涉及本文具体描述的多肽的“功能等同物”(也称为“类似物”或“功能突变”)。

例如，“功能等同物”是指一种多肽，其在用于确定酶促萜烯基二磷酸合酶活性或萜烯基二磷酸磷酸酶活性的测试中，显示与本文具体描述的多肽相比，至少高或低1至10％、或至少20％、或至少50％、或至少75％、或至少90％的活性。

根据本发明，“功能等同物”还涵盖特定的突变体，其在本文所述的氨基酸序列的至少一个序列位置中具有与具体陈述的氨基酸不同的氨基酸，但是仍然具有上述生物活性之一，例如酶活性。因此，“功能等同物”包括可通过一个或多个，例如1至20个、1至15个或5至10个氨基酸的添加、置换特别是保守置换、缺失和/或倒置而获得的突变体，其中所述变化可以在任何序列位置上发生，只要它们导致突变体具有本发明特性的概貌。还特别地提供功能等同性，如果活性模式与在突变体和未改变的多肽之间定性地重合，即，如果例如观察到与相同的激动剂或拮抗剂或底物的相互作用，但是速率不同(即，通过EC₅₀或IC₅₀值或任何本技术领域合适的其他参数来表示)。下表显示了合适的(保守)氨基酸置换的例子：

上述意义上的“功能等同物”也是本文所述多肽的“前体”，以及所述多肽的“功能衍生物”和“盐”。

在该情况下，“前体”是具有或不具有所期望生物活性的多肽的天然或合成前体。

表述“盐”是指根据本发明的蛋白质分子的羧基的盐以及氨基的酸加成的盐。羧基的盐可以已知的方式生产，并且包括无机盐，例如钠、钙、铵、铁和锌盐，以及与有机碱例如胺，如三乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、哌啶等形成的盐。酸加成的盐，例如与无机酸例如盐酸或硫酸形成的盐，以及与有机酸例如乙酸和草酸形成的盐，也被本发明所涵盖。

根据本发明的多肽的“功能衍生物”还可以使用已知技术在功能性氨基酸侧基或它们的N末端或C末端产生。这样的衍生物包括例如：羧酸基的脂族酯，羧酸基的酰胺，它们可通过与氨或与伯或仲胺反应获得；游离氨基的N-酰基衍生物，其通过与酰基反应生成；或游离羟基的O-酰基衍生物，其通过与酰基反应生成。

“功能等同物”自然也包括可以从其他生物体获得的多肽以及天然存在的变体。例如，可以通过序列比较来确定同源序列区域的面积，并且等同的多肽可以基于本发明的具体参数来确定。

“功能等同物”还包含根据本发明的多肽的“片段”，例如单个结构域或序列基序，或N末端和/或C末端截短的形式，其可以显示或可以不显示期望的生物学功能。优选地，这样的“片段”至少定性地保持期望的生物学功能。

此外，“功能等同物”是融合蛋白，其具有本文所述的多肽序列之一或由其衍生的功能等同物，以及在功能性N-末端或C-末端缔合(即，没有融合蛋白部分的实质性相互功能受损)中具有至少一个另外的功能不同的异源序列。这些异源序列的非限制性例子是例如信号肽、组氨酸锚或酶。

根据本发明还包括的“功能等同物”是与具体公开的多肽的同源物。它们与具体公开的氨基酸序列具有至少60％，优选至少75％，特别是至少80或85％，例如90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％的同源性(或同一性)，其通过Pearson and Lipman,Proc.Natl.Acad,Sci.(USA)85(8),1988,2444-2448的算法计算。根据本发明的同源多肽的以百分比表示的同源性或同一性尤其是指基于本文具体描述的氨基酸序列之一的总长度，以氨基酸残基的百分比表示的同一性。

以百分比表示的同一性数据也可以借助于BLAST比对，算法blastp(蛋白质-蛋白质BLAST)或通过应用本文下面详述的Clustal设置来确定。

在可能的蛋白质糖基化的情况下，根据本发明的“功能等同物”包括本文所述的去糖基化或糖基化形式的多肽，以及可以通过改变糖基化模式获得的经修饰形式。

根据本发明的多肽的功能等同物或同源物可以通过诱变产生，例如通过点突变、延长或缩短蛋白质或如下文更详细描述。

根据本发明的多肽的功能等同物或同源物可以通过筛选突变体例如缩短的突变体的组合数据库来鉴定。例如，蛋白质变体的多样性数据库可以通过在核酸水平上的组合诱变，例如通过合成寡核苷酸混合物的酶促连接来产生。有许多方法可用于从简并寡核苷酸序列产生潜在同源物的数据库。简并基因序列的化学合成可以在自动DNA合成仪中进行，然后可以将合成基因连接在合适的表达载体中。简并基因组的使用使得可以提供混合物中的所有序列，其编码所需的潜在蛋白质序列集合。简并寡核苷酸的合成方法是本领域技术人员已知的。

在现有技术中，已知几种技术用于筛选通过点突变或缩短产生的组合数据库的基因产物，以及用于筛选具有选定性质的基因产物的cDNA文库。这些技术可以适用于快速筛选通过根据本发明的同源物的组合诱变产生的基因库。最常用于筛选大型基因库的基于高通量分析的技术包括在可复制的表达载体中克隆基因库，用所得载体数据库转化合适的细胞，以及在特定条件下表达组合基因，在所述条件下，所需活性的检测促进编码基因(其产物被检测)的载体的分离。递归整合诱变(REM)是一种提高数据库中功能突变体频率的技术，其可以与筛选测试结合使用，以鉴定同源物。

本文提供的实施方案提供了本文公开的多肽的直系同源物和旁系同源物，以及用于鉴定和分离此类直系同源物和旁系同源物的方法。术语“直系同源物”和“旁系同源物”的定义在下面给出，并适用于氨基酸和核酸序列。

本发明的多肽包括本发明酶的所有活性形式，包括活性亚序列，例如催化结构域或活性位点。在一个形态中，本发明提供了如下所述的催化结构域或活性位点。在一个形态中，本发明提供了一种肽或多肽，其包含通过使用数据库预测的活性位点结构域或由其组成，所述数据库例如Pfam(http://pfam.wustl.edu/hmmsearch.shtml)(这是一个大集合涵盖许多常见蛋白质家族的多重序列比对和隐马尔可夫模型，Pfam蛋白质家族数据库，A.Bateman,E.Birney,L.Cerruti,R.Durbin,L.Etwiller,S.R.Eddy,S.Griffiths-Jones,K.L.Howe,M.Marshall,and E.L.L.Sonnhammer,Nucleic Acids Research,30(1):276-280,2002)或同等资料，例如InterPro和SMART数据库(http://www.ebi.ac.uk/interpro/scan.html，http://smart.embl-heidelberg.de/)。

本发明还涵盖具有所需活性的“多肽变体”，其中所述变体多肽选自如下的氨基酸序列，其与具体的特别是天然的由具体的SEQ ID NO所指的氨基酸序列具有至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性并包含至少一个相对于所述SEQ ID NO的置换修饰。

c.根据本发明适用的编码核酸序列

在本文语境中，以下定义适用：

术语“核酸序列”、“核酸”、“核酸分子”和“多核苷酸”可互换使用，是指核苷酸的序列。核酸序列可以是任意长度的单链或双链脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，并且包括基因的编码和非编码序列、外显子、内含子、有义和反义互补序列、基因组DNA、cDNA、miRNA、siRNA、mRNA、rRNA、tRNA、重组核酸序列、分离的和纯化的天然产生的DNA和/或RNA序列、合成的DNA和RNA序列、片段、引物和核酸探针。技术人员了解RNA的核酸序列与DNA序列相同，差异在于胸腺嘧啶(T)被替代为尿嘧啶(U)。术语“核苷酸序列”也应理解为包含单独的片段形式或作为较大核酸组分的多核苷酸分子或寡核苷酸分子。

“分离的核酸”或“分离的核酸序列”是指一种核酸或核酸序列，其所处的环境与天然产生的核酸或核酸序列所处的环境不同，并且可以包括基本上不含污染内源性物质的那些。

如本文使用的应用于核酸的术语“天然产生的”是指一种核酸，其在自然界的生物的细胞中发现，并且未经人类在实验室中进行有意的修饰。

多核苷酸或核酸序列的“片段”是指连续的核苷酸，其特别是本文一个实施方案的多核苷酸长度的至少15bp，至少30bp，至少40bp，至少50bp和/或至少60bp。特别地，多核苷酸的片段包含本文一个实施方案的多核苷酸的至少25个，更特别是至少50个，更特别是至少75个，更特别是至少100个，更特别是至少150个，更特别是至少200个，更特别是至少300个，更特别是至少400个，更特别是至少500个，更特别是至少600个，更特别是至少700个，更特别是至少800个，更特别是至少900个，更特别是至少1000个连续核苷酸。不受限制，本文的多核苷酸的片段可以用作PCR引物和/或探针，或用于反义基因沉默或RNAi。

如本文所用，术语“杂交”或在一定条件下杂交旨在描述杂交和洗涤的条件，在所述条件下彼此显著相同或同源的核苷酸序列保持彼此结合。该条件可以使得至少约70％、例如至少约80％、和例如至少约85％、90％或95％同一性的序列保持彼此结合。下文提供了低严格度、中等和高严格度杂交条件的定义。本领域技术人员可以通过例如Ausubel等人(1995,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,sections 2,4,and6)所举例说明的那样以最少的实验来选择合适的杂交条件。另外，严格条件在Sambrook等人(1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2nd ed.,Cold Spring HarborPress,chapters 7,9,and 11)中描述。

“重组核酸序列”是通过使用实验室方法(例如分子克隆)将来自多于一个源的遗传物质组合在一起所生成的核酸序列，由此创造出或修饰出不是天然产生并且不能以其他方式在生物有机体中发现的核酸序列。

“重组DNA技术”是指用于制备重组核酸序列的分子生物学方法，例如描述于由Weigel和Glazebrook编辑的Laboratory Manuals，2002,Cold Spring Harbor Lab Press；和Sambrook等，1989Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring Harbor Laboratory Press。

术语“基因”是指一种DNA序列，其包含可操作地连接到适当调控区域(例如启动子)的被转录为RNA分子(例如细胞中的mRNA)的区域。因此，基因可以包含几个可操作地连接的序列，诸如启动子、5’前导序列(包含例如参与翻译初始化的序列)、cDNA或基因组DNA的编码区、内含子、外显子和/或3’非翻译序列(包含例如转录终止位点)。

“多顺反子”是指可以在同一核酸分子内分别编码多于一个多肽的核酸分子，特别是mRNA。

“嵌合基因”是指通常不能在自然界的物种中发现的任何基因，特别是这样一种基因，其中核酸序列存在一个或多个部分在性质上彼此不相关联。例如，启动子在性质上与转录区的部分或全部或与另一调控区不相关联。术语“嵌合基因”应当被理解为包括表达构建体，其中启动子或转录调控序列被可操作地连接到一个或多个编码序列或反义(即有义链的反向互补链)或反向重复序列(有义和反义，由此RNA转录物在转录后形成双链RNA)。术语“嵌合基因”还包括通过组合一个或多个编码序列的部分以产生新基因而获得的基因。

“3’URT”或“3’非翻译序列”(也称为“3’未翻译区”或“3’末端”)是指在基因编码序列的下游发现的核酸序列，其包含例如转录终止位点和(在大多数但非全部的真核mRNA中)多聚腺苷酸化信号，例如AAUAAA或其变体。在转录终止后，mRNA转录物可以在多聚腺苷酸化信号的下游切去，并且可以添加poly(A)尾，其参与了mRNA向翻译位点例如细胞质的转运。

术语“引物”是指短的核酸序列，其被杂交到模板核酸序列并且被用于与该模板互补的核酸序列的聚合。

术语“可选择标记”是指在表达后能够被用来选择包括该可选择标记的一种或多种细胞的任何基因。以下描述了可选择标记的例子。本领域技术人员了解不同的抗生素、杀真菌剂、营养缺陷型或除草剂可选择标记可适用于不同的目标物种。

本发明还涉及编码如本文定义的多肽的核酸序列。

特别地，本发明还涉及编码上述多肽之一及其功能等同物的核酸序列(单链和双链DNA和RNA序列，例如cDNA、基因组DNA和mRNA)，其可以通过例如使用人工核苷酸类似物来获得。

本发明既涉及分离的核酸分子，其编码根据本发明的多肽或其生物学活性区段，又涉及核酸片段，其可用作例如鉴定或扩增根据本发明的编码核酸的杂交探针或引物。

本发明还涉及与本文具体公开的序列具有一定程度的“同一性”的核酸。两个核酸之间的“同一性”是指在每种情况下在核酸的整个长度上核苷酸的同一性。

两个核苷酸序列(同样适用于肽或氨基酸序列)之间的“同一性”是当产生这两个序列的比对时，核苷酸残基(或氨基酸残基)的数目的函数，或两个序列中相同的残基数目。相同的残基被定义为两个序列中在比对的给定位置的相同的残基。本文使用的序列同一性的百分比是从最佳比对中通过将两个序列之间相同的残基数除以最短序列中的残基总数并乘以100计算得到的。最佳比对是同一性百分比最高可能性的比对。可以将空位引入到一个或两个序列中的比对的一个或多个位置中以获得最佳比对。然后将这些空位考虑为用于计算序列同一性百分比的不相同的残基。用于确定氨基酸或核酸序列同一性百分比的比对可以使用计算机程序以及例如在互联网上可公开获得的计算机程序以多种方式实现。

特别地，可使用可从National Center for Biotechnology Information(美国国家生物技术信息中心)(NCBI)于http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/bl2seq/wblast2.cgi获得的设定为默认参数的BLAST程序(Tatiana等，FEMS Microbiol Lett.,1999,174:247-250,1999)来获得蛋白或核酸序列的最佳比对并计算序列同一性的百分比。

在另一个例子中，同一性可以通过Informax公司(美国)的Vector NTI Suite 7.1程序使用Clustal方法(Higgins DG,Sharp PM.((1989)))通过以下设置来计算：

多重比对参数：

成对比对参数：

或者，同一性可以根据Chenna et al.(2003)，网页：http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw/index.html#的方法和以下设置来确定：

本文提及的所有核酸序列(单链和双链DNA和RNA序列，例如cDNA和mRNA)可以以已知方式通过化学合成从核苷酸结构单元产生，例如通过双螺旋的各个重叠的互补核酸结构单元的片段缩合来实现。寡核苷酸的化学合成例如可以通过磷酰胺法(Voet,Voet,2ndedition,Wiley Press,New York,pages 896-897)以已知的方式进行。合成寡核苷酸的积累，和借助于DNA聚合酶的Klenow片段和连接反应的空位的填补，以及一般的克隆技术描述于Sambrook et al.(1989)，请参阅下文。

另外，根据本发明的核酸分子可以另外包含来自编码遗传区域的3'和/或5'末端的非翻译序列。

本发明进一步涉及与具体描述的核苷酸序列或其区段互补的核酸分子。

根据本发明的核苷酸序列使得可以产生可用于鉴定和/或克隆其他细胞类型和生物体中的同源序列的探针和引物。此类探针或引物通常包含在“严格”条件下(如本文其他部分所定义)与根据本发明的核酸序列的有义链或相应的反义链的至少约12个，优选至少约25个，例如约40、50或75个连续核苷酸杂交的核苷酸序列区域。

“同源”序列包括直系同源或旁系同源序列。鉴别直系同源物或旁系同源物的方法包括现有技术中已知且在本文中描述的系统发生学方法、序列相似性和杂交方法。

“旁系同源物”或旁系同源序列来源于基因复制，其产生具有相似序列和相似功能的两种或更多种基因。旁系同源物通常聚簇在一起并且通过在相关植物物种内基因的复制而形成。使用成对Blast分析或在基因家族的系统发生分析过程中使用程序诸如CLUSTAL在类似基因的组中发现旁系同源物。在旁系同源物中，共有序列可被鉴定为其特征在于相关基因中的序列并且具有基因的类似功能。

“直系同源物”或直系同源序列是彼此相似的序列，因为它们发现于由共同的祖先传下的物种中。例如，已知具有共同祖先的植物物种含有许多具有相似序列和功能的酶。例如通过使用CLUSTAL或BLAST程序构建一个物种的基因族的系统发生树，技术人员能够鉴定直系同源序列并预测直系同源物的功能。一种用于鉴定或确认同源序列间的相似功能的方法是通过比较过表达或缺乏(在基因敲除/敲减中)相关多肽的宿主细胞或生物体(如植物或微生物)中的转录物概况。技术人员能够理解，具有相似转录物概况的基因(具有大于50％调控的共同转录物，或具有大于70％调控的共同转录物，或大于90％调控的共同转录物)会具有相似的功能。通过使宿主细胞，生物体例如植物或微生物产生萜合酶蛋白，本文所述序列的同源物、旁系同源物、直系同源物以及任何其他变体预期以类似的方式发挥作用。

可以借助于分子生物学的标准技术和根据本发明提供的序列信息来分离根据本发明的核酸分子。例如，可以使用具体公开的完整序列之一或其片段作为杂交探针和标准杂交技术(例如，描述于Sambrook,(1989))从合适的cDNA文库中分离cDNA。

另外，包含所公开的序列之一或其片段的核酸分子可以使用基于该序列构建的寡核苷酸引物，通过聚合酶链反应来分离。以此方式扩增的核酸可以克隆到合适的载体中，并可以通过DNA测序来表征。根据本发明的寡核苷酸也可以通过标准的合成方法，例如使用自动DNA合成仪制备。

根据本发明的核酸序列或其衍生物，这些序列的同源物或部分可以例如通过常规的杂交技术或PCR技术从其他细菌中，例如通过基因组或cDNA文库分离出来。这些DNA序列在标准条件下与根据本发明的序列杂交。

“杂交”是指多核苷酸或寡核苷酸在标准条件下结合几乎互补的序列的能力，而在这些条件下非互补配对者之间不发生非特异性结合。为此，序列可以是90～100％互补的。能够彼此特异性结合的互补序列的性质被用于例如Northern印迹或Southern印迹或PCR或RT-PCR中的引物结合。

保守区的短寡核苷酸有利地用于杂交。然而，也可能使用更长的本发明核酸片段或完整序列进行杂交。这些“标准条件”取决于所使用的核酸(寡核苷酸，更长的片段或完整序列)或用于杂交的核酸类型(DNA或RNA)而有所不同。例如，DNA:DNA杂交种的解链温度比相同长度的DNA:RNA杂交种低约10℃。

例如，根据特定核酸的不同，标准条件是指温度在42至58℃，在浓度为0.1至5 xSSC(1 X SSC＝0.15M NaCl，15mM柠檬酸钠，pH 7.2)的缓冲水溶液中，或另外在50％甲酰胺(例如42℃，5 x SSC，50％甲酰胺)的存在下。有利地，用于DNA:DNA杂交种的杂交条件是0.1×SSC，温度为约20℃至45℃，优选约30℃至45℃。对于DNA:RNA杂交种，杂交条件有利地为0.1×SSC，并且温度为约30℃至55℃，优选约45℃至55℃。这些所述的杂交温度是对于长度约100个核苷酸的核酸，以及在不存在甲酰胺的情况下G+C含量为50％的经计算的解链温度值的例子。DNA杂交的实验条件已在相关的遗传学教科书(例如Sambrook et al.,1989)中进行了描述，并且可以使用本领域技术人员已知的分子式来计算，例如取决于核酸的长度、杂交种的类型或G+C含量。本领域技术人员可以从以下教科书中获得有关杂交的更多信息：Ausubel et al.(eds),(1985),Brown(ed)(1991)。

“杂交”尤其可以在严格条件下进行。这样的杂交条件例如描述于Sambrook(1989)，或Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。

如本文所用，术语杂交或在一定条件下杂交旨在描述杂交和洗涤的条件，在所述条件下彼此显著相同或同源的核苷酸序列保持彼此结合。该条件可以使得至少约70％，例如至少约80％和例如至少约85％、90％或95％同一性的序列保持彼此结合。本文提供了低严格度、中等和高严格度杂交条件的定义。

本领域技术人员可以通过例如Ausubel等人(1995,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,sections 2,4,and 6)所举例说明的那样以最少的实验来选择合适的杂交条件。另外，严格条件在Sambrook等人(1989,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,2nd ed.,Cold Spring Harbor Press,chapters 7,9,and 11)中描述。

如本文所用，所限定的低严格度条件如下。含有DNA的滤膜在含有35％甲酰胺，5xSSC，50mM Tris-HCl(pH 7.5)，5mM EDTA，0.1％PVP，0.1％Ficoll，1％BSA和500μg/ml变性鲑鱼精子DNA的溶液中于40℃预处理6小时。杂交在相同的溶液中进行，并进行以下修改：0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.2％BSA，100μg/ml鲑鱼精子DNA，10％(wt/vol)硫酸葡聚糖，并使用5-20x10⁶ 32P标记的探针。将滤膜在杂交混合物中于40℃孵育18～20小时，然后于55℃洗涤1.5小时。在含有2x SSC，25mM Tris-HCl(pH 7.4)，5mM EDTA和0.1％SDS的溶液中。用新鲜溶液代替洗涤溶液，并在60℃下再孵育1.5小时。将滤膜吸干并进行放射自显影。

如本文所用，所限定的中等严格度条件如下。含有DNA的滤膜在含有35％甲酰胺，5x SSC，50mM Tris-HCl(pH 7.5)，5mM EDTA，0.1％PVP，0.1％Ficoll，1％BSA和500μg/ml变性鲑鱼精子DNA的溶液中于50℃预处理7小时。杂交在相同的溶液中进行，并进行以下修改：0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.2％BSA，100μg/ml鲑鱼精子DNA，10％(wt/vol)硫酸葡聚糖，并使用5-20x10⁶ 32P标记的探针。将滤膜在杂交混合物中于50℃孵育30小时，然后于55℃洗涤1.5小时。在含有2x SSC，25mM Tris-HCl(pH 7.4)，5mM EDTA和0.1％SDS的溶液中。用新鲜溶液代替洗涤溶液，并在60℃下再孵育1.5小时。将滤膜吸干并进行放射自显影。

如本文所用，所限定的高严格度条件如下。含DNA的滤膜在由6x SSC，50mM Tris-HCl(pH 7.5)，1mM EDTA，0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.02％BSA和500μg/ml变性鲑鱼精子DNA组成的缓冲液中于65℃下预杂交8小时至过夜。在含有100μg/ml变性鲑鱼精子DNA和5-20x10⁶ cpm 32P标记探针的预杂交混合物中，将滤膜在65℃下杂交48小时。滤膜在含有2xSSC，0.01％PVP，0.01％Ficoll和0.01％BSA的溶液中于37℃洗涤1小时。然后在0.1x SSC中于50℃洗涤45分钟。

如果上述条件不合适(例如，如用于种间杂交)，则可以使用本领域众所周知的其他低、中等和高严格度条件(例如，用于种间杂交)。

用于编码本发明多肽的核酸序列的检测试剂盒可以包括对编码该多肽的核酸序列具有特异性的引物和/或探针，以及使用该引物和/或探针来检测样品中编码该多肽的核酸序列的相关方案。此种检测试剂盒可用于确定植物、生物、微生物或细胞是否已被修饰，即是否已用编码多肽的序列转化。

为了测试根据本文一个实施方案的变体DNA序列的功能，将目标序列可操作地连接到可选择的或可筛选的标记基因，并且在使用微生物或原生质体进行的瞬时表达分析中或在稳定转化的植物中测试报告基因的表达。

本发明还涉及具体公开的或可衍生的核酸序列的衍生物。

因此，根据本发明的另外的核酸序列可以衍生自本文具体公开的序列，并且可以通过一个或几个(例如1至10个)核苷酸的一个或多个，例如1至20个，特别是1至15个或5至10个添加、置换、插入或缺失而与之不同，并且还编码具有所期望特性的多肽。

本发明还包括与具体陈述的序列相比，根据特定原始或宿主生物的密码子使用而包含所谓的沉默突变或已被改变的核酸序列。

根据本发明的特定实施方案，可以制备变体核酸以使其核苷酸序列适应特定的表达系统。例如，如果氨基酸由特定的密码子编码，则已知细菌表达系统可更有效地表达多肽。由于遗传密码的简并性，多于一个密码子可以编码相同的氨基酸序列，多个核酸序列能够编码相同的蛋白或多肽，所有这些DNA序列均被涵盖在本文一个实施方案中。在适当的情况下，编码本文所述多肽的核酸序列可以被优化以增加在宿主细胞中的表达。例如，可以使用宿主特异性的密码子合成本文一个实施方案的核酸以改善表达。

本发明还涵盖本文描述的序列的天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体。

等位基因变体在所衍生的氨基酸水平上，具有在整个氨基酸范围至少60％的同源性，优选至少80％的同源性，非常特别优选至少90％的同源性(关于氨基酸水平的同源性，应参考以上对于多肽给出的详细信息)。有利地，同源性可以在序列的部分区域上更高。

本发明还涉及可通过保守核苷酸置换(即，由于其结果，所讨论的氨基酸被具有相同电荷、大小、极性和/或溶解度的氨基酸置换)获得的序列。

本发明还涉及通过序列多态性从具体公开的核酸衍生的分子。由于天然等位基因变异，这种遗传多态性可能存在于来自不同群体的细胞或来自一个群体内的细胞中。等位基因变体还可包括功能等同物。这些自然变异通常会在基因的核苷酸序列中产生1～5％的变化。所述多态性可以导致本文公开的多肽的氨基酸序列的改变。等位基因变体还可包括功能等同物。

此外，衍生物也应理解为根据本发明的核酸序列的同源物，例如动物、植物、真菌或细菌的同源物，缩短的序列，编码和非编码DNA序列的单链DNA或RNA。例如，在DNA水平上，同源物在本文具体公开的序列中给定的整个DNA区域中具有至少40％，优选至少60％，特别优选至少70％，非常特别优选至少80％的同源性。

此外，衍生物应理解为例如与启动子的融合体。尽管不损害启动子的功能或功效，添加至所述核苷酸序列的启动子可以通过至少一种核苷酸交换、至少一种插入、倒置和/或缺失来修饰。而且，启动子的功效可以通过改变它们的序列来增加，或者可以与更有效的启动子甚至是不同属的生物体的启动子完全交换。

d.功能性多肽突变体的产生

此外，本领域技术人员熟悉用于产生功能性突变体的方法，也就是说，一种核苷酸序列，其编码多肽，该多肽与本文公开的任何与氨基酸相关的SEQ ID NO具有至少40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性；和/或由核酸分子编码，该核酸分子包含与本文公开的任何与核苷酸相关的SEQ ID NO具有至少70％序列同一性的核苷酸序列。

取决于所使用的技术，本领域技术人员可以将完全随机的或更有针对性的突变引入到基因或非编码核酸区域(例如对于调节表达很重要)中，并随后产生遗传文库。为此目的所需的分子生物学方法是技术人员已知的，例如描述于Sambrook and Russell,Molecular Cloning.3rd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001。

修饰基因并由此修饰由其编码的多肽的方法是本领域技术人员长期以来已知的，举例而言例如：

-位点特异性诱变，其中基因的单个或多个核苷酸以定向方式被替换(Trower MK(Ed.)1996；In vitro mutagenesis protocols.Humana Press,New Jersey)，

-饱和诱变，其中任何氨基酸的密码子都可以在基因的任何位点交换或添加(Kegler-Ebo DM,Docktor CM,DiMaio D(1994)Nucleic Acids Res 22:1593；BarettinoD,Feigenbutz M,Valcárel R,Stunnenberg HG(1994)Nucleic Acids Res 22:541；BarikS(1995)Mol Biotechnol 3:1)，

-易错聚合酶链反应，其中核苷酸序列被易错DNA聚合酶突变(Eckert KA,KunkelTA(1990)Nucleic Acids Res 18:3739)；

-SeSaM法(序列饱和法)，其中优选的交换被聚合酶阻止。Schenk et al.,Biospektrum,Vol.3,2006,277-279，

-突变株中的基因传代，其中例如由于DNA修复机制缺陷，核苷酸序列的突变率增加(Greener A,Callahan M,Jerpseth B(1996)An efficient random mutagenesistechnique using an E.coli mutator strain.In:Trower MK(Ed.)In vitromutagenesis protocols.Humana Press,New Jersey)，或

-DNA改组，其中形成并消化一组密切相关的基因，并将这些片段用作聚合酶链反应的模板，其中通过重复的链分离和重新结合，最终生成了全长的镶嵌基因(Stemmer WPC(1994)Nature 370:389；Stemmer WPC(1994)Proc Natl Acad Sci USA 91:10747)。

使用所谓的定向进化(尤其描述于Reetz MT and Jaeger K-E(1999),TopicsCurr Chem 200:31；Zhao H,Moore JC,Volkov AA,Arnold FH(1999),Methods foroptimizing industrial polypeptides by directed evolution,In:Demain AL,DaviesJE(Ed.)Manual of industrial microbiology and biotechnology.American Societyfor Microbiology)，熟练的工人可以以定向的方式大规模生产功能性突变体。为此，在第一步中，首先，例如使用上文给出的方法，产生各自多肽的基因文库。基因文库以合适的方式表达，例如通过细菌或噬菌体展示系统来表达。

表达功能性突变体的宿主生物的相关基因(其功能在很大程度上与所需的特性相对应)可以提交给另一个突变周期。突变和选择或筛选的步骤可以迭代地重复，直到本发明的功能性突变体具有足够程度的所需特性。使用该迭代过程，可以分阶段进行有限数量的突变，例如1、2、3、4或5个突变，并评估和选择它们对所研究活性的影响。然后可以以相同的方式将所选择的突变体进行进一步的突变步骤。这样，可以显著减少待研究的单个突变体的数量。

根据本发明的结果还提供了与相关多肽的结构和序列有关的重要信息，这是以靶向方式产生具有所需修饰特性的其他多肽所必需的。特别地，可以定义所谓的“热点”，即潜在地适合于通过引入靶向突变来修饰特性的序列区段。

也可以推导出有关氨基酸序列位置的信息，在该区域中可以发生可能对活性几乎没有影响的突变，并且可以将其指定为潜在的“沉默突变”。

e.表达本发明多肽的构建体

在本文语境中，以下定义适用：

“基因的表达”涵盖“异源表达”和“过表达”，并且涉及基因的转录和mRNA向蛋白质的翻译。过表达是指在转基因细胞或生物中，以mRNA、多肽和/或酶活性水平测量的基因产物的产生超过了相似遗传背景的非转化细胞或生物中的产生水平。

如本文所用，“表达载体”是指这样一种核酸分子，其使用分子生物学方法和重组DNA技术工程化以将外来或外源DNA递送到宿主细胞中。表达载体典型地包括正确转录核苷酸序列所需的序列。编码区通常编码目的蛋白，但是也可以编码RNA，例如反义RNA、siRNA等。

如本文所用，“表达载体”包括任何线性的或环状的重组载体，包括但不限于病毒载体、噬菌体和质粒。技术人员根据表达系统能够选择适合的载体。在一个实施方案中，表达载体包括本文实施方案的核酸，其可操作地连接到至少一个“调控序列”，其控制转录、翻译、起始和终止，例如转录启动子、操纵子或增强子，或mRNA核糖体结合位点，并且可选地包括至少一个选择标记。当调控序列功能性地涉及本文实施方案的核酸时，核苷酸序列是“可操作地连接的”。

如本文所用，“表达系统”涵盖在给定表达宿主的体内或体外表达一种，或共表达两种或更多种多肽所需的核酸分子的任何组合。各自的编码序列可以位于单个核酸分子或载体上，例如包含多个克隆位点的载体，或位于多顺反子核酸上，或者可以分布在两个或更多个物理上不同的载体上。作为一个特定的例子，可以提及一种操纵子，其包含启动子序列、一个或多个操纵子序列以及一个或多个结构基因，每个基因编码本文所述的酶。

如本文所用，术语“进行扩增(amplifying)”和“扩增(amplification)”是指使用任何合适的扩增方法用于产生或检测天然表达的核酸的重组体，如下文详细描述的。例如，本发明提供用于扩增(例如，通过聚合酶链反应，PCR)天然表达的(例如，基因组DNA或mRNA)或本发明在体内、离体或体外的重组的核酸(例如cDNA)的方法和试剂(例如，特异性简并寡核苷酸引物对、寡聚dT引物)。

“调控序列”是指这样一种核酸序列，其确定本文实施方案的核酸序列的表达水平、并且能够调控可操作地连接到该调控序列的核酸序列的转录速率。调控序列包含启动子、增强子、转录因子、启动子元件等。

根据本发明，“启动子”、“具有启动子活性的核酸”或“启动子序列”应理解为是指这样一种核酸，当与要转录的核酸功能性连接时，其调节所述核酸的转录。“启动子”尤其是指一种核酸序列，其通过提供RNA聚合酶用的结合位点以及适合转录所需的其它因子，包括但不限于转录因子结合位点、抑制子和活化子蛋白结合位点，来控制编码序列的表达。术语启动子的含义还包括术语“启动子调控序列”。启动子调控序列可以包括可能影响转录、RNA加工或相关编码核酸序列的稳定性的上游和下游元件。启动子包括天然来源的和合成的序列。编码核酸序列通常位于启动子相对于以转录起始位点为起始的转录方向的下游。

在本文语境中，“功能性”或“可操作地”连接被理解为例如指具有调控序列的核酸之一的顺序排列。例如，具有启动子活性的序列，和待转录的核酸序列以及可选的其他调控元件(例如确保核酸转录的核酸序列)和例如终止子，该顺序排列的方式为使得每个调控元件都能在核酸序列转录后执行其功能。这不一定需要化学意义上的直接连接。遗传控制序列，例如增强子序列，甚至可以从更远的位置甚至从其他DNA分子上对目标序列发挥作用。优选的排列是这样的，其中待转录的核酸序列位于启动子序列的下游(即3'端)，从而使两个序列共价连接在一起。启动子序列和待重组表达的核酸序列之间的距离可以小于200个碱基对，或小于100个碱基对或小于50个碱基对。

除启动子和终止子外，还可以提及以下作为其他调控元件的例子：靶向序列，增强子，聚腺苷酸化信号，可选择标记，扩增信号，复制起点等。合适的调节序列描述于例如Goeddel,Gene Expression Technology:Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,CA(1990)。

术语“组成型启动子”是指不受调控的启动子，其允许其可操作地连接的核酸序列的持续转录。

如本文所用，术语“可操作地连接”是指处于功能性关系的多核苷酸元件的连接。当核酸与另一核酸序列处于功能性关系时，那么该核酸是“可操作地连接”的。例如，如果启动子或者转录调控序列能够影响编码序列的转录，那么该启动子或者转录调控序列是可操作地连接到该编码序列的。可操作地连接意味着被连接的DNA序列通常是邻接的。与启动子序列有关的核苷酸序列相对于要被转化的植物可以是同源或异源来源的。所述序列还可以是完全或部分合成的。不管来源如何，与启动子序列有关的核酸序列将根据在结合到本文实施方案的多肽后所连接的启动子性质而表达或沉默。相关核酸在所有时间或替代地在特定时间在整个生物体中或在特定组织、细胞或细胞室中可以编码需要表达或抑制的蛋白。此种核苷酸序列特别地编码将所需表型性状赋予给由其改变或转化的宿主细胞或生物体的蛋白质。更特别地，相关的核苷酸序列导致在细胞或生物体中产生如本文定义的一种或多种目的产物。特别地，核苷酸序列编码具有如本文定义的酶活性的多肽。

本文如上所述的核苷酸序列可以是“表达盒”的一部分。术语“表达盒”和“表达构建体”同义使用。(优选的重组)表达构建体包含这样的核苷酸序列，其编码根据本发明的多肽并且在调节核酸序列的遗传控制之下。

在根据本发明应用的方法中，表达盒可以是“表达载体”，特别是重组表达载体的一部分。

根据本发明，“表达单位”应理解为是指具有表达活性的核酸，其包含如本文所定义的启动子，并且在与待表达的核酸或基因功能性连接后调节表达，即所述核酸或所述基因的转录和翻译。因此在这方面也被称为“调节核酸序列”。除启动子外，还可以存在其他调节元件，例如增强子。

根据本发明，“表达盒”或“表达构建体”应理解为在功能上与要表达的核酸或要表达的基因连接的表达单元。因此，与表达单元相反，表达盒不仅包含调节转录和翻译的核酸序列，而且还包含由于转录和翻译而作为蛋白质表达的核酸序列。

在本发明的语境中，术语“表达”或“过表达”描述了微生物中一种或多种由相应DNA编码的多肽的细胞内活性的产生或增加。为此，例如可以将基因导入到生物体中，用另一个基因替代现有基因，增加基因的拷贝数，使用强启动子或使用编码具有高活性的相应多肽的基因。可选地，这些措施可以组合。

优选地，根据本发明的此类构建体包含各自编码序列5'上游的启动子和3'下游的终止子序列，以及可选地其他常见的调控元件，在每种情况下均与编码序列可操作地连接。

根据本发明的核酸构建体特别地包含编码多肽的序列，该多肽例如衍生自如本文所述的氨基酸相关的SEQ ID NO或其反向互补序列，或其衍生物和同源物，并且已经与一个或多个调节信号可操作地或功能性连接，用于有利地控制例如增加基因表达。

除了这些调控序列之外，这些序列的天然调控可能仍存在于实际的结构基因之前，并且可选地可能已经进行了遗传修饰，因此天然调控已被关闭，基因的表达得到了增强。然而，核酸构建体也可以具有更简单的构建，即，在编码序列之前没有插入额外的调节信号，并且具有调节作用的天然启动子尚未去除。相反，天然调节序列被突变，使得不再发生调节并且基因表达增加。

优选的核酸构建体有利地还包含与启动子功能性连接的一个或多个已经提及的“增强子”序列，该序列使得增强核酸序列的表达成为可能。还可以在DNA序列的3'末端插入其他有利的序列，例如其他调控元件或终止子。根据本发明的核酸的一个或多个拷贝可以存在于构建体中。在该构建体中，还可以可选地存在其他标记物，例如与营养缺陷性或抗生素抗性互补的基因，以便选择该构建体。

合适的调控序列的例子存在于启动子中，例如cos、tac、trp、tet、trp-tet、lpp、lac、lpp-lac、lacI^q、T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaP_BAD)SP6、lambda-P_R或lambda-P_L启动子中，它们有利地用于革兰氏阴性细菌中。其他有利的调节序列存在于例如革兰氏阳性启动子amy和SPO2中，酵母或真菌启动子ADC1、MFalpha、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH中。人工启动子也可以用于调节。

为了在宿主生物体中表达，将核酸构建体有利地插入到载体，例如质粒或噬菌体中，这使得基因在宿主中的最佳表达成为可能。除了质粒和噬菌体，载体还应理解为是本领域技术人员已知的所有其他载体，即例如病毒，例如SV40、CMV、杆状病毒和腺病毒、转座子、IS元件、噬粒、粘粒和线性或环状DNA或人工染色体。这些载体能够在宿主生物体中自主复制或通过染色体复制。这些载体是本发明的进一步发展。二元或cpo整合载体也是适用的。

合适的质粒是例如在大肠杆菌pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHS1、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III¹¹³-B1、λgt11或pBdCI中，在链霉菌pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361中，在芽孢杆菌pUB110、pC194或pBD214中，在棒状杆菌pSA77或pAJ667中，在真菌pALS1、pIL2或pBB116中，在酵母2alphaM、pAG-1、YEp6、YEp13或pEMBLYe23中，或在植物pLGV23、pGHlac⁺、pBIN19、pAK2004或pDH51中。上述质粒是可能的质粒的少量选择。其他质粒是技术人员众所周知的，并且可以在例如书籍Cloning Vectors(Eds.Pouwels P.H.et al.Elsevier,Amsterdam-New York-Oxford,1985,ISBN 0 444 904018)中找到。

在载体的进一步开发中，包含本发明的核酸构建体或本发明的核酸的载体也可以有利地以线性DNA的形式引入到微生物中并通过异源或同源重组整合到宿主生物体的基因组中。该线性DNA可以由线性化的载体例如质粒组成，或者仅由本发明的核酸构建体或核酸组成。

为了在生物体中异源基因的最佳表达，有利的是修饰核酸序列以匹配生物体中使用的特定“密码子使用”。“密码子使用”可以通过对所讨论的生物体的其他已知基因的计算机评估来容易地确定。

根据本发明的表达盒通过将合适的启动子融合到合适的编码核苷酸序列和终止子或聚腺苷酸化信号来产生。为此目的使用常规的重组和克隆技术，例如描述于T.Maniatis,E.F.Fritsch and J.Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY(1989)和T.J.Silhavy,M.L.Berman and L.W.Enquist,Experiments with Gene Fusions,Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,NY(1984)和Ausubel,F.M.et al.,Current Protocolsin Molecular Biology,Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience(1987)。

为了在合适的宿主生物体中表达，将重组核酸构建体或基因构建体有利地插入到宿主特异性载体中，这使得基因在宿主中的最佳表达成为可能。载体是技术人员众所周知的，并且可以在例如"cloning vectors"(Pouwels P.H.et al.,Ed.,Elsevier,Amsterdam-New York-Oxford,1985)中找到。

本文实施方案的替代实施方案提供了一种“改变宿主细胞中的基因表达”的方法。例如，在某些语境下(例如，暴露于一定温度或培养条件下)，在宿主细胞或宿主生物体中可以增强或过表达或诱导本文实施方案的多核苷酸。

本文提供的多核苷酸的表达的改变还会产生异位表达，其是在改变的以及在对照或野生型生物体中的一种不同的表达模式。表达的改变是由本文一个实施方案的多肽与外源性或内源性调节剂的相互作用而发生的或者是由于多肽的化学修饰导致的。该术语还指本文实施方案的多核苷酸的改变的表达模式，其被改变至低于检测水平或者完全被抑制活性。

在一个实施方案中，本文还提供了编码本文提供的多肽或变体多肽的分离的、重组的或合成的多核苷酸。

在一个实施方案中，多种编码多肽的核酸序列在单一宿主中共表达，特别是在不同启动子的控制下。在另一个实施方案中，多种编码多肽的核酸序列可以存在于单个转化载体上，或者可以使用分离的载体并选择包含两个嵌合基因的转化体同时进行共转化。类似地，一种或多种多肽编码基因可以与其他嵌合基因一起在单一植物、细胞、微生物或生物体中表达。

f.适用于本发明的宿主

取决于语境，术语“宿主”可以指野生型宿主或经遗传改变的重组宿主或两者。

原则上，所有的原核或真核生物都可以被认为是根据本发明的核酸或核酸构建体的宿主或重组宿主生物。

使用根据本发明的载体，可以生产重组宿主，其例如可以用至少一种根据本发明的载体转化，并可以用于生产根据本发明的多肽。有利地，将如上所述的根据本发明的重组构建体引入到合适的宿主系统中并表达。优选地，使用本领域技术人员已知的普通克隆和转染方法，例如共沉淀、原生质体融合、电穿孔、逆转录病毒转染等，以在各自的表达系统中表达所述核酸。合适的系统描述于Current Protocols in Molecular Biology,F.Ausubelet al.,Ed.,Wiley Interscience,New York 1997，或Sambrook et al.MolecularCloning:A Laboratory Manual.2nd edition,Cold Spring Harbor Laboratory,ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,1989。

有利地，诸如细菌、真菌或酵母的微生物被用作宿主生物。有利地，使用革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌，优选肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、假单胞菌科(Pseudomonadaceae)、根瘤菌科(Rhizobiaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)、链球菌科(Streptococcaceae)或诺卡氏菌科(Nocardiaceae)的细菌，特别优选埃希氏菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、乳球菌属(Lactococcus)、诺卡氏菌(Nocardia)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、沙门氏菌属(Salmonella)、农杆菌属(Agrobacterium)、艰难梭菌(Clostridium)或红球菌属(Rhodococcus)的细菌。大肠杆菌(Escherichia coli)属和种是非常特别优选的。此外，在α-变形菌(alpha-Proteobacteria)、β-变形菌(beta-Proteobacteria)或γ-变形菌(gamma-Proteobacteria)组中发现了其他有利的细菌。有利地，诸如酵母属(Saccharomyces)或毕赤酵母(Pichia)家族的酵母也是合适的宿主。

或者，整个植物或植物细胞可以用作天然或重组宿主。作为非限制性例子，可以提及以下植物或自其衍生的细胞：烟草属(Nicotiana)，特别是本氏烟草(Nicotianabenthamiana)和普通烟草(Nicotiana tabacum)(tobacco)；以及拟南芥属(Arabidopsis)，特别是阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)。

取决于宿主生物，根据本发明的方法中使用的生物以本领域技术人员已知的方式生长或培养。培养可以分批、半分批或连续进行。营养物可以在发酵开始时给予，也可以稍后，半连续或连续地提供。这也在下面更详细地描述。

g.根据本发明的多肽的重组生产

本发明进一步涉及重组生产根据本发明的多肽或其功能性生物学活性片段的方法，其中培养产生多肽的微生物，可选地通过施加至少一种诱导基因表达的诱导剂来诱导多肽的表达，并从培养物中分离这些多肽。如果需要，多肽也可以这种方式以工业规模生产。

根据本发明产生的微生物可以分批法或补料分批法或重复补料分批法连续或不连续培养。已知培养方法的概述可在Chmiel的教科书(Bioprozesstechnik 1.Einführungin die Bioverfahrenstechnik[Bioprocess technology 1.Introduction tobioprocess technology](Gustav Fischer Verlag,Stuttgart,1991))或在Storhas的教科书(Bioreaktoren und periphere Einrichtungen[Bioreactors and peripheralequipment](Vieweg Verlag,Braunschweig/Wiesbaden,1994))中找到。

所使用的培养基必须适当地满足各个菌株的要求。在美国细菌学学会(AmericanSociety for Bacteriology(Washington D.C.,USA,1981))的手册“Manual of Methodsfor General Bacteriology”中给出了各种微生物的培养基的描述。

可以根据本发明使用的这些培养基通常包含一种或多种碳源、氮源、无机盐、维生素和/或微量元素。

优选的碳源是糖，例如单糖、二糖或多糖。很好的碳源是例如葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖、淀粉或纤维素。糖也可以通过复杂的化合物(例如糖蜜)或糖精制的其他副产品添加到培养基中。添加不同碳源的混合物也是有利的。其他可能的碳源是油和脂，例如大豆油、葵花籽油、花生油和椰子油，脂肪酸例如棕榈酸、硬脂酸或亚油酸，醇例如甘油、甲醇或乙醇，和有机酸，例如乙酸或乳酸。

氮源通常是有机或无机氮化合物或含有这些化合物的材料。氮源的例子包括氨气或铵盐，例如硫酸铵、氯化铵、磷酸铵、碳酸铵或硝酸铵、硝酸盐、尿素、氨基酸或复合氮源，例如玉米浆、大豆粉、大豆蛋白质、酵母提取物、肉提取物等。氮源可以单独使用或作为混合物使用。

可以存在于培养基中的无机盐化合物包括钙、镁、钠、钴、钼、钾、锰、锌、铜和铁的氯化物、磷或硫酸盐。

无机含硫化合物，例如硫酸盐、亚硫酸盐、连二亚硫酸盐、连四硫酸盐、硫代硫酸盐、硫化物，以及有机硫化合物，例如硫醇(mercaptans)和巯类(thiols)，可用作硫源。

磷酸、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾或相应的含钠盐可用作磷源。

可以将螯合剂添加到培养基中，以将金属离子保持在溶液中。特别合适的螯合剂包括二羟基苯酚，例如儿茶酚或原儿茶酸酯，或有机酸，例如柠檬酸。

根据本发明使用的发酵培养基通常还包含其他生长因子，例如维生素或生长促进剂，其包括例如生物素、核黄素、硫胺素、叶酸、烟酸，泛酸和吡哆醇(pyridoxine)。生长因子和盐通常源自复杂培养基的成分，例如酵母提取物、糖蜜、玉米浆等。此外，可以将合适的前体添加到培养基中。化合物在培养基中的确切组成在很大程度上取决于相应的实验，并针对每种具体情况分别确定。有关培养基优化的信息可以在教科书"AppliedMicrobiol.Physiology,A Practical Approach"(Ed.P.M.Rhodes,P.F.Stanbury,IRLPress(1997)p.53-73,ISBN 0 19 963577 3)中找到。生长培养基也可以从商业供应商获得，例如Standard 1(Merck)或BHI(脑心浸液，DIFCO)等。

通过加热(在1.5bar和121℃下20分钟)或通过无菌过滤对培养基的所有成分进行灭菌。这些成分可以一起消毒，也可以根据需要单独消毒。培养基的所有成分都可以在培养开始时给予，也可以连续或分批添加。

培养温度通常在15℃至45℃之间，优选25℃至40℃，并且在实验过程中可以改变或保持恒定。介质的pH应在5至8.5的范围内，优选为7.0左右。生长期间的pH值可以通过添加碱性化合物(例如氢氧化钠、氢氧化钾、氨或氨水)或酸性化合物(例如磷酸或硫酸)来控制。消泡剂例如脂肪酸聚乙二醇酯可用于控制发泡。为了维持质粒的稳定性，可以向培养基中添加合适的选择性物质例如抗生素。为了维持有氧条件，将氧气或含氧气体混合物(例如环境空气)供入培养物中。培养物的温度通常在20℃至45℃的范围内。继续培养直至形成最大量的所期望产物。通常会在10到160个小时内达到此目标。

然后将发酵液进一步处理。根据需要，可以通过分离技术，例如离心、过滤、倾析或这些方法的组合，将生物质完全或部分地从发酵液中除去，或者可以完全留在其中。

如果多肽没有在培养基中分泌，也可以裂解细胞，并且可以通过用于分离蛋白质的已知方法从裂解物中获得产物。可以可选地通过高频超声，高压例如在高压细胞裂解机(French press)中，通过渗透，通过去污剂、裂解酶或有机溶剂的作用，通过均化器或通过上述几种方法的组合来破坏细胞。

可以通过已知的色谱技术，例如分子筛色谱(凝胶过滤)，例如Q-琼脂糖色谱，离子交换色谱和疏水色谱，以及其他常规技术，例如超滤、结晶、盐析、渗析和天然凝胶电泳来纯化多肽。合适的方法描述于例如Cooper,T.G.,Biochemische Arbeitsmethoden[Biochemical processes],Verlag Walter de Gruyter,Berlin,New York，或Scopes,R.,Protein Purification,Springer Verlag,New York,Heidelberg,Berlin。

为了分离重组蛋白，使用载体系统或寡核苷酸可能是有利的，所述载体系统或寡核苷酸通过限定的核苷酸序列延长cDNA，并因此编码改变的多肽或融合蛋白，其例如用于更容易的纯化。这种类型的合适修饰例如是充当锚的所谓“标签”，例如可以被识别为抗体抗原的被称为六组氨酸锚或表位的修饰(例如，描述于Harlow,E.and Lane,D.,1988,Antibodies:A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor(N.Y.)Press)。这些锚可以用于将蛋白质连接至固体载体，例如聚合物基质，其可以例如用作色谱柱中的填料，或者可以用于微量滴定板或其他载体上。

同时，这些锚也可用于识别蛋白质。为了识别蛋白质，还可以使用通常的标记物，例如荧光染料，酶标记物(与底物反应后形成可检测的反应产物)，或放射性标记物，单独使用或与锚结合使用以衍生化蛋白质。

h.多肽的固定化

根据本发明的酶或多肽可以在本文描述的方法中以游离形式或固定化而使用。固定化酶是固定在惰性载体上的酶。合适的载体材料和固定在其上的酶从EP-A-1149849、EP-A-1069183和DE-OS100193773以及从其中引用的参考文献中已知。在这方面，参考这些文件的全部公开内容。合适的载体材料包括例如粘土，粘土矿物，例如高岭石，硅藻土，珍珠岩，二氧化硅，氧化铝，碳酸钠，碳酸钙，纤维素粉末，阴离子交换剂材料，合成聚合物，例如聚苯乙烯，丙烯酸树脂，酚醛树脂，聚氨酯和聚烯烃，例如聚乙烯和聚丙烯。为了制备负载的酶，通常以细分的颗粒形式，优选多孔形式使用载体材料。载体材料的粒径通常不大于5mm，特别是不大于2mm(粒径分布曲线)。类似地，当使用脱氢酶作为全细胞催化剂时，可以选择游离形式或固定形式。载体材料例如为海藻酸钙和角叉菜胶。酶和细胞也可以直接与戊二醛交联(与CLEAs交联)。相应的和其他固定化技术描述于例如J.Lalonde and A.Margolin"Immobilization of Enzymes"in K.Drauz and H.Waldmann,Enzyme Catalysis inOrganic Synthesis 2002,Vol.III,991-1032,Wiley-VCH,Weinheim中。Rehm et al.(Ed.)Biotechnology,2nd Edn,Vol 3,Chapter 17,VCH,Weinheim给出了用于进行根据本发明的方法的生物转化和生物反应器的进一步信息。

i.本发明生物催化产生方法的反应条件

本发明的反应可以在体内或体外条件下进行。

存在于本发明的方法或上文定义的多步方法的单个步骤中的至少一种多肽/酶可以天然存在于活细胞中，或于收获的细胞(即在体内条件下)中，死细胞中，透化细胞中，粗细胞提取物中，纯化提取物中，或以基本纯净或完全纯净的形式(即在体外条件下)，重组产生一种或多种酶。所述至少一种酶可以以溶液形式存在或以固定在载体上的酶形式存在。一种或几种酶可以同时以可溶性和/或固定化形式存在。

根据本发明的方法可以在本领域技术人员已知的普通反应器中进行，并且可以在不同的规模范围内进行，例如从实验室规模(几毫升到几十升反应体积)到工业规模(几升到数千立方米反应体积)。如果多肽以通过无生命的、可选地透化的细胞包封的形式，以或多或少纯化的细胞提取物的形式或以纯化的形式使用，则可以使用化学反应器。化学反应器通常允许控制至少一种酶的量，至少一种底物的量，pH，温度和反应介质的循环。当活细胞中存在至少一种多肽/酶时，该过程将是发酵。在这种情况下，生物催化生产将在生物反应器(发酵罐)中进行，其中对于活细胞合适的生存条件必需的参数(例如，具有营养的培养基，温度，通气，有氧或无氧或其他气体，抗生素等)可以控制。本领域技术人员熟悉化学反应器或生物反应器，例如使用将化学或生物技术方法从实验室规模扩大到工业规模或优化工艺参数的程序，这些方法在文献中也有广泛描述(有关生物技术方法，请参见例如Crueger und Crueger,Biotechnologie–Lehrbuch der angewandten Mikrobiologie,2.Ed.,R.Oldenbourg Verlag,München,Wien,1984)。

包含至少一种酶的细胞可以通过物理或机械方式例如超声或射频脉冲，高压细胞裂解机(French press)或化学方式例如在培养基中存在的低渗介质、裂解酶和去污剂或这些方法的组合来渗透。洗涤剂的例子是洋地黄毒苷，正十二烷基麦芽糖苷，辛基糖苷，

X-100，

20，脱氧胆酸盐，CHAPS(3-[(3-氯酰胺基丙基)二甲基铵]-1-丙烷磺酸盐)，

P40(乙基苯酚聚(乙二醇醚))等。

代替活细胞，也可以将含有所需生物催化剂的非活细胞的生物质应用于本发明的生物转化反应。

如果固定了至少一种酶，则将其如上所述连接至惰性载体。

转化反应可以分批、半分批或连续进行。反应物(和可选的营养物)可以在反应开始时提供，或者可以随后半连续或连续地提供。

根据特定的反应类型，本发明的反应可以在水性、水性-有机或非水性反应介质中进行。

水性或水性-有机介质可包含合适的缓冲液，以将pH值调整为5至11，例如6至10。

在水性-有机介质中，可以使用与水可混溶、部分混溶或不混溶的有机溶剂。合适的有机溶剂的非限制性例子在下面列出。进一步的例子是一元或多元，芳族或脂族醇，特别是多元脂族醇，如甘油。

非水介质可以包含基本上不含水，即，将包含少于约1重量％或0.5重量％的水。

生物催化方法也可以在有机非水介质中进行。作为合适的有机溶剂，可以提及具有例如5至8个碳原子的脂族烃，例如戊烷、环戊烷、己烷、环己烷、庚烷、辛烷或环辛烷；芳族烃，例如苯、甲苯、二甲苯、氯苯或二氯苯，脂族无环和醚，例如乙醚、甲基叔丁基醚、乙基叔丁基醚、二丙基醚、二异丙醚、二丁基醚；或它们的混合物。

反应物/底物的浓度可以适应于最佳反应条件，这可以取决于所应用的特定酶。例如，初始底物浓度可以为0.1至0.5M，例如10至100mM。

反应温度可以适应于最佳反应条件，这可以取决于所应用的特定酶。例如，该反应可以在0至70℃的温度下进行，例如20至50或25至40℃。反应温度的例子是约30℃，约35℃，约37℃，约40℃，约45℃，约50℃，约55℃和约60℃。

该工艺可以继续进行直到在底物和随后的产物之间达到平衡为止，但是可以更早地停止。通常的工艺时间为1分钟至25小时，特别是10分钟至6小时，例如为1小时至4小时，特别是1.5小时至3.5小时。这些参数是合适的工艺条件的非限制性例子。

如果宿主是转基因植物，则可以提供最佳的生长条件，例如最佳的光照、水和营养条件。

k.产品分离

本发明的方法可以进一步包括回收终产物或中间产物的步骤，所述终产物或中间产物可选地为立体异构体或对映异构体的基本纯净的形式。术语“回收”包括从培养基或反应介质中提取、收获、分离或纯化化合物。化合物的回收可以根据本领域已知的任何常规分离或纯化方法进行，包括但不限于用常规树脂(例如，阴离子或阳离子交换树脂、非离子吸附树脂等)处理，用常规吸附剂(例如，活性炭、硅酸、硅胶、纤维素、氧化铝等)处理，pH值的改变，溶剂萃取(例如，使用常规溶剂，例如醇、乙酸乙酯、己烷等)，蒸馏，渗析，过滤，浓缩，结晶，重结晶，pH调节，冻干等。

经分离产物的身份和纯度可以通过已知技术确定，例如高效液相色谱(HPLC)，气相色谱(GC)，光谱学(例如IR、UV、NMR)，着色方法，TLC，NIRS，酶或微生物测定(参见例如：Patek et al.(1994)Appl.Environ.Microbiol.60:133-140；Malakhova et al.(1996)Biotekhnologiya 1127-32；und Schmidt et al.(1998)Bioprocess Engineer.19:67-70.Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry(1996)Bd.A27,VCH:Weinheim,S.89-90,S.521-540,S.540-547,S.559-566,575-581und S.581-587；Michal,G(1999)Biochemical Pathways:An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology,JohnWiley and Sons；Fallon,A.et al.(1987)Applications of HPLC in Biochemistry in:Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology,Bd.17.)。

可以将本文所述的任何方法生产的环状萜烯化合物转化成衍生物，例如但不限于烃、酯、酰胺、糖苷、醚、环氧化物、醛、酮、醇、二醇、缩醛或缩酮。萜烯化合物衍生物可以通过化学方法获得，例如但不限于氧化、还原、烷基化、酰化和/或重排。或者，萜烯化合物衍生物可以通过使用生化方法通过使萜烯化合物与酶接触而获得，所述酶例如但不限于氧化还原酶、单加氧酶、双加氧酶、转移酶。可以使用分离的酶，来自裂解细胞的酶在体外进行生化转化，也可以使用全细胞在体内进行生化转化。

l.萜烯/萜类化合物如半日花烷型化合物的发酵产生

本发明还涉及用于萜烯/萜类化合物如半日花烷型化合物的发酵产生方法。

根据本发明使用的发酵可以例如在搅拌的发酵罐、鼓泡塔和回路反应器中进行。有关可能的方法类型的全面概述，包括搅拌器类型和几何设计，请参见“Chmiel:Bioprozesstechnik:Einfuhrung in die Bioverfahrenstechnik,Band 1”。在本发明的方法中，可用的典型变型是本领域技术人员已知的或例如在“Chmiel,Hammes and Bailey:Biochemical Engineering”中解释的以下变型，例如分批、补料分批，重复补料分批进行或连续发酵，有或没有回收生物质。取决于生产应变，可以进行空气、氧气、二氧化碳、氢气、氮气或适当的气体混合物的喷射，以实现良好的收率(YP/S)。

要使用的培养基必须以适当的方式满足特定菌株的要求。在美国细菌学学会(American Society for Bacteriology(Washington D.C.,USA,1981))的手册“Manual ofMethods for General Bacteriology”中给出了各种微生物的培养基的描述。

优选的碳源是糖，例如单糖、二糖或多糖。非常好的碳源是例如葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖、淀粉或纤维素。糖也可以通过复杂的化合物(例如糖蜜)或糖精制的其他副产物添加到培养基中。添加各种碳源的混合物也是有利的。碳的其他可能来源是油和脂，例如大豆油、葵花籽油、花生油和椰子油，脂肪酸例如棕榈酸、硬脂酸或亚油酸，醇例如甘油、甲醇或乙醇，和有机酸，例如乙酸或乳酸。

可以存在于培养基中的无机盐化合物包括钙、镁、钠、钴、钼、钾、锰、锌、铜和铁的氯化物、磷酸盐或硫酸盐。

根据本发明使用的发酵培养基还可包含其他生长因子，例如维生素或生长促进剂，其包括例如生物素、核黄素、硫胺素、叶酸、烟酸、泛酸和吡哆醇。生长因子和盐通常来自培养基的复杂成分，例如酵母提取物、糖蜜、玉米浆等。另外，可以将合适的前体添加到培养基中。化合物在培养基中的精确组成在很大程度上取决于特定的实验，必须针对每种特定情况分别确定。有关培养基优化的信息可以在教科书"Applied Microbiol.Physiology,APractical Approach"(1997)中找到。生长培养基也可以从商业供应商那里获得，例如Standard 1(Merck)或BHI(脑心浸液、DIFCO)等。。

通过加热(在1.5bar和121℃下20分钟)或通过无菌过滤对培养基的所有成分进行灭菌。这些成分可以一起消毒，也可以根据需要单独消毒。培养基的所有成分都可以在生长开始时给予，或者可以选择连续添加或分批添加。

培养物的温度通常在15℃至45℃之间，优选25℃至40℃，并且可以在实验期间保持恒定或可以变化。介质的pH值应在5至8.5的范围内，优选7.0左右。生长期间的pH值可以通过添加碱性化合物(例如氢氧化钠、氢氧化钾、氨或氨水)或酸性化合物(例如磷酸或硫酸)来控制。消泡剂例如脂肪酸聚乙二醇酯可用于控制发泡。为了维持质粒的稳定性，可以向培养基中添加具有选择性作用的合适物质例如抗生素。为了维持有氧条件，将氧气或含氧气体混合物(例如环境空气)供入培养物中。培养物的温度通常为20℃至45℃。继续培养直至形成最大量的所期望产物。通常会在1到160个小时内达到此目标。

本发明的方法可以进一步包括回收所述萜烯醇的步骤。

术语“回收”包括从培养基中提取、收获、分离或纯化化合物。化合物的回收可以根据本领域已知的任何常规分离或纯化方法进行，包括但不限于用常规树脂(例如，阴离子或阳离子交换树脂、非离子吸附树脂等)处理，用常规吸附剂(例如，活性炭、硅酸、硅胶、纤维素、氧化铝等)处理，pH值的改变，溶剂萃取(例如，使用常规溶剂，例如醇、乙酸乙酯、己烷等)，蒸馏，渗析，过滤，浓缩，结晶，重结晶，pH调节，冻干等。

在预期的分离之前，可以除去发酵液的生物质。去除生物质的方法是本领域技术人员已知的，例如过滤、沉降和浮选。因此，可以例如通过离心机、分离器、倾析器、过滤器或在浮选设备中去除生物质。为了最大程度地回收有价值的产品，通常建议洗涤生物质，例如以渗滤的形式。方法的选择取决于发酵液中生物质的含量和生物质的性质，以及生物质与有价值产品的相互作用。

在一个实施方案中，可以将发酵液灭菌或巴氏灭菌。在另一个实施方案中，将发酵液浓缩。根据需要，该浓缩可以分批或连续进行。应该选择压力和温度范围，使得首先不会发生产品损坏，其次需要最小化设备和能源的使用。多级蒸发的压力和温度水平的熟练选择尤其可以节省能源。

以下实施例仅是说明性的，并不意味着限制本文所述的实施方案和实施方案的范围。

在考虑了本文提供的公开内容之后，对于本领域技术人员而言将立即变得显而易见的多种可能的变型方案也落入本发明的范围内。

实验部分

现在将通过以下实施例更详细地描述本发明。

a)材料：

除非另有说明，本文中使用的所有化学和生化材料以及微生物或细胞都是可商购的产品。

除非另有说明，否则重组蛋白是通过标准方法克隆和表达的，所述方法例如描述于Sambrook,J.,Fritsch,E.F.and Maniatis,T.,Molecular cloning:A LaboratoryManual,2^nd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Cold Spring Harbor,NY,1989。

b)通用方法

无细胞蛋白质级分的制备。

将表达载体转化到大肠杆菌KRX细胞(Promega Corporation，Madison，WI，USA)中，并在补充有适当抗生素的LB培养基平板上选择经转化的细胞。然后将细胞在补充有适当抗生素的25mL液体LB培养基中于37℃培养至OD为1。重组蛋白的表达由1mM异丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷和0.1％(w/v)的L-鼠李糖一水合物来诱导，细胞在25℃温和摇动下孵育24小时。

细菌细胞通过离心(5000g，12分钟)收获并通过超声破碎(Sonics，配备6mm直径尖端微探针的Vibra cell X 130超声仪；3次20秒20kHz脉冲，最大功率的80％)，该步骤在冰上在pH 7.4含有15％甘油的1.8mL的50mM MOPSO缓冲液中进行。裂解液通过离心(3500g，8分钟，4℃)澄清，所得上清液冷冻保存并用作体外测定的酶源。

体外酶分析。

在硼硅玻璃和PTFE密封螺旋盖管(11mL容量)(Wheaton,Millville,NJ 08332USA)中的分析液中，将含有重组蛋白之一的蛋白质级分在24℃下以230rpm的速度摇动孵育4小时，该分析液由20μl无细胞提取物、160至320mg/L底物(使用在DMSO中40g/L的底物储备溶液)、1mM辅助因子(只要相关)和50mM MOPSO pH7.4组成，最终体积为0.5至1mL。用1体积的甲基叔丁基醚(MTBE)提取分析液，并如下所述通过GC-MS进行分析。

全细胞生物转化测定。

使用表达重组酶的大肠杆菌细胞进行化合物的生物转化。将表达载体转化到大肠杆菌KRX细胞(Promega Corporation，Madison，WI，USA)中，并在补充有适当抗生素的LB培养基平板上选择经转化的细胞。细胞首先在30℃下在5mL LB培养基中培养过夜，该培养基补充了1％的葡萄糖和适当的抗生素。第二天，以0.2至0.75的初始光密度接种20mL补充有适当抗生素的TB培养基(Terrific Broth)。将培养物在摇瓶中于37℃孵育直至达到1至4的光密度，并通过添加0.1mM的异丙基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷IPTG和0.1％的鼠李糖来诱导重组蛋白的表达。然后将培养物以0.5至1mL的等分试样分装在12mL的玻璃管中，并在20℃温和摇动下孵育。

在诱导重组蛋白表达后90分钟，将底物加入到每个管中。使用40g/L的DMSO储备溶液将底物添加至0.25至1g/L的终浓度。或者，制备在水中含有150mg/mL

80(Sigma-Aldrich)和300mg/mL底物的乳液，并将其添加到分析液中以达到12mg/mL底物的终浓度。

孵育8至48小时后，用1体积的MTBE提取培养物，并如下所述通过GC-MS进行分析。

在能够产生萜烯化合物的条件下培养工程细菌细胞。

DP1205大肠杆菌细胞用一种或两种携带萜烯生物合成基因和/或萜烯修饰酶的表达质粒转化，经转化的细胞用适当的抗生素(卡那霉素(50μg/mL)和/或氯霉素(34μg/mL))在LB-琼脂糖板上培养。使用单菌落接种5mL液体LB培养基，该培养基补充有相同的抗生素、4g/L的葡萄糖和10％(v/v)的十二烷。第二天，用0.2mL过夜培养物接种补充有相同抗生素和10％(v/v)十二烷的2mL TB培养基。将培养物在37℃下培养直至达到3的光密度。然后通过添加1mM IPTG来引发重组蛋白的表达，并将培养物在20℃下孵育72小时。

然后用1体积的(MTBE)提取培养物，并如下所述通过GC-MS分析有机相的组成。为了定量，在GC-MS分析之前将内标物((α-长叶蒎烯(Aldrich))添加到提取物中，并根据峰面积的比较估计组分的浓度。

GC-MS分析方法。

使用连接了5975C系列质量选择检测器(MSD)并配备了分流/不分流进样器(Agilent Technologies,CA)的Agilent 7890A GC系统分析全细胞生物转化测定的样品。

GC进样口温度设置为230℃，以分流模式(分流比20:1)进样1.0μL样品，并在DB-5ms毛细管柱(30m x 0.25mm内径x0.25μm膜厚；Agilent J&W)上进行分析，使用1mL/min恒定流速的氦气作为载气。烘箱的初始温度设置为80℃，并程序升温至240℃(10℃/分钟；保持1分钟)，然后至300℃(20℃/分钟；保持1分钟)。

使用连接了5975系列质量选择检测器(MSD)并配备了分流/不分流进样器(Agilent Technologies,CA)和CombiPAL自动进样器(CTC Analytics，Zwingen，瑞士)注射系统的Agilent 6890N GC系统分析体外测定样品。GC进样口温度设置为250℃，1.0μL样品以脉冲不分流模式进样(脉冲压力1.56bar，脉冲时间0.6分钟)并在DB-1ms毛细管柱(30m x0.25mm内径x 0.25μm膜厚；Agilent J&W)上进行分析，使用1.2mL/min恒定流速的氦气作为载气。烘箱的初始温度设置为100℃(保持1分钟)，并程序升温至260℃(10至20℃/分钟)，然后至300℃(30℃/分钟；保持1分钟)。对于较小分子质量的化合物，使用相同的条件进行分析，只是将柱箱初始温度降低到80℃。

用于降解萜烯化合物的重组菌株的工程改造。

通过引入编码以下一种或多种蛋白质的核苷酸序列来改造能够产生或转化化合物的重组菌株：

-一种选自以下的拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)：

来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-BVMO1(SEQ ID NO:2)，

来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:6)，

来自罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)的SCH25-BVMO1(SEQ IDNO:10)，和

来自纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)的SCH46-BVMO1(SEQ ID NO:13)；

-选自以下的酯酶：

来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-EST(SEQ ID NO:20)，

来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-EST(SEQ ID NO:24)，

来自罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)的SCH25-EST(SEQ ID NO:28)；和

-选自以下的烯醛裂解酶(裂解酶)：

SCH94-3944红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)(SEQ ID NO:34)，

SCH80-05241玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)(SEQ ID NO:38)，

Pdigit7033指状青霉(Penicillium digitatum)(SEQ ID NO:42)，

PitalDUF4334-1意大利青霉(Penicillium italicum)(SEQ ID NO:46)，

AspWeDUF4334温特曲霉(Aspergillus wentii)(SEQ ID NO:49)，

RhoagDUF4334-2霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288(SEQ ID NO:53)，

RhoagDUF4334-3霍氏红球菌菌株N128(SEQ ID NO:56)，

RhoagDUF4334-4霍氏红球菌NBRC 10125(SEQ ID NO:59)，

CnecaDUF4334钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)(SEQ ID NO:62)，

Rins-DUF4334谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)(SEQ ID NO:69)，

CgatDUF4334格特隐球菌(Cryptococcus gattii)EJB2(SEQ ID NO:72)，

GclavDUF4334一种蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)kw1407(SEQ ID NO:75)，

TcurvaDUF4334弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)(SEQ ID NO:81)，

PprotDUF4334防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)(SEQ ID NO:87)，

用于体外酶测定或全细胞生物转化测定的细菌宿主细胞选自大肠杆菌KRX细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)和大肠杆菌BL21 Star^TM(DE3)细胞(ThermoFisher)。

为了使用选自上述酶的一种或多种酶的萜烯化合物的生化产生，宿主细胞被工程改造为使用甲羟戊酸酶途径产生增加量的法呢基焦磷酸(FPP)并进一步转化以表达倍半萜或二萜生物合成酶。

通过编码甲羟戊酸途径酶的基因的染色体整合，对重组大肠杆菌菌株进行工程化以产生FPP。

通过对编码甲羟戊酸途径酶的重组基因进行染色体整合，对大肠杆菌菌株进行工程改造以产生法呢基焦磷酸(FPP)。另请参见图1中描述的构建方案和重组事件。

设计了一个上游(upper)途径操纵子(从乙酰辅酶A到甲羟戊酸的操纵子1)，由来自大肠杆菌的编码乙酰乙酰辅酶A硫解酶的atoB基因，以及来自金黄色葡萄球菌的分别编码HMG-CoA合酶和HMG-CoA还原酶的mvaA和mvaS基因构成。

作为下游(lower)甲羟戊酸途径操纵子(从甲羟戊酸到法呢基焦磷酸的操纵子2)，选择了来自革兰氏阴性细菌肺炎链球菌的天然操纵子，其编码甲羟戊酸激酶(mvaK1)、磷酸甲羟戊酸激酶(mvaK2)、磷酸甲羟戊酸脱羧酶(mvaD)和异戊烯基二磷酸异构酶(fni)。

将密码子优化的酿酒酵母FPP合酶编码基因(ERG20)引入到上游途径操纵子的3'末端，以将异戊烯基二磷酸(IPP)和二甲基烯丙基二磷酸(DMAPP)转化为FPP。

通过DNA2.0合成上述操纵子，并将其整合到大肠杆菌BL21(DE3)菌株的araA基因中。使用CRISPR/Cas9基因组工程系统，在两个单独的重组步骤中引入了异源途径。待整合的第一个操纵子(下游途径；操纵子2)带有壮观霉素(Spec)标记，其用于筛选对Spec抗性的候选整合子。设计第二个操纵子以取代先前整合的操纵子的Spec标记，并在第二次重组事件之后相应地筛选Spec候选整合子(参见图1)。设计靶向araA基因的指导RNA表达载体，并通过DNA 2.0进行合成。使用PCR通过设计PCR引物来验证操纵子整合，以扩增跨araA基因整合靶标和跨整合子重组连接点。然后将产生正确PCR结果的一个克隆完全测序，并存档为菌株DP1205。

用于产生柯巴醇的重组细菌细胞的工程改造。

构建了一个操纵子，其含有两个cDNA，它们编码：

-AspWeTPP，一种来自温特曲霉(Aspergillus wentii)(SEQ ID NO:170)(GenBank登录号OJJ34585.1)的具有萜烯基二磷酸磷酸酶活性的蛋白质，具有使萜烯基二磷酸化合物例如柯巴基PP去磷酸化的能力；和

-PvCPS，一种来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)(SED ID NO:173)(GenBank登录号BBF88128.1)的具有异戊二烯基转移酶和柯巴基二磷酸合酶活性的蛋白质。PvCPS催化从IPP和DMAPP产生柯巴基PP。

编码AspWeTPP和PvCPS的cDNA经密码子优化(SEQ ID NO:171和174)。设计含有两个cDNA和位于cDNA上游的RBS序列(AAGGAGGTAAAAAA)(SEQ ID NO:196)的操纵子。合成该操纵子并将其克隆到pJ401表达质粒(ATUM,Newark,California)中，以提供质粒pJ401-CPOL-4。

用质粒pJ401-CPOL-4转化大肠杆菌细胞(例如DP1205大肠杆菌细胞)提供了在能够产生萜烯化合物的条件下培养时能够产生柯巴醇的重组细胞。

用于产生柯巴醛的重组细菌细胞的工程改造。

构建了一个操纵子，其含有3个cDNA，它们编码：

-AspWeTPP，一种来自温特曲霉(Aspergillus wentii)(SEQ ID NO:170)(GenBank登录号OJJ34585.1)的具有萜烯基二磷酸磷酸酶活性的蛋白质，具有使萜烯基二磷酸化合物例如柯巴基PP去磷酸化的能力；

-AzTolADH1，一种来自解甲苯固氮弯曲菌(Azoarcus toluclasticus)(SEQ IDNO:167)(GenBank登录号WP_018990713.1)的具有乙醇脱氢酶(ADH)活性的蛋白质，具有将萜烯醇例如柯巴醇氧化成相应的羰基化合物例如柯巴醛的能力；和

-PvCPS，一种来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)(SED ID NO:173)(GenBank登录号BBF88128.1)的具有异戊二烯基转移酶和柯巴基二磷酸合酶活性的蛋白质。具有从IPP和DMAPP产生环状萜烯基二磷酸化合物例如柯巴基PP的能力。

编码AspWeTPP、AzTolADH1和PvCPS的cDNA经密码子优化(SEQ ID NO:171、168和174)。设计了一个操纵子，其依次含有三个cDNA和位于每个cDNA上游的RBS序列(AAGGAGGTAAAAAA)(SEQ ID NO:196)。合成该操纵子并将其克隆到pJ401表达质粒(ATUM，Newark，California)中，以提供质粒pJ401-CPAL-1。

用质粒pJ401-CPAL-1转化大肠杆菌细胞(例如DP1205大肠杆菌细胞)提供了在能够产生萜烯化合物的条件下培养时能够产生柯巴醛的重组细胞。

用于产生法呢醛的重组细菌细胞的工程改造。

构建了一个操纵子，其含有两个cDNA，它们编码：

-TalCeTPP，一种来自纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)(GenBank:GAM42000.1)(SEQ ID NO:176)的具有萜烯基二磷酸磷酸酶活性的蛋白质，具有使萜烯基二磷酸化合物例如法呢基二磷酸去磷酸化的能力；和

-CdGeoA，一种来自解芳烃卡斯特罗尼氏菌(Castellaniella defragrans)(NCBI登记号WP_043683915.1)(SEQ ID NO:179)的具有醇脱氢酶(ADH)活性的蛋白质，具有将萜烯醇例如法呢醇氧化成相应的羰基化合物例如法呢醛的能力。

编码TalCeTPP和CdGeoA的cDNA经密码子优化(SEQ ID NO:177和180)。设计了一个操纵子，其依次含有两个cDNA和位于每个cDNA上游的RBS序列(AAGGAGGTAAAAAA)(SEQ IDNO:196)。合成该操纵子并将其克隆到pJ401表达质粒(ATUM,Newark,California)中，以提供质粒pJ401-FAL-1。

大肠杆菌细胞例如DP1205大肠杆菌细胞使用质粒pJ401-FAL-1的转化提供了在能够产生萜烯化合物的条件下培养时能够产生法呢醛的重组细胞。

用于产生半日花烯二醇的重组细菌细胞的工程改造。

构建了一个操纵子，其含有三个cDNA，它们编码：

-TalVeTPP，一种来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)(Genbank登录号KUL89334.1)(SEQ ID NO:194)的具有萜烯基二磷酸磷酸酶活性的蛋白质；具有使萜烯基二磷酸化合物例如半日花烯二醇PP去磷酸化的能力；

-SsLPS，一种来自快乐鼠尾草(Salvia sclarea)(Genbank登录号AET21247.1)(SEQ ID NO:188)的具有半日花烯二醇焦磷酸(LPP)合酶活性的蛋白质，具有从GGPP产生环状萜烯基二磷酸化合物例如半日花烯二醇二磷酸的能力；和

-CrtE，一种来自成团泛菌(Pantoea agglomerans)的香叶基香叶基二磷酸合酶(GenBank登录号AAA24819.1)(SEQ ID NO:191)，具有从FPP产生GGPP的能力。

编码TalVeTPP、SsLPS和CrtE的cDNA经密码子优化(SEQ ID NO:195、189和192)。设计了一个操纵子，其依次含有三个cDNA和位于每个cDNA上游的RBS序列(AAGGAGGTAAAAAA)(SEQ ID NO:196)。合成该操纵子并将其克隆到pJ401表达质粒(ATUM,Newark,California)中，以提供质粒pJ401-LOH-2。

大肠杆菌细胞例如DP1205大肠杆菌细胞使用质粒pJ401-LOH-2的转化提供了在能够产生萜烯化合物的条件下培养时能够产生半日花烯二醇的重组细胞。

酵母细胞的转化、选择和培养。

如Gietz and Woods,Methods Enzymol.,2002,350:87–96所述，所有酵母细胞转化均采用乙酸锂方案进行。将转化混合物涂在SmUra-或SmLeu-培养基平板上，该培养基平板含有6.7g/L不含氨基酸的酵母氮碱(BD Difco,New Jersey,USA)、1.92g/L不含尿嘧啶的Dropout补充剂(Sigma Aldrich,Missouri,USA)或1.6g/L不含亮氨酸的Dropout补充剂(Sigma Aldrich,Missouri,USA)、20g/L葡萄糖和20g/L琼脂。平板在30℃下孵育3～4天。

用于提高内源性法呢基二磷酸水平的酵母细胞工程改造。

为了增加酿酒酵母细胞中内源性法呢基二磷酸(FPP)池的水平，涉及甲羟戊酸途径的所有酵母内源基因的额外副本，从编码乙酰辅酶A C-乙酰转移酶的ERG10到编码FPP合成酶的ERG20，与Paddon et al.,Nature,2013,496:528-532中所述的相似，在半乳糖诱导型启动子的控制下，整合到酿酒酵母菌株CEN.PK2-1C(Euroscarf，Frankfurt，Germany)的基因组中。简而言之，将三个盒分别整合在LEU2、TRP1和URA3基因座中。第一个盒包含在GAL10/GAL1双向启动子控制下的ERG20基因和一个截短的HMG1(tHMG1，如Donald et al.,Proc Natl Acad Sci USA,1997,109:E111-8所述)，和同样在GAL10/GAL1启动子控制下的ERG19和ERG13基因。该盒的侧翼为两个100个核苷酸区域，分别对应于LEU2的上游和下游部分。第二个盒包含在GAL10/GAL1启动子控制下的基因IDI1和tHMG1以及在GAL7启动子区域控制下的基因ERG13。该盒的侧翼为两个100个核苷酸区域，分别对应于TRP1的上游和下游部分。第三个盒包含基因ERG10、ERG12、tHMG1和ERG8，都在GAL10/GAL1启动子的控制之下。该盒的侧翼为两个100个核苷酸的区域，分别对应于URA3的上游和下游部分。三个盒中的所有基因都包含其自身终止子区域的200个核苷酸。而且，在ERG9启动子区域上游，整合了如Griggs and Johnston,Proc Natl Acad Sci USA,1991,88:8597-8601中所描述的，在其自身启动子的突变形式的控制下的GAL4的额外拷贝。另外，通过启动子交换修饰了ERG9的表达。使用含有带有其自身的启动子和终止子的HIS3基因的盒删除GAL7、GAL10和GAL1基因。将所得菌株与菌株CEN.PK2-1D(Euroscarf，Frankfurt，Germany)交配，获得称为YST045的二倍体菌株，其根据Solis-Escalante et al.,FEMS Yeast Res,2015,15:2诱导芽孢形成。孢子分离是通过将asci重悬于200μL、0.5M山梨糖醇和2μL的zymolyase(1000U mL^-1，Zymoresearch，Irvine，CA)中并在37℃孵育20分钟而实现的。然后将混合物铺板在含有20g/L蛋白胨、10g/L酵母提取物和20g/L琼脂的培养基上，分离出一种发芽的孢子，称为YST075。

用于产生柯巴醇的重组酵母细胞的工程改造。

对于柯巴醇的产生，GGPP合酶carG(来自三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)，NCBI登录号JQ289995.1)(SEQ ID NO:182)、柯巴基焦磷酸合酶SmCPS2(来自丹参(Salviamiltiorrhiza)，NCBI登录号ABV57835.1)(SEQ ID NO:185)和柯巴基焦磷酸磷酸酶TalVeTPP(来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)，NCBI登录号KUL89334.1)(SEQID NO:194)在不同工程化酵母细胞中的表达是如先前Kuijpers et al.,Microb CellFact.,2013,12:47所描述的那样用体内构建的质粒系统，使用酵母内源性同源重组实现的。该质粒由六个用于酿酒酵母共转化的DNA片段组成。这些片段是：

a)LEU2酵母标记物，通过PCR，使用引物5’-AGGTGCAGTTCGCGTGCAATTATAACGTCGTGGCAACTGTTATCAGTCGTACCGCGCCATTCGACTACGTCGTAAGGCC-3’(SEQ ID NO:124)和5’-TCGTGGTCAAGGCGTGCAATTCTCAACACGAGAGTGATTCTTCGGCGTTGTTGCTGACCATCGACGGTCGAGGAGAACTT-3’(SEQ ID NO:125)以质粒pESC-LEU(Agilent Technologies,California,USA)为模板构建；

b)AmpR大肠杆菌标记物，通过PCR，使用引物5’-TGGTCAGCAACAACGCCGAAGAATCACTCTCGTGTTGAGAATTGCACGCCTTGACCACGACACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAG-3’(SEQ ID NO:126)和5’-AACGCGTACCCTAAGTACGGCACCACAGTGACTATGCAGTCCGCACTTTGCCAATGCCAAAAATGTGCGCGGAACCCCTA-3’(SEQ ID NO:127)以质粒pESC-URA为模板构建；

c)酵母复制起点，通过PCR，使用引物5’-TTGGCATTGGCAAAGTGCGGACTGCATAGTCACTGTGGTGCCGTACTTAGGGTACGCGTTCCTGAACGAAGCATCTGTGCTTCA-3’(SEQ ID NO:128)和5’-CCGAGATGCCAAAGGATAGGTGCTATGTTGATGACTACGACACAGAACTGCGGGTGACATAATGATAGCATTGAAGGATGAGACT-3’(SEQ ID NO:129)以pESC-URA为模板获得；

d)大肠杆菌复制起点，通过PCR，使用引物’-ATGTCACCCGCAGTTCTGTGTCGTAGTCATCAACATAGCACCTATCCTTTGGCATCTCGGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGG-3’(SEQ ID NO:130)和5’-CTCAGATGTACGGTGATCGCCACCATGTGACGGAAGCTATCCTGACAGTGTAGCAAGTGCTGAGCGTCAGACCCCGTAGAA-3’(SEQ ID NO:131)以质粒pESC-URA为模板获得；

e)一片段，由片段“d”的最后60个核苷酸，酵母基因PGK1的终止密码子的下游200个核苷酸、GGPP合酶编码序列CrtE、GAL10/GAL1的双向酵母启动子、TalVeTPP的编码序列、酵母基因CYC1的终止密码子的下游200个核苷酸和序列5’-ATTCCTAGTGACGGCCTTGGGAACTCGATACACGATGTTCAGTAGACCGCTCACACATGG-3’(SEQ ID NO:132)组成，该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的；以及

f)一片段，由片段“e”的最后60个核苷酸、酵母基因CYC1的终止密码子的下游200个核苷酸、SmCPS2柯巴基焦磷酸合酶编码序列、GAL10/GAL1的双向酵母启动子和对应于片段“a”开始的60个核苷酸组成，该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的。

可选地，GGPP合酶carG和柯巴基焦磷酸合酶被双功能PvCPS替代。

用于产生迈诺醇氧基的重组酵母细胞的工程改造。

为了使用不同的醇脱氢酶(ADH)、拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)和酯酶(EST)将柯巴醇降解为迈诺醇氧基，在YST075菌株中进行了基因组整合。每个整合盒由四个片段组成：

1)一片段，其含有相应于NDT80基因上游段的658bp和序列5’-GCAGGCAGCTCCATTTCATGTAGGTGATTTATCCCTCCGGGCGGTATTTGAGACTCTCGG-3’(SEQ ID NO:121)，该片段以来自菌株YST075的基因组DNA为模板，通过PCR获得；

2)一片段，其含有序列5’-GCAGGCAGCTCCATTTCATGTAGGTGATTTATCCCTCCGGGCGGTATTTGAGACTCTCGG-3’(SEQ ID NO:121)、CYC1终止子区域、编码BVMO的基因之一、GAL1和GAL10基因之间的基因间区域、编码酯酶的基因之一、ADH1基因的终止子区域和序列5’-ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC-3’(SEQ ID NO:122)，该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的；

3)一片段，其含有序列5’-ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC-3’(SEQ ID NO:122)、PGK1终止子区域、编码醇脱氢酶的基因之一、基因GAL1和GAL10的启动子区域、编码醇脱氢酶的基因之一、CYC1终止子区域和序列5’-AGTCGACCTTACAGCGCCTGGGACTCTACATAAACATGCAGCGAACATGCTTTCCAACGC-3’(SEQ ID NO:123)，根据所进行的实验，该片段可能含有一种或两种醇脱氢酶。它们是通过DNA合成(ATUM,MenloPark,CA 94025)获得的；和

4)一片段，其含有序列5’-AGTCGACCTTACAGCGCCTGGGACTCTACATAAACATGCAGCGAACATGCTTTCCAACGC-3’(SEQ ID NO:123)和相应于NDT80基因的405bp。该片段以来自菌株YST075的基因组DNA为模板，通过PCR获得。

用于将柯巴醇降解为迈诺醇氧基的重组酵母细胞的工程改造。

为了将柯巴醇降解为迈诺醇氧基，使用醇脱氢酶和不同的烯醛裂解多肽，在菌株YST075中进行基因组整合，每个整合盒由三个片段组成：

2)一片段，其含有序列5’-GCAGGCAGCTCCATTTCATGTAGGTGATTTATCCCTCCGGGCGGTATTTGAGACTCTCGG-3’(SEQ ID NO:121)、GAL1和GAL10基因之间的基因间区域、编码烯醛裂解多肽的基因之一、ADH1基因的终止子区域和序列5’-ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC-3’(SEQ ID NO:122)，该片段是通过DNA合成(ATUM,MenloPark,CA 94025)获得的；和

3)一片段，其含有序列5’-ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC-3’(SEQ ID NO:122)、PGK1终止子区域、编码醇脱氢酶的基因、基因GAL1和GAL10的启动子区域、序列5’-AGTCGACCTTACAGCGCCTGGGACTCTACATAAACATGCAGCGAACATGCTTTCCAACGC-3’(SEQ ID NO:123)和相应于NDT80基因的405bp。该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的。

在所有情况下，通过在如上所述的质粒系统中表达生物合成途径来实现柯巴醇的产生。

用于产生γ-ambryl乙酸酯的重组酵母细胞的工程改造。

为了使用醇脱氢酶、烯醛裂解多肽和不同的拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)将柯巴醇降解为γ-ambryl乙酸酯，在菌株YST075中进行了基因组整合；每个整合盒由三个片段组成：

(1)一片段，其含有相应于NDT80基因上游段的658bp和序列5’-GCAGGCAGCTCCATTTCATGTAGGTGATTTATCCCTCCGGGCGGTATTTGAGACTCTCGG-3’(SEQ ID NO:121)，该片段以来自菌株YST075的基因组DNA为模板，通过PCR获得；

(2)一片段，其含有序列5’-GCAGGCAGCTCCATTTCATGTAGGTGATTTATCCCTCCGGGCGGTATTTGAGACTCTCGG-3’(SEQ ID NO:121)、CYC1基因的终止子区域、编码所测试的BVMO的基因之一、GAL1和GAL10基因之间的基因间区域、编码烯醛裂解多肽的基因、ADH1基因的终止子区域和序列5’-ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC-3’(SEQ ID NO:122)，该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的；和

(3)一片段，其含有序列5’-ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC-3’(SEQ ID NO:122)、PGK1终止子区域、编码醇脱氢酶的基因、基因GAL1和GAL10的启动子区域、序列5’-AGTCGACCTTACAGCGCCTGGGACTCTACATAAACATGCAGCGAACATGCTTTCCAACGC-3’(SEQ ID NO:123)和相应于NDT80基因的405bp。该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的。

用于产生γ-ambrol的重组酵母细胞的工程改造。

为了使用醇脱氢酶、烯醛裂解多肽、拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)和不同的酯酶(EST)将柯巴醇降解为γ-ambrol，在菌株YST075中进行了基因组整合；每个整合盒由四个重叠片段组成：

1)一片段，其含有相应于BUD9基因上游段的至少300bp和至少60bp用于体内组装的重叠序列。该片段以菌株YST075的基因组DNA为模板通过PCR获得；

2)一片段，其含有ADH1基因的终止子区域、编码所测试的酯酶的基因之一以及GAL1和GAL10基因之间的基因间区域。该片段侧接有允许体内组装的序列。该片段是通过DNA合成(ATUM,Menlo Park,CA 94025)获得的；

3)一片段，其含有URA3酵母标记物，带有其自己的启动子和终止子，侧接有允许同源重组的序列。该片段是通过PCR获得的；和

4)一片段，其含有相应于BUD9基因下游段的至少300bp和至少60bp用于体内组装的重叠序列。该片段以来自菌株YST075的基因组DNA为模板通过PCR获得。

在能够产生萜烯化合物的条件下培养工程化酵母细胞和GC-MS分析方法。

通过在Westfall et al.,Proc Natl Acad Sci USA,2012,109:E111-118中描述的类似条件下，使用10％的十二烷或10％的肉豆蔻酸异丙酯(IPM)作为有机覆盖物培养细胞来评估工程化酵母细胞的萜烯和衍生物的产生。然后用两体积的MTBE提取培养物，并使用连接了5975C系列质量选择检测器(MSD)并配备了分流/不分流进样器和GC Injector 80进样系统(Agilent Technologies,CA)的Agilent 7890A GC系统分析有机相的组合物。GC进样口温度设置为260℃，1.0μl样品以不分流模式进样，并在HP-5GC色谱柱(30m x 0.25mmx 0.25μm；Agilent J&W)上进行分析，使用1.2mL/min恒定流速的氦气作为载气。烘箱的初始温度设置为100℃，并程序升温至300℃(10℃/min)。

c)实施例

实施例1：使用BVMO进行的迈诺醇氧基至γ-ambryl乙酸酯的体内转化

合成了编码来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-BVMO1(SEQ IDNO:2)、来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:6)和来自纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)的SCH46-BVMO1(SEQ ID NO:13)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ414表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-BVMO1、pJ414-SCH24-BVMO1和pJ414-SCH46-BVMO1。用这些表达质粒转化KRX大肠杆菌细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)。经转化的细胞生长并用于如上所述的全细胞生物转化测定，使用迈诺醇氧基作为底物。包括由用空质粒转化的细胞组成的阴性对照。在SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1或SCH46-BVMO1重组蛋白存在的情况下，观察到迈诺醇氧基转化为γ-ambryl乙酸酯(图2)。在阴性对照中未观察到转化。该实验表明，SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1或SCH46-BVMO1能催化以下转化：

这些结果表明，SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1和SCH46-BVMO1催化迈诺醇氧基的拜耳-维利格型氧化。

实施例2：使用BVMO进行的柯巴醛至化合物4的体内转化

合成了编码来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-BVMO1(SEQ IDNO:3)、来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:7)和来自纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)的SCH46-BVMO1(SEQ ID NO:14)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ414表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-BVMO1、pJ414-SCH24-BVMO1和pJ414-SCH46-BVMO1。用这些表达质粒转化KRX大肠杆菌细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)。细胞生长并用于如上所述的全细胞生物转化测定，使用顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的混合物作为底物。包括由用空质粒转化的细胞组成的阴性对照。在SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1或SCH46-BVMO1重组蛋白存在的情况下，观察到顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的转化。孵育42小时后生物转化产物的GC-MS分析(图3)显示形成了四种主要产物，两种立体异构体3a和3b以及两种立体异构体4a和4b。

生物转化的时间点测量显示化合物1a和1b作为中间产物的形成。图4比较了不同时间由SCH23-BVMO1将顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛转化的GC-MS分析；对于SCH24-BVMO1和SCH46-BVMO1观察到产品曲线的类似演变。这些化合物的连续形成表明反式-柯巴醛和顺式-柯巴醛在几个步骤中转化为化合物4a和4b。化合物1a和1b以及化合物4a和4b是甲酸酯。此类官能团可通过拜耳-维利格单加氧酶由醛化合物形成。因此，可以绘制以下涉及酶促和非酶促(化学反应)的反应路线来描述SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1或SCH46-BVMO1对反式-柯巴醛的转化。

在该路线中，重组酶在两种不同的醛上催化两种拜耳-维利格型氧化。首先，在第一次拜耳-维利格氧化中，反式-柯巴醛的α,β-不饱和醛基被重组酶氧化形成化合物1a。化合物1a的烯醇甲酸酯官能团在实验条件下不稳定，会被部分水解形成化合物2a。后一种化合物通过酮-烯醇互变异构迅速转化为化合物3(3a和3b)，因此在GC-MS分析中未检测到。化合物3(3a和3b)是催化第二次拜耳-维利格氧化形成化合物4(4a和4b)的相同酶的底物。

下面的反应路线描述了SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1或SCH46-BVMO1转化顺式-柯巴醛的类似反应。

这些结果表明，SCH23-BVMO1、SCH24-BVMO1和SCH46-BVMO1催化了半日花烷醛化合物的拜耳-维利格型氧化。

实施例3：使用BVMO和酯酶进行的迈诺醇氧基的体外转化。

对于该实验，使用了以下重组蛋白：来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-BVMO1(SEQ ID NO:2)、来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:6)、来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-EST(SEQ ID NO:20)和来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-EST(SEQ ID NO:24)。合成了编码SCH23-BVMO1(SEQ ID NO:3)和SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:7)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ414表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-BVMO1和pJ414-SCH24-BVMO1。合成了编码SCH23-EST(SEQ ID NO:21)和SCH24-EST(SEQ ID NO:25)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ431表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-EST、pJ414-SCH24-EST。

用这些表达质粒中的每一种转化KRX大肠杆菌细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)。经转化的细胞生长并如所述制备无细胞裂解物。用这些蛋白质级分中的任一种或用这些蛋白质级分中两种的组合进行体外酶促测定。体外测定条件如上所述，添加了160mg/L的迈诺醇氧基、60μM的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和500μM还原的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)。

使用含有重组SCH23-BVMO1和SCH24-BVMO1蛋白的粗级分，观察到迈诺醇氧基转化为γ-ambrol乙酸酯。当使用从用空质粒转化的大肠杆菌细胞中获得的对照裂解物时，未检测到转化(图5)。从这些实验中，可以得出以下酶促反应：

还使用含有重组酯酶的蛋白质级分和使用含有重组BVMO和重组酯酶的蛋白质级分的组合进行体外酶促测定。如上所述使用迈诺醇氧基作为底物进行这些测定。所形成的产物的GC-MS分析(图6和图7)显示了在BVMO酶(SCH23-BVMO1或SCH24-BVMO1)的存在下，迈诺醇氧基转化为γ-ambryl乙酸酯，并当测定中存在酯酶(SCH23-EST或SCH24-EST)时进一步将γ-ambryl乙酸酯转化为γ-ambrol。当在没有BVMO的情况下使用酯酶时，没有观察到底物转化(图6和图7)。

该实验表明，在BVMO和酯酶的存在下，迈诺醇氧基可以按照如下所示的反应路线转化为γ-ambrol：

实施例4：使用酯酶进行的化合物4a和4b至化合物5a和5b的体外转化。

合成了编码来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-EST(SEQ IDNO:21)、来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-EST(SEQ ID NO:25)和来自纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)的SCH46-EST(SEQ ID NO:32)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ414表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-EST1、pJ414-SCH24-EST1和pJ414-SCH46-EST1。用这些表达质粒转化KRX大肠杆菌细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)。经转化的细胞生长并如所述制备无细胞裂解物。按照上述条件对这些蛋白质级分进行体外酶促测定。

如图8所示，使用含有重组SCH23-EST1、SCH24-EST1和SCH25-EST1蛋白的粗级分，观察到两种立体异构体4a和4b向化合物5a和5b的转化。相比之下，当使用含有重组BVMO酶的裂解物时，未检测到转化(这些蛋白质因此用于本实验系列中的对照反应)。在这些条件下，SCH23-EST1和SCH25-EST1的酶活性高于SCH24-EST的酶活性。

从这些实验中，可以得出以下酶促反应：

实施例5：使用BVMO和酯酶进行的柯巴醛的体外转化。

对于该实验，使用了以下重组蛋白：来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-BVMO1(SEQ ID NO:2)、来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:6)、来自罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)的SCH25-BVMO1(SEQID NO:10)、来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-EST(SEQ ID NO:20)、来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)的SCH24-EST(SEQ ID NO:24)、来自罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)的SCH25-EST(SEQ ID NO:28)。

