CN114630663B - 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物 - Google Patents

用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物 Download PDF

Info

Publication number
CN114630663B
CN114630663B CN202180006008.7A CN202180006008A CN114630663B CN 114630663 B CN114630663 B CN 114630663B CN 202180006008 A CN202180006008 A CN 202180006008A CN 114630663 B CN114630663 B CN 114630663B
Authority
CN
China
Prior art keywords
substituted
unsubstituted
nnmt
tumor
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202180006008.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114630663A (zh
Inventor
请求不公布姓名
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Shijiang Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Shijiang Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Shijiang Biotechnology Co ltd filed Critical Shanghai Shijiang Biotechnology Co ltd
Publication of CN114630663A publication Critical patent/CN114630663A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114630663B publication Critical patent/CN114630663B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/451—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. glutethimide, meperidine, loperamide, phencyclidine, piminodine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/154—Methylation markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/91005—Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
    • G01N2333/91011—Methyltransferases (general) (2.1.1.)
    • G01N2333/91017—Methyltransferases (general) (2.1.1.) with definite EC number (2.1.1.-)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/91045—Acyltransferases (2.3)
    • G01N2333/91074—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2)
    • G01N2333/9108—Aminoacyltransferases (general) (2.3.2) with definite EC number (2.3.2.-)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2440/00—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material
    • G01N2440/12—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material alkylation, e.g. methylation, (iso-)prenylation, farnesylation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7057—(Intracellular) signaling and trafficking pathways

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物。具体地，本发明涉及一种线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于预防和/或治疗肿瘤。本发明发现线粒体氧化磷酸化通路抑制剂对线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤具有显著优异的治疗效果。

Description

用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物
技术领域
本发明涉及药物领域，具体地涉及用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物。
背景技术
线粒体在真核细胞中普遍存在，为细胞的生命活动提供能量和其他细胞生长必需的中间产物。线粒体作为细胞内的能量工厂和原料来源，也是肿瘤细胞成瘤不可或缺的细胞器，抑制线粒体功能能有效抑制肿瘤的发生发展，降低病人肿瘤的恶性程度，增加病人的生存期。
氧化磷酸化通路(Oxidative Phospholytion，OXPHOS)是线粒体最重要的通路之一，该通路利用三羧酸循环和脂肪氧化等通路来源的NADH和FADH等来合成ATP。线粒体氧化磷酸化通路有90余个蛋白组成，这些蛋白分别组成5个蛋白复合体，复合体I、II、III、IV和V。前4个蛋白复合体(复合体I、II、III和IV)又称为电子传递链，它们从电子供体NADH和FADH得到电子并将其传递给氧气。在传递电子的过程中，氢离子从线粒体内膜内侧泵到线粒体内膜和线粒体外膜间的膜间腔，从而在内膜内外形成氢离子梯度和电势差。储存于线粒体膜电势中的能量驱动氧化磷酸化通路中的复合体V，从而产生ATP。恶性程度较高的具有干细胞特性的癌细胞极为依赖该通路存活，抑制该通路可有效杀伤此类癌细胞，从而可解决相关恶性癌症复发问题，此类肿瘤能量代谢类药物是新一代抗癌药物研发的重要方向。
近年来发现一些可有效靶向线粒体氧化磷酸化通路的小分子，这些小分子在多种肿瘤模型和临床实验中取得明显抗癌效果，特别是对一些复发或转移的恶性癌症效果更好，能够为未满足的临床需求提供有效的解决方案。如发表在《Nature》的一项研究发现胰腺癌中引起其复发的肿瘤细胞对氧化磷酸化通路抑制剂Oligomycin非常敏感，此类抑制剂可有效杀伤肿瘤细胞，阻断肿瘤复发，参见Viale，A.，Pettazzoni，P.，Lyssiotis，C.etal.Oncogene ablation-resistant pancreatic cancer cells depend onmitochondrial function.Nature 514，628-632(2014)；同样发表在《Nature》的另一项研究发现线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin对脑瘤等多种肿瘤有较好杀伤作用，可有效抑制肿瘤生长，参见Shi，Y.，Lim，S.K.，Liang，Q.et al.Gboxin is an oxidativephosphorylation inhibitor that targets glioblastoma.Nature 567，341-346(2019)；发表在《Nature Medicine》的一项研究发现线粒体氧化磷酸化通路抑制剂IACS-010759对脑瘤和急性骨髓性白血病等有很好抑制效果，参见Molina，J.R.，Sun，Y.，Protopopova，M.et al.An inhibitor of oxidative phosphorylation exploits cancervulnerability.Nat Med 24，1036-1046(2018)。
同时有各种研究及临床案例发现，各类型抗肿瘤药物并不会对所有肿瘤都有效，某些肿瘤细胞对特定抗肿瘤药物不敏感，特定抗肿瘤药物用在对其不敏感的肿瘤细胞或肿瘤病人上不但起不到较好治疗效果，反而会贻误治疗时机，对肿瘤病人有很大的负面影响。特别是截至目前，针对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂这类新颖抗癌药物的特定肿瘤标记物还知之甚少。
然而，当前对相关肿瘤细胞对氧化磷酸化通路抑制剂敏感的机制还不清楚，与氧化磷酸化通路相关的肿瘤标记物还未见报道。相关肿瘤标记物的发现能够为线粒体氧化磷酸化通路抑制剂这类特定抗肿瘤药物提供精确的用药指引，从而实现对癌症患者的精准化治疗，可显著提癌症患者的临床治疗效果，并可避免对不适合使用此类特定抗癌药物的患者用药，贻误其治疗时机。因此，本领域亟需开发一种能够有效指引线粒体氧化磷酸化抑制剂这类抗肿瘤药物使用的生物标志物，从而精确指导该类药物用药，显著提升其治疗效果。
发明内容
本发明所述的目的在于提供一种线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平用于判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗的标志物，从而对肿瘤进行精准治疗。线粒体氧化磷酸化通路抑制剂对线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤具有显著优异的治疗效果。
本发明第一方面，提供一种线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于预防和/或治疗肿瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤为人源肿瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤为人肿瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括线粒体氧化磷酸化通路上调的肿瘤。
在另一优选例中，所述线粒体氧化磷酸化通路上调是指某一细胞(如肿瘤细胞)的线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性。
在另一优选例中，所述线粒体氧化磷酸化通路上调包括线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性高。
在另一优选例中，所述线粒体氧化磷酸化通路上调是指某一细胞(如肿瘤细胞)的线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性H1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中的线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性H0的比值(H1/H0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指线粒体氧化磷酸化通路正常表达或活性正常的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但线粒体氧化磷酸化通路正常表达或活性正常的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指线粒体氧化磷酸化通路正常表达或活性正常的正常组织细胞(如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括NNMT基因低表达或未表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述的NNMT基因为人源NNMT基因。
在另一优选例中，所述的NNMT基因为人NNMT基因。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括DNA甲基化酶高表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述的DNA甲基化酶选自下组：DNMT1、DNMT3a、DNMT3b，或