合成了编码SCH23-BVMO1(SEQ ID NO:3)、SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:7)和SCH25-BVMO1(SEQ ID NO:11)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ414表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-BVMO1、pJ414-SCH24-BVMO1和pJ414-SCH25-BVMO1。合成了编码SCH23-EST(SEQ ID NO:21)、SCH24-EST(SEQ ID NO:25)和SCH25-EST(SEQ ID NO:29)的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ431表达质粒(ATUM,Newark,California)中，提供了质粒pJ414-SCH23-EST、pJ414-SCH25-EST。

用这些表达质粒转化KRX大肠杆菌细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)。经转化的细胞生长并如所述制备无细胞裂解物。用含有重组BVMO酶或重组酯酶的蛋白质级分或通过组合含有重组BVMO和酯酶的蛋白质级分进行体外酶促测定。如上所述进行测定，添加了320mg/L的顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的混合物作为底物、60μM的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)和500μM还原的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)。

图9比较了在仅存在SCH23-BVMO1和与不同酯酶组合的情况下柯巴醛的转化产物。在SCH23-BVMO1的存在下，主要产物是甲酸酯化合物1a、1b和4a、4b。当在额外存在SCH23-EST或SCH25-EST的情况下进行测定时，转化的主要产物是化合物5a和5b，表明这两种酯酶可以有效地水解由BVMO酶产生的甲酸酯中间体。在额外存在SCH24-EST的情况下，观察到相同中间体(1a、1b和4a、4b)的水解，但是使用这种酶，SCH24-EST对中间体1a和1b的水解似乎比中间体4a和4b的水解更有效。

当SCH24-BVMO1与酯酶SCH23-EST或SCH24-EST结合时，观察到类似的顺式-和反式-柯巴醛的转化(图10)。在对照实验中，当柯巴醛仅与酯酶一起孵育时，未观察到转化。

从这些实验中，可以推导出以下酶途径。

实施例6：在表达BVMO和酯酶的工程化细菌细胞中进行的14,15-去二甲基-半日花烷化合物5a和5b以及生物合成中间体的体内产生。

在该实验中，如实验部分所述，使用质粒pJ401-CPAL-1(如上所述)转化大肠杆菌细胞以产生柯巴醛。当DP1205大肠杆菌细胞在实验部分描述的条件下转化和培养时，观察到反式-柯巴醛和顺式-柯巴醛的形成(图11，上部的色谱图)。检测到柯巴醛的两种双键异构体是由于(E)-α,β-不饱和醛相对容易异构化(Konning et al,Org.Lett.,2012,14(20),pp 5258-5261)。半日花-8(20)-烯-15-醇的额外检测是由于大肠杆菌内源性烯酸还原酶活性。

然后将细菌细胞用携带密码子优化的cDNA的第二表达质粒转化，该cDNA编码来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)(

20918^TM)(SEQ ID NO:7)或来自纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)的SCH46-BVMO1(SEQ ID NO:14)。这些质粒是通过将经优化的cDNA克隆到pJ423表达质粒(ATUM,Newark,California)中来制备的，分别提供了质粒pJ423-SCH23-BVMO和pJ423-SCH46-BVMO。培养用两种质粒转化的细胞，并使用实验部分中描述的条件分析萜烯化合物和萜烯衍生物的产生。在这些条件下，在培养液的溶剂提取物中检测到化合物1a和1b、3a和3b以及4a和4b(图11)。这些结果表明，使用这些酶的组合，可以在重组细胞中引入半日花烷二萜(例如柯巴醇)的生物合成和侧链中两个碳-碳键的连续酶促裂解。

类似地，细菌细胞用质粒pJ401-CPAL-1和带有编码BVMO的基因和编码酯酶的基因的第二质粒共转化，该第二质粒为：pJ423-SCH24-BVMO-SCH24-EST，其通过将由编码SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:7)的密码子优化的cDNA和编码SCH24-EST(SEQ ID NO:25)的密码子优化的cDNA组成的合成操纵子插入到pJ423表达质粒(ATUM,Newark,California)中制备，或pJ423-SCH46-BVMO-SCH46-EST，该质粒通过将由编码SCH46-BVMO(SEQ ID NO:14)的密码子优化的cDNA和编码SCH46-EST(SEQ ID NO:32)的密码子优化的cDNA组成的合成操纵子插入到pJ423表达质粒(ATUM,Newark,California)中制备。培养细胞并使用实验部分中描述的条件分析萜烯化合物和萜烯衍生物的产生。在这些条件下，检测到化合物5a和5b，并观察到途径中间体(化合物1a、1b、3a、3b、4a和4b)的量减少。

该实验系列表明，可以与BVMO和酯酶组合将以下生物合成途径引入到经转化以表达二萜生物合成酶的宿主细胞中。

实施例7：使用醇脱氢酶进行的化合物5a和5b至迈诺醇氧基的体内转化。

对于该实验，评估了以下用于化合物5a和5b至迈诺醇氧基的氧化的醇脱氢酶：

来自玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)的RrhSecADH(SEQ ID NO:146)，

来自玫瑰红红球菌的SCH80-00043(SEQ ID NO:149)，

来自玫瑰红红球菌的SCH80-04254(SEQ ID NO:152)，

来自玫瑰红红球菌的SCH80-06135(SEQ ID NO:155)，

来自玫瑰红红球菌的SCH80-06582(SEQ ID NO:158)，

(另见WO2005/026338)；上述ADH仅是非限制性例子，可以用其他已知的ADH代替。

合成了编码这些蛋白质中每一种的密码子优化的cDNA并将其克隆到载体pJ401中，提供了质粒pJ401-RrhSecADH、pJ401-SCH80-00043、pJ401-SCH80-04254、pJ401-SCH80-06135和pJ401-SCH80-06582(ATUM,Newark,California)。

用这些表达质粒转化KRX大肠杆菌细胞(Promega Corporation,Madison,WI,USA)。经转化的细胞生长并用于如上所述的全细胞生物转化测定，使用化合物5a和5b的混合物作为底物。在诱导重组蛋白表达五小时后，使用在水中含有50mg/mL吐温80和25mg/mL底物的乳液将底物添加至终浓度为0.55mg/mL。包括由用空质粒转化的细胞组成的阴性对照。仅在SCH80-06135和RrhSecADH重组蛋白存在的情况下观察到氧化反应(图12)，表明这些酶可以催化以下反应。

实施例8：在表达BVMO、酯酶和醇脱氢酶的工程化细菌细胞中进行的去四甲基-半日花烷化合物γ-ambrol和生物合成中间体的体内产生。

在该实验中，质粒pJ401-CPAL-1(如上所述)用于转化DP1205大肠杆菌细胞，从而产生如上一节所述的产生柯巴醛(顺式和反式异构体)的背景菌株。

然后将该菌株用质粒pJ423-SCH24-BVMO-SCH24-EST(如上所述)共转化，允许在相同细胞中进一步表达BVMO和酯酶。根据上一节中的观察，这种重组生物产生14,15-去二甲基-半日花烷化合物。

为了使侧链降解继续形成去四甲基-半日花烷衍生物，必须将化合物5a和5b的仲醇基团氧化成相应的酮。因此构建了包含编码BVMO、酯酶和合适的醇脱氢酶(在实施例7中鉴定)的核苷酸序列的质粒。对于醇脱氢酶，合成了编码来自红球菌(Rhodococcus)属的RrhSecADH的密码子优化的cDNA(登录号WP_043801412.1)(SEQ ID NO:147)，并设计了合成操纵子，结合RrhSecADH cDNA和编码SCH24-BVMO和SCH24-EST的cDNA。将操纵子克隆到pJ423表达质粒中，提供了pJ423-secADH-23BVMO-EST质粒。当用载体pJ401-CPAL-1和载体pJ423-secADH-23BVMO-EST共转化的DP1205大肠杆菌细胞在上述条件下培养时，在培养液的GC-MS分析中检测到了γ-ambrol(图13)。这些数据表明，当化合物5(5a和5b)在适当的ADH存在下被氧化为迈诺醇氧基时，BVMO可催化途径中提供γ-ambrol的以下步骤。

该实验系列表明可以在重组宿主细胞中引入以下生物合成途径。

实施例9：使用醇脱氢酶(ADHs)、拜耳-维利格单加氧酶(BVMOs)和来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)或浅白隐球菌(Cryptococcus albidus)的酯酶(EST)在酿酒酵母细胞中体内产生迈诺醇氧基。

为了产生迈诺醇氧基，编码GGPP合酶carG(来自三孢布拉氏霉菌(Blakesleatrispora)，NCBI登录号JQ289995.1)(SEQ ID NO:182)、柯巴基焦磷酸合酶SmCPS2(来自丹参(Salvia miltiorrhiza)，NCBI登录号ABV57835.1)(SEQ ID NO:185)、柯巴基焦磷酸磷酸酶TalVeTPP(来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)，NCBI登录号KUL89334.1)(SEQID NO:194)和要么醇脱氢酶SCH23-ADH1(SEQ ID NO:134)、拜耳-维利格单加氧酶SCH23-BVMO1(SEQ ID NOs:2)、酯酶SCH23-EST(SEQ ID NOs:20)和醇脱氢酶SCH23-ADH2(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))(SEQ ID NOs:137)要么醇脱氢酶SCH24-ADH1(SEQ IDNOs:140)、拜耳-维利格单加氧酶SCH24-BVMO1(SEQ ID NOs:6)、酯酶SCH24-EST1(SEQ IDNOs:24)和醇脱氢酶SCH24-ADH2(来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum))(SEQ ID NO:143)的基因如上述通用方法一节中所述在工程化酿酒酵母菌株YST075中表达。所有基因都针对它们在酿酒酵母中的表达进行了密码子优化(SCH23-ADH1，SEQ ID NO:135；SCH23-BVMO1，SEQ ID NO:4；SCH23-EST，SEQ ID NO:22；SCH23-ADH2，SEQ ID NO:138；SCH24-ADH1，SEQ ID NO:141；SCH24-BVMO1，SEQ ID NO:8；SCH24-EST，SEQ ID NO:26；SCH24-ADH2，SEQID NO:144；carG，SEQ ID NO:183；SmCPS2，SEQ ID NO:186；和TalVeTPP，SEQ ID NO:195)。

菌株YST120(带有SCH23-ADH1、SCH23-BVMO1、SCH23-EST和SCH23-ADH2)和YST121(带有SCH24-ADH1a、SCH24-BVMO1、SCH24-EST和SCH24-ADH2)也携带用于柯巴醇生物合成的质粒系统，在上述通用方法一节所述的条件下获得并培养。

在这些条件下，可在所有培养物中鉴定出柯巴醇。只有含有SCH23-ADH1或SCH24-ADH1的菌株才能将柯巴醇转化为柯巴醛(图14A)。此外，在表达醇脱氢酶的培养物中检测到法呢醛(图14B)。在所有培养物中都鉴定出橙花叔醇和法呢醇的积累(图14A)。

此外，在含有携带柯巴醇生物合成基因的质粒的YST120和YST121菌株的培养物中鉴定出迈诺醇氧基(图14C)。未鉴定出γ-ambryl乙酸酯和γ-ambrol。然而，迈诺醇氧基的存在表明BVMO、EST和ADH在工程化酵母细胞中功能性表达。我们假设所获得的迈诺醇氧基的量对于BVMOs催化转化为γ-ambryl乙酸酯是有限的。

实施例10：使用醇脱氢酶(ADHs)、拜耳-维利格单加氧酶(BVMOs)和来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)或浅白隐球菌(Cryptococcus albidus)的酯酶(ESTs)在酿酒酵母细胞中体内产生迈诺醇氧基。

为了产生迈诺醇氧基，编码GGPP合酶carG(来自三孢布拉氏霉菌(Blakesleatrispora)，NCBI登录号JQ289995.1)、柯巴基焦磷酸合酶SmCPS2(来自丹参(Salviamiltiorrhiza)，NCBI登录号ABV57835.1)、柯巴基焦磷酸磷酸酶TalVeTPP(来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)，NCBI登录号KUL89334.1)、醇脱氢酶SCH23-ADH1和要么拜耳-维利格单加氧酶SCH23-BVMO1和酯酶SCH23-EST(来自一种丝状酵母(Hyphozymaroseonigra))要么拜耳-维利格单加氧酶SCH24-BVMO1和酯酶SCH24-EST(来自浅白隐球菌(Cryptococcus albidus))的基因如上述通用方法一节中所述在工程化酿酒酵母菌株YST075中表达。

所获得的菌株命名为YST177(使用carG、SmCPS2、TalVeTPP、SCH23-ADH1、SCH23-BVMO1和SCH23-EST)和YST178(使用carG、SmCPS2、TalVeTPP、SCH23-ADH1、SCH24-BV1)，并且如上述通用方法一节所述进行培养。如上所述通过GC-MS分析培养物。

在提取后的培养物中鉴定出柯巴醇、柯巴醛、橙花叔醇、法呢醇和法呢醛。不含醇脱氢酶SCH23-ADH2或SCH24-ADH2的工程化细胞预计会积累中间体5a(或5b)并且不能产生迈诺醇氧基。令人感兴趣的是，已鉴定出迈诺醇氧基(图15)而未检测到分子5a(或5b)。这些结果表明，SCH23-ADH2和SCH24-ADH2可能有助于酵母细胞中迈诺醇氧基的产生，但在测试条件下对其产生不是必需的。我们假设酵母中的内源性醇脱氢酶活性是转化的原因。

实施例11：SCH94-3944，一种来自红平红球菌(Rhodococcus erytheropolis)的具有碳-碳键裂解活性的酶的表征。

在该实验中，使用质粒pJ401-CPOL-4(如上所述)转化DP1205大肠杆菌细胞，从而创建了产生柯巴醇的背景菌株。在试管测定中，所转化的菌株在培养基中产生浓度高至500mg/L的柯巴醇作为主要产物(图16)。

然后用带有来自红平红球菌(R.erytheropolis)的一种或多种大肠杆菌密码子优化的cDNA的第二质粒进一步转化该菌株。选择了两种cDNA：

-SCH94-3945，编码推定的醇脱氢酶(SEQ ID NO:161)，

-SCH94-3944，编码含有两个蛋白质家族结构域的157个氨基酸的蛋白质：“GXWXG”蛋白质结构域(pfam14231，http://pfam.xfam.org/)和未知功能域“DUF4334”(pfam14232，http://pfam.xfam.org/)(SEQ ID NO:34)。

使用pJ423作为背景来制备表达载体，并含有编码SCH94-3945(pJ423-SCH94-3945)或SCH94-3944(pJ423-SCH94-3944)的密码子优化的cDNA或由编码SCH94-3945和SCH94-3944(pJ423-SCH94-3944-3945)的优化的cDNA组成的双顺反子操纵子。

当用载体pJ401-CPOL-4和载体pJ423-SCH94-3944转化细胞时，与仅用pJ401-CPOL-4转化的细胞相比没有观察到差异，表明SCH94-3944重组蛋白不转化柯巴醇。当用载体pJ401-CPOL-4和载体pJ423-SCH94-3945转化细胞时，观察到顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的形成，表明SCH94-3945是一种能够将柯巴醇氧化为柯巴醛的醇脱氢酶(图16)。

当用载体pJ401-CPOL-4和载体pJ423-SCH94-3944-3945转化细胞时，观察到在试管测定中培养基中作为主要产物的迈诺醇氧基的形成，浓度高至1g/L。在此测定条件下，顺式-和反式-柯巴醛的转化几乎完成(图16)。

该实验表明SCH94-3944酶可以裂解柯巴醛的α-β碳-碳双键并催化顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛直接转化为14,15-去二甲基-半日花烷化合物迈诺醇氧基，如下面的路线所述。

实施例12：使用来自红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)的烯醛裂解多肽进行的顺式-和反式-法呢醛的体内转化。

在该实验中，使用质粒pJ401-FAL-1(如上所述)转化DP1205大肠杆菌细胞，从而创建了产生顺式-法呢醛和反式-法呢醛作为主要产物的背景菌株，在试管测定条件下在培养基中浓度高至500mg/L(图17)。

然后用带有编码来自红平红球菌(R.erytheropolis)的SCH94-3944的cDNA的质粒pJ423-SCH94-3944进一步转化该菌株。细胞产生的化合物的GC-MS分析表明形成了香叶基丙酮(图17)。因此，该实验表明，SCH94-3944酶可以裂解无环化合物法呢醛的α-β碳-碳双键，并催化顺式-法呢醛和反式-法呢醛直接转化为香叶基丙酮，如下面的路线所示。

在所应用的测试条件下，没有观察到法呢醇的转化。

实施例13.使用来自红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)的烯醛裂解多肽进行的柠檬醛的体内转化。

使用用质粒pJ423-SCH94-3944转化的大肠杆菌KRX(Promega)细胞进行化合物的生化转化，从而过表达SCH94-3944重组蛋白。使用2:1的底物:吐温80乳液将底物添加到细胞培养物中至终浓度为12g/L。如实验部分所述进行生物转化。使用用无插入物的pJ423表达质粒转化的细胞进行阴性对照。测试了几种底物：柠檬醛(由香叶醛和橙花醛组成的混合物)、香茅醛(2,3-二氢柠檬醛)和(E)-2-十二醛。在各种化合物存在下将细胞培养24小时，并如实验部分所述分析转化的产物。

在存在SCH94-3944重组蛋白的情况下，香叶醛和橙花醛都转化为甲基庚烯酮(图18)，表明该酶可以裂解无环单萜醛的α-β碳-碳双键，如下面的路线所示。

在存在SCH94-3944重组蛋白的情况下，使用下式的香茅醛：

未获得转化(图18)，表明催化需要不饱和的α,β-碳键。

使用(E)-2-十二醛，

观察到转化为癸醛。然而，与柠檬醛相比，转化率明显较低(图18)。该观察结果表明，3-甲基基团的缺失对通过SCH94-3944蛋白进行的酶促转化具有负面影响。

实施例14：使用含有来自其他生物体的蛋白质的GXWXG和DUF4334结构域的柯巴醛和法呢醛的体内转化。

SCH94-3944蛋白质序列含有GXWXG蛋白质家族结构域和DUF4334蛋白质家族结构域。在其他生物体中搜索具有相似结构域结构的蛋白质并进行测试以确定与SCH94-3944相关的酶活性是否也与这些同源酶相关。

在该实验中，使用质粒pJ401-CPAL-1(如上所述)转化DP1205大肠杆菌细胞，从而创建如上一节所述的产生柯巴醛(顺式和反式异构体)的背景菌株。在该菌株中，FPP合酶由基因组整合操纵子表达。由于萜烯基磷酸酶AspWeTPP除GGPP外还可以使FPP去磷酸化，并且因为AzeTolADH1还可以氧化法呢醇，所以当使用pJ401-CPAL-1转化DP1205细胞时，除柯巴醛外还检测到大量的反式法呢醛(图19)。

然后将该菌株与带有编码蛋白质的基因的第二质粒共转化，所述蛋白质包含GXWXG蛋白质家族结构域和DUF4334蛋白质家族结构域。选择了几种蛋白质：

-来自玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)(

12674^TM)的SCH80-05241(SEQ ID NO:38)，

-来自指状青霉(Penicillium digitatum)的Pdigit7033(SEQ ID NO:42)，

-来自意大利青霉(Penicillium italicum)的PitalDUF3443-1(SEQ ID NO:46)，

-来自温特曲霉(Aspergillus wentii)的AspWeDUF3443(SEQ ID NO:49)，

-来自霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288的RhoagDUF4334-2(SEQ IDNO:53)，

-来自霍氏红球菌菌株N128的RhoagDUF4334-3(SEQ ID NO:56)，

-来自霍氏红球菌NBRC 10125的RhoagDUF4334-4(SEQ ID NO:59)，

-来自钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)的CnecaDUF4334(SEQ ID NO:62)，

-来自谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)的Rins-DUF4334(SEQ ID NO:69)，

-来自格特隐球菌(Cryptococcus gattii)EJB2的CgatDUF4334(SEQ ID NO:72)，

-来自一种蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)kw1407的GclavDUF4334(SEQ IDNO:75)，

-来自弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)的TcurvaDUF4334(SEQ IDNO:81)，

和

-来自防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)的PprotDUF4334(SEQ ID NO:87)。

设计了编码这些蛋白质中每一种的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ423表达质粒(ATUM,Newark,California)中。DP1205大肠杆菌细胞用这些质粒之一和质粒pJ401-CPAL-1共转化。图20和图21显示了在含有GXWXG和DUF4334结构域的每种重组蛋白存在下顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛向迈诺醇氧基的转化。在测定条件下，除了GclavDUF4334酶(使用它，仅观察到少量转化)之外，每种重组酶的柯巴醛转化都几乎完成。图22和图23显示了顺式-法呢醛和反式-法呢醛向香叶基丙酮的转化。除了GclavDUF4334(使用它，仅转化了约50％的法呢醛)之外，每种酶也完成了法呢醛的转化。

该实验表明，在N端区域含有GXWXG蛋白质家族结构域和在C端区域含有DUF4334蛋白质家族结构域的蛋白质可以催化对柯巴醛和法呢醛的烯醛裂解活性，如下面的路线所示。

实施例15：具有单个氨基酸修饰的SCH94-3944变体。

含有GXWXG和DUF4334结构域并具有烯醛裂解活性的蛋白质的氨基酸序列的比对显示了沿着氨基酸序列并在所述两个蛋白质结构域内的保守氨基酸(图24)。蛋白质家族中的保守残基通常对酶活性很重要。

为了评估含有GXWXG和DUF4334结构域的酶中的保守残基对酶活性的参与，设计了SCH94-3944蛋白质的人工突变体，其中保守残基被单独替换为丙氨酸残基。以下残基发生了突变：W44、T51、H53、L59、W64、K67、S71、R106、Y115、D116、D122、M136、K139、F152、L154和R156。经修饰的蛋白质命名为SCH94-3944-W44A、SCH94-3944-T51A、SCH94-3944-H53A、SCH94-3944-L59A、SCH94-3944-W64A、SCH94-3944-K67A、SCH94-3944-S71A、SCH94-3944-R106A、SCH94-3944-Y115A、SCH94-3944-D116A、SCH94-3944-D122A、SCH94-3944-M136A、SCH94-3944-K139A、SCH94-3944-F152A、SCH94-3944-L154A和SCH94-3944-R156A。

设计了编码这些蛋白质中每一种的密码子优化的cDNA并将其克隆到pJ423表达质粒(ATUM,Newark,California)中。DP1205大肠杆菌细胞与这些质粒之一和质粒pJ401-CPAL-1共转化。在存在SCH94-3944-W44A、SCH94-3944-K67A、SCH94-3944-D122A、SCH94-3944-F152A或SCH94-3944-L154A重组蛋白的情况下，未观察到柯巴醛和法呢醛的转化。在存在SCH94-3944-T51A、SCH94-3944-H53A、SCH94-3944-L59A、SCH94-3944-W64A、SCH94-3944-S71、SCH94-3944-R106A、SCH94-3944-Y115A、SCH94-3944-D116A、SCH94-3944-M136A、SCH94-3944-K139A和SCH94-3944-R156A酶的情况下，观察到柯巴醛和法呢醛的转化，但效率低于野生型SCH94-3944蛋白。图25显示了每种单一氨基酸变体酶相对于野生型SCH94-3944的活性。

实施例16：通过在大肠杆菌细胞中结合烯醛裂解活性和BVMO活性进行的γ-ambryl乙酸酯的体内产生。

在该实验中，使用质粒pJ401-CPAL-1(如上所述)转化DP1205大肠杆菌细胞，从而创建了如上所述的产生柯巴醛(顺式和反式异构体)的背景菌株。

然后将该菌株用带有密码子优化的核苷酸序列的第二个质粒共转化，该核苷酸序列编码具有烯醛裂解活性的酶或具有BVMO活性的酶，或者用带有由密码子优化的编码烯醛裂解多肽的cDNA和密码子优化的编码BVMO的cDNA组成的操纵子的第二载体共转化：

-pJ423-AspWeBVMO，含有编码AspWeBVMO的优化的DNA序列(SEQ ID NO:17)；

-pJ423-SCH94-3944，含有编码SCH94-3944的优化的DNA序列(SEQ ID NO:35)；

-pJ423-SCH94-3944-SCH23-BVMO，含有编码SCH94-3944和SCH23-BVMO1的优化的DNA序列(SEQ ID NO:35和3)；

-pJ423-SCH94-3944-SCH24-BVMO，含有编码SCH94-3944和SCH23-BVMO1的优化的DNA序列(SEQ ID NO:35和7)；

-pJ423-SCH94-3944-SCH46-BVMO，含有编码SCH94-3944和SCH46-BVMO1的优化的DNA序列(SEQ ID NO:35和14)。

培养经转化的细胞，并如上所述通过GC-MS分析萜烯衍生物的形成。

当用载体pJ401-CPAL-1和空pJ423载体或pJ423-AspWeBVMO转化细胞时，仅观察到顺式-柯巴醛和反式-柯巴醛的形成(图26)。

当用载体pJ401-CPAL-1和pJ423-SCH94-3944转化细胞时，观察到迈诺醇氧基的形成和柯巴醛的完全转化(图26)。当用载体pJ401-CPAL-1和pJ423载体转化细胞时，允许共表达烯醛裂解多肽和BVMO，除迈诺醇氧基之外，还观察到γ-ambryl乙酸酯的形成。根据BVMO酶，观察到迈诺醇氧基和γ-ambryl乙酸酯的比率的变化。

该实验表明可以在宿主细胞中引入以下途径以产生γ-ambryl乙酸酯。

实施例17：使用来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-ADH1和不同烯醛裂解多肽在酿酒酵母细胞中迈诺醇氧基的体内产生。

为了产生迈诺醇氧基，编码GGPP合酶carG(来自三孢布拉氏霉菌(Blakesleatrispora)，NCBI登录号JQ289995.1)、柯巴基焦磷酸合酶SmCPS2(来自丹参(Salviamiltiorrhiza)，NCBI登录号ABV57835.1)、柯巴基焦磷酸磷酸酶TalVeTPP(来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)，NCBI登录号KUL89334.1)、醇脱氢酶SCH23-ADH1(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))和所测试的烯醛裂解多肽中一种的基因如上述通用方法一节中所述在工程化酿酒酵母菌株YST075中表达。

评估了五种烯醛裂解多肽：

-AspWeDUF4334(来自温特曲霉(Aspergillus wentii)；GenBank登录号OJJ34591.1)(SEQ ID NO:49)。

-CnecaDUF4334(来自钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)；GenBank登录号WP_049800708.1)(SEQ ID NO:62)。

-Pdigit7033(来自指状青霉(Penicillium digitatum))(SEQ ID NO:42)。

-SCH94-3944(来自红平红球菌(Rhodococcus erytheropolis))(SEQ ID NO:34)。

-SCH80-05241(来自玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous))。

所有基因都针对它们在酿酒酵母中的表达进行了密码子优化(AspWeDUF4334，SEQID NO:51；CnecaDUF4334，SEQ ID NO:64；Pdigit7033，SEQ ID NO:44；SCH94-03944，SEQ IDNO:36；和SCH80-05241 SEQ ID NO:40)。

所构建的菌株命名为YST184(使用AspWeDUF4334)、YST185(使用CnecaDUF4334)、YST186(使用Pdigit7033)、YST187(使用SCH94-03944)和YST188(使用SCH80-05241)。这些菌株按照上述通用方法一节所述进行培养；使用GC-MS分析鉴定了迈诺醇氧基和其他化合物的产生。

在测试条件下，在表达烯醛裂解多肽的所有培养物中都鉴定出柯巴醛、橙花叔醇、法呢醛、香叶基丙酮和迈诺醇氧基(图27)。正如预期的那样，所有测试的烯醛裂解多肽都能够使用法呢醛或柯巴醛作为底物，分别产生香叶基丙酮和迈诺醇氧基。在YST184、YST185、YST186、YST187和YST188的培养物中，迈诺醇氧基分别占所鉴定出萜烯总量的37％、1％、54％、22％和52％(图28A)。

令人感兴趣的是，在来自含有醇脱氢酶和不同烯醛裂解多肽的菌株的培养物中鉴定出的萜烯总量为对照培养物的2至4倍高(图28B)。

实施例18：使用来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-ADH1、来自温特曲霉(Aspergillus wentii)的AspWeDUF4334和不同拜耳-维利格单加氧酶(BVMOs)在酿酒酵母细胞中进行的γ-ambryl乙酸酯的体内产生。

为了产生γ-ambryl乙酸酯，编码GGPP合酶carG(来自三孢布拉氏霉菌(Blakesleatrispora)，NCBI登录号JQ289995.1)、柯巴基焦磷酸合酶SmCPS2(来自丹参(Salviamiltiorrhiza)，NCBI登录号ABV57835.1)、柯巴基焦磷酸磷酸酶TalVeTPP(来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)，NCBI登录号KUL89334.1)、醇脱氢酶SCH23-ADH1(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))、烯醛裂解多肽AspWeDUF4334(来自温特曲霉(Aspergillus wentii)，GenBank登录号OJJ34591.1)和测试的拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)之一的基因如上述通用方法一节中所述在工程化酿酒酵母菌株YST075中表达。

评估了三种BVMO：

-SCH23-BVMO1(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))(SEQ ID NO:2)。

-SCH24-BVMO1(来自巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum))(SEQ ID NO:6)。

-AspWeBVMO(来自温特曲霉(Aspergillus wentii)；GenBank登录号OJJ34587.1)(SEQ ID NO:16)。

所有基因都针对它们在酿酒酵母中的表达进行了密码子优化(SCH23-BVMO1，SEQID NO:4；SCH24-BVMO1，SEQ ID NO:8；和AspWeBVMO，SEQ ID NO:18)。

所获得的菌株命名为YST190(使用SCH23-BVMO1)、YST191(使用SCH24-BVMO1)和YST192(使用AspWeBVMO)。这些菌株按照上述通用方法一节所述进行培养；使用GC-MS分析鉴定了迈诺醇氧基和其他化合物的产生。

在测试条件下，在所有培养物中都鉴定出柯巴醇、柯巴醛、橙花叔醇、法呢醇、香叶基丙酮、迈诺醇氧基和γ-ambryl乙酸酯(图29)。令人感兴趣的是，与之前的实验不同，柯巴醇向柯巴醛的转化并不完全。此外，与不携带BVMO的菌株相比，所产生的萜烯总量较低(图30A)。在YST190、YST191和YST192的培养物中，γ-ambryl乙酸酯分别占所鉴定出萜烯总量的37％、27％和20％(图30B)。

实施例19：使用半日花烯二醇生物合成途径和碳-碳结合的烯醛裂解多肽进行的香紫苏醇氧化物的体内产生。

在该实验中，使用质粒pJ401-LOH-2(如上所述)转化DP1205大肠杆菌细胞，从而创建了如上所述的产生半日花烯二醇((13E)-13-半日花烯-8,15-二醇)的背景菌株。

然后将该菌株用带有编码醇脱氢酶和具有烯醛裂解多肽烯醛裂解多肽活性的酶的密码子优化的核苷酸序列的第二质粒共转化：

-pJ423-AzetolADH1，含有编码醇脱氢酶AzetolADH1的优化的DNA序列；和

-pJ423-SCH94-3944-3945，含有编码醇脱氢酶SCH94-3944和烯醛裂解多肽SCH94-3945的优化的DNA序列。

当用载体pJ401-LOH-2和空pJ423载体转化细胞时，观察到半日花烯二醇的形成(图31)。

当用载体pJ401-LOH-2和pJ423-AzetolADH1转化细胞以共表达醇脱氢酶时，观察到两种新产物的形成(图31)。NMR分析证实这两种化合物是(+)-8,13-环氧-半日花-15-醛的两种异构体(化合物7a和7b)，如以下路线所示。这两种化合物是由半日花烯二醇氧化产生的8-羟基-半日花-13-烯-15-醛(6)的不稳定性引起的。化合物6脱水并重排为化合物7a和7b的假定机制如以下路线所示。

当用载体pJ401-LOH-2和pJ423-SCH94-3944-3945转化细胞以共表达醇脱氢酶和烯醛裂解多肽时，除化合物7a和7b外，还观察到香紫苏醇氧化物的形成。在烯醛裂解多肽存在的情况下，香紫苏醇氧化物的形成可以通过以下路线中所示的转化步骤来解释。SCH94-3944烯醛裂解多肽催化化合物6的C-C双键裂解为8-羟基-14,15-去二甲基半日花-13-酮(8)。化合物8不稳定，在温和条件下会转化为香紫苏醇氧化物(Barrero et al.,Tetrahedron 49,(45)1993,10405-10412；Hua et al.,Tetrahedron 67(6)2011,1142-1144)。与化合物7a和7b相比，香紫苏醇氧化物最终量较小是由于SCH94-3944的酶活性与化合物6的化学脱水之间的竞争。

实施例20.使用来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)的SCH23-ADH1、来自温特曲霉(Aspergillus wentii)的AspWeDUF4334、来自一种丝状酵母(Hyphozymaroseonigra)的SCH23-BVMO1和不同酯酶在酿酒酵母细胞中进行的γ-ambrol的体内产生。

为了产生γ-ambrol，编码双功能酶PvCPS(来自细疣篮状菌(Talaromycesverruculosus))、柯巴基焦磷酸磷酸酶TalVeTPP(来自细疣篮状菌(Talaromycesverruculosus))、醇脱氢酶SCH23-ADH1(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))、烯醛裂解AspWeDUF4334(来自温特曲霉(Aspergillus wentii))、BVMO SCH23-BVMO1(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))和测试的酯酶(EST)之一的基因如上述通用方法一节中所述在工程化酿酒酵母菌株YST075中表达。

评估了两种酯酶：

-SCH23-EST1(来自一种丝状酵母(Hyphozyma roseonigra))。

-SCH24-EST1(来自浅白隐球菌(Cryptococcus albidus))。

所有基因都针对它们在酿酒酵母中的表达进行了密码子优化(SCH23-EST，SEQ IDNO:22；SCH24-EST，SEQ ID NO:26)。

所获得的菌株命名为YST257(使用SCH23-EST)和YST258(使用SCH24-EST)。这些菌株按照通用方法中的描述进行培养。在测试条件下，使用GC-MS/FID分析在所有培养物中鉴定出橙花叔醇、柯巴醇、柯巴醛、迈诺醇氧基、γ-ambryl乙酸酯和γ-ambrol(图33)。在YST257和YST258的培养物中，γ-ambrol分别占已鉴定出萜烯总量的16％和29％。

实施例21：通过结合烯醛裂解活性、BVMO活性和酯酶活性在大肠杆菌细胞中进行的γ-ambrol的体内产生。

第一个载体设计为含有两个操纵子，每个操纵子都在T5启动子的控制下。第一个操纵子含有两个cDNA，它们编码：

-来自温特曲霉(Aspergillus wentii)的AspWeTPP磷酸酶(SEQ ID NO:170)(GenBank登录号OJJ34585.1)；和

-PvCPS，一种来自细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)的柯巴基二磷酸合酶(SED ID NO:173)(GenBank登录号BBF88128.1)。PvCPS催化IPP和DMAPP产生柯巴基PP。

编码AspWeTPP和PvCPS的cDNA经密码子优化(SEQ ID NO:171和174)，并且操纵子设计为含有两个cDNA和位于每个cDNA上游的RBS序列(AAGGAGGTAAAAAA)(SEQ ID NO:196)。

第二个操纵子含有两个cDNA，它们编码：

-SCH94-3944，一种来自红球菌(Rhodococcus)的烯醛裂解多肽(SEQ ID NO:34)，

-SCH94-3945，一种来自红球菌的醇脱氢酶(SEQ ID NO:161)。

编码SCH94-3945和SCH94-3944的cDNA经密码子优化(SEQ ID NO:162和35)，并且操纵子设计为含有两个cDNA和位于每个cDNA上游的RBS序列(AAGGAGGTAAAAAA)(SEQ IDNO:196)。

将两个操纵子组装在单个载体中，提供pJ401-Mnoxy，允许表达从FPP到迈诺醇氧基的生物合成途径的所有基因。

细菌细胞(DP1205)用质粒pJ401-Manoxy和如下第二质粒共转化：

-pJ423-SCH24-BVMO，其带有仅编码BVMO SCH24-BVMO(SEQ ID NO:7)的基因，

-pJ423-SCH24-BVMO-SCH24-EST，含有由编码BVMO SCH24-BVMO1(SEQ ID NO:7)的cDNA和编码酯酶SCH24-EST(SEQ ID NO:25)的cDNA组成的操纵子，

-或对照质粒pJ423。

在实验一节所述的条件下培养所转化的细胞并如上所述分析萜烯的产生。

当用载体pJ401-Mnoxy和空pJ423载体转化细胞时，仅观察到迈诺醇氧基的形成(图34-A)。

当用载体pJ401-Mnoxy和pJ423-SCH24-BVMO转化细胞时，观察到γ-ambryl乙酸酯的形成(图34-B)。

当用载体pJ401-Mnoxy和pJ423-SCH24-BVMO-SCH24-EST转化细胞时，观察到γ-ambrol的形成(图34-B)。

该实验表明可以在宿主细胞中引入以下途径以产生γ-ambrol。

在此交叉引用的任何文献的内容通过引用并入。

表：序列概述

SEQ ID NO 1:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_wt

ATGCCTTCCGCAATCACCCCGCCGGTTGATCATCGCAGTCTTCCAGGTCTTTTCAAGCCACAGAGGAAGCTCAAAGTGATATGTGTCGGAGCCGGCGCCTCGGGCTTACTTCTTTCCTACAAGATACAACGACACTTCGAGGATTTCGAGCTCCAAGTCTTTGAGAAGAATCCCGAGGTATCAGGAACCTGGTACGAGAACAGGTATCCCGGCTGCGCTTGTGATGTTCCCTCGCATAATTATACATGGTCTTTTGAGCCCAAAACCGACTGGTCCGCCAACTATGCATCATCGAAGGAGATTTTCAAATATTTCAAGGACTTCACGAGGAAATATGGTCTAAGCAAGTACATCAAGCTGGAACATGAGGTCGTGGGAGCCACGTGGATGGAGGCGGAGGCACAGTGGAAAGTTGACGTCAAGGACCTTCGAAGTGGAAACACGCAGAGCTCGTTTGCGCATATACTGGTCAATGCAGGAGGCATTTTGAATGCTTGGCGATACCCGCCAATTCCAGGAATCAAGGATTTCAAGGGTGATCTTGTTCACTCCGCAGCTTGGCCAGAACATCTTGATCTTAATGGGAAGGTTGTCGGTCTCATCGGAAATGGATCCTCCGGCATTCAGATCCTTCCGGCCATCAAGAAGGATGTAAAGCAACTCGTTACATTCATTCGGGAAGCAACTTGGGTGGCGCCTCCTTTAGGTCAAGCCTATCGTGCGTTCTCGACTGATGAACAGGCTCAGTTTGCGCAAGATCCGCGCCATCACCTGGAGACACGGCGTGCAACTGAGGCTACCATGAATCAATCATTTGGTATCTTCCATTCGGGATCCGAGGAGCAGAAAGGGGTTCGCCAATATATGCAGAATATCATGGAAACGAAGCTCAACAACAAACAGCTCGAGAGTGTGCTGATTCCTGAGTGGTCGGTCGGTTGTCGGCGTCTTACACCAGGTACTAATTATCTAGAATCCCTGTCAGACGACAATGTCAAGGTCGTCTATGGTGAGATCACACAAATTACCGAATCGGGTGTCATCTGCGATGATGGTAAAGGCGAATATCCCGTTGAAGTTCTTATTTGCGCCACCGGCTTCGACACCACCTTCAAACCACGATTCCCACTCATCGGTACAACCCAAGAGAAACTCAGTGATGTTTGGAAAGATGATCCGAGGGGCTACTTTGGGATCGCAACCAACAACTATCCCAACTACTTCTTCACTCTTGGACCAAATTGTCCAATCGGTAATGGCCCCGTGCTGTGTGCCATTGAAGCTGAGGTTGAATATATAATCAACATGCTCTCGAAGTTTCAGAAGGAGAACATTCGTTCTTTTGATATCAAGGCAGATGCTGTCGACGCCTTCAACGACTGGAAGGATGACTTCATGAAAGATACCATCTGGGCAGAACAATGCCGGTCATGGTACAAGGCAGGATCCGCCACCGGTAAAATCCTTGCATTGTGGCCAGGCTCGACTTTGCACTACTTGGAAGCACTCAAGTCGCCGCGGTGGGAGGACTGGGACTTCAAGTATCAGCCTGGTAGAAATCGTTTCCACTACTTTGGAAATGGTCATAGCTGTGCTGAGCAGGATGGCGATCTGAGCTGGTACATTCGCAACGAGGATGATTCTTATATTGATCCGGTACTCAAGCCGAAGCCGAAGGCAGCAGTTGAAAGCGAGGCACATATCGCCCTGCCAGGAATCGGTCCGATGTTGATGGAAGACCCGCGTGATGTTGCTGTAGAGGCCTAG

SEQ ID NO 2:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_wt

MPSAITPPVDHRSLPGLFKPQRKLKVICVGAGASGLLLSYKIQRHFEDFELQVFEKNPEVSGTWYENRYPGCACDVPSHNYTWSFEPKTDWSANYASSKEIFKYFKDFTRKYGLSKYIKLEHEVVGATWMEAEAQWKVDVKDLRSGNTQSSFAHILVNAGGILNAWRYPPIPGIKDFKGDLVHSAAWPEHLDLNGKVVGLIGNGSSGIQILPAIKKDVKQLVTFIREATWVAPPLGQAYRAFSTDEQAQFAQDPRHHLETRRATEATMNQSFGIFHSGSEEQKGVRQYMQNIMETKLNNKQLESVLIPEWSVGCRRLTPGTNYLESLSDDNVKVVYGEITQITESGVICDDGKGEYPVEVLICATGFDTTFKPRFPLIGTTQEKLSDVWKDDPRGYFGIATNNYPNYFFTLGPNCPIGNGPVLCAIEAEVEYIINMLSKFQKENIRSFDIKADAVDAFNDWKDDFMKDTIWAEQCRSWYKAGSATGKILALWPGSTLHYLEALKSPRWEDWDFKYQPGRNRFHYFGNGHSCAEQDGDLSWYIRNEDDSYIDPVLKPKPKAAVESEAHIALPGIGPMLMEDPRDVAVEA

SEQ ID NO 3:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

ATGCCGTCTGCCATTACTCCACCTGTTGATCACCGTTCCCTGCCGGGCCTGTTTAAACCGCAGCGCAAGCTGAAAGTGATTTGCGTGGGCGCGGGTGCGAGCGGCCTGCTGTTGAGCTACAAGATTCAGCGCCACTTCGAAGATTTCGAGCTGCAAGTGTTTGAGAAGAACCCTGAAGTTAGCGGTACGTGGTACGAGAACCGTTATCCGGGTTGTGCGTGCGATGTGCCGAGCCATAACTACACCTGGAGCTTTGAGCCGAAAACGGATTGGTCCGCCAATTATGCGAGCAGCAAAGAGATTTTCAAATATTTCAAAGATTTTACGCGTAAATATGGTCTGTCTAAATACATTAAATTGGAACATGAAGTGGTCGGCGCGACCTGGATGGAAGCCGAGGCGCAGTGGAAAGTTGACGTTAAAGATCTGCGCAGCGGTAACACCCAGTCCAGCTTCGCGCATATCCTGGTTAACGCCGGCGGCATTCTGAATGCCTGGCGTTATCCGCCGATTCCGGGCATCAAAGATTTCAAGGGTGACCTGGTGCATAGCGCAGCATGGCCGGAGCATTTGGACCTGAATGGCAAAGTCGTTGGTCTGATCGGCAACGGTAGCAGCGGTATCCAAATCCTGCCGGCAATTAAGAAAGACGTGAAGCAACTGGTGACGTTTATCCGTGAAGCCACCTGGGTCGCACCGCCGCTGGGTCAAGCGTACCGTGCGTTTTCCACCGACGAGCAAGCACAGTTTGCGCAGGACCCGCGCCACCACCTGGAAACCCGTCGTGCGACCGAAGCCACCATGAATCAGAGCTTTGGTATTTTCCATAGCGGCAGCGAAGAACAGAAAGGTGTCCGCCAGTACATGCAAAACATTATGGAAACCAAGCTGAATAATAAGCAACTGGAGAGCGTCCTGATTCCGGAGTGGAGCGTCGGCTGTCGTCGTCTGACCCCGGGCACGAACTACCTGGAAAGCCTGAGCGACGACAATGTCAAAGTTGTGTACGGTGAGATTACCCAAATCACCGAGAGCGGTGTCATCTGCGATGACGGCAAGGGTGAGTATCCGGTTGAAGTCCTGATCTGCGCCACCGGTTTTGATACGACCTTTAAACCGCGCTTCCCGCTGATCGGTACGACCCAGGAAAAGCTGAGCGACGTGTGGAAAGATGATCCGCGCGGTTACTTCGGCATCGCGACGAATAATTATCCGAACTATTTCTTCACGCTGGGTCCGAACTGCCCGATCGGTAATGGCCCGGTCCTGTGTGCGATCGAAGCCGAAGTTGAGTACATCATCAACATGCTGAGCAAGTTTCAGAAAGAAAATATTCGCTCCTTCGACATTAAAGCCGACGCGGTGGACGCGTTTAATGATTGGAAAGACGATTTCATGAAAGATACCATCTGGGCAGAACAGTGCCGTAGCTGGTACAAGGCCGGCAGCGCGACCGGCAAGATTCTGGCACTGTGGCCGGGCAGCACGCTGCACTACCTGGAAGCGCTGAAAAGCCCGCGTTGGGAAGATTGGGACTTCAAGTATCAACCGGGCCGTAACCGTTTCCACTACTTTGGCAACGGTCACAGCTGTGCCGAGCAAGATGGCGACCTGTCCTGGTACATCCGTAATGAAGATGACAGCTACATTGACCCGGTTCTGAAACCGAAGCCGAAAGCCGCGGTGGAGAGCGAGGCACACATCGCACTGCCGGGTATTGGCCCGATGCTGATGGAAGATCCGCGTGATGTCGCGGTTGAGGCGTAA

SEQ ID NO 4:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_酵母，经优化的

ATGCCATCTGCTATCACTCCACCAGTTGACCACAGATCTTTGCCAGGTTTGTTCAAGCCACAAAGAAAGTTGAAGGTTATCTGTGTTGGTGCTGGTGCTTCTGGTTTGTTGTTGTCTTACAAGATCCAAAGACACTTCGAAGACTTCGAATTGCAAGTTTTCGAAAAGAACCCAGAAGTTTCTGGTACTTGGTACGAAAACAGATACCCAGGTTGTGCTTGTGACGTTCCATCTCACAACTACACTTGGTCTTTCGAACCAAAGACTGACTGGTCTGCTAACTACGCTTCTTCTAAGGAAATCTTCAAGTACTTCAAGGACTTCACTAGAAAGTACGGTTTGTCTAAGTACATCAAGTTGGAACACGAAGTTGTTGGTGCTACTTGGATGGAAGCTGAAGCTCAATGGAAGGTTGACGTTAAGGACTTGAGATCTGGTAACACTCAATCTTCTTTCGCTCACATCTTGGTTAACGCTGGTGGTATCTTGAACGCTTGGAGATACCCACCAATCCCAGGTATCAAGGACTTCAAGGGTGACTTGGTTCACTCTGCTGCTTGGCCAGAACACTTGGACTTGAACGGTAAGGTTGTTGGTTTGATCGGTAACGGTTCTTCTGGTATCCAAATCTTGCCAGCTATCAAGAAGGACGTTAAGCAATTGGTTACTTTCATCAGAGAAGCTACTTGGGTTGCTCCACCATTGGGTCAAGCTTACAGAGCTTTCTCTACTGACGAACAAGCTCAATTCGCTCAAGACCCAAGACACCACTTGGAAACTAGAAGAGCTACTGAAGCTACTATGAACCAATCTTTCGGTATCTTCCACTCTGGTTCTGAAGAACAAAAGGGTGTTAGACAATACATGCAAAACATCATGGAAACTAAGTTGAACAACAAGCAATTGGAATCTGTTTTGATCCCAGAATGGTCTGTTGGTTGTAGAAGATTGACTCCAGGTACTAACTACTTGGAATCTTTGTCTGACGACAACGTTAAGGTTGTTTACGGTGAAATCACTCAAATCACTGAATCTGGTGTTATCTGTGACGACGGTAAGGGTGAATACCCAGTTGAAGTTTTGATCTGTGCTACTGGTTTCGACACTACTTTCAAGCCAAGATTCCCATTGATCGGTACTACTCAAGAAAAGTTGTCTGACGTTTGGAAGGACGACCCAAGAGGTTACTTCGGTATCGCTACTAACAACTACCCAAACTACTTCTTCACTTTGGGTCCAAACTGTCCAATCGGTAACGGTCCAGTTTTGTGTGCTATCGAAGCTGAAGTTGAATACATCATCAACATGTTGTCTAAGTTCCAAAAGGAAAACATCAGATCTTTCGACATCAAGGCTGACGCTGTTGACGCTTTCAACGACTGGAAGGACGACTTCATGAAGGACACTATCTGGGCTGAACAATGTAGATCTTGGTACAAGGCTGGTTCTGCTACTGGTAAGATCTTGGCTTTGTGGCCAGGTTCTACTTTGCACTACTTGGAAGCTTTGAAGTCTCCAAGATGGGAAGACTGGGACTTCAAGTACCAACCAGGTAGAAACAGATTCCACTACTTCGGTAACGGTCACTCTTGTGCTGAACAAGACGGTGACTTGTCTTGGTACATCAGAAACGAAGACGACTCTTACATCGACCCAGTTTTGAAGCCAAAGCCAAAGGCTGCTGTTGAATCTGAAGCTCACATCGCTTTGCCAGGTATCGGTCCAATGTTGATGGAAGACCCAAGAGACGTTGCTGTTGAAGCTTAA

SEQ ID NO 5:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_wt

ATGACTATCGATTTGCAGCAGCCCGACGCCGTGCCATTCACCTCTTCGACTTTTGTCGTGCCGGATCCATCGAACCTGGCCTCTCAGGCACAGAATTCACAGCTCCAATCTGCTCAAGAAGGAGCAGAGTACCCTGTGAACGCACATGGGGTTCGAGGAGATGGAACGATTCATGAACGACCGATCAACGATCGCAGGAAGATGCGCGTCATCTGCGTCGGTGCAGGCATCTCAGGTCTCTATATGGCCATCAAGCTCCCTCGAAGTACGGAAAATGTAGAGCTCAAGATCTACGAGAAGAATCACGATCTCGGTGGGACCTGGCTGGAGAATAGGTATCCAGGATGCGCTTGTGATGTACCAGCCCATGCCTACGCATACAGCTTCGAGAACAACCCCGAATTTCCTAGATTCTTTTCGAGCTCGGAAGACATCCACAAGTACTTGCTTCGCGTGGCTGATAAATATGATTGCAAGAAATACATCGCATTCAACACCAAAGTAGTCGAGGCCATTTGGGACGAAGAACAGGGCATCTATAACGTCAAGATTGAACGCTCGGATGGCACAGTATTCCAGGACACGTGCGAAGTTCTATTGAACGCTTCTGGTATCCTTAACGCCTGGAGGTACCCTGGGATTCCTGGAATTAAGGACTACAAGGGCACGTTAATGCACTCGGCTACCTGGGACCGATCCGTGTCCCTGAAAGGCAAAAAGGTTGCCCTCATCGGATCAGGATCATCAGGCATTCAGATCTTGCCCAACATCCTTGACGATTGCAAAGAGGTCGTGACATACATCATTGATCCAGCCTGGATTGCCCCTGCGAATCTTGTCACGGCTGGAGTCTCGGACGACGGTGAAGAGCCTAAGGAGCCGACGCCTGAAGAATTGGCGTCGAGTAGTGACTTCGCCTACTCGCAAGAGCAAATCAATGGCTTCAAGAAGGACCCTAAGTCACTGATGGATCATCGAGCAACGCTCGAAAGGACGATGAATCAGTCTTTCCCCATCTTACTCAGAGGCTCACCGTCCAACCTTTATGCCGCTTCTCTCTTTGAAGACCTGATGAGGAAACGCCTTGCCAAGAAGCCTGAGGTAGCGGATGCCATCATCCCCGAATGGTCAATCGGTTGCCGACGTCTCACTCCTGGACCACACTATCTTGAGGCCTTGTGCAATCCCAAGGTCAAGATCTTGACCCAAGCTATCAAGTCCTTCTCCGATAAGGGAATGTACACTGCCGATGGCGAACACGAAGACTTTGACGTGGTGATATGCGCGACTGGATTCGACGTATCGTTCCGACCCCGATTCAAATTTATCGGCAAGGACGGGTATGAGGTGCCCGAGAACTTTGGTCAGACTCCCAAAGGTTACCTCGCTCTCGCTTACGCCGGTTTCCCTAATTCGTTCATCTTCATGGGGCCGAACGGACCTATCGCCAACGGATCTGTCGTGGTCTCCCTGGAGAAACAAGGCGACTACTTCATCAAGGCGATCAACAAGATCCAAAGGCAGAATATAAAAGGCATGACTGTCAGATTCGATGCGGTCGATGATTTCACCAACCACGTAGACAAATACATGGATAGGACCGTGCTCACCGATGACTGCATCAGCTGGTACAAGAACGGGAAACGAGACGGACGAGTCAGTGCCGTCTGGCCTGGGAGCGCACTTCATTATATGGAGGCCATCGCCGACCCTAGATGGGAGGATTACACCTACACTTATCGCGAACCCGGTCATTCTTTTTCGTTCTTGGGAGATGGGACGTCCTGGGTCGAACACACCGGAGGAGACACGGCTTGGTACCTGAAAGAGACCCTCTAA

SEQ ID NO 6:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_wt

MTIDLQQPDAVPFTSSTFVVPDPSNLASQAQNSQLQSAQEGAEYPVNAHGVRGDGTIHERPINDRRKMRVICVGAGISGLYMAIKLPRSTENVELKIYEKNHDLGGTWLENRYPGCACDVPAHAYAYSFENNPEFPRFFSSSEDIHKYLLRVADKYDCKKYIAFNTKVVEAIWDEEQGIYNVKIERSDGTVFQDTCEVLLNASGILNAWRYPGIPGIKDYKGTLMHSATWDRSVSLKGKKVALIGSGSSGIQILPNILDDCKEVVTYIIDPAWIAPANLVTAGVSDDGEEPKEPTPEELASSSDFAYSQEQINGFKKDPKSLMDHRATLERTMNQSFPILLRGSPSNLYAASLFEDLMRKRLAKKPEVADAIIPEWSIGCRRLTPGPHYLEALCNPKVKILTQAIKSFSDKGMYTADGEHEDFDVVICATGFDVSFRPRFKFIGKDGYEVPENFGQTPKGYLALAYAGFPNSFIFMGPNGPIANGSVVVSLEKQGDYFIKAINKIQRQNIKGMTVRFDAVDDFTNHVDKYMDRTVLTDDCISWYKNGKRDGRVSAVWPGSALHYMEAIADPRWEDYTYTYREPGHSFSFLGDGTSWVEHTGGDTAWYLKETL

SEQ ID NO 7:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

ATGACCATCGATTTGCAACAGCCAGACGCAGTCCCGTTTACGAGCAGCACTTTCGTCGTACCGGACCCGTCCAACCTGGCATCCCAGGCTCAAAACAGCCAACTGCAGAGCGCGCAAGAGGGCGCAGAGTACCCGGTGAATGCACACGGTGTCCGCGGTGACGGCACCATTCACGAGCGTCCGATCAATGACCGTCGTAAAATGCGCGTCATCTGCGTTGGTGCGGGTATTAGCGGCCTGTATATGGCGATCAAACTGCCGCGCAGCACCGAGAATGTTGAACTGAAGATCTACGAGAAAAACCATGACCTCGGCGGCACGTGGCTGGAGAATCGCTACCCTGGCTGCGCGTGCGATGTTCCGGCGCATGCGTATGCATATTCTTTTGAGAATAATCCGGAATTTCCACGCTTTTTCAGCAGCAGCGAGGATATCCACAAGTACCTGTTGCGTGTTGCGGACAAGTACGACTGTAAGAAATACATCGCCTTTAACACCAAAGTCGTTGAGGCTATCTGGGACGAAGAACAGGGTATTTACAATGTGAAGATTGAGCGTAGCGACGGCACCGTGTTCCAGGACACCTGTGAGGTGCTGCTGAACGCGAGCGGTATTCTGAATGCCTGGCGCTACCCGGGCATCCCTGGCATTAAGGATTACAAAGGTACGCTGATGCACAGCGCTACCTGGGACCGTAGCGTTTCTTTGAAAGGCAAAAAAGTCGCACTGATTGGCAGCGGTAGCAGCGGTATCCAGATTCTGCCGAACATTCTGGACGACTGCAAAGAAGTGGTCACGTACATTATCGACCCGGCGTGGATTGCTCCGGCTAACCTGGTGACCGCGGGTGTCTCCGATGATGGTGAGGAACCGAAAGAGCCAACCCCTGAGGAACTGGCCTCATCCTCCGACTTCGCTTATAGCCAGGAACAGATTAACGGCTTCAAGAAAGATCCGAAGTCGCTGATGGATCACCGCGCCACGCTGGAGCGTACCATGAATCAATCGTTTCCGATTCTGCTGCGTGGCTCTCCGAGCAACTTGTATGCCGCAAGCCTGTTCGAGGATTTGATGCGTAAGCGTCTGGCGAAGAAGCCGGAAGTTGCGGACGCGATTATCCCGGAGTGGAGCATCGGTTGCAGACGCCTGACGCCGGGTCCGCATTACCTGGAAGCACTGTGTAACCCGAAAGTGAAGATCCTGACTCAGGCGATCAAGAGCTTTAGCGATAAGGGCATGTATACTGCGGACGGTGAGCATGAAGATTTCGATGTTGTCATTTGTGCGACCGGTTTCGATGTGAGCTTTCGTCCGCGCTTCAAGTTTATTGGTAAAGATGGCTATGAAGTCCCAGAGAATTTCGGCCAAACGCCGAAAGGTTATCTGGCACTGGCGTACGCCGGCTTCCCGAACAGCTTCATCTTTATGGGTCCGAACGGTCCGATTGCGAACGGTAGCGTTGTGGTGAGCCTGGAGAAGCAAGGTGACTACTTCATTAAAGCGATCAATAAGATCCAGCGTCAAAACATTAAGGGTATGACCGTTCGTTTCGACGCCGTGGATGATTTTACGAATCACAGTGGACAAATACATGGACCGTACGGTGCTGACCGACGATTGCATCAGCTGGTACAAGAATGGTAAACGTGACGGTCGTGTTAGCGCAGTTTGGCCGGGTTCCGCGCTGCACTATATGGAAGCCATCGCAGACCCGCGTTGGGAAGATTACACCTACACCTATCGCGAACCGGGTCACTCTTTTAGCTTCCTGGGTGATGGCACCAGCTGGGTTGAGCATACGGGTGGCGATACCGCCTGGTATTTGAAAGAAACCCTGTAA

SEQ ID NO 8:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_酵母，经优化的

ATGACTATCGACTTGCAACAACCAGACGCTGTTCCATTCACTTCTTCTACTTTCGTTGTTCCAGACCCATCTAACTTGGCTTCTCAAGCTCAAAACTCTCAATTGCAATCTGCTCAAGAAGGTGCTGAATACCCAGTTAACGCTCACGGTGTTAGAGGTGACGGTACTATCCACGAAAGACCAATCAACGACAGAAGAAAGATGAGAGTTATCTGTGTTGGTGCTGGTATCTCTGGTTTGTACATGGCTATCAAGTTGCCAAGATCTACTGAAAACGTTGAATTGAAGATCTACGAAAAGAACCACGACTTGGGTGGTACTTGGTTGGAAAACAGATACCCAGGTTGTGCTTGTGACGTTCCAGCTCACGCTTACGCTTACTCTTTCGAAAACAACCCAGAATTCCCAAGATTCTTCTCTTCTTCTGAAGACATCCACAAGTACTTGTTGAGAGTTGCTGACAAGTACGACTGTAAGAAGTACATCGCTTTCAACACTAAGGTTGTTGAAGCTATCTGGGACGAAGAACAAGGTATCTACAACGTTAAGATCGAAAGATCTGACGGTACTGTTTTCCAAGACACTTGTGAAGTTTTGTTGAACGCTTCTGGTATCTTGAACGCTTGGAGATACCCAGGTATCCCAGGTATCAAGGACTACAAGGGTACTTTGATGCACTCTGCTACTTGGGACAGATCTGTTTCTTTGAAGGGTAAGAAGGTTGCTTTGATCGGTTCTGGTTCTTCTGGTATCCAAATCTTGCCAAACATCTTGGACGACTGTAAGGAAGTTGTTACTTACATCATCGACCCAGCTTGGATCGCTCCAGCTAACTTGGTTACTGCTGGTGTTTCTGACGACGGTGAAGAACCAAAGGAACCAACTCCAGAAGAATTGGCTTCTTCTTCTGACTTCGCTTACTCTCAAGAACAAATCAACGGTTTCAAGAAGGACCCAAAGTCTTTGATGGACCACAGAGCTACTTTGGAAAGAACTATGAACCAATCTTTCCCAATCTTGTTGAGAGGTTCTCCATCTAACTTGTACGCTGCTTCTTTGTTCGAAGACTTGATGAGAAAGAGATTGGCTAAGAAGCCAGAAGTTGCTGACGCTATCATCCCAGAATGGTCTATCGGTTGTAGAAGATTGACTCCAGGTCCACACTACTTGGAAGCTTTGTGTAACCCAAAGGTTAAGATCTTGACTCAAGCTATCAAGTCTTTCTCTGACAAGGGTATGTACACTGCTGACGGTGAACACGAAGACTTCGACGTTGTTATCTGTGCTACTGGTTTCGACGTTTCTTTCAGACCAAGATTCAAGTTCATCGGTAAGGACGGTTACGAAGTTCCAGAAAACTTCGGTCAAACTCCAAAGGGTTACTTGGCTTTGGCTTACGCTGGTTTCCCAAACTCTTTCATCTTCATGGGTCCAAACGGTCCAATCGCTAACGGTTCTGTTGTTGTTTCTTTGGAAAAGCAAGGTGACTACTTCATCAAGGCTATCAACAAGATCCAAAGACAAAACATCAAGGGTATGACTGTTAGATTCGACGCTGTTGACGACTTCACTAACCACGTTGACAAGTACATGGACAGAACTGTTTTGACTGACGACTGTATCTCTTGGTACAAGAACGGTAAGAGAGACGGTAGAGTTTCTGCTGTTTGGCCAGGTTCTGCTTTGCACTACATGGAAGCTATCGCTGACCCAAGATGGGAAGACTACACTTACACTTACAGAGAACCAGGTCACTCTTTCTCTTTCTTGGGTGACGGTACTTCTTGGGTTGAACACACTGGTGGTGACACTGCTTGGTACTTGAAGGAAACTTTGTAA

SEQ ID NO 9:罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-BVMO1_wt

ATGCCTTCCGCAATCACCCCGCCGGTTGATCATCGCAGTCTTCCAGGTCTTTTCAAGCCACAGAGGAAGCTCAAAGTGATATGTGTCGGAGCCGGCGCCTCGGGCTTACTTCTTTCCTACAAGATACAACGACACTTCGAGGATTTCGAGCTCCAAGTCTTTGAGAAGAATCCTGAAGTATCAGGAACCTGGTACGAGAACAGATATCCCGGCTGCGCTTGTGATGTTCCCTCGCATAATTATACATGGTCTTTTGAGCCCAAAACCGACTGGTCCGCCAACTATGCATCATCGAAGGAGATTTTCAAATATTTCAAGGACTTCACGAAGAAGTATGGTCTTAGCAAGTACATCAAGCTGGAGCATGAGGTCGTGGGGGCCACGTGGATGGAGGCGGAGGCACAGTGGAAAGTTGACGTCAAGGACCTTCGAAGTGGAAACACGCAGAGCTCGTTTGCGCATATACTGGTCAATGCAGGAGGCATTCTGAATGCTTGGCGATATCCGCCAATTCCAGGAATCAAGGATTTCAAGGGTGATCTTGTCCACTCCGCAGCTTGGCCAGAACATCTTGATCTTAATGGGAAGGTTGTCGGTCTCATCGGAAATGGATCCTCCGGCATTCAGATCCTTCCGGCCATCAAGAAGGATGTAAAGCAACTCGTTACATTCATTCGGGAAGCAACTTGGGTGGCGCCTCCTTTAGGTCAAGCCTATCGTGCGTTCTCGACTGATGAACAGGCTCAGTTTGCGCAAGATCCGCGCCATCACCTGGAGACACGGCGTGCAATTGAGGCTACCATGAATCAATCATTTGGTATCTTCCATTCGGGATCCGAGGAGCAGAAAGGGGTTCGCCAATATATGCAGAATATCATGGAAACGAAGCTCAACAACAAACAGCTCGAGAGTGTGCTGATTCCTGAGTGGTCGGTCGGTTGTCGGCGTCTTACACCAGGTACTAATTACCTAGAATCCCTGTCGGACGACAATGTCAAGGTCGTCTACGGTGAGATCACACAAATTACCGAATTGGGTGTCATCTGCGATGATGGCAAAGGCGAGTATCCCGTTGAAGTTCTTATTTGCGCCACTGGCTTCGACACCACCTTCAAACCACGATTCCCACTCATCGGTACAACCCAAGAGAAACTCAGTGATGTTTGGAAAGATGATCCGAGGGGTTACTTCGGGATTGCAACCAACAACTATCCCAACTACTTCTTCACTCTTGGACCGAATTGTCCAATCGGTAATGGCCCCGTGCTGTGTGCCATCGAAGCTGAGGTTGATTATATAATCAACATGCTCTCAAAGTTTCAAATGGAGAACATTCGTTCTTTTGATATCAAGGCAGATGCTGTCGACGCCTTCAACGACTGGAAGGATGACTTCATGAAAGATACCATCTGGGCAGAACAATGCCGGTCATGGTACAAGGCAGGATCTGCCACCGGTAAAATCCTTGCATTGTGGCCAGGCTCGACTTTGCACTACTTGGAAGCACTCAAGTCGCCGCGGTGGGAGGATTGGGACTTCAAGTATCAGCCTGGTAGAAATCGTTTCCACTACTTTGGAAATGGTCATAGCTGTGCTGAGCAGGATGGCGATCTGAGCTGGTACATTCGCAACGAGGATGATTCTTATATTGATCCGGTACTCAAGCCAAAGTCGAAGGCAGCAATTGAGAGCGAGGCACATATCGCCCTGCCAGGAATCGGTCCGATGTTGATGGAAGACCCGCGTGATGTTGCTGTAGAGGCCTAG

SEQ ID NO 10:罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-BVMO1_ wt

MPSAITPPVDHRSLPGLFKPQRKLKVICVGAGASGLLLSYKIQRHFEDFELQVFEKNPEVSGTWYENRYPGCACDVPSHNYTWSFEPKTDWSANYASSKEIFKYFKDFTKKYGLSKYIKLEHEVVGATWMEAEAQWKVDVKDLRSGNTQSSFAHILVNAGGILNAWRYPPIPGIKDFKGDLVHSAAWPEHLDLNGKVVGLIGNGSSGIQILPAIKKDVKQLVTFIREATWVAPPLGQAYRAFSTDEQAQFAQDPRHHLETRRAIEATMNQSFGIFHSGSEEQKGVRQYMQNIMETKLNNKQLESVLIPEWSVGCRRLTPGTNYLESLSDDNVKVVYGEITQITELGVICDDGKGEYPVEVLICATGFDTTFKPRFPLIGTTQEKLSDVWKDDPRGYFGIATNNYPNYFFTLGPNCPIGNGPVLCAIEAEVDYIINMLSKFQMENIRSFDIKADAVDAFNDWKDDFMKDTIWAEQCRSWYKAGSATGKILALWPGSTLHYLEALKSPRWEDWDFKYQPGRNRFHYFGNGHSCAEQDGDLSWYIRNEDDSYIDPVLKPKSKAAIESEAHIALPGIGPMLMEDPRDVAVEA

SEQ ID NO 11:罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-BVMO1_ 大肠杆菌，经优化的

ATGCCATCTGCCATTACTCCACCTGTTGATCATCGTAGCCTGCCGGGTCTGTTCAAGCCGCAACGTAAGTTGAAAGTGATCTGTGTTGGCGCGGGCGCGAGCGGCCTGTTGCTGAGCTACAAGATTCAGCGTCACTTTGAGGACTTTGAGTTGCAAGTTTTTGAGAAAAACCCTGAAGTGAGCGGCACCTGGTACGAGAATCGCTACCCGGGTTGCGCGTGCGATGTTCCGAGCCATAACTATACCTGGTCTTTTGAGCCGAAAACGGATTGGTCCGCAAACTATGCCAGCAGCAAAGAAATTTTCAAGTACTTCAAAGATTTCACCAAGAAATATGGTCTGTCTAAATACATTAAACTGGAACACGAAGTCGTGGGTGCGACGTGGATGGAAGCGGAAGCTCAATGGAAAGTTGACGTCAAAGACTTGCGTAGCGGCAACACCCAGAGCTCCTTCGCGCACATTCTGGTCAATGCCGGTGGCATTCTGAACGCTTGGCGTTACCCGCCGATTCCGGGTATCAAAGATTTTAAGGGTGACCTGGTGCACTCGGCAGCGTGGCCGGAGCATCTGGATCTGAATGGTAAAGTCGTTGGCCTGATTGGTAACGGTAGCAGCGGCATCCAAATTCTGCCGGCCATCAAAAAAGACGTGAAACAACTGGTCACGTTTATCCGTGAGGCCACGTGGGTCGCCCCGCCGCTGGGCCAAGCGTACCGCGCATTTAGCACCGACGAACAGGCGCAGTTTGCACAAGACCCGCGTCACCATCTGGAAACTCGTCGCGCGATTGAAGCTACCATGAATCAGAGCTTCGGTATCTTCCACAGCGGTTCAGAGGAACAGAAAGGTGTGCGTCAGTACATGCAGAATATCATGGAAACGAAATTGAATAACAAACAGCTGGAGAGCGTGCTGATTCCGGAGTGGTCCGTGGGTTGTCGCCGTCTGACCCCGGGCACGAACTATCTGGAGAGCTTGAGCGACGATAACGTGAAAGTTGTTTATGGCGAGATCACCCAGATCACCGAGCTGGGTGTGATTTGCGATGATGGCAAGGGTGAGTACCCGGTCGAAGTGCTGATTTGCGCTACCGGTTTCGACACCACGTTCAAACCGCGCTTCCCGTTGATTGGCACCACCCAGGAAAAGCTGAGCGACGTCTGGAAAGATGACCCTCGCGGTTATTTCGGTATCGCGACCAATAACTACCCGAACTACTTTTTCACCCTGGGTCCGAACTGCCCGATCGGCAATGGTCCGGTCCTGTGTGCAATCGAAGCTGAAGTGGACTATATCATCAATATGCTGAGCAAATTTCAGATGGAAAACATTCGCAGCTTCGACATTAAAGCCGACGCAGTTGATGCGTTTAACGACTGGAAAGATGACTTTATGAAAGACACCATCTGGGCAGAGCAGTGTCGTTCTTGGTACAAGGCTGGTTCTGCGACGGGTAAGATTTTGGCACTGTGGCCGGGCAGCACGCTGCATTATCTGGAAGCCCTGAAAAGCCCACGCTGGGAAGATTGGGACTTCAAGTATCAACCGGGTCGTAATCGCTTTCACTACTTCGGTAACGGCCACAGCTGCGCGGAGCAAGATGGTGATCTGTCCTGGTATATCCGTAATGAAGATGACAGCTACATTGACCCGGTACTGAAGCCGAAGTCCAAGGCAGCGATCGAGAGCGAAGCACACATCGCGCTGCCAGGCATTGGTCCGATGCTGATGGAGGACCCGCGTGACGTTGCGGTTGAGGCATAA

SEQ ID NO 12:纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-BVMO1_wt

ATGCCTTCCGCAATCACCCCACCGGTTGATCATCGCAGTCTTCCAGGTCTTTTCAAGCCACAGAGGAAGCTCAAAGTGATATGTGTCGGAGCCGGCGCCTCGGGCTTACTTCTTTCCTACAAGATACAACGACACTTCGAGGATTTCGAGCTCCAAGTCTTTGAGAAGAATCCTGAGGTATCAGGAACCTGGTACGAGAACAGGTATCCCGGCTGTGCTTGTGATGTTCCCTCGCATAATTATACATGGTCTTTTGAGCCCAAAACCGACTGGTCCGCCAACTATGCATCATCGAAGGAGATTTTCAAATATTTCAAGGACTTCACGAAGAAGTATGGTCTTAGCAAGTACATCAAGCTGGAGCATGAGGTCGTGGGGGCCACGTGGATGGAGGCGGAGGCACAGTGGAAAGTTGACGTCAAGGACCTTCGAAGTGGAAACACGCAGAGCTCGTTTGCGCATATACTGGTCAATGCAGGAGGCATTCTGAATGCTTGGCGATATCCGCCAATTCCAGGAATCAAGGATTTCAAGGGTGATCTTGTCCACTCCGCAGCTTGGCCAGAACATCTTGATCTTAATGGGAAGGTTGTCGGTCTAATCGGAAATGGATCCTCCGGCATTCAGATCCTTCCGGCCATCAAGAAGGATGTAAAGCAACTCGTTACATTTATTCGGGAAGCAACTTGGGTGGCGCCTCCTTTAGGTCAAGCCTATCGTGCGTTCTCGACTGATGAACAGGCTCAGTTTGCGCAAGATCCGCGCCATCACCTGGAAACACGTCGTGCAACTGAGGCTACCATGAATCAATCATTTGGTATCTTCCATTCGGGATCCGAGGAGCAGAAAGGAGTTCGCCAATATATGCAGGATATCATGGAAACGAAGCTCAACAACAAACAGCTCGAGAGTGTGCTGATTCCTGAGTGGTCGGTCGGTTGTCGGCGTCTTACACCAGGTACTAATTACCTAGAATCCCTATCGGACGACAATGTCAAGGTCGTCTACGGTGAAATCACACAAATTACCGAATCAGGTGTCATCTGCGATGATGGTAAAGGCGAATATCCCGTCGAAGTTCTTATTTGCGCCACCGGCTTCGACACCACCTTCAAACCACGATTTCCACTCATCGGCACTACGAAAGAGAAGCTCAGTGATGTTTGGAAAGATGATCCGAGGGGCTACTTTGGGATCGCAACCAACAACTATCCCAACTACTTCTTCACTCTTGGACCGAATTGTCCAATCGGTAATGGCCCCGTGCTGTGTGCCATTGAAGCTGAGGTTGAATATATAATCAACATGCTCTCGAAGTTTCAGAAGGAGAACATTCGTTCTTTTGATATCAAGGCAGATGCTGTCGACGCCTTCAACGACTGGAAGGATGACTTCATGAAAGATACCATCTGGGCAGAACAATGCCGGTCATGGTACAAGGCAGGATCCGCCACTGGTAAAATCCTTGCATTGTGGCCAGGCTCGACTTTGCACTACTTGGAAGCACTCAAGTCGCCGCGGTGGGAGGACTGGGACTTCAAGTATCAGCCTGGTAGAAATCGTTTCCATTACTTTGGAAATGGTCATAGCTGTGCTGAGCAGGATGGCGATCTGAGCTGGTACATCCGCAACGAGGATGATTCTTATATTGATCCGGTACTCAAGCCAAAGCCGAAGGCAGCAGTTGAGAGCGAGGCACATATCGCCCTGCCAGGAATCGGTCCGATGTTGATGGAAGACCCGCGTGATGTTGCTGTAGAGGCCTAG

SEQ ID NO 13:纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)(ATCC 20919)_SCH46- BVMO1_wt

MPSAITPPVDHRSLPGLFKPQRKLKVICVGAGASGLLLSYKIQRHFEDFELQVFEKNPEVSGTWYENRYPGCACDVPSHNYTWSFEPKTDWSANYASSKEIFKYFKDFTKKYGLSKYIKLEHEVVGATWMEAEAQWKVDVKDLRSGNTQSSFAHILVNAGGILNAWRYPPIPGIKDFKGDLVHSAAWPEHLDLNGKVVGLIGNGSSGIQILPAIKKDVKQLVTFIREATWVAPPLGQAYRAFSTDEQAQFAQDPRHHLETRRATEATMNQSFGIFHSGSEEQKGVRQYMQDIMETKLNNKQLESVLIPEWSVGCRRLTPGTNYLESLSDDNVKVVYGEITQITESGVICDDGKGEYPVEVLICATGFDTTFKPRFPLIGTTKEKLSDVWKDDPRGYFGIATNNYPNYFFTLGPNCPIGNGPVLCAIEAEVEYIINMLSKFQKENIRSFDIKADAVDAFNDWKDDFMKDTIWAEQCRSWYKAGSATGKILALWPGSTLHYLEALKSPRWEDWDFKYQPGRNRFHYFGNGHSCAEQDGDLSWYIRNEDDSYIDPVLKPKPKAAVESEAHIALPGIGPMLMEDPRDVAVEA

SEQ ID NO 14:纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

ATGCCATCTGCCATTACTCCACCTGTTGATCATCGTAGCCTGCCGGGTCTGTTCAAGCCGCAACGTAAGTTGAAAGTGATCTGTGTTGGCGCGGGCGCGAGCGGCCTGTTGCTGAGCTACAAGATTCAGCGTCACTTTGAGGACTTTGAGTTGCAAGTTTTTGAGAAAAACCCTGAAGTGAGCGGCACCTGGTACGAGAATCGCTACCCGGGTTGCGCGTGCGATGTTCCGAGCCATAACTATACCTGGTCTTTTGAGCCGAAAACGGATTGGTCCGCAAACTATGCCAGCAGCAAAGAAATTTTCAAGTACTTCAAAGATTTCACCAAGAAATATGGTCTGTCTAAATACATTAAACTGGAACACGAAGTCGTGGGTGCGACGTGGATGGAAGCGGAAGCTCAATGGAAAGTTGACGTCAAAGACTTGCGTAGCGGCAACACCCAGAGCTCCTTCGCGCACATTCTGGTCAATGCCGGTGGCATTCTGAACGCTTGGCGTTACCCGCCGATTCCGGGTATCAAAGATTTTAAGGGTGACCTGGTGCACTCGGCAGCGTGGCCGGAGCATCTGGATCTGAATGGTAAAGTCGTTGGCCTGATTGGTAACGGTAGCAGCGGCATCCAAATTCTGCCGGCCATCAAAAAAGACGTGAAACAACTGGTCACGTTTATCCGTGAGGCCACGTGGGTCGCCCCGCCGCTGGGCCAAGCGTACCGCGCATTTAGCACCGACGAACAGGCGCAGTTTGCACAAGACCCGCGTCACCATCTGGAAACTCGTCGCGCGACCGAAGCTACCATGAATCAGAGCTTCGGTATCTTCCACAGCGGTTCAGAGGAACAGAAAGGTGTGCGTCAGTACATGCAGGATATCATGGAAACGAAATTGAATAACAAACAGCTGGAGAGCGTGCTGATTCCGGAGTGGTCCGTGGGTTGTCGCCGTCTGACCCCGGGCACGAACTATCTGGAGAGCTTGAGCGACGATAACGTGAAAGTTGTTTATGGCGAGATCACCCAGATCACCGAGTCCGGTGTGATTTGCGATGATGGCAAGGGTGAGTACCCGGTCGAAGTGCTGATTTGCGCTACCGGTTTCGACACCACGTTCAAACCGCGCTTCCCGTTGATTGGCACCACCAAAGAAAAGCTGAGCGACGTCTGGAAAGATGACCCTCGCGGTTATTTCGGTATCGCGACCAATAACTACCCGAACTACTTTTTCACCCTGGGTCCGAACTGCCCGATCGGCAATGGTCCGGTCCTGTGTGCAATCGAAGCTGAAGTGGAGTATATCATCAATATGCTGAGCAAATTTCAGAAAGAAAACATTCGCAGCTTCGACATTAAAGCCGACGCAGTTGATGCGTTTAACGACTGGAAAGATGACTTTATGAAAGACACCATCTGGGCAGAGCAGTGTCGTTCTTGGTACAAGGCTGGTTCTGCGACGGGTAAGATTTTGGCACTGTGGCCGGGCAGCACGCTGCATTATCTGGAAGCCCTGAAAAGCCCACGCTGGGAAGATTGGGACTTCAAGTATCAACCGGGTCGTAATCGCTTTCACTACTTCGGTAACGGCCACAGCTGCGCGGAGCAAGATGGTGATCTGTCCTGGTATATCCGTAATGAAGATGACAGCTACATTGACCCGGTACTGAAGCCGAAGCCGAAGGCAGCGGTGGAGAGCGAAGCACACATCGCGCTGCCAGGCATTGGTCCGATGCTGATGGAGGACCCGCGTGACGTTGCGGTTGAGGCATAA

SEQ ID NO 15:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_wt

ATGACCAAAGACAATACCACATCATTCCCCTCGCACGCCATCTACGAGCCACGCCGGACATTAAAAGTGCTGGTCATAGGGGCTGGTGCGTCCGGTCTATTATTAGCATACAAACTACAGCGGCACTTTGATTGTGTGGAAATCACGGTGTTTGAGAAGAACCCCGCAGTGTCCGGCACTTGGTTTGAGAATCGATATCCGGGATGTGCCTGTGACGTTCCTTCGCATTGCTATACATGGTCCTTCGAGCCCAACCCCAACTGGTCCGCCAACTACGCTGGAGCCGACGAGATTCGACAATACTTTGTCGATTTCTGCCATCGCCACGACTTGCAGAAATATATCCATCTGGAACATGAGGTGGTCCACGCAGCGTGGAAGTCGGAGACTGGCCACTGGGAGGTGCAAGTGCGCGATATACAACACAATTCTCACACACAGCATACTGCGCATATCTTGATTAATGCTACTGGAATACTGAATCAATGGAAGTGGCCATCCATTCCCGGATTACAGTCGTTCCAGGGAGATCTTTTGCACAGTGCAGCATGGGACTCGTCAGTCAATCTAGAGGATAAAACGGTCGCTGTCATTGGAAACGGATCATCCGGAATCCAGATTGTCCCAGCGATTCTACCCCAAGTGCGCAAACTCGTGCACTTTACTCGTCAAGCGGCATGGGTCGCACCTCCAGTCAATGAAGAGTATCAGGAATACTCGCCCGAACAGATCGAACGCTTTCGCTCAGACCCAACATACCTGCTTGGGGTTCGTCGACAGATTGAAGCACGGATGAACGGCTCATTTCTGAAATTCATCCAAGGCTCAGACATGCAACGTCGTGCACACGAGTATGTCATGCTGCACATGATGAAGAGACTGGACGGAGACGCCTCCCTGGCAGAGACCTTGGTACCAACCTTCCCATTTGGCTGTCGAAGACCGACGCCAGGAACCGGGTATCTCGAAGCACTGAAGGACTCGAAAGTGGAAACAATTACCGGAGCCCGAATCGCGAATGTGACGGGTAACCAGGTGGTCCTCGAGAATGGCACGTCGTATACGGTGGATGCGATTGTGTGCGCCACGGGATTCGATACGTCTTACAAACCACGATTCCCACTGGTCGGCAGAGACAGCACCACTCTCAGCGAGGCCTGGAAGGACGAAGTGTCTGCATATCTGGGGCTTACAGTTCCTGGATTTCCCAACTATTTTTCCATCTTGGGACCGAACTGTCCGGTGGGTAACGGGCCGGTGTTGATCAGTATCGAAAAACAGGTCGAATATATTGTTCAGGTACTGGGGAAAATGCAGAAGGAGAATCTACAGTCATTTGAAGTCCGGCGGACGGCAACAGACTCGTTTAACCAATGGAAGGATGCATTCATGCAAAACACGGTGTGGACGAGTGGTTGTCGCAGCTGGTATCAGAATGGCTCGAAAGGGAACCAGATCGTGGCTCTCTGGCCTGGATCCACGTTGCACTATTTGGAGGCGATTCAGCATCCACGATACGAGGACTACATCTGGACCAGTCCACCTGGTGTCAATCCATGGGCCTTTCTAGGCAACGGGCAGAGTACGGCCGAAACCCGTCCCGGAGGCGACACGAGTTGGTATCTGCGTTCGAAAGATGATTCATTTATAGATCCATGTCTGAGACAGCTTTAG

SEQ ID NO 16:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_wt(OJJ34587.1)

MTKDNTTSFPSHAIYEPRRTLKVLVIGAGASGLLLAYKLQRHFDCVEITVFEKNPAVSGTWFENRYPGCACDVPSHCYTWSFEPNPNWSANYAGADEIRQYFVDFCHRHDLQKYIHLEHEVVHAAWKSETGHWEVQVRDIQHNSHTQHTAHILINATGILNQWKWPSIPGLQSFQGDLLHSAAWDSSVNLEDKTVAVIGNGSSGIQIVPAILPQVRKLVHFTRQAAWVAPPVNEEYQEYSPEQIERFRSDPTYLLGVRRQIEARMNGSFLKFIQGSDMQRRAHEYVMLHMMKRLDGDASLAETLVPTFPFGCRRPTPGTGYLEALKDSKVETITGARIANVTGNQVVLENGTSYTVDAIVCATGFDTSYKPRFPLVGRDSTTLSEAWKDEVSAYLGLTVPGFPNYFSILGPNCPVGNGPVLISIEKQVEYIVQVLGKMQKENLQSFEVRRTATDSFNQWKDAFMQNTVWTSGCRSWYQNGSKGNQIVALWPGSTLHYLEAIQHPRYEDYIWTSPPGVNPWAFLGNGQSTAETRPGGDTSWYLRSKDDSFIDPCLRQL*

SEQ ID NO 17:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_大肠杆菌，经优化的

ATGACCAAAGATAACACCACGTCCTTTCCGAGCCACGCCATTTACGAGCCGCGCCGTACCCTGAAAGTCCTGGTGATCGGTGCTGGCGCGAGCGGTTTGTTGCTGGCATATAAGCTGCAGCGCCACTTCGATTGCGTTGAGATTACCGTATTCGAGAAGAATCCGGCAGTCAGCGGCACCTGGTTTGAGAATCGTTACCCTGGTTGTGCATGTGACGTGCCGAGCCATTGCTACACCTGGTCGTTCGAGCCAAACCCGAATTGGAGCGCAAACTACGCGGGTGCGGATGAAATTCGCCAGTATTTCGTTGATTTCTGTCACCGTCATGATCTGCAGAAGTACATCCATCTGGAGCACGAAGTCGTTCATGCGGCATGGAAATCGGAGACTGGTCACTGGGAAGTGCAAGTCCGTGACATCCAGCACAACAGCCATACCCAGCACACGGCGCACATTTTGATCAACGCAACGGGTATCCTGAATCAATGGAAATGGCCGAGCATTCCGGGCCTGCAGAGCTTTCAGGGTGATCTGCTGCATAGCGCAGCGTGGGACAGCTCCGTCAACTTAGAGGATAAGACCGTCGCGGTGATCGGTAATGGCAGCAGCGGTATCCAGATTGTGCCGGCCATCCTGCCGCAAGTGCGCAAACTGGTTCACTTTACGCGTCAAGCGGCATGGGTGGCACCGCCGGTGAACGAAGAGTACCAAGAGTACAGCCCGGAGCAAATTGAGCGTTTCCGTAGCGACCCGACCTACCTGTTGGGCGTCCGCCGTCAAATTGAAGCCCGTATGAACGGCAGCTTTCTGAAGTTTATTCAGGGCAGCGACATGCAGCGCAGAGCGCACGAATACGTTATGCTGCACATGATGAAGCGTCTGGACGGTGATGCGAGCCTTGCTGAGACTCTGGTGCCGACGTTTCCGTTCGGCTGCCGTCGTCCGACCCCGGGCACCGGTTATCTGGAAGCGCTGAAAGACTCTAAAGTTGAAACGATCACGGGTGCCCGTATCGCAAATGTTACGGGCAACCAAGTTGTCCTGGAGAACGGTACTAGCTATACGGTCGATGCTATTGTCTGTGCTACCGGTTTCGACACCAGCTATAAGCCGCGTTTCCCGCTGGTTGGCCGCGACTCTACCACCCTGAGCGAAGCCTGGAAAGACGAAGTGTCTGCGTACCTGGGTCTGACCGTTCCGGGTTTTCCGAACTATTTCAGCATCCTGGGTCCTAATTGCCCGGTCGGTAATGGTCCGGTTTTGATCAGCATCGAGAAACAAGTGGAGTATATCGTGCAAGTTCTGGGTAAGATGCAGAAAGAAAACTTGCAGTCCTTCGAAGTTCGCCGTACCGCCACCGACAGCTTCAATCAGTGGAAAGATGCGTTCATGCAAAACACGGTGTGGACCTCAGGTTGCCGTTCTTGGTATCAGAATGGCAGCAAGGGCAACCAAATTGTCGCGCTGTGGCCGGGTTCCACGCTGCACTACCTGGAAGCGATTCAACATCCTCGCTACGAAGATTATATCTGGACGAGCCCACCGGGTGTTAATCCGTGGGCGTTTCTGGGCAATGGCCAGAGCACCGCGGAAACCCGTCCGGGTGGCGACACTTCCTGGTATCTCCGCTCCAAAGATGACAGCTTTATTGACCCATGCCTGCGTCAGCTGTAA

SEQ ID NO 18:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_酵母，经优化的

ATGACTAAGGACAACACTACTTCTTTCCCATCTCACGCTATCTACGAACCAAGAAGAACTTTGAAGGTTTTGGTTATCGGTGCTGGTGCTTCTGGTTTGTTGTTGGCTTACAAGTTGCAAAGACACTTCGACTGTGTTGAAATCACTGTTTTCGAAAAGAACCCAGCTGTTTCTGGTACTTGGTTCGAAAACAGATACCCAGGTTGTGCTTGTGACGTTCCATCTCACTGTTACACTTGGTCTTTCGAACCAAACCCAAACTGGTCTGCTAACTACGCTGGTGCTGACGAAATCAGACAATACTTCGTTGACTTCTGTCACAGACACGACTTGCAAAAGTACATCCACTTGGAACACGAAGTTGTTCACGCTGCTTGGAAGTCTGAAACTGGTCACTGGGAAGTTCAAGTTAGAGACATCCAACACAACTCTCACACTCAACACACTGCTCACATCTTGATCAACGCTACTGGTATCTTGAACCAATGGAAGTGGCCATCTATCCCAGGTTTGCAATCTTTCCAAGGTGACTTGTTGCACTCTGCTGCTTGGGACTCTTCTGTTAACTTGGAAGACAAGACTGTTGCTGTTATCGGTAACGGTTCTTCTGGTATCCAAATCGTTCCAGCTATCTTGCCACAAGTTAGAAAGTTGGTTCACTTCACTAGACAAGCTGCTTGGGTTGCTCCACCAGTTAACGAAGAATACCAAGAATACTCTCCAGAACAAATCGAAAGATTCAGATCTGACCCAACTTACTTGTTGGGTGTTAGAAGACAAATCGAAGCTAGAATGAACGGTTCTTTCTTGAAGTTCATCCAAGGTTCTGACATGCAAAGAAGAGCTCACGAATACGTTATGTTGCACATGATGAAGAGATTGGACGGTGACGCTTCTTTGGCTGAAACTTTGGTTCCAACTTTCCCATTCGGTTGTAGAAGACCAACTCCAGGTACTGGTTACTTGGAAGCTTTGAAGGACTCTAAGGTTGAAACTATCACTGGTGCTAGAATCGCTAACGTTACTGGTAACCAAGTTGTTTTGGAAAACGGTACTTCTTACACTGTTGACGCTATCGTTTGTGCTACTGGTTTCGACACTTCTTACAAGCCAAGATTCCCATTGGTTGGTAGAGACTCTACTACTTTGTCTGAAGCTTGGAAGGACGAAGTTTCTGCTTACTTGGGTTTGACTGTTCCAGGTTTCCCAAACTACTTCTCTATCTTGGGTCCAAACTGTCCAGTTGGTAACGGTCCAGTTTTGATCTCTATCGAAAAGCAAGTTGAATACATCGTTCAAGTTTTGGGTAAGATGCAAAAGGAAAACTTGCAATCTTTCGAAGTTAGAAGAACTGCTACTGACTCTTTCAACCAATGGAAGGACGCTTTCATGCAAAACACTGTTTGGACTTCTGGTTGTAGATCTTGGTACCAAAACGGTTCTAAGGGTAACCAAATCGTTGCTTTGTGGCCAGGTTCTACTTTGCACTACTTGGAAGCTATCCAACACCCAAGATACGAAGACTACATCTGGACTTCTCCACCAGGTGTTAACCCATGGGCTTTCTTGGGTAACGGTCAATCTACTGCTGAAACTAGACCAGGTGGTGACACTTCTTGGTACTTGAGATCTAAGGACGACTCTTTCATCGACCCATGTTTGAGACAATTGTAA

SEQ ID NO 19:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-EST_wt

ATGCCTTCCGATCTTCCCCGACCAGCATATGACCCGGAAATAGAGCCCTTCCTCTCTATGGTCCCATTACCACCAACAATCAATGCGGATATCATGAAAGAATTGCGTAAAGCACCTCTGCTCAGTCAAGCGCCTGACCTCGACGCATTACTTTCCGACAAGCCAATAACTCACCGCGAAGTCAGCATTCCAGGTCTCAATTCCCAAGATCCACAAATCACGTTGTCAATATTCTCCAGTACATTGGAGGGTGGCCCGAAACCATGTATCTATTTCGTTCATGGTGGCGGTATGATCATCGGATGTCGATTCGTGGGTATTGAGGATTATCTTCAATACGTCGAGCAGAACGACGCTGTCGTCGTGGCTGTAGAGTATCGTCTCGCTCCGGAACACCCGGACCCAGCGCCTGTCAATGATTGTTACGCTGGACTTTTATGGACGGCAGCAAATGCTGCAGAGCTAGGCATCGATCTGGAGAGACTGTTGATCTGTGGCGCTTCTGCTGGTGGTGGTCTTTCTGCTGGAGTGGCATTGATGGCACGAGACAAGAAAGGTCCAAAATTGGTAGGACAATTGTTATGCTATCCAATGCTCGACGATAGGAATGATTCACTCTCAAGTCAGCAGTACGTGGATGAAGGTGTTTGGAGTCGTGGTAGCAATGCATTTGGCTGGAAGCAATTGCTTGGAGACAGGGCGGGCAAAGAGGGAGTCAGTATTTATGCTGCGCCGGCAAGAGCAACTGATTTGAGCGGACTGCCGAACACTTTCATCGACGTTGGCAGCGCTGAAGTCTTCAGGGATGAGGACATCGCTTATGCCTCGAGGTTATGGGCTGTTGGTGTCCAAGCGGAACTTCATGTGTGGCCGGGTGGATATCATGCTGCGGAGAACATGGCACCTGGGACTGATTACTCTAAGAAGGTGAAAGCGACTCGCTTGGCATGGATGAAGAGAGTCTTCATGAAAGCCCCAAAGTCGACGACAGAGTCGTTGCCTGCTCCAACAGTGGATGAAGCTGTTGGCACAATATGA

SEQ ID NO 20:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-EST_wt

MPSDLPRPAYDPEIEPFLSMVPLPPTINADIMKELRKAPLLSQAPDLDALLSDKPITHREVSIPGLNSQDPQITLSIFSSTLEGGPKPCIYFVHGGGMIIGCRFVGIEDYLQYVEQNDAVVVAVEYRLAPEHPDPAPVNDCYAGLLWTAANAAELGIDLERLLICGASAGGGLSAGVALMARDKKGPKLVGQLLCYPMLDDRNDSLSSQQYVDEGVWSRGSNAFGWKQLLGDRAGKEGVSIYAAPARATDLSGLPNTFIDVGSAEVFRDEDIAYASRLWAVGVQAELHVWPGGYHAAENMAPGTDYSKKVKATRLAWMKRVFMKAPKSTTESLPAPTVDEAVGTI

SEQ ID NO 21:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-EST_大肠杆菌，经优化的

ATGCCATCGGATCTGCCGCGCCCAGCCTACGACCCTGAAATCGAACCGTTCTTGAGCATGGTTCCGCTGCCTCCGACCATTAACGCGGACATTATGAAAGAACTGCGTAAGGCCCCACTGCTGAGCCAGGCTCCGGATCTGGATGCCCTGCTGAGCGACAAGCCGATTACTCACCGTGAGGTGTCCATCCCGGGTCTGAACAGCCAGGACCCGCAGATTACCCTGAGCATCTTTAGCTCTACCCTGGAGGGTGGCCCGAAGCCGTGTATCTACTTCGTGCACGGTGGCGGCATGATTATTGGCTGTCGCTTCGTCGGTATTGAGGACTACTTGCAATACGTGGAACAGAATGACGCGGTCGTTGTGGCCGTTGAGTATCGTCTGGCACCGGAACATCCGGACCCGGCACCGGTGAATGACTGCTACGCGGGTCTGCTGTGGACCGCTGCGAACGCGGCAGAACTGGGCATCGATTTGGAGCGTCTGCTGATCTGCGGCGCTTCTGCGGGTGGCGGTCTGTCAGCGGGTGTGGCGCTGATGGCACGCGACAAAAAGGGTCCGAAACTGGTCGGTCAGCTGCTGTGCTATCCGATGCTCGACGATCGTAACGATAGCTTGAGCAGCCAGCAATACGTAGATGAGGGTGTTTGGAGCCGTGGTAGCAATGCGTTTGGTTGGAAGCAACTGCTGGGTGATCGTGCCGGCAAAGAGGGCGTGTCCATTTACGCGGCACCGGCTCGCGCAACCGACCTGTCTGGCTTGCCTAACACGTTTATCGACGTTGGTTCCGCCGAGGTTTTCCGTGATGAAGATATCGCGTATGCGAGCCGCTTATGGGCAGTCGGTGTTCAAGCGGAGCTGCATGTCTGGCCGGGTGGTTATCACGCTGCGGAGAATATGGCACCGGGCACCGATTATAGCAAAAAAGTCAAGGCGACGCGTCTGGCATGGATGAAACGCGTCTTTATGAAGGCCCCGAAAAGCACCACGGAGAGCCTGCCGGCACCGACGGTTGACGAAGCGGTGGGCACGATCTAA

SEQ ID NO 22:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-EST_酵母，经优化的

ATGCCATCTGACTTGCCAAGACCAGCTTACGACCCAGAAATCGAACCATTCTTGTCTATGGTTCCATTGCCACCAACTATCAACGCTGACATCATGAAGGAATTGAGAAAGGCTCCATTGTTGTCTCAAGCTCCAGACTTGGACGCTTTGTTGTCTGACAAGCCAATCACTCACAGAGAAGTTTCTATCCCAGGTTTGAACTCTCAAGACCCACAAATCACTTTGTCTATCTTCTCTTCTACTTTGGAAGGTGGTCCAAAGCCATGTATCTACTTCGTTCACGGTGGTGGTATGATCATCGGTTGTAGATTCGTTGGTATCGAAGACTACTTGCAATACGTTGAACAAAACGACGCTGTTGTTGTTGCTGTTGAATACAGATTGGCTCCAGAACACCCAGACCCAGCTCCAGTTAACGACTGTTACGCTGGTTTGTTGTGGACTGCTGCTAACGCTGCTGAATTGGGTATCGACTTGGAAAGATTGTTGATCTGTGGTGCTTCTGCTGGTGGTGGTTTGTCTGCTGGTGTTGCTTTGATGGCTAGAGACAAGAAGGGTCCAAAGTTGGTTGGTCAATTGTTGTGTTACCCAATGTTGGACGACAGAAACGACTCTTTGTCTTCTCAACAATACGTTGACGAAGGTGTTTGGTCTAGAGGTTCTAACGCTTTCGGTTGGAAGCAATTGTTGGGTGACAGAGCTGGTAAGGAAGGTGTTTCTATCTACGCTGCTCCAGCTAGAGCTACTGACTTGTCTGGTTTGCCAAACACTTTCATCGACGTTGGTTCTGCTGAAGTTTTCAGAGACGAAGACATCGCTTACGCTTCTAGATTGTGGGCTGTTGGTGTTCAAGCTGAATTGCACGTTTGGCCAGGTGGTTACCACGCTGCTGAAAACATGGCTCCAGGTACTGACTACTCTAAGAAGGTTAAGGCTACTAGATTGGCTTGGATGAAGAGAGTTTTCATGAAGGCTCCAAAGTCTACTACTGAATCTTTGCCAGCTCCAACTGTTGACGAAGCTGTTGGTACTATCTAA

SEQ ID NO 23:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-EST_wt

ATGACTCATAGCCCTCCACTCGATGCCGAACTTTCGCTACTCCGATATGCTCCTGCTGTTCCCGTGGGATGGCAGTTGGGACGAAAACTCTTGCGGATGAACACACTCATGACGCGCCCTATGGAGGGTGTCATGCGAGATGATGTGGTCATACCAAATCTTGATGGTACTGCCAACATCAGACTGTTCATTTGTCGCCCTCAAGACCCTACTGAGACTATGCCGGTGATACTTTGGTTACACGGAGGCGGTATGGTCGCAGGTCATTACAAACAAGACTCCGGGTTCATGGACATCTGGGCCAAGCGCCTAGGAGCCTTTGTGGTTTCGGTCGATTATCGTCTGGCTCCCGAGGCCAAGGCTCCAGCCGCTCTAGACGATTGCATCGCTGCTTGGCAATGGATCACCACGCAGACCGCTCGAGGCATCGACACTACCCGCATGGCGGTGGGTGGTGCGAGCGCAGGAGGAGGCCTGGCGGCCAGTACCGTTCAGCGACTTGTCGATCTCGGAGGAGTGAAACCTGTCTTTCAATTGCTCATCTATCCCATGTTGGACGACAGGACGGTGGTCAGATTTGATCCCGACCGAAGATATTACATGTGGACACCGGATTGTAATCGATATGGCTGGACCTCGTACCTCGGAGTCCCTCCAGGGAGCGCTGAGGTGCCTCCCTATGCGTCGGCGGCACGTCGACCGGATCTATCAGGTCTACCTCCCACCTGGATCGGTGTTGGGTCACTGGATCTCTTTCACGACGAGGACATGGATTATGCGCGCAGGTTACGTGAGAGCGGAGTTCCGGTTGAGGAATATGTCGCTGTCGGAGCGCCTCATGCCTTCGACACGATATATGGAAAGGCGAAGGTCACCTTGGATTTCTGGGACTCGCATTTCAACGCCCTTCGAAGGGCTTTGTGTCTCGACTGA

SEQ ID NO 24:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-EST_wt

MTHSPPLDAELSLLRYAPAVPVGWQLGRKLLRMNTLMTRPMEGVMRDDVVIPNLDGTANIRLFICRPQDPTETMPVILWLHGGGMVAGHYKQDSGFMDIWAKRLGAFVVSVDYRLAPEAKAPAALDDCIAAWQWITTQTARGIDTTRMAVGGASAGGGLAASTVQRLVDLGGVKPVFQLLIYPMLDDRTVVRFDPDRRYYMWTPDCNRYGWTSYLGVPPGSAEVPPYASAARRPDLSGLPPTWIGVGSLDLFHDEDMDYARRLRESGVPVEEYVAVGAPHAFDTIYGKAKVTLDFWDSHFNALRRALCLD

SEQ ID NO 25:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-EST_大肠杆菌，经优化的

ATGACCCACTCGCCGCCACTGGATGCCGAACTGAGCTTGCTGCGCTACGCCCCTGCCGTTCCGGTGGGTTGGCAGCTGGGTCGCAAACTGCTGCGTATGAACACCTTGATGACCCGTCCGATGGAAGGTGTCATGCGCGACGATGTGGTTATTCCGAATCTGGACGGCACGGCTAACATCCGTCTGTTTATCTGTCGTCCGCAAGACCCGACCGAGACTATGCCGGTTATCCTGTGGCTGCACGGTGGCGGCATGGTCGCAGGCCACTACAAACAAGACAGCGGTTTCATGGACATTTGGGCGAAGCGCCTGGGTGCGTTTGTTGTTAGCGTTGATTATCGCCTGGCGCCTGAGGCTAAGGCACCGGCAGCGCTCGATGACTGCATCGCGGCGTGGCAGTGGATTACCACCCAGACCGCGCGTGGTATTGACACCACTCGTATGGCAGTGGGTGGTGCGAGCGCGGGTGGCGGTCTGGCGGCAAGCACGGTTCAGCGTCTTGTCGATCTGGGCGGTGTGAAACCGGTCTTTCAACTGCTGATCTATCCGATGCTGGACGATCGTACCGTGGTGCGCTTCGACCCGGATCGTCGTTATTACATGTGGACGCCGGACTGCAACAGATACGGCTGGACCAGCTACCTGGGCGTGCCACCGGGTAGCGCAGAGGTCCCGCCGTATGCCTCCGCGGCTCGTCGTCCGGATCTGTCCGGCCTGCCGCCGACGTGGATCGGTGTCGGCTCTCTGGATCTGTTCCATGACGAAGATATGGATTACGCACGTCGTTTGCGCGAGAGCGGTGTGCCGGTCGAAGAGTATGTTGCTGTGGGTGCCCCGCATGCGTTCGACACGATTTACGGCAAGGCCAAAGTTACGCTGGACTTTTGGGATAGCCACTTCAATGCGCTGCGCCGTGCGTTGTGTTTAGACTAA

SEQ ID NO 26:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-EST_酵母，经优化的

ATGACTCACTCTCCACCATTGGACGCTGAATTGTCTTTGTTGAGATACGCTCCAGCTGTTCCAGTTGGTTGGCAATTGGGTAGAAAGTTGTTGAGAATGAACACTTTGATGACTAGACCAATGGAAGGTGTTATGAGAGACGACGTTGTTATCCCAAACTTGGACGGTACTGCTAACATCAGATTGTTCATCTGTAGACCACAAGACCCAACTGAAACTATGCCAGTTATCTTGTGGTTGCACGGTGGTGGTATGGTTGCTGGTCACTACAAGCAAGACTCTGGTTTCATGGACATCTGGGCTAAGAGATTGGGTGCTTTCGTTGTTTCTGTTGACTACAGATTGGCTCCAGAAGCTAAGGCTCCAGCTGCTTTGGACGACTGTATCGCTGCTTGGCAATGGATCACTACTCAAACTGCTAGAGGTATCGACACTACTAGAATGGCTGTTGGTGGTGCTTCTGCTGGTGGTGGTTTGGCTGCTTCTACTGTTCAAAGATTGGTTGACTTGGGTGGTGTTAAGCCAGTTTTCCAATTGTTGATCTACCCAATGTTGGACGACAGAACTGTTGTTAGATTCGACCCAGACAGAAGATACTACATGTGGACTCCAGACTGTAACAGATACGGTTGGACTTCTTACTTGGGTGTTCCACCAGGTTCTGCTGAAGTTCCACCATACGCTTCTGCTGCTAGAAGACCAGACTTGTCTGGTTTGCCACCAACTTGGATCGGTGTTGGTTCTTTGGACTTGTTCCACGACGAAGACATGGACTACGCTAGAAGATTGAGAGAATCTGGTGTTCCAGTTGAAGAATACGTTGCTGTTGGTGCTCCACACGCTTTCGACACTATCTACGGTAAGGCTAAGGTTACTTTGGACTTCTGGGACTCTCACTTCAACGCTTTGAGAAGAGCTTTGTGTTTGGACTAA

SEQ ID NO 27:罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-EST_wt

ATGCCTTCCAATCTCCCCCGACCAGCATATGACCCGGAAATAGAGCCATTCCTCTCTATGGTCCCATTACCACCAACAATCAATGCGGATATCATGAGAGAACTGCGTAAAGCGCCTCTACTCAGTCAAGCGCCTGACCTCGACGCATTACTTTCCGGCAAACCAATAACTCACCGCGAAGTCAGCATTCCAGGTCTCAATTCTTCAGATCCACAAATCACGTTGTCGATATTCTCCAGTACATTGACGAGCGGTCCAAAACCATGTATTTATTTCGTTCATGGTGGCGGTATGATCATCGGATGTCGATTCGTGGGTATTGAGGATTATCTTCAGTACGTCGAGCAGAATGACGCTGTCGTCGTGGCTGTGGAATATCGTCTTGCGCCGGAAAATCCAGATCCAGCGCCTGTCAATGATTGTTACGCTGGACTTCTATGGACCGCAGCAAATGCTGCAGAACTGGGCATTGATCTGGAGAGACTGTTGATCTGTGGCGCTTCTGCCGGTGGTGGTCTTTCTGCTGGAGTGGCTTTGATGGCGCGAGACAAGAAAGGTCCGAAACTGGTAGGACAATTGTTATGTTATCCGATGCTCGACGATAGGAATGATTCCCTTTCAAGTCAGCAGTACGTCGATGAAGGTGTTTGGAGTCGTGGTAGCAATGCATTCGGGTGGAAGCAATTGCTTGGAGACAGGGCAGGCAAAGAAGGTGTCAGCATCTATGCTGCACCGGCGAGGGCAACTGATTTGAGCGGACTGCCGAACACTTTCATCGACGTTGGCAGCGCTGAAGTCTTCAGGGATGAGGACATCGCTTATGCCTCGAGGTTATGGGCTGTCGGTGTCCAAGCAGAACTTCATGTGTGGCCGGGTGGATATCATGCTGCGGAAAACATGGCACCGGGGACTGACTACTCTAACAAGGTGAAAGCTGCCCGCTTGGCATGGATGAAGAGAGTCTTCATGAAAGCCCCAAAGTCGACGACAGAGTCGTTACCTGCTCCAACAGTGGATGAAGCTGTTGGCACAATATGA

SEQ ID NO 28:罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-EST_wt

MPSNLPRPAYDPEIEPFLSMVPLPPTINADIMRELRKAPLLSQAPDLDALLSGKPITHREVSIPGLNSSDPQITLSIFSSTLTSGPKPCIYFVHGGGMIIGCRFVGIEDYLQYVEQNDAVVVAVEYRLAPENPDPAPVNDCYAGLLWTAANAAELGIDLERLLICGASAGGGLSAGVALMARDKKGPKLVGQLLCYPMLDDRNDSLSSQQYVDEGVWSRGSNAFGWKQLLGDRAGKEGVSIYAAPARATDLSGLPNTFIDVGSAEVFRDEDIAYASRLWAVGVQAELHVWPGGYHAAENMAPGTDYSNKVKAARLAWMKRVFMKAPKSTTESLPAPTVDEAVGTI

SEQ ID NO 29:罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-EST_大肠杆菌，经优化的

ATGCCAAGCAACTTGCCGCGCCCAGCCTACGATCCGGAAATTGAGCCTTTTCTGTCTATGGTCCCGCTGCCGCCGACCATCAACGCGGACATTATGCGTGAGCTGCGTAAAGCCCCGCTGCTGAGCCAGGCACCGGACCTCGACGCACTGCTGAGCGGCAAGCCGATCACTCACCGTGAAGTCAGCATTCCGGGTCTGAACAGCAGCGACCCGCAAATCACCCTGAGCATTTTCTCCAGCACGTTGACCAGCGGTCCGAAACCGTGCATCTATTTTGTGCACGGTGGCGGTATGATTATTGGTTGTCGCTTCGTCGGCATTGAAGATTATCTGCAATATGTTGAGCAAAATGACGCGGTGGTTGTGGCGGTTGAGTATCGTCTGGCCCCTGAAAATCCGGACCCGGCACCGGTTAATGATTGCTACGCGGGTCTGCTGTGGACCGCAGCGAACGCAGCGGAGCTGGGTATCGATTTGGAACGCCTGCTGATCTGTGGCGCGAGCGCTGGCGGTGGTCTGAGCGCGGGTGTGGCGCTGATGGCTCGCGACAAAAAGGGTCCAAAACTGGTCGGTCAGCTGTTGTGCTACCCGATGCTGGACGATCGTAACGACAGCTTGAGCTCTCAACAGTACGTCGATGAGGGTGTTTGGAGCCGTGGCAGCAATGCTTTCGGCTGGAAACAGCTGCTGGGCGATCGTGCGGGTAAGGAAGGCGTGTCGATCTATGCCGCTCCGGCACGCGCAACCGATCTGTCTGGCCTGCCGAACACGTTCATCGATGTCGGTAGCGCTGAGGTGTTTCGTGACGAAGATATCGCGTACGCCTCACGTCTGTGGGCCGTCGGTGTGCAGGCCGAGCTGCATGTTTGGCCGGGTGGCTACCATGCAGCCGAGAATATGGCGCCTGGCACCGACTACTCCAATAAAGTGAAGGCAGCGCGCCTGGCGTGGATGAAGCGTGTGTTTATGAAAGCGCCGAAGTCCACGACCGAGAGCCTGCCGGCACCGACCGTTGACGAAGCGGTTGGTACGATTTAA

SEQ ID NO 30:纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-EST_wt

ATGCCTTCCAATCTCCCTCGACCAGCATATGACCCGGAAATAGAGCCATTCCTCTCTATGGTCCCATTACCACCAACAATCAATGCGGATATCATGAGAGAACTGCGTAAAGCACCTCTACTCAGTCAAGCGCCTGACCTCGACGCATTACTTTCCGGCAGACCGATAACTCACCGCGAAGTCAGCATTCCAGGTCTCAATTCCCAGGATCCACAAATCACGTTGTCAATATTCTCCAGTACATTGACGAGCGGTCCAAAACCATGTATTTATTTCGTTCATGGTGGCGGTATGATCATCGGATGTCGATTCGTGGGTATTGAGGATTATCTTCAATACGTCGAGCAGAACGACGCTGTCGTTGTGGCTGTGGAATATCGTCTTGCTCCGGAAAACCCGGACCCAGCGCCTGTTAATGATTGTTACGCCGGACTTTTATGGACCGCAGCGAATGCTGCAGAGCTAGGCATCGATCTGGAGAGACTGTTGATCTGTGGCGCTTCTGCCGGTGGTGGTCTTTCTGCTGGAGTGGCATTGATGGCACGAGACAAGAAAGGTCCAAAATTGGTAGGACAATTGTTATGCTATCCAATGCTCGACGATAGGAATGATTCACTCTCAAGTCAGCAGTACGTGGATGAAGGTGTTTGGAGTCGTGGTAGCAATGCATTTGGCTGGAAGCAATTGCTTGGAGACAGGGCGGGCAAAGAGGGAGTCAGTATTTATGCTGCGCCGGCAAGAGCAACTGATTTGAGCGGACTGCCGAACACTTTCATCGACGTTGGCAGCGCTGAGGTCTTCAGGGATGAGGACATCGCTTATGCCTCGAGGTTATGGGCTGTCGGTGTCCAAGCAGAACTTCATGTGTGGCCCGGTGGATATCATGCTGCGGAGAACATGGCACCGGGGACTGACTACTCTAAGAAGGTGAAAGCTGCGCGCTTGGCATGGATGAAGAGAGTCTTCCTGAAAGCCCCAAAGCCGACGACTGAGTCGTTGCCTGCTCCAACAGTGGATGAAGCTGTTGGCACAATATGA

SEQ ID NO 31:纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-EST_wt

MPSNLPRPAYDPEIEPFLSMVPLPPTINADIMRELRKAPLLSQAPDLDALLSGRPITHREVSIPGLNSQDPQITLSIFSSTLTSGPKPCIYFVHGGGMIIGCRFVGIEDYLQYVEQNDAVVVAVEYRLAPENPDPAPVNDCYAGLLWTAANAAELGIDLERLLICGASAGGGLSAGVALMARDKKGPKLVGQLLCYPMLDDRNDSLSSQQYVDEGVWSRGSNAFGWKQLLGDRAGKEGVSIYAAPARATDLSGLPNTFIDVGSAEVFRDEDIAYASRLWAVGVQAELHVWPGGYHAAENMAPGTDYSKKVKAARLAWMKRVFLKAPKPTTESLPAPTVDEAVGTI

SEQ ID NO 32:纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-EST_大肠杆菌，经优化的

ATGCCATCGAATCTGCCGCGTCCAGCCTACGACCCTGAAATTGAACCTTTCTTGAGCATGGTGCCGCTGCCGCCGACGATTAACGCTGATATCATGCGTGAGCTGCGCAAGGCACCGCTGCTGAGCCAAGCGCCGGACCTGGATGCGCTGTTGAGCGGTCGCCCGATCACCCACCGCGAAGTCAGCATCCCGGGTCTGAACTCTCAGGACCCGCAGATCACCTTGTCAATCTTTAGCAGCACCTTGACTTCCGGTCCGAAGCCGTGCATTTATTTTGTCCACGGTGGTGGCATGATTATCGGCTGTCGTTTCGTTGGTATTGAAGATTACTTACAATATGTGGAACAAAATGATGCAGTGGTTGTGGCAGTGGAGTACCGCCTGGCGCCTGAGAACCCGGACCCAGCGCCGGTGAACGACTGCTACGCGGGTCTGTTGTGGACGGCAGCTAACGCAGCAGAGCTGGGTATCGATCTGGAGCGCCTGCTGATCTGCGGTGCGAGCGCGGGTGGCGGCCTGTCCGCTGGCGTTGCGCTGATGGCCCGTGACAAAAAGGGTCCGAAACTGGTTGGCCAGCTGCTGTGTTATCCGATGCTGGACGACCGTAATGACAGCCTGAGCAGCCAGCAATACGTGGATGAGGGCGTCTGGAGCCGTGGTAGCAATGCGTTCGGTTGGAAGCAACTGCTGGGCGATCGTGCCGGCAAAGAGGGCGTTAGCATCTATGCGGCACCGGCGCGTGCCACGGATCTGTCTGGTCTGCCGAACACCTTCATTGACGTTGGTAGCGCTGAAGTTTTTCGCGATGAAGATATTGCGTACGCGAGCCGTCTGTGGGCAGTCGGCGTCCAGGCAGAGCTCCATGTCTGGCCGGGTGGCTATCATGCGGCCGAGAATATGGCACCGGGTACGGACTACAGCAAAAAAGTTAAAGCTGCGCGTCTGGCCTGGATGAAGCGTGTTTTCCTGAAAGCGCCGAAGCCGACCACCGAGTCCCTGCCGGCACCGACCGTGGATGAAGCCGTGGGCACCATTTAA

SEQ ID NO 33:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_wt

ATGAATCTCAACGAAGCCCGAACTGCTTTCGCCCGGCTCCGTGCAGCGGAAAATGGTTTATCACCAGCAGAACTCGACGAAGTGTGGGCCGCGCTGGAAACCGTCGCCGCTGAAGAAATCCTCGGTGAGTGGAAAGGTGACGACTTCGCCACCGGTCATCGTCTGCACGAAAAGCTGTCCGCGAGCCGCTGGTACGGCAAGACTTTCAATTCCGTCGAGGATGCCAAGCCGTTGATCTGCCGAGACGAAGACGGAAATCTCTATTCCGACGTCAAGAGCGGCAATGGCGAGGCAAGTCTGTGGAACATCGAGTTTCGTGGTGAAGTGACCGCGACCATGGTCTACGACGGCGCGCCGATTTTCGACCACTTCAAGAAAGTCGACGATTCGACGCTCATGGGCATCATGAACGGAAAGTCGGCGTTGGTCCTCGACGGCGGGCAGCACTACTACTTCCTGCTCGAGCGAGCGTGA

SEQ ID NO 34:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_wt(WP_ 042451379)

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 35:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 36:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_酵母，经优化的

ATGAACTTGGACGAAGCTAGAACTGCTTTCGCTAGATTGAGAGCTGCTGAATCTGGTGTTTCTCCAGCTGAATTGGACGAAGTTTGGGCTGCTTTGGAAACTGTTGCTGCTGAAGAAATCTTGGGTGAATGGAAGGGTGACGACTTCGCTACTGGTCACAGATTGCACGAAAAGTTGTTCGCTTCTAGATGGTACGGTAAGACTTTCAACTCTGTTGAAGACGCTAAGCCATTGATCTGTAGAGACGAAGACGGTAACTTGTACTCTGACGTTAAGTCTGGTAACGGTGAAGCTTCTTTGTGGAACATCGAATTCAGAGGTGAAGTTACTGCTACTATGGTTTACGACGGTGCTCCAATCTTCGACCACTTCAAGAAGGTTGACGACTCTACTTTGATGGGTATCATGAACGGTAAGTCTGCTTTGGTTTTGGACGGTGGTCAACACTACTACTTCTTGTTGGAAAGAGCTTAA

SEQ ID NO 37:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_wt

ATGAATCTCGACGAAGCCCGAACTGCTTTCGCCCGGCTCCGTGCTGCGGAAAGTGGTGTATCACCAGCAGAACTCGACGAAGTGTGGGCCGCGCTGGAAACCGTCGCCGCCGAAGAAATCCTCGGCGAGTGGAAGGGTGACGACTTCGCCACCGGTCACCGTCTTCACGAAAAGCTGTTCGCGAGCCGTTGGTACGGCAAGACCTTCAACTCGGTCGAGGACGCCAAGCCGTTGATCTGCCGAGACGAAGACGGCAACCTCTACTCCGACGTCAAGAGCGGCAATGGCGAGGCAAGTCTGTGGAACATCGAGTTTCGTGGCGAAGTCACGGCGACGATGGTCTACGACGGCGCGCCGATCTTCGACCACTTCAAGAAGGTCGACGATTCGACGCTCATGGGCATCATGAACGGAAAATCGGCGTTGGTTCTCGACGGCGGACAGCACTACTACTTCCTGCTCGAGCGAGCGTGA

SEQ ID NO 38:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_wt

MNLDEARTAFARLRAAESGVSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLFASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA*

SEQ ID NO 39:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_大肠杆菌，经优化的

ATGAATCTGGACGAAGCCCGTACTGCTTTCGCCCGTCTGCGCGCTGCTGAATCTGGTGTTAGCCCGGCAGAGCTGGACGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAAACCGTTGCGGCGGAAGAAATTCTGGGTGAGTGGAAGGGCGATGACTTCGCAACGGGCCATCGCTTGCACGAGAAATTGTTCGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTTAACAGCGTCGAAGATGCGAAACCGCTGATCTGCCGTGATGAAGATGGCAACCTGTACAGCGACGTCAAGAGCGGTAATGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGTGGCGAAGTGACCGCGACGATGGTGTACGACGGTGCACCGATTTTTGATCATTTCAAAAAAGTCGATGACAGCACCCTGATGGGCATCATGAACGGTAAGTCCGCGCTGGTTCTGGACGGTGGCCAGCACTATTACTTTCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 40:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_酵母，经优化的

ATGAACTTGAACGAAGCTAGAACTGCTTTCGCTAGATTGAGAGCTGCTGAAAACGGTTTGTCTCCAGCTGAATTGGACGAAGTTTGGGCTGCTTTGGAAACTGTTGCTGCTGAAGAAATCTTGGGTGAATGGAAGGGTGACGACTTCGCTACTGGTCACAGATTGCACGAAAAGTTGTCTGCTTCTAGATGGTACGGTAAGACTTTCAACTCTGTTGAAGACGCTAAGCCATTGATCTGTAGAGACGAAGACGGTAACTTGTACTCTGACGTTAAGTCTGGTAACGGTGAAGCTTCTTTGTGGAACATCGAATTCAGAGGTGAAGTTACTGCTACTATGGTTTACGACGGTGCTCCAATCTTCGACCACTTCAAGAAGGTTGACGACTCTACTTTGATGGGTATCATGAACGGTAAGTCTGCTTTGGTTTTGGACGGTGGTCAACACTACTACTTCTTGTTGGAAAGAGCTTAA

SEQ ID NO 41:指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_wt

ATGTCCACAAGCACCCCACAGGATCAGTTTGCTGCCCTAGTTGCAAAAAACAGCAAGTTGAATGAAACCGACATCGAGGCTGTTTATAACAAGCTTTCAGCTCTTCCCGTCGATTTCCTCCGTGGAGAATGGAAGGGTGGAAGCTTCGACACCGGCCACCCAGGCCACACCCAGCTTTTGGCTATGAACTGGGTTGGAAAGACGTTCCACGATACCGAGCGCGTCGACCCTATTGTTGTGTTAAAGGATGGAAAGCGTGTATGCGATGAGAACTGGGGCCATGCTATCGTCCGTGAGGTTCGTTTCCGTGGTATTGTGTCAACCGCTATGATCTATGACAAGCACCCTATCATTGATCACTTCCGCTATGTTAATGAGAACCTCGTTGCTGGCGCCATGGACACTAGCTCCTTCGGTGACGTTGGTACCTACTACTTCTACCTATACAAATAG

SEQ ID NO 42:指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_wt

MSTSTPQDQFAALVAKNSKLNETDIEAVYNKLSALPVDFLRGEWKGGSFDTGHPGHTQLLAMNWVGKTFHDTERVDPIVVLKDGKRVCDENWGHAIVREVRFRGIVSTAMIYDKHPIIDHFRYVNENLVAGAMDTSSFGDVGTYYFYLYK*

SEQ ID NO 43:指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_大肠杆菌，经优化的

ATGTCCACTAGCACCCCACAAGATCAATTTGCCGCACTGGTTGCCAAAAACTCTAAACTGAATGAAACCGACATTGAAGCTGTCTATAACAAGTTGAGCGCGTTGCCGGTGGATTTCCTGCGTGGCGAGTGGAAGGGCGGCAGCTTCGACACCGGTCACCCGGGTCACACGCAGCTGCTGGCAATGAATTGGGTCGGTAAGACCTTTCATGATACCGAGCGTGTGGACCCGATCGTCGTTCTGAAGGACGGTAAACGTGTGTGCGACGAGAATTGGGGTCACGCGATCGTTCGCGAAGTTCGCTTCCGTGGTATCGTGAGCACCGCGATGATCTATGATAAACACCCGATTATTGATCATTTCCGCTATGTTAACGAAAACCTGGTCGCGGGTGCGATGGATACGTCGAGCTTTGGCGACGTGGGCACGTACTACTTTTACCTGTACAAATAA

SEQ ID NO 44:指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_酵母，经优化的

ATGTCTACTTCTACTCCACAAGACCAATTCGCTGCTTTGGTTGCTAAGAACTCTAAGTTGAACGAAACTGACATCGAAGCTGTTTACAACAAGTTGTCTGCTTTGCCAGTTGACTTCTTGAGAGGTGAATGGAAGGGTGGTTCTTTCGACACTGGTCACCCAGGTCACACTCAATTGTTGGCTATGAACTGGGTTGGTAAGACTTTCCACGACACTGAAAGAGTTGACCCAATCGTTGTTTTGAAGGACGGTAAGAGAGTTTGTGACGAAAACTGGGGTCACGCTATCGTTAGAGAAGTTAGATTCAGAGGTATCGTTTCTACTGCTATGATCTACGACAAGCACCCAATCATCGACCACTTCAGATACGTTAACGAAAACTTGGTTGCTGGTGCTATGGACACTTCTTCTTTCGGTGACGTTGGTACTTACTACTTCTACTTGTACAAGTAA

SEQ ID NO 45:意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF4334-1_wt (JQGA01001114.171518-72084(+))

ATGTCGGCCAGTGACCCCAAGGACCAGTTTGCTGCCCTAGTTGCCAAGGACGGCAAGTTGAATGAAGACGAAATCGAGGCTGTTTACAACAAGCTTCCTGCTCTTCCCCTCGATTTCCTCCGTGGAGAATGGAAGGGTGGAAGCTTCGACACCGGTCACCCTGGTCACACCCAACTCTTGGCAATGAAATGGGTTGGGAAGACATTCCATTCCACCGAACGGGTTGACCCTATTGTTGTGTTAAAGGATGAAAAGCGTGTATGCAATGAGGACTGGGGCCATGCAGTCCTCCGTGAGATTCGTTTCCGTGGTATTGTGTCATCTGCTATGATCTATGACAAGCACCCTATCATCGACCACTTCCGCTATGTCAACGACAAGCTCATTGCTGGCGCCATGGACACTAGCAGCTTCGGTGACGTTGGCACCTACTACTTCTACCTGTGCAAATAG

SEQ ID NO 46:意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF4334-1_wt (KGO69886.1)

MSASDPKDQFAALVAKDGKLNEDEIEAVYNKLPALPLDFLRGEWKGGSFDTGHPGHTQLLAMKWVGKTFHSTERVDPIVVLKDEKRVCNEDWGHAVLREIRFRGIVSSAMIYDKHPIIDHFRYVNDKLIAGAMDTSSFGDVGTYYFYLCK*

SEQ ID NO 47:意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF4334-1_大肠杆菌，经优化的

ATGAGCGCTTCGGACCCAAAAGATCAATTCGCAGCATTGGTGGCAAAGGACGGTAAACTGAACGAAGATGAAATCGAAGCCGTCTATAACAAGCTGCCTGCGCTGCCGCTGGACTTCTTGCGTGGTGAGTGGAAGGGCGGCAGCTTTGATACCGGTCATCCGGGCCACACTCAGCTGCTGGCGATGAAATGGGTGGGTAAAACCTTTCACAGCACCGAGCGCGTGGACCCGATCGTCGTTCTGAAAGATGAGAAGCGTGTCTGTAATGAAGATTGGGGTCACGCCGTGCTGCGCGAGATTCGTTTTCGCGGTATCGTTTCTAGCGCGATGATTTATGACAAGCATCCGATTATTGACCACTTCCGTTACGTTAATGACAAGCTGATCGCGGGTGCGATGGATACGTCCAGCTTTGGCGACGTTGGCACGTACTATTTCTACCTGTGCAAATAA

SEQ ID NO 48:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF4334_wt (LJSE01000065.1(263404至263924))

ATGAGCTGTTGCACCGCCGAGGACCAGGCCAAACGGCTCTTCGAAGCGACCAGCCCCGTCCAACCATCAGCAGTCGAAGAACTCTTCAACCAACTCCAACCGATAAAGCCCTCATTCCTGATTGGCGAATGGGACGGAAATAGCCTGGACACCGGCCATCCCGGTCTCAAGCTGCTCCAGGCGATGCGGTGGGCGGGTAAGACATTTCGATCCGTGGATGACGCCGATCCGATTGTGACGCTGGACGATGCTGGCAATCGCATCTGGAAAGAGGAGTACGGTAATGCTGTGGTACGAGAAATGGCGTTTCGCGGAGTCGTTTCGGCGGCGATGATCTACGACACCAAGCCCATCATGGACCATTTTCGATACGTGGACGAAAAGACAGTGCTGGGTGTGATGGAAACCCCCAAGCAGGCTGGAAGCGGAACCTTTTATTTCTATCTGCAGCGTCGTGCTTCTGTCTAA

SEQ ID NO 49:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF4334_wt(OJJ43591)

MSCCTAEDQAKRLFEATSPVQPSAVEELFNQLQPIKPSFLIGEWDGNSLDTGHPGLKLLQAMRWAGKTFRSVDDADPIVTLDDAGNRIWKEEYGNAVVREMAFRGVVSAAMIYDTKPIMDHFRYVDEKTVLGVMETPKQAGSGTFYFYLQRRASV

SEQ ID NO 50:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGTCGTGTTGCACCGCCGAAGATCAAGCCAAACGTCTGTTCGAAGCCACTAGCCCGGTTCAACCGAGCGCGGTCGAAGAACTGTTCAATCAGCTGCAACCGATTAAGCCTTCCTTCCTGATCGGTGAGTGGGATGGCAACAGCCTGGATACCGGTCATCCGGGCTTGAAGCTGCTGCAGGCAATGCGCTGGGCGGGTAAGACCTTTCGTTCTGTGGATGACGCTGACCCAATTGTTACCCTGGACGACGCGGGTAATCGTATTTGGAAAGAGGAATACGGTAACGCAGTGGTTCGCGAGATGGCGTTTCGTGGTGTGGTCAGCGCGGCAATGATCTATGACACGAAGCCGATCATGGATCACTTTCGCTATGTTGACGAGAAAACGGTCCTGGGCGTGATGGAAACGCCGAAACAGGCTGGTAGCGGCACCTTCTACTTTTACTTGCAGCGTCGTGCGAGCGTCTAA

SEQ ID NO 51:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF4334_酵母，经优化的

ATGTCTTGTTGTACTGCTGAAGACCAAGCTAAGAGATTGTTCGAAGCTACTTCTCCAGTTCAACCATCTGCTGTTGAAGAATTGTTCAACCAATTGCAACCAATCAAGCCATCTTTCTTGATCGGTGAATGGGACGGTAACTCTTTGGACACTGGTCACCCAGGTTTGAAGTTGTTGCAAGCTATGAGATGGGCTGGTAAGACTTTCAGATCTGTTGACGACGCTGACCCAATCGTTACTTTGGACGACGCTGGTAACAGAATCTGGAAGGAAGAATACGGTAACGCTGTTGTTAGAGAAATGGCTTTCAGAGGTGTTGTTTCTGCTGCTATGATCTACGACACTAAGCCAATCATGGACCACTTCAGATACGTTGACGAAAAGACTGTTTTGGGTGTTATGGAAACTCCAAAGCAAGCTGGTTCTGGTACTTTCTACTTCTACTTGCAAAGAAGAGCTTCTGTTTAA

SEQ ID NO 52:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288_RhoagDUF4334- 2_wt(NZ_LWTW01000167.1 18658-19134(-))

ATGAACGTACGAGACGAGGTCGCCGCGCTGCGGGCGCGCACCGACCGGATCGATCCGCGGGAACTCGATTCGATCTGGGACCGCTTGGCCCCGTGTCGGCCCGTGGATCTGATCGGGTACCGCTGGAGGGGTTTCGACTTCGACACCGGACATCGCACGAGTGGGCTCCTCCGTCGAGCTCATTGGTACGGCAAGGCATTCGCCAGCGAGTCCGACGTGCAGCCTCTGCTGTGCCGCAGCGAGGACGGACAGCTGTTCTCCGACATCGGAACCGGGCACGGCGAGGCCAGCCTGTGGGAGGTCGTGTTCCGCGGGGAGGTGACCGCGACGATGGTCTACGACGGCATGCCGGTGTTCGACCACTTCAAGAAGGTCGACGACGACACCGTCATCGGCGTCATGAACGGCAAGGGCACGTTGGTGTTCGACGGCGGCGAACACTTCTGGTTCGGGCTGGAGCGAGACGTCGCACTCTGA

SEQ ID NO 53:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288_RhoagDUF4334- 2_wt(WP_005516054)

MNVRDEVAALRARTDRIDPRELDSIWDRLAPCRPVDLIGYRWRGFDFDTGHRTSGLLRRAHWYGKAFASESDVQPLLCRSEDGQLFSDIGTGHGEASLWEVVFRGEVTATMVYDGMPVFDHFKKVDDDTVIGVMNGKGTLVFDGGEHFWFGLERDVAL*

SEQ ID NO 54:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288_RhoagDUF4334- 2_大肠杆菌，经优化的

ATGAATGTTCGTGATGAAGTTGCAGCTCTGCGTGCCCGTACTGATAGAATCGACCCGCGTGAGCTGGATAGCATTTGGGACCGTCTGGCACCATGTCGTCCGGTGGACCTGATCGGTTACCGTTGGCGCGGTTTCGATTTCGACACCGGTCACCGTACCTCCGGTCTGTTGCGTCGCGCGCATTGGTATGGTAAGGCCTTTGCGAGCGAGAGCGACGTGCAACCGTTGCTGTGCCGCTCTGAGGACGGCCAGCTGTTTAGCGATATTGGCACCGGTCACGGTGAGGCGAGCCTGTGGGAAGTTGTCTTTCGCGGCGAAGTGACCGCGACGATGGTTTACGACGGTATGCCGGTGTTCGACCACTTCAAAAAAGTTGATGACGACACGGTGATCGGTGTCATGAACGGCAAGGGCACGCTGGTCTTTGATGGTGGCGAGCATTTCTGGTTTGGCCTGGAACGCGATGTCGCGCTGTAA

SEQ ID NO 55:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株N128_RhoagDUF4334-3_wt (NZ_LRQY01000021.1 163210-163686(-))

ATGAACGTACGAGACGAGGTCGCCGCGCTGCGGGCGCGCACCGACCGGATCGATCCGCGGGAACTCGATTCGATCTGGGACCGCTTGGCCCCGTGTCGGCCCGTGGATCTGATCGGGTACCGCTGGAGGGGTTTCGACTTCGACACCGGACATCGCACGAGTGGGCTCCTCCGTCGAGCTCATTGGTACGGCAAGGCATTCGCCAGCGAGTCCGACGTGCAGCCTCTGCTGTGCCGCAGCGACGACGGACAGCTGTTCTCCGACATCGGAACCGGGCACGGCGAGGCCAGCCTGTGGGAGGTCGTGTTCCGCGGGGAGGTGACCGCGACGATGGTCTACGACGGCATGCCGGTGTTCGACCACTTCAAGAAGGTCGACGACGACACCGTCATCGGCGTCATGAACGGCAAGGGCACGTTGGTGTTCGACGGCGGCGAACACTTCTGGTTCGGGCTGGAGCGAGACGTCGCACTCTGA

SEQ ID NO 56:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株N128_RhoagDUF4334-3_wt (WP_013414658)

MNVRDEVAALRARTDRIDPRELDSIWDRLAPCRPVDLIGYRWRGFDFDTGHRTSGLLRRAHWYGKAFASESDVQPLLCRSDDGQLFSDIGTGHGEASLWEVVFRGEVTATMVYDGMPVFDHFKKVDDDTVIGVMNGKGTLVFDGGEHFWFGLERDVAL*

SEQ ID NO 57:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株N128_RhoagDUF4334-3_大肠杆菌，经优化的

ATGAATGTTCGTGATGAAGTTGCAGCTCTGCGTGCCCGTACTGATAGAATCGACCCGCGTGAGCTGGATAGCATTTGGGACCGTCTGGCACCATGTCGTCCGGTGGACCTGATCGGTTACCGTTGGCGCGGTTTCGATTTCGACACCGGTCACCGTACCTCCGGTCTGTTGCGTCGCGCGCATTGGTATGGTAAGGCCTTTGCGAGCGAGAGCGACGTGCAACCGTTGCTGTGCCGCTCTGATGACGGCCAGCTGTTTAGCGATATTGGCACCGGTCACGGTGAGGCGAGCCTGTGGGAAGTTGTCTTTCGCGGCGAAGTGACCGCGACGATGGTTTACGACGGTATGCCGGTGTTCGACCACTTCAAAAAAGTTGATGACGACACGGTGATCGGTGTCATGAACGGCAAGGGCACGCTGGTCTTTGATGGTGGCGAGCATTTCTGGTTTGGCCTGGAACGCGATGTCGCGCTGTAA

SEQ ID NO 58:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)_RhoagDUF4334-4_wt(NZ_ BCRL01000037.1 133790-134266(+))

ATGAACGTACGAGACGAGGTCGCCGCGCTGCGGGCGCGCACCGACCGGATCGATCCGCGGGAACTCGATTCGATCTGGGACCGCTTGGCCCCGTGTCGGCCCGTGGATCTGATCGGGTACCGCTGGCGGGGTTTCGACTTCGACACCGGACATCGCACGAGTGGGCTCCTCCGTCGAGCGCATTGGTACGGCAAGGCATTCGCCAGCGAGTCCGACGTGCAGCCTCTGCTGTGCCGCAGCGAGGACGGACAGCTGTTCTCCGACATCGGAACCGGGCACGGCGAGGCCAGCCTGTGGGAGGTCGTGTTCCGCGGGGAGGTGACCGCGACGATGGTCTACGACGGCATGCCGGTGTCCGACCACTTCAAGAAGGTCGACGACGACACCGTCATCGGCGTCATGAACGGCAAGGGCACGTTGGTGTTCGACGGCGGCGAACACTTCTGGTTCGGGCTGGAGCGAGACGTCGCACTCTGA

SEQ ID NO 59:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)_RhoagDUF4334-4_wt(WP_ 022593671)

MNVRDEVAALRARTDRIDPRELDSIWDRLAPCRPVDLIGYRWRGFDFDTGHRTSGLLRRAHWYGKAFASESDVQPLLCRSEDGQLFSDIGTGHGEASLWEVVFRGEVTATMVYDGMPVSDHFKKVDDDTVIGVMNGKGTLVFDGGEHFWFGLERDVAL*

SEQ ID NO 60:霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)_RhoagDUF4334-4_大肠杆菌，经优化的

ATGAATGTTCGTGATGAAGTTGCAGCTCTGCGTGCCCGTACTGATAGAATCGACCCGCGTGAGCTGGATAGCATTTGGGACCGTCTGGCACCATGTCGTCCGGTGGACCTGATCGGTTACCGTTGGCGCGGTTTCGATTTCGACACCGGTCACCGTACCTCCGGTCTGTTGCGTCGCGCGCATTGGTATGGTAAGGCCTTTGCGAGCGAGAGCGACGTGCAACCGTTGCTGTGCCGCTCTGAGGACGGCCAGCTGTTTAGCGATATTGGCACCGGTCACGGTGAGGCGAGCCTGTGGGAAGTTGTCTTTCGCGGCGAAGTGACCGCGACGATGGTTTACGACGGTATGCCGGTGAGCGACCACTTCAAAAAAGTTGATGACGACACGGTGATCGGTGTCATGAACGGCAAGGGCACGCTGGTCTTTGATGGTGGCGAGCATTTCTGGTTTGGCCTGGAACGCGATGTCGCGCTGTAA

SEQ ID NO 61:钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_wt (CP002879.1:512553-513138)

ATGCTGACAGAAATGCTGCGGAATCGAGTCTCTACAACTGCGGCGGTACTGGCCGCTTTCGATGAACTTGATCCATTATCGAGCGATTCGCTAGTTGGCTGCTGGAGTGGTTTTGTGATCGCTACCGGGCACCCCATGGACGGTCTTCTGAGCGCTGTCGGCTGGTACGGGAAAATGTTCCAAAGCGTGGATGAGGCATATCCGCTGATCATCCGGTCCCCGGACGCCAGTACGCTTTTTTCGATCGATCCCAGCCCTTTGCCACTTATAGGCTGCGCGAAGTTATCTCCCACGGATATGGTGTCGCGTTTTTCAACACTTTCCCCGTTGGCCCTGAGCACAACCGTCTCTCACGGTCGGCTGCGTATGGTCGAGTATCGCGGAAAGGTCACAGGAACTCTGATCTACGACCAGCAGCCGATACTCGATCATTTCGTGATGATTGATTCGCAAACGGTACTTGGAATTATGGATTTTAAAGAGTTCCCGCAGCCAGGCGCGTTTGTGCTGCAGCGCGATGACGACAGTGCCGTCAGCGTTGATCGCGGCGACTGGTCCCAACTGGCGGCGCAACGGCTCGGGTGA

SEQ ID NO 62:钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_wt(WP_ 049800708)

MLTEMLRNRVSTTAAVLAAFDELDPLSSDSLVGCWSGFVIATGHPMDGLLSAVGWYGKMFQSVDEAYPLIIRSPDASTLFSIDPSPLPLIGCAKLSPTDMVSRFSTLSPLALSTTVSHGRLRMVEYRGKVTGTLIYDQQPILDHFVMIDSQTVLGIMDFKEFPQPGAFVLQRDDDSAVSVDRGDWSQLAAQRLG*

SEQ ID NO 63:钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGTTGACTGAAATGCTGCGTAACCGTGTGTCTACCACTGCCGCTGTCCTGGCCGCTTTTGACGAGCTGGACCCGCTGTCATCCGACAGCCTGGTTGGCTGCTGGAGCGGTTTCGTTATCGCGACGGGTCACCCTATGGATGGTCTGCTGAGCGCGGTGGGCTGGTACGGTAAAATGTTCCAGAGCGTTGATGAAGCATACCCGCTGATCATCCGCTCCCCGGACGCGAGCACGCTGTTTAGCATTGATCCGTCCCCGCTGCCGCTGATTGGTTGTGCGAAGCTGTCGCCAACCGATATGGTGAGCCGCTTCAGCACCTTAAGCCCGCTGGCGCTGAGCACCACCGTATCTCACGGTCGTCTGCGTATGGTTGAGTATCGTGGTAAGGTTACCGGCACGCTCATCTATGACCAACAGCCGATTTTGGATCATTTCGTCATGATTGACAGCCAAACGGTGCTGGGCATCATGGATTTCAAAGAATTTCCGCAGCCGGGTGCGTTTGTCTTGCAGCGTGACGACGATAGCGCAGTCAGCGTGGATCGCGGCGACTGGAGCCAACTGGCAGCCCAACGCCTGGGCTAA

SEQ ID NO 64:钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_酵母，经优化的

ATGTTGACTGAAATGTTGAGAAACAGAGTTTCTACTACTGCTGCTGTTTTGGCTGCTTTCGACGAATTGGACCCATTGTCTTCTGACTCTTTGGTTGGTTGTTGGTCTGGTTTCGTTATCGCTACTGGTCACCCAATGGACGGTTTGTTGTCTGCTGTTGGTTGGTACGGTAAGATGTTCCAATCTGTTGACGAAGCTTACCCATTGATCATCAGATCTCCAGACGCTTCTACTTTGTTCTCTATCGACCCATCTCCATTGCCATTGATCGGTTGTGCTAAGTTGTCTCCAACTGACATGGTTTCTAGATTCTCTACTTTGTCTCCATTGGCTTTGTCTACTACTGTTTCTCACGGTAGATTGAGAATGGTTGAATACAGAGGTAAGGTTACTGGTACTTTGATCTACGACCAACAACCAATCTTGGACCACTTCGTTATGATCGACTCTCAAACTGTTTTGGGTATCATGGACTTCAAGGAATTCCCACAACCAGGTGCTTTCGTTTTGCAAAGAGACGACGACTCTGCTGTTTCTGTTGACAGAGGTGACTGGTCTCAATTGGCTGCTCAAAGATTGGGTTAA

SEQ ID NO 65:意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF4334-2_wt (JQGA01000120.1 65652-66635(+))

ATGACAATCCAATTCCCAATCATGTCATTCGACTGTTTCCAGCCAAGCCCAGCCAAGAAATTCGTCTCTCTCACCAAACACCCTCGGGTGACTGGTGGGAAAATCAACACCGTCTTTCCTGAGCTCAAGCCTCTTCAGCCAGACGACCTAATCGGCGAATGGGACGGATATATTCTTGTCACGGGCCACCCCTTTGAAGAAGAACTGGACACGCTGAATTGGTTCGGAAATACATTTTATTCCACCGACGACGTGGCACCGCTGACTGTTGCGCGGAACGGGGTGCGGGTGCCCTTCGAGGATTGGGGGCGTGCATCTCTACGTGAAATCAAATATCAAGGAGTCGTCTCTGCGGCTTTGGTCTATGATAAACGACCAATGATGGTCTATTATCGAGCCGTGAAACATAACATGGTGGCTGGGGGTATTGAGAGTAAAGAGTGGTAG

SEQ ID NO 66:意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF4334-2_wt (KGO77618.1)

MTIQFPIMSFDCFQPSPAKKFVSLTKHPRVTGGKINTVFPELKPLQPDDLIGEWDGYILVTGHPFEEELDTLNWFGNTFYSTDDVAPLTVARNGVRVPFEDWGRASLREIKYQGVVSAALVYDKRPMMVYYRAVKHNMVAGGIESKEW*

SEQ ID NO 67:意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF4334-2_大肠杆菌，经优化的

ATGACCATTCAATTTCCTATCATGTCTTTTGATTGTTTTCAGCCGAGCCCAGCGAAGAAATTCGTGAGCTTGACGAAACATCCGCGTGTTACCGGTGGCAAGATCAATACGGTTTTCCCGGAACTGAAACCGCTGCAACCGGACGACCTGATCGGTGAGTGGGACGGTTACATTCTGGTGACGGGCCACCCGTTCGAAGAAGAACTGGATACCTTGAACTGGTTCGGCAATACTTTCTATAGCACCGACGATGTCGCTCCGCTGACCGTCGCCCGCAACGGTGTGCGTGTTCCGTTTGAGGATTGGGGTCGTGCGTCCCTGCGTGAGATCAAGTACCAGGGTGTGGTTAGCGCAGCGCTGGTCTACGACAAACGCCCGATGATGGTGTATTATCGCGCAGTTAAGCACAACATGGTCGCGGGTGGCATTGAGAGCAAAGAGTGGTAA

SEQ ID NO 68:谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)_Rins-DUF4334_wt (NZ_PKPC01000002.1 18273-18773(-))

ATGAACACGAAGCAGAAATTCGATCAACTCAAGAGCACGGAACGCCTGAATGACGAAATCCTGTTGGAGTTCTTCGACACCCTTCCCCCCGTTTCTACGGACGAAGCGCTGGGTCGCTGGAAAGGCGGTGACTTCAATACGGGGCATTGGGGCAACCTCGCTCTGAAAGCAAGGAAGTGGTACGGAAAGTGGTATCGCAGCAAGCTGGATGCGGTACCGCTTATCTGTTACGACGACCAAGGCCGCCTATATTCCAGCAAGGCCATGAAGGGCGAAGCGTCGCTTTGGGATGTGGCGTTCCGCGGAAAGGTCTCGACCACCATGATCTACGACGGCGTGCCGATCTTCGATCATTTGCGCAAGGTCGACGAGAACACGCTGTTCGGCATCATGGATGGCAAATCGTTTGAGGGGTCCCCCGACATCATCGACCGCGGCAAGTACTACTTTTTCTACCTCGAGAGGGTAGACAGCTTCCCGGCCGAATATCTGGAAGGCTGA

SEQ ID NO 69:谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)_Rins-DUF4334_wt (WP_104654734)

MNTKQKFDQLKSTERLNDEILLEFFDTLPPVSTDEALGRWKGGDFNTGHWGNLALKARKWYGKWYRSKLDAVPLICYDDQGRLYSSKAMKGEASLWDVAFRGKVSTTMIYDGVPIFDHLRKVDENTLFGIMDGKSFEGSPDIIDRGKYYFFYLERVDSFPAEYLEG*

SEQ ID NO 70:谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)_Rins-DUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGAACACCAAGCAAAAGTTTGACCAGCTGAAGTCCACCGAGCGCCTGAATGATGAAATCCTGTTGGAATTTTTCGATACCCTGCCTCCGGTGAGCACCGATGAAGCGCTGGGCCGTTGGAAGGGTGGCGACTTCAATACGGGTCATTGGGGTAACCTGGCCCTGAAAGCGCGTAAATGGTACGGCAAATGGTATCGCAGCAAACTGGACGCAGTTCCACTGATTTGCTATGACGATCAGGGCCGTCTGTACTCTAGCAAGGCTATGAAAGGTGAGGCGAGCCTGTGGGATGTTGCGTTTCGTGGTAAAGTGAGCACGACTATGATCTACGACGGTGTCCCGATTTTCGACCACTTGCGTAAAGTCGATGAGAACACGCTGTTTGGTATCATGGATGGTAAGTCGTTCGAGGGTAGCCCGGACATTATCGACCGTGGCAAGTACTATTTCTTTTATCTGGAGCGCGTTGACAGCTTCCCGGCAGAGTACCTGGAAGGCTAA

SEQ ID NO 71:格特隐球菌(Cryptococcus gattii)EJB2_CgatDUF4334_wt (KN848661.1 262486-263032(-))

ATGTCCCCTCAGGAACAGTATATTGCTCTCGTCCAGGCCGGCGGCAAGTCGGACCCATCCACCATTGAAGCTCTTTTCCAAGCGCTTCCGCCGGTCAAGCCCACTCAGCTGCTAGGCGACTGGAATCACGGCGGATTTTTCGACACAGGCCATCCGGTTAACGAGCAACTCAAAGAGATTAAATGGATTGGAAAGTCATTTAAGTCCGTCGAAGATGTTGATCCTGTGATTATTGACCAGGATGGTAAGCCAACTAGCTGGAGGAAGTGGGGGTCAGCCAGCCTGCGAGAGATGGTGTATGAAGGCACTGTATCAACGTCGATGATATATGATGACCGACCAATCATCGATCACTTCCGCTACGTAGATGACGACTTTATGGCGGGGATAATGGAAGGGAAGGCTCTGGGGGAGGCGGGGAAGTTTTATTTCTATTTGAGAAGATAG

SEQ ID NO 72:格特隐球菌(Cryptococcus gattii)EJB2_CgatDUF4334_wt (KIR80015)

MSPQEQYIALVQAGGKSDPSTIEALFQALPPVKPTQLLGDWNHGGFFDTGHPVNEQLKEIKWIGKSFKSVEDVDPVIIDQDGKPTSWRKWGSASLREMVYEGTVSTSMIYDDRPIIDHFRYVDDDFMAGIMEGKALGEAGKFYFYLRR*

SEQ ID NO 73:格特隐球菌(Cryptococcus gattii)EJB2_CgatDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGAGCCCACAAGAACAATACATTGCATTAGTCCAGGCCGGTGGTAAGAGCGATCCTAGCACGATCGAAGCGCTGTTTCAGGCATTGCCGCCGGTTAAACCGACCCAGCTGCTGGGCGATTGGAATCACGGTGGCTTCTTTGACACGGGCCATCCGGTGAACGAACAACTGAAAGAAATCAAGTGGATTGGCAAATCCTTCAAATCGGTCGAAGATGTTGATCCGGTGATCATCGACCAGGACGGTAAGCCGACTAGCTGGCGTAAGTGGGGTTCTGCGAGCCTGCGTGAGATGGTTTATGAGGGCACCGTGAGCACCAGCATGATTTATGACGACCGCCCGATCATTGATCACTTTCGTTACGTCGATGACGACTTCATGGCTGGTATTATGGAAGGCAAGGCACTGGGTGAGGCCGGTAAATTCTACTTTTATCTGCGCCGTTAA

SEQ ID NO 74:蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)kw1407_GclavDUF4334_wt (XM_014316402.1)

ATGACAGCTGTACAGCGATTTAACGCACTCACCAAAGCAGAAGGGCTTCTCAAGGAGTCTGAGCTTGCACAAATTTTCGACGAGCTCCCTCCTGTTTCTCCAGAAGCTATGACAGGCAAGTGGAATGGAGGCAGCTTTGACAGTGGCCATCCTGTCCACAAGCTGCTTCAAACTTTTAAATGGGCAGGGAAAGAATTCCGCTCCGTTGACGATATCGACCCGATTGTGATCTTCGACGAAAATGGGGAGCGAAAGTGGCTATCCGAGTATGGACATGCAAGACTGCGTGAAGTTAAGTTTCGGGGAGTTGTATCTGCCGCCTTGGTATACGACAAAGTTGCCATTATCGACTCGTTTCGTCGGGTTTCGGACAACGTGCTGATGGGAACTATGGACGCCAGGGACTGGCCGGATGCTGGCATCTACTACTTTTACATCACCAAGTTTGAAGAATTGTGA

SEQ ID NO 75:蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)kw1407_GclavDUF4334_wt (XP_014171877.1)

MTAVQRFNALTKAEGLLKESELAQIFDELPPVSPEAMTGKWNGGSFDSGHPVHKLLQTFKWAGKEFRSVDDIDPIVIFDENGERKWLSEYGHARLREVKFRGVVSAALVYDKVAIIDSFRRVSDNVLMGTMDARDWPDAGIYYFYITKFEEL*

SEQ ID NO 76:蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)kw1407_GclavDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGACTGCTGTTCAACGTTTTAACGCATTGACCAAAGCCGAGGGTTTGCTGAAAGAATCTGAGCTGGCACAGATTTTCGACGAACTGCCGCCGGTTAGCCCAGAGGCCATGACCGGTAAGTGGAATGGTGGCAGCTTTGATTCCGGCCATCCGGTGCACAAGCTGCTGCAGACGTTCAAATGGGCGGGTAAAGAATTTCGTAGCGTTGACGACATTGACCCGATCGTGATCTTTGATGAGAATGGCGAGCGCAAGTGGCTGAGCGAGTATGGTCACGCACGCCTGCGTGAAGTGAAGTTCCGTGGTGTCGTCAGCGCGGCTCTGGTCTATGACAAAGTCGCGATCATTGACAGCTTCCGCCGTGTTAGCGATAACGTGCTGATGGGTACGATGGATGCGCGTGATTGGCCGGATGCGGGCATTTACTACTTCTACATCACCAAGTTTGAAGAACTGTAA

SEQ ID NO 77:大孢树粉孢菌(Oidiodendron maius)Zn_OmaiusDUF4334_wt (KN832882.1 673187-675938(-))

ATGGCTTCTACTTTATATGAAGCTAGAGTTATTTTGGCACTTAAAGCTATTCAAAACAGCAACAATCTTAGCTTACGAGCTGCAGCAAAGCTGTATGATGTACAGCCAACAACCCTATATTACCGACAAGCTGGCCGACCTGCACGACATGATATTCCACCTAACTCTCGCAAGCTTACGGATCTAGAAGAGGAGACGATTGTTCGCCCGACGGAACAGTTTATTGCCCTAGCTCAGGCCCAGGGCCGGCTTGATGCCACATTGATTGACGCGGTGTTTAACAAGTTTGGCCCAGTCAAGCCAGAGCTGATGCTAGGCAAGTGGAGTGGTGGGATTTTAGACACCGGCCATCCTATGGGAGATACACTGAAGGAGATACGATGGGTGGGCAAGAATTTCACCTCCACTGAACACGTGGACCCGGTTATTATCGACAAGAACGGCCAAAGGGCCAGCTGGGGGAAGTGGGGCCTTGCTACCCTACGTGAGGTCTTGTATCGAGATGTTGTCTCGACGGCGATGATCTACGATGACCGCCCGGTCTTTGACTATTTCCGTTTCGCTAATGATGATATGGTTGCTGGTATCATGGAAGGGAAGGAGTTGGGAGGGAGACTTTTCTATTTCTACCTGAAGAGATAG

SEQ ID NO 78:大孢树粉孢菌(Oidiodendron maius)Zn_OmaiusDUF4334_wt (KIM97275)

MASTLYEARVILALKAIQNSNNLSLRAAAKLYDVQPTTLYYRQAGRPARHDIPPNSRKLTDLEEETIVRPTEQFIALAQAQGRLDATLIDAVFNKFGPVKPELMLGKWSGGILDTGHPMGDTLKEIRWVGKNFTSTEHVDPVIIDKNGQRASWGKWGLATLREVLYRDVVSTAMIYDDRPVFDYFRFANDDMVAGIMEGKELGGRLFYFYLKR*

SEQ ID NO 79:大孢树粉孢菌(Oidiodendron maius)Zn_OmaiusDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGGCAAGCACTTTGTATGAAGCTCGCGTGATTCTGGCGCTGAAAGCGATTCAAAATAGCAACAATCTGAGCTTGCGTGCAGCCGCGAAGCTCTATGATGTCCAGCCGACCACGCTGTACTATCGTCAGGCCGGTCGTCCAGCTCGCCACGACATCCCGCCGAACTCCCGTAAGCTGACCGATCTGGAAGAGGAAACGATCGTTCGCCCGACCGAGCAATTCATCGCGTTAGCACAAGCACAGGGCCGTCTGGATGCGACCCTGATTGATGCAGTTTTCAATAAGTTTGGTCCGGTGAAGCCTGAGCTGATGCTGGGTAAGTGGAGCGGTGGCATTCTGGACACGGGTCACCCGATGGGCGATACCCTGAAAGAAATCCGTTGGGTGGGTAAAAATTTCACCAGCACCGAACATGTTGATCCGGTCATCATTGACAAAAACGGTCAGCGCGCTTCTTGGGGCAAGTGGGGTCTGGCCACCTTGCGTGAAGTTCTGTACCGCGACGTCGTCAGCACGGCGATGATTTACGATGACCGTCCGGTGTTTGACTATTTTCGTTTCGCGAACGACGACATGGTTGCGGGTATCATGGAAGGCAAAGAACTGGGTGGCCGTCTGTTTTACTTCTACCTGAAACGCTAA

SEQ ID NO 80:弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)_TcurvaDUF4334_wt (NC_013510.1)

ATGGATGCGGAACAGCGCCTTGCCAAGATCATCGCGTCCGGCGACGAGTGCGACCGGGCCACCGTGGAGGAACTGTACGACCGGCTGGCCCCCGTGCCGGTGGACTTCATGCTCGGCACCTGGCGGGGCGGCATCTTCGACCGGGGCGACGCGCTGGCGGGGATGCTGCTGGGGATGAACTGGTACGGCAAGCGGTTCATCGACCGCGACCACGTCGAGCCGCTGCTGTGCCGCTCCCCCGACGGCTCGATCTACTCCTACGAGAAGCTCGGGCTGGCCCGGCTGCGCGAGGTCGCCCTGCGCGGCACGGTCTCGGCGGCCATGATCTACGACAAGCAGCCCATCATCGACCACTTCCGGCGGGTCAACGACGACATGGTGGTCGGCGCCATGGACGCCAAGGGCCAGCCCGACATCCTCTACTTCCACCTCACCCGGGAACGCTGA

SEQ ID NO 81:弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)_TcurvaDUF4334_wt (WP_012851400.1)

MDAEQRLAKIIASGDECDRATVEELYDRLAPVPVDFMLGTWRGGIFDRGDALAGMLLGMNWYGKRFIDRDHVEPLLCRSPDGSIYSYEKLGLARLREVALRGTVSAAMIYDKQPIIDHFRRVNDDMVVGAMDAKGQPDILYFHLTRER*

SEQ ID NO 82:弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)_TcurvaDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGGATGCGGAACAAAGACTGGCTAAAATTATTGCATCTGGTGATGAGTGTGATCGTGCAACCGTGGAAGAACTGTATGACCGTTTGGCCCCTGTCCCGGTTGACTTCATGCTGGGTACGTGGCGTGGTGGCATCTTCGATCGTGGTGATGCGCTGGCGGGTATGCTGCTGGGTATGAATTGGTATGGCAAGCGCTTTATCGACCGCGACCACGTCGAGCCACTGCTGTGCCGTAGCCCGGATGGCTCCATCTACAGCTACGAGAAACTGGGTCTGGCCCGTTTGCGCGAAGTGGCACTGCGTGGCACCGTTAGCGCGGCTATGATTTATGACAAACAGCCGATTATCGACCATTTCCGTCGCGTGAACGACGACATGGTTGTCGGCGCGATGGATGCGAAGGGTCAGCCGGACATCCTGTACTTTCACCTGACCCGCGAGCGTTAA

SEQ ID NO 83:海滨假单胞菌(Pseudomonas litoralis)_DlitoDUF4334_wt(NZ_ LT629748.1 3096922-3097413(+))

ATGACTGCAACACTGGCCGCCCTCAGCCTGACCACCCTGCTTGCCGGGCCCAGTCTGGCCGCAGATACGGAACAGCAATGGCTGGAGATGATCGCCAGCGGTGAAGCCTATTCGGCGGACACCCTGGTGCCTCTGTTCAAACAACTCGAACCGGTGGATACCGACTTCATGGTCGGCACATGGAAGGGCGGCAAGTTCGACGGCGGCGCCGAGCCGGACCCGATCAACTGGTACGGCAAACGTTTCACCTCGACCACCGATGTCGAGCCGTTATTGGTAAACGATGCCGAGGGCGAGGTGATCACCCACGACCGGCTCGGCGCCGCACAGATGCGCCAGGTGGTGTTCGATGGGAAGGTATCGGCCGCGTTGATCTACGACAGCCAGCCGATCATGGATTACCTCCGCAAGGTCAACGAGGATGTGGTCATCGGCCTGGGCGACATCAAGGGCAAGCCTACCGATTTCTTTTTCTATCTGGTACGCGATTAA

SEQ ID NO 84:海滨假单胞菌(Pseudomonas litoralis)_DlitoDUF4334_wt(WP_ 090274689)

MTATLAALSLTTLLAGPSLAADTEQQWLEMIASGEAYSADTLVPLFKQLEPVDTDFMVGTWKGGKFDGGAEPDPINWYGKRFTSTTDVEPLLVNDAEGEVITHDRLGAAQMRQVVFDGKVSAALIYDSQPIMDYLRKVNEDVVIGLGDIKGKPTDFFFYLVRD*

SEQ ID NO 85:海滨假单胞菌(Pseudomonas litoralis)_DlitoDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGACTGCGACTTTGGCTGCTCTGAGCTTGACGACCCTGTTGGCTGGCCCATCTTTGGCTGCGGACACCGAGCAGCAATGGCTGGAAATGATTGCAAGCGGCGAGGCGTATAGCGCGGACACCCTGGTGCCGCTGTTCAAGCAACTGGAGCCTGTCGATACGGACTTCATGGTCGGCACGTGGAAGGGCGGCAAATTTGATGGTGGTGCCGAACCGGACCCGATTAACTGGTACGGTAAGCGTTTTACCAGCACGACCGATGTGGAGCCGCTGCTGGTGAATGACGCCGAGGGTGAAGTTATCACCCACGATCGTCTGGGTGCGGCACAGATGCGCCAAGTTGTTTTTGATGGCAAAGTCTCCGCAGCGCTGATCTACGACAGCCAGCCGATTATGGACTATCTGCGCAAAGTGAACGAAGATGTTGTCATCGGTCTGGGTGACATCAAGGGTAAACCGACCGACTTTTTCTTCTACCTGGTTCGTGATTAA

SEQ ID NO 86:防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)_PprotDUF4334_wt(NC_ 021237.1 5528027-5528524(-))

ATGAATACGAAAGAAAAGTTTGAACAGCTTAAGAGCACGCAAGGTCTTAATGATGAAGTACTGTTGGACTTCTTTGACTCGCTTTCTCCAGTCACAATCGATGGCGCGTTGGGCCGTTGGCAAGGTGGTGACTTCAAGACAGGACACTGGGGCAATGACGCACTTACCGGAATGAAGTGGTACGGAAAGTGGTACCGGAGCAAGTTGGATGCCGTTCCCCTAGTCTGCTACGACGAACAGGGCCGACTATTTTCCAACAAGATCATGAAAGGTGAGGCCTCTCTCTGGGAGGTGGCGTTTCGTGGCAAGGTTTCGACTACGATGATCTACGATGGCGTTCCGATTTATGATCACTTGCGCAAGGTCGATGACAACACCCTTTTCGGGATCATGGATGGTAAGTCCTTTGAGGGGCAGCTCCCCGACATCATCGACAATGGCAAGTACTACTTCTTCTACCTCGAAAGGGTCGATGGCTTCCCTGTCGAGTTCGTCTAG

SEQ ID NO 87:防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)_PprotDUF4334_wt(WP_ 015636872.1)

MNTKEKFEQLKSTQGLNDEVLLDFFDSLSPVTIDGALGRWQGGDFKTGHWGNDALTGMKWYGKWYRSKLDAVPLVCYDEQGRLFSNKIMKGEASLWEVAFRGKVSTTMIYDGVPIYDHLRKVDDNTLFGIMDGKSFEGQLPDIIDNGKYYFFYLERVDGFPVEFV*

SEQ ID NO 88:防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)_PprotDUF4334_大肠杆菌，经优化的

ATGAACACGAAAGAAAAGTTTGAACAGTTGAAAAGCACCCAAGGTCTGAACGATGAAGTTTTGCTGGATTTCTTCGATAGCCTGAGCCCAGTGACCATTGACGGTGCACTGGGCCGTTGGCAGGGTGGCGACTTCAAGACCGGTCACTGGGGCAACGACGCGCTGACTGGCATGAAATGGTACGGTAAATGGTATCGCAGCAAACTGGATGCTGTGCCGCTGGTGTGCTACGACGAACAGGGTCGTCTGTTTTCCAATAAGATCATGAAAGGTGAGGCCAGCCTGTGGGAAGTCGCGTTCCGCGGTAAGGTTAGCACGACGATGATTTATGATGGTGTGCCGATCTATGACCATCTGCGTAAAGTTGATGACAATACCCTGTTTGGCATCATGGATGGCAAGTCTTTTGAGGGTCAACTGCCGGACATCATTGACAATGGCAAGTACTACTTCTTCTACCTGGAGCGTGTTGACGGTTTTCCGGTCGAGTTCGTCTAA

SEQ ID NO 89:人工_SCH91-3944-W44A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEAKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 90:人工_SCH91-3944-W44A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGGCAAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 91:人工_SCH91-3944-T51A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFAAGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 92:人工_SCH91-3944-T51A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGGCCGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 93:人工_SCH91-3944-H53A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGARLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 94:人工_SCH91-3944-H53A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTGCACGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 95:人工_SCH91-3944-L59A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKASASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 96:人工_SCH91-3944-L59A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAAGCATCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 97:人工_SCH91-3944-W64A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRAYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 98:人工_SCH91-3944-W64A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCGCCTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 99:人工_SCH91-3944-K67A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGATFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 100:人工_SCH91-3944-K67A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTGCAACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 101:人工_SCH91-3944-S71A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNAVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 102:人工_SCH91-3944-S71A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACGCAGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 103:人工_SCH91-3944-R106A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFAGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 104:人工_SCH91-3944-R106A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTGCAGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 105:人工_SCH91-3944-Y115A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVADGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 106:人工_SCH91-3944-Y115A_大肠杆菌，经优化的ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTGCCGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 107:人工_SCH91-3944-D116A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYAGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 108:人工_SCH91-3944-D116A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGCCGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 109:人工_SCH91-3944-D122A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFAHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 110:人工_SCH91-3944-D122A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGCACATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 111:人工_SCH91-3944-M136A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIANGKSALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 112:人工_SCH91-3944-M136A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTGCAAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 113:人工_SCH91-3944-K139A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGASALVLDGGQHYYFLLERA

SEQ ID NO 114:人工_SCH91-3944-K139A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCGCAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 115:人工_SCH91-3944-F152A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYALLERA

SEQ ID NO 116:人工_SCH91-3944-F152A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATGCACTGCTGGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 117:人工_SCH91-3944-L154A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLAERA

SEQ ID NO 118:人工_SCH91-3944-L154A_大肠杆菌，经优化的ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGGCCGAGCGTGCGTAA

SEQ ID NO 119:人工_SCH91-3944-R156A_变体

MNLNEARTAFARLRAAENGLSPAELDEVWAALETVAAEEILGEWKGDDFATGHRLHEKLSASRWYGKTFNSVEDAKPLICRDEDGNLYSDVKSGNGEASLWNIEFRGEVTATMVYDGAPIFDHFKKVDDSTLMGIMNGKSALVLDGGQHYYFLLEAA

SEQ ID NO 120:人工_SCH91-3944-R156A_大肠杆菌，经优化的

ATGAACTTAAATGAAGCGCGTACCGCATTTGCACGTCTGAGAGCTGCCGAGAACGGTCTGAGCCCGGCTGAGCTGGATGAAGTGTGGGCAGCGCTGGAGACTGTGGCGGCTGAAGAAATCCTGGGTGAGTGGAAGGGTGACGATTTTGCGACGGGTCACCGTCTGCACGAGAAACTGTCGGCGAGCCGCTGGTATGGTAAGACCTTCAACTCTGTTGAAGATGCAAAGCCGCTGATTTGCCGTGACGAAGATGGCAATCTGTACTCCGATGTCAAGAGCGGTAACGGTGAGGCCAGCCTGTGGAATATCGAGTTTCGCGGCGAAGTCACCGCGACGATGGTTTACGATGGTGCCCCGATCTTCGACCATTTCAAAAAAGTTGACGACAGCACCCTGATGGGCATTATGAATGGCAAAAGCGCGTTGGTGTTGGACGGTGGCCAGCATTACTATTTCCTGCTGGAGGCAGCGTAA

SEQ ID NO 121:整合盒片段1

GCAGGCAGCTCCATTTCATGTAGGTGATTTATCCCTCCGGGCGGTATTTGAGACTCTCGG

SEQ ID NO 122:整合盒片段2

ACTGCTGGGTACTGTTCAGGCACGATAGGAAATGCGTCCAGCGCATACACCAGTCTTAGC

SEQ ID NO 123:整合盒片段3

AGTCGACCTTACAGCGCCTGGGACTCTACATAAACATGCAGCGAACATGCTTTCCAACGC

SEQ ID NO 124:LEU2酵母标记物_引物1

AGGTGCAGTTCGCGTGCAATTATAACGTCGTGGCAACTGTTATCAGTCGTACCGCGCCATTCGACTACGTCGTAAGGCC

SEQ ID NO 125:LEU2酵母标记物_引物2

TCGTGGTCAAGGCGTGCAATTCTCAACACGAGAGTGATTCTTCGGCGTTGTTGCTGACCATCGACGGTCGAGGAGAACTT

SEQ ID NO 126:AmpR大肠杆菌标记物_引物1

TGGTCAGCAACAACGCCGAAGAATCACTCTCGTGTTGAGAATTGCACGCCTTGACCACGACACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAG

SEQ ID NO 127:AmpR大肠杆菌标记物_引物2

AACGCGTACCCTAAGTACGGCACCACAGTGACTATGCAGTCCGCACTTTGCCAATGCCAAAAATGTGCGCGGAACCCCTA

SEQ ID NO 128:酵母复制起点_引物1

TTGGCATTGGCAAAGTGCGGACTGCATAGTCACTGTGGTGCCGTACTTAGGGTACGCGTTCCTGAACGAAGCATCTGTGCTTCA

SEQ ID NO 129:酵母复制起点_引物2

CCGAGATGCCAAAGGATAGGTGCTATGTTGATGACTACGACACAGAACTGCGGGTGACATAATGATAGCATTGAAGGATGAGACT

SEQ ID NO 130:大肠杆菌复制起点_引物1

ATGTCACCCGCAGTTCTGTGTCGTAGTCATCAACATAGCACCTATCCTTTGGCATCTCGGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGG

SEQ ID NO 131:大肠杆菌复制起点_引物2

CTCAGATGTACGGTGATCGCCACCATGTGACGGAAGCTATCCTGACAGTGTAGCAAGTGCTGAGCGTCAGACCCCGTAGAA

SEQ ID NO 132:用于酿酒酵母共转化的DNA片段

ATTCCTAGTGACGGCCTTGGGAACTCGATACACGATGTTCAGTAGACCGCTCACACATGG

SEQ ID NO 133:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH1_wt

ATGCAATTCAGCATCGGAGATGTACTCGCCATTGTAGATAAAACAATCCTCAACCCACTCGTCGTCAGCGCAGGACTTCTGTCTCTGCACTTTCTCACCAATGACAAATACGCAATCACTGCGAATGACGGTCTATTCCCTTATCAAATTAGCACTCCAGACTCGCATCGAAAAGCCCTTTTTGCACTTGGCTTTGGTCTACTTCTCAGAGCCAATCGCTACATGAGCAGAAAAGCTCTGAACAACAACACCGCCGCACAATTCGACTGGAATCGTGAGATCATCGTTGTTACTGGTGGATCTGGTGGTATCGGTGCTCAGGCCGCGCAGAAATTGGCAGAAAGAGGATCGAAAGTGATTGTTATTGATGTGCTACCACTTACCTTTGACAAGCCCAAGAATTTGTACCACTATAAATGTGATCTCACAAACTACAAAGAGCTCCAAGAAGTTGCGGCTAAGATCGAAAGAGAAGTTGGCACTCCGACTTGTGTAGTTGCGAATGCAGGAATATGTCGTGGAAAGAACATATTCGATGCTACAGAACGAGATGTTCAGCTTACCTTTGGAGTCAACAATCTGGGACTTCTATGGACAGCCAAAACCTTTCTCCCATCAATGGCCAAAGCAAATCATGGCCATTTCTTGATCATCGCCTCTCAAACCGGCCATCTAGCGACCGCAGGAGTAGTCGACTATGCAGCGACCAAAGCAGCAGCAATCGCCATATATGAAGGTCTACAAACAGAGATGAAGCACTTTTATAAAGCGCCTGCTGTACGCGTATCTTGTATCTCCCCATCCGCGGTCAAGACGAAGATGTTTGCAGGCATCAAGACTGGAGGCAATTTCTTCATGCCAATGTTGACGCCTGATGATCTTGGAGACCTGATTGCAAAGACTTTGTGGGACGGTGTGGCAGTCAATATTTTGAGCCCTGCGGCGGCATATATCAGCCCGCCCACGAGAGCTTTGCCAGATTGGATGAGGGTTGGCATGCAGGATGCTGGTGCTGAGATCATGACGGAATTGACTCCTCATAAGCCGTTGGAGTAG

SEQ ID NO 134:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH1_wt

MQFSIGDVLAIVDKTILNPLVVSAGLLSLHFLTNDKYAITANDGLFPYQISTPDSHRKALFALGFGLLLRANRYMSRKALNNNTAAQFDWNREIIVVTGGSGGIGAQAAQKLAERGSKVIVIDVLPLTFDKPKNLYHYKCDLTNYKELQEVAAKIEREVGTPTCVVANAGICRGKNIFDATERDVQLTFGVNNLGLLWTAKTFLPSMAKANHGHFLIIASQTGHLATAGVVDYAATKAAAIAIYEGLQTEMKHFYKAPAVRVSCISPSAVKTKMFAGIKTGGNFFMPMLTPDDLGDLIAKTLWDGVAVNILSPAAAYISPPTRALPDWMRVGMQDAGAEIMTELTPHKPLE

SEQ ID NO 135:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH1_酵母，经优化的

ATGCAATTCTCTATCGGTGACGTTTTGGCTATCGTTGACAAGACTATCTTGAACCCATTGGTTGTTTCTGCTGGTTTGTTGTCTTTGCACTTCTTGACTAACGACAAGTACGCTATCACTGCTAACGACGGTTTGTTCCCATACCAAATCTCTACTCCAGACTCTCACAGAAAGGCTTTGTTCGCTTTGGGTTTCGGTTTGTTGTTGAGAGCTAACAGATACATGTCTAGAAAGGCTTTGAACAACAACACTGCTGCTCAATTCGACTGGAACAGAGAAATCATCGTTGTTACTGGTGGTTCTGGTGGTATCGGTGCTCAAGCTGCTCAAAAGTTGGCTGAAAGAGGTTCTAAGGTTATCGTTATCGACGTTTTGCCATTGACTTTCGACAAGCCAAAGAACTTGTACCACTACAAGTGTGACTTGACTAACTACAAGGAATTGCAAGAAGTTGCTGCTAAGATCGAAAGAGAAGTTGGTACTCCAACTTGTGTTGTTGCTAACGCTGGTATCTGTAGAGGTAAGAACATCTTCGACGCTACTGAAAGAGACGTTCAATTGACTTTCGGTGTTAACAACTTGGGTTTGTTGTGGACTGCTAAGACTTTCTTGCCATCTATGGCTAAGGCTAACCACGGTCACTTCTTGATCATCGCTTCTCAAACTGGTCACTTGGCTACTGCTGGTGTTGTTGACTACGCTGCTACTAAGGCTGCTGCTATCGCTATCTACGAAGGTTTGCAAACTGAAATGAAGCACTTCTACAAGGCTCCAGCTGTTAGAGTTTCTTGTATCTCTCCATCTGCTGTTAAGACTAAGATGTTCGCTGGTATCAAGACTGGTGGTAACTTCTTCATGCCAATGTTGACTCCAGACGACTTGGGTGACTTGATCGCTAAGACTTTGTGGGACGGTGTTGCTGTTAACATCTTGTCTCCAGCTGCTGCTTACATCTCTCCACCAACTAGAGCTTTGCCAGACTGGATGAGAGTTGGTATGCAAGACGCTGGTGCTGAAATCATGACTGAATTGACTCCACACAAGCCATTGGAATAA

SEQ ID NO 136:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH2_wt

ATGGCGACGATACCGACCACAATGACCGCAGCGACAATCGTTGAATTCAACAAGCCCATCGTGCTAAAGAACGACATACCAGTTCCAGACCTACCAGAGAACAAGATTCTTGTTAGGATAGCTGCAACATCATTATGCTCAAGCGACTTGATGGCGTACAAAGGTTACATGGATTTCATGACCAAGACGCCTTACTGCGGAGGACACGAGCCCGTGGGAACGGTGGTGAAAGTCGGTTCTTCGGTAAAAGGCTACTCGGTTGGAGATCGCGTTGGCATATTGATGTTCTTCGATACCTGTGGAACATGCAATGACTGCTTCTCGGGTGAACATCGCTTTTGCAGCACAAAGAAAATCCTAGGCTTCGCGGAAAGCTGGGGAGGATTTTCAGAATACGCACTTGCTGATCCCATCTCGACCATCAAGCTCCCGGAAGGGTTGAGTTTCGATGTAGCAGCGCCTTTGTTCTGCGCTGGGATCACAGCCTACAGCGCGCTGTTGAAGGTGAAGAGTCATGCCGGTCAACTCATCAATATCATCGGCTGTGGAGGCGTAGGACATATGGCTATATTGTATGCGAGAGCTATGGGATATCGAGTTCATGTTTACGATATATCCGATTCCAAGGTCGAATTTGCACTCTTTCTCGGCGCAGATGCAGCCTTCAACACTCTGACCTATACCGGTCCAATAGAATCAGCATCTTCTACGTTAGTCGTAAGTGGAGCAAATGCAGCATACCAGAGCGCTCTAGGCATGACGAGTAATCATGGAGTCGTCCTGGGTATTGGACTACCAGCGGGAGGTGTGGTCATTGATGTGCCAGCTTGGGGTACGAAAGGCGTTACATTCGTCCCATGCAACACAGGCTCGAAACAGGAACTAGAAGAAGCGCTAGAATTGGCTGTGAGAAAGGATATCAAACCATTACTTGACATCCGCCATATCGACACAATTAATGAGGCATATCAAGATTTGGCGGAGGGAAAGATCAATGGGAGGATTGTTTTCCACTTCGAGTGA

SEQ ID NO 137:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH2_wtMATIPTTMTAATIVEFNKPIVLKNDIPVPDLPENKILVRIAATSLCSSDLMAYKGYMDFMTKTPYCGGHEPVGTVVKVGSSVKGYSVGDRVGILMFFDTCGTCNDCFSGEHRFCSTKKILGFAESWGGFSEYALADPISTIKLPEGLSFDVAAPLFCAGITAYSALLKVKSHAGQLINIIGCGGVGHMAILYARAMGYRVHVYDISDSKVEFALFLGADAAFNTLTYTGPIESASSTLVVSGANAAYQSALGMTSNHGVVLGIGLPAGGVVIDVPAWGTKGVTFVPCNTGSKQELEEALELAVRKDIKPLLDIRHIDTINEAYQDLAEGKINGRIVFHFE

SEQ ID NO 138:丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH2_酵母，经优化的

ATGGCTACTATCCCAACTACTATGACTGCTGCTACTATCGTTGAATTCAACAAGCCAATCGTTTTGAAGAACGACATCCCAGTTCCAGACTTGCCAGAAAACAAGATCTTGGTTAGAATCGCTGCTACTTCTTTGTGTTCTTCTGACTTGATGGCTTACAAGGGTTACATGGACTTCATGACTAAGACTCCATACTGTGGTGGTCACGAACCAGTTGGTACTGTTGTTAAGGTTGGTTCTTCTGTTAAGGGTTACTCTGTTGGTGACAGAGTTGGTATCTTGATGTTCTTCGACACTTGTGGTACTTGTAACGACTGTTTCTCTGGTGAACACAGATTCTGTTCTACTAAGAAGATCTTGGGTTTCGCTGAATCTTGGGGTGGTTTCTCTGAATACGCTTTGGCTGACCCAATCTCTACTATCAAGTTGCCAGAAGGTTTGTCTTTCGACGTTGCTGCTCCATTGTTCTGTGCTGGTATCACTGCTTACTCTGCTTTGTTGAAGGTTAAGTCTCACGCTGGTCAATTGATCAACATCATCGGTTGTGGTGGTGTTGGTCACATGGCTATCTTGTACGCTAGAGCTATGGGTTACAGAGTTCACGTTTACGACATCTCTGACTCTAAGGTTGAATTCGCTTTGTTCTTGGGTGCTGACGCTGCTTTCAACACTTTGACTTACACTGGTCCAATCGAATCTGCTTCTTCTACTTTGGTTGTTTCTGGTGCTAACGCTGCTTACCAATCTGCTTTGGGTATGACTTCTAACCACGGTGTTGTTTTGGGTATCGGTTTGCCAGCTGGTGGTGTTGTTATCGACGTTCCAGCTTGGGGTACTAAGGGTGTTACTTTCGTTCCATGTAACACTGGTTCTAAGCAAGAATTGGAAGAAGCTTTGGAATTGGCTGTTAGAAAGGACATCAAGCCATTGTTGGACATCAGACACATCGACACTATCAACGAAGCTTACCAAGACTTGGCTGAAGGTAAGATCAACGGTAGAATCGTTTTCCACTTCGAATAA

SEQ ID NO 139:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH1_wt

ATGCCAACCCCTATCTTTGGCGCCCGAGAGGGTTTCACTATCGACTCCGTACTGAGCATCCTGGATGCGACCGTACTTAACCCCTGGTTTACCGGCGTGTGCCTAATAGCCGTCTGCGCCCGAGATCGCACCATTACGTACCCGGACTGGCCGGCGGCTCTGGACCAGGTGCTCCCCTTCTTGTCGCAGATGTGGAGGGAAACTGTCAGACCGACCTTTGGCGACCGCAACGTCCTTCATCTGTTGACCACTGTGTGTGTCGGCCTTGCCATCCGAACCAACAGACGGATGAGTCGGGGAGCGAGGAACAATTGGGTGTGGGATACTAGTTATGACTGGAAGAAGGAGATCGTAGTGGTTACGGGAGGAGCTGCCGGGTTTGGTGCAGACATCGTACAACAGCTAGACACGCGTGGAATCCAGGTCGTCGTCTTGGATGTGGGATCCCTCACCTATAGGCCTTCGAGCAGAGTTCATTATTACAAGTGCGACGTGTCGAACCCACAAGACGTCGCCAGCGTGGCTAAAGCTATCGTATCCAACGTCGGGCACCCGACCATATTGGTCAACAACGCTGGCGTATTCAGGGGTGCGACTATTCTCTCCACGACACCGCGCGACCTCGACATGACCTACGACATCAACGTCAAAGCGCACTATCATCTCACGAAGGCGTTCCTCCCGAACATGATCTCCAAGAACCATGGACATATTGTGACTGTGTCAAGCGCGACCGCATACGCTCAAGCTTGTTCTGGCGTGTCATACTGTTCCTCAAAGGCCGCCATCTTGTCATTTCACGAAGGACTGAGCGAAGAGATTTTGTGGATCTATAAGGCGCCCAAAGTCCGGACCTCGGTCATCTGCCCCGGACACGTCAATACGGCCATGTTTACAGGCATTGGAGCCGCCGCTCCCTCGTTCATGGCACCTGCACTTCATCCCTCGACAGTCGCCGAGACAATCGTCGATGTATTGCTCTCATGCGAGTCTCAACACGTCCTGATGCCCGCCGCCATGCACATGTCAGTCGCCGGACGAGCGCTGCCCACCTGGTTCTTCCGGGGGTTGTTGGCATCGGGCAAGGATACCATGGGTAGCGTTGTCCGCCGATGA

SEQ ID NO 140:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH1_wt

MPTPIFGAREGFTIDSVLSILDATVLNPWFTGVCLIAVCARDRTITYPDWPAALDQVLPFLSQMWRETVRPTFGDRNVLHLLTTVCVGLAIRTNRRMSRGARNNWVWDTSYDWKKEIVVVTGGAAGFGADIVQQLDTRGIQVVVLDVGSLTYRPSSRVHYYKCDVSNPQDVASVAKAIVSNVGHPTILVNNAGVFRGATILSTTPRDLDMTYDINVKAHYHLTKAFLPNMISKNHGHIVTVSSATAYAQACSGVSYCSSKAAILSFHEGLSEEILWIYKAPKVRTSVICPGHVNTAMFTGIGAAAPSFMAPALHPSTVAETIVDVLLSCESQHVLMPAAMHMSVAGRALPTWFFRGLLASGKDTMGSVVRR*

SEQ ID NO 141:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH1_酵母，经优化的

ATGCCAACTCCAATCTTCGGTGCTAGAGAAGGTTTCACTATCGACTCTGTTTTGTCTATCTTGGACGCTACTGTTTTGAACCCATGGTTCACTGGTGTTTGTTTGATCGCTGTTTGTGCTAGAGACAGAACTATCACTTACCCAGACTGGCCAGCTGCTTTGGACCAAGTTTTGCCATTCTTGTCTCAAATGTGGAGAGAAACTGTTAGACCAACTTTCGGTGACAGAAACGTTTTGCACTTGTTGACTACTGTTTGTGTTGGTTTGGCTATCAGAACTAACAGAAGAATGTCTAGAGGTGCTAGAAACAACTGGGTTTGGGACACTTCTTACGACTGGAAGAAGGAAATCGTTGTTGTTACTGGTGGTGCTGCTGGTTTCGGTGCTGACATCGTTCAACAATTGGACACTAGAGGTATCCAAGTTGTTGTTTTGGACGTTGGTTCTTTGACTTACAGACCATCTTCTAGAGTTCACTACTACAAGTGTGACGTTTCTAACCCACAAGACGTTGCTTCTGTTGCTAAGGCTATCGTTTCTAACGTTGGTCACCCAACTATCTTGGTTAACAACGCTGGTGTTTTCAGAGGTGCTACTATCTTGTCTACTACTCCAAGAGACTTGGACATGACTTACGACATCAACGTTAAGGCTCACTACCACTTGACTAAGGCTTTCTTGCCAAACATGATCTCTAAGAACCACGGTCACATCGTTACTGTTTCTTCTGCTACTGCTTACGCTCAAGCTTGTTCTGGTGTTTCTTACTGTTCTTCTAAGGCTGCTATCTTGTCTTTCCACGAAGGTTTGTCTGAAGAAATCTTGTGGATCTACAAGGCTCCAAAGGTTAGAACTTCTGTTATCTGTCCAGGTCACGTTAACACTGCTATGTTCACTGGTATCGGTGCTGCTGCTCCATCTTTCATGGCTCCAGCTTTGCACCCATCTACTGTTGCTGAAACTATCGTTGACGTTTTGTTGTCTTGTGAATCTCAACACGTTTTGATGCCAGCTGCTATGCACATGTCTGTTGCTGGTAGAGCTTTGCCAACTTGGTTCTTCAGAGGTTTGTTGGCTTCTGGTAAGGACACTATGGGTTCTGTTGTTAGAAGATAA

SEQ ID NO 142:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH2_wt

ATGGAGCCACCCCAGACTATGAAGGCCGCCTTGGTCACCGCATACAACGAGCCCCTGATTGTGAAAGACGTTGCTACACCCGAGCCGGGCCCTGGACAGATTCTCGTTCGGGTCAAAGCTAGTTCGCTTTGCATGTCAGATATCGGAGGCTATGTCGGAGCGATGGGGGAATTTATCACGCTCCCCTATTGTCCAGGTCATGAACCCGCCGGAGAGATCGTCGCCCTTGGCGACAACGTGTCCGGCTTCTCCGTTGGGGATCGGGTTACTTATATGGCCGCTCTAGATCCTTGTATGGGCTGCCGAGACTGTCTCCGAGGTGCCATTCGATTCTGCTCCAAACGCTCGAATCTCGGCTTCAGCCACCAGTACGGCGGGTTCTCCGAGTACTCTCTCGCCAGCCCATACTCGATGGCCAAGGTGCCGGACGAACTGTCCCTCGAGGAAGCTGCGAGCATGTCCTGTGCCGGGGTGACCGCTTTCGGTGCTCTCAAGCTATTGAGCAAGTATCAGGCTCCGGGAGGCATCATCAATGTCTTGGGCTGCGGCGGCGTTGGTCATCTGGTCATCAAGTTTGCCGTCGCGCTCGGCTACACCGTGCACGCTTTCGACATTAACGATGGCAAACTCAAACTGGCCGAGGAGTGCGGGGCATCTAAAGCCTTCCTTTCAAAGGGAGATCCCACCCAGGCGATGATGGCAGAGAGTACGATAGTCATCTCGGGTGTCAACGCGGCCTATGATTTCGCTATTAAAGCTACTCTGGCCGGTGGACGTATCATTGCGATTGGGCACCCACATTCGGCGACTCCGATGCCTCTCGGCTCGATGATCATCAACGACATCTCGTTGATCGTGAGCAATCAAGGTACAAGGGTGGATCTACAAGAAGCCTTGGATTTCGCCGCTCGATCCGGTGTCAGACCGAACATTACAATCAACGAAGGTCTGGACGGCATCAATCAGGGCTATAAATCGGTCATGACAGGCGCTGTAGAAGGCAGATTGGTCTACAAATTCTAG

SEQ ID NO 143:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH2_wt

MEPPQTMKAALVTAYNEPLIVKDVATPEPGPGQILVRVKASSLCMSDIGGYVGAMGEFITLPYCPGHEPAGEIVALGDNVSGFSVGDRVTYMAALDPCMGCRDCLRGAIRFCSKRSNLGFSHQYGGFSEYSLASPYSMAKVPDELSLEEAASMSCAGVTAFGALKLLSKYQAPGGIINVLGCGGVGHLVIKFAVALGYTVHAFDINDGKLKLAEECGASKAFLSKGDPTQAMMAESTIVISGVNAAYDFAIKATLAGGRIIAIGHPHSATPMPLGSMIINDISLIVSNQGTRVDLQEALDFAARSGVRPNITINEGLDGINQGYKSVMTGAVEGRLVYKF

SEQ ID NO 144:巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH2_酵母，经优化的

ATGGAACCACCACAAACTATGAAGGCTGCTTTGGTTACTGCTTACAACGAACCATTGATCGTTAAGGACGTTGCTACTCCAGAACCAGGTCCAGGTCAAATCTTGGTTAGAGTTAAGGCTTCTTCTTTGTGTATGTCTGACATCGGTGGTTACGTTGGTGCTATGGGTGAATTCATCACTTTGCCATACTGTCCAGGTCACGAACCAGCTGGTGAAATCGTTGCTTTGGGTGACAACGTTTCTGGTTTCTCTGTTGGTGACAGAGTTACTTACATGGCTGCTTTGGACCCATGTATGGGTTGTAGAGACTGTTTGAGAGGTGCTATCAGATTCTGTTCTAAGAGATCTAACTTGGGTTTCTCTCACCAATACGGTGGTTTCTCTGAATACTCTTTGGCTTCTCCATACTCTATGGCTAAGGTTCCAGACGAATTGTCTTTGGAAGAAGCTGCTTCTATGTCTTGTGCTGGTGTTACTGCTTTCGGTGCTTTGAAGTTGTTGTCTAAGTACCAAGCTCCAGGTGGTATCATCAACGTTTTGGGTTGTGGTGGTGTTGGTCACTTGGTTATCAAGTTCGCTGTTGCTTTGGGTTACACTGTTCACGCTTTCGACATCAACGACGGTAAGTTGAAGTTGGCTGAAGAATGTGGTGCTTCTAAGGCTTTCTTGTCTAAGGGTGACCCAACTCAAGCTATGATGGCTGAATCTACTATCGTTATCTCTGGTGTTAACGCTGCTTACGACTTCGCTATCAAGGCTACTTTGGCTGGTGGTAGAATCATCGCTATCGGTCACCCACACTCTGCTACTCCAATGCCATTGGGTTCTATGATCATCAACGACATCTCTTTGATCGTTTCTAACCAAGGTACTAGAGTTGACTTGCAAGAAGCTTTGGACTTCGCTGCTAGATCTGGTGTTAGACCAAACATCACTATCAACGAAGGTTTGGACGGTATCAACCAAGGTTACAAGTCTGTTATGACTGGTGCTGTTGAAGGTAGATTGGTTTACAAGTTCTAA

SEQ ID NO 145:红球菌属(Rhodococcus sp.)_RrhSecADH_wt(NZ_ AZHI01000124.1 6627-7664(+))

ATGAAAGCCGTCCAGTACACCGAGATCGGCTCCGAGCCGGTCGTTGTCGACATCCCCACCCCGACGCCCGGGCCGGGTGAGATCCTGCTGAAGGTCACCGCGGCCGGGCTGTGCCACTCGGACATCTTCGTGATGGACATGCCGGCGGCGCAGTACGCCTACGGCCTGCCGCTCACCCTCGGCCACGAGGGTGTCGGCACCGTCGCCGAACTCGGCGAGGGCGTCACGGGATTCGGGGTGGGGGACGCCGTCGCCGTGTACGGGCCGTGGGGCTGCGGTGCGTGCCACGCCTGCGCGCGCGGCCGGGAGAACTACTGCACCCGCGCCGCCGACCTGGGCATCACGCCACCCGGTCTCGGCTCGCCCGGATCGATGGCCGAGTACATGATCGTCGATTCGGCGCGCCACCTCGTCCCGATCGGAGACCTCGACCCGGTCGCCGCGGCGCCGCTCACCGACGCCGGTCTGACGCCGTACCACGCGATCTCCCGGGTCCTGCCGCTGCTGGGGCCGGGCTCGACGGCCGTCGTCATCGGTGTCGGCGGGCTCGGCCACGTCGGCATCCAGATCCTGCGCGCCGTCAGCGCGGCCCGTGTGATCGCCGTCGACCTCGACGACGACCGTCTCGCCCTCGCCCGCGAGGTCGGCGCCGACGCGGCGGTGAAGTCGGGCGCCGGTGCGGCGGACGCGATCCGGGAACTGACCGGCGGCCAGGGCGCGACGGCGGTGTTCGACTTCGTCGGCGCCCAGTCGACGATCGACACGGCGCAGCAGGTGGTCGCGGTCGACGGGCACATCTCGGTCGTGGGCATCCACGCCGGCGCACACGCCAAGGTCGGGTTCTTCATGATCCCGTTCGGCGCCTCCGTCGTGACCCCGTACTGGGGCACCCGGTCGGAACTGATGGAGGTCGTCGCGCTGGCCCGCGCCGGCCGGCTGGACATCCACACCGAGACGTTCACCCTCGACGAGGGGCCGGCGGCGTACCGGCGGCTGCGCGAGGGCAGCATCCGCGGCCGCGGCGTGGTGGTTCCCTGA

SEQ ID NO 146:红球菌属(Rhodococcus sp.)_RrhSecADH_wt(WP_043801412.1)

MKAVQYTEIGSEPVVVDIPTPTPGPGEILLKVTAAGLCHSDIFVMDMPAAQYAYGLPLTLGHEGVGTVAELGEGVTGFGVGDAVAVYGPWGCGACHACARGRENYCTRAADLGITPPGLGSPGSMAEYMIVDSARHLVPIGDLDPVAAAPLTDAGLTPYHAISRVLPLLGPGSTAVVIGVGGLGHVGIQILRAVSAARVIAVDLDDDRLALAREVGADAAVKSGAGAADAIRELTGGQGATAVFDFVGAQSTIDTAQQVVAVDGHISVVGIHAGAHAKVGFFMIPFGASVVTPYWGTRSELMEVVALARAGRLDIHTETFTLDEGPAAYRRLREGSIRGRGVVVP*

SEQ ID NO 147:红球菌属(Rhodococcus sp.)_RrhSecADH_大肠杆菌，经优化的

ATGAAAGCAGTGCAATATACGGAAATTGGCTCGGAACCTGTTGTGGTGGACATCCCGACCCCGACCCCGGGTCCTGGTGAAATCCTGCTGAAAGTTACCGCTGCCGGCCTGTGCCACAGCGACATCTTCGTGATGGACATGCCGGCTGCCCAGTACGCTTACGGTCTGCCACTGACGCTGGGTCACGAAGGCGTGGGTACGGTCGCCGAACTGGGCGAGGGTGTCACCGGTTTCGGTGTCGGTGATGCCGTGGCAGTGTACGGTCCGTGGGGTTGCGGTGCGTGCCACGCGTGTGCGCGCGGCCGCGAGAATTACTGTACGCGTGCAGCGGACCTGGGTATTACCCCGCCGGGCCTGGGCAGCCCGGGTAGCATGGCAGAGTACATGATCGTTGATAGCGCACGTCATCTGGTGCCGATTGGCGATTTGGACCCGGTCGCGGCAGCCCCGCTGACTGACGCGGGCTTGACCCCGTATCATGCAATCTCCCGTGTACTGCCACTGCTCGGTCCGGGCAGCACCGCTGTGGTTATCGGCGTCGGTGGCCTGGGTCATGTTGGCATCCAGATTCTGCGTGCAGTCAGCGCGGCACGCGTGATCGCGGTTGATCTGGACGACGATCGCCTGGCCCTGGCGCGTGAGGTCGGTGCGGATGCTGCGGTTAAGTCTGGTGCCGGTGCAGCGGATGCGATTCGTGAGCTGACGGGTGGCCAGGGTGCGACCGCCGTGTTTGATTTCGTTGGCGCGCAGAGCACCATTGATACGGCGCAACAAGTCGTTGCGGTCGATGGTCACATTTCCGTTGTGGGTATCCACGCGGGTGCACATGCCAAGGTCGGCTTTTTCATGATCCCGTTTGGTGCTAGCGTTGTTACCCCGTATTGGGGCACGCGCAGCGAGCTGATGGAAGTCGTGGCTTTGGCGCGTGCGGGTCGTCTGGACATTCACACCGAGACTTTCACCTTGGACGAAGGCCCGGCAGCGTATCGTCGTCTGCGCGAGGGTAGCATTCGTGGCCGTGGTGTTGTTGTCCCGTAA

SEQ ID NO 148:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-00043_wtATGAAGACCAAAGCTGCTGTACTGCTCGAGCCCGGAAAGCCTTTCGAGATCATGGAACTCGACCTCGACGGCCCGGGTGTGGGTGAGGTACTGATCAAGTACACCGCTGCCGGACTGTGCCATTCGGATCTGCACCTGACCGACGGTGATCTCCCGCCGCGTTACCCGATCGTCGGCGGACACGAAGGCTCGGGCATCATCGAAGAGGTCGGCCCAGGCGTCACGAAGGTCAAGCCGGGCGACCATGTCGTGTGTAGCTTCATCCCCAACTGCGGCACCTGTCGCTACTGCTCGACCGGTCGCCAGAACCTCTGCGACATGGGTGCCACCATCCTCGAAGGCTCGATGCCCGACGGTTCCTTCCGTTTCCACGGCAACGGAATGGATTTCGGCGGAATGTGCATGTTGGGAACGTTCTCCGAGCGCGCCACCATTTCTCAGCACTCGGTAGTCAAGATCGACGACTGGCTTCCCTTGGAGACAGCGGTGGTCGTCGGCTGCGGCGTGCCTTCGGGTTGGGGAACGGCAGTAAATGCCGGTAACCTTCGCGCCGGTGACACCGCTGTGATCTACGGCATCGGTGGTCTCGGCATCAACGCCGTCCAGGGCGCCGTTTCGGCCGGCTGCAAGTACGTCGTTGTGGTCGATCCGGTTGCTCTCAAGCGTGAGACCGCACTGAAGTTCGGTGCAACCCATGCCTTTGCAGACGCCGAGAGCGCTGCTGCCAAGGTCAACGAGCTGACGTGGGGACAGGGTGCCGACGCTGCGCTCATCCTTGTCGGCACCGTCGACGAGGACGTGGTCAGTGCAGCGACGGCAGTGATCGGCAAGGGTGGCACCGTGGTGATCACGGGACTCGCCGACCCCGCCAAGCTGACCGTTCACGTGTCGGGTACCGACCTGACGCTGAATCAGAAGACGATCAAGGGCACGTTGTTCGGGTCCATGAATCCGCAGTACGACATCGTGCGACTGCTGCGTCTCTACGATGCCGGTCAGCTCAAGCTCGACGAACTGATCACCAACACCTACAGCCTCGAAGACGTCAACAAGGGCTACCAGGATCTACGTGACGGCAAGAACATCCGTGGCGTGATCATTCACGACAAGTAA

SEQ ID NO 149:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-00043_wt

MKTKAAVLLEPGKPFEIMELDLDGPGVGEVLIKYTAAGLCHSDLHLTDGDLPPRYPIVGGHEGSGIIEEVGPGVTKVKPGDHVVCSFIPNCGTCRYCSTGRQNLCDMGATILEGSMPDGSFRFHGNGMDFGGMCMLGTFSERATISQHSVVKIDDWLPLETAVVVGCGVPSGWGTAVNAGNLRAGDTAVIYGIGGLGINAVQGAVSAGCKYVVVVDPVALKRETALKFGATHAFADAESAAAKVNELTWGQGADAALILVGTVDEDVVSAATAVIGKGGTVVITGLADPAKLTVHVSGTDLTLNQKTIKGTLFGSMNPQYDIVRLLRLYDAGQLKLDELITNTYSLEDVNKGYQDLRDGKNIRGVIIHDK*

SEQ ID NO 150:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-00043_大肠杆菌，经优化的

ATGAAAACGAAAGCCGCAGTGTTGTTGGAGCCGGGCAAACCATTTGAGATCATGGAACTGGATCTGGACGGTCCGGGTGTCGGTGAAGTGCTGATCAAGTACACCGCAGCGGGCTTGTGCCACTCTGATCTGCACCTGACCGACGGCGACTTGCCGCCACGTTACCCGATTGTGGGTGGCCATGAGGGTAGCGGTATCATTGAAGAGGTTGGTCCGGGCGTTACCAAGGTCAAACCGGGTGATCACGTCGTGTGCTCTTTCATCCCGAATTGTGGTACGTGCCGCTATTGTAGCACGGGTCGTCAGAACCTGTGCGACATGGGTGCCACCATTTTAGAGGGCTCCATGCCTGATGGCTCCTTCCGTTTTCACGGCAACGGTATGGACTTTGGTGGCATGTGCATGCTGGGTACGTTCAGCGAACGCGCGACCATCAGCCAACATAGCGTCGTTAAGATCGATGACTGGCTCCCGCTGGAAACCGCAGTTGTTGTTGGTTGTGGTGTTCCGAGCGGTTGGGGTACTGCGGTCAATGCCGGTAATCTGCGTGCTGGTGACACCGCGGTCATTTATGGTATTGGCGGCCTGGGTATCAACGCTGTGCAGGGCGCAGTTAGCGCGGGCTGCAAATACGTCGTTGTGGTTGACCCGGTTGCGCTGAAACGTGAGACTGCGCTGAAATTTGGCGCAACCCACGCGTTCGCAGACGCGGAGAGCGCAGCTGCGAAAGTGAACGAACTGACCTGGGGTCAGGGTGCGGATGCGGCACTGATCTTGGTCGGCACCGTGGACGAAGATGTCGTGAGCGCGGCGACTGCTGTTATCGGTAAGGGTGGCACCGTTGTGATCACCGGTCTGGCCGATCCGGCAAAGCTGACCGTTCATGTCAGCGGTACGGACCTGACCCTGAATCAGAAAACCATTAAGGGCACGCTGTTCGGTTCGATGAACCCGCAGTACGACATTGTGCGCCTGCTGCGTCTGTACGATGCGGGTCAACTGAAACTGGACGAACTTATTACGAATACGTATAGCCTGGAAGATGTGAACAAAGGCTACCAAGATCTGCGTGATGGTAAGAATATTCGTGGTGTCATTATCCACGACAAGTGA

SEQ ID NO 151:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-04254_wt

ATGAAGGCAGCCCAGCTCATGGGGCCCGGGCTCCTGGAAATCAACGACGTGCCGGTCCCGGAGATCGGCCCGTCGGAACTACTGATTCGGGTGGGCGCAGCGGGAATCTGCCACTCCGATCTCCATCTCCTGCACTTTCCGTACAAGATGCGCGAAGAACCGCTGACAATCGGCCACGAAATTGCCGGAACGATCGAAGCCGTCGGGAGTGGCGTCGACGGCCGTTCCGTCGGAGAGCGTGGCGTCGTCTACCTCTGTTGGTCATGTGGACAGTGCCGAGAATGCATGAGCGGCAACGAGAATATGTGCCTCGCCGCTGGACGCACCGCGATGCCGCCCTGCCCCGGACTCGGCCCTGAGGGCGGGATGGCCGAGTACGTCAAGATCCCGGCTCGCTCATTCGTACCCATCGGAGACCTCGACTTCCTGCAGGCCGCACCTCTCGCCGATGCGGCACTGACGAGCTACCACGCCATTCGCGGTGCCCGCGAACATCTCCAGCCCGGTGCCACCGCCGTCGTGATCGGCGTCGGCGGACTCGGTCACGTTGCAGTACAGATACTTCGCGCGATCAGTGCCGTGCGCATCATCGCCGTCGATGTCGGACAGGATCAACTCGATCTCGCCAAACGTTGCGGCGCCGACATCACGCTCGAATCGGGACCGGACACCGCGCAGCACATCCTCGACCTCACATCGGCCAGAGGCGCAGAAGTCATCTTCGACTTCGTCGGTATCGACGCAACTGCACAGATGTCTGTTCAAGCGGTTGCGCCGAACGGCGCGTATCGCATGGTAGGTCTCGGAGGCGGAAACCCCGGAATCACTGCCGAAGCTGCCGGCGGACCAGGCTGGCCATGGGGCGCATCGATCCGGAAGTCCTACGGCGGCACCAGAAACGACCTCGTCGATTCCATCGCCCTGGCACAGGCCGGTCTGGTAACGGTAGAAGTAGCCCGCTTCGACCTCGCTGATGCCCGCGACGCACTCGACCGTCTCGAACACGGCAAGGTCACCGGACGCGCAGTGCTCGTACCCTGA

SEQ ID NO 152:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-04254_wt

MKAAQLMGPGLLEINDVPVPEIGPSELLIRVGAAGICHSDLHLLHFPYKMREEPLTIGHEIAGTIEAVGSGVDGRSVGERGVVYLCWSCGQCRECMSGNENMCLAAGRTAMPPCPGLGPEGGMAEYVKIPARSFVPIGDLDFLQAAPLADAALTSYHAIRGAREHLQPGATAVVIGVGGLGHVAVQILRAISAVRIIAVDVGQDQLDLAKRCGADITLESGPDTAQHILDLTSARGAEVIFDFVGIDATAQMSVQAVAPNGAYRMVGLGGGNPGITAEAAGGPGWPWGASIRKSYGGTRNDLVDSIALAQAGLVTVEVARFDLADARDALDRLEHGKVTGRAVLVP*

SEQ ID NO 153:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-04254_大肠杆菌，经优化的

ATGAAAGCTGCACAACTGATGGGTCCGGGTCTGTTGGAAATTAATGATGTTCCAGTCCCAGAAATTGGTCCGAGCGAGCTGCTGATCCGTGTTGGCGCTGCCGGCATTTGCCACAGCGATCTGCATCTGCTGCACTTCCCGTACAAGATGCGTGAGGAACCGTTAACCATTGGTCACGAAATCGCGGGCACGATCGAAGCCGTTGGTAGCGGTGTGGATGGCCGCAGCGTTGGTGAGCGTGGCGTGGTTTACCTGTGCTGGTCCTGTGGTCAGTGCCGCGAGTGCATGTCCGGCAATGAAAACATGTGTCTGGCGGCTGGTCGTACCGCAATGCCGCCATGTCCGGGTTTGGGTCCTGAGGGTGGCATGGCCGAATATGTCAAGATCCCGGCGCGTAGCTTCGTGCCGATTGGCGATCTGGACTTTCTGCAGGCAGCGCCTTTGGCGGACGCAGCACTGACCAGCTACCACGCGATCCGTGGTGCCCGCGAACACTTGCAGCCGGGTGCAACCGCAGTGGTCATTGGTGTCGGCGGCTTGGGTCATGTGGCAGTGCAAATCCTGCGCGCGATTTCTGCGGTCCGTATCATTGCGGTTGATGTGGGCCAGGACCAACTGGACCTGGCGAAGCGTTGTGGCGCGGACATCACCCTGGAGAGCGGTCCTGACACCGCGCAACATATCCTGGACCTGACCTCCGCTCGTGGTGCCGAAGTGATTTTTGACTTCGTCGGTATCGATGCGACGGCACAGATGAGCGTCCAAGCGGTAGCCCCGAATGGCGCATACCGTATGGTTGGTCTGGGTGGTGGCAACCCGGGCATTACTGCAGAGGCAGCGGGTGGTCCTGGTTGGCCGTGGGGTGCTTCGATCCGCAAAAGCTATGGCGGCACGCGTAACGACCTGGTTGATTCTATTGCGTTGGCCCAGGCTGGTCTTGTTACCGTTGAAGTGGCGCGCTTTGACCTGGCAGACGCCCGTGATGCGCTGGACCGTCTGGAGCATGGTAAAGTGACGGGTCGCGCTGTGCTGGTGCCGTAA

SEQ ID NO 154:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06135_wt

ATGAAGGCAATCCAGTACACGAGAATCGGCGCAGAACCCGAACTCACGGAGATTCCCAAACCCGAGCCCGGTCCAGGTGAAGTGCTCCTGGAAGTCACCGCTGCCGGCGTCTGCCACTCGGACGACTTCATCATGAGCCTGCCCGAAGAGCAGTACACCTACGGCCTTCCTCTCACGCTCGGCCACGAAGGCGCCGGCCGGGTCGCCGCCGTCGGCGAGGGCGTCGAAGGACTCGACATCGGAACCAATGTCGTCGTCTACGGACCCTGGGGCTGTGGCAGCTGTTGGCACTGCTCGCAAGGACTCGAAAACTACTGTTCTCGGGCAAAAGAACTCGGCATCAATCCTCCTGGTCTCGGTGCACCCGGCGCGTTGGCCGAATTCATGATCGTCGATTCACCTCGCCACCTCGTCCCGATCGGCGACCTCGATCCGGTCAAGACGGTGCCGCTGACCGACGCCGGTCTGACTCCGTATCACGCGATCAAGCGTTCACTGCCGAAACTTCGCGGTGGCGCGTACGCCGTCGTCATCGGTACCGGCGGTCTCGGCCATGTCGCCATCCAACTCCTCCGCCACCTCTCGGCAGCAACCGTCATCGCACTCGACGTGAGCGCGGACAAGCTCGAACTGGCAACCAAGGTAGGCGCTCACGAAGTGGTCCTGTCCGACAAGGACGCGGCCGAGAACGTCCGCAGGATCACCGGAAGTCAGGGCGCCGCACTGGTTCTCGACTTCGTCGGCTATCAGCCCACCATCGACACCGCGATGGCTGTCGCCGGCGTCGGATCGGACGTCACGATCGTCGGGATCGGCGACGGGCAGGCCCATGCCAAAGTCGGGTTCTTCCAAAGTCCTTACGAGGCTTCTGTGACAGTTCCGTACTGGGGTGCCCGCAACGAGCTGATCGAATTGATCGACCTGGCGCACGCCGGCATCTTCGACATCGCGGTGGAGACCTTCAGTCTCGACAACGGCGCCGAAGCGTATCGACGACTGGCCGCCGGAACGCTCAGCGGCCGCGCGGTTGTGGTCCCTGGTCTGTGA

SEQ ID NO 155:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06135_wt

MKAIQYTRIGAEPELTEIPKPEPGPGEVLLEVTAAGVCHSDDFIMSLPEEQYTYGLPLTLGHEGAGRVAAVGEGVEGLDIGTNVVVYGPWGCGSCWHCSQGLENYCSRAKELGINPPGLGAPGALAEFMIVDSPRHLVPIGDLDPVKTVPLTDAGLTPYHAIKRSLPKLRGGAYAVVIGTGGLGHVAIQLLRHLSAATVIALDVSADKLELATKVGAHEVVLSDKDAAENVRRITGSQGAALVLDFVGYQPTIDTAMAVAGVGSDVTIVGIGDGQAHAKVGFFQSPYEASVTVPYWGARNELIELIDLAHAGIFDIAVETFSLDNGAEAYRRLAAGTLSGRAVVVPGL*

SEQ ID NO 156:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06135_大肠杆菌，经优化的

ATGAAAGCAATCCAATATACCCGCATTGGTGCAGAGCCTGAGTTGACCGAGATCCCGAAACCGGAACCGGGTCCTGGCGAAGTTCTGCTCGAAGTTACCGCTGCGGGTGTGTGCCACAGCGATGACTTTATCATGTCGCTGCCAGAGGAACAATACACGTACGGCTTACCGCTGACGCTGGGTCATGAGGGCGCTGGTCGTGTTGCAGCGGTGGGTGAGGGTGTCGAGGGCCTGGACATTGGCACCAACGTTGTCGTGTACGGTCCGTGGGGTTGCGGCTCTTGTTGGCATTGCTCCCAGGGCCTGGAGAATTACTGTTCCCGCGCGAAAGAACTGGGTATCAATCCGCCTGGTCTGGGTGCTCCAGGTGCGCTGGCTGAGTTCATGATTGTCGATAGCCCGCGTCACTTGGTTCCGATCGGTGACCTGGACCCGGTGAAAACCGTCCCGCTGACCGATGCGGGCTTGACGCCGTATCACGCGATTAAGCGCAGCCTGCCGAAACTGCGTGGTGGCGCGTATGCAGTCGTCATCGGTACTGGTGGCTTGGGCCATGTTGCGATTCAGCTGCTGCGTCATCTGTCTGCCGCGACGGTTATCGCGCTGGACGTGAGCGCCGATAAGCTCGAACTGGCCACTAAGGTTGGCGCGCACGAAGTCGTTCTGAGCGATAAAGACGCAGCCGAAAATGTGCGTCGTATTACCGGTAGCCAGGGTGCAGCATTGGTTCTGGACTTCGTTGGTTATCAGCCGACGATCGACACCGCGATGGCCGTTGCGGGCGTTGGTAGCGATGTCACCATTGTGGGTATTGGCGATGGTCAAGCCCACGCCAAGGTTGGTTTCTTTCAAAGCCCGTATGAAGCGAGCGTCACGGTGCCGTACTGGGGTGCGCGCAACGAACTGATCGAGCTGATCGATCTGGCTCACGCGGGTATTTTCGACATCGCAGTCGAAACCTTTAGCCTGGATAACGGCGCAGAGGCATACCGTCGTCTGGCGGCTGGCACTCTGAGCGGTCGCGCAGTGGTAGTGCCGGGTCTGTAA

SEQ ID NO 157:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06582_wt

ATGTTGGCAGTCCAGCTGACGGCGTGGGGTCAGCCTCCGCAGGTGCGTGAGATCCCCGTACCCGAGCCCGCTGAGGGGCAACTGTTGATCAAAGTCGGCGCCGCTGGTCTGTGCCGCTCGGATCTGCACGTCATGGATTCGCCCGCCGGACGTTTCGATTACCCGTTGCCGCTCACACTCGGCCATGAGGTTGCCGGTACCGTCGTCGGTGCGGGACCGCTGGCCGATCACGCGTGGATCGGTGAAAATGTTGTCATTCATGGTGTTTGGCCATGTGGCCGGTGCCGCAATTGCCGGCGCGAGCGCGAGAACTACTGCTTGGAGAAAGTCCCGCGTGGGGACGGCCGACTCAGCCCGATCGGAAACGGGTTGGGCCATCCGGGCGGGCTGGCAGAATACCTGCTGGTGCCCTCGGAAGCTGTTCTCGTTCGCGTCGGTTCGCTGAGCCCCCAGCAGGCCGCTCCGCTCGCCGACGCCGGCCTGACCGCATATCATGCGATCCGGACCAACAGCGACGTCATCGACTCGGACACTGTGGCTTTGGTGATAGGAATCGGCGGTCTCGGCCATCTGGCGGTGCAGATCCTGCGCTCTTTCGGCGTCACAGACATCATCGCCGTCGAGACAAGAACCCAGACACACGCTCTCGCGCTCGAATCGGGAGCACACGCGTGTTTTGCGACGCTCGCGGAAGCGACAGAGGCTGTGGCGAGCCTCGGCGGTGCCGACGTGGTCTTCGACTTTGTCGGGGCTCAGGCGACGGTCGAACCCGCTCCGGCGCTTCTCGCTCCCGGCGGCCGAGTTGTCGTCGTGGGAAGTGCGGGCGGGCAACTGACCGTCGGCAAAAGCCTTGGTTTGGTCAACGGCTGGCAAGTTCGGGCGCCGTTCTGGGGCACCATCGAGGACCTGCGTCAGGTGGTCGAACTCGCCAGTGCAGGAAAGCTGCATGCCGAGGTGACCACGTTCACGTTCGACAGCGCACTGGAGGCATACGATCGCCTGCGTTCAGGCGATCTGTCCGGCCGCGCCGTACTGGTTCCCACAGCCCCTTCATCGCTGTGA

SEQ ID NO 158:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06582_wt

MLAVQLTAWGQPPQVREIPVPEPAEGQLLIKVGAAGLCRSDLHVMDSPAGRFDYPLPLTLGHEVAGTVVGAGPLADHAWIGENVVIHGVWPCGRCRNCRRERENYCLEKVPRGDGRLSPIGNGLGHPGGLAEYLLVPSEAVLVRVGSLSPQQAAPLADAGLTAYHAIRTNSDVIDSDTVALVIGIGGLGHLAVQILRSFGVTDIIAVETRTQTHALALESGAHACFATLAEATEAVASLGGADVVFDFVGAQATVEPAPALLAPGGRVVVVGSAGGQLTVGKSLGLVNGWQVRAPFWGTIEDLRQVVELASAGKLHAEVTTFTFDSALEAYDRLRSGDLSGRAVLVPTAPSSL*

SEQ ID NO 159:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06582_大肠杆菌，经优化的

ATGTTAGCTGTTCAACTCACCGCATGGGGCCAACCACCACAAGTTCGCGAAATCCCGGTTCCGGAACCAGCCGAGGGCCAACTGCTGATTAAGGTTGGCGCAGCCGGTCTGTGCCGTAGCGACCTTCACGTTATGGACAGCCCTGCTGGTCGTTTTGATTACCCGTTGCCGCTGACGCTGGGTCACGAAGTGGCCGGCACGGTTGTCGGTGCCGGTCCGTTGGCAGACCACGCGTGGATTGGTGAGAACGTCGTGATTCACGGTGTGTGGCCGTGTGGCCGTTGTCGTAATTGCCGTCGCGAGCGTGAGAACTACTGTTTGGAAAAAGTGCCGCGTGGTGACGGTCGTCTGTCCCCGATCGGCAATGGTCTGGGTCATCCGGGTGGTCTGGCAGAGTATCTGCTGGTGCCGAGCGAAGCCGTCCTGGTGCGTGTCGGCTCTCTGAGCCCGCAACAGGCAGCACCGCTGGCAGATGCGGGTCTGACCGCGTATCACGCGATTCGCACGAATAGCGACGTTATCGACTCTGATACCGTGGCGCTGGTCATCGGTATTGGTGGCCTGGGTCACCTGGCCGTTCAGATTCTGCGTTCCTTCGGCGTGACGGACATCATTGCAGTCGAGACTCGTACCCAGACGCATGCGTTGGCCCTGGAGAGCGGTGCGCATGCGTGCTTTGCGACCCTGGCGGAAGCAACCGAAGCGGTTGCGAGCTTGGGCGGTGCAGATGTTGTCTTTGACTTCGTTGGTGCGCAGGCGACTGTTGAGCCGGCACCAGCTCTGCTGGCACCTGGTGGCCGTGTTGTCGTGGTGGGTTCTGCGGGTGGCCAACTGACCGTCGGCAAATCCCTGGGTCTGGTGAATGGCTGGCAAGTGCGTGCGCCGTTTTGGGGCACCATTGAAGATTTGCGTCAAGTCGTGGAACTGGCGTCTGCAGGCAAGTTGCACGCCGAAGTTACCACGTTCACGTTCGATAGCGCGCTGGAAGCGTACGACCGCCTGCGTAGCGGTGATCTGAGCGGTCGCGCTGTACTGGTTCCGACCGCCCCTAGCAGCCTGTAA

SEQ ID NO 160:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-03945_wt

ATGATTCGCGCCGAACAGAATTCGAGATCCTCCATGCAGATGACAGCGGCGCTCTCACACGGCCCGCACTCCCCCTTCACGCTCGACACCGTCGAGATCGACGACCCCCGCGCAGACGAGATCCTGGTTCGCATCGTCGCGACCGGCCTGTGCCACACAGATCTGTTCACGAAGTCGGCGCTACCGGAAAGACTCGGCCCCTGCGTGTTCGGGCACGAAGGGGCGGGGGTGGTCGAGGCCGTCGGCTCGTCGATCGACAGCATTGCGCCCGGTGATCACGTGTTGCTGAGCTACCGCAGTTGCGGTGTGTGCAGGCAGTGTCTCAGCGGCCATCGGGCGTACTGCGAAAGCTCACACGGGCTCAACAGCTCTGGCGCACGCACCGACGGCTCGACGCCGATCCGGCGAGACGGAACCCCGCTACGGTCCGCCTTCTTCGGCCAGTCCAGCTTCGCGGAATACGTCATCGCCTCTGCCGACAACACCGTCGTCGTCGATCCTGCGGTGGACCTGACCGTCGCAGCTCCGCTCGGCTGCGGGTTTCAAACCGGCGCCGGCGCGGTACTGAATCTGCTTCGCCCCGAGCCCGACTCGACGTTTGTCGTTTTCGGGGCAGGCAGCGTCGGACTCGCAGCGCTGCTGGCGGCGAGGGCTGCCGGCGTTTCCACCCTGGTCGCCGTGGACCCCGTTGCGCAGCGGCGCGCACTCGCCGAGGAATTCGGCGCCGTCACTGTCGATCCCTCGAATGAAGATGTGATCGACGCGGTCCACGCCGCCACCGACGGAGGTTCGACGCATTCCCTCGACACCACCGGAATCGGCTCCGTGATCAATCAAGCCGTCACATCACTTCGAGCACGGGGAACACTGGCGGTAGTCGGACTCGGAGCATCCACGGTCGAGGTGAACATGGCCGACATCATGCTGAGCGGAAAGACAATTCGAGGATGCATCGAAGGAGAGTCGGAAGTCTCGACGTTCATCCCCGAACTCGTCGAACTCTTCACTGGTGGCCGGTTTCCGATCGACCGCTTGGTGACGCGCTACGCATTCGCCGACATCAACAAAGCCGTCGAAGATCAAGCGTCGGGGCGCGTCATCAAACCCGTTCTCGTGTGGTGA

SEQ ID NO 161:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-03945_wt

MIRAEQNSRSSMQMTAALSHGPHSPFTLDTVEIDDPRADEILVRIVATGLCHTDLFTKSALPERLGPCVFGHEGAGVVEAVGSSIDSIAPGDHVLLSYRSCGVCRQCLSGHRAYCESSHGLNSSGARTDGSTPIRRDGTPLRSAFFGQSSFAEYVIASADNTVVVDPAVDLTVAAPLGCGFQTGAGAVLNLLRPEPDSTFVVFGAGSVGLAALLAARAAGVSTLVAVDPVAQRRALAEEFGAVTVDPSNEDVIDAVHAATDGGSTHSLDTTGIGSVINQAVTSLRARGTLAVVGLGASTVEVNMADIMLSGKTIRGCIEGESEVSTFIPELVELFTGGRFPIDRLVTRYAFADINKAVEDQASGRVIKPVLVW*

SEQ ID NO 162:红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-03945_大肠杆菌，经优化的

ATGATTAGAGCAGAACAGAACAGCCGCAGCTCCATGCAAATGACCGCGGCACTGTCACATGGTCCGCACAGCCCGTTTACGCTGGATACGGTTGAGATTGACGATCCACGCGCCGACGAAATTCTGGTACGCATCGTTGCGACTGGTCTGTGTCATACGGACTTGTTTACCAAGAGCGCGCTGCCGGAGCGCCTGGGTCCGTGCGTGTTCGGCCACGAGGGTGCGGGCGTGGTTGAGGCAGTTGGCTCTAGCATTGACAGCATCGCTCCGGGTGATCACGTCCTGTTGTCCTACCGTAGCTGCGGCGTCTGCCGTCAGTGCCTGAGCGGCCACCGTGCTTACTGTGAGAGCTCCCACGGCCTGAATAGCTCCGGTGCTCGTACCGACGGTAGCACCCCGATCCGTCGTGATGGTACGCCGCTTCGTAGCGCGTTCTTCGGTCAATCCAGCTTCGCGGAATATGTTATCGCAAGCGCAGACAACACCGTTGTGGTCGATCCGGCCGTGGACTTGACCGTTGCAGCACCGCTGGGTTGTGGCTTTCAGACCGGCGCCGGCGCGGTGCTGAATCTGCTGCGCCCTGAGCCGGACAGCACTTTCGTCGTCTTTGGTGCCGGCAGCGTCGGTTTGGCGGCACTGCTGGCGGCGCGTGCGGCGGGTGTTTCGACCCTGGTCGCAGTTGATCCGGTCGCGCAGCGCCGTGCGTTGGCCGAAGAATTTGGTGCCGTTACCGTCGATCCGAGCAACGAAGATGTTATTGACGCTGTGCACGCGGCGACCGACGGTGGCAGCACGCATTCTCTGGATACCACGGGCATCGGTTCTGTGATTAACCAAGCCGTGACCTCTCTGCGTGCGCGTGGTACTCTGGCTGTGGTTGGCCTGGGTGCTAGCACGGTCGAGGTGAATATGGCAGACATTATGCTGAGCGGTAAAACGATCCGTGGTTGCATCGAGGGCGAGAGCGAAGTTTCGACGTTTATCCCGGAACTGGTCGAGCTGTTCACCGGTGGCCGTTTCCCGATTGACCGCCTGGTTACCCGTTATGCATTCGCCGATATCAACAAAGCTGTGGAAGATCAAGCGTCCGGTCGCGTCATCAAGCCAGTGCTGGTGTGGTAA

SEQ ID NO 163:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05240_wt

ATGATTCGCGCCGAACAGAATTCGACGTCCGCCATGCAGATGACAGCGGCGCTCTCACACGGCCCGCACTCCCCCTTCACACTCGACACCGTCGAGATCGACGAACCCCGCGCAGACGAGATCCTGGTTCGCATCGTCGCGACCGGCCTGTGCCACACAGATCTGTTCACGAAGTCGGTGCTACCGGAACGACTCGGCCCCTGCGTGTTCGGGCACGAAGGGGCGGGGGTGGTCGAGGCCGTCGGCTCGGCGATCGACAAGGTCGTGCCCGGCGATCACGTGTTGTTGAGCTACCGCAGTTGCGGTGTGTGCAGGCAGTGTCTCAGCGGCCATCGGGCGTACTGCGAAAGCTCACACGGGCTCAACAGCTCTGGCGCACGCACCGACGGCTCGACGCCGGTCCGGCGAAGCGGAACTCCGATACGGTCCGCCTTCTTCGGCCAGTCCAGCTTCGCGGAATACGTCATCGCCACTGCCGACAACACCGTCGTCGTCGATCCTGCAGTGGACCTGACCGTCGCGGCTCCCCTCGGCTGCGGATTTCAAACCGGCGCGGGTGCCGTGCTGAATCTACTTCGCCCCGAGCCCGACTCGACGTTTGTCGTCTTCGGAGCCGGCAGCGTCGGACTCGCAGCGCTACTGGCAGCGAGGGCTGCCGGCGTTTCCACCCTGGTCGCCGTGGACCCCGTTGCGCAGCGGCGCGCACTCGCCGAGGAATTCGGCGCCGTCACTGTCGATCCGACCACCGAGGACGCGGTCGAAGCAGTACGCGCCGCCACCGACGGAGGTTCGACACATTCCCTCGACACCACCGGAATCGGCTCCGTGATCAATCAAGCCGTCACATCACTTCGAGCACGGGGAACACTGGCGGTAGTCGGACTCGGAGCGTCCACGGTCGAGATGAACATGGCCGACATCATGCTGAGCGGAAAGACAATTCGAGGATGCATCGAAGGAGAGTCGGAAGTCTCGACGTTCATCCCCGAACTCGTCGAACTCTTCACTGGTGGCCGGTTTCCGATCGACCGCTTGGTGACGCGCTACGCCTTCTCCGACATCAACAAAGCCGTCGAAGATCAAGCGTCGGGGCGCGTCATCAAACCCGTTCTCGTGTGGTGA

SEQ ID NO 164:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05240_wt

MIRAEQNSTSAMQMTAALSHGPHSPFTLDTVEIDEPRADEILVRIVATGLCHTDLFTKSVLPERLGPCVFGHEGAGVVEAVGSAIDKVVPGDHVLLSYRSCGVCRQCLSGHRAYCESSHGLNSSGARTDGSTPVRRSGTPIRSAFFGQSSFAEYVIATADNTVVVDPAVDLTVAAPLGCGFQTGAGAVLNLLRPEPDSTFVVFGAGSVGLAALLAARAAGVSTLVAVDPVAQRRALAEEFGAVTVDPTTEDAVEAVRAATDGGSTHSLDTTGIGSVINQAVTSLRARGTLAVVGLGASTVEMNMADIMLSGKTIRGCIEGESEVSTFIPELVELFTGGRFPIDRLVTRYAFSDINKAVEDQASGRVIKPVLVW*

SEQ ID NO 165:玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05240_大肠杆菌，经优化的

ATGATTAGAGCAGAACAGAACAGCACCAGCGCGATGCAAATGACCGCGGCACTGTCACATGGTCCGCACAGCCCGTTTACGCTGGATACGGTTGAGATTGACGAGCCACGCGCCGACGAAATTCTGGTACGCATCGTTGCGACTGGTCTGTGTCATACGGACTTGTTTACCAAGAGCGTCCTGCCGGAGCGCCTGGGTCCGTGCGTGTTCGGCCACGAGGGTGCGGGCGTGGTTGAGGCAGTTGGCTCTGCCATTGACAAAGTTGTTCCGGGTGATCACGTCCTGTTGTCCTACCGTAGCTGCGGCGTCTGCCGTCAGTGCCTGAGCGGCCACCGTGCTTACTGTGAGAGCTCCCACGGCCTGAATAGCTCCGGTGCTCGTACCGACGGTAGCACCCCGGTGCGTCGTAGCGGTACGCCGATTCGTAGCGCGTTCTTCGGTCAATCCAGCTTCGCGGAATATGTTATCGCAACCGCAGACAACACCGTTGTGGTCGATCCGGCCGTGGACTTGACCGTTGCAGCACCGCTGGGTTGTGGCTTTCAGACCGGCGCCGGCGCGGTGCTGAATCTGCTGCGCCCTGAGCCGGACAGCACTTTCGTCGTCTTTGGTGCCGGCAGCGTCGGTTTGGCGGCACTGCTGGCGGCGCGTGCGGCGGGTGTTTCGACCCTGGTCGCAGTTGATCCGGTCGCGCAGCGCCGTGCGTTGGCCGAAGAATTTGGTGCCGTTACCGTCGATCCGACGACCGAAGATGCCGTTGAAGCTGTGCGCGCGGCGACCGACGGTGGCAGCACGCATTCTCTGGATACCACGGGCATCGGTTCTGTGATTAACCAAGCCGTGACCTCTCTGCGTGCGCGTGGTACTCTGGCTGTGGTTGGCCTGGGTGCTAGCACGGTCGAGATGAATATGGCAGACATTATGCTGAGCGGTAAAACGATCCGTGGTTGCATCGAGGGCGAGAGCGAAGTTTCGACGTTTATCCCGGAACTGGTCGAGCTGTTCACCGGTGGCCGTTTCCCGATTGACCGCCTGGTTACCCGTTATGCATTCAGCGATATCAACAAAGCTGTGGAAGATCAAGCGTCCGGTCGCGTCATCAAGCCAGTGCTGGTGTGGTAA

SEQ ID NO 166:解甲苯固氮弯曲菌(Azoarcus toluclasticus)_AzTolADH1_wt (NZ_KB899498.1:215502-216629(+))

ATGGGAAGCATCCAGGATTCGCTGTTCATTCGGGCACGCGCTGCCGTGCTGCGTACGGTGGGCGGGCCGCTCGAGATCGAGAACGTGCGCATCAGCCCCCCCAAGGGCGATGAAGTGCTGGTGCGCATGGTCGGAGTCGGCGTATGCCATACCGACGTGGTGTGCCGCGACGGTTTTCCCGTGCCGCTGCCGATTGTGCTCGGGCACGAAGGCTCCGGCATCGTCGAGGCCGTCGGCGAGCGCGTGACGAAAGTGAAGCCGGGCCAGCGTGTCGTGCTGTCGTTCAACTCCTGCGGGCACTGCGCGAGCTGCTGCGAGGATCACCCGGCGACCTGCCACCAGATGCTGCCGCTCAACTTCGGCGCGGCGCAGCGCGTCGATGGGGGCACGGTGATCGATGCGTCCGGCGAAGCGGTGCAGAGCCTCTTCTTCGGTCAGTCCTCGTTTGGCACCTACGCGCTCGCGCGCGAAGTGAATACGGTCCCGGTTCCGGACGCCGTGCCGCTCGAAATCCTCGGCCCGCTCGGTTGCGGGATCCAGACCGGGGCGGGTGCGGCGATCAATTCGCTCGCGCTGAAACCGGGCCAATCGCTCGCGATCTTCGGCGGGGGCAGCGTCGGCCTGAGCGCGCTGCTCGGCGCGCTCGCGGTCGGTGCCGGCCCGGTGGTCGTGATTGAGCCCAACGAACGGCGTCGCGCGCTGGCGCTCGATCTGGGTGCAAGCCACGCCTTCGATCCCTTCAACACCGAGGATCTCGTCGCGAGCATCAAGGCTGCGACCGGCGGAGGCGTCACGCACTCGCTCGATTCGACGGGCCTCCCCCCCGTCATCGCCAACGCGATCAACTGCACCCTCCCGGGCGGCACCGTCGGCCTGCTGGGGGTGCCGTCACCCGAAGCCGCGGTGCCTGTGACCCTGCTGGACCTGCTCGTGAAAAGCGTCACCCTGCGCCCGATCACCGAAGGCGACGCGAACCCGCAGGAATTCATCCCGCGCATGGTCCAACTCTACCGCGACGGCAAGTTCCCCTTCGACAAGCTGATCACCACCTATCGCTTCGACGACATTAATCAAGCCTTCAAGGCGACCGAGACCGGAGAGGCGATCAAGCCGGTGCTGGTGTTCTGA

SEQ ID NO 167:解甲苯固氮弯曲菌(Azoarcus toluclasticus)_AzTolADH1_wt (WP_018990713.1)

MGSIQDSLFIRARAAVLRTVGGPLEIENVRISPPKGDEVLVRMVGVGVCHTDVVCRDGFPVPLPIVLGHEGSGIVEAVGERVTKVKPGQRVVLSFNSCGHCASCCEDHPATCHQMLPLNFGAAQRVDGGTVIDASGEAVQSLFFGQSSFGTYALAREVNTVPVPDAVPLEILGPLGCGIQTGAGAAINSLALKPGQSLAIFGGGSVGLSALLGALAVGAGPVVVIEPNERRRALALDLGASHAFDPFNTEDLVASIKAATGGGVTHSLDSTGLPPVIANAINCTLPGGTVGLLGVPSPEAAVPVTLLDLLVKSVTLRPITEGDANPQEFIPRMVQLYRDGKFPFDKLITTYRFDDINQAFKATETGEAIKPVLVF*

SEQ ID NO 168:解甲苯固氮弯曲菌(Azoarcus toluclasticus)_AzTolADH1_大肠杆菌，经优化的

ATGGGTTCTATTCAAGATTCTCTGTTCATCCGTGCACGCGCCGCTGTTCTGCGTACTGTCGGTGGCCCGCTGGAAATTGAAAACGTCCGCATTAGCCCTCCGAAGGGTGACGAAGTGCTCGTGCGTATGGTTGGTGTTGGTGTGTGCCATACCGACGTTGTGTGTCGCGATGGCTTCCCGGTTCCGCTGCCGATTGTGCTGGGTCACGAGGGCAGCGGTATTGTCGAGGCAGTGGGCGAGCGTGTGACCAAGGTTAAACCGGGTCAGCGTGTCGTTTTATCCTTCAATAGCTGTGGTCATTGCGCGTCCTGCTGCGAGGACCACCCGGCCACCTGTCACCAGATGCTGCCACTGAACTTTGGTGCGGCGCAGCGCGTGGATGGTGGCACCGTTATCGACGCGAGCGGCGAGGCAGTGCAGAGCCTGTTTTTTGGTCAAAGCTCTTTCGGTACGTATGCATTGGCGCGTGAAGTCAATACCGTACCGGTGCCGGATGCAGTTCCGTTGGAAATCCTGGGCCCGTTGGGTTGCGGCATCCAGACGGGTGCGGGTGCGGCTATCAACAGCCTGGCGCTGAAACCTGGTCAATCGCTGGCAATCTTCGGTGGCGGCAGCGTCGGTCTGTCCGCCCTGCTGGGCGCGCTGGCCGTGGGCGCGGGCCCGGTCGTTGTCATTGAGCCGAACGAACGTCGTCGTGCGTTGGCGCTGGACCTGGGTGCGAGCCATGCATTTGATCCGTTCAACACTGAAGATTTGGTTGCGAGCATCAAAGCCGCTACGGGTGGCGGCGTTACCCACAGCCTGGACAGCACGGGTCTGCCGCCGGTCATCGCGAATGCAATCAACTGTACCTTGCCGGGCGGCACGGTCGGTCTGCTGGGCGTCCCGAGCCCAGAGGCTGCCGTTCCGGTGACGCTGCTGGATCTGCTGGTTAAATCAGTTACCCTGCGTCCGATTACCGAGGGTGACGCCAATCCGCAAGAATTTATTCCGCGTATGGTCCAGCTGTACCGCGACGGTAAATTTCCGTTTGATAAGCTGATTACGACCTACCGCTTCGACGACATCAATCAAGCGTTCAAGGCAACCGAAACCGGTGAAGCGATTAAGCCAGTGCTGGTGTTTTAA

SEQ ID NO 169:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeTPP_wt(KV878213.1: 2482776-2483627)

ATGGCATCTGTACCAGCTCCCCCATTTGTCCACGTCGAAGGAATGAGCAATTTCCGATCGATAGGAGGATATCCCCTTGAGACAGCATCGACAAACAATCACCGCTCCACGAGGCAAGGATTCGCATTTCGCAGTGCCGATCCAACCTACGTCACCCAGAAAGGCCTGGAAACCATCCTTTCGCTCGACATCACTCGAGCCTTTGACCTCCGCTCACTGGAAGAAGCAAAGGCACAGCGCGCAAAACTCCAGGCCGCCTCAGGATGTCTCGACTGCAGCATCAGCCAGCACATGATCCACCAGCCCACACCCCTATTTCCAGATGGGGACTGGAGTCCAGAGGCCGCAGGGGAGCGGTATCTGCAGTACGCCCAGGCTGAGGGAGATGGGATATCGGGCTACGTGGAGGTCTACGGAAACATGCTCGAGGAAGGTTGGATGGCGATTCGCGAGATTCTGCTTCATGTCCGGGACCGGCCTACAGAGGCGTTTCTATGCCATTGTAGTGCAGGGAAAGATCGTACGGGGATTGTCATTGCGGTTTTGTTGAAGGTTGCAGGGTGCTCGGATGATCTTGTGTGCAGAGAGTATGAGTTGACCGAGATCGGGTTGGCTCGACGGAGGGAGTTTATCGTGCAGCATCTGCTTAAGAAGCCGGAAATGAATGGATCGAGGGAACTGGCCGAAAGAGTGGCGGGGGCCAGGTATGAGAATATGAAGGAAACGCTGGAGATGGTGCAAACTAGATATAGAGGGATGAGGGGCTATTGCAAGGAGATTTGCGGCTTGACCGACGAAGATCTATCTATTATCCAGGGGAACTTGACTAGTCCGGAGAGTCCTATCTTCTAA

SEQ ID NO 170:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeTPP_wt(OJJ34585.1)

MASVPAPPFVHVEGMSNFRSIGGYPLETASTNNHRSTRQGFAFRSADPTYVTQKGLETILSLDITRAFDLRSLEEAKAQRAKLQAASGCLDCSISQHMIHQPTPLFPDGDWSPEAAGERYLQYAQAEGDGISGYVEVYGNMLEEGWMAIREILLHVRDRPTEAFLCHCSAGKDRTGIVIAVLLKVAGCSDDLVCREYELTEIGLARRREFIVQHLLKKPEMNGSRELAERVAGARYENMKETLEMVQTRYRGMRGYCKEICGLTDEDLSIIQGNLTSPESPIF

SEQ ID NO 171:温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeTPP_大肠杆菌，经优化的

ATGGCGTCTGTCCCTGCTCCACCGTTTGTTCATGTTGAAGGTATGTCTAATTTTCGTAGCATCGGTGGCTACCCGCTGGAGACTGCCTCCACGAATAACCATCGCTCGACCCGTCAAGGCTTCGCGTTTCGTAGCGCGGACCCGACGTATGTGACGCAGAAAGGCCTGGAAACCATTCTGTCCCTGGATATTACCCGCGCATTTGACTTGCGTAGCTTGGAAGAAGCAAAGGCACAACGTGCGAAGTTGCAGGCCGCGAGCGGTTGTCTGGATTGCAGCATTAGCCAACACATGATCCACCAACCGACCCCGCTGTTCCCGGATGGTGACTGGTCCCCGGAAGCGGCGGGTGAGCGCTACTTGCAGTACGCACAAGCTGAGGGTGATGGTATCAGCGGTTATGTCGAAGTTTATGGTAATATGCTGGAAGAGGGCTGGATGGCGATCCGTGAGATTCTGCTGCACGTCCGTGACCGCCCGACCGAAGCATTCCTGTGCCACTGTTCCGCCGGTAAAGATCGTACGGGTATCGTGATTGCTGTTCTGCTCAAAGTCGCGGGTTGCAGCGACGACCTGGTGTGTCGTGAGTACGAACTGACCGAGATTGGCCTGGCGCGCCGTAGAGAGTTCATCGTTCAGCATCTGCTGAAGAAACCGGAAATGAACGGCAGCCGTGAGCTGGCGGAGCGCGTCGCAGGCGCCCGTTACGAGAACATGAAAGAAACCCTGGAAATGGTGCAGACCCGTTACCGCGGCATGCGCGGCTATTGCAAAGAAATCTGCGGTCTGACCGACGAAGATCTGAGCATTATCCAGGGTAACCTGACGAGCCCGGAGAGCCCGATTTTCTAA

SEQ ID NO 172:细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_PvCPS(LC316181.1)

ATGAGCCCAATGGATTTACAAGAATCAGCGGCAGCTTTGGTGCGGCAGTTGGGGGAGAGAGTCGAAGATCGCCGTGGTTTTGGATTCATGAGCCCTGCCATCTATGATACCGCATGGGTCTCTATGATTAGCAAGACAATCGATGACCAAAAAACATGGTTGTTTGCAGAATGTTTCCAGTACATTCTTTCTCATCAGCTCGAAGACGGTGGTTGGGCAATGTATGCATCTGAAATCGACGCCATCCTAAACACTTCGGCCTCATTACTATCATTAAAGAGACATCTTTCAAATCCCTATCAAATTACATCTATCACACAAGAGGATCTGTCCGCCCGCATTAACAGGGCTCAGAATGCTTTACAGAAGCTTCTCAATGAGTGGAATGTCGACAGCACGCTCCACGTGGGATTCGAGATCCTAGTTCCGGCCCTACTCAGGTATCTCGAAGATGAGGGCATCGCTTTTGCTTTTTCTGGTAGAGAGCGCCTGCTTGAGATTGAGAAACAGAAATTATCAAAGTTCAAAGCACAGTATCTATACCTTCCAATCAAAGTGACAGCTTTGCATTCTCTGGAAGCGTTCATAGGCGCCATTGAGTTTGATAAAGTCAGTCACCACAAAGTCAGCGGTGCGTTCATGGCATCTCCATCATCCACAGCAGCTTACATGATGCATGCGACACAATGGGATGATGAATGCGAGGATTACCTACGCCACGTCATTGCTCATGCATCTGGGAAAGGATCCGGAGGTGTTCCAAGCGCTTTTCCTTCCACCATCTTTGAAAGCGTTTGGCCTCTATCAACTCTGCTAAAGGTGGGATATGATCTCAACTCGGCACCTTTTATCGAAAAAATCAGATCATACTTGCATGATGCATATATTGCTGAAAAGGGAATTCTCGGCTTCACTCCTTTTGTTGGCGCTGATGCAGATGATACCGCTACCACCATATTGGTGCTCAATCTTTTGAACCAACCAGTCTCAGTCGACGCGATGTTGAAGGAATTTGAAGAAGAACATCACTTCAAAACCTACTCTCAGGAGCGCAATCCTAGTTTCTCGGCCAATTGTAACGTTCTTCTTGCCTTACTATACAGTCAAGAGCCATCGCTTTATAGCGCGCAGATCGAAAAAGCTATAAGGTTCCTCTATAAGCAATTCACAGATTCAGAAATGGACGTTCGAGACAAATGGAATCTATCACCATACTATTCTTGGATGCTCATGACACAAGCCATCACGCGGTTGACGACTCTTCAGAAGACTTCGAAACTTTCAACATTGAGAGATGATTCTATCAGCAAAGGCTTGATTAGTCTGCTGTTTAGGATAGCTTCTACCGTGGTTAAAGACCAAAAGCCAGGAGGTTCTTGGGGCACTCGAGCTTCGAAAGAAGAGACTGCCTACGCAGTGTTGATTCTCACATATGCTTTCTACCTCGATGAGGTTACGGAGTCGTTGCGGCATGATATCAAGATCGCCATTGAGAATGGTTGCTCATTCCTATCTGAAAGAACCATGCAGTCCGATTCGGAGTGGCTTTGGGTTGAGAAAGTCACATATAAATCAGAGGTTCTTTCGGAAGCATATATCTTGGCCGCTCTTAAACGGGCAGCTGACTTACCCGACGAAAATGCAGAAGCAGCCCCCGTCATAAATGGAATTTCTACAAATGGATTTGAGCATACCGATAGAATTAACGGCAAGCTTAAAGTCAATGGTACCAACGGTACAAATGGCAGTCATGAGACAAACGGTATCAACGGTACGCATGAAATTGAACAGATCAATGGCGTCAACGGCACGAATGGTCACTCTGATGTGCCTCACGATACAAATGGCTGGGTAGAAGAGCCGACCGCCATCAATGAGACAAATGGCCACTACGTGAATGGCACGAATCACGAGACTCCCCTTACCAACGGCATTTCCAATGGAGATTCTGTTTCCGTTCATACAGACCACTCGGACAGTTACTATCAGCGCAGTGATTGGACAGCCGACGAAGAACAAATTCTTCTCGGTCCATTTGACTACCTGGAGAGCCTGCCAGGCAAGAATATGCGCTCACAACTGATTCAATCATTCAACACATGGCTCAAAGTCCCAACTGAGAGCTTGGATGTTATTATTAAGGTGATTTCAATGTTGCATACGGCCTCTCTCTTGATCGATGATATTCAGGATCAATCAATACTCCGCCGCGGGCAACCTGTAGCGCACAGCATCTTTGGCACAGCGCAAGCAATGAACTCAGGGAATTATGTCTACTTTCTAGCCCTTAGGGAGGTTCAGAAACTACAAAACCCGAAAGCCATCAGTATTTATGTTGACTCTTTGATTGATCTTCACCGTGGCCAAGGCATGGAGCTTTTCTGGCGGGATTCTCTCATGTGCCCAACCGAAGAGCAGTACCTTGACATGGTCGCAAACAAAACTGGCGGCCTGTTTTGCCTTGCTATCCAATTGATGCAAGCTGAAGCCACTATCCAAGTCGACTTCATACCACTTGTCCGACTACTCGGCATCATCTTCCAGATTTGTGATGATTACTTGAATCTGAAGTCTACGGCCTATACAGACAACAAAGGGTTGTGTGAGGATTTGACAGAGGGCAAATTCTCTTTTCCTATCATCCATAGCATTCGATCCAACCCTGGCAACCGACAGCTAATCAACATCTTGAAGCAAAAGCCACGTGAAGACGACATCAAACGCTATGCTCTATCCTATATGGAAAGCACCAACTCATTTGAGTATACTCGGGGTGTCGTTAGAAAACTGAAGACCGAGGCAATCGATACTATTCAAGGCTTGGAGAAGCACGGCCTGGAAGAGAATATTGGCATTCGAAAGATACTAGCTCGCATGTCCCTTGAGCTATGA

SEQ ID NO 173:细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_PvCPS(BBF88128.1)

MSPMDLQESAAALVRQLGERVEDRRGFGFMSPAIYDTAWVSMISKTIDDQKTWLFAECFQYILSHQLEDGGWAMYASEIDAILNTSASLLSLKRHLSNPYQITSITQEDLSARINRAQNALQKLLNEWNVDSTLHVGFEILVPALLRYLEDEGIAFAFSGRERLLEIEKQKLSKFKAQYLYLPIKVTALHSLEAFIGAIEFDKVSHHKVSGAFMASPSSTAAYMMHATQWDDECEDYLRHVIAHASGKGSGGVPSAFPSTIFESVWPLSTLLKVGYDLNSAPFIEKIRSYLHDAYIAEKGILGFTPFVGADADDTATTILVLNLLNQPVSVDAMLKEFEEEHHFKTYSQERNPSFSANCNVLLALLYSQEPSLYSAQIEKAIRFLYKQFTDSEMDVRDKWNLSPYYSWMLMTQAITRLTTLQKTSKLSTLRDDSISKGLISLLFRIASTVVKDQKPGGSWGTRASKEETAYAVLILTYAFYLDEVTESLRHDIKIAIENGCSFLSERTMQSDSEWLWVEKVTYKSEVLSEAYILAALKRAADLPDENAEAAPVINGISTNGFEHTDRINGKLKVNGTNGTNGSHETNGINGTHEIEQINGVNGTNGHSDVPHDTNGWVEEPTAINETNGHYVNGTNHETPLTNGISNGDSVSVHTDHSDSYYQRSDWTADEEQILLGPFDYLESLPGKNMRSQLIQSFNTWLKVPTESLDVIIKVISMLHTASLLIDDIQDQSILRRGQPVAHSIFGTAQAMNSGNYVYFLALREVQKLQNPKAISIYVDSLIDLHRGQGMELFWRDSLMCPTEEQYLDMVANKTGGLFCLAIQLMQAEATIQVDFIPLVRLLGIIFQICDDYLNLKSTAYTDNKGLCEDLTEGKFSFPIIHSIRSNPGNRQLINILKQKPREDDIKRYALSYMESTNSFEYTRGVVRKLKTEAIDTIQGLEKHGLEENIGIRKILARMSLEL

SEQ ID NO 174:细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_PvCPS_大肠杆菌，经优化的

ATGAGCCCTATGGATTTGCAAGAAAGCGCCGCAGCCCTGGTCCGTCAATTGGGTGAACGCGTTGAGGATCGCCGCGGTTTTGGTTTCATGAGCCCGGCCATTTATGACACGGCCTGGGTTAGCATGATTAGCAAGACCATCGACGACCAAAAAACTTGGCTGTTTGCGGAGTGCTTCCAGTACATTCTGTCTCACCAACTGGAAGATGGTGGCTGGGCGATGTACGCATCCGAAATCGATGCCATCTTGAATACTTCCGCGTCACTGCTGTCCCTGAAACGCCACCTGTCCAACCCTTACCAGATCACCAGCATCACTCAGGAAGATCTGAGCGCTCGCATCAACCGCGCTCAAAACGCCCTGCAGAAATTGCTGAACGAGTGGAACGTTGACTCCACGCTGCACGTCGGTTTCGAGATTCTGGTTCCGGCGCTGCTGCGCTATCTGGAAGATGAAGGCATCGCGTTTGCGTTCTCGGGTCGTGAGCGTTTGTTAGAGATTGAGAAACAAAAACTGTCCAAGTTTAAAGCGCAGTATTTGTACTTACCGATTAAGGTCACCGCACTGCATAGCCTGGAAGCCTTCATCGGCGCTATTGAGTTCGACAAAGTCAGCCATCACAAAGTATCCGGTGCTTTCATGGCGTCGCCGTCTAGCACCGCAGCATACATGATGCATGCGACGCAATGGGATGACGAATGTGAGGATTACTTGCGTCACGTGATCGCGCATGCGTCAGGTAAGGGTTCTGGCGGCGTGCCGAGCGCCTTTCCGAGCACCATCTTCGAGAGCGTTTGGCCGCTGTCTACTCTGCTGAAAGTTGGCTATGATCTGAATAGCGCTCCGTTCATCGAGAAAATTCGTAGCTACTTGCACGATGCCTATATCGCAGAGAAAGGTATTCTCGGTTTCACCCCGTTCGTTGGCGCTGACGCGGACGACACCGCTACCACGATTCTGGTGTTGAATCTGCTGAACCAACCGGTGAGCGTGGACGCGATGTTGAAAGAATTTGAAGAGGAACATCACTTCAAGACCTACAGCCAAGAGCGTAATCCGAGCTTTTCCGCAAACTGTAATGTTCTGCTGGCGCTGCTGTACAGCCAGGAACCGAGCCTGTACAGCGCGCAAATCGAAAAAGCGATCCGTTTTCTGTATAAGCAATTCACCGACTCTGAGATGGATGTGCGCGATAAATGGAACCTGTCCCCGTATTATAGCTGGATGCTGATGACCCAGGCCATCACCCGTCTGACGACCCTGCAAAAGACCAGCAAGCTGAGCACGCTGCGTGATGACAGCATTAGCAAGGGCCTGATTTCTCTGCTGTTCCGCATTGCATCCACCGTGGTTAAAGATCAAAAACCGGGTGGCAGCTGGGGCACGCGTGCGAGCAAAGAAGAAACGGCATACGCCGTGCTGATTCTGACCTACGCGTTTTATCTGGACGAGGTGACCGAGTCTCTGCGCCACGATATCAAAATTGCAATCGAGAATGGTTGCTCGTTCCTGAGCGAGCGCACCATGCAAAGCGACAGCGAGTGGCTGTGGGTCGAAAAGGTTACCTACAAGAGCGAAGTGCTGAGCGAAGCATACATCCTGGCAGCTCTGAAACGTGCGGCAGACTTGCCGGATGAGAACGCTGAGGCAGCCCCAGTGATCAACGGTATCTCTACCAATGGCTTTGAGCACACCGACCGCATTAATGGTAAACTCAAGGTCAATGGTACGAATGGCACCAACGGTTCCCACGAAACGAACGGTATCAATGGCACCCATGAGATTGAGCAAATTAATGGTGTCAACGGCACGAATGGCCATAGCGACGTGCCACATGACACGAATGGTTGGGTCGAGGAACCGACGGCGATTAATGAAACGAACGGTCACTACGTTAACGGCACCAACCATGAGACTCCGCTGACCAATGGTATTAGCAATGGTGACTCCGTGAGCGTTCACACCGACCATAGCGACAGCTACTATCAGCGTAGCGACTGGACCGCGGATGAAGAACAGATCCTGCTGGGTCCATTCGATTACCTGGAATCCCTGCCTGGTAAAAATATGCGCAGCCAGCTGATCCAGTCTTTCAATACGTGGCTGAAGGTCCCGACCGAGAGCTTGGACGTGATTATTAAGGTCATTAGCATGCTGCACACTGCTAGCCTGCTGATCGACGATATTCAGGACCAAAGCATCCTGCGTCGTGGTCAGCCTGTGGCGCACTCGATCTTCGGCACCGCGCAAGCGATGAACTCTGGTAACTATGTTTACTTCCTGGCATTGCGTGAAGTTCAGAAATTGCAAAACCCGAAGGCTATCAGCATTTATGTGGACAGCTTGATCGATCTTCATCGCGGCCAGGGCATGGAACTGTTCTGGCGTGATTCTCTGATGTGCCCGACTGAAGAACAGTATCTGGACATGGTGGCGAACAAGACCGGTGGCCTGTTTTGTCTGGCGATTCAGCTGATGCAGGCAGAAGCGACCATTCAGGTTGATTTTATTCCGCTGGTGCGTCTGCTGGGTATCATTTTCCAGATTTGCGACGACTACCTGAACTTGAAAAGCACTGCGTATACCGACAACAAAGGTCTGTGTGAAGATCTTACCGAGGGTAAATTCTCCTTCCCGATCATTCACAGCATCCGTAGCAATCCGGGCAATCGTCAGCTGATCAATATTCTGAAGCAAAAACCGCGCGAAGATGACATCAAGCGTTACGCACTGTCCTATATGGAGAGCACGAATAGCTTCGAGTACACCCGTGGCGTCGTCCGTAAATTGAAAACCGAAGCAATTGACACGATTCAAGGTCTGGAGAAGCATGGCCTGGAAGAAAACATTGGTATTCGTAAGATTCTGGCGCGTATGAGCCTGGAACTGTAA

SEQ ID NO 175:纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)_TalCeTPP_ wt

ATGTCTAATGACACCACTAGCACGGCTTCTGCCGGAACAGCAACTTCTTCGCGGTTTCTTTCTGTGGGCGGAGTTGTGAATTTCCGTGAACTGGGCGGTTATCCATGTGATTCTGTCCCTCCTGCTCCTGCCTCAAACGGCTCACCGGACAACGCATCTGAAGCGATCCTTTGGGTTGGCCACTCGTCCATTCGGCCTAGGTTTCTCTTTCGATCGGCACAGCCGTCTCAGATTACCCCGGCCGGTATTGAGACATTGATCCGCCAGCTTGGCATCCAGGCAATTTTTGACTTTCGTTCACGGACGGAAATTCAGCTTGTCGCCACTCGCTATCCTGATTCGCTACTCGAGATACCTGGTACGACTCGCTATTCCGTGCCCGTCTTCACGGAGGGCGACTATTCCCCGGCGTCATTAGTCAAGAGGTACGGAGTGTCCTCCGATACTGCAACTGATTCCACTTCCTCCAAATGTGCCAAGCCTACAGGATTCGTCCACGCATATGAGGCTATCGCACGCAGCGCAGCAGAAAACGGCAGTTTTCGTAAAATAACGGACCACATAATACAACATCCGGACCGGCCTATCCTGTTTCACTGTACATTGGGAAAAGACCGAACCGGTGTATTTGCAGCATTGTTATTGAGTCTTTGCGGGGTACCAAACGACACGATAGTTGAAGACTATGCTATGACTACCGAGGGATTTGGGGTCTGGCGAGAACATCTAATTCAACGCCTGTTACAAAGAAAGGATGCAGCTACGCGTGAGGATGCAGAATTCATTATTGCCAGCCACCCGGAGAGTATGAAGGCTTTTCTAGAAGATGTGGTAGCAACCAAGTTCGGGGATGCTCGAAATTACTTTATCCAGCACTGTGGATTGACGGAAGCGGAGGTTGATAAGCTAATTCGGACACTGGTCATTGCGAATTGA

SEQ ID NO 176:纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)_TalCeTPP_ wt(GAM42000.1)

MSNDTTSTASAGTATSSRFLSVGGVVNFRELGGYPCDSVPPAPASNGSPDNASEAILWVGHSSIRPRFLFRSAQPSQITPAGIETLIRQLGIQAIFDFRSRTEIQLVATRYPDSLLEIPGTTRYSVPVFTEGDYSPASLVKRYGVSSDTATDSTSSKCAKPTGFVHAYEAIARSAAENGSFRKITDHIIQHPDRPILFHCTLGKDRTGVFAALLLSLCGVPNDTIVEDYAMTTEGFGVWREHLIQRLLQRKDAATREDAEFIIASHPESMKAFLEDVVATKFGDARNYFIQHCGLTEAEVDKLIRTLVIAN

SEQ ID NO 177:纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)_TalCeTPP_ 大肠杆菌，经优化的

ATGAGCAACGACACGACCAGCACCGCATCCGCAGGCACCGCAACTTCTTCGCGCTTTCTGAGCGTCGGTGGCGTGGTTAACTTCCGTGAGTTGGGTGGCTACCCGTGCGACAGCGTTCCTCCTGCACCAGCAAGCAATGGTAGCCCGGACAATGCGAGCGAAGCGATTCTGTGGGTTGGTCACAGCAGCATTCGTCCGCGCTTCTTGTTTCGTAGCGCACAGCCGTCCCAGATCACCCCGGCCGGTATTGAAACGCTGATTCGCCAACTCGGTATTCAAGCGATCTTTGACTTTCGTTCCCGTACCGAGATCCAACTGGTGGCAACCCGCTACCCAGATAGCCTGCTGGAAATTCCGGGCACGACTCGTTACTCTGTTCCGGTCTTTACCGAGGGCGACTACAGCCCGGCTTCTCTGGTTAAGCGTTATGGTGTCTCTAGCGACACGGCAACGGATAGCACCAGCTCAAAGTGCGCGAAACCGACCGGCTTTGTGCATGCTTATGAAGCGATTGCTCGTTCTGCCGCGGAGAACGGTAGCTTCCGCAAGATCACCGACCACATTATCCAACATCCGGATCGCCCGATCCTGTTTCACTGCACGCTGGGCAAAGACCGTACCGGTGTTTTCGCAGCGCTGCTGCTGAGCTTGTGTGGTGTCCCGAATGACACCATCGTGGAAGATTATGCGATGACGACCGAAGGCTTCGGTGTGTGGCGTGAGCACTTGATTCAGCGTCTGCTGCAGCGCAAAGATGCGGCTACGCGTGAAGATGCCGAGTTCATTATCGCGAGCCATCCGGAGAGCATGAAAGCGTTCCTGGAAGATGTCGTTGCGACCAAATTCGGTGACGCCCGCAACTACTTTATCCAGCACTGTGGTCTGACCGAAGCCGAAGTGGATAAGCTGATCCGTACGCTGGTGATCGCGAATTAA

SEQ ID NO 178:解芳烃卡斯特罗尼氏菌(Castellaniella defragrans)_CdGeoA_ wt(NZ_HG916765.1 3061533-3062654(+))

ATGAACGACACCCAGGATTTCATTTCCGCGCAGGCCGCCGTGCTGCGCCAGGTCGGCGGGCCGCTCGCGGTCGAGCCCGTGCGCATCAGCATGCCCAAAGGCGACGAGGTCTTGATCCGCATCGCCGGCGTGGGCGTCTGCCACACCGACCTGGTGTGCCGCGACGGATTTCCCGTGCCGCTGCCGATCGTGCTCGGCCACGAAGGCTCCGGCACCGTCGAGGCGGTGGGCGAGCAGGTGCGCACGCTCAAGCCCGGCGACCGGGTCGTGCTGTCCTTCAATTCCTGCGGGCATTGCGGCAATTGCCACGACGGCCATCCGTCGAACTGCCTGCAGATGCTGCCCCTGAACTTCGGCGGCGCGCAGCGCGTGGACGGCGGCCAGGTGCTGGACGGCGCCGGCCATCCCGTGCAGAGCATGTTCTTCGGCCAGTCCTCGTTCGGCACGCATGCCGTGGCGCGCGAAATCAATGCGGTCAAGGTCGGCGACGACCTGCCGCTGGAACTGCTGGGCCCGCTGGGCTGCGGCATCCAGACCGGCGCGGGCGCGGCGATCAATTCGCTGGGGATCGGCCCGGGCCAGTCCCTGGCCATCTTCGGCGGTGGCGGCGTCGGCCTGAGCGCGCTGCTGGGCGCGCGCGCCGTCGGGGCGGACCGGGTCGTGGTGATCGAGCCCAATGCCGCGCGCCGGGCCCTGGCCCTGGAACTGGGCGCCAGCCATGCCCTCGACCCGCACGCCGAAGGCGACCTGGTGGCCGCGATCAAGGCGGCCACCGGCGGCGGCGCGACCCACTCGCTGGACACGACGGGCCTGCCCCCGGTCATCGGCAGCGCGATCGCCTGCACCCTGCCGGGCGGCACCGTGGGCATGGTCGGACTGCCGGCGCCCGATGCCCCGGTGCCGGCGACCCTGCTCGATCTGCTGAGCAAAAGCGTCACCCTGCGCCCGATCACCGAGGGCGACGCGGACCCGCAGCGCTTCATCCCGCGCATGCTGGATTTCCATCGCGCGGGCAAATTCCCGTTCGACCGGCTGATCACCCGCTACCGTTTCGACCAGATCAACGAGGCCCTGCACGCCACCGAGAAGGGCGAGGCGATCAAGCCGGTGCTGGTGTTCTGA

SEQ ID NO 179:解芳烃卡斯特罗尼氏菌(Castellaniella defragrans)_CdGeoA_ wt(WP_043683915.1)

MNDTQDFISAQAAVLRQVGGPLAVEPVRISMPKGDEVLIRIAGVGVCHTDLVCRDGFPVPLPIVLGHEGSGTVEAVGEQVRTLKPGDRVVLSFNSCGHCGNCHDGHPSNCLQMLPLNFGGAQRVDGGQVLDGAGHPVQSMFFGQSSFGTHAVAREINAVKVGDDLPLELLGPLGCGIQTGAGAAINSLGIGPGQSLAIFGGGGVGLSALLGARAVGADRVVVIEPNAARRALALELGASHALDPHAEGDLVAAIKAATGGGATHSLDTTGLPPVIGSAIACTLPGGTVGMVGLPAPDAPVPATLLDLLSKSVTLRPITEGDADPQRFIPRMLDFHRAGKFPFDRLITRYRFDQINEALHATEKGEAIKPVLVF

SEQ ID NO 180:解芳烃卡斯特罗尼氏菌(Castellaniella defragrans)_CdGeoA_ 大肠杆菌，经优化的

ATGAACGATACGCAGGATTTTATTAGCGCCCAAGCCGCAGTGTTACGTCAGGTCGGTGGCCCGCTGGCCGTTGAGCCTGTTCGTATCAGCATGCCGAAGGGTGACGAAGTCCTGATTCGTATCGCGGGTGTTGGTGTGTGCCACACCGACTTGGTGTGCCGTGATGGCTTCCCGGTGCCGCTGCCAATTGTGCTGGGTCACGAGGGTAGCGGTACTGTCGAAGCCGTCGGTGAACAAGTCCGTACCCTGAAACCGGGCGATCGCGTCGTGCTGAGCTTTAACAGCTGCGGTCATTGCGGTAACTGTCACGACGGTCACCCGAGCAATTGCCTGCAGATGCTGCCGCTGAACTTCGGTGGCGCGCAACGCGTGGACGGTGGCCAAGTTTTGGACGGTGCGGGTCATCCGGTTCAGTCCATGTTTTTCGGCCAGTCCAGCTTTGGCACCCACGCAGTAGCGCGCGAGATCAACGCAGTCAAGGTCGGCGATGATCTGCCACTGGAACTGCTGGGTCCGTTGGGTTGTGGCATTCAAACCGGTGCGGGTGCAGCTATCAATTCTCTGGGCATTGGTCCGGGTCAGTCTCTGGCTATCTTCGGCGGCGGCGGCGTGGGTCTGAGCGCACTGCTGGGCGCCCGTGCGGTGGGTGCCGACCGTGTTGTTGTCATTGAGCCGAATGCAGCGCGCCGTGCGCTGGCATTGGAACTGGGTGCCAGCCACGCACTGGACCCGCATGCCGAGGGCGACCTTGTTGCGGCGATTAAAGCTGCGACGGGTGGCGGCGCTACGCATAGCTTGGATACGACCGGCCTGCCGCCAGTCATTGGCTCCGCGATCGCGTGTACTCTGCCGGGTGGCACCGTTGGTATGGTTGGTCTGCCGGCGCCGGACGCACCGGTCCCTGCGACGCTGTTGGATCTGCTGAGCAAATCGGTTACCCTGCGTCCGATTACCGAGGGTGACGCTGACCCGCAACGCTTCATCCCGCGTATGCTGGATTTCCATCGTGCGGGCAAGTTTCCGTTCGACCGCCTGATCACCCGTTACCGCTTTGATCAGATCAATGAAGCGCTGCACGCGACCGAGAAAGGTGAAGCAATCAAACCGGTTCTGGTGTTTTAA

SEQ ID NO 181:三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)_GGPP合酶carG_wt (JQ289995.1)

ATGTTGACCTCTAGCAAATCAATTGAATCCTTCCCCAAGAATGTTCAACCTTATGGCAAGCATTATCAAAATGGCTTGGAACCTGTTGGAAAAAGCCAAGAAGATATTCTCTTGGAGCCATTCCACTATCTCTGTTCGAATCCTGGTAAAGATGTCCGAACCAAGATGATTGAAGCGTTCAATGCTTGGCTGAAAGTACCCAAGGACGATTTGATCGTCATCACACGTGTGATTGAAATGCTTCATAGTGCTAGTTTGTTAATTGATGATGTGGAAGATGATTCCGTGTTGCGTCGTGGTGTTCCTGCAGCTCATCATATATATGGTACTCCTCAAACTATCAATTGTGCTAATTACGTGTACTTTCTTGCACTGAAAGAAATTGCCAAGTTGAACAAGCCCAACATGATTACTATCTATACCGATGAATTGATCAATTTGCACAGAGGGCAAGGAATGGAATTGTTTTGGCGTGACACCTTAACTTGTCCTACAGAGAAAGAATTTCTTGACATGGTAAACGACAAAACTGGTGGCCTCTTGAGATTAGCTGTGAAACTTATGCAAGAAGCTAGTCAATCGGGAACTGATTATACGGGACTCGTAAGTAAGATTGGTATCCATTTCCAAGTACGCGACGATTATATGAATTTGCAGTCAAAAAACTATGCTGACAACAAAGGATTCTGCGAAGACTTGACAGAAGGAAAATTCTCTTTCCCTATTATACATTCAATCCGCTCTGACCCAAGCAATCGCCAGCTTTTGAACATTTTAAAACAGCGCAGTAGCTCTATCGAACTCAAGCAATTTGCCTTGCAGCTACTGGAAAACACAAACACTTTCCAATACTGTCGTGATTTCTTACGTGTCTTGGAAAAGGAAGCTAGAGAAGAAATTAAGCTTTTAGGGGGTAACATCATGTTGGAGAAAATTATGGATGTCTTGAGTGTCAATGAATAA

SEQ ID NO 182:三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)_GGPP合酶carG_wt (AFC92798.1)

MLTSSKSIESFPKNVQPYGKHYQNGLEPVGKSQEDILLEPFHYLCSNPGKDVRTKMIEAFNAWLKVPKDDLIVITRVIEMLHSASLLIDDVEDDSVLRRGVPAAHHIYGTPQTINCANYVYFLALKEIAKLNKPNMITIYTDELINLHRGQGMELFWRDTLTCPTEKEFLDMVNDKTGGLLRLAVKLMQEASQSGTDYTGLVSKIGIHFQVRDDYMNLQSKNYADNKGFCEDLTEGKFSFPIIHSIRSDPSNRQLLNILKQRSSSIELKQFALQLLENTNTFQYCRDFLRVLEKEAREEIKLLGGNIMLEKIMDVLSVNE*

SEQ ID NO 183:三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)_GGPP合酶carG_酵母，经优化的

ATGTTGACATCTTCTAAGTCCATCGAATCTTTCCCAAAGAACGTTCAACCATACGGTAAACACTATCAAAACGGTTTAGAACCAGTCGGTAAGTCTCAAGAAGACATCTTGTTGGAACCTTTCCACTACTTATGTTCTAATCCAGGTAAGGATGTTAGAACCAAGATGATTGAAGCTTTCAACGCCTGGTTGAAAGTCCCAAAGGACGATTTGATTGTTATCACCAGAGTCATTGAAATGTTGCACTCCGCTTCTTTGTTGATTGATGACGTCGAGGACGATTCTGTCTTGAGAAGAGGTGTCCCAGCCGCCCACCATATCTACGGTACCCCTCAAACCATCAACTGCGCTAACTACGTTTATTTCTTGGCCTTGAAAGAAATCGCCAAGTTGAACAAGCCAAATATGATTACTATTTATACCGATGAATTGATCAACTTGCACAGAGGTCAAGGTATGGAATTGTTCTGGCGTGATACCTTGACCTGCCCAACTGAGAAAGAGTTTTTGGATATGGTTAACGATAAGACTGGTGGTTTGTTGAGATTGGCCGTCAAGTTGATGCAAGAGGCTTCTCAATCTGGTACCGACTATACTGGTTTGGTTTCTAAGATCGGTATCCATTTTCAAGTTAGAGATGACTACATGAACTTGCAATCCAAAAACTACGCCGATAATAAGGGTTTCTGTGAAGATTTGACCGAAGGTAAGTTCTCCTTTCCAATTATTCACTCTATCAGATCTGACCCATCCAACAGACAATTATTGAATATTTTGAAGCAAAGATCTTCTTCTATTGAATTGAAACAATTCGCTTTACAATTGTTAGAAAACACTAACACTTTTCAATACTGTAGAGATTTCTTGAGAGTTTTGGAAAAGGAAGCCAGAGAAGAGATCAAATTATTGGGTGGTAACATCATGTTGGAAAAGATTATGGACGTCTTGTCTGTTAATGAATAA

SEQ ID NO 184:丹参(Salvia miltiorrhiza)_SmCPS2_wt(EU003997.1 73-2454 (+))

ATGGCCTCCTTATCCTCTACAATCCTCAGCCGCTCTCCGGCGGCCCGCCGCAGAATTACGCCGGCGTCGGCTAAGCTTCACCGGCCGGAATGTTTCGCCACCAGTGCATGGATGGGCAGCAGCAGTAAAAACCTTTCTCTCAGCTACCAACTTAATCACAAGAAAATATCAGTTGCCACAGTAGATGCGCCGCAGGTGCATGACCACGACGGCACTACCGTTCATCAAGGCCATGATGCGGTGAAGAATATTGAGGATCCCATTGAATACATCAGGACGTTGTTGAGGACGACGGGGGACGGGAGAATAAGCGTGTCGCCGTACGACACGGCGTGGGTGGCGATGATCAAGGACGTGGAGGGGCGGGACGGCCCCCAGTTCCCCTCCAGCCTCGAGTGGATCGTGCAGAATCAACTCGAGGATGGATCGTGGGGCGATCAGAAGCTTTTCTGCGTCTACGATCGCCTCGTCAATACCATCGCGTGCGTGGTAGCCTTGAGATCGTGGAATGTTCATGCTCACAAGGTCAAAAGAGGAGTGACGTACATCAAGGAAAATGTGGATAAACTTATGGAGGGAAATGAGGAGCACATGACTTGTGGGTTCGAAGTGGTGTTTCCGGCGCTTCTACAAAAAGCGAAAAGCTTAGGCATCGAAGATCTTCCTTACGATTCTCCGGCGGTGCAGGAGGTTTATCATGTCAGGGAACAAAAGTTGAAAAGGATTCCACTGGAGATTATGCACAAAATACCGACATCATTATTATTTAGTTTGGAAGGGCTCGAAAATTTGGATTGGGACAAACTTTTGAAACTGCAGTCAGCCGACGGTTCCTTCCTCACCTCTCCCTCCTCCACCGCCTTCGCGTTCATGCAAACCAAGGATGAAAAATGCTACCAATTCATCAAGAACACGATAGACACTTTCAACGGAGGAGCGCCACACACTTATCCCGTCGACGTGTTTGGAAGGCTCTGGGCGATCGACCGGCTGCAGCGCCTCGGAATTTCCCGCTTTTTTGAGCCGGAGATTGCTGATTGCTTAAGCCACATCCACAAATTTTGGACGGATAAGGGAGTTTTCAGTGGGAGAGAATCGGAGTTTTGCGACATTGACGATACATCCATGGGAATGAGGCTTATGAGGATGCATGGATATGATGTTGATCCAAATGTGCTGAGGAATTTCAAGCAGAAAGATGGTAAATTCTCTTGCTACGGCGGGCAGATGATCGAGTCGCCTTCTCCGATATACAATCTTTACAGAGCTTCTCAGCTCCGATTTCCCGGCGAGGAAATCCTCGAAGATGCGAAGAGATTCGCCTACGATTTCTTGAAAGAAAAACTAGCCAACAATCAGATTCTGGATAAATGGGTTATTTCTAAGCACTTGCCTGATGAGATCAAGCTCGGGCTAGAGATGCCGTGGCTCGCCACCCTACCCCGCGTCGAGGCGAAGTACTACATCCAGTACTACGCCGGCTCCGGCGACGTGTGGATCGGAAAGACGCTGTACAGGATGCCGGAGATCAGCAACGACACGTACCACGACCTAGCCAAGACGGATTTCAAGAGATGCCAAGCGAAGCATCAGTTCGAGTGGCTCTACATGCAAGAATGGTACGAGAGCTGCGGCATCGAGGAATTCGGGATAAGCAGAAAGGACCTTCTGCTTTCCTATTTCTTGGCGACCGCGAGCATCTTCGAGCTCGAGAGGACCAACGAGCGAATCGCGTGGGCCAAATCGCAGATCATCGCTAAGATGATCACTTCTTTCTTCAACAAGGAAACTACGTCGGAGGAGGACAAGCGAGCTCTTTTGAACGAGCTCGGAAACATTAATGGCCTCAACGACACAAACGGCGCAGGGAGAGAAGGTGGGGCCGGTAGCATTGCGCTAGCGACCCTCACTCAGTTCCTCGAGGGATTCGACAGATACACCAGACACCAGCTGAAAAATGCTTGGAGCGTATGGCTGACGCAGCTGCAACATGGCGAAGCAGACGACGCGGAGCTCCTAACCAACACGTTGAACATCTGCGCCGGCCACATCGCCTTCAGGGAAGAAATACTGGCGCACAACGAGTACAAAGCTCTCTCCAACCTAACCAGCAAAATCTGTCGACAGCTTTCTTTCATTCAAAGCGAAAAGGAGATGGGAGTAGAGGGCGAGATCGCAGCGAAATCGAGCATAAAAAACAAGGAACTCGAAGAAGACATGCAAATGTTGGTGAAGTTGGTGCTTGAGAAATATGGGGGCATAGATAGAAATATAAAGAAAGCGTTTTTAGCAGTTGCGAAGACTTATTATTACAGAGCGTATCATGCCGCCGACACCATAGACACACACATGTTTAAAGTGCTTTTCGAGCCAGTCGCGTGA

SEQ ID NO 185:丹参(Salvia miltiorrhiza)_SmCPS2_

MATVDAPQVHDHDGTTVHQGHDAVKNIEDPIEYIRTLLRTTGDGRISVSPYDTAWVAMIKDVEGRDGPQFPSSLEWIVQNQLEDGSWGDQKLFCVYDRLVNTIACVVALRSWNVHAHKVKRGVTYIKENVDKLMEGNEEHMTCGFEVVFPALLQKAKSLGIEDLPYDSPAVQEVYHVREQKLKRIPLEIMHKIPTSLLFSLEGLENLDWDKLLKLQSADGSFLTSPSSTAFAFMQTKDEKCYQFIKNTIDTFNGGAPHTYPVDVFGRLWAIDRLQRLGISRFFEPEIADCLSHIHKFWTDKGVFSGRESEFCDIDDTSMGMRLMRMHGYDVDPNVLRNFKQKDGKFSCYGGQMIESPSPIYNLYRASQLRFPGEEILEDAKRFAYDFLKEKLANNQILDKWVISKHLPDEIKLGLEMPWLATLPRVEAKYYIQYYAGSGDVWIGKTLYRMPEISNDTYHDLAKTDFKRCQAKHQFEWLYMQEWYESCGIEEFGISRKDLLLSYFLATASIFELERTNERIAWAKSQIIAKMITSFFNKETTSEEDKRALLNELGNINGLNDTNGAGREGGAGSIALATLTQFLEGFDRYTRHQLKNAWSVWLTQLQHGEADDAELLTNTLNICAGHIAFREEILAHNEYKALSNLTSKICRQLSFIQSEKEMGVEGEIAAKSSIKNKELEEDMQMLVKLVLEKYGGIDRNIKKAFLAVAKTYYYRAYHAADTIDTHMFKVLFEPVA*

SEQ ID NO 186:丹参(Salvia miltiorrhiza)_SmCPS2_酵母，经优化的

ATGGCTACTGTTGACGCTCCACAAGTTCACGACCACGACGGTACTACTGTTCACCAAGGTCACGACGCTGTTAAGAACATCGAAGACCCAATCGAATACATCAGAACTTTGTTGAGAACTACTGGTGACGGTAGAATCTCTGTTTCTCCATACGACACTGCTTGGGTTGCTATGATCAAGGACGTTGAAGGTAGAGACGGTCCACAATTCCCATCTTCTTTGGAATGGATCGTTCAAAACCAATTGGAAGACGGTTCTTGGGGTGACCAAAAGTTGTTCTGTGTTTACGACAGATTGGTTAACACTATCGCTTGTGTTGTTGCTTTGAGATCTTGGAACGTTCACGCTCACAAGGTTAAGAGAGGTGTTACTTACATCAAGGAAAACGTTGACAAGTTGATGGAAGGTAACGAAGAACACATGACTTGTGGTTTCGAAGTTGTTTTCCCAGCTTTGTTGCAAAAGGCTAAGTCTTTGGGTATCGAAGACTTGCCATACGACTCTCCAGCTGTTCAAGAAGTTTACCACGTTAGAGAACAAAAGTTGAAGAGAATCCCATTGGAAATCATGCACAAGATCCCAACTTCTTTGTTGTTCTCTTTGGAAGGTTTGGAAAACTTGGACTGGGACAAGTTGTTGAAGTTGCAATCTGCTGACGGTTCTTTCTTGACTTCTCCATCTTCTACTGCTTTCGCTTTCATGCAAACTAAGGACGAAAAGTGTTACCAATTCATCAAGAACACTATCGACACTTTCAACGGTGGTGCTCCACACACTTACCCAGTTGACGTTTTCGGTAGATTGTGGGCTATCGACAGATTGCAAAGATTGGGTATCTCTAGATTCTTCGAACCAGAAATCGCTGACTGTTTGTCTCACATCCACAAGTTCTGGACTGACAAGGGTGTTTTCTCTGGTAGAGAATCTGAATTCTGTGACATCGACGACACTTCTATGGGTATGAGATTGATGAGAATGCACGGTTACGACGTTGACCCAAACGTTTTGAGAAACTTCAAGCAAAAGGACGGTAAGTTCTCTTGTTACGGTGGTCAAATGATCGAATCTCCATCTCCAATCTACAACTTGTACAGAGCTTCTCAATTGAGATTCCCAGGTGAAGAAATCTTGGAAGACGCTAAGAGATTCGCTTACGACTTCTTGAAGGAAAAGTTGGCTAACAACCAAATCTTGGACAAGTGGGTTATCTCTAAGCACTTGCCAGACGAAATCAAGTTGGGTTTGGAAATGCCATGGTTGGCTACTTTGCCAAGAGTTGAAGCTAAGTACTACATCCAATACTACGCTGGTTCTGGTGACGTTTGGATCGGTAAGACTTTGTACAGAATGCCAGAAATCTCTAACGACACTTACCACGACTTGGCTAAGACTGACTTCAAGAGATGTCAAGCTAAGCACCAATTCGAATGGTTGTACATGCAAGAATGGTACGAATCTTGTGGTATCGAAGAATTCGGTATCTCTAGAAAGGACTTGTTGTTGTCTTACTTCTTGGCTACTGCTTCTATCTTCGAATTGGAAAGAACTAACGAAAGAATCGCTTGGGCTAAGTCTCAAATCATCGCTAAGATGATCACTTCTTTCTTCAACAAGGAAACTACTTCTGAAGAAGACAAGAGAGCTTTGTTGAACGAATTGGGTAACATCAACGGTTTGAACGACACTAACGGTGCTGGTAGAGAAGGTGGTGCTGGTTCTATCGCTTTGGCTACTTTGACTCAATTCTTGGAAGGTTTCGACAGATACACTAGACACCAATTGAAGAACGCTTGGTCTGTTTGGTTGACTCAATTGCAACACGGTGAAGCTGACGACGCTGAATTGTTGACTAACACTTTGAACATCTGTGCTGGTCACATCGCTTTCAGAGAAGAAATCTTGGCTCACAACGAATACAAGGCTTTGTCTAACTTGACTTCTAAGATCTGTAGACAATTGTCTTTCATCCAATCTGAAAAGGAAATGGGTGTTGAAGGTGAAATCGCTGCTAAGTCTTCTATCAAGAACAAGGAATTGGAAGAAGACATGCAAATGTTGGTTAAGTTGGTTTTGGAAAAGTACGGTGGTATCGACAGAAACATCAAGAAGGCTTTCTTGGCTGTTGCTAAGACTTACTACTACAGAGCTTACCACGCTGCTGACACTATCGACACTCACATGTTCAAGGTTTTGTTCGAACCAGTTGCTTAA

SEQ ID NO 187:快乐鼠尾草(Salvia sclarea)_SsLPS_wt(JN133923.1)

ATGACTTCTGTAAATTTGAGCAGAGCACCAGCAGCGATTACCCGGCGCAGGCTGCAGCTACAGCCGGAATTTCATGCCGAGTGTTCATGGCTGAAAAGCAGCAGCAAACACGCGCCCTTGACCTTGAGTTGCCAAATCCGTCCTAAGCAACTCTCCCAAATAGCTGAATTGAGAGTAACAAGCCTGGATGCGTCGCAAGCGAGTGAAAAAGACATTTCCCTTGTTCAAACTCCGCATAAGGTTGAGGTTAATGAAAAGATCGAGGAGTCAATCGAGTACGTCCAAAATCTGTTGATGACGTCGGGCGACGGGCGAATAAGCGTGTCACCCTATGACACGGCAGTGATCGCCCTGATCAAGGACTTGAAAGGGCGCGACGCCCCGCAGTTTCCGTCATGTCTCGAGTGGATCGCGCACCACCAACTGGCTGATGGCTCATGGGGCGACGAATTCTTCTGTATTTATGATCGGATTCTAAATACATTGGCATGTGTCGTAGCCTTGAAATCATGGAACCTTCACTCTGATATTATTGAAAAAGGAGTGACGTACATCAAGGAGAATGTGCATAAACTTAAAGGTGCAAATGTTGAGCACAGGACAGCGGGGTTCGAACTTGTGGTTCCTACTTTTATGCAAATGGCCACAGATTTGGGCATCCAAGATCTGCCCTATGATCATCCCCTCATCAAGGAGATTGCTGACACAAAACAACAAAGATTGAAAGAGATACCCAAGGATTTGGTTTACCAAATGCCAACGAATTTACTGTACAGTTTAGAAGGGTTAGGAGATTTGGAGTGGGAAAGGCTACTGAAACTGCAGTCGGGCAATGGCTCCTTCCTCACTTCGCCGTCGTCCACCGCCGCCGTCTTGATGCATACCAAAGATGAAAAATGTTTGAAATACATCGAAAACGCCCTCAAGAATTGCGACGGAGGAGCACCACATACTTATCCAGTCGATATCTTCTCAAGACTTTGGGCAATCGATAGGCTACAACGCCTAGGAATTTCTCGTTTCTTCCAGCACGAGATCAAGTATTTCTTAGATCACATCGAAAGCGTTTGGGAGGAGACCGGAGTTTTCAGTGGAAGATATACGAAATTTAGCGATATTGATGACACGTCCATGGGCGTTAGGCTTCTCAAAATGCACGGATACGACGTCGATCCAAATGTACTAAAACATTTCAAGCAACAAGATGGTAAATTTTCCTGCTACATTGGTCAATCGGTCGAGTCTGCATCTCCAATGTACAATCTTTATAGGGCTGCTCAACTAAGATTTCCAGGAGAAGAAGTTCTTGAAGAAGCCACTAAATTTGCCTTTAACTTCTTGCAAGAAATGCTAGTCAAAGATCGACTTCAAGAAAGATGGGTGATATCCGACCACTTATTTGATGAGATAAAGCTGGGGTTGAAGATGCCATGGTACGCCACTCTACCCCGAGTCGAGGCTGCATATTATCTAGACCATTATGCTGGTTCTGGTGATGTATGGATTGGCAAGAGTTTCTACAGGATGCCAGAAATCAGCAATGATACATACAAGGAGCTTGCGATATTGGATTTCAACAGATGCCAAACACAACATCAGTTGGAGTGGATCCACATGCAGGAATGGTACGACAGATGCAGCCTTAGCGAATTCGGGATAAGCAAAAGAGAGTTGCTTCGCTCTTACTTTCTGGCCGCAGCAACCATATTCGAACCGGAGAGAACTCAAGAGAGGCTTCTGTGGGCCAAAACCAGAATTCTTTCTAAGATGATCACTTCATTTGTCAACATTAGTGGAACAACACTATCTTTGGACTACAATTTCAATGGCCTCGATGAAATAATTAGTAGTGCCAATGAAGATCAAGGACTGGCTGGGACTCTGCTGGCAACCTTCCATCAACTTCTAGACGGATTCGATATATACACTCTCCATCAACTCAAACATGTTTGGAGCCAATGGTTCATGAAAGTGCAGCAAGGAGAGGGAAGCGGCGGGGAAGACGCGGTGCTCCTAGCGAACACGCTCAACATCTGCGCCGGCCTCAACGAAGACGTGTTGTCCAACAATGAATACACGGCTCTGTCCACCCTCACAAATAAAATCTGCAATCGCCTCGCCCAAATTCAAGACAATAAGATTCTCCAAGTTGTGGATGGGAGCATAAAGGATAAGGAGCTAGAACAGGATATGCAGGCGTTGGTGAAGTTAGTGCTTCAAGAAAATGGCGGCGCCGTAGACAGAAACATCAGACACACGTTTTTGTCGGTTTCCAAGACTTTCTACTACGATGCCTACCACGACGATGAGACGACCGATCTTCATATCTTCAAAGTACTCTTTCGACCGGTTGTATGA

SEQ ID NO 188:快乐鼠尾草(Salvia sclarea)_SsLPS_大肠杆菌，经优化的

MASQASEKDISLVQTPHKVEVNEKIEESIEYVQNLLMTSGDGRISVSPYDTAVIALIKDLKGRDAPQFPSCLEWIAHHQLADGSWGDEFFCIYDRILNTLACVVALKSWNLHSDIIEKGVTYIKENVHKLKGANVEHRTAGFELVVPTFMQMATDLGIQDLPYDHPLIKEIADTKQQRLKEIPKDLVYQMPTNLLYSLEGLGDLEWERLLKLQSGNGSFLTSPSSTAAVLMHTKDEKCLKYIENALKNCDGGAPHTYPVDIFSRLWAIDRLQRLGISRFFQHEIKYFLDHIESVWEETGVFSGRYTKFSDIDDTSMGVRLLKMHGYDVDPNVLKHFKQQDGKFSCYIGQSVESASPMYNLYRAAQLRFPGEEVLEEATKFAFNFLQEMLVKDRLQERWVISDHLFDEIKLGLKMPWYATLPRVEAAYYLDHYAGSGDVWIGKSFYRMPEISNDTYKELAILDFNRCQTQHQLEWIHMQEWYDRCSLSEFGISKRELLRSYFLAAATIFEPERTQERLLWAKTRILSKMITSFVNISGTTLSLDYNFNGLDEIISSANEDQGLAGTLLATFHQLLDGFDIYTLHQLKHVWSQWFMKVQQGEGSGGEDAVLLANTLNICAGLNEDVLSNNEYTALSTLTNKICNRLAQIQDNKILQVVDGSIKDKELEQDMQALVKLVLQENGGAVDRNIRHTFLSVSKTFYYDAYHDDETTDLHIFKVLFRPVV*

SEQ ID NO 189:快乐鼠尾草(Salvia sclarea)_SsLPS_大肠杆菌，经优化的

ATGGCATCCCAAGCGTCCGAGAAAGATATTAGCCTGGTTCAAACCCCGCATAAGGTCGAGGTCAACGAAAAGATCGAAGAGAGCATCGAGTACGTCCAAAATCTGCTGATGACGAGCGGTGACGGTCGTATCTCCGTGTCTCCGTACGATACCGCGGTCATCGCTCTGATTAAAGATCTGAAGGGTCGCGACGCACCGCAGTTCCCGAGCTGTCTGGAGTGGATTGCGCACCACCAGTTAGCGGATGGTAGCTGGGGCGACGAGTTCTTTTGTATCTATGACCGCATTTTGAATACCCTGGCGTGCGTCGTCGCACTGAAATCTTGGAATCTGCACAGCGACATTATTGAAAAAGGCGTGACCTACATTAAGGAAAACGTCCATAAGCTGAAAGGCGCGAATGTTGAGCATAGAACCGCCGGTTTTGAGCTGGTTGTTCCGACCTTCATGCAGATGGCGACTGACCTGGGTATTCAGGATCTGCCGTACGATCATCCTCTTATCAAAGAAATCGCTGATACGAAGCAACAGCGCCTGAAAGAAATTCCGAAAGATTTGGTTTATCAGATGCCGACCAATCTGCTGTATAGCCTGGAAGGCCTGGGCGATTTAGAGTGGGAGCGTTTGCTGAAGCTGCAGTCTGGTAATGGTAGCTTCCTGACGAGCCCAAGCAGCACGGCGGCAGTTCTGATGCATACCAAAGACGAGAAGTGTTTGAAATACATTGAGAATGCGCTGAAGAACTGCGACGGTGGCGCTCCTCATACGTATCCGGTTGACATCTTTAGCCGCTTGTGGGCGATCGACCGTTTGCAACGTCTGGGCATTAGCCGTTTCTTCCAACACGAGATCAAATACTTTCTGGACCACATCGAGTCAGTCTGGGAAGAAACCGGCGTGTTTAGCGGTCGTTACACGAAGTTTAGCGACATCGATGACACGAGCATGGGTGTCCGCCTGCTGAAAATGCACGGTTACGACGTAGACCCAAACGTGTTGAAACACTTTAAGCAGCAAGACGGCAAATTCAGCTGCTACATCGGCCAGAGCGTCGAGAGCGCGAGCCCGATGTATAATCTGTACCGTGCCGCCCAGCTGCGTTTCCCGGGTGAAGAAGTGCTTGAAGAAGCAACTAAATTCGCGTTTAACTTCCTGCAAGAGATGCTGGTGAAGGATCGCTTGCAAGAGCGTTGGGTTATTAGCGATCACCTGTTTGACGAGATTAAGCTCGGTCTGAAGATGCCGTGGTATGCTACCCTGCCGCGTGTTGAGGCCGCTTATTACCTGGATCACTATGCGGGTAGCGGTGATGTGTGGATTGGTAAGTCTTTTTACCGCATGCCGGAGATTAGCAATGACACCTACAAAGAATTGGCCATCCTGGACTTTAACCGTTGTCAGACTCAGCATCAGCTGGAGTGGATTCACATGCAAGAGTGGTATGACCGCTGCTCTCTGTCCGAGTTTGGTATTAGCAAGCGTGAGCTGCTGCGTAGCTACTTCCTGGCTGCCGCAACCATTTTCGAACCGGAACGCACCCAAGAGCGTCTGCTCTGGGCAAAGACCCGCATCCTGAGCAAGATGATTACCAGCTTCGTCAACATCTCCGGTACGACCCTGAGCCTGGATTACAACTTCAACGGTTTGGATGAGATCATTTCCAGCGCGAATGAAGATCAGGGTCTGGCGGGTACGCTGTTGGCCACGTTCCATCAACTGCTGGATGGTTTCGACATTTACACCCTGCACCAACTGAAACACGTCTGGTCGCAATGGTTTATGAAAGTTCAGCAAGGCGAGGGCTCCGGCGGCGAAGATGCGGTCCTGCTGGCAAATACTCTGAATATCTGCGCGGGTCTGAATGAAGATGTGCTGTCGAACAACGAGTATACCGCGCTGAGCACGCTGACGAACAAGATCTGCAACCGTCTGGCCCAGATCCAGGACAACAAGATTCTGCAAGTGGTGGACGGCAGCATCAAAGACAAAGAACTGGAACAGGATATGCAGGCATTGGTTAAACTGGTGCTGCAGGAAAACGGTGGCGCAGTGGACCGTAACATCCGTCACACGTTTCTGAGCGTTAGCAAGACCTTCTACTATGACGCGTATCACGACGATGAAACCACCGATCTGCATATCTTTAAAGTCCTGTTCCGTCCGGTTGTTTAA

SEQ ID NO 190:成团泛菌(Pantoea agglomerans)_CrtE_wt(M38424.1 40-963 (+))

ATGGTGAGTGGCAGTAAAGCGGGCGTTTCGCCTCATCGCGAAATAGAAGTAATGAGACAATCCATTGACGATCACCTGGCTGGCCTGTTACCTGAAACCGACAGCCAGGATATCGTCAGCCTTGCGATGCGTGAAGGCGTCATGGCACCCGGTAAACGGATCCGTCCGCTGCTGATGCTGCTGGCCGCCCGCGACCTCCGCTACCAGGGCAGTATGCCTACGCTGCTCGATCTCGCCTGCGCCGTTGAACTGACCCATACCGCGTCGCTGATGCTCGACGACATGCCCTGCATGGACAACGCCGAGCTGCGCCGCGGTCAGCCCACTACCCACAAAAAATTTGGTGAGAGCGTGGCGATCCTTGCCTCCGTTGGGCTGCTCTCTAAAGCCTTTGGTCTGATCGCCGCCACCGGCGATCTGCCGGGGGAGAGGCGTGCCCAGGCGGTCAACGAGCTCTCTACCGCCGTGGGCGTGCAGGGCCTGGTACTGGGGCAGTTTCGCGATCTTAACGATGCCGCCCTCGACCGTACCCCTGACGCTATCCTCAGCACCAACCACCTCAAGACCGGCATTCTGTTCAGCGCGATGCTGCAGATCGTCGCCATTGCTTCCGCCTCGTCGCCGAGCACGCGAGAGACGCTGCACGCCTTCGCCCTCGACTTCGGCCAGGCGTTTCAACTGCTGGACGATCTGCGTGACGATCACCCGGAAACCGGTAAAGATCGCAATAAGGACGCGGGAAAATCGACGCTGGTCAACCGGCTGGGCGCAGACGCGGCCCGGCAAAAGCTGCGCGAGCATATTGATTCCGCCGACAAACACCTCACTTTTGCCTGTCCGCAGGGCGGCGCCATCCGACAGTTTATGCATCTGTGGTTTGGCCATCACCTTGCCGACTGGTCACCGGTCATGAAAATCGCCTGA

SEQ ID NO 191:成团泛菌(Pantoea agglomerans)_CrtE_wt(AAA24819.1)

MVSGSKAGVSPHREIEVMRQSIDDHLAGLLPETDSQDIVSLAMREGVMAPGKRIRPLLMLLAARDLRYQGSMPTLLDLACAVELTHTASLMLDDMPCMDNAELRRGQPTTHKKFGESVAILASVGLLSKAFGLIAATGDLPGERRAQAVNELSTAVGVQGLVLGQFRDLNDAALDRTPDAILSTNHLKTGILFSAMLQIVAIASASSPSTRETLHAFALDFGQAFQLLDDLRDDHPETGKDRNKDAGKSTLVNRLGADAARQKLREHIDSADKHLTFACPQGGAIRQFMHLWFGHHLADWSPVMKIA*

SEQ ID NO 192:成团泛菌(Pantoea agglomerans)_CrtE_酵母，经优化的

ATGGTTTCTGGTTCGAAAGCAGGAGTATCACCTCATAGGGAAATCGAAGTCATGAGACAGTCCATTGATGACCACTTAGCAGGATTGTTGCCAGAAACAGATTCCCAGGATATCGTTAGCCTTGCTATGAGAGAAGGTGTTATGGCACCTGGTAAACGTATCAGACCTTTGCTGATGTTACTTGCTGCAAGAGACCTGAGATATCAGGGTTCTATGCCTACACTACTGGATCTAGCTTGTGCTGTTGAACTGACACATACTGCTTCCTTGATGCTGGATGACATGCCTTGTATGGACAATGCGGAACTTAGAAGAGGTCAACCAACAACCCACAAGAAATTCGGAGAATCTGTTGCCATTTTGGCTTCTGTAGGTCTGTTGTCGAAAGCATTTGGCTTGATTGCTGCAACTGGTGATCTTCCAGGTGAAAGGAGAGCACAAGCTGTAAACGAGCTATCTACTGCAGTTGGTGTTCAAGGTCTAGTCTTAGGACAGTTCAGAGATTTGAATGACGCAGCTTTGGACAGAACTCCTGATGCTATCCTGTCTACGAACCATCTGAAGACTGGCATCTTGTTCTCAGCTATGTTGCAAATCGTAGCCATTGCTTCTGCTTCTTCACCATCTACTAGGGAAACGTTACACGCATTCGCATTGGACTTTGGTCAAGCCTTTCAACTGCTAGACGATTTGAGGGATGATCATCCAGAGACAGGTAAAGACCGTAACAAAGACGCTGGTAAAAGCACTCTAGTCAACAGATTGGGTGCTGATGCAGCTAGACAGAAACTGAGAGAGCACATTGACTCTGCTGACAAACACCTGACATTTGCATGTCCACAAGGAGGTGCTATAAGGCAGTTTATGCACCTATGGTTTGGACACCATCTTGCTGATTGGTCTCCAGTGATGAAGATCGCCTAA

SEQ ID NO 193:细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_TalVeTPP_wt (LHCL01000010.1 150095-151030(+))

ATGTCTAATGACACCACTACCACGGCTTCTGCCGGAACAGCAACTTCTTCGCGGTTTCTTTCCGTGGGGGGAGTTGTGAACTTCCGTGAACTGGGCGGTTACCCATGTGATTCTGTCCCTCCTGCTCCTGCCTCAAACGGCTCACCGGACAATGCATCTGAAGCGACCCTTTGGGTTGGCCACTCGTCCATTCGGCCTGGATTTCTGTTTCGATCGGCACAGCCGTCTCAGATTACCCCGGCCGGTATTGAGACATTGATCCGCCAGCTTGGCATCCAGACAATTTTTGACTTTCGTTCAAGGACGGAAATTGAGCTTGTTGCCACTCGCTATCCTGATTCGCTACTTGAGATACCTGGCACGACTCGCTATTCCGTGCCCGTCTTCTCGGAAGGCGACTATTCCCCAGCGTCATTAGTCAAGAGGTACGGAGTGTCCTCCGATACTGCAACCGATTCCACTTCCTCCAAAAGTGCTAAGCCTACAGGATTCGTCCACGCATATGAGGCTATCGCACGCAGTGCAGCAGAAAACGGCAGTTTTCGTAAGATAACGGACCACATAATACAACATCCGGACCGGCCTATTCTGTTTCACTGTACACTGGGGAAAGACCGAACCGGTGTGTTTGCAGCATTGTTATTGAGTCTTTGCGGGGTACCAGACGAGACGATAGTTGAAGACTATGCTATGACTACCGAGGGATTTGGAGCCTGGCGGGAACATCTAATTCAACGCTTGCTACAAAGGAAGGATGCAGCTACGCGCGAGGATGCAGAATCCATTATTGCCAGCCCCCCGGAGACTATGAAGGCTTTTCTAGAAGATGTGGTAGCAGCCAAGTTCGGGGGTGCTCGAAATTACTTTATCCAGCACTGTGGATTTACGGAAGCTGAGGTTGATAAGTTAAGCCATACACTGGCCATTACGAATTGA

SEQ ID NO 194:细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_TalVeTPP_wt (KUL89334.1)

MSNDTTTTASAGTATSSRFLSVGGVVNFRELGGYPCDSVPPAPASNGSPDNASEATLWVGHSSIRPGFLFRSAQPSQITPAGIETLIRQLGIQTIFDFRSRTEIELVATRYPDSLLEIPGTTRYSVPVFSEGDYSPASLVKRYGVSSDTATDSTSSKSAKPTGFVHAYEAIARSAAENGSFRKITDHIIQHPDRPILFHCTLGKDRTGVFAALLLSLCGVPDETIVEDYAMTTEGFGAWREHLIQRLLQRKDAATREDAESIIASPPETMKAFLEDVVAAKFGGARNYFIQHCGFTEAEVDKLSHTLAITN

SEQ ID NO 195:细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_TalVeTPP_酵母，经优化的

ATGTCTAACGACACTACTACTACTGCTTCTGCTGGTACTGCTACTTCTTCTAGATTCTTGTCTGTTGGTGGTGTTGTTAACTTCAGAGAATTGGGTGGTTACCCATGTGACTCTGTTCCACCAGCTCCAGCTTCTAACGGTTCTCCAGACAACGCTTCTGAAGCTACTTTGTGGGTTGGTCACTCTTCTATCAGACCAGGTTTCTTGTTCAGATCTGCTCAACCATCTCAAATCACTCCAGCTGGTATCGAAACTTTGATCAGACAATTGGGTATCCAAACTATCTTCGACTTCAGATCTAGAACTGAAATCGAATTGGTTGCTACTAGATACCCAGACTCTTTGTTGGAAATCCCAGGTACTACTAGATACTCTGTTCCAGTTTTCTCTGAAGGTGACTACTCTCCAGCTTCTTTGGTTAAGAGATACGGTGTTTCTTCTGACACTGCTACTGACTCTACTTCTTCTAAGTCTGCTAAGCCAACTGGTTTCGTTCACGCTTACGAAGCTATCGCTAGATCTGCTGCTGAAAACGGTTCTTTCAGAAAGATCACTGACCACATCATCCAACACCCAGACAGACCAATCTTGTTCCACTGTACTTTGGGTAAGGACAGAACTGGTGTTTTCGCTGCTTTGTTGTTGTCTTTGTGTGGTGTTCCAGACGAAACTATCGTTGAAGACTACGCTATGACTACTGAAGGTTTCGGTGCTTGGAGAGAACACTTGATCCAAAGATTGTTGCAAAGAAAGGACGCTGCTACTAGAGAAGACGCTGAATCTATCATCGCTTCTCCACCAGAAACTATGAAGGCTTTCTTGGAAGACGTTGTTGCTGCTAAGTTCGGTGGTGCTAGAAACTACTTCATCCAACACTGTGGTTTCACTGAAGCTGAAGTTGACAAGTTGTCTCACACTTTGGCTATCACTAACTAA

SEQ ID NO 196:人工_RBS序列

AAGGAGGTAAAAAA

SEQ ID NO 197:人工_BVMO序列基序8

GAGxSGL

X₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或I

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 198:人工_BVMO序列基序1

EKNxxxxGTWxENRYPGCACDVPxHxYxxSFE

X₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是H或P。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A、D或E。

X₆可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G或S。

X₁₁可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F、L或Y。

X₂₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或S。

X₂₆可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A、C或N。

X₂₈可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或T。

X₂₉可以是任何天然存在的氨基酸，特别是W或Y。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 199:人工_BVMO序列基序2

LxNAxGILNxWxxPxIPG

X₂可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I、L或V。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G、S或T。

X₁₀可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或Q。

X₁₂可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K或R。

X₁₃可以是任何天然存在的氨基酸，特别是W或Y。

X₁₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G、P或S。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 200:人工_BVMO序列基序3

LxxKxVxxIGxGSSGIQIxPxI

X₂可以是任何天然存在的氨基酸，特别是E、K或N。

X₃可以是任何天然存在的氨基酸，特别是D或G。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K、T或V。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或G。

X₈可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V。

X₁₁可以是任何天然存在的氨基酸，特别是N或S。

X₁₉可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V。

X₂₁可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或N。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 201:人工_BVMO序列基序4

GCRRxTPGxxYLExL

X₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或P。

X₉可以是任何天然存在的氨基酸，特别是P或T。

X₁₀可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G、H或N。

X₁₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或S。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 202:人工_BVMO序列基序5

CATGFDxxxxPRFxxxG

X₇可以是任何天然存在的氨基酸，特别是T或V。

X₈可以是任何天然存在的氨基酸，特别是S或T。

X₉可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F或Y。

X₁₀可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K或R。

X₁₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K或P。

X₁₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F或L。

X₁₆可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I或V。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 203:人工_BVMO序列基序6

PNxFxxxGPNxPxxNGxV

X₃可以是任何天然存在的氨基酸，特别是S或Y。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F、I或S。

X₆可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F、I或T。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或M。

X₁₁可以是任何天然存在的氨基酸，特别是C或G。

X₁₃可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I或V。

X₁₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或G。

X₁₇可以是任何天然存在的氨基酸，特别是P或S。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 204:人工_BVMO序列基序7

AxWPGSxLHYxEAxxxPRxED

X₂可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或T。

X₁₁可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或M。

X₁₄可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I或L。

X₁₅可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A、K或Q。

X₁₆可以是任何天然存在的氨基酸，特别是D、H或S。

X₁₉可以是任何天然存在的氨基酸，特别是W或Y。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 205:人工_烯醛裂解多肽序列基序1

G-[Y或-]-x-W-x-G-x-x-[F、L或I]-x-[T、S或R]-G-[H或D]

GxxWxGxxxxxGx

X₂可以是Y或可以删除。

X₃可以是任何天然存在的氨基酸。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸。

X₈可以是任何天然存在的氨基酸。

X₉可以是F、L或I。

X₁₀可以是任何天然存在的氨基酸。

X₁₁可以是R、S或T。

X₁₃可以是H或D。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 206:人工_烯醛裂解多肽序列基序2

W-[Y、A或V]-G-K-x-[F或Y]-x-[S或D]

WxGKxxxx

X₂可以是A、V或Y。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸。

X₆可以是F或Y。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸。

X₈可以是D或S。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 207:人工_烯醛裂解多肽序列基序3

[G或S]-x-[A或G]-x-[L或V]-x-x-x-x-[F、Y或L]-R-G-x-V

xxxxxxxxxxRGxV

X₁可以是G或S。

X₂可以是任何天然存在的氨基酸。

X₃可以是A或G。

X₄可以是任何天然存在的氨基酸。

X₅可以是L或V。

X₆可以是任何天然存在的氨基酸。

X₇可以是任何天然存在的氨基酸。

X₈可以是任何天然存在的氨基酸。

X₉可以是任何天然存在的氨基酸。

X₁₀可以是F、L或Y。

X₁₃可以是任何天然存在的氨基酸。

X的编号对应于它在序列中的位置。

SEQ ID NO 208:人工_烯醛裂解多肽序列基序4

[M或L]-[V或I]-Y-D-x-x-P-[I或V]-x-D-[H或S]-[F或L]

xxYDxxPxxDxx

X₁可以是L或M。

X₂可以是I或V。

X₅可以是任何天然存在的氨基酸。

X₆可以是任何天然存在的氨基酸。

X₈可以是I或V。

X₉可以是任何天然存在的氨基酸。

X₁₁可以是H或S。

X₁₂可以是F或L。

X的编号对应于它在序列中的位置。

序列表

<110> Firmenich SA

<120> 萜烯化合物受控降解的生物催化方法

<130> 12060PCT

<160> 208

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1767

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1767)

<400> 1

atg cct tcc gca atc acc ccg ccg gtt gat cat cgc agt ctt cca ggt 48

Met Pro Ser Ala Ile Thr Pro Pro Val Asp His Arg Ser Leu Pro Gly

1 5 10 15

ctt ttc aag cca cag agg aag ctc aaa gtg ata tgt gtc gga gcc ggc 96

Leu Phe Lys Pro Gln Arg Lys Leu Lys Val Ile Cys Val Gly Ala Gly

20 25 30

gcc tcg ggc tta ctt ctt tcc tac aag ata caa cga cac ttc gag gat 144

Ala Ser Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Lys Ile Gln Arg His Phe Glu Asp

35 40 45

ttc gag ctc caa gtc ttt gag aag aat ccc gag gta tca gga acc tgg 192

Phe Glu Leu Gln Val Phe Glu Lys Asn Pro Glu Val Ser Gly Thr Trp

50 55 60

tac gag aac agg tat ccc ggc tgc gct tgt gat gtt ccc tcg cat aat 240

Tyr Glu Asn Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Asn

65 70 75 80

tat aca tgg tct ttt gag ccc aaa acc gac tgg tcc gcc aac tat gca 288

Tyr Thr Trp Ser Phe Glu Pro Lys Thr Asp Trp Ser Ala Asn Tyr Ala

85 90 95

tca tcg aag gag att ttc aaa tat ttc aag gac ttc acg agg aaa tat 336

Ser Ser Lys Glu Ile Phe Lys Tyr Phe Lys Asp Phe Thr Arg Lys Tyr

100 105 110

ggt cta agc aag tac atc aag ctg gaa cat gag gtc gtg gga gcc acg 384

Gly Leu Ser Lys Tyr Ile Lys Leu Glu His Glu Val Val Gly Ala Thr

115 120 125

tgg atg gag gcg gag gca cag tgg aaa gtt gac gtc aag gac ctt cga 432

Trp Met Glu Ala Glu Ala Gln Trp Lys Val Asp Val Lys Asp Leu Arg

130 135 140

agt gga aac acg cag agc tcg ttt gcg cat ata ctg gtc aat gca gga 480

Ser Gly Asn Thr Gln Ser Ser Phe Ala His Ile Leu Val Asn Ala Gly

145 150 155 160

ggc att ttg aat gct tgg cga tac ccg cca att cca gga atc aag gat 528

Gly Ile Leu Asn Ala Trp Arg Tyr Pro Pro Ile Pro Gly Ile Lys Asp

165 170 175

ttc aag ggt gat ctt gtt cac tcc gca gct tgg cca gaa cat ctt gat 576

Phe Lys Gly Asp Leu Val His Ser Ala Ala Trp Pro Glu His Leu Asp

180 185 190

ctt aat ggg aag gtt gtc ggt ctc atc gga aat gga tcc tcc ggc att 624

Leu Asn Gly Lys Val Val Gly Leu Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile

195 200 205

cag atc ctt ccg gcc atc aag aag gat gta aag caa ctc gtt aca ttc 672

Gln Ile Leu Pro Ala Ile Lys Lys Asp Val Lys Gln Leu Val Thr Phe

210 215 220

att cgg gaa gca act tgg gtg gcg cct cct tta ggt caa gcc tat cgt 720

Ile Arg Glu Ala Thr Trp Val Ala Pro Pro Leu Gly Gln Ala Tyr Arg

225 230 235 240

gcg ttc tcg act gat gaa cag gct cag ttt gcg caa gat ccg cgc cat 768

Ala Phe Ser Thr Asp Glu Gln Ala Gln Phe Ala Gln Asp Pro Arg His

245 250 255

cac ctg gag aca cgg cgt gca act gag gct acc atg aat caa tca ttt 816

His Leu Glu Thr Arg Arg Ala Thr Glu Ala Thr Met Asn Gln Ser Phe

260 265 270

ggt atc ttc cat tcg gga tcc gag gag cag aaa ggg gtt cgc caa tat 864

Gly Ile Phe His Ser Gly Ser Glu Glu Gln Lys Gly Val Arg Gln Tyr

275 280 285

atg cag aat atc atg gaa acg aag ctc aac aac aaa cag ctc gag agt 912

Met Gln Asn Ile Met Glu Thr Lys Leu Asn Asn Lys Gln Leu Glu Ser

290 295 300

gtg ctg att cct gag tgg tcg gtc ggt tgt cgg cgt ctt aca cca ggt 960

Val Leu Ile Pro Glu Trp Ser Val Gly Cys Arg Arg Leu Thr Pro Gly

305 310 315 320

act aat tat cta gaa tcc ctg tca gac gac aat gtc aag gtc gtc tat 1008

Thr Asn Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Asp Asp Asn Val Lys Val Val Tyr

325 330 335

ggt gag atc aca caa att acc gaa tcg ggt gtc atc tgc gat gat ggt 1056

Gly Glu Ile Thr Gln Ile Thr Glu Ser Gly Val Ile Cys Asp Asp Gly

340 345 350

aaa ggc gaa tat ccc gtt gaa gtt ctt att tgc gcc acc ggc ttc gac 1104

Lys Gly Glu Tyr Pro Val Glu Val Leu Ile Cys Ala Thr Gly Phe Asp

355 360 365

acc acc ttc aaa cca cga ttc cca ctc atc ggt aca acc caa gag aaa 1152

Thr Thr Phe Lys Pro Arg Phe Pro Leu Ile Gly Thr Thr Gln Glu Lys

370 375 380

ctc agt gat gtt tgg aaa gat gat ccg agg ggc tac ttt ggg atc gca 1200

Leu Ser Asp Val Trp Lys Asp Asp Pro Arg Gly Tyr Phe Gly Ile Ala

385 390 395 400

acc aac aac tat ccc aac tac ttc ttc act ctt gga cca aat tgt cca 1248

Thr Asn Asn Tyr Pro Asn Tyr Phe Phe Thr Leu Gly Pro Asn Cys Pro

405 410 415

atc ggt aat ggc ccc gtg ctg tgt gcc att gaa gct gag gtt gaa tat 1296

Ile Gly Asn Gly Pro Val Leu Cys Ala Ile Glu Ala Glu Val Glu Tyr

420 425 430

ata atc aac atg ctc tcg aag ttt cag aag gag aac att cgt tct ttt 1344

Ile Ile Asn Met Leu Ser Lys Phe Gln Lys Glu Asn Ile Arg Ser Phe

435 440 445

gat atc aag gca gat gct gtc gac gcc ttc aac gac tgg aag gat gac 1392

Asp Ile Lys Ala Asp Ala Val Asp Ala Phe Asn Asp Trp Lys Asp Asp

450 455 460

ttc atg aaa gat acc atc tgg gca gaa caa tgc cgg tca tgg tac aag 1440

Phe Met Lys Asp Thr Ile Trp Ala Glu Gln Cys Arg Ser Trp Tyr Lys

465 470 475 480

gca gga tcc gcc acc ggt aaa atc ctt gca ttg tgg cca ggc tcg act 1488

Ala Gly Ser Ala Thr Gly Lys Ile Leu Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr

485 490 495

ttg cac tac ttg gaa gca ctc aag tcg ccg cgg tgg gag gac tgg gac 1536

Leu His Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Ser Pro Arg Trp Glu Asp Trp Asp

500 505 510

ttc aag tat cag cct ggt aga aat cgt ttc cac tac ttt gga aat ggt 1584

Phe Lys Tyr Gln Pro Gly Arg Asn Arg Phe His Tyr Phe Gly Asn Gly

515 520 525

cat agc tgt gct gag cag gat ggc gat ctg agc tgg tac att cgc aac 1632

His Ser Cys Ala Glu Gln Asp Gly Asp Leu Ser Trp Tyr Ile Arg Asn

530 535 540

gag gat gat tct tat att gat ccg gta ctc aag ccg aag ccg aag gca 1680

Glu Asp Asp Ser Tyr Ile Asp Pro Val Leu Lys Pro Lys Pro Lys Ala

545 550 555 560

gca gtt gaa agc gag gca cat atc gcc ctg cca gga atc ggt ccg atg 1728

Ala Val Glu Ser Glu Ala His Ile Ala Leu Pro Gly Ile Gly Pro Met

565 570 575

ttg atg gaa gac ccg cgt gat gtt gct gta gag gcc tag 1767

Leu Met Glu Asp Pro Arg Asp Val Ala Val Glu Ala

580 585

<210> 2

<211> 588

<212> PRT

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_wt

<400> 2

Met Pro Ser Ala Ile Thr Pro Pro Val Asp His Arg Ser Leu Pro Gly

1 5 10 15

Leu Phe Lys Pro Gln Arg Lys Leu Lys Val Ile Cys Val Gly Ala Gly

20 25 30

Ala Ser Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Lys Ile Gln Arg His Phe Glu Asp

35 40 45

Phe Glu Leu Gln Val Phe Glu Lys Asn Pro Glu Val Ser Gly Thr Trp

50 55 60

Tyr Glu Asn Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Asn

65 70 75 80

Tyr Thr Trp Ser Phe Glu Pro Lys Thr Asp Trp Ser Ala Asn Tyr Ala

85 90 95

Ser Ser Lys Glu Ile Phe Lys Tyr Phe Lys Asp Phe Thr Arg Lys Tyr

100 105 110

Gly Leu Ser Lys Tyr Ile Lys Leu Glu His Glu Val Val Gly Ala Thr

115 120 125

Trp Met Glu Ala Glu Ala Gln Trp Lys Val Asp Val Lys Asp Leu Arg

130 135 140

Ser Gly Asn Thr Gln Ser Ser Phe Ala His Ile Leu Val Asn Ala Gly

145 150 155 160

Gly Ile Leu Asn Ala Trp Arg Tyr Pro Pro Ile Pro Gly Ile Lys Asp

165 170 175

Phe Lys Gly Asp Leu Val His Ser Ala Ala Trp Pro Glu His Leu Asp

180 185 190

Leu Asn Gly Lys Val Val Gly Leu Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile

195 200 205

Gln Ile Leu Pro Ala Ile Lys Lys Asp Val Lys Gln Leu Val Thr Phe

210 215 220

Ile Arg Glu Ala Thr Trp Val Ala Pro Pro Leu Gly Gln Ala Tyr Arg

225 230 235 240

Ala Phe Ser Thr Asp Glu Gln Ala Gln Phe Ala Gln Asp Pro Arg His

245 250 255

His Leu Glu Thr Arg Arg Ala Thr Glu Ala Thr Met Asn Gln Ser Phe

260 265 270

Gly Ile Phe His Ser Gly Ser Glu Glu Gln Lys Gly Val Arg Gln Tyr

275 280 285

Met Gln Asn Ile Met Glu Thr Lys Leu Asn Asn Lys Gln Leu Glu Ser

290 295 300

Val Leu Ile Pro Glu Trp Ser Val Gly Cys Arg Arg Leu Thr Pro Gly

305 310 315 320

Thr Asn Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Asp Asp Asn Val Lys Val Val Tyr

325 330 335

Gly Glu Ile Thr Gln Ile Thr Glu Ser Gly Val Ile Cys Asp Asp Gly

340 345 350

Lys Gly Glu Tyr Pro Val Glu Val Leu Ile Cys Ala Thr Gly Phe Asp

355 360 365

Thr Thr Phe Lys Pro Arg Phe Pro Leu Ile Gly Thr Thr Gln Glu Lys

370 375 380

Leu Ser Asp Val Trp Lys Asp Asp Pro Arg Gly Tyr Phe Gly Ile Ala

385 390 395 400

Thr Asn Asn Tyr Pro Asn Tyr Phe Phe Thr Leu Gly Pro Asn Cys Pro

405 410 415

Ile Gly Asn Gly Pro Val Leu Cys Ala Ile Glu Ala Glu Val Glu Tyr

420 425 430

Ile Ile Asn Met Leu Ser Lys Phe Gln Lys Glu Asn Ile Arg Ser Phe

435 440 445

Asp Ile Lys Ala Asp Ala Val Asp Ala Phe Asn Asp Trp Lys Asp Asp

450 455 460

Phe Met Lys Asp Thr Ile Trp Ala Glu Gln Cys Arg Ser Trp Tyr Lys

465 470 475 480

Ala Gly Ser Ala Thr Gly Lys Ile Leu Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr

485 490 495

Leu His Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Ser Pro Arg Trp Glu Asp Trp Asp

500 505 510

Phe Lys Tyr Gln Pro Gly Arg Asn Arg Phe His Tyr Phe Gly Asn Gly

515 520 525

His Ser Cys Ala Glu Gln Asp Gly Asp Leu Ser Trp Tyr Ile Arg Asn

530 535 540

Glu Asp Asp Ser Tyr Ile Asp Pro Val Leu Lys Pro Lys Pro Lys Ala

545 550 555 560

Ala Val Glu Ser Glu Ala His Ile Ala Leu Pro Gly Ile Gly Pro Met

565 570 575

Leu Met Glu Asp Pro Arg Asp Val Ala Val Glu Ala

580 585

<210> 3

<211> 1767

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

<400> 3

atgccgtctg ccattactcc acctgttgat caccgttccc tgccgggcct gtttaaaccg 60

cagcgcaagc tgaaagtgat ttgcgtgggc gcgggtgcga gcggcctgct gttgagctac 120

aagattcagc gccacttcga agatttcgag ctgcaagtgt ttgagaagaa ccctgaagtt 180

agcggtacgt ggtacgagaa ccgttatccg ggttgtgcgt gcgatgtgcc gagccataac 240

tacacctgga gctttgagcc gaaaacggat tggtccgcca attatgcgag cagcaaagag 300

attttcaaat atttcaaaga ttttacgcgt aaatatggtc tgtctaaata cattaaattg 360

gaacatgaag tggtcggcgc gacctggatg gaagccgagg cgcagtggaa agttgacgtt 420

aaagatctgc gcagcggtaa cacccagtcc agcttcgcgc atatcctggt taacgccggc 480

ggcattctga atgcctggcg ttatccgccg attccgggca tcaaagattt caagggtgac 540

ctggtgcata gcgcagcatg gccggagcat ttggacctga atggcaaagt cgttggtctg 600

atcggcaacg gtagcagcgg tatccaaatc ctgccggcaa ttaagaaaga cgtgaagcaa 660

ctggtgacgt ttatccgtga agccacctgg gtcgcaccgc cgctgggtca agcgtaccgt 720

gcgttttcca ccgacgagca agcacagttt gcgcaggacc cgcgccacca cctggaaacc 780

cgtcgtgcga ccgaagccac catgaatcag agctttggta ttttccatag cggcagcgaa 840

gaacagaaag gtgtccgcca gtacatgcaa aacattatgg aaaccaagct gaataataag 900

caactggaga gcgtcctgat tccggagtgg agcgtcggct gtcgtcgtct gaccccgggc 960

acgaactacc tggaaagcct gagcgacgac aatgtcaaag ttgtgtacgg tgagattacc 1020

caaatcaccg agagcggtgt catctgcgat gacggcaagg gtgagtatcc ggttgaagtc 1080

ctgatctgcg ccaccggttt tgatacgacc tttaaaccgc gcttcccgct gatcggtacg 1140

acccaggaaa agctgagcga cgtgtggaaa gatgatccgc gcggttactt cggcatcgcg 1200

acgaataatt atccgaacta tttcttcacg ctgggtccga actgcccgat cggtaatggc 1260

ccggtcctgt gtgcgatcga agccgaagtt gagtacatca tcaacatgct gagcaagttt 1320

cagaaagaaa atattcgctc cttcgacatt aaagccgacg cggtggacgc gtttaatgat 1380

tggaaagacg atttcatgaa agataccatc tgggcagaac agtgccgtag ctggtacaag 1440

gccggcagcg cgaccggcaa gattctggca ctgtggccgg gcagcacgct gcactacctg 1500

gaagcgctga aaagcccgcg ttgggaagat tgggacttca agtatcaacc gggccgtaac 1560

cgtttccact actttggcaa cggtcacagc tgtgccgagc aagatggcga cctgtcctgg 1620

tacatccgta atgaagatga cagctacatt gacccggttc tgaaaccgaa gccgaaagcc 1680

gcggtggaga gcgaggcaca catcgcactg ccgggtattg gcccgatgct gatggaagat 1740

ccgcgtgatg tcgcggttga ggcgtaa 1767

<210> 4

<211> 1767

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-BVMO1_酵母，经优化的

<400> 4

atgccatctg ctatcactcc accagttgac cacagatctt tgccaggttt gttcaagcca 60

caaagaaagt tgaaggttat ctgtgttggt gctggtgctt ctggtttgtt gttgtcttac 120

aagatccaaa gacacttcga agacttcgaa ttgcaagttt tcgaaaagaa cccagaagtt 180

tctggtactt ggtacgaaaa cagataccca ggttgtgctt gtgacgttcc atctcacaac 240

tacacttggt ctttcgaacc aaagactgac tggtctgcta actacgcttc ttctaaggaa 300

atcttcaagt acttcaagga cttcactaga aagtacggtt tgtctaagta catcaagttg 360

gaacacgaag ttgttggtgc tacttggatg gaagctgaag ctcaatggaa ggttgacgtt 420

aaggacttga gatctggtaa cactcaatct tctttcgctc acatcttggt taacgctggt 480

ggtatcttga acgcttggag atacccacca atcccaggta tcaaggactt caagggtgac 540

ttggttcact ctgctgcttg gccagaacac ttggacttga acggtaaggt tgttggtttg 600

atcggtaacg gttcttctgg tatccaaatc ttgccagcta tcaagaagga cgttaagcaa 660

ttggttactt tcatcagaga agctacttgg gttgctccac cattgggtca agcttacaga 720

gctttctcta ctgacgaaca agctcaattc gctcaagacc caagacacca cttggaaact 780

agaagagcta ctgaagctac tatgaaccaa tctttcggta tcttccactc tggttctgaa 840

gaacaaaagg gtgttagaca atacatgcaa aacatcatgg aaactaagtt gaacaacaag 900

caattggaat ctgttttgat cccagaatgg tctgttggtt gtagaagatt gactccaggt 960

actaactact tggaatcttt gtctgacgac aacgttaagg ttgtttacgg tgaaatcact 1020

caaatcactg aatctggtgt tatctgtgac gacggtaagg gtgaataccc agttgaagtt 1080

ttgatctgtg ctactggttt cgacactact ttcaagccaa gattcccatt gatcggtact 1140

actcaagaaa agttgtctga cgtttggaag gacgacccaa gaggttactt cggtatcgct 1200

actaacaact acccaaacta cttcttcact ttgggtccaa actgtccaat cggtaacggt 1260

ccagttttgt gtgctatcga agctgaagtt gaatacatca tcaacatgtt gtctaagttc 1320

caaaaggaaa acatcagatc tttcgacatc aaggctgacg ctgttgacgc tttcaacgac 1380

tggaaggacg acttcatgaa ggacactatc tgggctgaac aatgtagatc ttggtacaag 1440

gctggttctg ctactggtaa gatcttggct ttgtggccag gttctacttt gcactacttg 1500

gaagctttga agtctccaag atgggaagac tgggacttca agtaccaacc aggtagaaac 1560

agattccact acttcggtaa cggtcactct tgtgctgaac aagacggtga cttgtcttgg 1620

tacatcagaa acgaagacga ctcttacatc gacccagttt tgaagccaaa gccaaaggct 1680

gctgttgaat ctgaagctca catcgctttg ccaggtatcg gtccaatgtt gatggaagac 1740

ccaagagacg ttgctgttga agcttaa 1767

<210> 5

<211> 1839

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1839)

<400> 5

atg act atc gat ttg cag cag ccc gac gcc gtg cca ttc acc tct tcg 48

Met Thr Ile Asp Leu Gln Gln Pro Asp Ala Val Pro Phe Thr Ser Ser

1 5 10 15

act ttt gtc gtg ccg gat cca tcg aac ctg gcc tct cag gca cag aat 96

Thr Phe Val Val Pro Asp Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gln Ala Gln Asn

20 25 30

tca cag ctc caa tct gct caa gaa gga gca gag tac cct gtg aac gca 144

Ser Gln Leu Gln Ser Ala Gln Glu Gly Ala Glu Tyr Pro Val Asn Ala

35 40 45

cat ggg gtt cga gga gat gga acg att cat gaa cga ccg atc aac gat 192

His Gly Val Arg Gly Asp Gly Thr Ile His Glu Arg Pro Ile Asn Asp

50 55 60

cgc agg aag atg cgc gtc atc tgc gtc ggt gca ggc atc tca ggt ctc 240

Arg Arg Lys Met Arg Val Ile Cys Val Gly Ala Gly Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

tat atg gcc atc aag ctc cct cga agt acg gaa aat gta gag ctc aag 288

Tyr Met Ala Ile Lys Leu Pro Arg Ser Thr Glu Asn Val Glu Leu Lys

85 90 95

atc tac gag aag aat cac gat ctc ggt ggg acc tgg ctg gag aat agg 336

Ile Tyr Glu Lys Asn His Asp Leu Gly Gly Thr Trp Leu Glu Asn Arg

100 105 110

tat cca gga tgc gct tgt gat gta cca gcc cat gcc tac gca tac agc 384

Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ala His Ala Tyr Ala Tyr Ser

115 120 125

ttc gag aac aac ccc gaa ttt cct aga ttc ttt tcg agc tcg gaa gac 432

Phe Glu Asn Asn Pro Glu Phe Pro Arg Phe Phe Ser Ser Ser Glu Asp

130 135 140

atc cac aag tac ttg ctt cgc gtg gct gat aaa tat gat tgc aag aaa 480

Ile His Lys Tyr Leu Leu Arg Val Ala Asp Lys Tyr Asp Cys Lys Lys

145 150 155 160

tac atc gca ttc aac acc aaa gta gtc gag gcc att tgg gac gaa gaa 528

Tyr Ile Ala Phe Asn Thr Lys Val Val Glu Ala Ile Trp Asp Glu Glu

165 170 175

cag ggc atc tat aac gtc aag att gaa cgc tcg gat ggc aca gta ttc 576

Gln Gly Ile Tyr Asn Val Lys Ile Glu Arg Ser Asp Gly Thr Val Phe

180 185 190

cag gac acg tgc gaa gtt cta ttg aac gct tct ggt atc ctt aac gcc 624

Gln Asp Thr Cys Glu Val Leu Leu Asn Ala Ser Gly Ile Leu Asn Ala

195 200 205

tgg agg tac cct ggg att cct gga att aag gac tac aag ggc acg tta 672

Trp Arg Tyr Pro Gly Ile Pro Gly Ile Lys Asp Tyr Lys Gly Thr Leu

210 215 220

atg cac tcg gct acc tgg gac cga tcc gtg tcc ctg aaa ggc aaa aag 720

Met His Ser Ala Thr Trp Asp Arg Ser Val Ser Leu Lys Gly Lys Lys

225 230 235 240

gtt gcc ctc atc gga tca gga tca tca ggc att cag atc ttg ccc aac 768

Val Ala Leu Ile Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ile Gln Ile Leu Pro Asn

245 250 255

atc ctt gac gat tgc aaa gag gtc gtg aca tac atc att gat cca gcc 816

Ile Leu Asp Asp Cys Lys Glu Val Val Thr Tyr Ile Ile Asp Pro Ala

260 265 270

tgg att gcc cct gcg aat ctt gtc acg gct gga gtc tcg gac gac ggt 864

Trp Ile Ala Pro Ala Asn Leu Val Thr Ala Gly Val Ser Asp Asp Gly

275 280 285

gaa gag cct aag gag ccg acg cct gaa gaa ttg gcg tcg agt agt gac 912

Glu Glu Pro Lys Glu Pro Thr Pro Glu Glu Leu Ala Ser Ser Ser Asp

290 295 300

ttc gcc tac tcg caa gag caa atc aat ggc ttc aag aag gac cct aag 960

Phe Ala Tyr Ser Gln Glu Gln Ile Asn Gly Phe Lys Lys Asp Pro Lys

305 310 315 320

tca ctg atg gat cat cga gca acg ctc gaa agg acg atg aat cag tct 1008

Ser Leu Met Asp His Arg Ala Thr Leu Glu Arg Thr Met Asn Gln Ser

325 330 335

ttc ccc atc tta ctc aga ggc tca ccg tcc aac ctt tat gcc gct tct 1056

Phe Pro Ile Leu Leu Arg Gly Ser Pro Ser Asn Leu Tyr Ala Ala Ser

340 345 350

ctc ttt gaa gac ctg atg agg aaa cgc ctt gcc aag aag cct gag gta 1104

Leu Phe Glu Asp Leu Met Arg Lys Arg Leu Ala Lys Lys Pro Glu Val

355 360 365

gcg gat gcc atc atc ccc gaa tgg tca atc ggt tgc cga cgt ctc act 1152

Ala Asp Ala Ile Ile Pro Glu Trp Ser Ile Gly Cys Arg Arg Leu Thr

370 375 380

cct gga cca cac tat ctt gag gcc ttg tgc aat ccc aag gtc aag atc 1200

Pro Gly Pro His Tyr Leu Glu Ala Leu Cys Asn Pro Lys Val Lys Ile

385 390 395 400

ttg acc caa gct atc aag tcc ttc tcc gat aag gga atg tac act gcc 1248

Leu Thr Gln Ala Ile Lys Ser Phe Ser Asp Lys Gly Met Tyr Thr Ala

405 410 415

gat ggc gaa cac gaa gac ttt gac gtg gtg ata tgc gcg act gga ttc 1296

Asp Gly Glu His Glu Asp Phe Asp Val Val Ile Cys Ala Thr Gly Phe

420 425 430

gac gta tcg ttc cga ccc cga ttc aaa ttt atc ggc aag gac ggg tat 1344

Asp Val Ser Phe Arg Pro Arg Phe Lys Phe Ile Gly Lys Asp Gly Tyr

435 440 445

gag gtg ccc gag aac ttt ggt cag act ccc aaa ggt tac ctc gct ctc 1392

Glu Val Pro Glu Asn Phe Gly Gln Thr Pro Lys Gly Tyr Leu Ala Leu

450 455 460

gct tac gcc ggt ttc cct aat tcg ttc atc ttc atg ggg ccg aac gga 1440

Ala Tyr Ala Gly Phe Pro Asn Ser Phe Ile Phe Met Gly Pro Asn Gly

465 470 475 480

cct atc gcc aac gga tct gtc gtg gtc tcc ctg gag aaa caa ggc gac 1488

Pro Ile Ala Asn Gly Ser Val Val Val Ser Leu Glu Lys Gln Gly Asp

485 490 495

tac ttc atc aag gcg atc aac aag atc caa agg cag aat ata aaa ggc 1536

Tyr Phe Ile Lys Ala Ile Asn Lys Ile Gln Arg Gln Asn Ile Lys Gly

500 505 510

atg act gtc aga ttc gat gcg gtc gat gat ttc acc aac cac gta gac 1584

Met Thr Val Arg Phe Asp Ala Val Asp Asp Phe Thr Asn His Val Asp

515 520 525

aaa tac atg gat agg acc gtg ctc acc gat gac tgc atc agc tgg tac 1632

Lys Tyr Met Asp Arg Thr Val Leu Thr Asp Asp Cys Ile Ser Trp Tyr

530 535 540

aag aac ggg aaa cga gac gga cga gtc agt gcc gtc tgg cct ggg agc 1680

Lys Asn Gly Lys Arg Asp Gly Arg Val Ser Ala Val Trp Pro Gly Ser

545 550 555 560

gca ctt cat tat atg gag gcc atc gcc gac cct aga tgg gag gat tac 1728

Ala Leu His Tyr Met Glu Ala Ile Ala Asp Pro Arg Trp Glu Asp Tyr

565 570 575

acc tac act tat cgc gaa ccc ggt cat tct ttt tcg ttc ttg gga gat 1776

Thr Tyr Thr Tyr Arg Glu Pro Gly His Ser Phe Ser Phe Leu Gly Asp

580 585 590

ggg acg tcc tgg gtc gaa cac acc gga gga gac acg gct tgg tac ctg 1824

Gly Thr Ser Trp Val Glu His Thr Gly Gly Asp Thr Ala Trp Tyr Leu

595 600 605

aaa gag acc ctc taa 1839

Lys Glu Thr Leu

610

<210> 6

<211> 612

<212> PRT

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_wt

<400> 6

Met Thr Ile Asp Leu Gln Gln Pro Asp Ala Val Pro Phe Thr Ser Ser

1 5 10 15

Thr Phe Val Val Pro Asp Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gln Ala Gln Asn

20 25 30

Ser Gln Leu Gln Ser Ala Gln Glu Gly Ala Glu Tyr Pro Val Asn Ala

35 40 45

His Gly Val Arg Gly Asp Gly Thr Ile His Glu Arg Pro Ile Asn Asp

50 55 60

Arg Arg Lys Met Arg Val Ile Cys Val Gly Ala Gly Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Tyr Met Ala Ile Lys Leu Pro Arg Ser Thr Glu Asn Val Glu Leu Lys

85 90 95

Ile Tyr Glu Lys Asn His Asp Leu Gly Gly Thr Trp Leu Glu Asn Arg

100 105 110

Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ala His Ala Tyr Ala Tyr Ser

115 120 125

Phe Glu Asn Asn Pro Glu Phe Pro Arg Phe Phe Ser Ser Ser Glu Asp

130 135 140

Ile His Lys Tyr Leu Leu Arg Val Ala Asp Lys Tyr Asp Cys Lys Lys

145 150 155 160

Tyr Ile Ala Phe Asn Thr Lys Val Val Glu Ala Ile Trp Asp Glu Glu

165 170 175

Gln Gly Ile Tyr Asn Val Lys Ile Glu Arg Ser Asp Gly Thr Val Phe

180 185 190

Gln Asp Thr Cys Glu Val Leu Leu Asn Ala Ser Gly Ile Leu Asn Ala

195 200 205

Trp Arg Tyr Pro Gly Ile Pro Gly Ile Lys Asp Tyr Lys Gly Thr Leu

210 215 220

Met His Ser Ala Thr Trp Asp Arg Ser Val Ser Leu Lys Gly Lys Lys

225 230 235 240

Val Ala Leu Ile Gly Ser Gly Ser Ser Gly Ile Gln Ile Leu Pro Asn

245 250 255

Ile Leu Asp Asp Cys Lys Glu Val Val Thr Tyr Ile Ile Asp Pro Ala

260 265 270

Trp Ile Ala Pro Ala Asn Leu Val Thr Ala Gly Val Ser Asp Asp Gly

275 280 285

Glu Glu Pro Lys Glu Pro Thr Pro Glu Glu Leu Ala Ser Ser Ser Asp

290 295 300

Phe Ala Tyr Ser Gln Glu Gln Ile Asn Gly Phe Lys Lys Asp Pro Lys

305 310 315 320

Ser Leu Met Asp His Arg Ala Thr Leu Glu Arg Thr Met Asn Gln Ser

325 330 335

Phe Pro Ile Leu Leu Arg Gly Ser Pro Ser Asn Leu Tyr Ala Ala Ser

340 345 350

Leu Phe Glu Asp Leu Met Arg Lys Arg Leu Ala Lys Lys Pro Glu Val

355 360 365

Ala Asp Ala Ile Ile Pro Glu Trp Ser Ile Gly Cys Arg Arg Leu Thr

370 375 380

Pro Gly Pro His Tyr Leu Glu Ala Leu Cys Asn Pro Lys Val Lys Ile

385 390 395 400

Leu Thr Gln Ala Ile Lys Ser Phe Ser Asp Lys Gly Met Tyr Thr Ala

405 410 415

Asp Gly Glu His Glu Asp Phe Asp Val Val Ile Cys Ala Thr Gly Phe

420 425 430

Asp Val Ser Phe Arg Pro Arg Phe Lys Phe Ile Gly Lys Asp Gly Tyr

435 440 445

Glu Val Pro Glu Asn Phe Gly Gln Thr Pro Lys Gly Tyr Leu Ala Leu

450 455 460

Ala Tyr Ala Gly Phe Pro Asn Ser Phe Ile Phe Met Gly Pro Asn Gly

465 470 475 480

Pro Ile Ala Asn Gly Ser Val Val Val Ser Leu Glu Lys Gln Gly Asp

485 490 495

Tyr Phe Ile Lys Ala Ile Asn Lys Ile Gln Arg Gln Asn Ile Lys Gly

500 505 510

Met Thr Val Arg Phe Asp Ala Val Asp Asp Phe Thr Asn His Val Asp

515 520 525

Lys Tyr Met Asp Arg Thr Val Leu Thr Asp Asp Cys Ile Ser Trp Tyr

530 535 540

Lys Asn Gly Lys Arg Asp Gly Arg Val Ser Ala Val Trp Pro Gly Ser

545 550 555 560

Ala Leu His Tyr Met Glu Ala Ile Ala Asp Pro Arg Trp Glu Asp Tyr

565 570 575

Thr Tyr Thr Tyr Arg Glu Pro Gly His Ser Phe Ser Phe Leu Gly Asp

580 585 590

Gly Thr Ser Trp Val Glu His Thr Gly Gly Asp Thr Ala Trp Tyr Leu

595 600 605

Lys Glu Thr Leu

610

<210> 7

<211> 1839

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

<400> 7

atgaccatcg atttgcaaca gccagacgca gtcccgttta cgagcagcac tttcgtcgta 60

ccggacccgt ccaacctggc atcccaggct caaaacagcc aactgcagag cgcgcaagag 120

ggcgcagagt acccggtgaa tgcacacggt gtccgcggtg acggcaccat tcacgagcgt 180

ccgatcaatg accgtcgtaa aatgcgcgtc atctgcgttg gtgcgggtat tagcggcctg 240

tatatggcga tcaaactgcc gcgcagcacc gagaatgttg aactgaagat ctacgagaaa 300

aaccatgacc tcggcggcac gtggctggag aatcgctacc ctggctgcgc gtgcgatgtt 360

ccggcgcatg cgtatgcata ttcttttgag aataatccgg aatttccacg ctttttcagc 420

agcagcgagg atatccacaa gtacctgttg cgtgttgcgg acaagtacga ctgtaagaaa 480

tacatcgcct ttaacaccaa agtcgttgag gctatctggg acgaagaaca gggtatttac 540

aatgtgaaga ttgagcgtag cgacggcacc gtgttccagg acacctgtga ggtgctgctg 600

aacgcgagcg gtattctgaa tgcctggcgc tacccgggca tccctggcat taaggattac 660

aaaggtacgc tgatgcacag cgctacctgg gaccgtagcg tttctttgaa aggcaaaaaa 720

gtcgcactga ttggcagcgg tagcagcggt atccagattc tgccgaacat tctggacgac 780

tgcaaagaag tggtcacgta cattatcgac ccggcgtgga ttgctccggc taacctggtg 840

accgcgggtg tctccgatga tggtgaggaa ccgaaagagc caacccctga ggaactggcc 900

tcatcctccg acttcgctta tagccaggaa cagattaacg gcttcaagaa agatccgaag 960

tcgctgatgg atcaccgcgc cacgctggag cgtaccatga atcaatcgtt tccgattctg 1020

ctgcgtggct ctccgagcaa cttgtatgcc gcaagcctgt tcgaggattt gatgcgtaag 1080

cgtctggcga agaagccgga agttgcggac gcgattatcc cggagtggag catcggttgc 1140

agacgcctga cgccgggtcc gcattacctg gaagcactgt gtaacccgaa agtgaagatc 1200

ctgactcagg cgatcaagag ctttagcgat aagggcatgt atactgcgga cggtgagcat 1260

gaagatttcg atgttgtcat ttgtgcgacc ggtttcgatg tgagctttcg tccgcgcttc 1320

aagtttattg gtaaagatgg ctatgaagtc ccagagaatt tcggccaaac gccgaaaggt 1380

tatctggcac tggcgtacgc cggcttcccg aacagcttca tctttatggg tccgaacggt 1440

ccgattgcga acggtagcgt tgtggtgagc ctggagaagc aaggtgacta cttcattaaa 1500

gcgatcaata agatccagcg tcaaaacatt aagggtatga ccgttcgttt cgacgccgtg 1560

gatgatttta cgaatcacgt ggacaaatac atggaccgta cggtgctgac cgacgattgc 1620

atcagctggt acaagaatgg taaacgtgac ggtcgtgtta gcgcagtttg gccgggttcc 1680

gcgctgcact atatggaagc catcgcagac ccgcgttggg aagattacac ctacacctat 1740

cgcgaaccgg gtcactcttt tagcttcctg ggtgatggca ccagctgggt tgagcatacg 1800

ggtggcgata ccgcctggta tttgaaagaa accctgtaa 1839

<210> 8

<211> 1839

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-BVMO1_酵母，经优化的

<400> 8

atgactatcg acttgcaaca accagacgct gttccattca cttcttctac tttcgttgtt 60

ccagacccat ctaacttggc ttctcaagct caaaactctc aattgcaatc tgctcaagaa 120

ggtgctgaat acccagttaa cgctcacggt gttagaggtg acggtactat ccacgaaaga 180

ccaatcaacg acagaagaaa gatgagagtt atctgtgttg gtgctggtat ctctggtttg 240

tacatggcta tcaagttgcc aagatctact gaaaacgttg aattgaagat ctacgaaaag 300

aaccacgact tgggtggtac ttggttggaa aacagatacc caggttgtgc ttgtgacgtt 360

ccagctcacg cttacgctta ctctttcgaa aacaacccag aattcccaag attcttctct 420

tcttctgaag acatccacaa gtacttgttg agagttgctg acaagtacga ctgtaagaag 480

tacatcgctt tcaacactaa ggttgttgaa gctatctggg acgaagaaca aggtatctac 540

aacgttaaga tcgaaagatc tgacggtact gttttccaag acacttgtga agttttgttg 600

aacgcttctg gtatcttgaa cgcttggaga tacccaggta tcccaggtat caaggactac 660

aagggtactt tgatgcactc tgctacttgg gacagatctg tttctttgaa gggtaagaag 720

gttgctttga tcggttctgg ttcttctggt atccaaatct tgccaaacat cttggacgac 780

tgtaaggaag ttgttactta catcatcgac ccagcttgga tcgctccagc taacttggtt 840

actgctggtg tttctgacga cggtgaagaa ccaaaggaac caactccaga agaattggct 900

tcttcttctg acttcgctta ctctcaagaa caaatcaacg gtttcaagaa ggacccaaag 960

tctttgatgg accacagagc tactttggaa agaactatga accaatcttt cccaatcttg 1020

ttgagaggtt ctccatctaa cttgtacgct gcttctttgt tcgaagactt gatgagaaag 1080

agattggcta agaagccaga agttgctgac gctatcatcc cagaatggtc tatcggttgt 1140

agaagattga ctccaggtcc acactacttg gaagctttgt gtaacccaaa ggttaagatc 1200

ttgactcaag ctatcaagtc tttctctgac aagggtatgt acactgctga cggtgaacac 1260

gaagacttcg acgttgttat ctgtgctact ggtttcgacg tttctttcag accaagattc 1320

aagttcatcg gtaaggacgg ttacgaagtt ccagaaaact tcggtcaaac tccaaagggt 1380

tacttggctt tggcttacgc tggtttccca aactctttca tcttcatggg tccaaacggt 1440

ccaatcgcta acggttctgt tgttgtttct ttggaaaagc aaggtgacta cttcatcaag 1500

gctatcaaca agatccaaag acaaaacatc aagggtatga ctgttagatt cgacgctgtt 1560

gacgacttca ctaaccacgt tgacaagtac atggacagaa ctgttttgac tgacgactgt 1620

atctcttggt acaagaacgg taagagagac ggtagagttt ctgctgtttg gccaggttct 1680

gctttgcact acatggaagc tatcgctgac ccaagatggg aagactacac ttacacttac 1740

agagaaccag gtcactcttt ctctttcttg ggtgacggta cttcttgggt tgaacacact 1800

ggtggtgaca ctgcttggta cttgaaggaa actttgtaa 1839

<210> 9

<211> 1767

<212> DNA

<213> 罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-BVMO1_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1767)

<400> 9

atg cct tcc gca atc acc ccg ccg gtt gat cat cgc agt ctt cca ggt 48

Met Pro Ser Ala Ile Thr Pro Pro Val Asp His Arg Ser Leu Pro Gly

1 5 10 15

ctt ttc aag cca cag agg aag ctc aaa gtg ata tgt gtc gga gcc ggc 96

Leu Phe Lys Pro Gln Arg Lys Leu Lys Val Ile Cys Val Gly Ala Gly

20 25 30

gcc tcg ggc tta ctt ctt tcc tac aag ata caa cga cac ttc gag gat 144

Ala Ser Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Lys Ile Gln Arg His Phe Glu Asp

35 40 45

ttc gag ctc caa gtc ttt gag aag aat cct gaa gta tca gga acc tgg 192

Phe Glu Leu Gln Val Phe Glu Lys Asn Pro Glu Val Ser Gly Thr Trp

50 55 60

tac gag aac aga tat ccc ggc tgc gct tgt gat gtt ccc tcg cat aat 240

Tyr Glu Asn Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Asn

65 70 75 80

tat aca tgg tct ttt gag ccc aaa acc gac tgg tcc gcc aac tat gca 288

Tyr Thr Trp Ser Phe Glu Pro Lys Thr Asp Trp Ser Ala Asn Tyr Ala

85 90 95

tca tcg aag gag att ttc aaa tat ttc aag gac ttc acg aag aag tat 336

Ser Ser Lys Glu Ile Phe Lys Tyr Phe Lys Asp Phe Thr Lys Lys Tyr

100 105 110

ggt ctt agc aag tac atc aag ctg gag cat gag gtc gtg ggg gcc acg 384

Gly Leu Ser Lys Tyr Ile Lys Leu Glu His Glu Val Val Gly Ala Thr

115 120 125

tgg atg gag gcg gag gca cag tgg aaa gtt gac gtc aag gac ctt cga 432

Trp Met Glu Ala Glu Ala Gln Trp Lys Val Asp Val Lys Asp Leu Arg

130 135 140

agt gga aac acg cag agc tcg ttt gcg cat ata ctg gtc aat gca gga 480

Ser Gly Asn Thr Gln Ser Ser Phe Ala His Ile Leu Val Asn Ala Gly

145 150 155 160

ggc att ctg aat gct tgg cga tat ccg cca att cca gga atc aag gat 528

Gly Ile Leu Asn Ala Trp Arg Tyr Pro Pro Ile Pro Gly Ile Lys Asp

165 170 175

ttc aag ggt gat ctt gtc cac tcc gca gct tgg cca gaa cat ctt gat 576

Phe Lys Gly Asp Leu Val His Ser Ala Ala Trp Pro Glu His Leu Asp

180 185 190

ctt aat ggg aag gtt gtc ggt ctc atc gga aat gga tcc tcc ggc att 624

Leu Asn Gly Lys Val Val Gly Leu Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile

195 200 205

cag atc ctt ccg gcc atc aag aag gat gta aag caa ctc gtt aca ttc 672

Gln Ile Leu Pro Ala Ile Lys Lys Asp Val Lys Gln Leu Val Thr Phe

210 215 220

att cgg gaa gca act tgg gtg gcg cct cct tta ggt caa gcc tat cgt 720

Ile Arg Glu Ala Thr Trp Val Ala Pro Pro Leu Gly Gln Ala Tyr Arg

225 230 235 240

gcg ttc tcg act gat gaa cag gct cag ttt gcg caa gat ccg cgc cat 768

Ala Phe Ser Thr Asp Glu Gln Ala Gln Phe Ala Gln Asp Pro Arg His

245 250 255

cac ctg gag aca cgg cgt gca att gag gct acc atg aat caa tca ttt 816

His Leu Glu Thr Arg Arg Ala Ile Glu Ala Thr Met Asn Gln Ser Phe

260 265 270

ggt atc ttc cat tcg gga tcc gag gag cag aaa ggg gtt cgc caa tat 864

Gly Ile Phe His Ser Gly Ser Glu Glu Gln Lys Gly Val Arg Gln Tyr

275 280 285

atg cag aat atc atg gaa acg aag ctc aac aac aaa cag ctc gag agt 912

Met Gln Asn Ile Met Glu Thr Lys Leu Asn Asn Lys Gln Leu Glu Ser

290 295 300

gtg ctg att cct gag tgg tcg gtc ggt tgt cgg cgt ctt aca cca ggt 960

Val Leu Ile Pro Glu Trp Ser Val Gly Cys Arg Arg Leu Thr Pro Gly

305 310 315 320

act aat tac cta gaa tcc ctg tcg gac gac aat gtc aag gtc gtc tac 1008

Thr Asn Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Asp Asp Asn Val Lys Val Val Tyr

325 330 335

ggt gag atc aca caa att acc gaa ttg ggt gtc atc tgc gat gat ggc 1056

Gly Glu Ile Thr Gln Ile Thr Glu Leu Gly Val Ile Cys Asp Asp Gly

340 345 350

aaa ggc gag tat ccc gtt gaa gtt ctt att tgc gcc act ggc ttc gac 1104

Lys Gly Glu Tyr Pro Val Glu Val Leu Ile Cys Ala Thr Gly Phe Asp

355 360 365

acc acc ttc aaa cca cga ttc cca ctc atc ggt aca acc caa gag aaa 1152

Thr Thr Phe Lys Pro Arg Phe Pro Leu Ile Gly Thr Thr Gln Glu Lys

370 375 380

ctc agt gat gtt tgg aaa gat gat ccg agg ggt tac ttc ggg att gca 1200

Leu Ser Asp Val Trp Lys Asp Asp Pro Arg Gly Tyr Phe Gly Ile Ala

385 390 395 400

acc aac aac tat ccc aac tac ttc ttc act ctt gga ccg aat tgt cca 1248

Thr Asn Asn Tyr Pro Asn Tyr Phe Phe Thr Leu Gly Pro Asn Cys Pro

405 410 415

atc ggt aat ggc ccc gtg ctg tgt gcc atc gaa gct gag gtt gat tat 1296

Ile Gly Asn Gly Pro Val Leu Cys Ala Ile Glu Ala Glu Val Asp Tyr

420 425 430

ata atc aac atg ctc tca aag ttt caa atg gag aac att cgt tct ttt 1344

Ile Ile Asn Met Leu Ser Lys Phe Gln Met Glu Asn Ile Arg Ser Phe

435 440 445

gat atc aag gca gat gct gtc gac gcc ttc aac gac tgg aag gat gac 1392

Asp Ile Lys Ala Asp Ala Val Asp Ala Phe Asn Asp Trp Lys Asp Asp

450 455 460

ttc atg aaa gat acc atc tgg gca gaa caa tgc cgg tca tgg tac aag 1440

Phe Met Lys Asp Thr Ile Trp Ala Glu Gln Cys Arg Ser Trp Tyr Lys

465 470 475 480

gca gga tct gcc acc ggt aaa atc ctt gca ttg tgg cca ggc tcg act 1488

Ala Gly Ser Ala Thr Gly Lys Ile Leu Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr

485 490 495

ttg cac tac ttg gaa gca ctc aag tcg ccg cgg tgg gag gat tgg gac 1536

Leu His Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Ser Pro Arg Trp Glu Asp Trp Asp

500 505 510

ttc aag tat cag cct ggt aga aat cgt ttc cac tac ttt gga aat ggt 1584

Phe Lys Tyr Gln Pro Gly Arg Asn Arg Phe His Tyr Phe Gly Asn Gly

515 520 525

cat agc tgt gct gag cag gat ggc gat ctg agc tgg tac att cgc aac 1632

His Ser Cys Ala Glu Gln Asp Gly Asp Leu Ser Trp Tyr Ile Arg Asn

530 535 540

gag gat gat tct tat att gat ccg gta ctc aag cca aag tcg aag gca 1680

Glu Asp Asp Ser Tyr Ile Asp Pro Val Leu Lys Pro Lys Ser Lys Ala

545 550 555 560

gca att gag agc gag gca cat atc gcc ctg cca gga atc ggt ccg atg 1728

Ala Ile Glu Ser Glu Ala His Ile Ala Leu Pro Gly Ile Gly Pro Met

565 570 575

ttg atg gaa gac ccg cgt gat gtt gct gta gag gcc tag 1767

Leu Met Glu Asp Pro Arg Asp Val Ala Val Glu Ala

580 585

<210> 10

<211> 588

<212> PRT

<213> 罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-BVMO1_wt

<400> 10

Met Pro Ser Ala Ile Thr Pro Pro Val Asp His Arg Ser Leu Pro Gly

1 5 10 15

Leu Phe Lys Pro Gln Arg Lys Leu Lys Val Ile Cys Val Gly Ala Gly

20 25 30

Ala Ser Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Lys Ile Gln Arg His Phe Glu Asp

35 40 45

Phe Glu Leu Gln Val Phe Glu Lys Asn Pro Glu Val Ser Gly Thr Trp

50 55 60

Tyr Glu Asn Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Asn

65 70 75 80

Tyr Thr Trp Ser Phe Glu Pro Lys Thr Asp Trp Ser Ala Asn Tyr Ala

85 90 95

Ser Ser Lys Glu Ile Phe Lys Tyr Phe Lys Asp Phe Thr Lys Lys Tyr

100 105 110

Gly Leu Ser Lys Tyr Ile Lys Leu Glu His Glu Val Val Gly Ala Thr

115 120 125

Trp Met Glu Ala Glu Ala Gln Trp Lys Val Asp Val Lys Asp Leu Arg

130 135 140

Ser Gly Asn Thr Gln Ser Ser Phe Ala His Ile Leu Val Asn Ala Gly

145 150 155 160

Gly Ile Leu Asn Ala Trp Arg Tyr Pro Pro Ile Pro Gly Ile Lys Asp

165 170 175

Phe Lys Gly Asp Leu Val His Ser Ala Ala Trp Pro Glu His Leu Asp

180 185 190

Leu Asn Gly Lys Val Val Gly Leu Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile

195 200 205

Gln Ile Leu Pro Ala Ile Lys Lys Asp Val Lys Gln Leu Val Thr Phe

210 215 220

Ile Arg Glu Ala Thr Trp Val Ala Pro Pro Leu Gly Gln Ala Tyr Arg

225 230 235 240

Ala Phe Ser Thr Asp Glu Gln Ala Gln Phe Ala Gln Asp Pro Arg His

245 250 255

His Leu Glu Thr Arg Arg Ala Ile Glu Ala Thr Met Asn Gln Ser Phe

260 265 270

Gly Ile Phe His Ser Gly Ser Glu Glu Gln Lys Gly Val Arg Gln Tyr

275 280 285

Met Gln Asn Ile Met Glu Thr Lys Leu Asn Asn Lys Gln Leu Glu Ser

290 295 300

Val Leu Ile Pro Glu Trp Ser Val Gly Cys Arg Arg Leu Thr Pro Gly

305 310 315 320

Thr Asn Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Asp Asp Asn Val Lys Val Val Tyr

325 330 335

Gly Glu Ile Thr Gln Ile Thr Glu Leu Gly Val Ile Cys Asp Asp Gly

340 345 350

Lys Gly Glu Tyr Pro Val Glu Val Leu Ile Cys Ala Thr Gly Phe Asp

355 360 365

Thr Thr Phe Lys Pro Arg Phe Pro Leu Ile Gly Thr Thr Gln Glu Lys

370 375 380

Leu Ser Asp Val Trp Lys Asp Asp Pro Arg Gly Tyr Phe Gly Ile Ala

385 390 395 400

Thr Asn Asn Tyr Pro Asn Tyr Phe Phe Thr Leu Gly Pro Asn Cys Pro

405 410 415

Ile Gly Asn Gly Pro Val Leu Cys Ala Ile Glu Ala Glu Val Asp Tyr

420 425 430

Ile Ile Asn Met Leu Ser Lys Phe Gln Met Glu Asn Ile Arg Ser Phe

435 440 445

Asp Ile Lys Ala Asp Ala Val Asp Ala Phe Asn Asp Trp Lys Asp Asp

450 455 460

Phe Met Lys Asp Thr Ile Trp Ala Glu Gln Cys Arg Ser Trp Tyr Lys

465 470 475 480

Ala Gly Ser Ala Thr Gly Lys Ile Leu Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr

485 490 495

Leu His Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Ser Pro Arg Trp Glu Asp Trp Asp

500 505 510

Phe Lys Tyr Gln Pro Gly Arg Asn Arg Phe His Tyr Phe Gly Asn Gly

515 520 525

His Ser Cys Ala Glu Gln Asp Gly Asp Leu Ser Trp Tyr Ile Arg Asn

530 535 540

Glu Asp Asp Ser Tyr Ile Asp Pro Val Leu Lys Pro Lys Ser Lys Ala

545 550 555 560

Ala Ile Glu Ser Glu Ala His Ile Ala Leu Pro Gly Ile Gly Pro Met

565 570 575

Leu Met Glu Asp Pro Arg Asp Val Ala Val Glu Ala

580 585

<210> 11

<211> 1767

<212> DNA

<213> 罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

<400> 11

atgccatctg ccattactcc acctgttgat catcgtagcc tgccgggtct gttcaagccg 60

caacgtaagt tgaaagtgat ctgtgttggc gcgggcgcga gcggcctgtt gctgagctac 120

aagattcagc gtcactttga ggactttgag ttgcaagttt ttgagaaaaa ccctgaagtg 180

agcggcacct ggtacgagaa tcgctacccg ggttgcgcgt gcgatgttcc gagccataac 240

tatacctggt cttttgagcc gaaaacggat tggtccgcaa actatgccag cagcaaagaa 300

attttcaagt acttcaaaga tttcaccaag aaatatggtc tgtctaaata cattaaactg 360

gaacacgaag tcgtgggtgc gacgtggatg gaagcggaag ctcaatggaa agttgacgtc 420

aaagacttgc gtagcggcaa cacccagagc tccttcgcgc acattctggt caatgccggt 480

ggcattctga acgcttggcg ttacccgccg attccgggta tcaaagattt taagggtgac 540

ctggtgcact cggcagcgtg gccggagcat ctggatctga atggtaaagt cgttggcctg 600

attggtaacg gtagcagcgg catccaaatt ctgccggcca tcaaaaaaga cgtgaaacaa 660

ctggtcacgt ttatccgtga ggccacgtgg gtcgccccgc cgctgggcca agcgtaccgc 720

gcatttagca ccgacgaaca ggcgcagttt gcacaagacc cgcgtcacca tctggaaact 780

cgtcgcgcga ttgaagctac catgaatcag agcttcggta tcttccacag cggttcagag 840

gaacagaaag gtgtgcgtca gtacatgcag aatatcatgg aaacgaaatt gaataacaaa 900

cagctggaga gcgtgctgat tccggagtgg tccgtgggtt gtcgccgtct gaccccgggc 960

acgaactatc tggagagctt gagcgacgat aacgtgaaag ttgtttatgg cgagatcacc 1020

cagatcaccg agctgggtgt gatttgcgat gatggcaagg gtgagtaccc ggtcgaagtg 1080

ctgatttgcg ctaccggttt cgacaccacg ttcaaaccgc gcttcccgtt gattggcacc 1140

acccaggaaa agctgagcga cgtctggaaa gatgaccctc gcggttattt cggtatcgcg 1200

accaataact acccgaacta ctttttcacc ctgggtccga actgcccgat cggcaatggt 1260

ccggtcctgt gtgcaatcga agctgaagtg gactatatca tcaatatgct gagcaaattt 1320

cagatggaaa acattcgcag cttcgacatt aaagccgacg cagttgatgc gtttaacgac 1380

tggaaagatg actttatgaa agacaccatc tgggcagagc agtgtcgttc ttggtacaag 1440

gctggttctg cgacgggtaa gattttggca ctgtggccgg gcagcacgct gcattatctg 1500

gaagccctga aaagcccacg ctgggaagat tgggacttca agtatcaacc gggtcgtaat 1560

cgctttcact acttcggtaa cggccacagc tgcgcggagc aagatggtga tctgtcctgg 1620

tatatccgta atgaagatga cagctacatt gacccggtac tgaagccgaa gtccaaggca 1680

gcgatcgaga gcgaagcaca catcgcgctg ccaggcattg gtccgatgct gatggaggac 1740

ccgcgtgacg ttgcggttga ggcataa 1767

<210> 12

<211> 1767

<212> DNA

<213> 纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-BVMO1_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1767)

<400> 12

atg cct tcc gca atc acc cca ccg gtt gat cat cgc agt ctt cca ggt 48

Met Pro Ser Ala Ile Thr Pro Pro Val Asp His Arg Ser Leu Pro Gly

1 5 10 15

ctt ttc aag cca cag agg aag ctc aaa gtg ata tgt gtc gga gcc ggc 96

Leu Phe Lys Pro Gln Arg Lys Leu Lys Val Ile Cys Val Gly Ala Gly

20 25 30

gcc tcg ggc tta ctt ctt tcc tac aag ata caa cga cac ttc gag gat 144

Ala Ser Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Lys Ile Gln Arg His Phe Glu Asp

35 40 45

ttc gag ctc caa gtc ttt gag aag aat cct gag gta tca gga acc tgg 192

Phe Glu Leu Gln Val Phe Glu Lys Asn Pro Glu Val Ser Gly Thr Trp

50 55 60

tac gag aac agg tat ccc ggc tgt gct tgt gat gtt ccc tcg cat aat 240

Tyr Glu Asn Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Asn

65 70 75 80

tat aca tgg tct ttt gag ccc aaa acc gac tgg tcc gcc aac tat gca 288

Tyr Thr Trp Ser Phe Glu Pro Lys Thr Asp Trp Ser Ala Asn Tyr Ala

85 90 95

tca tcg aag gag att ttc aaa tat ttc aag gac ttc acg aag aag tat 336

Ser Ser Lys Glu Ile Phe Lys Tyr Phe Lys Asp Phe Thr Lys Lys Tyr

100 105 110

ggt ctt agc aag tac atc aag ctg gag cat gag gtc gtg ggg gcc acg 384

Gly Leu Ser Lys Tyr Ile Lys Leu Glu His Glu Val Val Gly Ala Thr

115 120 125

tgg atg gag gcg gag gca cag tgg aaa gtt gac gtc aag gac ctt cga 432

Trp Met Glu Ala Glu Ala Gln Trp Lys Val Asp Val Lys Asp Leu Arg

130 135 140

agt gga aac acg cag agc tcg ttt gcg cat ata ctg gtc aat gca gga 480

Ser Gly Asn Thr Gln Ser Ser Phe Ala His Ile Leu Val Asn Ala Gly

145 150 155 160

ggc att ctg aat gct tgg cga tat ccg cca att cca gga atc aag gat 528

Gly Ile Leu Asn Ala Trp Arg Tyr Pro Pro Ile Pro Gly Ile Lys Asp

165 170 175

ttc aag ggt gat ctt gtc cac tcc gca gct tgg cca gaa cat ctt gat 576

Phe Lys Gly Asp Leu Val His Ser Ala Ala Trp Pro Glu His Leu Asp

180 185 190

ctt aat ggg aag gtt gtc ggt cta atc gga aat gga tcc tcc ggc att 624

Leu Asn Gly Lys Val Val Gly Leu Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile

195 200 205

cag atc ctt ccg gcc atc aag aag gat gta aag caa ctc gtt aca ttt 672

Gln Ile Leu Pro Ala Ile Lys Lys Asp Val Lys Gln Leu Val Thr Phe

210 215 220

att cgg gaa gca act tgg gtg gcg cct cct tta ggt caa gcc tat cgt 720

Ile Arg Glu Ala Thr Trp Val Ala Pro Pro Leu Gly Gln Ala Tyr Arg

225 230 235 240

gcg ttc tcg act gat gaa cag gct cag ttt gcg caa gat ccg cgc cat 768

Ala Phe Ser Thr Asp Glu Gln Ala Gln Phe Ala Gln Asp Pro Arg His

245 250 255

cac ctg gaa aca cgt cgt gca act gag gct acc atg aat caa tca ttt 816

His Leu Glu Thr Arg Arg Ala Thr Glu Ala Thr Met Asn Gln Ser Phe

260 265 270

ggt atc ttc cat tcg gga tcc gag gag cag aaa gga gtt cgc caa tat 864

Gly Ile Phe His Ser Gly Ser Glu Glu Gln Lys Gly Val Arg Gln Tyr

275 280 285

atg cag gat atc atg gaa acg aag ctc aac aac aaa cag ctc gag agt 912

Met Gln Asp Ile Met Glu Thr Lys Leu Asn Asn Lys Gln Leu Glu Ser

290 295 300

gtg ctg att cct gag tgg tcg gtc ggt tgt cgg cgt ctt aca cca ggt 960

Val Leu Ile Pro Glu Trp Ser Val Gly Cys Arg Arg Leu Thr Pro Gly

305 310 315 320

act aat tac cta gaa tcc cta tcg gac gac aat gtc aag gtc gtc tac 1008

Thr Asn Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Asp Asp Asn Val Lys Val Val Tyr

325 330 335

ggt gaa atc aca caa att acc gaa tca ggt gtc atc tgc gat gat ggt 1056

Gly Glu Ile Thr Gln Ile Thr Glu Ser Gly Val Ile Cys Asp Asp Gly

340 345 350

aaa ggc gaa tat ccc gtc gaa gtt ctt att tgc gcc acc ggc ttc gac 1104

Lys Gly Glu Tyr Pro Val Glu Val Leu Ile Cys Ala Thr Gly Phe Asp

355 360 365

acc acc ttc aaa cca cga ttt cca ctc atc ggc act acg aaa gag aag 1152

Thr Thr Phe Lys Pro Arg Phe Pro Leu Ile Gly Thr Thr Lys Glu Lys

370 375 380

ctc agt gat gtt tgg aaa gat gat ccg agg ggc tac ttt ggg atc gca 1200

Leu Ser Asp Val Trp Lys Asp Asp Pro Arg Gly Tyr Phe Gly Ile Ala

385 390 395 400

acc aac aac tat ccc aac tac ttc ttc act ctt gga ccg aat tgt cca 1248

Thr Asn Asn Tyr Pro Asn Tyr Phe Phe Thr Leu Gly Pro Asn Cys Pro

405 410 415

atc ggt aat ggc ccc gtg ctg tgt gcc att gaa gct gag gtt gaa tat 1296

Ile Gly Asn Gly Pro Val Leu Cys Ala Ile Glu Ala Glu Val Glu Tyr

420 425 430

ata atc aac atg ctc tcg aag ttt cag aag gag aac att cgt tct ttt 1344

Ile Ile Asn Met Leu Ser Lys Phe Gln Lys Glu Asn Ile Arg Ser Phe

435 440 445

gat atc aag gca gat gct gtc gac gcc ttc aac gac tgg aag gat gac 1392

Asp Ile Lys Ala Asp Ala Val Asp Ala Phe Asn Asp Trp Lys Asp Asp

450 455 460

ttc atg aaa gat acc atc tgg gca gaa caa tgc cgg tca tgg tac aag 1440

Phe Met Lys Asp Thr Ile Trp Ala Glu Gln Cys Arg Ser Trp Tyr Lys

465 470 475 480

gca gga tcc gcc act ggt aaa atc ctt gca ttg tgg cca ggc tcg act 1488

Ala Gly Ser Ala Thr Gly Lys Ile Leu Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr

485 490 495

ttg cac tac ttg gaa gca ctc aag tcg ccg cgg tgg gag gac tgg gac 1536

Leu His Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Ser Pro Arg Trp Glu Asp Trp Asp

500 505 510

ttc aag tat cag cct ggt aga aat cgt ttc cat tac ttt gga aat ggt 1584

Phe Lys Tyr Gln Pro Gly Arg Asn Arg Phe His Tyr Phe Gly Asn Gly

515 520 525

cat agc tgt gct gag cag gat ggc gat ctg agc tgg tac atc cgc aac 1632

His Ser Cys Ala Glu Gln Asp Gly Asp Leu Ser Trp Tyr Ile Arg Asn

530 535 540

gag gat gat tct tat att gat ccg gta ctc aag cca aag ccg aag gca 1680

Glu Asp Asp Ser Tyr Ile Asp Pro Val Leu Lys Pro Lys Pro Lys Ala

545 550 555 560

gca gtt gag agc gag gca cat atc gcc ctg cca gga atc ggt ccg atg 1728

Ala Val Glu Ser Glu Ala His Ile Ala Leu Pro Gly Ile Gly Pro Met

565 570 575

ttg atg gaa gac ccg cgt gat gtt gct gta gag gcc tag 1767

Leu Met Glu Asp Pro Arg Asp Val Ala Val Glu Ala

580 585

<210> 13

<211> 588

<212> PRT

<213> 纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-BVMO1_wt

<400> 13

Met Pro Ser Ala Ile Thr Pro Pro Val Asp His Arg Ser Leu Pro Gly

1 5 10 15

Leu Phe Lys Pro Gln Arg Lys Leu Lys Val Ile Cys Val Gly Ala Gly

20 25 30

Ala Ser Gly Leu Leu Leu Ser Tyr Lys Ile Gln Arg His Phe Glu Asp

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50 55 60

Tyr Glu Asn Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Asn

65 70 75 80

Tyr Thr Trp Ser Phe Glu Pro Lys Thr Asp Trp Ser Ala Asn Tyr Ala

85 90 95

Ser Ser Lys Glu Ile Phe Lys Tyr Phe Lys Asp Phe Thr Lys Lys Tyr

100 105 110

Gly Leu Ser Lys Tyr Ile Lys Leu Glu His Glu Val Val Gly Ala Thr

115 120 125

Trp Met Glu Ala Glu Ala Gln Trp Lys Val Asp Val Lys Asp Leu Arg

130 135 140

Ser Gly Asn Thr Gln Ser Ser Phe Ala His Ile Leu Val Asn Ala Gly

145 150 155 160

Gly Ile Leu Asn Ala Trp Arg Tyr Pro Pro Ile Pro Gly Ile Lys Asp

165 170 175

Phe Lys Gly Asp Leu Val His Ser Ala Ala Trp Pro Glu His Leu Asp

180 185 190

Leu Asn Gly Lys Val Val Gly Leu Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile

195 200 205

Gln Ile Leu Pro Ala Ile Lys Lys Asp Val Lys Gln Leu Val Thr Phe

210 215 220

Ile Arg Glu Ala Thr Trp Val Ala Pro Pro Leu Gly Gln Ala Tyr Arg

225 230 235 240

Ala Phe Ser Thr Asp Glu Gln Ala Gln Phe Ala Gln Asp Pro Arg His

245 250 255

His Leu Glu Thr Arg Arg Ala Thr Glu Ala Thr Met Asn Gln Ser Phe

260 265 270

Gly Ile Phe His Ser Gly Ser Glu Glu Gln Lys Gly Val Arg Gln Tyr

275 280 285

Met Gln Asp Ile Met Glu Thr Lys Leu Asn Asn Lys Gln Leu Glu Ser

290 295 300

Val Leu Ile Pro Glu Trp Ser Val Gly Cys Arg Arg Leu Thr Pro Gly

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Thr Asn Tyr Leu Glu Ser Leu Ser Asp Asp Asn Val Lys Val Val Tyr

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340 345 350

Lys Gly Glu Tyr Pro Val Glu Val Leu Ile Cys Ala Thr Gly Phe Asp

355 360 365

Thr Thr Phe Lys Pro Arg Phe Pro Leu Ile Gly Thr Thr Lys Glu Lys

370 375 380

Leu Ser Asp Val Trp Lys Asp Asp Pro Arg Gly Tyr Phe Gly Ile Ala

385 390 395 400

Thr Asn Asn Tyr Pro Asn Tyr Phe Phe Thr Leu Gly Pro Asn Cys Pro

405 410 415

Ile Gly Asn Gly Pro Val Leu Cys Ala Ile Glu Ala Glu Val Glu Tyr

420 425 430

Ile Ile Asn Met Leu Ser Lys Phe Gln Lys Glu Asn Ile Arg Ser Phe

435 440 445

Asp Ile Lys Ala Asp Ala Val Asp Ala Phe Asn Asp Trp Lys Asp Asp

450 455 460

Phe Met Lys Asp Thr Ile Trp Ala Glu Gln Cys Arg Ser Trp Tyr Lys

465 470 475 480

Ala Gly Ser Ala Thr Gly Lys Ile Leu Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr

485 490 495

Leu His Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Ser Pro Arg Trp Glu Asp Trp Asp

500 505 510

Phe Lys Tyr Gln Pro Gly Arg Asn Arg Phe His Tyr Phe Gly Asn Gly

515 520 525

His Ser Cys Ala Glu Gln Asp Gly Asp Leu Ser Trp Tyr Ile Arg Asn

530 535 540

Glu Asp Asp Ser Tyr Ile Asp Pro Val Leu Lys Pro Lys Pro Lys Ala

545 550 555 560

Ala Val Glu Ser Glu Ala His Ile Ala Leu Pro Gly Ile Gly Pro Met

565 570 575

Leu Met Glu Asp Pro Arg Asp Val Ala Val Glu Ala

580 585

<210> 14

<211> 1767

<212> DNA

<213> 纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46-BVMO1_大肠杆菌，经优化的

<400> 14

atgccatctg ccattactcc acctgttgat catcgtagcc tgccgggtct gttcaagccg 60

caacgtaagt tgaaagtgat ctgtgttggc gcgggcgcga gcggcctgtt gctgagctac 120

aagattcagc gtcactttga ggactttgag ttgcaagttt ttgagaaaaa ccctgaagtg 180

agcggcacct ggtacgagaa tcgctacccg ggttgcgcgt gcgatgttcc gagccataac 240

tatacctggt cttttgagcc gaaaacggat tggtccgcaa actatgccag cagcaaagaa 300

attttcaagt acttcaaaga tttcaccaag aaatatggtc tgtctaaata cattaaactg 360

gaacacgaag tcgtgggtgc gacgtggatg gaagcggaag ctcaatggaa agttgacgtc 420

aaagacttgc gtagcggcaa cacccagagc tccttcgcgc acattctggt caatgccggt 480

ggcattctga acgcttggcg ttacccgccg attccgggta tcaaagattt taagggtgac 540

ctggtgcact cggcagcgtg gccggagcat ctggatctga atggtaaagt cgttggcctg 600

attggtaacg gtagcagcgg catccaaatt ctgccggcca tcaaaaaaga cgtgaaacaa 660

ctggtcacgt ttatccgtga ggccacgtgg gtcgccccgc cgctgggcca agcgtaccgc 720

gcatttagca ccgacgaaca ggcgcagttt gcacaagacc cgcgtcacca tctggaaact 780

cgtcgcgcga ccgaagctac catgaatcag agcttcggta tcttccacag cggttcagag 840

gaacagaaag gtgtgcgtca gtacatgcag gatatcatgg aaacgaaatt gaataacaaa 900

cagctggaga gcgtgctgat tccggagtgg tccgtgggtt gtcgccgtct gaccccgggc 960

acgaactatc tggagagctt gagcgacgat aacgtgaaag ttgtttatgg cgagatcacc 1020

cagatcaccg agtccggtgt gatttgcgat gatggcaagg gtgagtaccc ggtcgaagtg 1080

ctgatttgcg ctaccggttt cgacaccacg ttcaaaccgc gcttcccgtt gattggcacc 1140

accaaagaaa agctgagcga cgtctggaaa gatgaccctc gcggttattt cggtatcgcg 1200

accaataact acccgaacta ctttttcacc ctgggtccga actgcccgat cggcaatggt 1260

ccggtcctgt gtgcaatcga agctgaagtg gagtatatca tcaatatgct gagcaaattt 1320

cagaaagaaa acattcgcag cttcgacatt aaagccgacg cagttgatgc gtttaacgac 1380

tggaaagatg actttatgaa agacaccatc tgggcagagc agtgtcgttc ttggtacaag 1440

gctggttctg cgacgggtaa gattttggca ctgtggccgg gcagcacgct gcattatctg 1500

gaagccctga aaagcccacg ctgggaagat tgggacttca agtatcaacc gggtcgtaat 1560

cgctttcact acttcggtaa cggccacagc tgcgcggagc aagatggtga tctgtcctgg 1620

tatatccgta atgaagatga cagctacatt gacccggtac tgaagccgaa gccgaaggca 1680

gcggtggaga gcgaagcaca catcgcgctg ccaggcattg gtccgatgct gatggaggac 1740

ccgcgtgacg ttgcggttga ggcataa 1767

<210> 15

<211> 1674

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1674)

<400> 15

atg acc aaa gac aat acc aca tca ttc ccc tcg cac gcc atc tac gag 48

Met Thr Lys Asp Asn Thr Thr Ser Phe Pro Ser His Ala Ile Tyr Glu

1 5 10 15

cca cgc cgg aca tta aaa gtg ctg gtc ata ggg gct ggt gcg tcc ggt 96

Pro Arg Arg Thr Leu Lys Val Leu Val Ile Gly Ala Gly Ala Ser Gly

20 25 30

cta tta tta gca tac aaa cta cag cgg cac ttt gat tgt gtg gaa atc 144

Leu Leu Leu Ala Tyr Lys Leu Gln Arg His Phe Asp Cys Val Glu Ile

35 40 45

acg gtg ttt gag aag aac ccc gca gtg tcc ggc act tgg ttt gag aat 192

Thr Val Phe Glu Lys Asn Pro Ala Val Ser Gly Thr Trp Phe Glu Asn

50 55 60

cga tat ccg gga tgt gcc tgt gac gtt cct tcg cat tgc tat aca tgg 240

Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Cys Tyr Thr Trp

65 70 75 80

tcc ttc gag ccc aac ccc aac tgg tcc gcc aac tac gct gga gcc gac 288

Ser Phe Glu Pro Asn Pro Asn Trp Ser Ala Asn Tyr Ala Gly Ala Asp

85 90 95

gag att cga caa tac ttt gtc gat ttc tgc cat cgc cac gac ttg cag 336

Glu Ile Arg Gln Tyr Phe Val Asp Phe Cys His Arg His Asp Leu Gln

100 105 110

aaa tat atc cat ctg gaa cat gag gtg gtc cac gca gcg tgg aag tcg 384

Lys Tyr Ile His Leu Glu His Glu Val Val His Ala Ala Trp Lys Ser

115 120 125

gag act ggc cac tgg gag gtg caa gtg cgc gat ata caa cac aat tct 432

Glu Thr Gly His Trp Glu Val Gln Val Arg Asp Ile Gln His Asn Ser

130 135 140

cac aca cag cat act gcg cat atc ttg att aat gct act gga ata ctg 480

His Thr Gln His Thr Ala His Ile Leu Ile Asn Ala Thr Gly Ile Leu

145 150 155 160

aat caa tgg aag tgg cca tcc att ccc gga tta cag tcg ttc cag gga 528

Asn Gln Trp Lys Trp Pro Ser Ile Pro Gly Leu Gln Ser Phe Gln Gly

165 170 175

gat ctt ttg cac agt gca gca tgg gac tcg tca gtc aat cta gag gat 576

Asp Leu Leu His Ser Ala Ala Trp Asp Ser Ser Val Asn Leu Glu Asp

180 185 190

aaa acg gtc gct gtc att gga aac gga tca tcc gga atc cag att gtc 624

Lys Thr Val Ala Val Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile Gln Ile Val

195 200 205

cca gcg att cta ccc caa gtg cgc aaa ctc gtg cac ttt act cgt caa 672

Pro Ala Ile Leu Pro Gln Val Arg Lys Leu Val His Phe Thr Arg Gln

210 215 220

gcg gca tgg gtc gca cct cca gtc aat gaa gag tat cag gaa tac tcg 720

Ala Ala Trp Val Ala Pro Pro Val Asn Glu Glu Tyr Gln Glu Tyr Ser

225 230 235 240

ccc gaa cag atc gaa cgc ttt cgc tca gac cca aca tac ctg ctt ggg 768

Pro Glu Gln Ile Glu Arg Phe Arg Ser Asp Pro Thr Tyr Leu Leu Gly

245 250 255

gtt cgt cga cag att gaa gca cgg atg aac ggc tca ttt ctg aaa ttc 816

Val Arg Arg Gln Ile Glu Ala Arg Met Asn Gly Ser Phe Leu Lys Phe

260 265 270

atc caa ggc tca gac atg caa cgt cgt gca cac gag tat gtc atg ctg 864

Ile Gln Gly Ser Asp Met Gln Arg Arg Ala His Glu Tyr Val Met Leu

275 280 285

cac atg atg aag aga ctg gac gga gac gcc tcc ctg gca gag acc ttg 912

His Met Met Lys Arg Leu Asp Gly Asp Ala Ser Leu Ala Glu Thr Leu

290 295 300

gta cca acc ttc cca ttt ggc tgt cga aga ccg acg cca gga acc ggg 960

Val Pro Thr Phe Pro Phe Gly Cys Arg Arg Pro Thr Pro Gly Thr Gly

305 310 315 320

tat ctc gaa gca ctg aag gac tcg aaa gtg gaa aca att acc gga gcc 1008

Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Asp Ser Lys Val Glu Thr Ile Thr Gly Ala

325 330 335

cga atc gcg aat gtg acg ggt aac cag gtg gtc ctc gag aat ggc acg 1056

Arg Ile Ala Asn Val Thr Gly Asn Gln Val Val Leu Glu Asn Gly Thr

340 345 350

tcg tat acg gtg gat gcg att gtg tgc gcc acg gga ttc gat acg tct 1104

Ser Tyr Thr Val Asp Ala Ile Val Cys Ala Thr Gly Phe Asp Thr Ser

355 360 365

tac aaa cca cga ttc cca ctg gtc ggc aga gac agc acc act ctc agc 1152

Tyr Lys Pro Arg Phe Pro Leu Val Gly Arg Asp Ser Thr Thr Leu Ser

370 375 380

gag gcc tgg aag gac gaa gtg tct gca tat ctg ggg ctt aca gtt cct 1200

Glu Ala Trp Lys Asp Glu Val Ser Ala Tyr Leu Gly Leu Thr Val Pro

385 390 395 400

gga ttt ccc aac tat ttt tcc atc ttg gga ccg aac tgt ccg gtg ggt 1248

Gly Phe Pro Asn Tyr Phe Ser Ile Leu Gly Pro Asn Cys Pro Val Gly

405 410 415

aac ggg ccg gtg ttg atc agt atc gaa aaa cag gtc gaa tat att gtt 1296

Asn Gly Pro Val Leu Ile Ser Ile Glu Lys Gln Val Glu Tyr Ile Val

420 425 430

cag gta ctg ggg aaa atg cag aag gag aat cta cag tca ttt gaa gtc 1344

Gln Val Leu Gly Lys Met Gln Lys Glu Asn Leu Gln Ser Phe Glu Val

435 440 445

cgg cgg acg gca aca gac tcg ttt aac caa tgg aag gat gca ttc atg 1392

Arg Arg Thr Ala Thr Asp Ser Phe Asn Gln Trp Lys Asp Ala Phe Met

450 455 460

caa aac acg gtg tgg acg agt ggt tgt cgc agc tgg tat cag aat ggc 1440

Gln Asn Thr Val Trp Thr Ser Gly Cys Arg Ser Trp Tyr Gln Asn Gly

465 470 475 480

tcg aaa ggg aac cag atc gtg gct ctc tgg cct gga tcc acg ttg cac 1488

Ser Lys Gly Asn Gln Ile Val Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr Leu His

485 490 495

tat ttg gag gcg att cag cat cca cga tac gag gac tac atc tgg acc 1536

Tyr Leu Glu Ala Ile Gln His Pro Arg Tyr Glu Asp Tyr Ile Trp Thr

500 505 510

agt cca cct ggt gtc aat cca tgg gcc ttt cta ggc aac ggg cag agt 1584

Ser Pro Pro Gly Val Asn Pro Trp Ala Phe Leu Gly Asn Gly Gln Ser

515 520 525

acg gcc gaa acc cgt ccc gga ggc gac acg agt tgg tat ctg cgt tcg 1632

Thr Ala Glu Thr Arg Pro Gly Gly Asp Thr Ser Trp Tyr Leu Arg Ser

530 535 540

aaa gat gat tca ttt ata gat cca tgt ctg aga cag ctt tag 1674

Lys Asp Asp Ser Phe Ile Asp Pro Cys Leu Arg Gln Leu

545 550 555

<210> 16

<211> 557

<212> PRT

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_wt

<400> 16

Met Thr Lys Asp Asn Thr Thr Ser Phe Pro Ser His Ala Ile Tyr Glu

1 5 10 15

Pro Arg Arg Thr Leu Lys Val Leu Val Ile Gly Ala Gly Ala Ser Gly

20 25 30

Leu Leu Leu Ala Tyr Lys Leu Gln Arg His Phe Asp Cys Val Glu Ile

35 40 45

Thr Val Phe Glu Lys Asn Pro Ala Val Ser Gly Thr Trp Phe Glu Asn

50 55 60

Arg Tyr Pro Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Ser His Cys Tyr Thr Trp

65 70 75 80

Ser Phe Glu Pro Asn Pro Asn Trp Ser Ala Asn Tyr Ala Gly Ala Asp

85 90 95

Glu Ile Arg Gln Tyr Phe Val Asp Phe Cys His Arg His Asp Leu Gln

100 105 110

Lys Tyr Ile His Leu Glu His Glu Val Val His Ala Ala Trp Lys Ser

115 120 125

Glu Thr Gly His Trp Glu Val Gln Val Arg Asp Ile Gln His Asn Ser

130 135 140

His Thr Gln His Thr Ala His Ile Leu Ile Asn Ala Thr Gly Ile Leu

145 150 155 160

Asn Gln Trp Lys Trp Pro Ser Ile Pro Gly Leu Gln Ser Phe Gln Gly

165 170 175

Asp Leu Leu His Ser Ala Ala Trp Asp Ser Ser Val Asn Leu Glu Asp

180 185 190

Lys Thr Val Ala Val Ile Gly Asn Gly Ser Ser Gly Ile Gln Ile Val

195 200 205

Pro Ala Ile Leu Pro Gln Val Arg Lys Leu Val His Phe Thr Arg Gln

210 215 220

Ala Ala Trp Val Ala Pro Pro Val Asn Glu Glu Tyr Gln Glu Tyr Ser

225 230 235 240

Pro Glu Gln Ile Glu Arg Phe Arg Ser Asp Pro Thr Tyr Leu Leu Gly

245 250 255

Val Arg Arg Gln Ile Glu Ala Arg Met Asn Gly Ser Phe Leu Lys Phe

260 265 270

Ile Gln Gly Ser Asp Met Gln Arg Arg Ala His Glu Tyr Val Met Leu

275 280 285

His Met Met Lys Arg Leu Asp Gly Asp Ala Ser Leu Ala Glu Thr Leu

290 295 300

Val Pro Thr Phe Pro Phe Gly Cys Arg Arg Pro Thr Pro Gly Thr Gly

305 310 315 320

Tyr Leu Glu Ala Leu Lys Asp Ser Lys Val Glu Thr Ile Thr Gly Ala

325 330 335

Arg Ile Ala Asn Val Thr Gly Asn Gln Val Val Leu Glu Asn Gly Thr

340 345 350

Ser Tyr Thr Val Asp Ala Ile Val Cys Ala Thr Gly Phe Asp Thr Ser

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Tyr Lys Pro Arg Phe Pro Leu Val Gly Arg Asp Ser Thr Thr Leu Ser

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Glu Ala Trp Lys Asp Glu Val Ser Ala Tyr Leu Gly Leu Thr Val Pro

385 390 395 400

Gly Phe Pro Asn Tyr Phe Ser Ile Leu Gly Pro Asn Cys Pro Val Gly

405 410 415

Asn Gly Pro Val Leu Ile Ser Ile Glu Lys Gln Val Glu Tyr Ile Val

420 425 430

Gln Val Leu Gly Lys Met Gln Lys Glu Asn Leu Gln Ser Phe Glu Val

435 440 445

Arg Arg Thr Ala Thr Asp Ser Phe Asn Gln Trp Lys Asp Ala Phe Met

450 455 460

Gln Asn Thr Val Trp Thr Ser Gly Cys Arg Ser Trp Tyr Gln Asn Gly

465 470 475 480

Ser Lys Gly Asn Gln Ile Val Ala Leu Trp Pro Gly Ser Thr Leu His

485 490 495

Tyr Leu Glu Ala Ile Gln His Pro Arg Tyr Glu Asp Tyr Ile Trp Thr

500 505 510

Ser Pro Pro Gly Val Asn Pro Trp Ala Phe Leu Gly Asn Gly Gln Ser

515 520 525

Thr Ala Glu Thr Arg Pro Gly Gly Asp Thr Ser Trp Tyr Leu Arg Ser

530 535 540

Lys Asp Asp Ser Phe Ile Asp Pro Cys Leu Arg Gln Leu

545 550 555

<210> 17

<211> 1674

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_大肠杆菌，经优化的

<400> 17

atgaccaaag ataacaccac gtcctttccg agccacgcca tttacgagcc gcgccgtacc 60

ctgaaagtcc tggtgatcgg tgctggcgcg agcggtttgt tgctggcata taagctgcag 120

cgccacttcg attgcgttga gattaccgta ttcgagaaga atccggcagt cagcggcacc 180

tggtttgaga atcgttaccc tggttgtgca tgtgacgtgc cgagccattg ctacacctgg 240

tcgttcgagc caaacccgaa ttggagcgca aactacgcgg gtgcggatga aattcgccag 300

tatttcgttg atttctgtca ccgtcatgat ctgcagaagt acatccatct ggagcacgaa 360

gtcgttcatg cggcatggaa atcggagact ggtcactggg aagtgcaagt ccgtgacatc 420

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aatcaatgga aatggccgag cattccgggc ctgcagagct ttcagggtga tctgctgcat 540

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tatctggaag cgctgaaaga ctctaaagtt gaaacgatca cgggtgcccg tatcgcaaat 1020

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ggttttccga actatttcag catcctgggt cctaattgcc cggtcggtaa tggtccggtt 1260

ttgatcagca tcgagaaaca agtggagtat atcgtgcaag ttctgggtaa gatgcagaaa 1320

gaaaacttgc agtccttcga agttcgccgt accgccaccg acagcttcaa tcagtggaaa 1380

gatgcgttca tgcaaaacac ggtgtggacc tcaggttgcc gttcttggta tcagaatggc 1440

agcaagggca accaaattgt cgcgctgtgg ccgggttcca cgctgcacta cctggaagcg 1500

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<210> 18

<211> 1674

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeBVMO_酵母，经优化的

<400> 18

atgactaagg acaacactac ttctttccca tctcacgcta tctacgaacc aagaagaact 60

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agacacttcg actgtgttga aatcactgtt ttcgaaaaga acccagctgt ttctggtact 180

tggttcgaaa acagataccc aggttgtgct tgtgacgttc catctcactg ttacacttgg 240

tctttcgaac caaacccaaa ctggtctgct aactacgctg gtgctgacga aatcagacaa 300

tacttcgttg acttctgtca cagacacgac ttgcaaaagt acatccactt ggaacacgaa 360

gttgttcacg ctgcttggaa gtctgaaact ggtcactggg aagttcaagt tagagacatc 420

caacacaact ctcacactca acacactgct cacatcttga tcaacgctac tggtatcttg 480

aaccaatgga agtggccatc tatcccaggt ttgcaatctt tccaaggtga cttgttgcac 540

tctgctgctt gggactcttc tgttaacttg gaagacaaga ctgttgctgt tatcggtaac 600

ggttcttctg gtatccaaat cgttccagct atcttgccac aagttagaaa gttggttcac 660

ttcactagac aagctgcttg ggttgctcca ccagttaacg aagaatacca agaatactct 720

ccagaacaaa tcgaaagatt cagatctgac ccaacttact tgttgggtgt tagaagacaa 780

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agagctcacg aatacgttat gttgcacatg atgaagagat tggacggtga cgcttctttg 900

gctgaaactt tggttccaac tttcccattc ggttgtagaa gaccaactcc aggtactggt 960

tacttggaag ctttgaagga ctctaaggtt gaaactatca ctggtgctag aatcgctaac 1020

gttactggta accaagttgt tttggaaaac ggtacttctt acactgttga cgctatcgtt 1080

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ggtttcccaa actacttctc tatcttgggt ccaaactgtc cagttggtaa cggtccagtt 1260

ttgatctcta tcgaaaagca agttgaatac atcgttcaag ttttgggtaa gatgcaaaag 1320

gaaaacttgc aatctttcga agttagaaga actgctactg actctttcaa ccaatggaag 1380

gacgctttca tgcaaaacac tgtttggact tctggttgta gatcttggta ccaaaacggt 1440

tctaagggta accaaatcgt tgctttgtgg ccaggttcta ctttgcacta cttggaagct 1500

atccaacacc caagatacga agactacatc tggacttctc caccaggtgt taacccatgg 1560

gctttcttgg gtaacggtca atctactgct gaaactagac caggtggtga cacttcttgg 1620

tacttgagat ctaaggacga ctctttcatc gacccatgtt tgagacaatt gtaa 1674

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<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-EST_wt

<220>

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<222> (1)..(1038)

<400> 19

atg cct tcc gat ctt ccc cga cca gca tat gac ccg gaa ata gag ccc 48

Met Pro Ser Asp Leu Pro Arg Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ile Glu Pro

1 5 10 15

ttc ctc tct atg gtc cca tta cca cca aca atc aat gcg gat atc atg 96

Phe Leu Ser Met Val Pro Leu Pro Pro Thr Ile Asn Ala Asp Ile Met

20 25 30

aaa gaa ttg cgt aaa gca cct ctg ctc agt caa gcg cct gac ctc gac 144

Lys Glu Leu Arg Lys Ala Pro Leu Leu Ser Gln Ala Pro Asp Leu Asp

35 40 45

gca tta ctt tcc gac aag cca ata act cac cgc gaa gtc agc att cca 192

Ala Leu Leu Ser Asp Lys Pro Ile Thr His Arg Glu Val Ser Ile Pro

50 55 60

ggt ctc aat tcc caa gat cca caa atc acg ttg tca ata ttc tcc agt 240

Gly Leu Asn Ser Gln Asp Pro Gln Ile Thr Leu Ser Ile Phe Ser Ser

65 70 75 80

aca ttg gag ggt ggc ccg aaa cca tgt atc tat ttc gtt cat ggt ggc 288

Thr Leu Glu Gly Gly Pro Lys Pro Cys Ile Tyr Phe Val His Gly Gly

85 90 95

ggt atg atc atc gga tgt cga ttc gtg ggt att gag gat tat ctt caa 336

Gly Met Ile Ile Gly Cys Arg Phe Val Gly Ile Glu Asp Tyr Leu Gln

100 105 110

tac gtc gag cag aac gac gct gtc gtc gtg gct gta gag tat cgt ctc 384

Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ala Val Val Val Ala Val Glu Tyr Arg Leu

115 120 125

gct ccg gaa cac ccg gac cca gcg cct gtc aat gat tgt tac gct gga 432

Ala Pro Glu His Pro Asp Pro Ala Pro Val Asn Asp Cys Tyr Ala Gly

130 135 140

ctt tta tgg acg gca gca aat gct gca gag cta ggc atc gat ctg gag 480

Leu Leu Trp Thr Ala Ala Asn Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Leu Glu

145 150 155 160

aga ctg ttg atc tgt ggc gct tct gct ggt ggt ggt ctt tct gct gga 528

Arg Leu Leu Ile Cys Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ser Ala Gly

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gtg gca ttg atg gca cga gac aag aaa ggt cca aaa ttg gta gga caa 576

Val Ala Leu Met Ala Arg Asp Lys Lys Gly Pro Lys Leu Val Gly Gln

180 185 190

ttg tta tgc tat cca atg ctc gac gat agg aat gat tca ctc tca agt 624

Leu Leu Cys Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser

195 200 205

cag cag tac gtg gat gaa ggt gtt tgg agt cgt ggt agc aat gca ttt 672

Gln Gln Tyr Val Asp Glu Gly Val Trp Ser Arg Gly Ser Asn Ala Phe

210 215 220

ggc tgg aag caa ttg ctt gga gac agg gcg ggc aaa gag gga gtc agt 720

Gly Trp Lys Gln Leu Leu Gly Asp Arg Ala Gly Lys Glu Gly Val Ser

225 230 235 240

att tat gct gcg ccg gca aga gca act gat ttg agc gga ctg ccg aac 768

Ile Tyr Ala Ala Pro Ala Arg Ala Thr Asp Leu Ser Gly Leu Pro Asn

245 250 255

act ttc atc gac gtt ggc agc gct gaa gtc ttc agg gat gag gac atc 816

Thr Phe Ile Asp Val Gly Ser Ala Glu Val Phe Arg Asp Glu Asp Ile

260 265 270

gct tat gcc tcg agg tta tgg gct gtt ggt gtc caa gcg gaa ctt cat 864

Ala Tyr Ala Ser Arg Leu Trp Ala Val Gly Val Gln Ala Glu Leu His

275 280 285

gtg tgg ccg ggt gga tat cat gct gcg gag aac atg gca cct ggg act 912

Val Trp Pro Gly Gly Tyr His Ala Ala Glu Asn Met Ala Pro Gly Thr

290 295 300

gat tac tct aag aag gtg aaa gcg act cgc ttg gca tgg atg aag aga 960

Asp Tyr Ser Lys Lys Val Lys Ala Thr Arg Leu Ala Trp Met Lys Arg

305 310 315 320

gtc ttc atg aaa gcc cca aag tcg acg aca gag tcg ttg cct gct cca 1008

Val Phe Met Lys Ala Pro Lys Ser Thr Thr Glu Ser Leu Pro Ala Pro

325 330 335

aca gtg gat gaa gct gtt ggc aca ata tga 1038

Thr Val Asp Glu Ala Val Gly Thr Ile

340 345

<210> 20

<211> 345

<212> PRT

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-EST_wt

<400> 20

Met Pro Ser Asp Leu Pro Arg Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ile Glu Pro

1 5 10 15

Phe Leu Ser Met Val Pro Leu Pro Pro Thr Ile Asn Ala Asp Ile Met

20 25 30

Lys Glu Leu Arg Lys Ala Pro Leu Leu Ser Gln Ala Pro Asp Leu Asp

35 40 45

Ala Leu Leu Ser Asp Lys Pro Ile Thr His Arg Glu Val Ser Ile Pro

50 55 60

Gly Leu Asn Ser Gln Asp Pro Gln Ile Thr Leu Ser Ile Phe Ser Ser

65 70 75 80

Thr Leu Glu Gly Gly Pro Lys Pro Cys Ile Tyr Phe Val His Gly Gly

85 90 95

Gly Met Ile Ile Gly Cys Arg Phe Val Gly Ile Glu Asp Tyr Leu Gln

100 105 110

Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ala Val Val Val Ala Val Glu Tyr Arg Leu

115 120 125

Ala Pro Glu His Pro Asp Pro Ala Pro Val Asn Asp Cys Tyr Ala Gly

130 135 140

Leu Leu Trp Thr Ala Ala Asn Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Leu Glu

145 150 155 160

Arg Leu Leu Ile Cys Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ser Ala Gly

165 170 175

Val Ala Leu Met Ala Arg Asp Lys Lys Gly Pro Lys Leu Val Gly Gln

180 185 190

Leu Leu Cys Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser

195 200 205

Gln Gln Tyr Val Asp Glu Gly Val Trp Ser Arg Gly Ser Asn Ala Phe

210 215 220

Gly Trp Lys Gln Leu Leu Gly Asp Arg Ala Gly Lys Glu Gly Val Ser

225 230 235 240

Ile Tyr Ala Ala Pro Ala Arg Ala Thr Asp Leu Ser Gly Leu Pro Asn

245 250 255

Thr Phe Ile Asp Val Gly Ser Ala Glu Val Phe Arg Asp Glu Asp Ile

260 265 270

Ala Tyr Ala Ser Arg Leu Trp Ala Val Gly Val Gln Ala Glu Leu His

275 280 285

Val Trp Pro Gly Gly Tyr His Ala Ala Glu Asn Met Ala Pro Gly Thr

290 295 300

Asp Tyr Ser Lys Lys Val Lys Ala Thr Arg Leu Ala Trp Met Lys Arg

305 310 315 320

Val Phe Met Lys Ala Pro Lys Ser Thr Thr Glu Ser Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Thr Val Asp Glu Ala Val Gly Thr Ile

340 345

<210> 21

<211> 1038

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23- EST_大肠杆菌，经优化的

<400> 21

atgccatcgg atctgccgcg cccagcctac gaccctgaaa tcgaaccgtt cttgagcatg 60

gttccgctgc ctccgaccat taacgcggac attatgaaag aactgcgtaa ggccccactg 120

ctgagccagg ctccggatct ggatgccctg ctgagcgaca agccgattac tcaccgtgag 180

gtgtccatcc cgggtctgaa cagccaggac ccgcagatta ccctgagcat ctttagctct 240

accctggagg gtggcccgaa gccgtgtatc tacttcgtgc acggtggcgg catgattatt 300

ggctgtcgct tcgtcggtat tgaggactac ttgcaatacg tggaacagaa tgacgcggtc 360

gttgtggccg ttgagtatcg tctggcaccg gaacatccgg acccggcacc ggtgaatgac 420

tgctacgcgg gtctgctgtg gaccgctgcg aacgcggcag aactgggcat cgatttggag 480

cgtctgctga tctgcggcgc ttctgcgggt ggcggtctgt cagcgggtgt ggcgctgatg 540

gcacgcgaca aaaagggtcc gaaactggtc ggtcagctgc tgtgctatcc gatgctcgac 600

gatcgtaacg atagcttgag cagccagcaa tacgtagatg agggtgtttg gagccgtggt 660

agcaatgcgt ttggttggaa gcaactgctg ggtgatcgtg ccggcaaaga gggcgtgtcc 720

atttacgcgg caccggctcg cgcaaccgac ctgtctggct tgcctaacac gtttatcgac 780

gttggttccg ccgaggtttt ccgtgatgaa gatatcgcgt atgcgagccg cttatgggca 840

gtcggtgttc aagcggagct gcatgtctgg ccgggtggtt atcacgctgc ggagaatatg 900

gcaccgggca ccgattatag caaaaaagtc aaggcgacgc gtctggcatg gatgaaacgc 960

gtctttatga aggccccgaa aagcaccacg gagagcctgc cggcaccgac ggttgacgaa 1020

gcggtgggca cgatctaa 1038

<210> 22

<211> 1038

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23- EST_酵母，经优化的

<400> 22

atgccatctg acttgccaag accagcttac gacccagaaa tcgaaccatt cttgtctatg 60

gttccattgc caccaactat caacgctgac atcatgaagg aattgagaaa ggctccattg 120

ttgtctcaag ctccagactt ggacgctttg ttgtctgaca agccaatcac tcacagagaa 180

gtttctatcc caggtttgaa ctctcaagac ccacaaatca ctttgtctat cttctcttct 240

actttggaag gtggtccaaa gccatgtatc tacttcgttc acggtggtgg tatgatcatc 300

ggttgtagat tcgttggtat cgaagactac ttgcaatacg ttgaacaaaa cgacgctgtt 360

gttgttgctg ttgaatacag attggctcca gaacacccag acccagctcc agttaacgac 420

tgttacgctg gtttgttgtg gactgctgct aacgctgctg aattgggtat cgacttggaa 480

agattgttga tctgtggtgc ttctgctggt ggtggtttgt ctgctggtgt tgctttgatg 540

gctagagaca agaagggtcc aaagttggtt ggtcaattgt tgtgttaccc aatgttggac 600

gacagaaacg actctttgtc ttctcaacaa tacgttgacg aaggtgtttg gtctagaggt 660

tctaacgctt tcggttggaa gcaattgttg ggtgacagag ctggtaagga aggtgtttct 720

atctacgctg ctccagctag agctactgac ttgtctggtt tgccaaacac tttcatcgac 780

gttggttctg ctgaagtttt cagagacgaa gacatcgctt acgcttctag attgtgggct 840

gttggtgttc aagctgaatt gcacgtttgg ccaggtggtt accacgctgc tgaaaacatg 900

gctccaggta ctgactactc taagaaggtt aaggctacta gattggcttg gatgaagaga 960

gttttcatga aggctccaaa gtctactact gaatctttgc cagctccaac tgttgacgaa 1020

gctgttggta ctatctaa 1038

<210> 23

<211> 933

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24- EST_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(933)

<400> 23

atg act cat agc cct cca ctc gat gcc gaa ctt tcg cta ctc cga tat 48

Met Thr His Ser Pro Pro Leu Asp Ala Glu Leu Ser Leu Leu Arg Tyr

1 5 10 15

gct cct gct gtt ccc gtg gga tgg cag ttg gga cga aaa ctc ttg cgg 96

Ala Pro Ala Val Pro Val Gly Trp Gln Leu Gly Arg Lys Leu Leu Arg

20 25 30

atg aac aca ctc atg acg cgc cct atg gag ggt gtc atg cga gat gat 144

Met Asn Thr Leu Met Thr Arg Pro Met Glu Gly Val Met Arg Asp Asp

35 40 45

gtg gtc ata cca aat ctt gat ggt act gcc aac atc aga ctg ttc att 192

Val Val Ile Pro Asn Leu Asp Gly Thr Ala Asn Ile Arg Leu Phe Ile

50 55 60

tgt cgc cct caa gac cct act gag act atg ccg gtg ata ctt tgg tta 240

Cys Arg Pro Gln Asp Pro Thr Glu Thr Met Pro Val Ile Leu Trp Leu

65 70 75 80

cac gga ggc ggt atg gtc gca ggt cat tac aaa caa gac tcc ggg ttc 288

His Gly Gly Gly Met Val Ala Gly His Tyr Lys Gln Asp Ser Gly Phe

85 90 95

atg gac atc tgg gcc aag cgc cta gga gcc ttt gtg gtt tcg gtc gat 336

Met Asp Ile Trp Ala Lys Arg Leu Gly Ala Phe Val Val Ser Val Asp

100 105 110

tat cgt ctg gct ccc gag gcc aag gct cca gcc gct cta gac gat tgc 384

Tyr Arg Leu Ala Pro Glu Ala Lys Ala Pro Ala Ala Leu Asp Asp Cys

115 120 125

atc gct gct tgg caa tgg atc acc acg cag acc gct cga ggc atc gac 432

Ile Ala Ala Trp Gln Trp Ile Thr Thr Gln Thr Ala Arg Gly Ile Asp

130 135 140

act acc cgc atg gcg gtg ggt ggt gcg agc gca gga gga ggc ctg gcg 480

Thr Thr Arg Met Ala Val Gly Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ala

145 150 155 160

gcc agt acc gtt cag cga ctt gtc gat ctc gga gga gtg aaa cct gtc 528

Ala Ser Thr Val Gln Arg Leu Val Asp Leu Gly Gly Val Lys Pro Val

165 170 175

ttt caa ttg ctc atc tat ccc atg ttg gac gac agg acg gtg gtc aga 576

Phe Gln Leu Leu Ile Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Thr Val Val Arg

180 185 190

ttt gat ccc gac cga aga tat tac atg tgg aca ccg gat tgt aat cga 624

Phe Asp Pro Asp Arg Arg Tyr Tyr Met Trp Thr Pro Asp Cys Asn Arg

195 200 205

tat ggc tgg acc tcg tac ctc gga gtc cct cca ggg agc gct gag gtg 672

Tyr Gly Trp Thr Ser Tyr Leu Gly Val Pro Pro Gly Ser Ala Glu Val

210 215 220

cct ccc tat gcg tcg gcg gca cgt cga ccg gat cta tca ggt cta cct 720

Pro Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Arg Arg Pro Asp Leu Ser Gly Leu Pro

225 230 235 240

ccc acc tgg atc ggt gtt ggg tca ctg gat ctc ttt cac gac gag gac 768

Pro Thr Trp Ile Gly Val Gly Ser Leu Asp Leu Phe His Asp Glu Asp

245 250 255

atg gat tat gcg cgc agg tta cgt gag agc gga gtt ccg gtt gag gaa 816

Met Asp Tyr Ala Arg Arg Leu Arg Glu Ser Gly Val Pro Val Glu Glu

260 265 270

tat gtc gct gtc gga gcg cct cat gcc ttc gac acg ata tat gga aag 864

Tyr Val Ala Val Gly Ala Pro His Ala Phe Asp Thr Ile Tyr Gly Lys

275 280 285

gcg aag gtc acc ttg gat ttc tgg gac tcg cat ttc aac gcc ctt cga 912

Ala Lys Val Thr Leu Asp Phe Trp Asp Ser His Phe Asn Ala Leu Arg

290 295 300

agg gct ttg tgt ctc gac tga 933

Arg Ala Leu Cys Leu Asp

305 310

<210> 24

<211> 310

<212> PRT

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24- EST_wt

<400> 24

Met Thr His Ser Pro Pro Leu Asp Ala Glu Leu Ser Leu Leu Arg Tyr

1 5 10 15

Ala Pro Ala Val Pro Val Gly Trp Gln Leu Gly Arg Lys Leu Leu Arg

20 25 30

Met Asn Thr Leu Met Thr Arg Pro Met Glu Gly Val Met Arg Asp Asp

35 40 45

Val Val Ile Pro Asn Leu Asp Gly Thr Ala Asn Ile Arg Leu Phe Ile

50 55 60

Cys Arg Pro Gln Asp Pro Thr Glu Thr Met Pro Val Ile Leu Trp Leu

65 70 75 80

His Gly Gly Gly Met Val Ala Gly His Tyr Lys Gln Asp Ser Gly Phe

85 90 95

Met Asp Ile Trp Ala Lys Arg Leu Gly Ala Phe Val Val Ser Val Asp

100 105 110

Tyr Arg Leu Ala Pro Glu Ala Lys Ala Pro Ala Ala Leu Asp Asp Cys

115 120 125

Ile Ala Ala Trp Gln Trp Ile Thr Thr Gln Thr Ala Arg Gly Ile Asp

130 135 140

Thr Thr Arg Met Ala Val Gly Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ala

145 150 155 160

Ala Ser Thr Val Gln Arg Leu Val Asp Leu Gly Gly Val Lys Pro Val

165 170 175

Phe Gln Leu Leu Ile Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Thr Val Val Arg

180 185 190

Phe Asp Pro Asp Arg Arg Tyr Tyr Met Trp Thr Pro Asp Cys Asn Arg

195 200 205

Tyr Gly Trp Thr Ser Tyr Leu Gly Val Pro Pro Gly Ser Ala Glu Val

210 215 220

Pro Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Arg Arg Pro Asp Leu Ser Gly Leu Pro

225 230 235 240

Pro Thr Trp Ile Gly Val Gly Ser Leu Asp Leu Phe His Asp Glu Asp

245 250 255

Met Asp Tyr Ala Arg Arg Leu Arg Glu Ser Gly Val Pro Val Glu Glu

260 265 270

Tyr Val Ala Val Gly Ala Pro His Ala Phe Asp Thr Ile Tyr Gly Lys

275 280 285

Ala Lys Val Thr Leu Asp Phe Trp Asp Ser His Phe Asn Ala Leu Arg

290 295 300

Arg Ala Leu Cys Leu Asp

305 310

<210> 25

<211> 933

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24- EST_大肠杆菌，经优化的

<400> 25

atgacccact cgccgccact ggatgccgaa ctgagcttgc tgcgctacgc ccctgccgtt 60

ccggtgggtt ggcagctggg tcgcaaactg ctgcgtatga acaccttgat gacccgtccg 120

atggaaggtg tcatgcgcga cgatgtggtt attccgaatc tggacggcac ggctaacatc 180

cgtctgttta tctgtcgtcc gcaagacccg accgagacta tgccggttat cctgtggctg 240

cacggtggcg gcatggtcgc aggccactac aaacaagaca gcggtttcat ggacatttgg 300

gcgaagcgcc tgggtgcgtt tgttgttagc gttgattatc gcctggcgcc tgaggctaag 360

gcaccggcag cgctcgatga ctgcatcgcg gcgtggcagt ggattaccac ccagaccgcg 420

cgtggtattg acaccactcg tatggcagtg ggtggtgcga gcgcgggtgg cggtctggcg 480

gcaagcacgg ttcagcgtct tgtcgatctg ggcggtgtga aaccggtctt tcaactgctg 540

atctatccga tgctggacga tcgtaccgtg gtgcgcttcg acccggatcg tcgttattac 600

atgtggacgc cggactgcaa cagatacggc tggaccagct acctgggcgt gccaccgggt 660

agcgcagagg tcccgccgta tgcctccgcg gctcgtcgtc cggatctgtc cggcctgccg 720

ccgacgtgga tcggtgtcgg ctctctggat ctgttccatg acgaagatat ggattacgca 780

cgtcgtttgc gcgagagcgg tgtgccggtc gaagagtatg ttgctgtggg tgccccgcat 840

gcgttcgaca cgatttacgg caaggccaaa gttacgctgg acttttggga tagccacttc 900

aatgcgctgc gccgtgcgtt gtgtttagac taa 933

<210> 26

<211> 933

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24- EST_酵母，经优化的

<400> 26

atgactcact ctccaccatt ggacgctgaa ttgtctttgt tgagatacgc tccagctgtt 60

ccagttggtt ggcaattggg tagaaagttg ttgagaatga acactttgat gactagacca 120

atggaaggtg ttatgagaga cgacgttgtt atcccaaact tggacggtac tgctaacatc 180

agattgttca tctgtagacc acaagaccca actgaaacta tgccagttat cttgtggttg 240

cacggtggtg gtatggttgc tggtcactac aagcaagact ctggtttcat ggacatctgg 300

gctaagagat tgggtgcttt cgttgtttct gttgactaca gattggctcc agaagctaag 360

gctccagctg ctttggacga ctgtatcgct gcttggcaat ggatcactac tcaaactgct 420

agaggtatcg acactactag aatggctgtt ggtggtgctt ctgctggtgg tggtttggct 480

gcttctactg ttcaaagatt ggttgacttg ggtggtgtta agccagtttt ccaattgttg 540

atctacccaa tgttggacga cagaactgtt gttagattcg acccagacag aagatactac 600

atgtggactc cagactgtaa cagatacggt tggacttctt acttgggtgt tccaccaggt 660

tctgctgaag ttccaccata cgcttctgct gctagaagac cagacttgtc tggtttgcca 720

ccaacttgga tcggtgttgg ttctttggac ttgttccacg acgaagacat ggactacgct 780

agaagattga gagaatctgg tgttccagtt gaagaatacg ttgctgttgg tgctccacac 840

gctttcgaca ctatctacgg taaggctaag gttactttgg acttctggga ctctcacttc 900

aacgctttga gaagagcttt gtgtttggac taa 933

<210> 27

<211> 1038

<212> DNA

<213> 罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25- EST_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1038)

<400> 27

atg cct tcc aat ctc ccc cga cca gca tat gac ccg gaa ata gag cca 48

Met Pro Ser Asn Leu Pro Arg Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ile Glu Pro

1 5 10 15

ttc ctc tct atg gtc cca tta cca cca aca atc aat gcg gat atc atg 96

Phe Leu Ser Met Val Pro Leu Pro Pro Thr Ile Asn Ala Asp Ile Met

20 25 30

aga gaa ctg cgt aaa gcg cct cta ctc agt caa gcg cct gac ctc gac 144

Arg Glu Leu Arg Lys Ala Pro Leu Leu Ser Gln Ala Pro Asp Leu Asp

35 40 45

gca tta ctt tcc ggc aaa cca ata act cac cgc gaa gtc agc att cca 192

Ala Leu Leu Ser Gly Lys Pro Ile Thr His Arg Glu Val Ser Ile Pro

50 55 60

ggt ctc aat tct tca gat cca caa atc acg ttg tcg ata ttc tcc agt 240

Gly Leu Asn Ser Ser Asp Pro Gln Ile Thr Leu Ser Ile Phe Ser Ser

65 70 75 80

aca ttg acg agc ggt cca aaa cca tgt att tat ttc gtt cat ggt ggc 288

Thr Leu Thr Ser Gly Pro Lys Pro Cys Ile Tyr Phe Val His Gly Gly

85 90 95

ggt atg atc atc gga tgt cga ttc gtg ggt att gag gat tat ctt cag 336

Gly Met Ile Ile Gly Cys Arg Phe Val Gly Ile Glu Asp Tyr Leu Gln

100 105 110

tac gtc gag cag aat gac gct gtc gtc gtg gct gtg gaa tat cgt ctt 384

Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ala Val Val Val Ala Val Glu Tyr Arg Leu

115 120 125

gcg ccg gaa aat cca gat cca gcg cct gtc aat gat tgt tac gct gga 432

Ala Pro Glu Asn Pro Asp Pro Ala Pro Val Asn Asp Cys Tyr Ala Gly

130 135 140

ctt cta tgg acc gca gca aat gct gca gaa ctg ggc att gat ctg gag 480

Leu Leu Trp Thr Ala Ala Asn Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Leu Glu

145 150 155 160

aga ctg ttg atc tgt ggc gct tct gcc ggt ggt ggt ctt tct gct gga 528

Arg Leu Leu Ile Cys Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ser Ala Gly

165 170 175

gtg gct ttg atg gcg cga gac aag aaa ggt ccg aaa ctg gta gga caa 576

Val Ala Leu Met Ala Arg Asp Lys Lys Gly Pro Lys Leu Val Gly Gln

180 185 190

ttg tta tgt tat ccg atg ctc gac gat agg aat gat tcc ctt tca agt 624

Leu Leu Cys Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser

195 200 205

cag cag tac gtc gat gaa ggt gtt tgg agt cgt ggt agc aat gca ttc 672

Gln Gln Tyr Val Asp Glu Gly Val Trp Ser Arg Gly Ser Asn Ala Phe

210 215 220

ggg tgg aag caa ttg ctt gga gac agg gca ggc aaa gaa ggt gtc agc 720

Gly Trp Lys Gln Leu Leu Gly Asp Arg Ala Gly Lys Glu Gly Val Ser

225 230 235 240

atc tat gct gca ccg gcg agg gca act gat ttg agc gga ctg ccg aac 768

Ile Tyr Ala Ala Pro Ala Arg Ala Thr Asp Leu Ser Gly Leu Pro Asn

245 250 255

act ttc atc gac gtt ggc agc gct gaa gtc ttc agg gat gag gac atc 816

Thr Phe Ile Asp Val Gly Ser Ala Glu Val Phe Arg Asp Glu Asp Ile

260 265 270

gct tat gcc tcg agg tta tgg gct gtc ggt gtc caa gca gaa ctt cat 864

Ala Tyr Ala Ser Arg Leu Trp Ala Val Gly Val Gln Ala Glu Leu His

275 280 285

gtg tgg ccg ggt gga tat cat gct gcg gaa aac atg gca ccg ggg act 912

Val Trp Pro Gly Gly Tyr His Ala Ala Glu Asn Met Ala Pro Gly Thr

290 295 300

gac tac tct aac aag gtg aaa gct gcc cgc ttg gca tgg atg aag aga 960

Asp Tyr Ser Asn Lys Val Lys Ala Ala Arg Leu Ala Trp Met Lys Arg

305 310 315 320

gtc ttc atg aaa gcc cca aag tcg acg aca gag tcg tta cct gct cca 1008

Val Phe Met Lys Ala Pro Lys Ser Thr Thr Glu Ser Leu Pro Ala Pro

325 330 335

aca gtg gat gaa gct gtt ggc aca ata tga 1038

Thr Val Asp Glu Ala Val Gly Thr Ile

340 345

<210> 28

<211> 345

<212> PRT

<213> 罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25- EST_wt

<400> 28

Met Pro Ser Asn Leu Pro Arg Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ile Glu Pro

1 5 10 15

Phe Leu Ser Met Val Pro Leu Pro Pro Thr Ile Asn Ala Asp Ile Met

20 25 30

Arg Glu Leu Arg Lys Ala Pro Leu Leu Ser Gln Ala Pro Asp Leu Asp

35 40 45

Ala Leu Leu Ser Gly Lys Pro Ile Thr His Arg Glu Val Ser Ile Pro

50 55 60

Gly Leu Asn Ser Ser Asp Pro Gln Ile Thr Leu Ser Ile Phe Ser Ser

65 70 75 80

Thr Leu Thr Ser Gly Pro Lys Pro Cys Ile Tyr Phe Val His Gly Gly

85 90 95

Gly Met Ile Ile Gly Cys Arg Phe Val Gly Ile Glu Asp Tyr Leu Gln

100 105 110

Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ala Val Val Val Ala Val Glu Tyr Arg Leu

115 120 125

Ala Pro Glu Asn Pro Asp Pro Ala Pro Val Asn Asp Cys Tyr Ala Gly

130 135 140

Leu Leu Trp Thr Ala Ala Asn Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Leu Glu

145 150 155 160

Arg Leu Leu Ile Cys Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ser Ala Gly

165 170 175

Val Ala Leu Met Ala Arg Asp Lys Lys Gly Pro Lys Leu Val Gly Gln

180 185 190

Leu Leu Cys Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser

195 200 205

Gln Gln Tyr Val Asp Glu Gly Val Trp Ser Arg Gly Ser Asn Ala Phe

210 215 220

Gly Trp Lys Gln Leu Leu Gly Asp Arg Ala Gly Lys Glu Gly Val Ser

225 230 235 240

Ile Tyr Ala Ala Pro Ala Arg Ala Thr Asp Leu Ser Gly Leu Pro Asn

245 250 255

Thr Phe Ile Asp Val Gly Ser Ala Glu Val Phe Arg Asp Glu Asp Ile

260 265 270

Ala Tyr Ala Ser Arg Leu Trp Ala Val Gly Val Gln Ala Glu Leu His

275 280 285

Val Trp Pro Gly Gly Tyr His Ala Ala Glu Asn Met Ala Pro Gly Thr

290 295 300

Asp Tyr Ser Asn Lys Val Lys Ala Ala Arg Leu Ala Trp Met Lys Arg

305 310 315 320

Val Phe Met Lys Ala Pro Lys Ser Thr Thr Glu Ser Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Thr Val Asp Glu Ala Val Gly Thr Ile

340 345

<210> 29

<211> 1038

<212> DNA

<213> 罗伦氏蝶形担孢酵母(Papiliotrema laurentii)_SCH25- EST_大肠杆菌，经优化的

<400> 29

atgccaagca acttgccgcg cccagcctac gatccggaaa ttgagccttt tctgtctatg 60

gtcccgctgc cgccgaccat caacgcggac attatgcgtg agctgcgtaa agccccgctg 120

ctgagccagg caccggacct cgacgcactg ctgagcggca agccgatcac tcaccgtgaa 180

gtcagcattc cgggtctgaa cagcagcgac ccgcaaatca ccctgagcat tttctccagc 240

acgttgacca gcggtccgaa accgtgcatc tattttgtgc acggtggcgg tatgattatt 300

ggttgtcgct tcgtcggcat tgaagattat ctgcaatatg ttgagcaaaa tgacgcggtg 360

gttgtggcgg ttgagtatcg tctggcccct gaaaatccgg acccggcacc ggttaatgat 420

tgctacgcgg gtctgctgtg gaccgcagcg aacgcagcgg agctgggtat cgatttggaa 480

cgcctgctga tctgtggcgc gagcgctggc ggtggtctga gcgcgggtgt ggcgctgatg 540

gctcgcgaca aaaagggtcc aaaactggtc ggtcagctgt tgtgctaccc gatgctggac 600

gatcgtaacg acagcttgag ctctcaacag tacgtcgatg agggtgtttg gagccgtggc 660

agcaatgctt tcggctggaa acagctgctg ggcgatcgtg cgggtaagga aggcgtgtcg 720

atctatgccg ctccggcacg cgcaaccgat ctgtctggcc tgccgaacac gttcatcgat 780

gtcggtagcg ctgaggtgtt tcgtgacgaa gatatcgcgt acgcctcacg tctgtgggcc 840

gtcggtgtgc aggccgagct gcatgtttgg ccgggtggct accatgcagc cgagaatatg 900

gcgcctggca ccgactactc caataaagtg aaggcagcgc gcctggcgtg gatgaagcgt 960

gtgtttatga aagcgccgaa gtccacgacc gagagcctgc cggcaccgac cgttgacgaa 1020

gcggttggta cgatttaa 1038

<210> 30

<211> 1038

<212> DNA

<213> 纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46- EST_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1038)

<400> 30

atg cct tcc aat ctc cct cga cca gca tat gac ccg gaa ata gag cca 48

Met Pro Ser Asn Leu Pro Arg Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ile Glu Pro

1 5 10 15

ttc ctc tct atg gtc cca tta cca cca aca atc aat gcg gat atc atg 96

Phe Leu Ser Met Val Pro Leu Pro Pro Thr Ile Asn Ala Asp Ile Met

20 25 30

aga gaa ctg cgt aaa gca cct cta ctc agt caa gcg cct gac ctc gac 144

Arg Glu Leu Arg Lys Ala Pro Leu Leu Ser Gln Ala Pro Asp Leu Asp

35 40 45

gca tta ctt tcc ggc aga ccg ata act cac cgc gaa gtc agc att cca 192

Ala Leu Leu Ser Gly Arg Pro Ile Thr His Arg Glu Val Ser Ile Pro

50 55 60

ggt ctc aat tcc cag gat cca caa atc acg ttg tca ata ttc tcc agt 240

Gly Leu Asn Ser Gln Asp Pro Gln Ile Thr Leu Ser Ile Phe Ser Ser

65 70 75 80

aca ttg acg agc ggt cca aaa cca tgt att tat ttc gtt cat ggt ggc 288

Thr Leu Thr Ser Gly Pro Lys Pro Cys Ile Tyr Phe Val His Gly Gly

85 90 95

ggt atg atc atc gga tgt cga ttc gtg ggt att gag gat tat ctt caa 336

Gly Met Ile Ile Gly Cys Arg Phe Val Gly Ile Glu Asp Tyr Leu Gln

100 105 110

tac gtc gag cag aac gac gct gtc gtt gtg gct gtg gaa tat cgt ctt 384

Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ala Val Val Val Ala Val Glu Tyr Arg Leu

115 120 125

gct ccg gaa aac ccg gac cca gcg cct gtt aat gat tgt tac gcc gga 432

Ala Pro Glu Asn Pro Asp Pro Ala Pro Val Asn Asp Cys Tyr Ala Gly

130 135 140

ctt tta tgg acc gca gcg aat gct gca gag cta ggc atc gat ctg gag 480

Leu Leu Trp Thr Ala Ala Asn Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Leu Glu

145 150 155 160

aga ctg ttg atc tgt ggc gct tct gcc ggt ggt ggt ctt tct gct gga 528

Arg Leu Leu Ile Cys Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ser Ala Gly

165 170 175

gtg gca ttg atg gca cga gac aag aaa ggt cca aaa ttg gta gga caa 576

Val Ala Leu Met Ala Arg Asp Lys Lys Gly Pro Lys Leu Val Gly Gln

180 185 190

ttg tta tgc tat cca atg ctc gac gat agg aat gat tca ctc tca agt 624

Leu Leu Cys Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser

195 200 205

cag cag tac gtg gat gaa ggt gtt tgg agt cgt ggt agc aat gca ttt 672

Gln Gln Tyr Val Asp Glu Gly Val Trp Ser Arg Gly Ser Asn Ala Phe

210 215 220

ggc tgg aag caa ttg ctt gga gac agg gcg ggc aaa gag gga gtc agt 720

Gly Trp Lys Gln Leu Leu Gly Asp Arg Ala Gly Lys Glu Gly Val Ser

225 230 235 240

att tat gct gcg ccg gca aga gca act gat ttg agc gga ctg ccg aac 768

Ile Tyr Ala Ala Pro Ala Arg Ala Thr Asp Leu Ser Gly Leu Pro Asn

245 250 255

act ttc atc gac gtt ggc agc gct gag gtc ttc agg gat gag gac atc 816

Thr Phe Ile Asp Val Gly Ser Ala Glu Val Phe Arg Asp Glu Asp Ile

260 265 270

gct tat gcc tcg agg tta tgg gct gtc ggt gtc caa gca gaa ctt cat 864

Ala Tyr Ala Ser Arg Leu Trp Ala Val Gly Val Gln Ala Glu Leu His

275 280 285

gtg tgg ccc ggt gga tat cat gct gcg gag aac atg gca ccg ggg act 912

Val Trp Pro Gly Gly Tyr His Ala Ala Glu Asn Met Ala Pro Gly Thr

290 295 300

gac tac tct aag aag gtg aaa gct gcg cgc ttg gca tgg atg aag aga 960

Asp Tyr Ser Lys Lys Val Lys Ala Ala Arg Leu Ala Trp Met Lys Arg

305 310 315 320

gtc ttc ctg aaa gcc cca aag ccg acg act gag tcg ttg cct gct cca 1008

Val Phe Leu Lys Ala Pro Lys Pro Thr Thr Glu Ser Leu Pro Ala Pro

325 330 335

aca gtg gat gaa gct gtt ggc aca ata tga 1038

Thr Val Asp Glu Ala Val Gly Thr Ile

340 345

<210> 31

<211> 345

<212> PRT

<213> 纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46- EST_wt

<400> 31

Met Pro Ser Asn Leu Pro Arg Pro Ala Tyr Asp Pro Glu Ile Glu Pro

1 5 10 15

Phe Leu Ser Met Val Pro Leu Pro Pro Thr Ile Asn Ala Asp Ile Met

20 25 30

Arg Glu Leu Arg Lys Ala Pro Leu Leu Ser Gln Ala Pro Asp Leu Asp

35 40 45

Ala Leu Leu Ser Gly Arg Pro Ile Thr His Arg Glu Val Ser Ile Pro

50 55 60

Gly Leu Asn Ser Gln Asp Pro Gln Ile Thr Leu Ser Ile Phe Ser Ser

65 70 75 80

Thr Leu Thr Ser Gly Pro Lys Pro Cys Ile Tyr Phe Val His Gly Gly

85 90 95

Gly Met Ile Ile Gly Cys Arg Phe Val Gly Ile Glu Asp Tyr Leu Gln

100 105 110

Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ala Val Val Val Ala Val Glu Tyr Arg Leu

115 120 125

Ala Pro Glu Asn Pro Asp Pro Ala Pro Val Asn Asp Cys Tyr Ala Gly

130 135 140

Leu Leu Trp Thr Ala Ala Asn Ala Ala Glu Leu Gly Ile Asp Leu Glu

145 150 155 160

Arg Leu Leu Ile Cys Gly Ala Ser Ala Gly Gly Gly Leu Ser Ala Gly

165 170 175

Val Ala Leu Met Ala Arg Asp Lys Lys Gly Pro Lys Leu Val Gly Gln

180 185 190

Leu Leu Cys Tyr Pro Met Leu Asp Asp Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser

195 200 205

Gln Gln Tyr Val Asp Glu Gly Val Trp Ser Arg Gly Ser Asn Ala Phe

210 215 220

Gly Trp Lys Gln Leu Leu Gly Asp Arg Ala Gly Lys Glu Gly Val Ser

225 230 235 240

Ile Tyr Ala Ala Pro Ala Arg Ala Thr Asp Leu Ser Gly Leu Pro Asn

245 250 255

Thr Phe Ile Asp Val Gly Ser Ala Glu Val Phe Arg Asp Glu Asp Ile

260 265 270

Ala Tyr Ala Ser Arg Leu Trp Ala Val Gly Val Gln Ala Glu Leu His

275 280 285

Val Trp Pro Gly Gly Tyr His Ala Ala Glu Asn Met Ala Pro Gly Thr

290 295 300

Asp Tyr Ser Lys Lys Val Lys Ala Ala Arg Leu Ala Trp Met Lys Arg

305 310 315 320

Val Phe Leu Lys Ala Pro Lys Pro Thr Thr Glu Ser Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Thr Val Asp Glu Ala Val Gly Thr Ile

340 345

<210> 32

<211> 1038

<212> DNA

<213> 纤细本森顿酵母(Bensingtonia ciliata)_SCH46- EST_大肠杆菌，经优化的

<400> 32

atgccatcga atctgccgcg tccagcctac gaccctgaaa ttgaaccttt cttgagcatg 60

gtgccgctgc cgccgacgat taacgctgat atcatgcgtg agctgcgcaa ggcaccgctg 120

ctgagccaag cgccggacct ggatgcgctg ttgagcggtc gcccgatcac ccaccgcgaa 180

gtcagcatcc cgggtctgaa ctctcaggac ccgcagatca ccttgtcaat ctttagcagc 240

accttgactt ccggtccgaa gccgtgcatt tattttgtcc acggtggtgg catgattatc 300

ggctgtcgtt tcgttggtat tgaagattac ttacaatatg tggaacaaaa tgatgcagtg 360

gttgtggcag tggagtaccg cctggcgcct gagaacccgg acccagcgcc ggtgaacgac 420

tgctacgcgg gtctgttgtg gacggcagct aacgcagcag agctgggtat cgatctggag 480

cgcctgctga tctgcggtgc gagcgcgggt ggcggcctgt ccgctggcgt tgcgctgatg 540

gcccgtgaca aaaagggtcc gaaactggtt ggccagctgc tgtgttatcc gatgctggac 600

gaccgtaatg acagcctgag cagccagcaa tacgtggatg agggcgtctg gagccgtggt 660

agcaatgcgt tcggttggaa gcaactgctg ggcgatcgtg ccggcaaaga gggcgttagc 720

atctatgcgg caccggcgcg tgccacggat ctgtctggtc tgccgaacac cttcattgac 780

gttggtagcg ctgaagtttt tcgcgatgaa gatattgcgt acgcgagccg tctgtgggca 840

gtcggcgtcc aggcagagct ccatgtctgg ccgggtggct atcatgcggc cgagaatatg 900

gcaccgggta cggactacag caaaaaagtt aaagctgcgc gtctggcctg gatgaagcgt 960

gttttcctga aagcgccgaa gccgaccacc gagtccctgc cggcaccgac cgtggatgaa 1020

gccgtgggca ccatttaa 1038

<210> 33

<211> 474

<212> DNA

<213> 红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(474)

<400> 33

atg aat ctc aac gaa gcc cga act gct ttc gcc cgg ctc cgt gca gcg 48

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

gaa aat ggt tta tca cca gca gaa ctc gac gaa gtg tgg gcc gcg ctg 96

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

gaa acc gtc gcc gct gaa gaa atc ctc ggt gag tgg aaa ggt gac gac 144

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

ttc gcc acc ggt cat cgt ctg cac gaa aag ctg tcc gcg agc cgc tgg 192

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

tac ggc aag act ttc aat tcc gtc gag gat gcc aag ccg ttg atc tgc 240

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

cga gac gaa gac gga aat ctc tat tcc gac gtc aag agc ggc aat ggc 288

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

gag gca agt ctg tgg aac atc gag ttt cgt ggt gaa gtg acc gcg acc 336

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

atg gtc tac gac ggc gcg ccg att ttc gac cac ttc aag aaa gtc gac 384

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

gat tcg acg ctc atg ggc atc atg aac gga aag tcg gcg ttg gtc ctc 432

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

gac ggc ggg cag cac tac tac ttc ctg ctc gag cga gcg tga 474

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 34

<211> 157

<212> PRT

<213> 红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_wt

<400> 34

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 35

<211> 474

<212> DNA

<213> 红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_大肠杆菌，经优化的

<400> 35

atgaacttaa atgaagcgcg taccgcattt gcacgtctga gagctgccga gaacggtctg 60

agcccggctg agctggatga agtgtgggca gcgctggaga ctgtggcggc tgaagaaatc 120

ctgggtgagt ggaagggtga cgattttgcg acgggtcacc gtctgcacga gaaactgtcg 180

gcgagccgct ggtatggtaa gaccttcaac tctgttgaag atgcaaagcc gctgatttgc 240

cgtgacgaag atggcaatct gtactccgat gtcaagagcg gtaacggtga ggccagcctg 300

tggaatatcg agtttcgcgg cgaagtcacc gcgacgatgg tttacgatgg tgccccgatc 360

ttcgaccatt tcaaaaaagt tgacgacagc accctgatgg gcattatgaa tggcaaaagc 420

gcgttggtgt tggacggtgg ccagcattac tatttcctgc tggagcgtgc gtaa 474

<210> 36

<211> 474

<212> DNA

<213> 红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)_SCH94-3944_酵母，经优化的

<400> 36

atgaacttgg acgaagctag aactgctttc gctagattga gagctgctga atctggtgtt 60

tctccagctg aattggacga agtttgggct gctttggaaa ctgttgctgc tgaagaaatc 120

ttgggtgaat ggaagggtga cgacttcgct actggtcaca gattgcacga aaagttgttc 180

gcttctagat ggtacggtaa gactttcaac tctgttgaag acgctaagcc attgatctgt 240

agagacgaag acggtaactt gtactctgac gttaagtctg gtaacggtga agcttctttg 300

tggaacatcg aattcagagg tgaagttact gctactatgg tttacgacgg tgctccaatc 360

ttcgaccact tcaagaaggt tgacgactct actttgatgg gtatcatgaa cggtaagtct 420

gctttggttt tggacggtgg tcaacactac tacttcttgt tggaaagagc ttaa 474

<210> 37

<211> 474

<212> DNA

<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(474)

<400> 37

atg aat ctc gac gaa gcc cga act gct ttc gcc cgg ctc cgt gct gcg 48

Met Asn Leu Asp Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

gaa agt ggt gta tca cca gca gaa ctc gac gaa gtg tgg gcc gcg ctg 96

Glu Ser Gly Val Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

gaa acc gtc gcc gcc gaa gaa atc ctc ggc gag tgg aag ggt gac gac 144

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

ttc gcc acc ggt cac cgt ctt cac gaa aag ctg ttc gcg agc cgt tgg 192

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Phe Ala Ser Arg Trp

50 55 60

tac ggc aag acc ttc aac tcg gtc gag gac gcc aag ccg ttg atc tgc 240

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

cga gac gaa gac ggc aac ctc tac tcc gac gtc aag agc ggc aat ggc 288

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

gag gca agt ctg tgg aac atc gag ttt cgt ggc gaa gtc acg gcg acg 336

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

atg gtc tac gac ggc gcg ccg atc ttc gac cac ttc aag aag gtc gac 384

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

gat tcg acg ctc atg ggc atc atg aac gga aaa tcg gcg ttg gtt ctc 432

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

gac ggc gga cag cac tac tac ttc ctg ctc gag cga gcg tga 474

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 38

<211> 157

<212> PRT

<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_wt

<400> 38

Met Asn Leu Asp Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Ser Gly Val Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Phe Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 39

<211> 474

<212> DNA

<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_大肠杆菌，经优化的

<400> 39

atgaatctgg acgaagcccg tactgctttc gcccgtctgc gcgctgctga atctggtgtt 60

agcccggcag agctggacga agtgtgggca gcgctggaaa ccgttgcggc ggaagaaatt 120

ctgggtgagt ggaagggcga tgacttcgca acgggccatc gcttgcacga gaaattgttc 180

gcgagccgct ggtatggtaa gacctttaac agcgtcgaag atgcgaaacc gctgatctgc 240

cgtgatgaag atggcaacct gtacagcgac gtcaagagcg gtaatggtga ggccagcctg 300

tggaatatcg agtttcgtgg cgaagtgacc gcgacgatgg tgtacgacgg tgcaccgatt 360

tttgatcatt tcaaaaaagt cgatgacagc accctgatgg gcatcatgaa cggtaagtcc 420

gcgctggttc tggacggtgg ccagcactat tactttctgc tggagcgtgc gtaa 474

<210> 40

<211> 474

<212> DNA

<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05241_酵母，经优化的

<400> 40

atgaacttga acgaagctag aactgctttc gctagattga gagctgctga aaacggtttg 60

tctccagctg aattggacga agtttgggct gctttggaaa ctgttgctgc tgaagaaatc 120

ttgggtgaat ggaagggtga cgacttcgct actggtcaca gattgcacga aaagttgtct 180

gcttctagat ggtacggtaa gactttcaac tctgttgaag acgctaagcc attgatctgt 240

agagacgaag acggtaactt gtactctgac gttaagtctg gtaacggtga agcttctttg 300

tggaacatcg aattcagagg tgaagttact gctactatgg tttacgacgg tgctccaatc 360

ttcgaccact tcaagaaggt tgacgactct actttgatgg gtatcatgaa cggtaagtct 420

gctttggttt tggacggtgg tcaacactac tacttcttgt tggaaagagc ttaa 474

<210> 41

<211> 453

<212> DNA

<213> 指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_wt (XM_014678330.1)

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(453)

<400> 41

atg tcc aca agc acc cca cag gat cag ttt gct gcc cta gtt gca aaa 48

Met Ser Thr Ser Thr Pro Gln Asp Gln Phe Ala Ala Leu Val Ala Lys

1 5 10 15

aac agc aag ttg aat gaa acc gac atc gag gct gtt tat aac aag ctt 96

Asn Ser Lys Leu Asn Glu Thr Asp Ile Glu Ala Val Tyr Asn Lys Leu

20 25 30

tca gct ctt ccc gtc gat ttc ctc cgt gga gaa tgg aag ggt gga agc 144

Ser Ala Leu Pro Val Asp Phe Leu Arg Gly Glu Trp Lys Gly Gly Ser

35 40 45

ttc gac acc ggc cac cca ggc cac acc cag ctt ttg gct atg aac tgg 192

Phe Asp Thr Gly His Pro Gly His Thr Gln Leu Leu Ala Met Asn Trp

50 55 60

gtt gga aag acg ttc cac gat acc gag cgc gtc gac cct att gtt gtg 240

Val Gly Lys Thr Phe His Asp Thr Glu Arg Val Asp Pro Ile Val Val

65 70 75 80

tta aag gat gga aag cgt gta tgc gat gag aac tgg ggc cat gct atc 288

Leu Lys Asp Gly Lys Arg Val Cys Asp Glu Asn Trp Gly His Ala Ile

85 90 95

gtc cgt gag gtt cgt ttc cgt ggt att gtg tca acc gct atg atc tat 336

Val Arg Glu Val Arg Phe Arg Gly Ile Val Ser Thr Ala Met Ile Tyr

100 105 110

gac aag cac cct atc att gat cac ttc cgc tat gtt aat gag aac ctc 384

Asp Lys His Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Tyr Val Asn Glu Asn Leu

115 120 125

gtt gct ggc gcc atg gac act agc tcc ttc ggt gac gtt ggt acc tac 432

Val Ala Gly Ala Met Asp Thr Ser Ser Phe Gly Asp Val Gly Thr Tyr

130 135 140

tac ttc tac cta tac aaa tag 453

Tyr Phe Tyr Leu Tyr Lys

145 150

<210> 42

<211> 150

<212> PRT

<213> 指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_wt (XM_014678330.1)

<400> 42

Met Ser Thr Ser Thr Pro Gln Asp Gln Phe Ala Ala Leu Val Ala Lys

1 5 10 15

Asn Ser Lys Leu Asn Glu Thr Asp Ile Glu Ala Val Tyr Asn Lys Leu

20 25 30

Ser Ala Leu Pro Val Asp Phe Leu Arg Gly Glu Trp Lys Gly Gly Ser

35 40 45

Phe Asp Thr Gly His Pro Gly His Thr Gln Leu Leu Ala Met Asn Trp

50 55 60

Val Gly Lys Thr Phe His Asp Thr Glu Arg Val Asp Pro Ile Val Val

65 70 75 80

Leu Lys Asp Gly Lys Arg Val Cys Asp Glu Asn Trp Gly His Ala Ile

85 90 95

Val Arg Glu Val Arg Phe Arg Gly Ile Val Ser Thr Ala Met Ile Tyr

100 105 110

Asp Lys His Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Tyr Val Asn Glu Asn Leu

115 120 125

Val Ala Gly Ala Met Asp Thr Ser Ser Phe Gly Asp Val Gly Thr Tyr

130 135 140

Tyr Phe Tyr Leu Tyr Lys

145 150

<210> 43

<211> 453

<212> DNA

<213> 指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_大肠杆菌，经优化的

<400> 43

atgtccacta gcaccccaca agatcaattt gccgcactgg ttgccaaaaa ctctaaactg 60

aatgaaaccg acattgaagc tgtctataac aagttgagcg cgttgccggt ggatttcctg 120

cgtggcgagt ggaagggcgg cagcttcgac accggtcacc cgggtcacac gcagctgctg 180

gcaatgaatt gggtcggtaa gacctttcat gataccgagc gtgtggaccc gatcgtcgtt 240

ctgaaggacg gtaaacgtgt gtgcgacgag aattggggtc acgcgatcgt tcgcgaagtt 300

cgcttccgtg gtatcgtgag caccgcgatg atctatgata aacacccgat tattgatcat 360

ttccgctatg ttaacgaaaa cctggtcgcg ggtgcgatgg atacgtcgag ctttggcgac 420

gtgggcacgt actactttta cctgtacaaa taa 453

<210> 44

<211> 453

<212> DNA

<213> 指状青霉(Penicillium digitatum)_Pdigit7033_酵母，经优化的

<400> 44

atgtctactt ctactccaca agaccaattc gctgctttgg ttgctaagaa ctctaagttg 60

aacgaaactg acatcgaagc tgtttacaac aagttgtctg ctttgccagt tgacttcttg 120

agaggtgaat ggaagggtgg ttctttcgac actggtcacc caggtcacac tcaattgttg 180

gctatgaact gggttggtaa gactttccac gacactgaaa gagttgaccc aatcgttgtt 240

ttgaaggacg gtaagagagt ttgtgacgaa aactggggtc acgctatcgt tagagaagtt 300

agattcagag gtatcgtttc tactgctatg atctacgaca agcacccaat catcgaccac 360

ttcagatacg ttaacgaaaa cttggttgct ggtgctatgg acacttcttc tttcggtgac 420

gttggtactt actacttcta cttgtacaag taa 453

<210> 45

<211> 453

<212> DNA

<213> 意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF3443-1_wt (JQGA01001114.171518-72084 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(453)

<400> 45

atg tcg gcc agt gac ccc aag gac cag ttt gct gcc cta gtt gcc aag 48

Met Ser Ala Ser Asp Pro Lys Asp Gln Phe Ala Ala Leu Val Ala Lys

1 5 10 15

gac ggc aag ttg aat gaa gac gaa atc gag gct gtt tac aac aag ctt 96

Asp Gly Lys Leu Asn Glu Asp Glu Ile Glu Ala Val Tyr Asn Lys Leu

20 25 30

cct gct ctt ccc ctc gat ttc ctc cgt gga gaa tgg aag ggt gga agc 144

Pro Ala Leu Pro Leu Asp Phe Leu Arg Gly Glu Trp Lys Gly Gly Ser

35 40 45

ttc gac acc ggt cac cct ggt cac acc caa ctc ttg gca atg aaa tgg 192

Phe Asp Thr Gly His Pro Gly His Thr Gln Leu Leu Ala Met Lys Trp

50 55 60

gtt ggg aag aca ttc cat tcc acc gaa cgg gtt gac cct att gtt gtg 240

Val Gly Lys Thr Phe His Ser Thr Glu Arg Val Asp Pro Ile Val Val

65 70 75 80

tta aag gat gaa aag cgt gta tgc aat gag gac tgg ggc cat gca gtc 288

Leu Lys Asp Glu Lys Arg Val Cys Asn Glu Asp Trp Gly His Ala Val

85 90 95

ctc cgt gag att cgt ttc cgt ggt att gtg tca tct gct atg atc tat 336

Leu Arg Glu Ile Arg Phe Arg Gly Ile Val Ser Ser Ala Met Ile Tyr

100 105 110

gac aag cac cct atc atc gac cac ttc cgc tat gtc aac gac aag ctc 384

Asp Lys His Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Tyr Val Asn Asp Lys Leu

115 120 125

att gct ggc gcc atg gac act agc agc ttc ggt gac gtt ggc acc tac 432

Ile Ala Gly Ala Met Asp Thr Ser Ser Phe Gly Asp Val Gly Thr Tyr

130 135 140

tac ttc tac ctg tgc aaa tag 453

Tyr Phe Tyr Leu Cys Lys

145 150

<210> 46

<211> 150

<212> PRT

<400> 46

Met Ser Ala Ser Asp Pro Lys Asp Gln Phe Ala Ala Leu Val Ala Lys

1 5 10 15

Asp Gly Lys Leu Asn Glu Asp Glu Ile Glu Ala Val Tyr Asn Lys Leu

20 25 30

Pro Ala Leu Pro Leu Asp Phe Leu Arg Gly Glu Trp Lys Gly Gly Ser

35 40 45

Phe Asp Thr Gly His Pro Gly His Thr Gln Leu Leu Ala Met Lys Trp

50 55 60

Val Gly Lys Thr Phe His Ser Thr Glu Arg Val Asp Pro Ile Val Val

65 70 75 80

Leu Lys Asp Glu Lys Arg Val Cys Asn Glu Asp Trp Gly His Ala Val

85 90 95

Leu Arg Glu Ile Arg Phe Arg Gly Ile Val Ser Ser Ala Met Ile Tyr

100 105 110

Asp Lys His Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Tyr Val Asn Asp Lys Leu

115 120 125

Ile Ala Gly Ala Met Asp Thr Ser Ser Phe Gly Asp Val Gly Thr Tyr

130 135 140

Tyr Phe Tyr Leu Cys Lys

145 150

<210> 47

<211> 453

<212> DNA

<213> 意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF3443-1_大肠杆菌，经优化的

<400> 47

atgagcgctt cggacccaaa agatcaattc gcagcattgg tggcaaagga cggtaaactg 60

aacgaagatg aaatcgaagc cgtctataac aagctgcctg cgctgccgct ggacttcttg 120

cgtggtgagt ggaagggcgg cagctttgat accggtcatc cgggccacac tcagctgctg 180

gcgatgaaat gggtgggtaa aacctttcac agcaccgagc gcgtggaccc gatcgtcgtt 240

ctgaaagatg agaagcgtgt ctgtaatgaa gattggggtc acgccgtgct gcgcgagatt 300

cgttttcgcg gtatcgtttc tagcgcgatg atttatgaca agcatccgat tattgaccac 360

ttccgttacg ttaatgacaa gctgatcgcg ggtgcgatgg atacgtccag ctttggcgac 420

gttggcacgt actatttcta cctgtgcaaa taa 453

<210> 48

<211> 468

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF3443_wt (LJSE01000065.1(263404至263924))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(468)

<400> 48

atg agc tgt tgc acc gcc gag gac cag gcc aaa cgg ctc ttc gaa gcg 48

Met Ser Cys Cys Thr Ala Glu Asp Gln Ala Lys Arg Leu Phe Glu Ala

1 5 10 15

acc agc ccc gtc caa cca tca gca gtc gaa gaa ctc ttc aac caa ctc 96

Thr Ser Pro Val Gln Pro Ser Ala Val Glu Glu Leu Phe Asn Gln Leu

20 25 30

caa ccg ata aag ccc tca ttc ctg att ggc gaa tgg gac gga aat agc 144

Gln Pro Ile Lys Pro Ser Phe Leu Ile Gly Glu Trp Asp Gly Asn Ser

35 40 45

ctg gac acc ggc cat ccc ggt ctc aag ctg ctc cag gcg atg cgg tgg 192

Leu Asp Thr Gly His Pro Gly Leu Lys Leu Leu Gln Ala Met Arg Trp

50 55 60

gcg ggt aag aca ttt cga tcc gtg gat gac gcc gat ccg att gtg acg 240

Ala Gly Lys Thr Phe Arg Ser Val Asp Asp Ala Asp Pro Ile Val Thr

65 70 75 80

ctg gac gat gct ggc aat cgc atc tgg aaa gag gag tac ggt aat gct 288

Leu Asp Asp Ala Gly Asn Arg Ile Trp Lys Glu Glu Tyr Gly Asn Ala

85 90 95

gtg gta cga gaa atg gcg ttt cgc gga gtc gtt tcg gcg gcg atg atc 336

Val Val Arg Glu Met Ala Phe Arg Gly Val Val Ser Ala Ala Met Ile

100 105 110

tac gac acc aag ccc atc atg gac cat ttt cga tac gtg gac gaa aag 384

Tyr Asp Thr Lys Pro Ile Met Asp His Phe Arg Tyr Val Asp Glu Lys

115 120 125

aca gtg ctg ggt gtg atg gaa acc ccc aag cag gct gga agc gga acc 432

Thr Val Leu Gly Val Met Glu Thr Pro Lys Gln Ala Gly Ser Gly Thr

130 135 140

ttt tat ttc tat ctg cag cgt cgt gct tct gtc taa 468

Phe Tyr Phe Tyr Leu Gln Arg Arg Ala Ser Val

145 150 155

<210> 49

<211> 155

<212> PRT

<400> 49

Met Ser Cys Cys Thr Ala Glu Asp Gln Ala Lys Arg Leu Phe Glu Ala

1 5 10 15

Thr Ser Pro Val Gln Pro Ser Ala Val Glu Glu Leu Phe Asn Gln Leu

20 25 30

Gln Pro Ile Lys Pro Ser Phe Leu Ile Gly Glu Trp Asp Gly Asn Ser

35 40 45

Leu Asp Thr Gly His Pro Gly Leu Lys Leu Leu Gln Ala Met Arg Trp

50 55 60

Ala Gly Lys Thr Phe Arg Ser Val Asp Asp Ala Asp Pro Ile Val Thr

65 70 75 80

Leu Asp Asp Ala Gly Asn Arg Ile Trp Lys Glu Glu Tyr Gly Asn Ala

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Val Val Arg Glu Met Ala Phe Arg Gly Val Val Ser Ala Ala Met Ile

100 105 110

Tyr Asp Thr Lys Pro Ile Met Asp His Phe Arg Tyr Val Asp Glu Lys

115 120 125

Thr Val Leu Gly Val Met Glu Thr Pro Lys Gln Ala Gly Ser Gly Thr

130 135 140

Phe Tyr Phe Tyr Leu Gln Arg Arg Ala Ser Val

145 150 155

<210> 50

<211> 468

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF3443_大肠杆菌，经优化的

<400> 50

atgtcgtgtt gcaccgccga agatcaagcc aaacgtctgt tcgaagccac tagcccggtt 60

caaccgagcg cggtcgaaga actgttcaat cagctgcaac cgattaagcc ttccttcctg 120

atcggtgagt gggatggcaa cagcctggat accggtcatc cgggcttgaa gctgctgcag 180

gcaatgcgct gggcgggtaa gacctttcgt tctgtggatg acgctgaccc aattgttacc 240

ctggacgacg cgggtaatcg tatttggaaa gaggaatacg gtaacgcagt ggttcgcgag 300

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cactttcgct atgttgacga gaaaacggtc ctgggcgtga tggaaacgcc gaaacaggct 420

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<210> 51

<211> 468

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWe DUF3443_酵母，经优化的

<400> 51

atgtcttgtt gtactgctga agaccaagct aagagattgt tcgaagctac ttctccagtt 60

caaccatctg ctgttgaaga attgttcaac caattgcaac caatcaagcc atctttcttg 120

atcggtgaat gggacggtaa ctctttggac actggtcacc caggtttgaa gttgttgcaa 180

gctatgagat gggctggtaa gactttcaga tctgttgacg acgctgaccc aatcgttact 240

ttggacgacg ctggtaacag aatctggaag gaagaatacg gtaacgctgt tgttagagaa 300

atggctttca gaggtgttgt ttctgctgct atgatctacg acactaagcc aatcatggac 360

cacttcagat acgttgacga aaagactgtt ttgggtgtta tggaaactcc aaagcaagct 420

ggttctggta ctttctactt ctacttgcaa agaagagctt ctgtttaa 468

<210> 52

<211> 477

<212> DNA

<213> 霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288_RhoagDUF4334-2_wt (NZ_LWTW01000167.1 18658-19134 (-))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(477)

<400> 52

atg aac gta cga gac gag gtc gcc gcg ctg cgg gcg cgc acc gac cgg 48

Met Asn Val Arg Asp Glu Val Ala Ala Leu Arg Ala Arg Thr Asp Arg

1 5 10 15

atc gat ccg cgg gaa ctc gat tcg atc tgg gac cgc ttg gcc ccg tgt 96

Ile Asp Pro Arg Glu Leu Asp Ser Ile Trp Asp Arg Leu Ala Pro Cys

20 25 30

cgg ccc gtg gat ctg atc ggg tac cgc tgg agg ggt ttc gac ttc gac 144

Arg Pro Val Asp Leu Ile Gly Tyr Arg Trp Arg Gly Phe Asp Phe Asp

35 40 45

acc gga cat cgc acg agt ggg ctc ctc cgt cga gct cat tgg tac ggc 192

Thr Gly His Arg Thr Ser Gly Leu Leu Arg Arg Ala His Trp Tyr Gly

50 55 60

aag gca ttc gcc agc gag tcc gac gtg cag cct ctg ctg tgc cgc agc 240

Lys Ala Phe Ala Ser Glu Ser Asp Val Gln Pro Leu Leu Cys Arg Ser

65 70 75 80

gag gac gga cag ctg ttc tcc gac atc gga acc ggg cac ggc gag gcc 288

Glu Asp Gly Gln Leu Phe Ser Asp Ile Gly Thr Gly His Gly Glu Ala

85 90 95

agc ctg tgg gag gtc gtg ttc cgc ggg gag gtg acc gcg acg atg gtc 336

Ser Leu Trp Glu Val Val Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr Met Val

100 105 110

tac gac ggc atg ccg gtg ttc gac cac ttc aag aag gtc gac gac gac 384

Tyr Asp Gly Met Pro Val Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp Asp Asp

115 120 125

acc gtc atc ggc gtc atg aac ggc aag ggc acg ttg gtg ttc gac ggc 432

Thr Val Ile Gly Val Met Asn Gly Lys Gly Thr Leu Val Phe Asp Gly

130 135 140

ggc gaa cac ttc tgg ttc ggg ctg gag cga gac gtc gca ctc tga 477

Gly Glu His Phe Trp Phe Gly Leu Glu Arg Asp Val Ala Leu

145 150 155

<210> 53

<211> 158

<212> PRT

<400> 53

Met Asn Val Arg Asp Glu Val Ala Ala Leu Arg Ala Arg Thr Asp Arg

1 5 10 15

Ile Asp Pro Arg Glu Leu Asp Ser Ile Trp Asp Arg Leu Ala Pro Cys

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Arg Pro Val Asp Leu Ile Gly Tyr Arg Trp Arg Gly Phe Asp Phe Asp

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Thr Gly His Arg Thr Ser Gly Leu Leu Arg Arg Ala His Trp Tyr Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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Ser Leu Trp Glu Val Val Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr Met Val

100 105 110

Tyr Asp Gly Met Pro Val Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp Asp Asp

115 120 125

Thr Val Ile Gly Val Met Asn Gly Lys Gly Thr Leu Val Phe Asp Gly

130 135 140

Gly Glu His Phe Trp Phe Gly Leu Glu Arg Asp Val Ala Leu

145 150 155

<210> 54

<211> 477

<212> DNA

<213> 霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株PAM2288_RhoagDUF4334-2_大肠杆菌，经优化的

<400> 54

atgaatgttc gtgatgaagt tgcagctctg cgtgcccgta ctgatagaat cgacccgcgt 60

gagctggata gcatttggga ccgtctggca ccatgtcgtc cggtggacct gatcggttac 120

cgttggcgcg gtttcgattt cgacaccggt caccgtacct ccggtctgtt gcgtcgcgcg 180

cattggtatg gtaaggcctt tgcgagcgag agcgacgtgc aaccgttgct gtgccgctct 240

gaggacggcc agctgtttag cgatattggc accggtcacg gtgaggcgag cctgtgggaa 300

gttgtctttc gcggcgaagt gaccgcgacg atggtttacg acggtatgcc ggtgttcgac 360

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gtctttgatg gtggcgagca tttctggttt ggcctggaac gcgatgtcgc gctgtaa 477

<210> 55

<211> 477

<212> DNA

<213> 霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株N128_RhoagDUF4334-3_wt (NZ_LRQY01000021.1 163210-163686 (-))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(477)

<400> 55

atg aac gta cga gac gag gtc gcc gcg ctg cgg gcg cgc acc gac cgg 48

Met Asn Val Arg Asp Glu Val Ala Ala Leu Arg Ala Arg Thr Asp Arg

1 5 10 15

atc gat ccg cgg gaa ctc gat tcg atc tgg gac cgc ttg gcc ccg tgt 96

Ile Asp Pro Arg Glu Leu Asp Ser Ile Trp Asp Arg Leu Ala Pro Cys

20 25 30

cgg ccc gtg gat ctg atc ggg tac cgc tgg agg ggt ttc gac ttc gac 144

Arg Pro Val Asp Leu Ile Gly Tyr Arg Trp Arg Gly Phe Asp Phe Asp

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Thr Gly His Arg Thr Ser Gly Leu Leu Arg Arg Ala His Trp Tyr Gly

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Lys Ala Phe Ala Ser Glu Ser Asp Val Gln Pro Leu Leu Cys Arg Ser

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gac gac gga cag ctg ttc tcc gac atc gga acc ggg cac ggc gag gcc 288

Asp Asp Gly Gln Leu Phe Ser Asp Ile Gly Thr Gly His Gly Glu Ala

85 90 95

agc ctg tgg gag gtc gtg ttc cgc ggg gag gtg acc gcg acg atg gtc 336

Ser Leu Trp Glu Val Val Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr Met Val

100 105 110

tac gac ggc atg ccg gtg ttc gac cac ttc aag aag gtc gac gac gac 384

Tyr Asp Gly Met Pro Val Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp Asp Asp

115 120 125

acc gtc atc ggc gtc atg aac ggc aag ggc acg ttg gtg ttc gac ggc 432

Thr Val Ile Gly Val Met Asn Gly Lys Gly Thr Leu Val Phe Asp Gly

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Gly Glu His Phe Trp Phe Gly Leu Glu Arg Asp Val Ala Leu

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<210> 56

<211> 158

<212> PRT

<400> 56

Met Asn Val Arg Asp Glu Val Ala Ala Leu Arg Ala Arg Thr Asp Arg

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Asp Asp Gly Gln Leu Phe Ser Asp Ile Gly Thr Gly His Gly Glu Ala

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Ser Leu Trp Glu Val Val Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr Met Val

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130 135 140

Gly Glu His Phe Trp Phe Gly Leu Glu Arg Asp Val Ala Leu

145 150 155

<210> 57

<211> 477

<212> DNA

<213> 霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)菌株N128_RhoagDUF4334-3_大肠杆菌，经优化的

<400> 57

atgaatgttc gtgatgaagt tgcagctctg cgtgcccgta ctgatagaat cgacccgcgt 60

gagctggata gcatttggga ccgtctggca ccatgtcgtc cggtggacct gatcggttac 120

cgttggcgcg gtttcgattt cgacaccggt caccgtacct ccggtctgtt gcgtcgcgcg 180

cattggtatg gtaaggcctt tgcgagcgag agcgacgtgc aaccgttgct gtgccgctct 240

gatgacggcc agctgtttag cgatattggc accggtcacg gtgaggcgag cctgtgggaa 300

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gtctttgatg gtggcgagca tttctggttt ggcctggaac gcgatgtcgc gctgtaa 477

<210> 58

<211> 477

<212> DNA

<213> 霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)_RhoagDUF4334-4_wt (NZ_BCRL01000037.1133790-134266 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(477)

<400> 58

atg aac gta cga gac gag gtc gcc gcg ctg cgg gcg cgc acc gac cgg 48

Met Asn Val Arg Asp Glu Val Ala Ala Leu Arg Ala Arg Thr Asp Arg

1 5 10 15

atc gat ccg cgg gaa ctc gat tcg atc tgg gac cgc ttg gcc ccg tgt 96

Ile Asp Pro Arg Glu Leu Asp Ser Ile Trp Asp Arg Leu Ala Pro Cys

20 25 30

cgg ccc gtg gat ctg atc ggg tac cgc tgg cgg ggt ttc gac ttc gac 144

Arg Pro Val Asp Leu Ile Gly Tyr Arg Trp Arg Gly Phe Asp Phe Asp

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Lys Ala Phe Ala Ser Glu Ser Asp Val Gln Pro Leu Leu Cys Arg Ser

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Glu Asp Gly Gln Leu Phe Ser Asp Ile Gly Thr Gly His Gly Glu Ala

85 90 95

agc ctg tgg gag gtc gtg ttc cgc ggg gag gtg acc gcg acg atg gtc 336

Ser Leu Trp Glu Val Val Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr Met Val

100 105 110

tac gac ggc atg ccg gtg tcc gac cac ttc aag aag gtc gac gac gac 384

Tyr Asp Gly Met Pro Val Ser Asp His Phe Lys Lys Val Asp Asp Asp

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<210> 59

<211> 158

<212> PRT

<400> 59

Met Asn Val Arg Asp Glu Val Ala Ala Leu Arg Ala Arg Thr Asp Arg

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50 55 60

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Gly Glu His Phe Trp Phe Gly Leu Glu Arg Asp Val Ala Leu

145 150 155

<210> 60

<211> 477

<212> DNA

<213> 霍氏红球菌(Rhodococcus hoagii)_RhoagDUF4334-4_大肠杆菌，经优化的

<400> 60

atgaatgttc gtgatgaagt tgcagctctg cgtgcccgta ctgatagaat cgacccgcgt 60

gagctggata gcatttggga ccgtctggca ccatgtcgtc cggtggacct gatcggttac 120

cgttggcgcg gtttcgattt cgacaccggt caccgtacct ccggtctgtt gcgtcgcgcg 180

cattggtatg gtaaggcctt tgcgagcgag agcgacgtgc aaccgttgct gtgccgctct 240

gaggacggcc agctgtttag cgatattggc accggtcacg gtgaggcgag cctgtgggaa 300

gttgtctttc gcggcgaagt gaccgcgacg atggtttacg acggtatgcc ggtgagcgac 360

cacttcaaaa aagttgatga cgacacggtg atcggtgtca tgaacggcaa gggcacgctg 420

gtctttgatg gtggcgagca tttctggttt ggcctggaac gcgatgtcgc gctgtaa 477

<210> 61

<211> 585

<212> DNA

<213> 钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_wt (CP002879.1:512553-513138)

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(585)

<400> 61

atg ctg aca gaa atg ctg cgg aat cga gtc tct aca act gcg gcg gta 48

Met Leu Thr Glu Met Leu Arg Asn Arg Val Ser Thr Thr Ala Ala Val

1 5 10 15

ctg gcc gct ttc gat gaa ctt gat cca tta tcg agc gat tcg cta gtt 96

Leu Ala Ala Phe Asp Glu Leu Asp Pro Leu Ser Ser Asp Ser Leu Val

20 25 30

ggc tgc tgg agt ggt ttt gtg atc gct acc ggg cac ccc atg gac ggt 144

Gly Cys Trp Ser Gly Phe Val Ile Ala Thr Gly His Pro Met Asp Gly

35 40 45

ctt ctg agc gct gtc ggc tgg tac ggg aaa atg ttc caa agc gtg gat 192

Leu Leu Ser Ala Val Gly Trp Tyr Gly Lys Met Phe Gln Ser Val Asp

50 55 60

gag gca tat ccg ctg atc atc cgg tcc ccg gac gcc agt acg ctt ttt 240

Glu Ala Tyr Pro Leu Ile Ile Arg Ser Pro Asp Ala Ser Thr Leu Phe

65 70 75 80

tcg atc gat ccc agc cct ttg cca ctt ata ggc tgc gcg aag tta tct 288

Ser Ile Asp Pro Ser Pro Leu Pro Leu Ile Gly Cys Ala Lys Leu Ser

85 90 95

ccc acg gat atg gtg tcg cgt ttt tca aca ctt tcc ccg ttg gcc ctg 336

Pro Thr Asp Met Val Ser Arg Phe Ser Thr Leu Ser Pro Leu Ala Leu

100 105 110

agc aca acc gtc tct cac ggt cgg ctg cgt atg gtc gag tat cgc gga 384

Ser Thr Thr Val Ser His Gly Arg Leu Arg Met Val Glu Tyr Arg Gly

115 120 125

aag gtc aca gga act ctg atc tac gac cag cag ccg ata ctc gat cat 432

Lys Val Thr Gly Thr Leu Ile Tyr Asp Gln Gln Pro Ile Leu Asp His

130 135 140

ttc gtg atg att gat tcg caa acg gta ctt gga att atg gat ttt aaa 480

Phe Val Met Ile Asp Ser Gln Thr Val Leu Gly Ile Met Asp Phe Lys

145 150 155 160

gag ttc ccg cag cca ggc gcg ttt gtg ctg cag cgc gat gac gac agt 528

Glu Phe Pro Gln Pro Gly Ala Phe Val Leu Gln Arg Asp Asp Asp Ser

165 170 175

gcc gtc agc gtt gat cgc ggc gac tgg tcc caa ctg gcg gcg caa cgg 576

Ala Val Ser Val Asp Arg Gly Asp Trp Ser Gln Leu Ala Ala Gln Arg

180 185 190

ctc ggg tga 585

Leu Gly

<210> 62

<211> 194

<212> PRT

<400> 62

Met Leu Thr Glu Met Leu Arg Asn Arg Val Ser Thr Thr Ala Ala Val

1 5 10 15

Leu Ala Ala Phe Asp Glu Leu Asp Pro Leu Ser Ser Asp Ser Leu Val

20 25 30

Gly Cys Trp Ser Gly Phe Val Ile Ala Thr Gly His Pro Met Asp Gly

35 40 45

Leu Leu Ser Ala Val Gly Trp Tyr Gly Lys Met Phe Gln Ser Val Asp

50 55 60

Glu Ala Tyr Pro Leu Ile Ile Arg Ser Pro Asp Ala Ser Thr Leu Phe

65 70 75 80

Ser Ile Asp Pro Ser Pro Leu Pro Leu Ile Gly Cys Ala Lys Leu Ser

85 90 95

Pro Thr Asp Met Val Ser Arg Phe Ser Thr Leu Ser Pro Leu Ala Leu

100 105 110

Ser Thr Thr Val Ser His Gly Arg Leu Arg Met Val Glu Tyr Arg Gly

115 120 125

Lys Val Thr Gly Thr Leu Ile Tyr Asp Gln Gln Pro Ile Leu Asp His

130 135 140

Phe Val Met Ile Asp Ser Gln Thr Val Leu Gly Ile Met Asp Phe Lys

145 150 155 160

Glu Phe Pro Gln Pro Gly Ala Phe Val Leu Gln Arg Asp Asp Asp Ser

165 170 175

Ala Val Ser Val Asp Arg Gly Asp Trp Ser Gln Leu Ala Ala Gln Arg

180 185 190

Leu Gly

<210> 63

<211> 585

<212> DNA

<213> 钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 63

atgttgactg aaatgctgcg taaccgtgtg tctaccactg ccgctgtcct ggccgctttt 60

gacgagctgg acccgctgtc atccgacagc ctggttggct gctggagcgg tttcgttatc 120

gcgacgggtc accctatgga tggtctgctg agcgcggtgg gctggtacgg taaaatgttc 180

cagagcgttg atgaagcata cccgctgatc atccgctccc cggacgcgag cacgctgttt 240

agcattgatc cgtccccgct gccgctgatt ggttgtgcga agctgtcgcc aaccgatatg 300

gtgagccgct tcagcacctt aagcccgctg gcgctgagca ccaccgtatc tcacggtcgt 360

ctgcgtatgg ttgagtatcg tggtaaggtt accggcacgc tcatctatga ccaacagccg 420

attttggatc atttcgtcat gattgacagc caaacggtgc tgggcatcat ggatttcaaa 480

gaatttccgc agccgggtgc gtttgtcttg cagcgtgacg acgatagcgc agtcagcgtg 540

gatcgcggcg actggagcca actggcagcc caacgcctgg gctaa 585

<210> 64

<211> 585

<212> DNA

<213> 钩虫贪铜菌(Cupriavidus necator)_CnecaDUF4334_酵母，经优化的

<400> 64

atgttgactg aaatgttgag aaacagagtt tctactactg ctgctgtttt ggctgctttc 60

gacgaattgg acccattgtc ttctgactct ttggttggtt gttggtctgg tttcgttatc 120

gctactggtc acccaatgga cggtttgttg tctgctgttg gttggtacgg taagatgttc 180

caatctgttg acgaagctta cccattgatc atcagatctc cagacgcttc tactttgttc 240

tctatcgacc catctccatt gccattgatc ggttgtgcta agttgtctcc aactgacatg 300

gtttctagat tctctacttt gtctccattg gctttgtcta ctactgtttc tcacggtaga 360

ttgagaatgg ttgaatacag aggtaaggtt actggtactt tgatctacga ccaacaacca 420

atcttggacc acttcgttat gatcgactct caaactgttt tgggtatcat ggacttcaag 480

gaattcccac aaccaggtgc tttcgttttg caaagagacg acgactctgc tgtttctgtt 540

gacagaggtg actggtctca attggctgct caaagattgg gttaa 585

<210> 65

<211> 447

<212> DNA

<213> 意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF3443-2_wt (JQGA01000120.165652-66635 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(447)

<400> 65

atg aca atc caa ttc cca atc atg tca ttc gac tgt ttc cag cca agc 48

Met Thr Ile Gln Phe Pro Ile Met Ser Phe Asp Cys Phe Gln Pro Ser

1 5 10 15

cca gcc aag aaa ttc gtc tct ctc acc aaa cac cct cgg gtg act ggt 96

Pro Ala Lys Lys Phe Val Ser Leu Thr Lys His Pro Arg Val Thr Gly

20 25 30

ggg aaa atc aac acc gtc ttt cct gag ctc aag cct ctt cag cca gac 144

Gly Lys Ile Asn Thr Val Phe Pro Glu Leu Lys Pro Leu Gln Pro Asp

35 40 45

gac cta atc ggc gaa tgg gac gga tat att ctt gtc acg ggc cac ccc 192

Asp Leu Ile Gly Glu Trp Asp Gly Tyr Ile Leu Val Thr Gly His Pro

50 55 60

ttt gaa gaa gaa ctg gac acg ctg aat tgg ttc gga aat aca ttt tat 240

Phe Glu Glu Glu Leu Asp Thr Leu Asn Trp Phe Gly Asn Thr Phe Tyr

65 70 75 80

tcc acc gac gac gtg gca ccg ctg act gtt gcg cgg aac ggg gtg cgg 288

Ser Thr Asp Asp Val Ala Pro Leu Thr Val Ala Arg Asn Gly Val Arg

85 90 95

gtg ccc ttc gag gat tgg ggg cgt gca tct cta cgt gaa atc aaa tat 336

Val Pro Phe Glu Asp Trp Gly Arg Ala Ser Leu Arg Glu Ile Lys Tyr

100 105 110

caa gga gtc gtc tct gcg gct ttg gtc tat gat aaa cga cca atg atg 384

Gln Gly Val Val Ser Ala Ala Leu Val Tyr Asp Lys Arg Pro Met Met

115 120 125

gtc tat tat cga gcc gtg aaa cat aac atg gtg gct ggg ggt att gag 432

Val Tyr Tyr Arg Ala Val Lys His Asn Met Val Ala Gly Gly Ile Glu

130 135 140

agt aaa gag tgg tag 447

Ser Lys Glu Trp

145

<210> 66

<211> 148

<212> PRT

<400> 66

Met Thr Ile Gln Phe Pro Ile Met Ser Phe Asp Cys Phe Gln Pro Ser

1 5 10 15

Pro Ala Lys Lys Phe Val Ser Leu Thr Lys His Pro Arg Val Thr Gly

20 25 30

Gly Lys Ile Asn Thr Val Phe Pro Glu Leu Lys Pro Leu Gln Pro Asp

35 40 45

Asp Leu Ile Gly Glu Trp Asp Gly Tyr Ile Leu Val Thr Gly His Pro

50 55 60

Phe Glu Glu Glu Leu Asp Thr Leu Asn Trp Phe Gly Asn Thr Phe Tyr

65 70 75 80

Ser Thr Asp Asp Val Ala Pro Leu Thr Val Ala Arg Asn Gly Val Arg

85 90 95

Val Pro Phe Glu Asp Trp Gly Arg Ala Ser Leu Arg Glu Ile Lys Tyr

100 105 110

Gln Gly Val Val Ser Ala Ala Leu Val Tyr Asp Lys Arg Pro Met Met

115 120 125

Val Tyr Tyr Arg Ala Val Lys His Asn Met Val Ala Gly Gly Ile Glu

130 135 140

Ser Lys Glu Trp

145

<210> 67

<211> 447

<212> DNA

<213> 意大利青霉(Penicillium italicum)_PitalDUF3443-2_大肠杆菌，经优化的

<400> 67

atgaccattc aatttcctat catgtctttt gattgttttc agccgagccc agcgaagaaa 60

ttcgtgagct tgacgaaaca tccgcgtgtt accggtggca agatcaatac ggttttcccg 120

gaactgaaac cgctgcaacc ggacgacctg atcggtgagt gggacggtta cattctggtg 180

acgggccacc cgttcgaaga agaactggat accttgaact ggttcggcaa tactttctat 240

agcaccgacg atgtcgctcc gctgaccgtc gcccgcaacg gtgtgcgtgt tccgtttgag 300

gattggggtc gtgcgtccct gcgtgagatc aagtaccagg gtgtggttag cgcagcgctg 360

gtctacgaca aacgcccgat gatggtgtat tatcgcgcag ttaagcacaa catggtcgcg 420

ggtggcattg agagcaaaga gtggtaa 447

<210> 68

<211> 501

<212> DNA

<213> 谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)_Rins-DUF4334_wt (NZ_PKPC01000002.1 18273-18773 (-))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(501)

<400> 68

atg aac acg aag cag aaa ttc gat caa ctc aag agc acg gaa cgc ctg 48

Met Asn Thr Lys Gln Lys Phe Asp Gln Leu Lys Ser Thr Glu Arg Leu

1 5 10 15

aat gac gaa atc ctg ttg gag ttc ttc gac acc ctt ccc ccc gtt tct 96

Asn Asp Glu Ile Leu Leu Glu Phe Phe Asp Thr Leu Pro Pro Val Ser

20 25 30

acg gac gaa gcg ctg ggt cgc tgg aaa ggc ggt gac ttc aat acg ggg 144

Thr Asp Glu Ala Leu Gly Arg Trp Lys Gly Gly Asp Phe Asn Thr Gly

35 40 45

cat tgg ggc aac ctc gct ctg aaa gca agg aag tgg tac gga aag tgg 192

His Trp Gly Asn Leu Ala Leu Lys Ala Arg Lys Trp Tyr Gly Lys Trp

50 55 60

tat cgc agc aag ctg gat gcg gta ccg ctt atc tgt tac gac gac caa 240

Tyr Arg Ser Lys Leu Asp Ala Val Pro Leu Ile Cys Tyr Asp Asp Gln

65 70 75 80

ggc cgc cta tat tcc agc aag gcc atg aag ggc gaa gcg tcg ctt tgg 288

Gly Arg Leu Tyr Ser Ser Lys Ala Met Lys Gly Glu Ala Ser Leu Trp

85 90 95

gat gtg gcg ttc cgc gga aag gtc tcg acc acc atg atc tac gac ggc 336

Asp Val Ala Phe Arg Gly Lys Val Ser Thr Thr Met Ile Tyr Asp Gly

100 105 110

gtg ccg atc ttc gat cat ttg cgc aag gtc gac gag aac acg ctg ttc 384

Val Pro Ile Phe Asp His Leu Arg Lys Val Asp Glu Asn Thr Leu Phe

115 120 125

ggc atc atg gat ggc aaa tcg ttt gag ggg tcc ccc gac atc atc gac 432

Gly Ile Met Asp Gly Lys Ser Phe Glu Gly Ser Pro Asp Ile Ile Asp

130 135 140

cgc ggc aag tac tac ttt ttc tac ctc gag agg gta gac agc ttc ccg 480

Arg Gly Lys Tyr Tyr Phe Phe Tyr Leu Glu Arg Val Asp Ser Phe Pro

145 150 155 160

gcc gaa tat ctg gaa ggc tga 501

Ala Glu Tyr Leu Glu Gly

165

<210> 69

<211> 166

<212> PRT

<400> 69

Met Asn Thr Lys Gln Lys Phe Asp Gln Leu Lys Ser Thr Glu Arg Leu

1 5 10 15

Asn Asp Glu Ile Leu Leu Glu Phe Phe Asp Thr Leu Pro Pro Val Ser

20 25 30

Thr Asp Glu Ala Leu Gly Arg Trp Lys Gly Gly Asp Phe Asn Thr Gly

35 40 45

His Trp Gly Asn Leu Ala Leu Lys Ala Arg Lys Trp Tyr Gly Lys Trp

50 55 60

Tyr Arg Ser Lys Leu Asp Ala Val Pro Leu Ile Cys Tyr Asp Asp Gln

65 70 75 80

Gly Arg Leu Tyr Ser Ser Lys Ala Met Lys Gly Glu Ala Ser Leu Trp

85 90 95

Asp Val Ala Phe Arg Gly Lys Val Ser Thr Thr Met Ile Tyr Asp Gly

100 105 110

Val Pro Ile Phe Asp His Leu Arg Lys Val Asp Glu Asn Thr Leu Phe

115 120 125

Gly Ile Met Asp Gly Lys Ser Phe Glu Gly Ser Pro Asp Ile Ile Asp

130 135 140

Arg Gly Lys Tyr Tyr Phe Phe Tyr Leu Glu Arg Val Asp Ser Phe Pro

145 150 155 160

Ala Glu Tyr Leu Glu Gly

165

<210> 70

<211> 501

<212> DNA

<213> 谲诈罗尔斯通氏菌(Ralstonia insidiosa)_Rins-DUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 70

atgaacacca agcaaaagtt tgaccagctg aagtccaccg agcgcctgaa tgatgaaatc 60

ctgttggaat ttttcgatac cctgcctccg gtgagcaccg atgaagcgct gggccgttgg 120

aagggtggcg acttcaatac gggtcattgg ggtaacctgg ccctgaaagc gcgtaaatgg 180

tacggcaaat ggtatcgcag caaactggac gcagttccac tgatttgcta tgacgatcag 240

ggccgtctgt actctagcaa ggctatgaaa ggtgaggcga gcctgtggga tgttgcgttt 300

cgtggtaaag tgagcacgac tatgatctac gacggtgtcc cgattttcga ccacttgcgt 360

aaagtcgatg agaacacgct gtttggtatc atggatggta agtcgttcga gggtagcccg 420

gacattatcg accgtggcaa gtactatttc ttttatctgg agcgcgttga cagcttcccg 480

gcagagtacc tggaaggcta a 501

<210> 71

<211> 447

<212> DNA

<213> 格特隐球菌(Cryptococcus gattii) EJB2_CgatDUF4334_wt (KN848661.1262486-263032 (-))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(447)

<400> 71

atg tcc cct cag gaa cag tat att gct ctc gtc cag gcc ggc ggc aag 48

Met Ser Pro Gln Glu Gln Tyr Ile Ala Leu Val Gln Ala Gly Gly Lys

1 5 10 15

tcg gac cca tcc acc att gaa gct ctt ttc caa gcg ctt ccg ccg gtc 96

Ser Asp Pro Ser Thr Ile Glu Ala Leu Phe Gln Ala Leu Pro Pro Val

20 25 30

aag ccc act cag ctg cta ggc gac tgg aat cac ggc gga ttt ttc gac 144

Lys Pro Thr Gln Leu Leu Gly Asp Trp Asn His Gly Gly Phe Phe Asp

35 40 45

aca ggc cat ccg gtt aac gag caa ctc aaa gag att aaa tgg att gga 192

Thr Gly His Pro Val Asn Glu Gln Leu Lys Glu Ile Lys Trp Ile Gly

50 55 60

aag tca ttt aag tcc gtc gaa gat gtt gat cct gtg att att gac cag 240

Lys Ser Phe Lys Ser Val Glu Asp Val Asp Pro Val Ile Ile Asp Gln

65 70 75 80

gat ggt aag cca act agc tgg agg aag tgg ggg tca gcc agc ctg cga 288

Asp Gly Lys Pro Thr Ser Trp Arg Lys Trp Gly Ser Ala Ser Leu Arg

85 90 95

gag atg gtg tat gaa ggc act gta tca acg tcg atg ata tat gat gac 336

Glu Met Val Tyr Glu Gly Thr Val Ser Thr Ser Met Ile Tyr Asp Asp

100 105 110

cga cca atc atc gat cac ttc cgc tac gta gat gac gac ttt atg gcg 384

Arg Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Tyr Val Asp Asp Asp Phe Met Ala

115 120 125

ggg ata atg gaa ggg aag gct ctg ggg gag gcg ggg aag ttt tat ttc 432

Gly Ile Met Glu Gly Lys Ala Leu Gly Glu Ala Gly Lys Phe Tyr Phe

130 135 140

tat ttg aga aga tag 447

Tyr Leu Arg Arg

145

<210> 72

<211> 148

<212> PRT

<400> 72

Met Ser Pro Gln Glu Gln Tyr Ile Ala Leu Val Gln Ala Gly Gly Lys

1 5 10 15

Ser Asp Pro Ser Thr Ile Glu Ala Leu Phe Gln Ala Leu Pro Pro Val

20 25 30

Lys Pro Thr Gln Leu Leu Gly Asp Trp Asn His Gly Gly Phe Phe Asp

35 40 45

Thr Gly His Pro Val Asn Glu Gln Leu Lys Glu Ile Lys Trp Ile Gly

50 55 60

Lys Ser Phe Lys Ser Val Glu Asp Val Asp Pro Val Ile Ile Asp Gln

65 70 75 80

Asp Gly Lys Pro Thr Ser Trp Arg Lys Trp Gly Ser Ala Ser Leu Arg

85 90 95

Glu Met Val Tyr Glu Gly Thr Val Ser Thr Ser Met Ile Tyr Asp Asp

100 105 110

Arg Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Tyr Val Asp Asp Asp Phe Met Ala

115 120 125

Gly Ile Met Glu Gly Lys Ala Leu Gly Glu Ala Gly Lys Phe Tyr Phe

130 135 140

Tyr Leu Arg Arg

145

<210> 73

<211> 447

<212> DNA

<213> 格特隐球菌(Cryptococcus gattii) EJB2_CgatDUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 73

atgagcccac aagaacaata cattgcatta gtccaggccg gtggtaagag cgatcctagc 60

acgatcgaag cgctgtttca ggcattgccg ccggttaaac cgacccagct gctgggcgat 120

tggaatcacg gtggcttctt tgacacgggc catccggtga acgaacaact gaaagaaatc 180

aagtggattg gcaaatcctt caaatcggtc gaagatgttg atccggtgat catcgaccag 240

gacggtaagc cgactagctg gcgtaagtgg ggttctgcga gcctgcgtga gatggtttat 300

gagggcaccg tgagcaccag catgatttat gacgaccgcc cgatcattga tcactttcgt 360

tacgtcgatg acgacttcat ggctggtatt atggaaggca aggcactggg tgaggccggt 420

aaattctact tttatctgcg ccgttaa 447

<210> 74

<211> 459

<212> DNA

<213> 蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera) kw1407_GclavDUF4334_wt (XM_014316402.1)

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(459)

<400> 74

atg aca gct gta cag cga ttt aac gca ctc acc aaa gca gaa ggg ctt 48

Met Thr Ala Val Gln Arg Phe Asn Ala Leu Thr Lys Ala Glu Gly Leu

1 5 10 15

ctc aag gag tct gag ctt gca caa att ttc gac gag ctc cct cct gtt 96

Leu Lys Glu Ser Glu Leu Ala Gln Ile Phe Asp Glu Leu Pro Pro Val

20 25 30

tct cca gaa gct atg aca ggc aag tgg aat gga ggc agc ttt gac agt 144

Ser Pro Glu Ala Met Thr Gly Lys Trp Asn Gly Gly Ser Phe Asp Ser

35 40 45

ggc cat cct gtc cac aag ctg ctt caa act ttt aaa tgg gca ggg aaa 192

Gly His Pro Val His Lys Leu Leu Gln Thr Phe Lys Trp Ala Gly Lys

50 55 60

gaa ttc cgc tcc gtt gac gat atc gac ccg att gtg atc ttc gac gaa 240

Glu Phe Arg Ser Val Asp Asp Ile Asp Pro Ile Val Ile Phe Asp Glu

65 70 75 80

aat ggg gag cga aag tgg cta tcc gag tat gga cat gca aga ctg cgt 288

Asn Gly Glu Arg Lys Trp Leu Ser Glu Tyr Gly His Ala Arg Leu Arg

85 90 95

gaa gtt aag ttt cgg gga gtt gta tct gcc gcc ttg gta tac gac aaa 336

Glu Val Lys Phe Arg Gly Val Val Ser Ala Ala Leu Val Tyr Asp Lys

100 105 110

gtt gcc att atc gac tcg ttt cgt cgg gtt tcg gac aac gtg ctg atg 384

Val Ala Ile Ile Asp Ser Phe Arg Arg Val Ser Asp Asn Val Leu Met

115 120 125

gga act atg gac gcc agg gac tgg ccg gat gct ggc atc tac tac ttt 432

Gly Thr Met Asp Ala Arg Asp Trp Pro Asp Ala Gly Ile Tyr Tyr Phe

130 135 140

tac atc acc aag ttt gaa gaa ttg tga 459

Tyr Ile Thr Lys Phe Glu Glu Leu

145 150

<210> 75

<211> 152

<212> PRT

<400> 75

Met Thr Ala Val Gln Arg Phe Asn Ala Leu Thr Lys Ala Glu Gly Leu

1 5 10 15

Leu Lys Glu Ser Glu Leu Ala Gln Ile Phe Asp Glu Leu Pro Pro Val

20 25 30

Ser Pro Glu Ala Met Thr Gly Lys Trp Asn Gly Gly Ser Phe Asp Ser

35 40 45

Gly His Pro Val His Lys Leu Leu Gln Thr Phe Lys Trp Ala Gly Lys

50 55 60

Glu Phe Arg Ser Val Asp Asp Ile Asp Pro Ile Val Ile Phe Asp Glu

65 70 75 80

Asn Gly Glu Arg Lys Trp Leu Ser Glu Tyr Gly His Ala Arg Leu Arg

85 90 95

Glu Val Lys Phe Arg Gly Val Val Ser Ala Ala Leu Val Tyr Asp Lys

100 105 110

Val Ala Ile Ile Asp Ser Phe Arg Arg Val Ser Asp Asn Val Leu Met

115 120 125

Gly Thr Met Asp Ala Arg Asp Trp Pro Asp Ala Gly Ile Tyr Tyr Phe

130 135 140

Tyr Ile Thr Lys Phe Glu Glu Leu

145 150

<210> 76

<211> 459

<212> DNA

<213> 蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera) kw1407_GclavDUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 76

atgactgctg ttcaacgttt taacgcattg accaaagccg agggtttgct gaaagaatct 60

gagctggcac agattttcga cgaactgccg ccggttagcc cagaggccat gaccggtaag 120

tggaatggtg gcagctttga ttccggccat ccggtgcaca agctgctgca gacgttcaaa 180

tgggcgggta aagaatttcg tagcgttgac gacattgacc cgatcgtgat ctttgatgag 240

aatggcgagc gcaagtggct gagcgagtat ggtcacgcac gcctgcgtga agtgaagttc 300

cgtggtgtcg tcagcgcggc tctggtctat gacaaagtcg cgatcattga cagcttccgc 360

cgtgttagcg ataacgtgct gatgggtacg atggatgcgc gtgattggcc ggatgcgggc 420

atttactact tctacatcac caagtttgaa gaactgtaa 459

<210> 77

<211> 642

<212> DNA

<213> 大孢树粉孢菌(Oidiodendron maius) Zn_OmaiusDUF4334_wt (KN832882.1673187-675938 (-))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(642)

<400> 77

atg gct tct act tta tat gaa gct aga gtt att ttg gca ctt aaa gct 48

Met Ala Ser Thr Leu Tyr Glu Ala Arg Val Ile Leu Ala Leu Lys Ala

1 5 10 15

att caa aac agc aac aat ctt agc tta cga gct gca gca aag ctg tat 96

Ile Gln Asn Ser Asn Asn Leu Ser Leu Arg Ala Ala Ala Lys Leu Tyr

20 25 30

gat gta cag cca aca acc cta tat tac cga caa gct ggc cga cct gca 144

Asp Val Gln Pro Thr Thr Leu Tyr Tyr Arg Gln Ala Gly Arg Pro Ala

35 40 45

cga cat gat att cca cct aac tct cgc aag ctt acg gat cta gaa gag 192

Arg His Asp Ile Pro Pro Asn Ser Arg Lys Leu Thr Asp Leu Glu Glu

50 55 60

gag acg att gtt cgc ccg acg gaa cag ttt att gcc cta gct cag gcc 240

Glu Thr Ile Val Arg Pro Thr Glu Gln Phe Ile Ala Leu Ala Gln Ala

65 70 75 80

cag ggc cgg ctt gat gcc aca ttg att gac gcg gtg ttt aac aag ttt 288

Gln Gly Arg Leu Asp Ala Thr Leu Ile Asp Ala Val Phe Asn Lys Phe

85 90 95

ggc cca gtc aag cca gag ctg atg cta ggc aag tgg agt ggt ggg att 336

Gly Pro Val Lys Pro Glu Leu Met Leu Gly Lys Trp Ser Gly Gly Ile

100 105 110

tta gac acc ggc cat cct atg gga gat aca ctg aag gag ata cga tgg 384

Leu Asp Thr Gly His Pro Met Gly Asp Thr Leu Lys Glu Ile Arg Trp

115 120 125

gtg ggc aag aat ttc acc tcc act gaa cac gtg gac ccg gtt att atc 432

Val Gly Lys Asn Phe Thr Ser Thr Glu His Val Asp Pro Val Ile Ile

130 135 140

gac aag aac ggc caa agg gcc agc tgg ggg aag tgg ggc ctt gct acc 480

Asp Lys Asn Gly Gln Arg Ala Ser Trp Gly Lys Trp Gly Leu Ala Thr

145 150 155 160

cta cgt gag gtc ttg tat cga gat gtt gtc tcg acg gcg atg atc tac 528

Leu Arg Glu Val Leu Tyr Arg Asp Val Val Ser Thr Ala Met Ile Tyr

165 170 175

gat gac cgc ccg gtc ttt gac tat ttc cgt ttc gct aat gat gat atg 576

Asp Asp Arg Pro Val Phe Asp Tyr Phe Arg Phe Ala Asn Asp Asp Met

180 185 190

gtt gct ggt atc atg gaa ggg aag gag ttg gga ggg aga ctt ttc tat 624

Val Ala Gly Ile Met Glu Gly Lys Glu Leu Gly Gly Arg Leu Phe Tyr

195 200 205

ttc tac ctg aag aga tag 642

Phe Tyr Leu Lys Arg

210

<210> 78

<211> 213

<212> PRT

<400> 78

Met Ala Ser Thr Leu Tyr Glu Ala Arg Val Ile Leu Ala Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ile Gln Asn Ser Asn Asn Leu Ser Leu Arg Ala Ala Ala Lys Leu Tyr

20 25 30

Asp Val Gln Pro Thr Thr Leu Tyr Tyr Arg Gln Ala Gly Arg Pro Ala

35 40 45

Arg His Asp Ile Pro Pro Asn Ser Arg Lys Leu Thr Asp Leu Glu Glu

50 55 60

Glu Thr Ile Val Arg Pro Thr Glu Gln Phe Ile Ala Leu Ala Gln Ala

65 70 75 80

Gln Gly Arg Leu Asp Ala Thr Leu Ile Asp Ala Val Phe Asn Lys Phe

85 90 95

Gly Pro Val Lys Pro Glu Leu Met Leu Gly Lys Trp Ser Gly Gly Ile

100 105 110

Leu Asp Thr Gly His Pro Met Gly Asp Thr Leu Lys Glu Ile Arg Trp

115 120 125

Val Gly Lys Asn Phe Thr Ser Thr Glu His Val Asp Pro Val Ile Ile

130 135 140

Asp Lys Asn Gly Gln Arg Ala Ser Trp Gly Lys Trp Gly Leu Ala Thr

145 150 155 160

Leu Arg Glu Val Leu Tyr Arg Asp Val Val Ser Thr Ala Met Ile Tyr

165 170 175

Asp Asp Arg Pro Val Phe Asp Tyr Phe Arg Phe Ala Asn Asp Asp Met

180 185 190

Val Ala Gly Ile Met Glu Gly Lys Glu Leu Gly Gly Arg Leu Phe Tyr

195 200 205

Phe Tyr Leu Lys Arg

210

<210> 79

<211> 642

<212> DNA

<213> 大孢树粉孢菌(Oidiodendron maius) Zn_OmaiusDUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 79

atggcaagca ctttgtatga agctcgcgtg attctggcgc tgaaagcgat tcaaaatagc 60

aacaatctga gcttgcgtgc agccgcgaag ctctatgatg tccagccgac cacgctgtac 120

tatcgtcagg ccggtcgtcc agctcgccac gacatcccgc cgaactcccg taagctgacc 180

gatctggaag aggaaacgat cgttcgcccg accgagcaat tcatcgcgtt agcacaagca 240

cagggccgtc tggatgcgac cctgattgat gcagttttca ataagtttgg tccggtgaag 300

cctgagctga tgctgggtaa gtggagcggt ggcattctgg acacgggtca cccgatgggc 360

gataccctga aagaaatccg ttgggtgggt aaaaatttca ccagcaccga acatgttgat 420

ccggtcatca ttgacaaaaa cggtcagcgc gcttcttggg gcaagtgggg tctggccacc 480

ttgcgtgaag ttctgtaccg cgacgtcgtc agcacggcga tgatttacga tgaccgtccg 540

gtgtttgact attttcgttt cgcgaacgac gacatggttg cgggtatcat ggaaggcaaa 600

gaactgggtg gccgtctgtt ttacttctac ctgaaacgct aa 642

<210> 80

<211> 447

<212> DNA

<213> 弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)_TcurvaDUF4334_wt (NC_013510.1)

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(447)

<400> 80

atg gat gcg gaa cag cgc ctt gcc aag atc atc gcg tcc ggc gac gag 48

Met Asp Ala Glu Gln Arg Leu Ala Lys Ile Ile Ala Ser Gly Asp Glu

1 5 10 15

tgc gac cgg gcc acc gtg gag gaa ctg tac gac cgg ctg gcc ccc gtg 96

Cys Asp Arg Ala Thr Val Glu Glu Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Pro Val

20 25 30

ccg gtg gac ttc atg ctc ggc acc tgg cgg ggc ggc atc ttc gac cgg 144

Pro Val Asp Phe Met Leu Gly Thr Trp Arg Gly Gly Ile Phe Asp Arg

35 40 45

ggc gac gcg ctg gcg ggg atg ctg ctg ggg atg aac tgg tac ggc aag 192

Gly Asp Ala Leu Ala Gly Met Leu Leu Gly Met Asn Trp Tyr Gly Lys

50 55 60

cgg ttc atc gac cgc gac cac gtc gag ccg ctg ctg tgc cgc tcc ccc 240

Arg Phe Ile Asp Arg Asp His Val Glu Pro Leu Leu Cys Arg Ser Pro

65 70 75 80

gac ggc tcg atc tac tcc tac gag aag ctc ggg ctg gcc cgg ctg cgc 288

Asp Gly Ser Ile Tyr Ser Tyr Glu Lys Leu Gly Leu Ala Arg Leu Arg

85 90 95

gag gtc gcc ctg cgc ggc acg gtc tcg gcg gcc atg atc tac gac aag 336

Glu Val Ala Leu Arg Gly Thr Val Ser Ala Ala Met Ile Tyr Asp Lys

100 105 110

cag ccc atc atc gac cac ttc cgg cgg gtc aac gac gac atg gtg gtc 384

Gln Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Arg Val Asn Asp Asp Met Val Val

115 120 125

ggc gcc atg gac gcc aag ggc cag ccc gac atc ctc tac ttc cac ctc 432

Gly Ala Met Asp Ala Lys Gly Gln Pro Asp Ile Leu Tyr Phe His Leu

130 135 140

acc cgg gaa cgc tga 447

Thr Arg Glu Arg

145

<210> 81

<211> 148

<212> PRT

<400> 81

Met Asp Ala Glu Gln Arg Leu Ala Lys Ile Ile Ala Ser Gly Asp Glu

1 5 10 15

Cys Asp Arg Ala Thr Val Glu Glu Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Pro Val

20 25 30

Pro Val Asp Phe Met Leu Gly Thr Trp Arg Gly Gly Ile Phe Asp Arg

35 40 45

Gly Asp Ala Leu Ala Gly Met Leu Leu Gly Met Asn Trp Tyr Gly Lys

50 55 60

Arg Phe Ile Asp Arg Asp His Val Glu Pro Leu Leu Cys Arg Ser Pro

65 70 75 80

Asp Gly Ser Ile Tyr Ser Tyr Glu Lys Leu Gly Leu Ala Arg Leu Arg

85 90 95

Glu Val Ala Leu Arg Gly Thr Val Ser Ala Ala Met Ile Tyr Asp Lys

100 105 110

Gln Pro Ile Ile Asp His Phe Arg Arg Val Asn Asp Asp Met Val Val

115 120 125

Gly Ala Met Asp Ala Lys Gly Gln Pro Asp Ile Leu Tyr Phe His Leu

130 135 140

Thr Arg Glu Arg

145

<210> 82

<211> 447

<212> DNA

<213> 弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)_TcurvaDUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 82

atggatgcgg aacaaagact ggctaaaatt attgcatctg gtgatgagtg tgatcgtgca 60

accgtggaag aactgtatga ccgtttggcc cctgtcccgg ttgacttcat gctgggtacg 120

tggcgtggtg gcatcttcga tcgtggtgat gcgctggcgg gtatgctgct gggtatgaat 180

tggtatggca agcgctttat cgaccgcgac cacgtcgagc cactgctgtg ccgtagcccg 240

gatggctcca tctacagcta cgagaaactg ggtctggccc gtttgcgcga agtggcactg 300

cgtggcaccg ttagcgcggc tatgatttat gacaaacagc cgattatcga ccatttccgt 360

cgcgtgaacg acgacatggt tgtcggcgcg atggatgcga agggtcagcc ggacatcctg 420

tactttcacc tgacccgcga gcgttaa 447

<210> 83

<211> 492

<212> DNA

<213> 海滨假单胞菌(Pseudomonas litoralis)_DlitoDUF3443_wt (NZ_LT629748.13096922-3097413 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(492)

<400> 83

atg act gca aca ctg gcc gcc ctc agc ctg acc acc ctg ctt gcc ggg 48

Met Thr Ala Thr Leu Ala Ala Leu Ser Leu Thr Thr Leu Leu Ala Gly

1 5 10 15

ccc agt ctg gcc gca gat acg gaa cag caa tgg ctg gag atg atc gcc 96

Pro Ser Leu Ala Ala Asp Thr Glu Gln Gln Trp Leu Glu Met Ile Ala

20 25 30

agc ggt gaa gcc tat tcg gcg gac acc ctg gtg cct ctg ttc aaa caa 144

Ser Gly Glu Ala Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Val Pro Leu Phe Lys Gln

35 40 45

ctc gaa ccg gtg gat acc gac ttc atg gtc ggc aca tgg aag ggc ggc 192

Leu Glu Pro Val Asp Thr Asp Phe Met Val Gly Thr Trp Lys Gly Gly

50 55 60

aag ttc gac ggc ggc gcc gag ccg gac ccg atc aac tgg tac ggc aaa 240

Lys Phe Asp Gly Gly Ala Glu Pro Asp Pro Ile Asn Trp Tyr Gly Lys

65 70 75 80

cgt ttc acc tcg acc acc gat gtc gag ccg tta ttg gta aac gat gcc 288

Arg Phe Thr Ser Thr Thr Asp Val Glu Pro Leu Leu Val Asn Asp Ala

85 90 95

gag ggc gag gtg atc acc cac gac cgg ctc ggc gcc gca cag atg cgc 336

Glu Gly Glu Val Ile Thr His Asp Arg Leu Gly Ala Ala Gln Met Arg

100 105 110

cag gtg gtg ttc gat ggg aag gta tcg gcc gcg ttg atc tac gac agc 384

Gln Val Val Phe Asp Gly Lys Val Ser Ala Ala Leu Ile Tyr Asp Ser

115 120 125

cag ccg atc atg gat tac ctc cgc aag gtc aac gag gat gtg gtc atc 432

Gln Pro Ile Met Asp Tyr Leu Arg Lys Val Asn Glu Asp Val Val Ile

130 135 140

ggc ctg ggc gac atc aag ggc aag cct acc gat ttc ttt ttc tat ctg 480

Gly Leu Gly Asp Ile Lys Gly Lys Pro Thr Asp Phe Phe Phe Tyr Leu

145 150 155 160

gta cgc gat taa 492

Val Arg Asp

<210> 84

<211> 163

<212> PRT

<400> 84

Met Thr Ala Thr Leu Ala Ala Leu Ser Leu Thr Thr Leu Leu Ala Gly

1 5 10 15

Pro Ser Leu Ala Ala Asp Thr Glu Gln Gln Trp Leu Glu Met Ile Ala

20 25 30

Ser Gly Glu Ala Tyr Ser Ala Asp Thr Leu Val Pro Leu Phe Lys Gln

35 40 45

Leu Glu Pro Val Asp Thr Asp Phe Met Val Gly Thr Trp Lys Gly Gly

50 55 60

Lys Phe Asp Gly Gly Ala Glu Pro Asp Pro Ile Asn Trp Tyr Gly Lys

65 70 75 80

Arg Phe Thr Ser Thr Thr Asp Val Glu Pro Leu Leu Val Asn Asp Ala

85 90 95

Glu Gly Glu Val Ile Thr His Asp Arg Leu Gly Ala Ala Gln Met Arg

100 105 110

Gln Val Val Phe Asp Gly Lys Val Ser Ala Ala Leu Ile Tyr Asp Ser

115 120 125

Gln Pro Ile Met Asp Tyr Leu Arg Lys Val Asn Glu Asp Val Val Ile

130 135 140

Gly Leu Gly Asp Ile Lys Gly Lys Pro Thr Asp Phe Phe Phe Tyr Leu

145 150 155 160

Val Arg Asp

<210> 85

<211> 492

<212> DNA

<213> 海滨假单胞菌(Pseudomonas litoralis)_DlitoDUF3443_大肠杆菌，经优化的

<400> 85

atgactgcga ctttggctgc tctgagcttg acgaccctgt tggctggccc atctttggct 60

gcggacaccg agcagcaatg gctggaaatg attgcaagcg gcgaggcgta tagcgcggac 120

accctggtgc cgctgttcaa gcaactggag cctgtcgata cggacttcat ggtcggcacg 180

tggaagggcg gcaaatttga tggtggtgcc gaaccggacc cgattaactg gtacggtaag 240

cgttttacca gcacgaccga tgtggagccg ctgctggtga atgacgccga gggtgaagtt 300

atcacccacg atcgtctggg tgcggcacag atgcgccaag ttgtttttga tggcaaagtc 360

tccgcagcgc tgatctacga cagccagccg attatggact atctgcgcaa agtgaacgaa 420

gatgttgtca tcggtctggg tgacatcaag ggtaaaccga ccgacttttt cttctacctg 480

gttcgtgatt aa 492

<210> 86

<211> 498

<212> DNA

<213> 防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)_PprotDUF4334_wt (NC_021237.15528027-5528524 (-))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(498)

<400> 86

atg aat acg aaa gaa aag ttt gaa cag ctt aag agc acg caa ggt ctt 48

Met Asn Thr Lys Glu Lys Phe Glu Gln Leu Lys Ser Thr Gln Gly Leu

1 5 10 15

aat gat gaa gta ctg ttg gac ttc ttt gac tcg ctt tct cca gtc aca 96

Asn Asp Glu Val Leu Leu Asp Phe Phe Asp Ser Leu Ser Pro Val Thr

20 25 30

atc gat ggc gcg ttg ggc cgt tgg caa ggt ggt gac ttc aag aca gga 144

Ile Asp Gly Ala Leu Gly Arg Trp Gln Gly Gly Asp Phe Lys Thr Gly

35 40 45

cac tgg ggc aat gac gca ctt acc gga atg aag tgg tac gga aag tgg 192

His Trp Gly Asn Asp Ala Leu Thr Gly Met Lys Trp Tyr Gly Lys Trp

50 55 60

tac cgg agc aag ttg gat gcc gtt ccc cta gtc tgc tac gac gaa cag 240

Tyr Arg Ser Lys Leu Asp Ala Val Pro Leu Val Cys Tyr Asp Glu Gln

65 70 75 80

ggc cga cta ttt tcc aac aag atc atg aaa ggt gag gcc tct ctc tgg 288

Gly Arg Leu Phe Ser Asn Lys Ile Met Lys Gly Glu Ala Ser Leu Trp

85 90 95

gag gtg gcg ttt cgt ggc aag gtt tcg act acg atg atc tac gat ggc 336

Glu Val Ala Phe Arg Gly Lys Val Ser Thr Thr Met Ile Tyr Asp Gly

100 105 110

gtt ccg att tat gat cac ttg cgc aag gtc gat gac aac acc ctt ttc 384

Val Pro Ile Tyr Asp His Leu Arg Lys Val Asp Asp Asn Thr Leu Phe

115 120 125

ggg atc atg gat ggt aag tcc ttt gag ggg cag ctc ccc gac atc atc 432

Gly Ile Met Asp Gly Lys Ser Phe Glu Gly Gln Leu Pro Asp Ile Ile

130 135 140

gac aat ggc aag tac tac ttc ttc tac ctc gaa agg gtc gat ggc ttc 480

Asp Asn Gly Lys Tyr Tyr Phe Phe Tyr Leu Glu Arg Val Asp Gly Phe

145 150 155 160

cct gtc gag ttc gtc tag 498

Pro Val Glu Phe Val

165

<210> 87

<211> 165

<212> PRT

<400> 87

Met Asn Thr Lys Glu Lys Phe Glu Gln Leu Lys Ser Thr Gln Gly Leu

1 5 10 15

Asn Asp Glu Val Leu Leu Asp Phe Phe Asp Ser Leu Ser Pro Val Thr

20 25 30

Ile Asp Gly Ala Leu Gly Arg Trp Gln Gly Gly Asp Phe Lys Thr Gly

35 40 45

His Trp Gly Asn Asp Ala Leu Thr Gly Met Lys Trp Tyr Gly Lys Trp

50 55 60

Tyr Arg Ser Lys Leu Asp Ala Val Pro Leu Val Cys Tyr Asp Glu Gln

65 70 75 80

Gly Arg Leu Phe Ser Asn Lys Ile Met Lys Gly Glu Ala Ser Leu Trp

85 90 95

Glu Val Ala Phe Arg Gly Lys Val Ser Thr Thr Met Ile Tyr Asp Gly

100 105 110

Val Pro Ile Tyr Asp His Leu Arg Lys Val Asp Asp Asn Thr Leu Phe

115 120 125

Gly Ile Met Asp Gly Lys Ser Phe Glu Gly Gln Leu Pro Asp Ile Ile

130 135 140

Asp Asn Gly Lys Tyr Tyr Phe Phe Tyr Leu Glu Arg Val Asp Gly Phe

145 150 155 160

Pro Val Glu Phe Val

165

<210> 88

<211> 498

<212> DNA

<213> 防御假单胞菌(Pseudomonas protegens)_PprotDUF4334_大肠杆菌，经优化的

<400> 88

atgaacacga aagaaaagtt tgaacagttg aaaagcaccc aaggtctgaa cgatgaagtt 60

ttgctggatt tcttcgatag cctgagccca gtgaccattg acggtgcact gggccgttgg 120

cagggtggcg acttcaagac cggtcactgg ggcaacgacg cgctgactgg catgaaatgg 180

tacggtaaat ggtatcgcag caaactggat gctgtgccgc tggtgtgcta cgacgaacag 240

ggtcgtctgt tttccaataa gatcatgaaa ggtgaggcca gcctgtggga agtcgcgttc 300

cgcggtaagg ttagcacgac gatgatttat gatggtgtgc cgatctatga ccatctgcgt 360

aaagttgatg acaataccct gtttggcatc atggatggca agtcttttga gggtcaactg 420

ccggacatca ttgacaatgg caagtactac ttcttctacc tggagcgtgt tgacggtttt 480

ccggtcgagt tcgtctaa 498

<210> 89

<211> 157

<212> PRT

<213> 人工_SCH91-3944-W44A_变体

<400> 89

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Ala Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 90

<211> 474

<212> DNA

<213> 人工_SCH91-3944-W44A_大肠杆菌，经优化的

<400> 90

atgaacttaa atgaagcgcg taccgcattt gcacgtctga gagctgccga gaacggtctg 60

agcccggctg agctggatga agtgtgggca gcgctggaga ctgtggcggc tgaagaaatc 120

ctgggtgagg caaagggtga cgattttgcg acgggtcacc gtctgcacga gaaactgtcg 180

gcgagccgct ggtatggtaa gaccttcaac tctgttgaag atgcaaagcc gctgatttgc 240

cgtgacgaag atggcaatct gtactccgat gtcaagagcg gtaacggtga ggccagcctg 300

tggaatatcg agtttcgcgg cgaagtcacc gcgacgatgg tttacgatgg tgccccgatc 360

ttcgaccatt tcaaaaaagt tgacgacagc accctgatgg gcattatgaa tggcaaaagc 420

gcgttggtgt tggacggtgg ccagcattac tatttcctgc tggagcgtgc gtaa 474

<210> 91

<211> 157

<212> PRT

<213> 人工_SCH91-3944-T51A_变体

<400> 91

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Ala Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 92

<211> 474

<212> DNA

<213> 人工_SCH91-3944-T51A_大肠杆菌，经优化的

<400> 92

atgaacttaa atgaagcgcg taccgcattt gcacgtctga gagctgccga gaacggtctg 60

agcccggctg agctggatga agtgtgggca gcgctggaga ctgtggcggc tgaagaaatc 120

ctgggtgagt ggaagggtga cgattttgcg gccggtcacc gtctgcacga gaaactgtcg 180

gcgagccgct ggtatggtaa gaccttcaac tctgttgaag atgcaaagcc gctgatttgc 240

cgtgacgaag atggcaatct gtactccgat gtcaagagcg gtaacggtga ggccagcctg 300

tggaatatcg agtttcgcgg cgaagtcacc gcgacgatgg tttacgatgg tgccccgatc 360

ttcgaccatt tcaaaaaagt tgacgacagc accctgatgg gcattatgaa tggcaaaagc 420

gcgttggtgt tggacggtgg ccagcattac tatttcctgc tggagcgtgc gtaa 474

<210> 93

<211> 157

<212> PRT

<213> 人工_SCH91-3944-H53A_变体

<400> 93

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Thr Gly Ala Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 94

<211> 474

<212> DNA

<213> 人工_SCH91-3944-H53A_大肠杆菌，经优化的

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<211> 474

<212> DNA

<213> 人工_SCH91-3944-K139A_大肠杆菌，经优化的

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<213> 人工_SCH91-3944-F152A_变体

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<210> 117

<211> 157

<212> PRT

<213> 人工_SCH91-3944-L154A_变体

<400> 117

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Ala Glu Arg Ala

145 150 155

<210> 118

<211> 474

<212> DNA

<213> 人工_SCH91-3944-L154A_大肠杆菌，经优化的

<400> 118

atgaacttaa atgaagcgcg taccgcattt gcacgtctga gagctgccga gaacggtctg 60

agcccggctg agctggatga agtgtgggca gcgctggaga ctgtggcggc tgaagaaatc 120

ctgggtgagt ggaagggtga cgattttgcg acgggtcacc gtctgcacga gaaactgtcg 180

gcgagccgct ggtatggtaa gaccttcaac tctgttgaag atgcaaagcc gctgatttgc 240

cgtgacgaag atggcaatct gtactccgat gtcaagagcg gtaacggtga ggccagcctg 300

tggaatatcg agtttcgcgg cgaagtcacc gcgacgatgg tttacgatgg tgccccgatc 360

ttcgaccatt tcaaaaaagt tgacgacagc accctgatgg gcattatgaa tggcaaaagc 420

gcgttggtgt tggacggtgg ccagcattac tatttcctgg ccgagcgtgc gtaa 474

<210> 119

<211> 157

<212> PRT

<213> 人工_SCH91-3944-R156A_变体

<400> 119

Met Asn Leu Asn Glu Ala Arg Thr Ala Phe Ala Arg Leu Arg Ala Ala

1 5 10 15

Glu Asn Gly Leu Ser Pro Ala Glu Leu Asp Glu Val Trp Ala Ala Leu

20 25 30

Glu Thr Val Ala Ala Glu Glu Ile Leu Gly Glu Trp Lys Gly Asp Asp

35 40 45

Phe Ala Thr Gly His Arg Leu His Glu Lys Leu Ser Ala Ser Arg Trp

50 55 60

Tyr Gly Lys Thr Phe Asn Ser Val Glu Asp Ala Lys Pro Leu Ile Cys

65 70 75 80

Arg Asp Glu Asp Gly Asn Leu Tyr Ser Asp Val Lys Ser Gly Asn Gly

85 90 95

Glu Ala Ser Leu Trp Asn Ile Glu Phe Arg Gly Glu Val Thr Ala Thr

100 105 110

Met Val Tyr Asp Gly Ala Pro Ile Phe Asp His Phe Lys Lys Val Asp

115 120 125

Asp Ser Thr Leu Met Gly Ile Met Asn Gly Lys Ser Ala Leu Val Leu

130 135 140

Asp Gly Gly Gln His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Ala Ala

145 150 155

<210> 120

<211> 474

<212> DNA

<213> 人工_SCH91-3944-R156A_大肠杆菌，经优化的

<400> 120

atgaacttaa atgaagcgcg taccgcattt gcacgtctga gagctgccga gaacggtctg 60

agcccggctg agctggatga agtgtgggca gcgctggaga ctgtggcggc tgaagaaatc 120

ctgggtgagt ggaagggtga cgattttgcg acgggtcacc gtctgcacga gaaactgtcg 180

gcgagccgct ggtatggtaa gaccttcaac tctgttgaag atgcaaagcc gctgatttgc 240

cgtgacgaag atggcaatct gtactccgat gtcaagagcg gtaacggtga ggccagcctg 300

tggaatatcg agtttcgcgg cgaagtcacc gcgacgatgg tttacgatgg tgccccgatc 360

ttcgaccatt tcaaaaaagt tgacgacagc accctgatgg gcattatgaa tggcaaaagc 420

gcgttggtgt tggacggtgg ccagcattac tatttcctgc tggaggcagc gtaa 474

<210> 121

<211> 60

<212> DNA

<213> 整合盒片段1

<400> 121

gcaggcagct ccatttcatg taggtgattt atccctccgg gcggtatttg agactctcgg 60

<210> 122

<211> 60

<212> DNA

<213> 整合盒片段2

<400> 122

actgctgggt actgttcagg cacgatagga aatgcgtcca gcgcatacac cagtcttagc 60

<210> 123

<211> 60

<212> DNA

<213> 整合盒片段3

<400> 123

agtcgacctt acagcgcctg ggactctaca taaacatgca gcgaacatgc tttccaacgc 60

<210> 124

<211> 79

<212> DNA

<213> LEU2 酵母标记物_引物1

<400> 124

aggtgcagtt cgcgtgcaat tataacgtcg tggcaactgt tatcagtcgt accgcgccat 60

tcgactacgt cgtaaggcc 79

<210> 125

<211> 80

<212> DNA

<213> LEU2 酵母标记物_引物2

<400> 125

tcgtggtcaa ggcgtgcaat tctcaacacg agagtgattc ttcggcgttg ttgctgacca 60

tcgacggtcg aggagaactt 80

<210> 126

<211> 85

<212> DNA

<213> AmpR 大肠杆菌标记物_引物1

<400> 126

tggtcagcaa caacgccgaa gaatcactct cgtgttgaga attgcacgcc ttgaccacga 60

cacgttaagg gattttggtc atgag 85

<210> 127

<211> 80

<212> DNA

<213> AmpR 大肠杆菌标记物_引物2

<400> 127

aacgcgtacc ctaagtacgg caccacagtg actatgcagt ccgcactttg ccaatgccaa 60

aaatgtgcgc ggaaccccta 80

<210> 128

<211> 84

<212> DNA

<213> 酵母复制起点_引物1

<400> 128

ttggcattgg caaagtgcgg actgcatagt cactgtggtg ccgtacttag ggtacgcgtt 60

cctgaacgaa gcatctgtgc ttca 84

<210> 129

<211> 85

<212> DNA

<213> 酵母复制起点_引物2

<400> 129

ccgagatgcc aaaggatagg tgctatgttg atgactacga cacagaactg cgggtgacat 60

aatgatagca ttgaaggatg agact 85

<210> 130

<211> 82

<212> DNA

<213> 大肠杆菌复制起点_引物1

<400> 130

atgtcacccg cagttctgtg tcgtagtcat caacatagca cctatccttt ggcatctcgg 60

tgagcaaaag gccagcaaaa gg 82

<210> 131

<211> 81

<212> DNA

<213> 大肠杆菌复制起点_引物2

<400> 131

ctcagatgta cggtgatcgc caccatgtga cggaagctat cctgacagtg tagcaagtgc 60

tgagcgtcag accccgtaga a 81

<210> 132

<211> 60

<212> DNA

<213> 用于酿酒酵母共转化的DNA片段

<400> 132

attcctagtg acggccttgg gaactcgata cacgatgttc agtagaccgc tcacacatgg 60

<210> 133

<211> 1056

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH1_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1056)

<400> 133

atg caa ttc agc atc gga gat gta ctc gcc att gta gat aaa aca atc 48

Met Gln Phe Ser Ile Gly Asp Val Leu Ala Ile Val Asp Lys Thr Ile

1 5 10 15

ctc aac cca ctc gtc gtc agc gca gga ctt ctg tct ctg cac ttt ctc 96

Leu Asn Pro Leu Val Val Ser Ala Gly Leu Leu Ser Leu His Phe Leu

20 25 30

acc aat gac aaa tac gca atc act gcg aat gac ggt cta ttc cct tat 144

Thr Asn Asp Lys Tyr Ala Ile Thr Ala Asn Asp Gly Leu Phe Pro Tyr

35 40 45

caa att agc act cca gac tcg cat cga aaa gcc ctt ttt gca ctt ggc 192

Gln Ile Ser Thr Pro Asp Ser His Arg Lys Ala Leu Phe Ala Leu Gly

50 55 60

ttt ggt cta ctt ctc aga gcc aat cgc tac atg agc aga aaa gct ctg 240

Phe Gly Leu Leu Leu Arg Ala Asn Arg Tyr Met Ser Arg Lys Ala Leu

65 70 75 80

aac aac aac acc gcc gca caa ttc gac tgg aat cgt gag atc atc gtt 288

Asn Asn Asn Thr Ala Ala Gln Phe Asp Trp Asn Arg Glu Ile Ile Val

85 90 95

gtt act ggt gga tct ggt ggt atc ggt gct cag gcc gcg cag aaa ttg 336

Val Thr Gly Gly Ser Gly Gly Ile Gly Ala Gln Ala Ala Gln Lys Leu

100 105 110

gca gaa aga gga tcg aaa gtg att gtt att gat gtg cta cca ctt acc 384

Ala Glu Arg Gly Ser Lys Val Ile Val Ile Asp Val Leu Pro Leu Thr

115 120 125

ttt gac aag ccc aag aat ttg tac cac tat aaa tgt gat ctc aca aac 432

Phe Asp Lys Pro Lys Asn Leu Tyr His Tyr Lys Cys Asp Leu Thr Asn

130 135 140

tac aaa gag ctc caa gaa gtt gcg gct aag atc gaa aga gaa gtt ggc 480

Tyr Lys Glu Leu Gln Glu Val Ala Ala Lys Ile Glu Arg Glu Val Gly

145 150 155 160

act ccg act tgt gta gtt gcg aat gca gga ata tgt cgt gga aag aac 528

Thr Pro Thr Cys Val Val Ala Asn Ala Gly Ile Cys Arg Gly Lys Asn

165 170 175

ata ttc gat gct aca gaa cga gat gtt cag ctt acc ttt gga gtc aac 576

Ile Phe Asp Ala Thr Glu Arg Asp Val Gln Leu Thr Phe Gly Val Asn

180 185 190

aat ctg gga ctt cta tgg aca gcc aaa acc ttt ctc cca tca atg gcc 624

Asn Leu Gly Leu Leu Trp Thr Ala Lys Thr Phe Leu Pro Ser Met Ala

195 200 205

aaa gca aat cat ggc cat ttc ttg atc atc gcc tct caa acc ggc cat 672

Lys Ala Asn His Gly His Phe Leu Ile Ile Ala Ser Gln Thr Gly His

210 215 220

cta gcg acc gca gga gta gtc gac tat gca gcg acc aaa gca gca gca 720

Leu Ala Thr Ala Gly Val Val Asp Tyr Ala Ala Thr Lys Ala Ala Ala

225 230 235 240

atc gcc ata tat gaa ggt cta caa aca gag atg aag cac ttt tat aaa 768

Ile Ala Ile Tyr Glu Gly Leu Gln Thr Glu Met Lys His Phe Tyr Lys

245 250 255

gcg cct gct gta cgc gta tct tgt atc tcc cca tcc gcg gtc aag acg 816

Ala Pro Ala Val Arg Val Ser Cys Ile Ser Pro Ser Ala Val Lys Thr

260 265 270

aag atg ttt gca ggc atc aag act gga ggc aat ttc ttc atg cca atg 864

Lys Met Phe Ala Gly Ile Lys Thr Gly Gly Asn Phe Phe Met Pro Met

275 280 285

ttg acg cct gat gat ctt gga gac ctg att gca aag act ttg tgg gac 912

Leu Thr Pro Asp Asp Leu Gly Asp Leu Ile Ala Lys Thr Leu Trp Asp

290 295 300

ggt gtg gca gtc aat att ttg agc cct gcg gcg gca tat atc agc ccg 960

Gly Val Ala Val Asn Ile Leu Ser Pro Ala Ala Ala Tyr Ile Ser Pro

305 310 315 320

ccc acg aga gct ttg cca gat tgg atg agg gtt ggc atg cag gat gct 1008

Pro Thr Arg Ala Leu Pro Asp Trp Met Arg Val Gly Met Gln Asp Ala

325 330 335

ggt gct gag atc atg acg gaa ttg act cct cat aag ccg ttg gag tag 1056

Gly Ala Glu Ile Met Thr Glu Leu Thr Pro His Lys Pro Leu Glu

340 345 350

<210> 134

<211> 351

<212> PRT

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH1_wt

<400> 134

Met Gln Phe Ser Ile Gly Asp Val Leu Ala Ile Val Asp Lys Thr Ile

1 5 10 15

Leu Asn Pro Leu Val Val Ser Ala Gly Leu Leu Ser Leu His Phe Leu

20 25 30

Thr Asn Asp Lys Tyr Ala Ile Thr Ala Asn Asp Gly Leu Phe Pro Tyr

35 40 45

Gln Ile Ser Thr Pro Asp Ser His Arg Lys Ala Leu Phe Ala Leu Gly

50 55 60

Phe Gly Leu Leu Leu Arg Ala Asn Arg Tyr Met Ser Arg Lys Ala Leu

65 70 75 80

Asn Asn Asn Thr Ala Ala Gln Phe Asp Trp Asn Arg Glu Ile Ile Val

85 90 95

Val Thr Gly Gly Ser Gly Gly Ile Gly Ala Gln Ala Ala Gln Lys Leu

100 105 110

Ala Glu Arg Gly Ser Lys Val Ile Val Ile Asp Val Leu Pro Leu Thr

115 120 125

Phe Asp Lys Pro Lys Asn Leu Tyr His Tyr Lys Cys Asp Leu Thr Asn

130 135 140

Tyr Lys Glu Leu Gln Glu Val Ala Ala Lys Ile Glu Arg Glu Val Gly

145 150 155 160

Thr Pro Thr Cys Val Val Ala Asn Ala Gly Ile Cys Arg Gly Lys Asn

165 170 175

Ile Phe Asp Ala Thr Glu Arg Asp Val Gln Leu Thr Phe Gly Val Asn

180 185 190

Asn Leu Gly Leu Leu Trp Thr Ala Lys Thr Phe Leu Pro Ser Met Ala

195 200 205

Lys Ala Asn His Gly His Phe Leu Ile Ile Ala Ser Gln Thr Gly His

210 215 220

Leu Ala Thr Ala Gly Val Val Asp Tyr Ala Ala Thr Lys Ala Ala Ala

225 230 235 240

Ile Ala Ile Tyr Glu Gly Leu Gln Thr Glu Met Lys His Phe Tyr Lys

245 250 255

Ala Pro Ala Val Arg Val Ser Cys Ile Ser Pro Ser Ala Val Lys Thr

260 265 270

Lys Met Phe Ala Gly Ile Lys Thr Gly Gly Asn Phe Phe Met Pro Met

275 280 285

Leu Thr Pro Asp Asp Leu Gly Asp Leu Ile Ala Lys Thr Leu Trp Asp

290 295 300

Gly Val Ala Val Asn Ile Leu Ser Pro Ala Ala Ala Tyr Ile Ser Pro

305 310 315 320

Pro Thr Arg Ala Leu Pro Asp Trp Met Arg Val Gly Met Gln Asp Ala

325 330 335

Gly Ala Glu Ile Met Thr Glu Leu Thr Pro His Lys Pro Leu Glu

340 345 350

<210> 135

<211> 1056

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH1_酵母，经优化的

<400> 135

atgcaattct ctatcggtga cgttttggct atcgttgaca agactatctt gaacccattg 60

gttgtttctg ctggtttgtt gtctttgcac ttcttgacta acgacaagta cgctatcact 120

gctaacgacg gtttgttccc ataccaaatc tctactccag actctcacag aaaggctttg 180

ttcgctttgg gtttcggttt gttgttgaga gctaacagat acatgtctag aaaggctttg 240

aacaacaaca ctgctgctca attcgactgg aacagagaaa tcatcgttgt tactggtggt 300

tctggtggta tcggtgctca agctgctcaa aagttggctg aaagaggttc taaggttatc 360

gttatcgacg ttttgccatt gactttcgac aagccaaaga acttgtacca ctacaagtgt 420

gacttgacta actacaagga attgcaagaa gttgctgcta agatcgaaag agaagttggt 480

actccaactt gtgttgttgc taacgctggt atctgtagag gtaagaacat cttcgacgct 540

actgaaagag acgttcaatt gactttcggt gttaacaact tgggtttgtt gtggactgct 600

aagactttct tgccatctat ggctaaggct aaccacggtc acttcttgat catcgcttct 660

caaactggtc acttggctac tgctggtgtt gttgactacg ctgctactaa ggctgctgct 720

atcgctatct acgaaggttt gcaaactgaa atgaagcact tctacaaggc tccagctgtt 780

agagtttctt gtatctctcc atctgctgtt aagactaaga tgttcgctgg tatcaagact 840

ggtggtaact tcttcatgcc aatgttgact ccagacgact tgggtgactt gatcgctaag 900

actttgtggg acggtgttgc tgttaacatc ttgtctccag ctgctgctta catctctcca 960

ccaactagag ctttgccaga ctggatgaga gttggtatgc aagacgctgg tgctgaaatc 1020

atgactgaat tgactccaca caagccattg gaataa 1056

<210> 136

<211> 1023

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH2_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1023)

<400> 136

atg gcg acg ata ccg acc aca atg acc gca gcg aca atc gtt gaa ttc 48

Met Ala Thr Ile Pro Thr Thr Met Thr Ala Ala Thr Ile Val Glu Phe

1 5 10 15

aac aag ccc atc gtg cta aag aac gac ata cca gtt cca gac cta cca 96

Asn Lys Pro Ile Val Leu Lys Asn Asp Ile Pro Val Pro Asp Leu Pro

20 25 30

gag aac aag att ctt gtt agg ata gct gca aca tca tta tgc tca agc 144

Glu Asn Lys Ile Leu Val Arg Ile Ala Ala Thr Ser Leu Cys Ser Ser

35 40 45

gac ttg atg gcg tac aaa ggt tac atg gat ttc atg acc aag acg cct 192

Asp Leu Met Ala Tyr Lys Gly Tyr Met Asp Phe Met Thr Lys Thr Pro

50 55 60

tac tgc gga gga cac gag ccc gtg gga acg gtg gtg aaa gtc ggt tct 240

Tyr Cys Gly Gly His Glu Pro Val Gly Thr Val Val Lys Val Gly Ser

65 70 75 80

tcg gta aaa ggc tac tcg gtt gga gat cgc gtt ggc ata ttg atg ttc 288

Ser Val Lys Gly Tyr Ser Val Gly Asp Arg Val Gly Ile Leu Met Phe

85 90 95

ttc gat acc tgt gga aca tgc aat gac tgc ttc tcg ggt gaa cat cgc 336

Phe Asp Thr Cys Gly Thr Cys Asn Asp Cys Phe Ser Gly Glu His Arg

100 105 110

ttt tgc agc aca aag aaa atc cta ggc ttc gcg gaa agc tgg gga gga 384

Phe Cys Ser Thr Lys Lys Ile Leu Gly Phe Ala Glu Ser Trp Gly Gly

115 120 125

ttt tca gaa tac gca ctt gct gat ccc atc tcg acc atc aag ctc ccg 432

Phe Ser Glu Tyr Ala Leu Ala Asp Pro Ile Ser Thr Ile Lys Leu Pro

130 135 140

gaa ggg ttg agt ttc gat gta gca gcg cct ttg ttc tgc gct ggg atc 480

Glu Gly Leu Ser Phe Asp Val Ala Ala Pro Leu Phe Cys Ala Gly Ile

145 150 155 160

aca gcc tac agc gcg ctg ttg aag gtg aag agt cat gcc ggt caa ctc 528

Thr Ala Tyr Ser Ala Leu Leu Lys Val Lys Ser His Ala Gly Gln Leu

165 170 175

atc aat atc atc ggc tgt gga ggc gta gga cat atg gct ata ttg tat 576

Ile Asn Ile Ile Gly Cys Gly Gly Val Gly His Met Ala Ile Leu Tyr

180 185 190

gcg aga gct atg gga tat cga gtt cat gtt tac gat ata tcc gat tcc 624

Ala Arg Ala Met Gly Tyr Arg Val His Val Tyr Asp Ile Ser Asp Ser

195 200 205

aag gtc gaa ttt gca ctc ttt ctc ggc gca gat gca gcc ttc aac act 672

Lys Val Glu Phe Ala Leu Phe Leu Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asn Thr

210 215 220

ctg acc tat acc ggt cca ata gaa tca gca tct tct acg tta gtc gta 720

Leu Thr Tyr Thr Gly Pro Ile Glu Ser Ala Ser Ser Thr Leu Val Val

225 230 235 240

agt gga gca aat gca gca tac cag agc gct cta ggc atg acg agt aat 768

Ser Gly Ala Asn Ala Ala Tyr Gln Ser Ala Leu Gly Met Thr Ser Asn

245 250 255

cat gga gtc gtc ctg ggt att gga cta cca gcg gga ggt gtg gtc att 816

His Gly Val Val Leu Gly Ile Gly Leu Pro Ala Gly Gly Val Val Ile

260 265 270

gat gtg cca gct tgg ggt acg aaa ggc gtt aca ttc gtc cca tgc aac 864

Asp Val Pro Ala Trp Gly Thr Lys Gly Val Thr Phe Val Pro Cys Asn

275 280 285

aca ggc tcg aaa cag gaa cta gaa gaa gcg cta gaa ttg gct gtg aga 912

Thr Gly Ser Lys Gln Glu Leu Glu Glu Ala Leu Glu Leu Ala Val Arg

290 295 300

aag gat atc aaa cca tta ctt gac atc cgc cat atc gac aca att aat 960

Lys Asp Ile Lys Pro Leu Leu Asp Ile Arg His Ile Asp Thr Ile Asn

305 310 315 320

gag gca tat caa gat ttg gcg gag gga aag atc aat ggg agg att gtt 1008

Glu Ala Tyr Gln Asp Leu Ala Glu Gly Lys Ile Asn Gly Arg Ile Val

325 330 335

ttc cac ttc gag tga 1023

Phe His Phe Glu

340

<210> 137

<211> 340

<212> PRT

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH2_wt

<400> 137

Met Ala Thr Ile Pro Thr Thr Met Thr Ala Ala Thr Ile Val Glu Phe

1 5 10 15

Asn Lys Pro Ile Val Leu Lys Asn Asp Ile Pro Val Pro Asp Leu Pro

20 25 30

Glu Asn Lys Ile Leu Val Arg Ile Ala Ala Thr Ser Leu Cys Ser Ser

35 40 45

Asp Leu Met Ala Tyr Lys Gly Tyr Met Asp Phe Met Thr Lys Thr Pro

50 55 60

Tyr Cys Gly Gly His Glu Pro Val Gly Thr Val Val Lys Val Gly Ser

65 70 75 80

Ser Val Lys Gly Tyr Ser Val Gly Asp Arg Val Gly Ile Leu Met Phe

85 90 95

Phe Asp Thr Cys Gly Thr Cys Asn Asp Cys Phe Ser Gly Glu His Arg

100 105 110

Phe Cys Ser Thr Lys Lys Ile Leu Gly Phe Ala Glu Ser Trp Gly Gly

115 120 125

Phe Ser Glu Tyr Ala Leu Ala Asp Pro Ile Ser Thr Ile Lys Leu Pro

130 135 140

Glu Gly Leu Ser Phe Asp Val Ala Ala Pro Leu Phe Cys Ala Gly Ile

145 150 155 160

Thr Ala Tyr Ser Ala Leu Leu Lys Val Lys Ser His Ala Gly Gln Leu

165 170 175

Ile Asn Ile Ile Gly Cys Gly Gly Val Gly His Met Ala Ile Leu Tyr

180 185 190

Ala Arg Ala Met Gly Tyr Arg Val His Val Tyr Asp Ile Ser Asp Ser

195 200 205

Lys Val Glu Phe Ala Leu Phe Leu Gly Ala Asp Ala Ala Phe Asn Thr

210 215 220

Leu Thr Tyr Thr Gly Pro Ile Glu Ser Ala Ser Ser Thr Leu Val Val

225 230 235 240

Ser Gly Ala Asn Ala Ala Tyr Gln Ser Ala Leu Gly Met Thr Ser Asn

245 250 255

His Gly Val Val Leu Gly Ile Gly Leu Pro Ala Gly Gly Val Val Ile

260 265 270

Asp Val Pro Ala Trp Gly Thr Lys Gly Val Thr Phe Val Pro Cys Asn

275 280 285

Thr Gly Ser Lys Gln Glu Leu Glu Glu Ala Leu Glu Leu Ala Val Arg

290 295 300

Lys Asp Ile Lys Pro Leu Leu Asp Ile Arg His Ile Asp Thr Ile Asn

305 310 315 320

Glu Ala Tyr Gln Asp Leu Ala Glu Gly Lys Ile Asn Gly Arg Ile Val

325 330 335

Phe His Phe Glu

340

<210> 138

<211> 1023

<212> DNA

<213> 丝状酵母(Hyphozyma roseonigra)_SCH23-ADH2_酵母，经优化的

<400> 138

atggctacta tcccaactac tatgactgct gctactatcg ttgaattcaa caagccaatc 60

gttttgaaga acgacatccc agttccagac ttgccagaaa acaagatctt ggttagaatc 120

gctgctactt ctttgtgttc ttctgacttg atggcttaca agggttacat ggacttcatg 180

actaagactc catactgtgg tggtcacgaa ccagttggta ctgttgttaa ggttggttct 240

tctgttaagg gttactctgt tggtgacaga gttggtatct tgatgttctt cgacacttgt 300

ggtacttgta acgactgttt ctctggtgaa cacagattct gttctactaa gaagatcttg 360

ggtttcgctg aatcttgggg tggtttctct gaatacgctt tggctgaccc aatctctact 420

atcaagttgc cagaaggttt gtctttcgac gttgctgctc cattgttctg tgctggtatc 480

actgcttact ctgctttgtt gaaggttaag tctcacgctg gtcaattgat caacatcatc 540

ggttgtggtg gtgttggtca catggctatc ttgtacgcta gagctatggg ttacagagtt 600

cacgtttacg acatctctga ctctaaggtt gaattcgctt tgttcttggg tgctgacgct 660

gctttcaaca ctttgactta cactggtcca atcgaatctg cttcttctac tttggttgtt 720

tctggtgcta acgctgctta ccaatctgct ttgggtatga cttctaacca cggtgttgtt 780

ttgggtatcg gtttgccagc tggtggtgtt gttatcgacg ttccagcttg gggtactaag 840

ggtgttactt tcgttccatg taacactggt tctaagcaag aattggaaga agctttggaa 900

ttggctgtta gaaaggacat caagccattg ttggacatca gacacatcga cactatcaac 960

gaagcttacc aagacttggc tgaaggtaag atcaacggta gaatcgtttt ccacttcgaa 1020

taa 1023

<210> 139

<211> 1116

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH1_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1116)

<400> 139

atg cca acc cct atc ttt ggc gcc cga gag ggt ttc act atc gac tcc 48

Met Pro Thr Pro Ile Phe Gly Ala Arg Glu Gly Phe Thr Ile Asp Ser

1 5 10 15

gta ctg agc atc ctg gat gcg acc gta ctt aac ccc tgg ttt acc ggc 96

Val Leu Ser Ile Leu Asp Ala Thr Val Leu Asn Pro Trp Phe Thr Gly

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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Leu Leu Thr Thr Val Cys Val Gly Leu Ala Ile Arg Thr Asn Arg Arg

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100 105 110

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Trp Lys Lys Glu Ile Val Val Val Thr Gly Gly Ala Ala Gly Phe Gly

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Ala Asp Ile Val Gln Gln Leu Asp Thr Arg Gly Ile Gln Val Val Val

130 135 140

ttg gat gtg gga tcc ctc acc tat agg cct tcg agc aga gtt cat tat 480

Leu Asp Val Gly Ser Leu Thr Tyr Arg Pro Ser Ser Arg Val His Tyr

145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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225 230 235 240

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Val Ser Ser Ala Thr Ala Tyr Ala Gln Ala Cys Ser Gly Val Ser Tyr

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260 265 270

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275 280 285

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Ala Pro Ser Phe Met Ala Pro Ala Leu His Pro Ser Thr Val Ala Glu

305 310 315 320

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<210> 140

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<212> PRT

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH1_wt

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Val Leu Ser Ile Leu Asp Ala Thr Val Leu Asn Pro Trp Phe Thr Gly

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Trp Lys Lys Glu Ile Val Val Val Thr Gly Gly Ala Ala Gly Phe Gly

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Ala Asp Ile Val Gln Gln Leu Asp Thr Arg Gly Ile Gln Val Val Val

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Tyr Lys Cys Asp Val Ser Asn Pro Gln Asp Val Ala Ser Val Ala Lys

165 170 175

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Gly Val Phe Arg Gly Ala Thr Ile Leu Ser Thr Thr Pro Arg Asp Leu

195 200 205

Asp Met Thr Tyr Asp Ile Asn Val Lys Ala His Tyr His Leu Thr Lys

210 215 220

Ala Phe Leu Pro Asn Met Ile Ser Lys Asn His Gly His Ile Val Thr

225 230 235 240

Val Ser Ser Ala Thr Ala Tyr Ala Gln Ala Cys Ser Gly Val Ser Tyr

245 250 255

Cys Ser Ser Lys Ala Ala Ile Leu Ser Phe His Glu Gly Leu Ser Glu

260 265 270

Glu Ile Leu Trp Ile Tyr Lys Ala Pro Lys Val Arg Thr Ser Val Ile

275 280 285

Cys Pro Gly His Val Asn Thr Ala Met Phe Thr Gly Ile Gly Ala Ala

290 295 300

Ala Pro Ser Phe Met Ala Pro Ala Leu His Pro Ser Thr Val Ala Glu

305 310 315 320

Thr Ile Val Asp Val Leu Leu Ser Cys Glu Ser Gln His Val Leu Met

325 330 335

Pro Ala Ala Met His Met Ser Val Ala Gly Arg Ala Leu Pro Thr Trp

340 345 350

Phe Phe Arg Gly Leu Leu Ala Ser Gly Lys Asp Thr Met Gly Ser Val

355 360 365

Val Arg Arg

370

<210> 141

<211> 1116

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH1_酵母，经优化的

<400> 141

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ttggacgcta ctgttttgaa cccatggttc actggtgttt gtttgatcgc tgtttgtgct 120

agagacagaa ctatcactta cccagactgg ccagctgctt tggaccaagt tttgccattc 180

ttgtctcaaa tgtggagaga aactgttaga ccaactttcg gtgacagaaa cgttttgcac 240

ttgttgacta ctgtttgtgt tggtttggct atcagaacta acagaagaat gtctagaggt 300

gctagaaaca actgggtttg ggacacttct tacgactgga agaaggaaat cgttgttgtt 360

actggtggtg ctgctggttt cggtgctgac atcgttcaac aattggacac tagaggtatc 420

caagttgttg ttttggacgt tggttctttg acttacagac catcttctag agttcactac 480

tacaagtgtg acgtttctaa cccacaagac gttgcttctg ttgctaaggc tatcgtttct 540

aacgttggtc acccaactat cttggttaac aacgctggtg ttttcagagg tgctactatc 600

ttgtctacta ctccaagaga cttggacatg acttacgaca tcaacgttaa ggctcactac 660

cacttgacta aggctttctt gccaaacatg atctctaaga accacggtca catcgttact 720

gtttcttctg ctactgctta cgctcaagct tgttctggtg tttcttactg ttcttctaag 780

gctgctatct tgtctttcca cgaaggtttg tctgaagaaa tcttgtggat ctacaaggct 840

ccaaaggtta gaacttctgt tatctgtcca ggtcacgtta acactgctat gttcactggt 900

atcggtgctg ctgctccatc tttcatggct ccagctttgc acccatctac tgttgctgaa 960

actatcgttg acgttttgtt gtcttgtgaa tctcaacacg ttttgatgcc agctgctatg 1020

cacatgtctg ttgctggtag agctttgcca acttggttct tcagaggttt gttggcttct 1080

ggtaaggaca ctatgggttc tgttgttaga agataa 1116

<210> 142

<211> 1023

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH2_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1023)

<400> 142

atg gag cca ccc cag act atg aag gcc gcc ttg gtc acc gca tac aac 48

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Glu Pro Leu Ile Val Lys Asp Val Ala Thr Pro Glu Pro Gly Pro Gly

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Gln Ile Leu Val Arg Val Lys Ala Ser Ser Leu Cys Met Ser Asp Ile

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Gly Gly Tyr Val Gly Ala Met Gly Glu Phe Ile Thr Leu Pro Tyr Cys

50 55 60

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65 70 75 80

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Ser Gly Phe Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Tyr Met Ala Ala Leu Asp

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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180 185 190

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Ser Gly Val Asn Ala Ala Tyr Asp Phe Ala Ile Lys Ala Thr Leu Ala

245 250 255

ggt gga cgt atc att gcg att ggg cac cca cat tcg gcg act ccg atg 816

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260 265 270

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Val Tyr Lys Phe

340

<210> 143

<211> 340

<212> PRT

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum)_SCH24-ADH2_wt

<400> 143

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Lys Leu Lys Leu Ala Glu Glu Cys Gly Ala Ser Lys Ala Phe Leu Ser

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275 280 285

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290 295 300

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340

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<211> 1023

<212> DNA

<213> 巨大线黑粉菌(Filobasidium magnum) _SCH24-ADH2_酵母，经优化的

<400> 144

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tctcaccaat acggtggttt ctctgaatac tctttggctt ctccatactc tatggctaag 420

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ttcggtgctt tgaagttgtt gtctaagtac caagctccag gtggtatcat caacgttttg 540

ggttgtggtg gtgttggtca cttggttatc aagttcgctg ttgctttggg ttacactgtt 600

cacgctttcg acatcaacga cggtaagttg aagttggctg aagaatgtgg tgcttctaag 660

gctttcttgt ctaagggtga cccaactcaa gctatgatgg ctgaatctac tatcgttatc 720

tctggtgtta acgctgctta cgacttcgct atcaaggcta ctttggctgg tggtagaatc 780

atcgctatcg gtcacccaca ctctgctact ccaatgccat tgggttctat gatcatcaac 840

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aaccaaggtt acaagtctgt tatgactggt gctgttgaag gtagattggt ttacaagttc 1020

taa 1023

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<212> DNA

<213> 红球菌属(Rhodococcus sp.)_RrhSecADH_wt (NZ_AZHI01000124.1 6627-7664(+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1038)

<400> 145

atg aaa gcc gtc cag tac acc gag atc ggc tcc gag ccg gtc gtt gtc 48

Met Lys Ala Val Gln Tyr Thr Glu Ile Gly Ser Glu Pro Val Val Val

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gac atc ccc acc ccg acg ccc ggg ccg ggt gag atc ctg ctg aag gtc 96

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Val Gly Thr Val Ala Glu Leu Gly Glu Gly Val Thr Gly Phe Gly Val

65 70 75 80

ggg gac gcc gtc gcc gtg tac ggg ccg tgg ggc tgc ggt gcg tgc cac 288

Gly Asp Ala Val Ala Val Tyr Gly Pro Trp Gly Cys Gly Ala Cys His

85 90 95

gcc tgc gcg cgc ggc cgg gag aac tac tgc acc cgc gcc gcc gac ctg 336

Ala Cys Ala Arg Gly Arg Glu Asn Tyr Cys Thr Arg Ala Ala Asp Leu

100 105 110

ggc atc acg cca ccc ggt ctc ggc tcg ccc gga tcg atg gcc gag tac 384

Gly Ile Thr Pro Pro Gly Leu Gly Ser Pro Gly Ser Met Ala Glu Tyr

115 120 125

atg atc gtc gat tcg gcg cgc cac ctc gtc ccg atc gga gac ctc gac 432

Met Ile Val Asp Ser Ala Arg His Leu Val Pro Ile Gly Asp Leu Asp

130 135 140

ccg gtc gcc gcg gcg ccg ctc acc gac gcc ggt ctg acg ccg tac cac 480

Pro Val Ala Ala Ala Pro Leu Thr Asp Ala Gly Leu Thr Pro Tyr His

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gcg atc tcc cgg gtc ctg ccg ctg ctg ggg ccg ggc tcg acg gcc gtc 528

Ala Ile Ser Arg Val Leu Pro Leu Leu Gly Pro Gly Ser Thr Ala Val

165 170 175

gtc atc ggt gtc ggc ggg ctc ggc cac gtc ggc atc cag atc ctg cgc 576

Val Ile Gly Val Gly Gly Leu Gly His Val Gly Ile Gln Ile Leu Arg

180 185 190

gcc gtc agc gcg gcc cgt gtg atc gcc gtc gac ctc gac gac gac cgt 624

Ala Val Ser Ala Ala Arg Val Ile Ala Val Asp Leu Asp Asp Asp Arg

195 200 205

ctc gcc ctc gcc cgc gag gtc ggc gcc gac gcg gcg gtg aag tcg ggc 672

Leu Ala Leu Ala Arg Glu Val Gly Ala Asp Ala Ala Val Lys Ser Gly

210 215 220

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Ala Gly Ala Ala Asp Ala Ile Arg Glu Leu Thr Gly Gly Gln Gly Ala

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Gln Gln Val Val Ala Val Asp Gly His Ile Ser Val Val Gly Ile His

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Ala Gly Ala His Ala Lys Val Gly Phe Phe Met Ile Pro Phe Gly Ala

275 280 285

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Ser Val Val Thr Pro Tyr Trp Gly Thr Arg Ser Glu Leu Met Glu Val

290 295 300

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Val Ala Leu Ala Arg Ala Gly Arg Leu Asp Ile His Thr Glu Thr Phe

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acc ctc gac gag ggg ccg gcg gcg tac cgg cgg ctg cgc gag ggc agc 1008

Thr Leu Asp Glu Gly Pro Ala Ala Tyr Arg Arg Leu Arg Glu Gly Ser

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<400> 146

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100 105 110

Gly Ile Thr Pro Pro Gly Leu Gly Ser Pro Gly Ser Met Ala Glu Tyr

115 120 125

Met Ile Val Asp Ser Ala Arg His Leu Val Pro Ile Gly Asp Leu Asp

130 135 140

Pro Val Ala Ala Ala Pro Leu Thr Asp Ala Gly Leu Thr Pro Tyr His

145 150 155 160

Ala Ile Ser Arg Val Leu Pro Leu Leu Gly Pro Gly Ser Thr Ala Val

165 170 175

Val Ile Gly Val Gly Gly Leu Gly His Val Gly Ile Gln Ile Leu Arg

180 185 190

Ala Val Ser Ala Ala Arg Val Ile Ala Val Asp Leu Asp Asp Asp Arg

195 200 205

Leu Ala Leu Ala Arg Glu Val Gly Ala Asp Ala Ala Val Lys Ser Gly

210 215 220

Ala Gly Ala Ala Asp Ala Ile Arg Glu Leu Thr Gly Gly Gln Gly Ala

225 230 235 240

Thr Ala Val Phe Asp Phe Val Gly Ala Gln Ser Thr Ile Asp Thr Ala

245 250 255

Gln Gln Val Val Ala Val Asp Gly His Ile Ser Val Val Gly Ile His

260 265 270

Ala Gly Ala His Ala Lys Val Gly Phe Phe Met Ile Pro Phe Gly Ala

275 280 285

Ser Val Val Thr Pro Tyr Trp Gly Thr Arg Ser Glu Leu Met Glu Val

290 295 300

Val Ala Leu Ala Arg Ala Gly Arg Leu Asp Ile His Thr Glu Thr Phe

305 310 315 320

Thr Leu Asp Glu Gly Pro Ala Ala Tyr Arg Arg Leu Arg Glu Gly Ser

325 330 335

Ile Arg Gly Arg Gly Val Val Val Pro

340 345

<210> 147

<211> 1038

<212> DNA

<213> 红球菌属(Rhodococcus sp.)_RrhSecADH_大肠杆菌，经优化的

<400> 147

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agcccgggta gcatggcaga gtacatgatc gttgatagcg cacgtcatct ggtgccgatt 420

ggcgatttgg acccggtcgc ggcagccccg ctgactgacg cgggcttgac cccgtatcat 480

gcaatctccc gtgtactgcc actgctcggt ccgggcagca ccgctgtggt tatcggcgtc 540

ggtggcctgg gtcatgttgg catccagatt ctgcgtgcag tcagcgcggc acgcgtgatc 600

gcggttgatc tggacgacga tcgcctggcc ctggcgcgtg aggtcggtgc ggatgctgcg 660

gttaagtctg gtgccggtgc agcggatgcg attcgtgagc tgacgggtgg ccagggtgcg 720

accgccgtgt ttgatttcgt tggcgcgcag agcaccattg atacggcgca acaagtcgtt 780

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tttttcatga tcccgtttgg tgctagcgtt gttaccccgt attggggcac gcgcagcgag 900

ctgatggaag tcgtggcttt ggcgcgtgcg ggtcgtctgg acattcacac cgagactttc 960

accttggacg aaggcccggc agcgtatcgt cgtctgcgcg agggtagcat tcgtggccgt 1020

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<220>

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<400> 148

atg aag acc aaa gct gct gta ctg ctc gag ccc gga aag cct ttc gag 48

Met Lys Thr Lys Ala Ala Val Leu Leu Glu Pro Gly Lys Pro Phe Glu

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atc atg gaa ctc gac ctc gac ggc ccg ggt gtg ggt gag gta ctg atc 96

Ile Met Glu Leu Asp Leu Asp Gly Pro Gly Val Gly Glu Val Leu Ile

20 25 30

aag tac acc gct gcc gga ctg tgc cat tcg gat ctg cac ctg acc gac 144

Lys Tyr Thr Ala Ala Gly Leu Cys His Ser Asp Leu His Leu Thr Asp

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ggt gat ctc ccg ccg cgt tac ccg atc gtc ggc gga cac gaa ggc tcg 192

Gly Asp Leu Pro Pro Arg Tyr Pro Ile Val Gly Gly His Glu Gly Ser

50 55 60

ggc atc atc gaa gag gtc ggc cca ggc gtc acg aag gtc aag ccg ggc 240

Gly Ile Ile Glu Glu Val Gly Pro Gly Val Thr Lys Val Lys Pro Gly

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gac cat gtc gtg tgt agc ttc atc ccc aac tgc ggc acc tgt cgc tac 288

Asp His Val Val Cys Ser Phe Ile Pro Asn Cys Gly Thr Cys Arg Tyr

85 90 95

tgc tcg acc ggt cgc cag aac ctc tgc gac atg ggt gcc acc atc ctc 336

Cys Ser Thr Gly Arg Gln Asn Leu Cys Asp Met Gly Ala Thr Ile Leu

100 105 110

gaa ggc tcg atg ccc gac ggt tcc ttc cgt ttc cac ggc aac gga atg 384

Glu Gly Ser Met Pro Asp Gly Ser Phe Arg Phe His Gly Asn Gly Met

115 120 125

gat ttc ggc gga atg tgc atg ttg gga acg ttc tcc gag cgc gcc acc 432

Asp Phe Gly Gly Met Cys Met Leu Gly Thr Phe Ser Glu Arg Ala Thr

130 135 140

att tct cag cac tcg gta gtc aag atc gac gac tgg ctt ccc ttg gag 480

Ile Ser Gln His Ser Val Val Lys Ile Asp Asp Trp Leu Pro Leu Glu

145 150 155 160

aca gcg gtg gtc gtc ggc tgc ggc gtg cct tcg ggt tgg gga acg gca 528

Thr Ala Val Val Val Gly Cys Gly Val Pro Ser Gly Trp Gly Thr Ala

165 170 175

gta aat gcc ggt aac ctt cgc gcc ggt gac acc gct gtg atc tac ggc 576

Val Asn Ala Gly Asn Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Ile Tyr Gly

180 185 190

atc ggt ggt ctc ggc atc aac gcc gtc cag ggc gcc gtt tcg gcc ggc 624

Ile Gly Gly Leu Gly Ile Asn Ala Val Gln Gly Ala Val Ser Ala Gly

195 200 205

tgc aag tac gtc gtt gtg gtc gat ccg gtt gct ctc aag cgt gag acc 672

Cys Lys Tyr Val Val Val Val Asp Pro Val Ala Leu Lys Arg Glu Thr

210 215 220

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Ala Leu Lys Phe Gly Ala Thr His Ala Phe Ala Asp Ala Glu Ser Ala

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ctc atc ctt gtc ggc acc gtc gac gag gac gtg gtc agt gca gcg acg 816

Leu Ile Leu Val Gly Thr Val Asp Glu Asp Val Val Ser Ala Ala Thr

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gca gtg atc ggc aag ggt ggc acc gtg gtg atc acg gga ctc gcc gac 864

Ala Val Ile Gly Lys Gly Gly Thr Val Val Ile Thr Gly Leu Ala Asp

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ccc gcc aag ctg acc gtt cac gtg tcg ggt acc gac ctg acg ctg aat 912

Pro Ala Lys Leu Thr Val His Val Ser Gly Thr Asp Leu Thr Leu Asn

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cag aag acg atc aag ggc acg ttg ttc ggg tcc atg aat ccg cag tac 960

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gac atc gtg cga ctg ctg cgt ctc tac gat gcc ggt cag ctc aag ctc 1008

Asp Ile Val Arg Leu Leu Arg Leu Tyr Asp Ala Gly Gln Leu Lys Leu

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Met Lys Thr Lys Ala Ala Val Leu Leu Glu Pro Gly Lys Pro Phe Glu

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Asp Phe Gly Gly Met Cys Met Leu Gly Thr Phe Ser Glu Arg Ala Thr

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Ile Ser Gln His Ser Val Val Lys Ile Asp Asp Trp Leu Pro Leu Glu

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Thr Ala Val Val Val Gly Cys Gly Val Pro Ser Gly Trp Gly Thr Ala

165 170 175

Val Asn Ala Gly Asn Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Ile Tyr Gly

180 185 190

Ile Gly Gly Leu Gly Ile Asn Ala Val Gln Gly Ala Val Ser Ala Gly

195 200 205

Cys Lys Tyr Val Val Val Val Asp Pro Val Ala Leu Lys Arg Glu Thr

210 215 220

Ala Leu Lys Phe Gly Ala Thr His Ala Phe Ala Asp Ala Glu Ser Ala

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Ala Ala Lys Val Asn Glu Leu Thr Trp Gly Gln Gly Ala Asp Ala Ala

245 250 255

Leu Ile Leu Val Gly Thr Val Asp Glu Asp Val Val Ser Ala Ala Thr

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Ala Val Ile Gly Lys Gly Gly Thr Val Val Ile Thr Gly Leu Ala Asp

275 280 285

Pro Ala Lys Leu Thr Val His Val Ser Gly Thr Asp Leu Thr Leu Asn

290 295 300

Gln Lys Thr Ile Lys Gly Thr Leu Phe Gly Ser Met Asn Pro Gln Tyr

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Asp Ile Val Arg Leu Leu Arg Leu Tyr Asp Ala Gly Gln Leu Lys Leu

325 330 335

Asp Glu Leu Ile Thr Asn Thr Tyr Ser Leu Glu Asp Val Asn Lys Gly

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Tyr Gln Asp Leu Arg Asp Gly Lys Asn Ile Arg Gly Val Ile Ile His

355 360 365

Asp Lys

370

<210> 150

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<212> DNA

<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-00043_大肠杆菌，经优化的

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gatctggacg gtccgggtgt cggtgaagtg ctgatcaagt acaccgcagc gggcttgtgc 120

cactctgatc tgcacctgac cgacggcgac ttgccgccac gttacccgat tgtgggtggc 180

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gatcacgtcg tgtgctcttt catcccgaat tgtggtacgt gccgctattg tagcacgggt 300

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atg aag gca gcc cag ctc atg ggg ccc ggg ctc ctg gaa atc aac gac 48

Met Lys Ala Ala Gln Leu Met Gly Pro Gly Leu Leu Glu Ile Asn Asp

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Lys Met Arg Glu Glu Pro Leu Thr Ile Gly His Glu Ile Ala Gly Thr

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Gly Val Val Tyr Leu Cys Trp Ser Cys Gly Gln Cys Arg Glu Cys Met

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Pro Cys Pro Gly Leu Gly Pro Glu Gly Gly Met Ala Glu Tyr Val Lys

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Gly Ala Arg Glu His Leu Gln Pro Gly Ala Thr Ala Val Val Ile Gly

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gtc ggc gga ctc ggt cac gtt gca gta cag ata ctt cgc gcg atc agt 576

Val Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Gln Ile Leu Arg Ala Ile Ser

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Ala Val Arg Ile Ile Ala Val Asp Val Gly Gln Asp Gln Leu Asp Leu

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Phe Asp Phe Val Gly Ile Asp Ala Thr Ala Gln Met Ser Val Gln Ala

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gtt gcg ccg aac ggc gcg tat cgc atg gta ggt ctc gga ggc gga aac 816

Val Ala Pro Asn Gly Ala Tyr Arg Met Val Gly Leu Gly Gly Gly Asn

260 265 270

ccc gga atc act gcc gaa gct gcc ggc gga cca ggc tgg cca tgg ggc 864

Pro Gly Ile Thr Ala Glu Ala Ala Gly Gly Pro Gly Trp Pro Trp Gly

275 280 285

gca tcg atc cgg aag tcc tac ggc ggc acc aga aac gac ctc gtc gat 912

Ala Ser Ile Arg Lys Ser Tyr Gly Gly Thr Arg Asn Asp Leu Val Asp

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Val Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Gln Ile Leu Arg Ala Ile Ser

180 185 190

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Phe Asp Phe Val Gly Ile Asp Ala Thr Ala Gln Met Ser Val Gln Ala

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Val Ala Pro Asn Gly Ala Tyr Arg Met Val Gly Leu Gly Gly Gly Asn

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<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-04254_大肠杆菌，经优化的

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ggtcatgtgg cagtgcaaat cctgcgcgcg atttctgcgg tccgtatcat tgcggttgat 600

gtgggccagg accaactgga cctggcgaag cgttgtggcg cggacatcac cctggagagc 660

ggtcctgaca ccgcgcaaca tatcctggac ctgacctccg ctcgtggtgc cgaagtgatt 720

tttgacttcg tcggtatcga tgcgacggca cagatgagcg tccaagcggt agccccgaat 780

ggcgcatacc gtatggttgg tctgggtggt ggcaacccgg gcattactgc agaggcagcg 840

ggtggtcctg gttggccgtg gggtgcttcg atccgcaaaa gctatggcgg cacgcgtaac 900

gacctggttg attctattgc gttggcccag gctggtcttg ttaccgttga agtggcgcgc 960

tttgacctgg cagacgcccg tgatgcgctg gaccgtctgg agcatggtaa agtgacgggt 1020

cgcgctgtgc tggtgccgta a 1041

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<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06135_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1047)

<400> 154

atg aag gca atc cag tac acg aga atc ggc gca gaa ccc gaa ctc acg 48

Met Lys Ala Ile Gln Tyr Thr Arg Ile Gly Ala Glu Pro Glu Leu Thr

1 5 10 15

gag att ccc aaa ccc gag ccc ggt cca ggt gaa gtg ctc ctg gaa gtc 96

Glu Ile Pro Lys Pro Glu Pro Gly Pro Gly Glu Val Leu Leu Glu Val

20 25 30

acc gct gcc ggc gtc tgc cac tcg gac gac ttc atc atg agc ctg ccc 144

Thr Ala Ala Gly Val Cys His Ser Asp Asp Phe Ile Met Ser Leu Pro

35 40 45

gaa gag cag tac acc tac ggc ctt cct ctc acg ctc ggc cac gaa ggc 192

Glu Glu Gln Tyr Thr Tyr Gly Leu Pro Leu Thr Leu Gly His Glu Gly

50 55 60

gcc ggc cgg gtc gcc gcc gtc ggc gag ggc gtc gaa gga ctc gac atc 240

Ala Gly Arg Val Ala Ala Val Gly Glu Gly Val Glu Gly Leu Asp Ile

65 70 75 80

gga acc aat gtc gtc gtc tac gga ccc tgg ggc tgt ggc agc tgt tgg 288

Gly Thr Asn Val Val Val Tyr Gly Pro Trp Gly Cys Gly Ser Cys Trp

85 90 95

cac tgc tcg caa gga ctc gaa aac tac tgt tct cgg gca aaa gaa ctc 336

His Cys Ser Gln Gly Leu Glu Asn Tyr Cys Ser Arg Ala Lys Glu Leu

100 105 110

ggc atc aat cct cct ggt ctc ggt gca ccc ggc gcg ttg gcc gaa ttc 384

Gly Ile Asn Pro Pro Gly Leu Gly Ala Pro Gly Ala Leu Ala Glu Phe

115 120 125

atg atc gtc gat tca cct cgc cac ctc gtc ccg atc ggc gac ctc gat 432

Met Ile Val Asp Ser Pro Arg His Leu Val Pro Ile Gly Asp Leu Asp

130 135 140

ccg gtc aag acg gtg ccg ctg acc gac gcc ggt ctg act ccg tat cac 480

Pro Val Lys Thr Val Pro Leu Thr Asp Ala Gly Leu Thr Pro Tyr His

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Ala Ile Lys Arg Ser Leu Pro Lys Leu Arg Gly Gly Ala Tyr Ala Val

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gtc atc ggt acc ggc ggt ctc ggc cat gtc gcc atc caa ctc ctc cgc 576

Val Ile Gly Thr Gly Gly Leu Gly His Val Ala Ile Gln Leu Leu Arg

180 185 190

cac ctc tcg gca gca acc gtc atc gca ctc gac gtg agc gcg gac aag 624

His Leu Ser Ala Ala Thr Val Ile Ala Leu Asp Val Ser Ala Asp Lys

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ctc gaa ctg gca acc aag gta ggc gct cac gaa gtg gtc ctg tcc gac 672

Leu Glu Leu Ala Thr Lys Val Gly Ala His Glu Val Val Leu Ser Asp

210 215 220

aag gac gcg gcc gag aac gtc cgc agg atc acc gga agt cag ggc gcc 720

Lys Asp Ala Ala Glu Asn Val Arg Arg Ile Thr Gly Ser Gln Gly Ala

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Ala Leu Val Leu Asp Phe Val Gly Tyr Gln Pro Thr Ile Asp Thr Ala

245 250 255

atg gct gtc gcc ggc gtc gga tcg gac gtc acg atc gtc ggg atc ggc 816

Met Ala Val Ala Gly Val Gly Ser Asp Val Thr Ile Val Gly Ile Gly

260 265 270

gac ggg cag gcc cat gcc aaa gtc ggg ttc ttc caa agt cct tac gag 864

Asp Gly Gln Ala His Ala Lys Val Gly Phe Phe Gln Ser Pro Tyr Glu

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gct tct gtg aca gtt ccg tac tgg ggt gcc cgc aac gag ctg atc gaa 912

Ala Ser Val Thr Val Pro Tyr Trp Gly Ala Arg Asn Glu Leu Ile Glu

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ttg atc gac ctg gcg cac gcc ggc atc ttc gac atc gcg gtg gag acc 960

Leu Ile Asp Leu Ala His Ala Gly Ile Phe Asp Ile Ala Val Glu Thr

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Phe Ser Leu Asp Asn Gly Ala Glu Ala Tyr Arg Arg Leu Ala Ala Gly

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Ala Gly Arg Val Ala Ala Val Gly Glu Gly Val Glu Gly Leu Asp Ile

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Met Ile Val Asp Ser Pro Arg His Leu Val Pro Ile Gly Asp Leu Asp

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Ala Ile Lys Arg Ser Leu Pro Lys Leu Arg Gly Gly Ala Tyr Ala Val

165 170 175

Val Ile Gly Thr Gly Gly Leu Gly His Val Ala Ile Gln Leu Leu Arg

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His Leu Ser Ala Ala Thr Val Ile Ala Leu Asp Val Ser Ala Asp Lys

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Leu Glu Leu Ala Thr Lys Val Gly Ala His Glu Val Val Leu Ser Asp

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Lys Asp Ala Ala Glu Asn Val Arg Arg Ile Thr Gly Ser Gln Gly Ala

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Met Ala Val Ala Gly Val Gly Ser Asp Val Thr Ile Val Gly Ile Gly

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<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06135_大肠杆菌，经优化的

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Gly Asp Gly Arg Leu Ser Pro Ile Gly Asn Gly Leu Gly His Pro Gly

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gac act gtg gct ttg gtg ata gga atc ggc ggt ctc ggc cat ctg gcg 576

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gtg cag atc ctg cgc tct ttc ggc gtc aca gac atc atc gcc gtc gag 624

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ggt gcc gac gtg gtc ttc gac ttt gtc ggg gct cag gcg acg gtc gaa 768

Gly Ala Asp Val Val Phe Asp Phe Val Gly Ala Gln Ala Thr Val Glu

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Pro Ala Pro Ala Leu Leu Ala Pro Gly Gly Arg Val Val Val Val Gly

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agt gcg ggc ggg caa ctg acc gtc ggc aaa agc ctt ggt ttg gtc aac 864

Ser Ala Gly Gly Gln Leu Thr Val Gly Lys Ser Leu Gly Leu Val Asn

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ggc tgg caa gtt cgg gcg ccg ttc tgg ggc acc atc gag gac ctg cgt 912

Gly Trp Gln Val Arg Ala Pro Phe Trp Gly Thr Ile Glu Asp Leu Arg

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Leu

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Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Leu Val Pro Ser Glu Ala Val Leu Val Arg

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Leu Thr Ala Tyr His Ala Ile Arg Thr Asn Ser Asp Val Ile Asp Ser

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Asp Thr Val Ala Leu Val Ile Gly Ile Gly Gly Leu Gly His Leu Ala

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Leu

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<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-06582_大肠杆菌，经优化的

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gtgacggaca tcattgcagt cgagactcgt acccagacgc atgcgttggc cctggagagc 660

ggtgcgcatg cgtgctttgc gaccctggcg gaagcaaccg aagcggttgc gagcttgggc 720

ggtgcagatg ttgtctttga cttcgttggt gcgcaggcga ctgttgagcc ggcaccagct 780

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Gly Leu Cys His Thr Asp Leu Phe Thr Lys Ser Ala Leu Pro Glu Arg

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Leu Gly Pro Cys Val Phe Gly His Glu Gly Ala Gly Val Val Glu Ala

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Val Gly Ser Ser Ile Asp Ser Ile Ala Pro Gly Asp His Val Leu Leu

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gcg tac tgc gaa agc tca cac ggg ctc aac agc tct ggc gca cgc acc 384

Ala Tyr Cys Glu Ser Ser His Gly Leu Asn Ser Ser Gly Ala Arg Thr

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ctc ggc tgc ggg ttt caa acc ggc gcc ggc gcg gta ctg aat ctg ctt 576

Leu Gly Cys Gly Phe Gln Thr Gly Ala Gly Ala Val Leu Asn Leu Leu

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cgc ccc gag ccc gac tcg acg ttt gtc gtt ttc ggg gca ggc agc gtc 624

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Gly Ala Val Thr Val Asp Pro Ser Asn Glu Asp Val Ile Asp Ala Val

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His Ala Ala Thr Asp Gly Gly Ser Thr His Ser Leu Asp Thr Thr Gly

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atc ggc tcc gtg atc aat caa gcc gtc aca tca ctt cga gca cgg gga 864

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Ala Asp Ile Met Leu Ser Gly Lys Thr Ile Arg Gly Cys Ile Glu Gly

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gag tcg gaa gtc tcg acg ttc atc ccc gaa ctc gtc gaa ctc ttc act 1008

Glu Ser Glu Val Ser Thr Phe Ile Pro Glu Leu Val Glu Leu Phe Thr

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Val Ala Val Asp Pro Val Ala Gln Arg Arg Ala Leu Ala Glu Glu Phe

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Gly Ala Val Thr Val Asp Pro Ser Asn Glu Asp Val Ile Asp Ala Val

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His Ala Ala Thr Asp Gly Gly Ser Thr His Ser Leu Asp Thr Thr Gly

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gttggctcta gcattgacag catcgctccg ggtgatcacg tcctgttgtc ctaccgtagc 300

tgcggcgtct gccgtcagtg cctgagcggc caccgtgctt actgtgagag ctcccacggc 360

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<212> DNA

<213> 玫瑰红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)_SCH80-05240_大肠杆菌，经优化的

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tttcagaccg gcgccggcgc ggtgctgaat ctgctgcgcc ctgagccgga cagcactttc 600

gtcgtctttg gtgccggcag cgtcggtttg gcggcactgc tggcggcgcg tgcggcgggt 660

gtttcgaccc tggtcgcagt tgatccggtc gcgcagcgcc gtgcgttggc cgaagaattt 720

ggtgccgtta ccgtcgatcc gacgaccgaa gatgccgttg aagctgtgcg cgcggcgacc 780

gacggtggca gcacgcattc tctggatacc acgggcatcg gttctgtgat taaccaagcc 840

gtgacctctc tgcgtgcgcg tggtactctg gctgtggttg gcctgggtgc tagcacggtc 900

gagatgaata tggcagacat tatgctgagc ggtaaaacga tccgtggttg catcgagggc 960

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<400> 170

Met Ala Ser Val Pro Ala Pro Pro Phe Val His Val Glu Gly Met Ser

1 5 10 15

Asn Phe Arg Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Leu Glu Thr Ala Ser Thr Asn

20 25 30

Asn His Arg Ser Thr Arg Gln Gly Phe Ala Phe Arg Ser Ala Asp Pro

35 40 45

Thr Tyr Val Thr Gln Lys Gly Leu Glu Thr Ile Leu Ser Leu Asp Ile

50 55 60

Thr Arg Ala Phe Asp Leu Arg Ser Leu Glu Glu Ala Lys Ala Gln Arg

65 70 75 80

Ala Lys Leu Gln Ala Ala Ser Gly Cys Leu Asp Cys Ser Ile Ser Gln

85 90 95

His Met Ile His Gln Pro Thr Pro Leu Phe Pro Asp Gly Asp Trp Ser

100 105 110

Pro Glu Ala Ala Gly Glu Arg Tyr Leu Gln Tyr Ala Gln Ala Glu Gly

115 120 125

Asp Gly Ile Ser Gly Tyr Val Glu Val Tyr Gly Asn Met Leu Glu Glu

130 135 140

Gly Trp Met Ala Ile Arg Glu Ile Leu Leu His Val Arg Asp Arg Pro

145 150 155 160

Thr Glu Ala Phe Leu Cys His Cys Ser Ala Gly Lys Asp Arg Thr Gly

165 170 175

Ile Val Ile Ala Val Leu Leu Lys Val Ala Gly Cys Ser Asp Asp Leu

180 185 190

Val Cys Arg Glu Tyr Glu Leu Thr Glu Ile Gly Leu Ala Arg Arg Arg

195 200 205

Glu Phe Ile Val Gln His Leu Leu Lys Lys Pro Glu Met Asn Gly Ser

210 215 220

Arg Glu Leu Ala Glu Arg Val Ala Gly Ala Arg Tyr Glu Asn Met Lys

225 230 235 240

Glu Thr Leu Glu Met Val Gln Thr Arg Tyr Arg Gly Met Arg Gly Tyr

245 250 255

Cys Lys Glu Ile Cys Gly Leu Thr Asp Glu Asp Leu Ser Ile Ile Gln

260 265 270

Gly Asn Leu Thr Ser Pro Glu Ser Pro Ile Phe

275 280

<210> 171

<211> 852

<212> DNA

<213> 温特曲霉(Aspergillus wentii)_AspWeTPP_大肠杆菌，经优化的

<400> 171

atggcgtctg tccctgctcc accgtttgtt catgttgaag gtatgtctaa ttttcgtagc 60

atcggtggct acccgctgga gactgcctcc acgaataacc atcgctcgac ccgtcaaggc 120

ttcgcgtttc gtagcgcgga cccgacgtat gtgacgcaga aaggcctgga aaccattctg 180

tccctggata ttacccgcgc atttgacttg cgtagcttgg aagaagcaaa ggcacaacgt 240

gcgaagttgc aggccgcgag cggttgtctg gattgcagca ttagccaaca catgatccac 300

caaccgaccc cgctgttccc ggatggtgac tggtccccgg aagcggcggg tgagcgctac 360

ttgcagtacg cacaagctga gggtgatggt atcagcggtt atgtcgaagt ttatggtaat 420

atgctggaag agggctggat ggcgatccgt gagattctgc tgcacgtccg tgaccgcccg 480

accgaagcat tcctgtgcca ctgttccgcc ggtaaagatc gtacgggtat cgtgattgct 540

gttctgctca aagtcgcggg ttgcagcgac gacctggtgt gtcgtgagta cgaactgacc 600

gagattggcc tggcgcgccg tagagagttc atcgttcagc atctgctgaa gaaaccggaa 660

atgaacggca gccgtgagct ggcggagcgc gtcgcaggcg cccgttacga gaacatgaaa 720

gaaaccctgg aaatggtgca gacccgttac cgcggcatgc gcggctattg caaagaaatc 780

tgcggtctga ccgacgaaga tctgagcatt atccagggta acctgacgag cccggagagc 840

ccgattttct aa 852

<210> 172

<211> 2892

<212> DNA

<213> 细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_PvCPS (LC316181.1

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(2892)

<400> 172

atg agc cca atg gat tta caa gaa tca gcg gca gct ttg gtg cgg cag 48

Met Ser Pro Met Asp Leu Gln Glu Ser Ala Ala Ala Leu Val Arg Gln

1 5 10 15

ttg ggg gag aga gtc gaa gat cgc cgt ggt ttt gga ttc atg agc cct 96

Leu Gly Glu Arg Val Glu Asp Arg Arg Gly Phe Gly Phe Met Ser Pro

20 25 30

gcc atc tat gat acc gca tgg gtc tct atg att agc aag aca atc gat 144

Ala Ile Tyr Asp Thr Ala Trp Val Ser Met Ile Ser Lys Thr Ile Asp

35 40 45

gac caa aaa aca tgg ttg ttt gca gaa tgt ttc cag tac att ctt tct 192

Asp Gln Lys Thr Trp Leu Phe Ala Glu Cys Phe Gln Tyr Ile Leu Ser

50 55 60

cat cag ctc gaa gac ggt ggt tgg gca atg tat gca tct gaa atc gac 240

His Gln Leu Glu Asp Gly Gly Trp Ala Met Tyr Ala Ser Glu Ile Asp

65 70 75 80

gcc atc cta aac act tcg gcc tca tta cta tca tta aag aga cat ctt 288

Ala Ile Leu Asn Thr Ser Ala Ser Leu Leu Ser Leu Lys Arg His Leu

85 90 95

tca aat ccc tat caa att aca tct atc aca caa gag gat ctg tcc gcc 336

Ser Asn Pro Tyr Gln Ile Thr Ser Ile Thr Gln Glu Asp Leu Ser Ala

100 105 110

cgc att aac agg gct cag aat gct tta cag aag ctt ctc aat gag tgg 384

Arg Ile Asn Arg Ala Gln Asn Ala Leu Gln Lys Leu Leu Asn Glu Trp

115 120 125

aat gtc gac agc acg ctc cac gtg gga ttc gag atc cta gtt ccg gcc 432

Asn Val Asp Ser Thr Leu His Val Gly Phe Glu Ile Leu Val Pro Ala

130 135 140

cta ctc agg tat ctc gaa gat gag ggc atc gct ttt gct ttt tct ggt 480

Leu Leu Arg Tyr Leu Glu Asp Glu Gly Ile Ala Phe Ala Phe Ser Gly

145 150 155 160

aga gag cgc ctg ctt gag att gag aaa cag aaa tta tca aag ttc aaa 528

Arg Glu Arg Leu Leu Glu Ile Glu Lys Gln Lys Leu Ser Lys Phe Lys

165 170 175

gca cag tat cta tac ctt cca atc aaa gtg aca gct ttg cat tct ctg 576

Ala Gln Tyr Leu Tyr Leu Pro Ile Lys Val Thr Ala Leu His Ser Leu

180 185 190

gaa gcg ttc ata ggc gcc att gag ttt gat aaa gtc agt cac cac aaa 624

Glu Ala Phe Ile Gly Ala Ile Glu Phe Asp Lys Val Ser His His Lys

195 200 205

gtc agc ggt gcg ttc atg gca tct cca tca tcc aca gca gct tac atg 672

Val Ser Gly Ala Phe Met Ala Ser Pro Ser Ser Thr Ala Ala Tyr Met

210 215 220

atg cat gcg aca caa tgg gat gat gaa tgc gag gat tac cta cgc cac 720

Met His Ala Thr Gln Trp Asp Asp Glu Cys Glu Asp Tyr Leu Arg His

225 230 235 240

gtc att gct cat gca tct ggg aaa gga tcc gga ggt gtt cca agc gct 768

Val Ile Ala His Ala Ser Gly Lys Gly Ser Gly Gly Val Pro Ser Ala

245 250 255

ttt cct tcc acc atc ttt gaa agc gtt tgg cct cta tca act ctg cta 816

Phe Pro Ser Thr Ile Phe Glu Ser Val Trp Pro Leu Ser Thr Leu Leu

260 265 270

aag gtg gga tat gat ctc aac tcg gca cct ttt atc gaa aaa atc aga 864

Lys Val Gly Tyr Asp Leu Asn Ser Ala Pro Phe Ile Glu Lys Ile Arg

275 280 285

tca tac ttg cat gat gca tat att gct gaa aag gga att ctc ggc ttc 912

Ser Tyr Leu His Asp Ala Tyr Ile Ala Glu Lys Gly Ile Leu Gly Phe

290 295 300

act cct ttt gtt ggc gct gat gca gat gat acc gct acc acc ata ttg 960

Thr Pro Phe Val Gly Ala Asp Ala Asp Asp Thr Ala Thr Thr Ile Leu

305 310 315 320

gtg ctc aat ctt ttg aac caa cca gtc tca gtc gac gcg atg ttg aag 1008

Val Leu Asn Leu Leu Asn Gln Pro Val Ser Val Asp Ala Met Leu Lys

325 330 335

gaa ttt gaa gaa gaa cat cac ttc aaa acc tac tct cag gag cgc aat 1056

Glu Phe Glu Glu Glu His His Phe Lys Thr Tyr Ser Gln Glu Arg Asn

340 345 350

cct agt ttc tcg gcc aat tgt aac gtt ctt ctt gcc tta cta tac agt 1104

Pro Ser Phe Ser Ala Asn Cys Asn Val Leu Leu Ala Leu Leu Tyr Ser

355 360 365

caa gag cca tcg ctt tat agc gcg cag atc gaa aaa gct ata agg ttc 1152

Gln Glu Pro Ser Leu Tyr Ser Ala Gln Ile Glu Lys Ala Ile Arg Phe

370 375 380

ctc tat aag caa ttc aca gat tca gaa atg gac gtt cga gac aaa tgg 1200

Leu Tyr Lys Gln Phe Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Arg Asp Lys Trp

385 390 395 400

aat cta tca cca tac tat tct tgg atg ctc atg aca caa gcc atc acg 1248

Asn Leu Ser Pro Tyr Tyr Ser Trp Met Leu Met Thr Gln Ala Ile Thr

405 410 415

cgg ttg acg act ctt cag aag act tcg aaa ctt tca aca ttg aga gat 1296

Arg Leu Thr Thr Leu Gln Lys Thr Ser Lys Leu Ser Thr Leu Arg Asp

420 425 430

gat tct atc agc aaa ggc ttg att agt ctg ctg ttt agg ata gct tct 1344

Asp Ser Ile Ser Lys Gly Leu Ile Ser Leu Leu Phe Arg Ile Ala Ser

435 440 445

acc gtg gtt aaa gac caa aag cca gga ggt tct tgg ggc act cga gct 1392

Thr Val Val Lys Asp Gln Lys Pro Gly Gly Ser Trp Gly Thr Arg Ala

450 455 460

tcg aaa gaa gag act gcc tac gca gtg ttg att ctc aca tat gct ttc 1440

Ser Lys Glu Glu Thr Ala Tyr Ala Val Leu Ile Leu Thr Tyr Ala Phe

465 470 475 480

tac ctc gat gag gtt acg gag tcg ttg cgg cat gat atc aag atc gcc 1488

Tyr Leu Asp Glu Val Thr Glu Ser Leu Arg His Asp Ile Lys Ile Ala

485 490 495

att gag aat ggt tgc tca ttc cta tct gaa aga acc atg cag tcc gat 1536

Ile Glu Asn Gly Cys Ser Phe Leu Ser Glu Arg Thr Met Gln Ser Asp

500 505 510

tcg gag tgg ctt tgg gtt gag aaa gtc aca tat aaa tca gag gtt ctt 1584

Ser Glu Trp Leu Trp Val Glu Lys Val Thr Tyr Lys Ser Glu Val Leu

515 520 525

tcg gaa gca tat atc ttg gcc gct ctt aaa cgg gca gct gac tta ccc 1632

Ser Glu Ala Tyr Ile Leu Ala Ala Leu Lys Arg Ala Ala Asp Leu Pro

530 535 540

gac gaa aat gca gaa gca gcc ccc gtc ata aat gga att tct aca aat 1680

Asp Glu Asn Ala Glu Ala Ala Pro Val Ile Asn Gly Ile Ser Thr Asn

545 550 555 560

gga ttt gag cat acc gat aga att aac ggc aag ctt aaa gtc aat ggt 1728

Gly Phe Glu His Thr Asp Arg Ile Asn Gly Lys Leu Lys Val Asn Gly

565 570 575

acc aac ggt aca aat ggc agt cat gag aca aac ggt atc aac ggt acg 1776

Thr Asn Gly Thr Asn Gly Ser His Glu Thr Asn Gly Ile Asn Gly Thr

580 585 590

cat gaa att gaa cag atc aat ggc gtc aac ggc acg aat ggt cac tct 1824

His Glu Ile Glu Gln Ile Asn Gly Val Asn Gly Thr Asn Gly His Ser

595 600 605

gat gtg cct cac gat aca aat ggc tgg gta gaa gag ccg acc gcc atc 1872

Asp Val Pro His Asp Thr Asn Gly Trp Val Glu Glu Pro Thr Ala Ile

610 615 620

aat gag aca aat ggc cac tac gtg aat ggc acg aat cac gag act ccc 1920

Asn Glu Thr Asn Gly His Tyr Val Asn Gly Thr Asn His Glu Thr Pro

625 630 635 640

ctt acc aac ggc att tcc aat gga gat tct gtt tcc gtt cat aca gac 1968

Leu Thr Asn Gly Ile Ser Asn Gly Asp Ser Val Ser Val His Thr Asp

645 650 655

cac tcg gac agt tac tat cag cgc agt gat tgg aca gcc gac gaa gaa 2016

His Ser Asp Ser Tyr Tyr Gln Arg Ser Asp Trp Thr Ala Asp Glu Glu

660 665 670

caa att ctt ctc ggt cca ttt gac tac ctg gag agc ctg cca ggc aag 2064

Gln Ile Leu Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Leu Glu Ser Leu Pro Gly Lys

675 680 685

aat atg cgc tca caa ctg att caa tca ttc aac aca tgg ctc aaa gtc 2112

Asn Met Arg Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Asn Thr Trp Leu Lys Val

690 695 700

cca act gag agc ttg gat gtt att att aag gtg att tca atg ttg cat 2160

Pro Thr Glu Ser Leu Asp Val Ile Ile Lys Val Ile Ser Met Leu His

705 710 715 720

acg gcc tct ctc ttg atc gat gat att cag gat caa tca ata ctc cgc 2208

Thr Ala Ser Leu Leu Ile Asp Asp Ile Gln Asp Gln Ser Ile Leu Arg

725 730 735

cgc ggg caa cct gta gcg cac agc atc ttt ggc aca gcg caa gca atg 2256

Arg Gly Gln Pro Val Ala His Ser Ile Phe Gly Thr Ala Gln Ala Met

740 745 750

aac tca ggg aat tat gtc tac ttt cta gcc ctt agg gag gtt cag aaa 2304

Asn Ser Gly Asn Tyr Val Tyr Phe Leu Ala Leu Arg Glu Val Gln Lys

755 760 765

cta caa aac ccg aaa gcc atc agt att tat gtt gac tct ttg att gat 2352

Leu Gln Asn Pro Lys Ala Ile Ser Ile Tyr Val Asp Ser Leu Ile Asp

770 775 780

ctt cac cgt ggc caa ggc atg gag ctt ttc tgg cgg gat tct ctc atg 2400

Leu His Arg Gly Gln Gly Met Glu Leu Phe Trp Arg Asp Ser Leu Met

785 790 795 800

tgc cca acc gaa gag cag tac ctt gac atg gtc gca aac aaa act ggc 2448

Cys Pro Thr Glu Glu Gln Tyr Leu Asp Met Val Ala Asn Lys Thr Gly

805 810 815

ggc ctg ttt tgc ctt gct atc caa ttg atg caa gct gaa gcc act atc 2496

Gly Leu Phe Cys Leu Ala Ile Gln Leu Met Gln Ala Glu Ala Thr Ile

820 825 830

caa gtc gac ttc ata cca ctt gtc cga cta ctc ggc atc atc ttc cag 2544

Gln Val Asp Phe Ile Pro Leu Val Arg Leu Leu Gly Ile Ile Phe Gln

835 840 845

att tgt gat gat tac ttg aat ctg aag tct acg gcc tat aca gac aac 2592

Ile Cys Asp Asp Tyr Leu Asn Leu Lys Ser Thr Ala Tyr Thr Asp Asn

850 855 860

aaa ggg ttg tgt gag gat ttg aca gag ggc aaa ttc tct ttt cct atc 2640

Lys Gly Leu Cys Glu Asp Leu Thr Glu Gly Lys Phe Ser Phe Pro Ile

865 870 875 880

atc cat agc att cga tcc aac cct ggc aac cga cag cta atc aac atc 2688

Ile His Ser Ile Arg Ser Asn Pro Gly Asn Arg Gln Leu Ile Asn Ile

885 890 895

ttg aag caa aag cca cgt gaa gac gac atc aaa cgc tat gct cta tcc 2736

Leu Lys Gln Lys Pro Arg Glu Asp Asp Ile Lys Arg Tyr Ala Leu Ser

900 905 910

tat atg gaa agc acc aac tca ttt gag tat act cgg ggt gtc gtt aga 2784

Tyr Met Glu Ser Thr Asn Ser Phe Glu Tyr Thr Arg Gly Val Val Arg

915 920 925

aaa ctg aag acc gag gca atc gat act att caa ggc ttg gag aag cac 2832

Lys Leu Lys Thr Glu Ala Ile Asp Thr Ile Gln Gly Leu Glu Lys His

930 935 940

ggc ctg gaa gag aat att ggc att cga aag ata cta gct cgc atg tcc 2880

Gly Leu Glu Glu Asn Ile Gly Ile Arg Lys Ile Leu Ala Arg Met Ser

945 950 955 960

ctt gag cta tga 2892

Leu Glu Leu

<210> 173

<211> 963

<212> PRT

<213> 细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_PvCPS (LC316181.1

<400> 173

Met Ser Pro Met Asp Leu Gln Glu Ser Ala Ala Ala Leu Val Arg Gln

1 5 10 15

Leu Gly Glu Arg Val Glu Asp Arg Arg Gly Phe Gly Phe Met Ser Pro

20 25 30

Ala Ile Tyr Asp Thr Ala Trp Val Ser Met Ile Ser Lys Thr Ile Asp

35 40 45

Asp Gln Lys Thr Trp Leu Phe Ala Glu Cys Phe Gln Tyr Ile Leu Ser

50 55 60

His Gln Leu Glu Asp Gly Gly Trp Ala Met Tyr Ala Ser Glu Ile Asp

65 70 75 80

Ala Ile Leu Asn Thr Ser Ala Ser Leu Leu Ser Leu Lys Arg His Leu

85 90 95

Ser Asn Pro Tyr Gln Ile Thr Ser Ile Thr Gln Glu Asp Leu Ser Ala

100 105 110

Arg Ile Asn Arg Ala Gln Asn Ala Leu Gln Lys Leu Leu Asn Glu Trp

115 120 125

Asn Val Asp Ser Thr Leu His Val Gly Phe Glu Ile Leu Val Pro Ala

130 135 140

Leu Leu Arg Tyr Leu Glu Asp Glu Gly Ile Ala Phe Ala Phe Ser Gly

145 150 155 160

Arg Glu Arg Leu Leu Glu Ile Glu Lys Gln Lys Leu Ser Lys Phe Lys

165 170 175

Ala Gln Tyr Leu Tyr Leu Pro Ile Lys Val Thr Ala Leu His Ser Leu

180 185 190

Glu Ala Phe Ile Gly Ala Ile Glu Phe Asp Lys Val Ser His His Lys

195 200 205

Val Ser Gly Ala Phe Met Ala Ser Pro Ser Ser Thr Ala Ala Tyr Met

210 215 220

Met His Ala Thr Gln Trp Asp Asp Glu Cys Glu Asp Tyr Leu Arg His

225 230 235 240

Val Ile Ala His Ala Ser Gly Lys Gly Ser Gly Gly Val Pro Ser Ala

245 250 255

Phe Pro Ser Thr Ile Phe Glu Ser Val Trp Pro Leu Ser Thr Leu Leu

260 265 270

Lys Val Gly Tyr Asp Leu Asn Ser Ala Pro Phe Ile Glu Lys Ile Arg

275 280 285

Ser Tyr Leu His Asp Ala Tyr Ile Ala Glu Lys Gly Ile Leu Gly Phe

290 295 300

Thr Pro Phe Val Gly Ala Asp Ala Asp Asp Thr Ala Thr Thr Ile Leu

305 310 315 320

Val Leu Asn Leu Leu Asn Gln Pro Val Ser Val Asp Ala Met Leu Lys

325 330 335

Glu Phe Glu Glu Glu His His Phe Lys Thr Tyr Ser Gln Glu Arg Asn

340 345 350

Pro Ser Phe Ser Ala Asn Cys Asn Val Leu Leu Ala Leu Leu Tyr Ser

355 360 365

Gln Glu Pro Ser Leu Tyr Ser Ala Gln Ile Glu Lys Ala Ile Arg Phe

370 375 380

Leu Tyr Lys Gln Phe Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Arg Asp Lys Trp

385 390 395 400

Asn Leu Ser Pro Tyr Tyr Ser Trp Met Leu Met Thr Gln Ala Ile Thr

405 410 415

Arg Leu Thr Thr Leu Gln Lys Thr Ser Lys Leu Ser Thr Leu Arg Asp

420 425 430

Asp Ser Ile Ser Lys Gly Leu Ile Ser Leu Leu Phe Arg Ile Ala Ser

435 440 445

Thr Val Val Lys Asp Gln Lys Pro Gly Gly Ser Trp Gly Thr Arg Ala

450 455 460

Ser Lys Glu Glu Thr Ala Tyr Ala Val Leu Ile Leu Thr Tyr Ala Phe

465 470 475 480

Tyr Leu Asp Glu Val Thr Glu Ser Leu Arg His Asp Ile Lys Ile Ala

485 490 495

Ile Glu Asn Gly Cys Ser Phe Leu Ser Glu Arg Thr Met Gln Ser Asp

500 505 510

Ser Glu Trp Leu Trp Val Glu Lys Val Thr Tyr Lys Ser Glu Val Leu

515 520 525

Ser Glu Ala Tyr Ile Leu Ala Ala Leu Lys Arg Ala Ala Asp Leu Pro

530 535 540

Asp Glu Asn Ala Glu Ala Ala Pro Val Ile Asn Gly Ile Ser Thr Asn

545 550 555 560

Gly Phe Glu His Thr Asp Arg Ile Asn Gly Lys Leu Lys Val Asn Gly

565 570 575

Thr Asn Gly Thr Asn Gly Ser His Glu Thr Asn Gly Ile Asn Gly Thr

580 585 590

His Glu Ile Glu Gln Ile Asn Gly Val Asn Gly Thr Asn Gly His Ser

595 600 605

Asp Val Pro His Asp Thr Asn Gly Trp Val Glu Glu Pro Thr Ala Ile

610 615 620

Asn Glu Thr Asn Gly His Tyr Val Asn Gly Thr Asn His Glu Thr Pro

625 630 635 640

Leu Thr Asn Gly Ile Ser Asn Gly Asp Ser Val Ser Val His Thr Asp

645 650 655

His Ser Asp Ser Tyr Tyr Gln Arg Ser Asp Trp Thr Ala Asp Glu Glu

660 665 670

Gln Ile Leu Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Leu Glu Ser Leu Pro Gly Lys

675 680 685

Asn Met Arg Ser Gln Leu Ile Gln Ser Phe Asn Thr Trp Leu Lys Val

690 695 700

Pro Thr Glu Ser Leu Asp Val Ile Ile Lys Val Ile Ser Met Leu His

705 710 715 720

Thr Ala Ser Leu Leu Ile Asp Asp Ile Gln Asp Gln Ser Ile Leu Arg

725 730 735

Arg Gly Gln Pro Val Ala His Ser Ile Phe Gly Thr Ala Gln Ala Met

740 745 750

Asn Ser Gly Asn Tyr Val Tyr Phe Leu Ala Leu Arg Glu Val Gln Lys

755 760 765

Leu Gln Asn Pro Lys Ala Ile Ser Ile Tyr Val Asp Ser Leu Ile Asp

770 775 780

Leu His Arg Gly Gln Gly Met Glu Leu Phe Trp Arg Asp Ser Leu Met

785 790 795 800

Cys Pro Thr Glu Glu Gln Tyr Leu Asp Met Val Ala Asn Lys Thr Gly

805 810 815

Gly Leu Phe Cys Leu Ala Ile Gln Leu Met Gln Ala Glu Ala Thr Ile

820 825 830

Gln Val Asp Phe Ile Pro Leu Val Arg Leu Leu Gly Ile Ile Phe Gln

835 840 845

Ile Cys Asp Asp Tyr Leu Asn Leu Lys Ser Thr Ala Tyr Thr Asp Asn

850 855 860

Lys Gly Leu Cys Glu Asp Leu Thr Glu Gly Lys Phe Ser Phe Pro Ile

865 870 875 880

Ile His Ser Ile Arg Ser Asn Pro Gly Asn Arg Gln Leu Ile Asn Ile

885 890 895

Leu Lys Gln Lys Pro Arg Glu Asp Asp Ile Lys Arg Tyr Ala Leu Ser

900 905 910

Tyr Met Glu Ser Thr Asn Ser Phe Glu Tyr Thr Arg Gly Val Val Arg

915 920 925

Lys Leu Lys Thr Glu Ala Ile Asp Thr Ile Gln Gly Leu Glu Lys His

930 935 940

Gly Leu Glu Glu Asn Ile Gly Ile Arg Lys Ile Leu Ala Arg Met Ser

945 950 955 960

Leu Glu Leu

<210> 174

<211> 2892

<212> DNA

<213> 细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_PvCPS_大肠杆菌，经优化的

<400> 174

atgagcccta tggatttgca agaaagcgcc gcagccctgg tccgtcaatt gggtgaacgc 60

gttgaggatc gccgcggttt tggtttcatg agcccggcca tttatgacac ggcctgggtt 120

agcatgatta gcaagaccat cgacgaccaa aaaacttggc tgtttgcgga gtgcttccag 180

tacattctgt ctcaccaact ggaagatggt ggctgggcga tgtacgcatc cgaaatcgat 240

gccatcttga atacttccgc gtcactgctg tccctgaaac gccacctgtc caacccttac 300

cagatcacca gcatcactca ggaagatctg agcgctcgca tcaaccgcgc tcaaaacgcc 360

ctgcagaaat tgctgaacga gtggaacgtt gactccacgc tgcacgtcgg tttcgagatt 420

ctggttccgg cgctgctgcg ctatctggaa gatgaaggca tcgcgtttgc gttctcgggt 480

cgtgagcgtt tgttagagat tgagaaacaa aaactgtcca agtttaaagc gcagtatttg 540

tacttaccga ttaaggtcac cgcactgcat agcctggaag ccttcatcgg cgctattgag 600

ttcgacaaag tcagccatca caaagtatcc ggtgctttca tggcgtcgcc gtctagcacc 660

gcagcataca tgatgcatgc gacgcaatgg gatgacgaat gtgaggatta cttgcgtcac 720

gtgatcgcgc atgcgtcagg taagggttct ggcggcgtgc cgagcgcctt tccgagcacc 780

atcttcgaga gcgtttggcc gctgtctact ctgctgaaag ttggctatga tctgaatagc 840

gctccgttca tcgagaaaat tcgtagctac ttgcacgatg cctatatcgc agagaaaggt 900

attctcggtt tcaccccgtt cgttggcgct gacgcggacg acaccgctac cacgattctg 960

gtgttgaatc tgctgaacca accggtgagc gtggacgcga tgttgaaaga atttgaagag 1020

gaacatcact tcaagaccta cagccaagag cgtaatccga gcttttccgc aaactgtaat 1080

gttctgctgg cgctgctgta cagccaggaa ccgagcctgt acagcgcgca aatcgaaaaa 1140

gcgatccgtt ttctgtataa gcaattcacc gactctgaga tggatgtgcg cgataaatgg 1200

aacctgtccc cgtattatag ctggatgctg atgacccagg ccatcacccg tctgacgacc 1260

ctgcaaaaga ccagcaagct gagcacgctg cgtgatgaca gcattagcaa gggcctgatt 1320

tctctgctgt tccgcattgc atccaccgtg gttaaagatc aaaaaccggg tggcagctgg 1380

ggcacgcgtg cgagcaaaga agaaacggca tacgccgtgc tgattctgac ctacgcgttt 1440

tatctggacg aggtgaccga gtctctgcgc cacgatatca aaattgcaat cgagaatggt 1500

tgctcgttcc tgagcgagcg caccatgcaa agcgacagcg agtggctgtg ggtcgaaaag 1560

gttacctaca agagcgaagt gctgagcgaa gcatacatcc tggcagctct gaaacgtgcg 1620

gcagacttgc cggatgagaa cgctgaggca gccccagtga tcaacggtat ctctaccaat 1680

ggctttgagc acaccgaccg cattaatggt aaactcaagg tcaatggtac gaatggcacc 1740

aacggttccc acgaaacgaa cggtatcaat ggcacccatg agattgagca aattaatggt 1800

gtcaacggca cgaatggcca tagcgacgtg ccacatgaca cgaatggttg ggtcgaggaa 1860

ccgacggcga ttaatgaaac gaacggtcac tacgttaacg gcaccaacca tgagactccg 1920

ctgaccaatg gtattagcaa tggtgactcc gtgagcgttc acaccgacca tagcgacagc 1980

tactatcagc gtagcgactg gaccgcggat gaagaacaga tcctgctggg tccattcgat 2040

tacctggaat ccctgcctgg taaaaatatg cgcagccagc tgatccagtc tttcaatacg 2100

tggctgaagg tcccgaccga gagcttggac gtgattatta aggtcattag catgctgcac 2160

actgctagcc tgctgatcga cgatattcag gaccaaagca tcctgcgtcg tggtcagcct 2220

gtggcgcact cgatcttcgg caccgcgcaa gcgatgaact ctggtaacta tgtttacttc 2280

ctggcattgc gtgaagttca gaaattgcaa aacccgaagg ctatcagcat ttatgtggac 2340

agcttgatcg atcttcatcg cggccagggc atggaactgt tctggcgtga ttctctgatg 2400

tgcccgactg aagaacagta tctggacatg gtggcgaaca agaccggtgg cctgttttgt 2460

ctggcgattc agctgatgca ggcagaagcg accattcagg ttgattttat tccgctggtg 2520

cgtctgctgg gtatcatttt ccagatttgc gacgactacc tgaacttgaa aagcactgcg 2580

tataccgaca acaaaggtct gtgtgaagat cttaccgagg gtaaattctc cttcccgatc 2640

attcacagca tccgtagcaa tccgggcaat cgtcagctga tcaatattct gaagcaaaaa 2700

ccgcgcgaag atgacatcaa gcgttacgca ctgtcctata tggagagcac gaatagcttc 2760

gagtacaccc gtggcgtcgt ccgtaaattg aaaaccgaag caattgacac gattcaaggt 2820

ctggagaagc atggcctgga agaaaacatt ggtattcgta agattctggc gcgtatgagc 2880

ctggaactgt aa 2892

<210> 175

<211> 936

<212> DNA

<213> 纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)_TalCeTPP_wt

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(936)

<400> 175

atg tct aat gac acc act agc acg gct tct gcc gga aca gca act tct 48

Met Ser Asn Asp Thr Thr Ser Thr Ala Ser Ala Gly Thr Ala Thr Ser

1 5 10 15

tcg cgg ttt ctt tct gtg ggc gga gtt gtg aat ttc cgt gaa ctg ggc 96

Ser Arg Phe Leu Ser Val Gly Gly Val Val Asn Phe Arg Glu Leu Gly

20 25 30

ggt tat cca tgt gat tct gtc cct cct gct cct gcc tca aac ggc tca 144

Gly Tyr Pro Cys Asp Ser Val Pro Pro Ala Pro Ala Ser Asn Gly Ser

35 40 45

ccg gac aac gca tct gaa gcg atc ctt tgg gtt ggc cac tcg tcc att 192

Pro Asp Asn Ala Ser Glu Ala Ile Leu Trp Val Gly His Ser Ser Ile

50 55 60

cgg cct agg ttt ctc ttt cga tcg gca cag ccg tct cag att acc ccg 240

Arg Pro Arg Phe Leu Phe Arg Ser Ala Gln Pro Ser Gln Ile Thr Pro

65 70 75 80

gcc ggt att gag aca ttg atc cgc cag ctt ggc atc cag gca att ttt 288

Ala Gly Ile Glu Thr Leu Ile Arg Gln Leu Gly Ile Gln Ala Ile Phe

85 90 95

gac ttt cgt tca cgg acg gaa att cag ctt gtc gcc act cgc tat cct 336

Asp Phe Arg Ser Arg Thr Glu Ile Gln Leu Val Ala Thr Arg Tyr Pro

100 105 110

gat tcg cta ctc gag ata cct ggt acg act cgc tat tcc gtg ccc gtc 384

Asp Ser Leu Leu Glu Ile Pro Gly Thr Thr Arg Tyr Ser Val Pro Val

115 120 125

ttc acg gag ggc gac tat tcc ccg gcg tca tta gtc aag agg tac gga 432

Phe Thr Glu Gly Asp Tyr Ser Pro Ala Ser Leu Val Lys Arg Tyr Gly

130 135 140

gtg tcc tcc gat act gca act gat tcc act tcc tcc aaa tgt gcc aag 480

Val Ser Ser Asp Thr Ala Thr Asp Ser Thr Ser Ser Lys Cys Ala Lys

145 150 155 160

cct aca gga ttc gtc cac gca tat gag gct atc gca cgc agc gca gca 528

Pro Thr Gly Phe Val His Ala Tyr Glu Ala Ile Ala Arg Ser Ala Ala

165 170 175

gaa aac ggc agt ttt cgt aaa ata acg gac cac ata ata caa cat ccg 576

Glu Asn Gly Ser Phe Arg Lys Ile Thr Asp His Ile Ile Gln His Pro

180 185 190

gac cgg cct atc ctg ttt cac tgt aca ttg gga aaa gac cga acc ggt 624

Asp Arg Pro Ile Leu Phe His Cys Thr Leu Gly Lys Asp Arg Thr Gly

195 200 205

gta ttt gca gca ttg tta ttg agt ctt tgc ggg gta cca aac gac acg 672

Val Phe Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Cys Gly Val Pro Asn Asp Thr

210 215 220

ata gtt gaa gac tat gct atg act acc gag gga ttt ggg gtc tgg cga 720

Ile Val Glu Asp Tyr Ala Met Thr Thr Glu Gly Phe Gly Val Trp Arg

225 230 235 240

gaa cat cta att caa cgc ctg tta caa aga aag gat gca gct acg cgt 768

Glu His Leu Ile Gln Arg Leu Leu Gln Arg Lys Asp Ala Ala Thr Arg

245 250 255

gag gat gca gaa ttc att att gcc agc cac ccg gag agt atg aag gct 816

Glu Asp Ala Glu Phe Ile Ile Ala Ser His Pro Glu Ser Met Lys Ala

260 265 270

ttt cta gaa gat gtg gta gca acc aag ttc ggg gat gct cga aat tac 864

Phe Leu Glu Asp Val Val Ala Thr Lys Phe Gly Asp Ala Arg Asn Tyr

275 280 285

ttt atc cag cac tgt gga ttg acg gaa gcg gag gtt gat aag cta att 912

Phe Ile Gln His Cys Gly Leu Thr Glu Ala Glu Val Asp Lys Leu Ile

290 295 300

cgg aca ctg gtc att gcg aat tga 936

Arg Thr Leu Val Ile Ala Asn

305 310

<210> 176

<211> 311

<212> PRT

<213> 纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)_TalCeTPP_wt

<400> 176

Met Ser Asn Asp Thr Thr Ser Thr Ala Ser Ala Gly Thr Ala Thr Ser

1 5 10 15

Ser Arg Phe Leu Ser Val Gly Gly Val Val Asn Phe Arg Glu Leu Gly

20 25 30

Gly Tyr Pro Cys Asp Ser Val Pro Pro Ala Pro Ala Ser Asn Gly Ser

35 40 45

Pro Asp Asn Ala Ser Glu Ala Ile Leu Trp Val Gly His Ser Ser Ile

50 55 60

Arg Pro Arg Phe Leu Phe Arg Ser Ala Gln Pro Ser Gln Ile Thr Pro

65 70 75 80

Ala Gly Ile Glu Thr Leu Ile Arg Gln Leu Gly Ile Gln Ala Ile Phe

85 90 95

Asp Phe Arg Ser Arg Thr Glu Ile Gln Leu Val Ala Thr Arg Tyr Pro

100 105 110

Asp Ser Leu Leu Glu Ile Pro Gly Thr Thr Arg Tyr Ser Val Pro Val

115 120 125

Phe Thr Glu Gly Asp Tyr Ser Pro Ala Ser Leu Val Lys Arg Tyr Gly

130 135 140

Val Ser Ser Asp Thr Ala Thr Asp Ser Thr Ser Ser Lys Cys Ala Lys

145 150 155 160

Pro Thr Gly Phe Val His Ala Tyr Glu Ala Ile Ala Arg Ser Ala Ala

165 170 175

Glu Asn Gly Ser Phe Arg Lys Ile Thr Asp His Ile Ile Gln His Pro

180 185 190

Asp Arg Pro Ile Leu Phe His Cys Thr Leu Gly Lys Asp Arg Thr Gly

195 200 205

Val Phe Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Cys Gly Val Pro Asn Asp Thr

210 215 220

Ile Val Glu Asp Tyr Ala Met Thr Thr Glu Gly Phe Gly Val Trp Arg

225 230 235 240

Glu His Leu Ile Gln Arg Leu Leu Gln Arg Lys Asp Ala Ala Thr Arg

245 250 255

Glu Asp Ala Glu Phe Ile Ile Ala Ser His Pro Glu Ser Met Lys Ala

260 265 270

Phe Leu Glu Asp Val Val Ala Thr Lys Phe Gly Asp Ala Arg Asn Tyr

275 280 285

Phe Ile Gln His Cys Gly Leu Thr Glu Ala Glu Val Asp Lys Leu Ile

290 295 300

Arg Thr Leu Val Ile Ala Asn

305 310

<210> 177

<211> 936

<212> DNA

<213> 纤维素分解篮状菌(Talaromyces cellulolyticus)_TalCeTPP_大肠杆菌，经优化的

<400> 177

atgagcaacg acacgaccag caccgcatcc gcaggcaccg caacttcttc gcgctttctg 60

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cctgcaccag caagcaatgg tagcccggac aatgcgagcg aagcgattct gtgggttggt 180

cacagcagca ttcgtccgcg cttcttgttt cgtagcgcac agccgtccca gatcaccccg 240

gccggtattg aaacgctgat tcgccaactc ggtattcaag cgatctttga ctttcgttcc 300

cgtaccgaga tccaactggt ggcaacccgc tacccagata gcctgctgga aattccgggc 360

acgactcgtt actctgttcc ggtctttacc gagggcgact acagcccggc ttctctggtt 420

aagcgttatg gtgtctctag cgacacggca acggatagca ccagctcaaa gtgcgcgaaa 480

ccgaccggct ttgtgcatgc ttatgaagcg attgctcgtt ctgccgcgga gaacggtagc 540

ttccgcaaga tcaccgacca cattatccaa catccggatc gcccgatcct gtttcactgc 600

acgctgggca aagaccgtac cggtgttttc gcagcgctgc tgctgagctt gtgtggtgtc 660

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gagcacttga ttcagcgtct gctgcagcgc aaagatgcgg ctacgcgtga agatgccgag 780

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gataagctga tccgtacgct ggtgatcgcg aattaa 936

<210> 178

<211> 1122

<212> DNA

<213> 解芳烃卡斯特罗尼氏菌(Castellaniella defragrans)_CdGeoA_wt (NZ_HG916765.1 3061533-3062654 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1122)

<400> 178

atg aac gac acc cag gat ttc att tcc gcg cag gcc gcc gtg ctg cgc 48

Met Asn Asp Thr Gln Asp Phe Ile Ser Ala Gln Ala Ala Val Leu Arg

1 5 10 15

cag gtc ggc ggg ccg ctc gcg gtc gag ccc gtg cgc atc agc atg ccc 96

Gln Val Gly Gly Pro Leu Ala Val Glu Pro Val Arg Ile Ser Met Pro

20 25 30

aaa ggc gac gag gtc ttg atc cgc atc gcc ggc gtg ggc gtc tgc cac 144

Lys Gly Asp Glu Val Leu Ile Arg Ile Ala Gly Val Gly Val Cys His

35 40 45

acc gac ctg gtg tgc cgc gac gga ttt ccc gtg ccg ctg ccg atc gtg 192

Thr Asp Leu Val Cys Arg Asp Gly Phe Pro Val Pro Leu Pro Ile Val

50 55 60

ctc ggc cac gaa ggc tcc ggc acc gtc gag gcg gtg ggc gag cag gtg 240

Leu Gly His Glu Gly Ser Gly Thr Val Glu Ala Val Gly Glu Gln Val

65 70 75 80

cgc acg ctc aag ccc ggc gac cgg gtc gtg ctg tcc ttc aat tcc tgc 288

Arg Thr Leu Lys Pro Gly Asp Arg Val Val Leu Ser Phe Asn Ser Cys

85 90 95

ggg cat tgc ggc aat tgc cac gac ggc cat ccg tcg aac tgc ctg cag 336

Gly His Cys Gly Asn Cys His Asp Gly His Pro Ser Asn Cys Leu Gln

100 105 110

atg ctg ccc ctg aac ttc ggc ggc gcg cag cgc gtg gac ggc ggc cag 384

Met Leu Pro Leu Asn Phe Gly Gly Ala Gln Arg Val Asp Gly Gly Gln

115 120 125

gtg ctg gac ggc gcc ggc cat ccc gtg cag agc atg ttc ttc ggc cag 432

Val Leu Asp Gly Ala Gly His Pro Val Gln Ser Met Phe Phe Gly Gln

130 135 140

tcc tcg ttc ggc acg cat gcc gtg gcg cgc gaa atc aat gcg gtc aag 480

Ser Ser Phe Gly Thr His Ala Val Ala Arg Glu Ile Asn Ala Val Lys

145 150 155 160

gtc ggc gac gac ctg ccg ctg gaa ctg ctg ggc ccg ctg ggc tgc ggc 528

Val Gly Asp Asp Leu Pro Leu Glu Leu Leu Gly Pro Leu Gly Cys Gly

165 170 175

atc cag acc ggc gcg ggc gcg gcg atc aat tcg ctg ggg atc ggc ccg 576

Ile Gln Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ile Asn Ser Leu Gly Ile Gly Pro

180 185 190

ggc cag tcc ctg gcc atc ttc ggc ggt ggc ggc gtc ggc ctg agc gcg 624

Gly Gln Ser Leu Ala Ile Phe Gly Gly Gly Gly Val Gly Leu Ser Ala

195 200 205

ctg ctg ggc gcg cgc gcc gtc ggg gcg gac cgg gtc gtg gtg atc gag 672

Leu Leu Gly Ala Arg Ala Val Gly Ala Asp Arg Val Val Val Ile Glu

210 215 220

ccc aat gcc gcg cgc cgg gcc ctg gcc ctg gaa ctg ggc gcc agc cat 720

Pro Asn Ala Ala Arg Arg Ala Leu Ala Leu Glu Leu Gly Ala Ser His

225 230 235 240

gcc ctc gac ccg cac gcc gaa ggc gac ctg gtg gcc gcg atc aag gcg 768

Ala Leu Asp Pro His Ala Glu Gly Asp Leu Val Ala Ala Ile Lys Ala

245 250 255

gcc acc ggc ggc ggc gcg acc cac tcg ctg gac acg acg ggc ctg ccc 816

Ala Thr Gly Gly Gly Ala Thr His Ser Leu Asp Thr Thr Gly Leu Pro

260 265 270

ccg gtc atc ggc agc gcg atc gcc tgc acc ctg ccg ggc ggc acc gtg 864

Pro Val Ile Gly Ser Ala Ile Ala Cys Thr Leu Pro Gly Gly Thr Val

275 280 285

ggc atg gtc gga ctg ccg gcg ccc gat gcc ccg gtg ccg gcg acc ctg 912

Gly Met Val Gly Leu Pro Ala Pro Asp Ala Pro Val Pro Ala Thr Leu

290 295 300

ctc gat ctg ctg agc aaa agc gtc acc ctg cgc ccg atc acc gag ggc 960

Leu Asp Leu Leu Ser Lys Ser Val Thr Leu Arg Pro Ile Thr Glu Gly

305 310 315 320

gac gcg gac ccg cag cgc ttc atc ccg cgc atg ctg gat ttc cat cgc 1008

Asp Ala Asp Pro Gln Arg Phe Ile Pro Arg Met Leu Asp Phe His Arg

325 330 335

gcg ggc aaa ttc ccg ttc gac cgg ctg atc acc cgc tac cgt ttc gac 1056

Ala Gly Lys Phe Pro Phe Asp Arg Leu Ile Thr Arg Tyr Arg Phe Asp

340 345 350

cag atc aac gag gcc ctg cac gcc acc gag aag ggc gag gcg atc aag 1104

Gln Ile Asn Glu Ala Leu His Ala Thr Glu Lys Gly Glu Ala Ile Lys

355 360 365

ccg gtg ctg gtg ttc tga 1122

Pro Val Leu Val Phe

370

<210> 179

<211> 373

<212> PRT

<400> 179

Met Asn Asp Thr Gln Asp Phe Ile Ser Ala Gln Ala Ala Val Leu Arg

1 5 10 15

Gln Val Gly Gly Pro Leu Ala Val Glu Pro Val Arg Ile Ser Met Pro

20 25 30

Lys Gly Asp Glu Val Leu Ile Arg Ile Ala Gly Val Gly Val Cys His

35 40 45

Thr Asp Leu Val Cys Arg Asp Gly Phe Pro Val Pro Leu Pro Ile Val

50 55 60

Leu Gly His Glu Gly Ser Gly Thr Val Glu Ala Val Gly Glu Gln Val

65 70 75 80

Arg Thr Leu Lys Pro Gly Asp Arg Val Val Leu Ser Phe Asn Ser Cys

85 90 95

Gly His Cys Gly Asn Cys His Asp Gly His Pro Ser Asn Cys Leu Gln

100 105 110

Met Leu Pro Leu Asn Phe Gly Gly Ala Gln Arg Val Asp Gly Gly Gln

115 120 125

Val Leu Asp Gly Ala Gly His Pro Val Gln Ser Met Phe Phe Gly Gln

130 135 140

Ser Ser Phe Gly Thr His Ala Val Ala Arg Glu Ile Asn Ala Val Lys

145 150 155 160

Val Gly Asp Asp Leu Pro Leu Glu Leu Leu Gly Pro Leu Gly Cys Gly

165 170 175

Ile Gln Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ile Asn Ser Leu Gly Ile Gly Pro

180 185 190

Gly Gln Ser Leu Ala Ile Phe Gly Gly Gly Gly Val Gly Leu Ser Ala

195 200 205

Leu Leu Gly Ala Arg Ala Val Gly Ala Asp Arg Val Val Val Ile Glu

210 215 220

Pro Asn Ala Ala Arg Arg Ala Leu Ala Leu Glu Leu Gly Ala Ser His

225 230 235 240

Ala Leu Asp Pro His Ala Glu Gly Asp Leu Val Ala Ala Ile Lys Ala

245 250 255

Ala Thr Gly Gly Gly Ala Thr His Ser Leu Asp Thr Thr Gly Leu Pro

260 265 270

Pro Val Ile Gly Ser Ala Ile Ala Cys Thr Leu Pro Gly Gly Thr Val

275 280 285

Gly Met Val Gly Leu Pro Ala Pro Asp Ala Pro Val Pro Ala Thr Leu

290 295 300

Leu Asp Leu Leu Ser Lys Ser Val Thr Leu Arg Pro Ile Thr Glu Gly

305 310 315 320

Asp Ala Asp Pro Gln Arg Phe Ile Pro Arg Met Leu Asp Phe His Arg

325 330 335

Ala Gly Lys Phe Pro Phe Asp Arg Leu Ile Thr Arg Tyr Arg Phe Asp

340 345 350

Gln Ile Asn Glu Ala Leu His Ala Thr Glu Lys Gly Glu Ala Ile Lys

355 360 365

Pro Val Leu Val Phe

370

<210> 180

<211> 1122

<212> DNA

<213> 解芳烃卡斯特罗尼氏菌(Castellaniella defragrans)_CdGeoA_大肠杆菌，经优化的

<400> 180

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ccgctggccg ttgagcctgt tcgtatcagc atgccgaagg gtgacgaagt cctgattcgt 120

atcgcgggtg ttggtgtgtg ccacaccgac ttggtgtgcc gtgatggctt cccggtgccg 180

ctgccaattg tgctgggtca cgagggtagc ggtactgtcg aagccgtcgg tgaacaagtc 240

cgtaccctga aaccgggcga tcgcgtcgtg ctgagcttta acagctgcgg tcattgcggt 300

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tttttcggcc agtccagctt tggcacccac gcagtagcgc gcgagatcaa cgcagtcaag 480

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gcgggtgcag ctatcaattc tctgggcatt ggtccgggtc agtctctggc tatcttcggc 600

ggcggcggcg tgggtctgag cgcactgctg ggcgcccgtg cggtgggtgc cgaccgtgtt 660

gttgtcattg agccgaatgc agcgcgccgt gcgctggcat tggaactggg tgccagccac 720

gcactggacc cgcatgccga gggcgacctt gttgcggcga ttaaagctgc gacgggtggc 780

ggcgctacgc atagcttgga tacgaccggc ctgccgccag tcattggctc cgcgatcgcg 840

tgtactctgc cgggtggcac cgttggtatg gttggtctgc cggcgccgga cgcaccggtc 900

cctgcgacgc tgttggatct gctgagcaaa tcggttaccc tgcgtccgat taccgagggt 960

gacgctgacc cgcaacgctt catcccgcgt atgctggatt tccatcgtgc gggcaagttt 1020

ccgttcgacc gcctgatcac ccgttaccgc tttgatcaga tcaatgaagc gctgcacgcg 1080

accgagaaag gtgaagcaat caaaccggtt ctggtgtttt aa 1122

<210> 181

<211> 963

<212> DNA

<213> 三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)_GGPP合酶carG_wt (JQ289995.1)

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(963)

<400> 181

atg ttg acc tct agc aaa tca att gaa tcc ttc ccc aag aat gtt caa 48

Met Leu Thr Ser Ser Lys Ser Ile Glu Ser Phe Pro Lys Asn Val Gln

1 5 10 15

cct tat ggc aag cat tat caa aat ggc ttg gaa cct gtt gga aaa agc 96

Pro Tyr Gly Lys His Tyr Gln Asn Gly Leu Glu Pro Val Gly Lys Ser

20 25 30

caa gaa gat att ctc ttg gag cca ttc cac tat ctc tgt tcg aat cct 144

Gln Glu Asp Ile Leu Leu Glu Pro Phe His Tyr Leu Cys Ser Asn Pro

35 40 45

ggt aaa gat gtc cga acc aag atg att gaa gcg ttc aat gct tgg ctg 192

Gly Lys Asp Val Arg Thr Lys Met Ile Glu Ala Phe Asn Ala Trp Leu

50 55 60

aaa gta ccc aag gac gat ttg atc gtc atc aca cgt gtg att gaa atg 240

Lys Val Pro Lys Asp Asp Leu Ile Val Ile Thr Arg Val Ile Glu Met

65 70 75 80

ctt cat agt gct agt ttg tta att gat gat gtg gaa gat gat tcc gtg 288

Leu His Ser Ala Ser Leu Leu Ile Asp Asp Val Glu Asp Asp Ser Val

85 90 95

ttg cgt cgt ggt gtt cct gca gct cat cat ata tat ggt act cct caa 336

Leu Arg Arg Gly Val Pro Ala Ala His His Ile Tyr Gly Thr Pro Gln

100 105 110

act atc aat tgt gct aat tac gtg tac ttt ctt gca ctg aaa gaa att 384

Thr Ile Asn Cys Ala Asn Tyr Val Tyr Phe Leu Ala Leu Lys Glu Ile

115 120 125

gcc aag ttg aac aag ccc aac atg att act atc tat acc gat gaa ttg 432

Ala Lys Leu Asn Lys Pro Asn Met Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Glu Leu

130 135 140

atc aat ttg cac aga ggg caa gga atg gaa ttg ttt tgg cgt gac acc 480

Ile Asn Leu His Arg Gly Gln Gly Met Glu Leu Phe Trp Arg Asp Thr

145 150 155 160

tta act tgt cct aca gag aaa gaa ttt ctt gac atg gta aac gac aaa 528

Leu Thr Cys Pro Thr Glu Lys Glu Phe Leu Asp Met Val Asn Asp Lys

165 170 175

act ggt ggc ctc ttg aga tta gct gtg aaa ctt atg caa gaa gct agt 576

Thr Gly Gly Leu Leu Arg Leu Ala Val Lys Leu Met Gln Glu Ala Ser

180 185 190

caa tcg gga act gat tat acg gga ctc gta agt aag att ggt atc cat 624

Gln Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Gly Leu Val Ser Lys Ile Gly Ile His

195 200 205

ttc caa gta cgc gac gat tat atg aat ttg cag tca aaa aac tat gct 672

Phe Gln Val Arg Asp Asp Tyr Met Asn Leu Gln Ser Lys Asn Tyr Ala

210 215 220

gac aac aaa gga ttc tgc gaa gac ttg aca gaa gga aaa ttc tct ttc 720

Asp Asn Lys Gly Phe Cys Glu Asp Leu Thr Glu Gly Lys Phe Ser Phe

225 230 235 240

cct att ata cat tca atc cgc tct gac cca agc aat cgc cag ctt ttg 768

Pro Ile Ile His Ser Ile Arg Ser Asp Pro Ser Asn Arg Gln Leu Leu

245 250 255

aac att tta aaa cag cgc agt agc tct atc gaa ctc aag caa ttt gcc 816

Asn Ile Leu Lys Gln Arg Ser Ser Ser Ile Glu Leu Lys Gln Phe Ala

260 265 270

ttg cag cta ctg gaa aac aca aac act ttc caa tac tgt cgt gat ttc 864

Leu Gln Leu Leu Glu Asn Thr Asn Thr Phe Gln Tyr Cys Arg Asp Phe

275 280 285

tta cgt gtc ttg gaa aag gaa gct aga gaa gaa att aag ctt tta ggg 912

Leu Arg Val Leu Glu Lys Glu Ala Arg Glu Glu Ile Lys Leu Leu Gly

290 295 300

ggt aac atc atg ttg gag aaa att atg gat gtc ttg agt gtc aat gaa 960

Gly Asn Ile Met Leu Glu Lys Ile Met Asp Val Leu Ser Val Asn Glu

305 310 315 320

taa 963

<210> 182

<211> 320

<212> PRT

<213> 三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)_GGPP合酶carG_wt (JQ289995.1)

<400> 182

Met Leu Thr Ser Ser Lys Ser Ile Glu Ser Phe Pro Lys Asn Val Gln

1 5 10 15

Pro Tyr Gly Lys His Tyr Gln Asn Gly Leu Glu Pro Val Gly Lys Ser

20 25 30

Gln Glu Asp Ile Leu Leu Glu Pro Phe His Tyr Leu Cys Ser Asn Pro

35 40 45

Gly Lys Asp Val Arg Thr Lys Met Ile Glu Ala Phe Asn Ala Trp Leu

50 55 60

Lys Val Pro Lys Asp Asp Leu Ile Val Ile Thr Arg Val Ile Glu Met

65 70 75 80

Leu His Ser Ala Ser Leu Leu Ile Asp Asp Val Glu Asp Asp Ser Val

85 90 95

Leu Arg Arg Gly Val Pro Ala Ala His His Ile Tyr Gly Thr Pro Gln

100 105 110

Thr Ile Asn Cys Ala Asn Tyr Val Tyr Phe Leu Ala Leu Lys Glu Ile

115 120 125

Ala Lys Leu Asn Lys Pro Asn Met Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Glu Leu

130 135 140

Ile Asn Leu His Arg Gly Gln Gly Met Glu Leu Phe Trp Arg Asp Thr

145 150 155 160

Leu Thr Cys Pro Thr Glu Lys Glu Phe Leu Asp Met Val Asn Asp Lys

165 170 175

Thr Gly Gly Leu Leu Arg Leu Ala Val Lys Leu Met Gln Glu Ala Ser

180 185 190

Gln Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Gly Leu Val Ser Lys Ile Gly Ile His

195 200 205

Phe Gln Val Arg Asp Asp Tyr Met Asn Leu Gln Ser Lys Asn Tyr Ala

210 215 220

Asp Asn Lys Gly Phe Cys Glu Asp Leu Thr Glu Gly Lys Phe Ser Phe

225 230 235 240

Pro Ile Ile His Ser Ile Arg Ser Asp Pro Ser Asn Arg Gln Leu Leu

245 250 255

Asn Ile Leu Lys Gln Arg Ser Ser Ser Ile Glu Leu Lys Gln Phe Ala

260 265 270

Leu Gln Leu Leu Glu Asn Thr Asn Thr Phe Gln Tyr Cys Arg Asp Phe

275 280 285

Leu Arg Val Leu Glu Lys Glu Ala Arg Glu Glu Ile Lys Leu Leu Gly

290 295 300

Gly Asn Ile Met Leu Glu Lys Ile Met Asp Val Leu Ser Val Asn Glu

305 310 315 320

<210> 183

<211> 963

<212> DNA

<213> 三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)_GGPP合酶carG_酵母，经优化的

<400> 183

atgttgacat cttctaagtc catcgaatct ttcccaaaga acgttcaacc atacggtaaa 60

cactatcaaa acggtttaga accagtcggt aagtctcaag aagacatctt gttggaacct 120

ttccactact tatgttctaa tccaggtaag gatgttagaa ccaagatgat tgaagctttc 180

aacgcctggt tgaaagtccc aaaggacgat ttgattgtta tcaccagagt cattgaaatg 240

ttgcactccg cttctttgtt gattgatgac gtcgaggacg attctgtctt gagaagaggt 300

gtcccagccg cccaccatat ctacggtacc cctcaaacca tcaactgcgc taactacgtt 360

tatttcttgg ccttgaaaga aatcgccaag ttgaacaagc caaatatgat tactatttat 420

accgatgaat tgatcaactt gcacagaggt caaggtatgg aattgttctg gcgtgatacc 480

ttgacctgcc caactgagaa agagtttttg gatatggtta acgataagac tggtggtttg 540

ttgagattgg ccgtcaagtt gatgcaagag gcttctcaat ctggtaccga ctatactggt 600

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aaaaactacg ccgataataa gggtttctgt gaagatttga ccgaaggtaa gttctccttt 720

ccaattattc actctatcag atctgaccca tccaacagac aattattgaa tattttgaag 780

caaagatctt cttctattga attgaaacaa ttcgctttac aattgttaga aaacactaac 840

acttttcaat actgtagaga tttcttgaga gttttggaaa aggaagccag agaagagatc 900

aaattattgg gtggtaacat catgttggaa aagattatgg acgtcttgtc tgttaatgaa 960

taa 963

<210> 184

<211> 2382

<212> DNA

<213> 丹参(Salvia miltiorrhiza)_SmCPS2_wt (EU003997.1 73-2454 (+))

<400> 184

atggcctcct tatcctctac aatcctcagc cgctctccgg cggcccgccg cagaattacg 60

ccggcgtcgg ctaagcttca ccggccggaa tgtttcgcca ccagtgcatg gatgggcagc 120

agcagtaaaa acctttctct cagctaccaa cttaatcaca agaaaatatc agttgccaca 180

gtagatgcgc cgcaggtgca tgaccacgac ggcactaccg ttcatcaagg ccatgatgcg 240

gtgaagaata ttgaggatcc cattgaatac atcaggacgt tgttgaggac gacgggggac 300

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gggcgggacg gcccccagtt cccctccagc ctcgagtgga tcgtgcagaa tcaactcgag 420

gatggatcgt ggggcgatca gaagcttttc tgcgtctacg atcgcctcgt caataccatc 480

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acgtacatca aggaaaatgt ggataaactt atggagggaa atgaggagca catgacttgt 600

gggttcgaag tggtgtttcc ggcgcttcta caaaaagcga aaagcttagg catcgaagat 660

cttccttacg attctccggc ggtgcaggag gtttatcatg tcagggaaca aaagttgaaa 720

aggattccac tggagattat gcacaaaata ccgacatcat tattatttag tttggaaggg 780

ctcgaaaatt tggattggga caaacttttg aaactgcagt cagccgacgg ttccttcctc 840

acctctccct cctccaccgc cttcgcgttc atgcaaacca aggatgaaaa atgctaccaa 900

ttcatcaaga acacgataga cactttcaac ggaggagcgc cacacactta tcccgtcgac 960

gtgtttggaa ggctctgggc gatcgaccgg ctgcagcgcc tcggaatttc ccgctttttt 1020

gagccggaga ttgctgattg cttaagccac atccacaaat tttggacgga taagggagtt 1080

ttcagtggga gagaatcgga gttttgcgac attgacgata catccatggg aatgaggctt 1140

atgaggatgc atggatatga tgttgatcca aatgtgctga ggaatttcaa gcagaaagat 1200

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gcctacgatt tcttgaaaga aaaactagcc aacaatcaga ttctggataa atgggttatt 1380

tctaagcact tgcctgatga gatcaagctc gggctagaga tgccgtggct cgccacccta 1440

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tacgagagct gcggcatcga ggaattcggg ataagcagaa aggaccttct gctttcctat 1680

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<210> 185

<211> 736

<212> PRT

<213> 丹参(Salvia miltiorrhiza)_SmCPS2_酵母，经优化的

<400> 185

Met Ala Thr Val Asp Ala Pro Gln Val His Asp His Asp Gly Thr Thr

1 5 10 15

Val His Gln Gly His Asp Ala Val Lys Asn Ile Glu Asp Pro Ile Glu

20 25 30

Tyr Ile Arg Thr Leu Leu Arg Thr Thr Gly Asp Gly Arg Ile Ser Val

35 40 45

Ser Pro Tyr Asp Thr Ala Trp Val Ala Met Ile Lys Asp Val Glu Gly

50 55 60

Arg Asp Gly Pro Gln Phe Pro Ser Ser Leu Glu Trp Ile Val Gln Asn

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asp Gly Ser Trp Gly Asp Gln Lys Leu Phe Cys Val Tyr

85 90 95

Asp Arg Leu Val Asn Thr Ile Ala Cys Val Val Ala Leu Arg Ser Trp

100 105 110

Asn Val His Ala His Lys Val Lys Arg Gly Val Thr Tyr Ile Lys Glu

115 120 125

Asn Val Asp Lys Leu Met Glu Gly Asn Glu Glu His Met Thr Cys Gly

130 135 140

Phe Glu Val Val Phe Pro Ala Leu Leu Gln Lys Ala Lys Ser Leu Gly

145 150 155 160

Ile Glu Asp Leu Pro Tyr Asp Ser Pro Ala Val Gln Glu Val Tyr His

165 170 175

Val Arg Glu Gln Lys Leu Lys Arg Ile Pro Leu Glu Ile Met His Lys

180 185 190

Ile Pro Thr Ser Leu Leu Phe Ser Leu Glu Gly Leu Glu Asn Leu Asp

195 200 205

Trp Asp Lys Leu Leu Lys Leu Gln Ser Ala Asp Gly Ser Phe Leu Thr

210 215 220

Ser Pro Ser Ser Thr Ala Phe Ala Phe Met Gln Thr Lys Asp Glu Lys

225 230 235 240

Cys Tyr Gln Phe Ile Lys Asn Thr Ile Asp Thr Phe Asn Gly Gly Ala

245 250 255

Pro His Thr Tyr Pro Val Asp Val Phe Gly Arg Leu Trp Ala Ile Asp

260 265 270

Arg Leu Gln Arg Leu Gly Ile Ser Arg Phe Phe Glu Pro Glu Ile Ala

275 280 285

Asp Cys Leu Ser His Ile His Lys Phe Trp Thr Asp Lys Gly Val Phe

290 295 300

Ser Gly Arg Glu Ser Glu Phe Cys Asp Ile Asp Asp Thr Ser Met Gly

305 310 315 320

Met Arg Leu Met Arg Met His Gly Tyr Asp Val Asp Pro Asn Val Leu

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Arg Asn Phe Lys Gln Lys Asp Gly Lys Phe Ser Cys Tyr Gly Gly Gln

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Met Ile Glu Ser Pro Ser Pro Ile Tyr Asn Leu Tyr Arg Ala Ser Gln

355 360 365

Leu Arg Phe Pro Gly Glu Glu Ile Leu Glu Asp Ala Lys Arg Phe Ala

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Tyr Asp Phe Leu Lys Glu Lys Leu Ala Asn Asn Gln Ile Leu Asp Lys

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Met Pro Trp Leu Ala Thr Leu Pro Arg Val Glu Ala Lys Tyr Tyr Ile

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Gln Glu Trp Tyr Glu Ser Cys Gly Ile Glu Glu Phe Gly Ile Ser Arg

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Lys Asp Leu Leu Leu Ser Tyr Phe Leu Ala Thr Ala Ser Ile Phe Glu

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515 520 525

Ala Lys Met Ile Thr Ser Phe Phe Asn Lys Glu Thr Thr Ser Glu Glu

530 535 540

Asp Lys Arg Ala Leu Leu Asn Glu Leu Gly Asn Ile Asn Gly Leu Asn

545 550 555 560

Asp Thr Asn Gly Ala Gly Arg Glu Gly Gly Ala Gly Ser Ile Ala Leu

565 570 575

Ala Thr Leu Thr Gln Phe Leu Glu Gly Phe Asp Arg Tyr Thr Arg His

580 585 590

Gln Leu Lys Asn Ala Trp Ser Val Trp Leu Thr Gln Leu Gln His Gly

595 600 605

Glu Ala Asp Asp Ala Glu Leu Leu Thr Asn Thr Leu Asn Ile Cys Ala

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645 650 655

Gln Ser Glu Lys Glu Met Gly Val Glu Gly Glu Ile Ala Ala Lys Ser

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Ser Ile Lys Asn Lys Glu Leu Glu Glu Asp Met Gln Met Leu Val Lys

675 680 685

Leu Val Leu Glu Lys Tyr Gly Gly Ile Asp Arg Asn Ile Lys Lys Ala

690 695 700

Phe Leu Ala Val Ala Lys Thr Tyr Tyr Tyr Arg Ala Tyr His Ala Ala

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Asp Thr Ile Asp Thr His Met Phe Lys Val Leu Phe Glu Pro Val Ala

725 730 735

<210> 186

<211> 2211

<212> DNA

<213> 丹参(Salvia miltiorrhiza)_SmCPS2_酵母，经优化的

<400> 186

atggctactg ttgacgctcc acaagttcac gaccacgacg gtactactgt tcaccaaggt 60

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gacgttgaag gtagagacgg tccacaattc ccatcttctt tggaatggat cgttcaaaac 240

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aagttgaaga gaatcccatt ggaaatcatg cacaagatcc caacttcttt gttgttctct 600

ttggaaggtt tggaaaactt ggactgggac aagttgttga agttgcaatc tgctgacggt 660

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atgagattga tgagaatgca cggttacgac gttgacccaa acgttttgag aaacttcaag 1020

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tgggttatct ctaagcactt gccagacgaa atcaagttgg gtttggaaat gccatggttg 1260

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gacactatcg acactcacat gttcaaggtt ttgttcgaac cagttgctta a 2211

<210> 187

<211> 2358

<212> DNA

<213> 快乐鼠尾草(Salvia sclarea)_SsLPS_wt (JN133923.1)

<400> 187

atgacttctg taaatttgag cagagcacca gcagcgatta cccggcgcag gctgcagcta 60

cagccggaat ttcatgccga gtgttcatgg ctgaaaagca gcagcaaaca cgcgcccttg 120

accttgagtt gccaaatccg tcctaagcaa ctctcccaaa tagctgaatt gagagtaaca 180

agcctggatg cgtcgcaagc gagtgaaaaa gacatttccc ttgttcaaac tccgcataag 240

gttgaggtta atgaaaagat cgaggagtca atcgagtacg tccaaaatct gttgatgacg 300

tcgggcgacg ggcgaataag cgtgtcaccc tatgacacgg cagtgatcgc cctgatcaag 360

gacttgaaag ggcgcgacgc cccgcagttt ccgtcatgtc tcgagtggat cgcgcaccac 420

caactggctg atggctcatg gggcgacgaa ttcttctgta tttatgatcg gattctaaat 480

acattggcat gtgtcgtagc cttgaaatca tggaaccttc actctgatat tattgaaaaa 540

ggagtgacgt acatcaagga gaatgtgcat aaacttaaag gtgcaaatgt tgagcacagg 600

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caagatctgc cctatgatca tcccctcatc aaggagattg ctgacacaaa acaacaaaga 720

ttgaaagaga tacccaagga tttggtttac caaatgccaa cgaatttact gtacagttta 780

gaagggttag gagatttgga gtgggaaagg ctactgaaac tgcagtcggg caatggctcc 840

ttcctcactt cgccgtcgtc caccgccgcc gtcttgatgc ataccaaaga tgaaaaatgt 900

ttgaaataca tcgaaaacgc cctcaagaat tgcgacggag gagcaccaca tacttatcca 960

gtcgatatct tctcaagact ttgggcaatc gataggctac aacgcctagg aatttctcgt 1020

ttcttccagc acgagatcaa gtatttctta gatcacatcg aaagcgtttg ggaggagacc 1080

ggagttttca gtggaagata tacgaaattt agcgatattg atgacacgtc catgggcgtt 1140

aggcttctca aaatgcacgg atacgacgtc gatccaaatg tactaaaaca tttcaagcaa 1200

caagatggta aattttcctg ctacattggt caatcggtcg agtctgcatc tccaatgtac 1260

aatctttata gggctgctca actaagattt ccaggagaag aagttcttga agaagccact 1320

aaatttgcct ttaacttctt gcaagaaatg ctagtcaaag atcgacttca agaaagatgg 1380

gtgatatccg accacttatt tgatgagata aagctggggt tgaagatgcc atggtacgcc 1440

actctacccc gagtcgaggc tgcatattat ctagaccatt atgctggttc tggtgatgta 1500

tggattggca agagtttcta caggatgcca gaaatcagca atgatacata caaggagctt 1560

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gaatggtacg acagatgcag ccttagcgaa ttcgggataa gcaaaagaga gttgcttcgc 1680

tcttactttc tggccgcagc aaccatattc gaaccggaga gaactcaaga gaggcttctg 1740

tgggccaaaa ccagaattct ttctaagatg atcacttcat ttgtcaacat tagtggaaca 1800

acactatctt tggactacaa tttcaatggc ctcgatgaaa taattagtag tgccaatgaa 1860

gatcaaggac tggctgggac tctgctggca accttccatc aacttctaga cggattcgat 1920

atatacactc tccatcaact caaacatgtt tggagccaat ggttcatgaa agtgcagcaa 1980

ggagagggaa gcggcgggga agacgcggtg ctcctagcga acacgctcaa catctgcgcc 2040

ggcctcaacg aagacgtgtt gtccaacaat gaatacacgg ctctgtccac cctcacaaat 2100

aaaatctgca atcgcctcgc ccaaattcaa gacaataaga ttctccaagt tgtggatggg 2160

agcataaagg ataaggagct agaacaggat atgcaggcgt tggtgaagtt agtgcttcaa 2220

gaaaatggcg gcgccgtaga cagaaacatc agacacacgt ttttgtcggt ttccaagact 2280

ttctactacg atgcctacca cgacgatgag acgaccgatc ttcatatctt caaagtactc 2340

tttcgaccgg ttgtatga 2358

<210> 188

<211> 723

<212> PRT

<213> 快乐鼠尾草(Salvia sclarea)_SsLPS_大肠杆菌，经优化的

<400> 188

Met Ala Ser Gln Ala Ser Glu Lys Asp Ile Ser Leu Val Gln Thr Pro

1 5 10 15

His Lys Val Glu Val Asn Glu Lys Ile Glu Glu Ser Ile Glu Tyr Val

20 25 30

Gln Asn Leu Leu Met Thr Ser Gly Asp Gly Arg Ile Ser Val Ser Pro

35 40 45

Tyr Asp Thr Ala Val Ile Ala Leu Ile Lys Asp Leu Lys Gly Arg Asp

50 55 60

Ala Pro Gln Phe Pro Ser Cys Leu Glu Trp Ile Ala His His Gln Leu

65 70 75 80

Ala Asp Gly Ser Trp Gly Asp Glu Phe Phe Cys Ile Tyr Asp Arg Ile

85 90 95

Leu Asn Thr Leu Ala Cys Val Val Ala Leu Lys Ser Trp Asn Leu His

100 105 110

Ser Asp Ile Ile Glu Lys Gly Val Thr Tyr Ile Lys Glu Asn Val His

115 120 125

Lys Leu Lys Gly Ala Asn Val Glu His Arg Thr Ala Gly Phe Glu Leu

130 135 140

Val Val Pro Thr Phe Met Gln Met Ala Thr Asp Leu Gly Ile Gln Asp

145 150 155 160

Leu Pro Tyr Asp His Pro Leu Ile Lys Glu Ile Ala Asp Thr Lys Gln

165 170 175

Gln Arg Leu Lys Glu Ile Pro Lys Asp Leu Val Tyr Gln Met Pro Thr

180 185 190

Asn Leu Leu Tyr Ser Leu Glu Gly Leu Gly Asp Leu Glu Trp Glu Arg

195 200 205

Leu Leu Lys Leu Gln Ser Gly Asn Gly Ser Phe Leu Thr Ser Pro Ser

210 215 220

Ser Thr Ala Ala Val Leu Met His Thr Lys Asp Glu Lys Cys Leu Lys

225 230 235 240

Tyr Ile Glu Asn Ala Leu Lys Asn Cys Asp Gly Gly Ala Pro His Thr

245 250 255

Tyr Pro Val Asp Ile Phe Ser Arg Leu Trp Ala Ile Asp Arg Leu Gln

260 265 270

Arg Leu Gly Ile Ser Arg Phe Phe Gln His Glu Ile Lys Tyr Phe Leu

275 280 285

Asp His Ile Glu Ser Val Trp Glu Glu Thr Gly Val Phe Ser Gly Arg

290 295 300

Tyr Thr Lys Phe Ser Asp Ile Asp Asp Thr Ser Met Gly Val Arg Leu

305 310 315 320

Leu Lys Met His Gly Tyr Asp Val Asp Pro Asn Val Leu Lys His Phe

325 330 335

Lys Gln Gln Asp Gly Lys Phe Ser Cys Tyr Ile Gly Gln Ser Val Glu

340 345 350

Ser Ala Ser Pro Met Tyr Asn Leu Tyr Arg Ala Ala Gln Leu Arg Phe

355 360 365

Pro Gly Glu Glu Val Leu Glu Glu Ala Thr Lys Phe Ala Phe Asn Phe

370 375 380

Leu Gln Glu Met Leu Val Lys Asp Arg Leu Gln Glu Arg Trp Val Ile

385 390 395 400

Ser Asp His Leu Phe Asp Glu Ile Lys Leu Gly Leu Lys Met Pro Trp

405 410 415

Tyr Ala Thr Leu Pro Arg Val Glu Ala Ala Tyr Tyr Leu Asp His Tyr

420 425 430

Ala Gly Ser Gly Asp Val Trp Ile Gly Lys Ser Phe Tyr Arg Met Pro

435 440 445

Glu Ile Ser Asn Asp Thr Tyr Lys Glu Leu Ala Ile Leu Asp Phe Asn

450 455 460

Arg Cys Gln Thr Gln His Gln Leu Glu Trp Ile His Met Gln Glu Trp

465 470 475 480

Tyr Asp Arg Cys Ser Leu Ser Glu Phe Gly Ile Ser Lys Arg Glu Leu

485 490 495

Leu Arg Ser Tyr Phe Leu Ala Ala Ala Thr Ile Phe Glu Pro Glu Arg

500 505 510

Thr Gln Glu Arg Leu Leu Trp Ala Lys Thr Arg Ile Leu Ser Lys Met

515 520 525

Ile Thr Ser Phe Val Asn Ile Ser Gly Thr Thr Leu Ser Leu Asp Tyr

530 535 540

Asn Phe Asn Gly Leu Asp Glu Ile Ile Ser Ser Ala Asn Glu Asp Gln

545 550 555 560

Gly Leu Ala Gly Thr Leu Leu Ala Thr Phe His Gln Leu Leu Asp Gly

565 570 575

Phe Asp Ile Tyr Thr Leu His Gln Leu Lys His Val Trp Ser Gln Trp

580 585 590

Phe Met Lys Val Gln Gln Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Asp Ala Val

595 600 605

Leu Leu Ala Asn Thr Leu Asn Ile Cys Ala Gly Leu Asn Glu Asp Val

610 615 620

Leu Ser Asn Asn Glu Tyr Thr Ala Leu Ser Thr Leu Thr Asn Lys Ile

625 630 635 640

Cys Asn Arg Leu Ala Gln Ile Gln Asp Asn Lys Ile Leu Gln Val Val

645 650 655

Asp Gly Ser Ile Lys Asp Lys Glu Leu Glu Gln Asp Met Gln Ala Leu

660 665 670

Val Lys Leu Val Leu Gln Glu Asn Gly Gly Ala Val Asp Arg Asn Ile

675 680 685

Arg His Thr Phe Leu Ser Val Ser Lys Thr Phe Tyr Tyr Asp Ala Tyr

690 695 700

His Asp Asp Glu Thr Thr Asp Leu His Ile Phe Lys Val Leu Phe Arg

705 710 715 720

Pro Val Val

<210> 189

<211> 2172

<212> DNA

<213> 快乐鼠尾草(Salvia sclarea)_SsLPS_大肠杆菌，经优化的

<400> 189

atggcatccc aagcgtccga gaaagatatt agcctggttc aaaccccgca taaggtcgag 60

gtcaacgaaa agatcgaaga gagcatcgag tacgtccaaa atctgctgat gacgagcggt 120

gacggtcgta tctccgtgtc tccgtacgat accgcggtca tcgctctgat taaagatctg 180

aagggtcgcg acgcaccgca gttcccgagc tgtctggagt ggattgcgca ccaccagtta 240

gcggatggta gctggggcga cgagttcttt tgtatctatg accgcatttt gaataccctg 300

gcgtgcgtcg tcgcactgaa atcttggaat ctgcacagcg acattattga aaaaggcgtg 360

acctacatta aggaaaacgt ccataagctg aaaggcgcga atgttgagca tagaaccgcc 420

ggttttgagc tggttgttcc gaccttcatg cagatggcga ctgacctggg tattcaggat 480

ctgccgtacg atcatcctct tatcaaagaa atcgctgata cgaagcaaca gcgcctgaaa 540

gaaattccga aagatttggt ttatcagatg ccgaccaatc tgctgtatag cctggaaggc 600

ctgggcgatt tagagtggga gcgtttgctg aagctgcagt ctggtaatgg tagcttcctg 660

acgagcccaa gcagcacggc ggcagttctg atgcatacca aagacgagaa gtgtttgaaa 720

tacattgaga atgcgctgaa gaactgcgac ggtggcgctc ctcatacgta tccggttgac 780

atctttagcc gcttgtgggc gatcgaccgt ttgcaacgtc tgggcattag ccgtttcttc 840

caacacgaga tcaaatactt tctggaccac atcgagtcag tctgggaaga aaccggcgtg 900

tttagcggtc gttacacgaa gtttagcgac atcgatgaca cgagcatggg tgtccgcctg 960

ctgaaaatgc acggttacga cgtagaccca aacgtgttga aacactttaa gcagcaagac 1020

ggcaaattca gctgctacat cggccagagc gtcgagagcg cgagcccgat gtataatctg 1080

taccgtgccg cccagctgcg tttcccgggt gaagaagtgc ttgaagaagc aactaaattc 1140

gcgtttaact tcctgcaaga gatgctggtg aaggatcgct tgcaagagcg ttgggttatt 1200

agcgatcacc tgtttgacga gattaagctc ggtctgaaga tgccgtggta tgctaccctg 1260

ccgcgtgttg aggccgctta ttacctggat cactatgcgg gtagcggtga tgtgtggatt 1320

ggtaagtctt tttaccgcat gccggagatt agcaatgaca cctacaaaga attggccatc 1380

ctggacttta accgttgtca gactcagcat cagctggagt ggattcacat gcaagagtgg 1440

tatgaccgct gctctctgtc cgagtttggt attagcaagc gtgagctgct gcgtagctac 1500

ttcctggctg ccgcaaccat tttcgaaccg gaacgcaccc aagagcgtct gctctgggca 1560

aagacccgca tcctgagcaa gatgattacc agcttcgtca acatctccgg tacgaccctg 1620

agcctggatt acaacttcaa cggtttggat gagatcattt ccagcgcgaa tgaagatcag 1680

ggtctggcgg gtacgctgtt ggccacgttc catcaactgc tggatggttt cgacatttac 1740

accctgcacc aactgaaaca cgtctggtcg caatggttta tgaaagttca gcaaggcgag 1800

ggctccggcg gcgaagatgc ggtcctgctg gcaaatactc tgaatatctg cgcgggtctg 1860

aatgaagatg tgctgtcgaa caacgagtat accgcgctga gcacgctgac gaacaagatc 1920

tgcaaccgtc tggcccagat ccaggacaac aagattctgc aagtggtgga cggcagcatc 1980

aaagacaaag aactggaaca ggatatgcag gcattggtta aactggtgct gcaggaaaac 2040

ggtggcgcag tggaccgtaa catccgtcac acgtttctga gcgttagcaa gaccttctac 2100

tatgacgcgt atcacgacga tgaaaccacc gatctgcata tctttaaagt cctgttccgt 2160

ccggttgttt aa 2172

<210> 190

<211> 924

<212> DNA

<213> 成团泛菌(Pantoea agglomerans)_CrtE_wt (M38424.1 40-963 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(924)

<400> 190

atg gtg agt ggc agt aaa gcg ggc gtt tcg cct cat cgc gaa ata gaa 48

Met Val Ser Gly Ser Lys Ala Gly Val Ser Pro His Arg Glu Ile Glu

1 5 10 15

gta atg aga caa tcc att gac gat cac ctg gct ggc ctg tta cct gaa 96

Val Met Arg Gln Ser Ile Asp Asp His Leu Ala Gly Leu Leu Pro Glu

20 25 30

acc gac agc cag gat atc gtc agc ctt gcg atg cgt gaa ggc gtc atg 144

Thr Asp Ser Gln Asp Ile Val Ser Leu Ala Met Arg Glu Gly Val Met

35 40 45

gca ccc ggt aaa cgg atc cgt ccg ctg ctg atg ctg ctg gcc gcc cgc 192

Ala Pro Gly Lys Arg Ile Arg Pro Leu Leu Met Leu Leu Ala Ala Arg

50 55 60

gac ctc cgc tac cag ggc agt atg cct acg ctg ctc gat ctc gcc tgc 240

Asp Leu Arg Tyr Gln Gly Ser Met Pro Thr Leu Leu Asp Leu Ala Cys

65 70 75 80

gcc gtt gaa ctg acc cat acc gcg tcg ctg atg ctc gac gac atg ccc 288

Ala Val Glu Leu Thr His Thr Ala Ser Leu Met Leu Asp Asp Met Pro

85 90 95

tgc atg gac aac gcc gag ctg cgc cgc ggt cag ccc act acc cac aaa 336

Cys Met Asp Asn Ala Glu Leu Arg Arg Gly Gln Pro Thr Thr His Lys

100 105 110

aaa ttt ggt gag agc gtg gcg atc ctt gcc tcc gtt ggg ctg ctc tct 384

Lys Phe Gly Glu Ser Val Ala Ile Leu Ala Ser Val Gly Leu Leu Ser

115 120 125

aaa gcc ttt ggt ctg atc gcc gcc acc ggc gat ctg ccg ggg gag agg 432

Lys Ala Phe Gly Leu Ile Ala Ala Thr Gly Asp Leu Pro Gly Glu Arg

130 135 140

cgt gcc cag gcg gtc aac gag ctc tct acc gcc gtg ggc gtg cag ggc 480

Arg Ala Gln Ala Val Asn Glu Leu Ser Thr Ala Val Gly Val Gln Gly

145 150 155 160

ctg gta ctg ggg cag ttt cgc gat ctt aac gat gcc gcc ctc gac cgt 528

Leu Val Leu Gly Gln Phe Arg Asp Leu Asn Asp Ala Ala Leu Asp Arg

165 170 175

acc cct gac gct atc ctc agc acc aac cac ctc aag acc ggc att ctg 576

Thr Pro Asp Ala Ile Leu Ser Thr Asn His Leu Lys Thr Gly Ile Leu

180 185 190

ttc agc gcg atg ctg cag atc gtc gcc att gct tcc gcc tcg tcg ccg 624

Phe Ser Ala Met Leu Gln Ile Val Ala Ile Ala Ser Ala Ser Ser Pro

195 200 205

agc acg cga gag acg ctg cac gcc ttc gcc ctc gac ttc ggc cag gcg 672

Ser Thr Arg Glu Thr Leu His Ala Phe Ala Leu Asp Phe Gly Gln Ala

210 215 220

ttt caa ctg ctg gac gat ctg cgt gac gat cac ccg gaa acc ggt aaa 720

Phe Gln Leu Leu Asp Asp Leu Arg Asp Asp His Pro Glu Thr Gly Lys

225 230 235 240

gat cgc aat aag gac gcg gga aaa tcg acg ctg gtc aac cgg ctg ggc 768

Asp Arg Asn Lys Asp Ala Gly Lys Ser Thr Leu Val Asn Arg Leu Gly

245 250 255

gca gac gcg gcc cgg caa aag ctg cgc gag cat att gat tcc gcc gac 816

Ala Asp Ala Ala Arg Gln Lys Leu Arg Glu His Ile Asp Ser Ala Asp

260 265 270

aaa cac ctc act ttt gcc tgt ccg cag ggc ggc gcc atc cga cag ttt 864

Lys His Leu Thr Phe Ala Cys Pro Gln Gly Gly Ala Ile Arg Gln Phe

275 280 285

atg cat ctg tgg ttt ggc cat cac ctt gcc gac tgg tca ccg gtc atg 912

Met His Leu Trp Phe Gly His His Leu Ala Asp Trp Ser Pro Val Met

290 295 300

aaa atc gcc tga 924

Lys Ile Ala

305

<210> 191

<211> 307

<212> PRT

<213> 成团泛菌(Pantoea agglomerans)_CrtE_wt (M38424.1 40-963 (+))

<400> 191

Met Val Ser Gly Ser Lys Ala Gly Val Ser Pro His Arg Glu Ile Glu

1 5 10 15

Val Met Arg Gln Ser Ile Asp Asp His Leu Ala Gly Leu Leu Pro Glu

20 25 30

Thr Asp Ser Gln Asp Ile Val Ser Leu Ala Met Arg Glu Gly Val Met

35 40 45

Ala Pro Gly Lys Arg Ile Arg Pro Leu Leu Met Leu Leu Ala Ala Arg

50 55 60

Asp Leu Arg Tyr Gln Gly Ser Met Pro Thr Leu Leu Asp Leu Ala Cys

65 70 75 80

Ala Val Glu Leu Thr His Thr Ala Ser Leu Met Leu Asp Asp Met Pro

85 90 95

Cys Met Asp Asn Ala Glu Leu Arg Arg Gly Gln Pro Thr Thr His Lys

100 105 110

Lys Phe Gly Glu Ser Val Ala Ile Leu Ala Ser Val Gly Leu Leu Ser

115 120 125

Lys Ala Phe Gly Leu Ile Ala Ala Thr Gly Asp Leu Pro Gly Glu Arg

130 135 140

Arg Ala Gln Ala Val Asn Glu Leu Ser Thr Ala Val Gly Val Gln Gly

145 150 155 160

Leu Val Leu Gly Gln Phe Arg Asp Leu Asn Asp Ala Ala Leu Asp Arg

165 170 175

Thr Pro Asp Ala Ile Leu Ser Thr Asn His Leu Lys Thr Gly Ile Leu

180 185 190

Phe Ser Ala Met Leu Gln Ile Val Ala Ile Ala Ser Ala Ser Ser Pro

195 200 205

Ser Thr Arg Glu Thr Leu His Ala Phe Ala Leu Asp Phe Gly Gln Ala

210 215 220

Phe Gln Leu Leu Asp Asp Leu Arg Asp Asp His Pro Glu Thr Gly Lys

225 230 235 240

Asp Arg Asn Lys Asp Ala Gly Lys Ser Thr Leu Val Asn Arg Leu Gly

245 250 255

Ala Asp Ala Ala Arg Gln Lys Leu Arg Glu His Ile Asp Ser Ala Asp

260 265 270

Lys His Leu Thr Phe Ala Cys Pro Gln Gly Gly Ala Ile Arg Gln Phe

275 280 285

Met His Leu Trp Phe Gly His His Leu Ala Asp Trp Ser Pro Val Met

290 295 300

Lys Ile Ala

305

<210> 192

<211> 924

<212> DNA

<213> 成团泛菌(Pantoea agglomerans)_CrtE_ 酵母，经优化的

<400> 192

atggtttctg gttcgaaagc aggagtatca cctcataggg aaatcgaagt catgagacag 60

tccattgatg accacttagc aggattgttg ccagaaacag attcccagga tatcgttagc 120

cttgctatga gagaaggtgt tatggcacct ggtaaacgta tcagaccttt gctgatgtta 180

cttgctgcaa gagacctgag atatcagggt tctatgccta cactactgga tctagcttgt 240

gctgttgaac tgacacatac tgcttccttg atgctggatg acatgccttg tatggacaat 300

gcggaactta gaagaggtca accaacaacc cacaagaaat tcggagaatc tgttgccatt 360

ttggcttctg taggtctgtt gtcgaaagca tttggcttga ttgctgcaac tggtgatctt 420

ccaggtgaaa ggagagcaca agctgtaaac gagctatcta ctgcagttgg tgttcaaggt 480

ctagtcttag gacagttcag agatttgaat gacgcagctt tggacagaac tcctgatgct 540

atcctgtcta cgaaccatct gaagactggc atcttgttct cagctatgtt gcaaatcgta 600

gccattgctt ctgcttcttc accatctact agggaaacgt tacacgcatt cgcattggac 660

tttggtcaag cctttcaact gctagacgat ttgagggatg atcatccaga gacaggtaaa 720

gaccgtaaca aagacgctgg taaaagcact ctagtcaaca gattgggtgc tgatgcagct 780

agacagaaac tgagagagca cattgactct gctgacaaac acctgacatt tgcatgtcca 840

caaggaggtg ctataaggca gtttatgcac ctatggtttg gacaccatct tgctgattgg 900

tctccagtga tgaagatcgc ctaa 924

<210> 193

<211> 936

<212> DNA

<213> 细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_TalVeTPP_wt (LHCL01000010.1150095-151030 (+))

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(936)

<400> 193

atg tct aat gac acc act acc acg gct tct gcc gga aca gca act tct 48

Met Ser Asn Asp Thr Thr Thr Thr Ala Ser Ala Gly Thr Ala Thr Ser

1 5 10 15

tcg cgg ttt ctt tcc gtg ggg gga gtt gtg aac ttc cgt gaa ctg ggc 96

Ser Arg Phe Leu Ser Val Gly Gly Val Val Asn Phe Arg Glu Leu Gly

20 25 30

ggt tac cca tgt gat tct gtc cct cct gct cct gcc tca aac ggc tca 144

Gly Tyr Pro Cys Asp Ser Val Pro Pro Ala Pro Ala Ser Asn Gly Ser

35 40 45

ccg gac aat gca tct gaa gcg acc ctt tgg gtt ggc cac tcg tcc att 192

Pro Asp Asn Ala Ser Glu Ala Thr Leu Trp Val Gly His Ser Ser Ile

50 55 60

cgg cct gga ttt ctg ttt cga tcg gca cag ccg tct cag att acc ccg 240

Arg Pro Gly Phe Leu Phe Arg Ser Ala Gln Pro Ser Gln Ile Thr Pro

65 70 75 80

gcc ggt att gag aca ttg atc cgc cag ctt ggc atc cag aca att ttt 288

Ala Gly Ile Glu Thr Leu Ile Arg Gln Leu Gly Ile Gln Thr Ile Phe

85 90 95

gac ttt cgt tca agg acg gaa att gag ctt gtt gcc act cgc tat cct 336

Asp Phe Arg Ser Arg Thr Glu Ile Glu Leu Val Ala Thr Arg Tyr Pro

100 105 110

gat tcg cta ctt gag ata cct ggc acg act cgc tat tcc gtg ccc gtc 384

Asp Ser Leu Leu Glu Ile Pro Gly Thr Thr Arg Tyr Ser Val Pro Val

115 120 125

ttc tcg gaa ggc gac tat tcc cca gcg tca tta gtc aag agg tac gga 432

Phe Ser Glu Gly Asp Tyr Ser Pro Ala Ser Leu Val Lys Arg Tyr Gly

130 135 140

gtg tcc tcc gat act gca acc gat tcc act tcc tcc aaa agt gct aag 480

Val Ser Ser Asp Thr Ala Thr Asp Ser Thr Ser Ser Lys Ser Ala Lys

145 150 155 160

cct aca gga ttc gtc cac gca tat gag gct atc gca cgc agt gca gca 528

Pro Thr Gly Phe Val His Ala Tyr Glu Ala Ile Ala Arg Ser Ala Ala

165 170 175

gaa aac ggc agt ttt cgt aag ata acg gac cac ata ata caa cat ccg 576

Glu Asn Gly Ser Phe Arg Lys Ile Thr Asp His Ile Ile Gln His Pro

180 185 190

gac cgg cct att ctg ttt cac tgt aca ctg ggg aaa gac cga acc ggt 624

Asp Arg Pro Ile Leu Phe His Cys Thr Leu Gly Lys Asp Arg Thr Gly

195 200 205

gtg ttt gca gca ttg tta ttg agt ctt tgc ggg gta cca gac gag acg 672

Val Phe Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Cys Gly Val Pro Asp Glu Thr

210 215 220

ata gtt gaa gac tat gct atg act acc gag gga ttt gga gcc tgg cgg 720

Ile Val Glu Asp Tyr Ala Met Thr Thr Glu Gly Phe Gly Ala Trp Arg

225 230 235 240

gaa cat cta att caa cgc ttg cta caa agg aag gat gca gct acg cgc 768

Glu His Leu Ile Gln Arg Leu Leu Gln Arg Lys Asp Ala Ala Thr Arg

245 250 255

gag gat gca gaa tcc att att gcc agc ccc ccg gag act atg aag gct 816

Glu Asp Ala Glu Ser Ile Ile Ala Ser Pro Pro Glu Thr Met Lys Ala

260 265 270

ttt cta gaa gat gtg gta gca gcc aag ttc ggg ggt gct cga aat tac 864

Phe Leu Glu Asp Val Val Ala Ala Lys Phe Gly Gly Ala Arg Asn Tyr

275 280 285

ttt atc cag cac tgt gga ttt acg gaa gct gag gtt gat aag tta agc 912

Phe Ile Gln His Cys Gly Phe Thr Glu Ala Glu Val Asp Lys Leu Ser

290 295 300

cat aca ctg gcc att acg aat tga 936

His Thr Leu Ala Ile Thr Asn

305 310

<210> 194

<211> 311

<212> PRT

<400> 194

Met Ser Asn Asp Thr Thr Thr Thr Ala Ser Ala Gly Thr Ala Thr Ser

1 5 10 15

Ser Arg Phe Leu Ser Val Gly Gly Val Val Asn Phe Arg Glu Leu Gly

20 25 30

Gly Tyr Pro Cys Asp Ser Val Pro Pro Ala Pro Ala Ser Asn Gly Ser

35 40 45

Pro Asp Asn Ala Ser Glu Ala Thr Leu Trp Val Gly His Ser Ser Ile

50 55 60

Arg Pro Gly Phe Leu Phe Arg Ser Ala Gln Pro Ser Gln Ile Thr Pro

65 70 75 80

Ala Gly Ile Glu Thr Leu Ile Arg Gln Leu Gly Ile Gln Thr Ile Phe

85 90 95

Asp Phe Arg Ser Arg Thr Glu Ile Glu Leu Val Ala Thr Arg Tyr Pro

100 105 110

Asp Ser Leu Leu Glu Ile Pro Gly Thr Thr Arg Tyr Ser Val Pro Val

115 120 125

Phe Ser Glu Gly Asp Tyr Ser Pro Ala Ser Leu Val Lys Arg Tyr Gly

130 135 140

Val Ser Ser Asp Thr Ala Thr Asp Ser Thr Ser Ser Lys Ser Ala Lys

145 150 155 160

Pro Thr Gly Phe Val His Ala Tyr Glu Ala Ile Ala Arg Ser Ala Ala

165 170 175

Glu Asn Gly Ser Phe Arg Lys Ile Thr Asp His Ile Ile Gln His Pro

180 185 190

Asp Arg Pro Ile Leu Phe His Cys Thr Leu Gly Lys Asp Arg Thr Gly

195 200 205

Val Phe Ala Ala Leu Leu Leu Ser Leu Cys Gly Val Pro Asp Glu Thr

210 215 220

Ile Val Glu Asp Tyr Ala Met Thr Thr Glu Gly Phe Gly Ala Trp Arg

225 230 235 240

Glu His Leu Ile Gln Arg Leu Leu Gln Arg Lys Asp Ala Ala Thr Arg

245 250 255

Glu Asp Ala Glu Ser Ile Ile Ala Ser Pro Pro Glu Thr Met Lys Ala

260 265 270

Phe Leu Glu Asp Val Val Ala Ala Lys Phe Gly Gly Ala Arg Asn Tyr

275 280 285

Phe Ile Gln His Cys Gly Phe Thr Glu Ala Glu Val Asp Lys Leu Ser

290 295 300

His Thr Leu Ala Ile Thr Asn

305 310

<210> 195

<211> 936

<212> DNA

<213> 细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)_TalVeTPP_酵母，经优化的

<400> 195

atgtctaacg acactactac tactgcttct gctggtactg ctacttcttc tagattcttg 60

tctgttggtg gtgttgttaa cttcagagaa ttgggtggtt acccatgtga ctctgttcca 120

ccagctccag cttctaacgg ttctccagac aacgcttctg aagctacttt gtgggttggt 180

cactcttcta tcagaccagg tttcttgttc agatctgctc aaccatctca aatcactcca 240

gctggtatcg aaactttgat cagacaattg ggtatccaaa ctatcttcga cttcagatct 300

agaactgaaa tcgaattggt tgctactaga tacccagact ctttgttgga aatcccaggt 360

actactagat actctgttcc agttttctct gaaggtgact actctccagc ttctttggtt 420

aagagatacg gtgtttcttc tgacactgct actgactcta cttcttctaa gtctgctaag 480

ccaactggtt tcgttcacgc ttacgaagct atcgctagat ctgctgctga aaacggttct 540

ttcagaaaga tcactgacca catcatccaa cacccagaca gaccaatctt gttccactgt 600

actttgggta aggacagaac tggtgttttc gctgctttgt tgttgtcttt gtgtggtgtt 660

ccagacgaaa ctatcgttga agactacgct atgactactg aaggtttcgg tgcttggaga 720

gaacacttga tccaaagatt gttgcaaaga aaggacgctg ctactagaga agacgctgaa 780

tctatcatcg cttctccacc agaaactatg aaggctttct tggaagacgt tgttgctgct 840

aagttcggtg gtgctagaaa ctacttcatc caacactgtg gtttcactga agctgaagtt 900

gacaagttgt ctcacacttt ggctatcact aactaa 936

<210> 196

<211> 14

<212> DNA

<213> 人工_RBS序列

<400> 196

aaggaggtaa aaaa 14

<210> 197

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序1

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或I

<400> 197

Gly Ala Gly Xaa Ser Gly Leu

1 5

<210> 198

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序2

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是H或P

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A, D,或E

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G或S

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F, L,或Y

<221> MISC_FEATURE

<222> (24)..(24)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或S

<221> MISC_FEATURE

<222> (26)..(26)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A, C,或N

<221> MISC_FEATURE

<222> (28)..(28)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或T

<221> MISC_FEATURE

<222> (29)..(29)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是W或Y

<400> 198

Glu Lys Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Thr Trp Xaa Glu Asn Arg Tyr Pro

1 5 10 15

Gly Cys Ala Cys Asp Val Pro Xaa His Xaa Tyr Xaa Xaa Ser Phe Glu

20 25 30

<210> 199

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序3

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I, L,或V

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G, S,或T

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或Q

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K或R

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是W或Y

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G, P,或S

<400> 199

Leu Xaa Asn Ala Xaa Gly Ile Leu Asn Xaa Trp Xaa Xaa Pro Xaa Ile

1 5 10 15

Pro Gly

<210> 200

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序4

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是E, K,或N

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是D或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K, T,或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是N或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)..(19)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (21)..(21)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或N

<400> 200

Leu Xaa Xaa Lys Xaa Val Xaa Xaa Ile Gly Xaa Gly Ser Ser Gly Ile

1 5 10 15

Gln Ile Xaa Pro Xaa Ile

20

<210> 201

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序5

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或P

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是P或T

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是G, H,或N

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或S

<400> 201

Gly Cys Arg Arg Xaa Thr Pro Gly Xaa Xaa Tyr Leu Glu Xaa Leu

1 5 10 15

<210> 202

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序6

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是T或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是S或T

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K或R

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是K或P

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F或L

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I或V

<400> 202

Cys Ala Thr Gly Phe Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Arg Phe Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Gly

<210> 203

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序7

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是S或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F, I,或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是F, I,或T

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或M

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是C或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是P或S

<400> 203

Pro Asn Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Gly Pro Asn Xaa Pro Xaa Xaa Asn Gly

1 5 10 15

Xaa Val

<210> 204

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工_BVMO序列基序8

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A或T

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是L或M

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是I或L

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是A, K,或Q

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是D, H,或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (19)..(19)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸，特别是W或Y

<400> 204

Ala Xaa Trp Pro Gly Ser Xaa Leu His Tyr Xaa Glu Ala Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Pro Arg Xaa Glu Asp

20

<210> 205

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工_烯醛裂解多肽序列基序1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是Y或可以删除

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是F, L,或I

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是R, S,或T

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa可以是H或D

<400> 205

Gly Xaa Xaa Trp Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa

1 5 10

<210> 206

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工_烯醛裂解多肽序列基序2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是A, V,或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是F或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是D或S

<400> 206

Trp Xaa Gly Lys Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 207

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工_烯醛裂解多肽序列基序3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是G或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是A或G

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是L或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是F, L,或Y

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 207

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Gly Xaa Val

1 5 10

<210> 208

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工_烯醛裂解多肽序列基序4

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是L或M

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是I或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是I或V

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是H或S

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa可以是F或L

<400> 208

Xaa Xaa Tyr Asp Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Asp Xaa Xaa

1 5 10

Claims

1.一种具有烯醛裂解活性的分离的多肽，选自：

(1)含有如下的一组多肽：

a)至少一个DUF4334蛋白质家族结构域，其Pfam ID号为PF14232；和/或

b)至少一个GXWXG蛋白质家族结构域，其Pfam ID号为PF14231；或者

c)至少一个与PF14232或PF14231保持至少90％序列同一性的结构域；

和/或

(2)一组多肽，其中每个多肽包含至少一个选自以下的序列基序/结构域：

SEQ ID NO:205中所示的G-[Y或-]-x-W-x-G-x-x-[F、L或I]-x-[T、S或R]-G-[H或D]；

SEQ ID NO:206中所示的W-[Y、A或V]-G-K-x-[F或Y]-x-[S或D]；

SEQ ID NO:207中所示的[G或S]-x-[A或G]-x-[L或V]-x-x-x-x-[F、Y或L]-R-G-x-V；

SEQ ID NO:208中所示的[M或L]-[V或I]-Y-D-x-x-P-[I或V]-x-D-[H或S]-[F或L]；

其中残基x彼此独立地代表任何天然氨基酸残基；

和/或

(3)包含选自以下氨基酸序列的一组多肽：

a)SEQ ID NO:34中所示的SCH94-3944

b)SEQ ID NO:38中所示的SCH80-05241

c)SEQ ID NO:42中所示的Pdigit7033

d)SEQ ID NO:46中所示的PitalDUF4334-1

e)SEQ ID NO:49中所示的AspWeDUF4334

f)SEQ ID NO:53中所示的RhoagDUF4334-2，

g)SEQ ID NO:56中所示的RhoagDUF4334-3，

h)SEQ ID NO:59中所示的RhoagDUF4334-4，

i)SEQ ID NO:62中所示的CnecaDUF4334，

j)SEQ ID NO:69中所示的Rins-DUF4334，

k)SEQ ID NO:72中所示的CgatDUF4334，

l)SEQ ID NO:75中所示的GclavDUF4334

m)SEQ ID NO:81中所示的TcurvaDUF4334，

n)SEQ ID NO:87中所示的PprotDUF4334，和

o)包含与a)至n)的任一氨基酸序列具有至少40％序列同一性的氨基酸序列并保留降解下述式(V)萜烯前体的所述酶活性的多肽。

2.一种分离的核酸分子，其包含编码权利要求1的多肽的核酸序列。

3.一种制备通式IV化合物的生物催化方法：

其中

R¹代表H或低级烷基；

R²代表H，直链或支链的饱和或不饱和的可选取代的烃基残基，或残基Cyc-A-，

其中

Cyc代表可选取代的饱和或不饱和的单环或多环的烃基残基，并且

A代表化学键或可选取代的直链或支链的亚烷基桥；

并且

R³彼此独立地代表H或低级烷基；

该方法包括以下步骤：

(1)使通式V的相应未降解前体与具有烯醛裂解活性的多肽接触：

其中

R¹、R²和R³的定义同上；并且

R⁴代表H或低级烷基，

R⁵代表H或低级烷基，

并且其中所述式V的化合物可以立体异构基本纯的形式或作为立体异构体的混合物存在，

以及可选地

(2)将步骤(1)中得到的式IV的降解产物分离，

其中所述式IV的化合物以立体异构纯的形式或作为立体异构体的混合物来提供。

4.根据权利要求3所述的方法，其中施用式V的萜烯前体，其中

R¹代表H或甲基，

R²代表H或

具有1至20个碳原子的非环状的直链或支链的饱和或不饱和的烃基残基；或者

环状基团Cyc-A-，

其中

A代表直链或支链的C₁-C₄亚烷基桥；并且

Cyc代表单环或多环的饱和或不饱和的烃基残基，可选地取代有1至10个独立地选自C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷亚基、C₂-C₄烯基、氧代、羟基或氨基的取代基；

每个R³代表H，

R⁴代表H或甲基，并且

R⁵代表H或甲基。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中通式IV的化合物具有半日花烷型结构，并且/或者其中Cyc-A代表式IIIa、IIIb或IIIc之一的残基：

6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中所述具有烯醛裂解活性的多肽选自权利要求1中所定义的多肽。

7.根据权利要求3至6中任一项所述的方法，还包括如下步骤作为步骤(3)：使用化学或生物催化合成或两者的组合来处理在步骤(1)中形成的或在步骤(2)中分离的式IV化合物以获得其衍生物，其中所述衍生物可特别地选自烃、醇、二醇、三醇、缩醛、缩酮、醛、酸、醚、酰胺、酮、内酯、环氧化物、乙酸酯、糖苷和/或酯，以及如下步骤作为步骤(4)：可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(3)包括用具有拜耳-维利格单加氧酶(BVMO)活性的多肽来处理在步骤(1)中形成的或在步骤(2)中分离的式IV化合物，以形成相应的羰基酯(EC.1.13.14.-)，并且可选地还包括用酯酶(EC 3.1.1)将羰基酯化合物水解成相应的脱酯化产物；

并且可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

9.一种制备酯化合物的生物催化方法，包括：

(1)使通式I的羰基前体化合物与具有拜尔-维利格单加氧酶(BVMO)(EC 1.13.14.-)活性的多肽接触，以形成相应的羰基酯：

其中

“a”表示单键或双键，

如果“a”表示双键，则“x”为1，如果“a”表示单键，则“x”为2，

R¹彼此独立地代表H或低级烷基，

R²代表H，直链或支链的饱和或不饱和的可选取代的烃基残基，或Cyc-A-基团，

其中

Cyc表示可选取代的饱和或不饱和的单环或多环烃基残基，并且

A代表化学键或可选取代的直链或支链亚烷基桥，

R³彼此独立地代表H或C₁-C₁₅烃基，或低级烷基，

并且

当“a”表示单键时，则Z代表含有羰基的烃基残基，

而

当“a”表示双键时，则Z与其所连接的碳原子一起形成羰基或者带有末端羰基的烷亚基残基，

或者

当“a”表示双键，并且Z与其所连接的碳原子一起形成羰基时，则R²和R¹与它们所连接的碳原子一起也可以形成环状的饱和或不饱和的可选取代的碳环基团，

并且其中所述通式I的羰基化合物以立体异构纯的形式或作为立体异构体的混合物来提供；

(2)和可选地，将步骤(1)中形成的羰基酯分离，其中所述羰基酯化合物以立体异构纯的形式或作为立体异构体的混合物获得。

10.根据权利要求9所述的方法，其中在通式I的羰基化合物中，

“a”代表化学双键，并且Z代表＝O或＝C(R⁴)-C(R⁵)＝O；

或者

“a”代表化学单键，并且Z代表-C(R⁵)＝O；

其中

R⁴和R⁵彼此独立地代表H或低级烷基。

11.根据权利要求9和10中任一项所述的方法，其中通式I的羰基化合物具有半日花烷型结构。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中R²代表基团Cyc-A-，其中A代表直链或支链的C₁-C₄亚烷基桥，并且Cyc代表单环或多环的饱和或不饱和的烃基残基，其中Cyc可选地取代有1至10个取代基，所述取代基独立地选自C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷亚基、C₂-C₄烯基、氧代、羟基或氨基。

13.根据权利要求12所述的方法，其中Cyc-A代表式IIIa、IIIb或IIIc之一的双环残基：

14.根据权利要求9至13中任一项所述的方法，其中所述具有BVMO活性的多肽选自：

(1)一组多肽，在其氨基酸序列中含有PfamID号为PF00743的含黄素单加氧酶(FMO)蛋白质家族结构域，或与PF00743保持至少90％序列同一性的结构域；

和/或

(2)一组多肽，其包含至少一个选自以下的序列基序/结构域：

SEQ ID NO:197中所示的GAGxSGL；

SEQ ID NO:198中所示的EKNxxxxGTWxENRYPGCACDVPxHxYXXSFE；

SEQ ID NO:199中所示的LxNAxGILNxWxxPxIPG；

SEQ ID NO:200中所示的LxxKxVxxIGxGSSGIQIxPxI；

SEQ ID NO:201中所示的GCRRxTPGxxYLExL；

SEQ ID NO:202中所示的CATGFDxxxxPRFxxxG；

SEQ ID NO:203中所示的PNxFxxxGPNxPxxNGxV；

SEQ ID NO:204中所示的AxWPGSxLHYxEAxxxPRxED；

其中残基x彼此独立地代表任何天然氨基酸残基；

和/或

(3)由以下组成的一组多肽：

(a)包含SEQ ID NO:2中所示的SCH23-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(b)包含SEQ ID NO:6中所示的SCH24-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(c)包含SEQ ID NO:10中所示的SCH25-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(d)包含SEQ ID NO:13中所示的SCH46-BVMO1氨基酸序列的多肽；

(e)包含SEQ ID NO:16中所示的AspWeBVMO氨基酸序列的多肽；

(f)包含与a)至e)的任一氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列的多肽。

15.根据权利要求9至14中任一项所述的方法，还包括如下步骤作为步骤(3)：使用化学或生物催化合成或两者的组合来处理在步骤(1)中形成的或在步骤(2)中分离的式IV化合物以获得其衍生物，其中所述衍生物可特别地选自烃、醇、二醇、三醇、缩醛、缩酮、醛、酸、醚、酰胺、酮、内酯、环氧化物、乙酸酯、糖苷和/或酯，以及可选地，将步骤(3)的衍生物分离。

16.根据权利要求15所述的方法，其中步骤(3)包括用具有酯酶活性(EC 3.1.1.)的多肽将羰基酯化合物水解成相应的脱酯化产物，并且可选地，将步骤(3)的衍生物分离；并且可选地，在进一步的步骤(4)中，通过具有醇脱氢酶(ADH)(EC 1.1.1.-)活性的多肽的酶促作用使脱酯化产物进行酶促氧化还原反应。

17.权利要求14中定义的具有BVMO活性的分离的多肽。

18.一种分离的核酸分子，其包含编码权利要求17的多肽的核酸序列。

19.一种制备半日花烷型萜烯的体内方法，该方法包括提供表达一组多肽的重组宿主，所述多肽具有催化如下顺序的反应步骤所需的酶活性：

(1)可选地，通过ADH多肽的酶促作用将半日花烷醇转化为相应的半日花烷醛，

(2)通过权利要求1中定义的具有烯醛裂解活性的多肽的作用，将步骤(1)的所述半日花烷醛转化为相应的去二甲基半日花烷羰基化合物；

(3)可选地，通过权利要求17中定义的具有BVMO活性的多肽的作用，将步骤(2)的所述去二甲基半日花烷羰基化合物转化为相应的去四甲基半日花烷乙酸酯；

(4)可选地，通过具有酯酶活性的多肽的作用，将步骤(3)的所述去四甲基半日花烷乙酸酯转化为相应的去四甲基半日花烷醇；和可选地

(5)将步骤(2)、(3)或(4)的产物分离。

20.一种制备半日花烷型环萜烯的体内方法，该方法包括提供表达一组多肽的重组宿主，所述多肽具有催化如下顺序的反应步骤所需的酶活性：

(1)可选地，通过ADH多肽的酶促作用将半日花烷醇转化为相应的半日花烷醛；

(2)通过权利要求17中定义的具有BVMO活性的多肽的作用，将步骤(1)的所述半日花烷醛转化为相应的半日花烷酯化合物；

(3)将步骤(2)的所述半日花烷酯化合物转化为相应的去甲基半日花烷醛，该步骤可选地通过具有酯酶活性的多肽的作用进行；

(4)通过权利要求17中定义的具有BVMO活性的多肽的作用，将步骤(3)的所述去甲基半日花烷醛转化为相应的去甲基半日花烷酯；

(5)通过具有酯酶活性的多肽的作用，将步骤(4)的所述去甲基半日花烷酯转化为相应的去二甲基半日花烷醇；

(6)可选地，通过具有ADH活性的多肽的作用，将步骤(5)的所述去二甲基半日花烷醇转化为相应的去二甲基半日花烷羰基化合物；

(7)可选地，通过权利要求17中定义的具有BVMO活性的多肽的作用，将步骤(6)的所述去二甲基半日花烷羰基化合物转化为相应的去四甲基半日花烷乙酸酯；

(8)通过具有酯酶活性的多肽的作用，将步骤(7)的所述去四甲基半日花烷乙酸酯转化为相应的去四甲基半日花烷醇，和可选地

(9)将步骤(5)、(6)、(7)或(8)的产物分离。

21.一种制备环氧-去四甲基半日花烷化合物的方法，该方法包括：

(1)通过应用包括权利要求3至16、19或20中任一项所定义的一个或多个方法步骤的生物催化方法，来提供去四甲基半日花烷醇或去四甲基半日花烷乙酸酯或去二甲基半日花烷羰基化合物，并且可选地将所述产物分离；和

(2)通过应用一个或多个化学和/或生化转化步骤，将步骤(1)的所述产物转化为环氧-去四甲基半日花烷。

22.一种制备二环氧-去二甲基半日花烷的方法，该方法包括：

(1)通过应用包括权利要求3至16、19或20中任一项所定义的一个或多个方法步骤的方法，来提供去二甲基半日花烷羰基化合物，并且可选地将所述去二甲基半日花烷羰基化合物分离；和

(2)通过应用一个或多个化学和/或生化转化步骤，将所述去二甲基半日花烷羰基化合物转化为所述二环氧-去二甲基半日花烷。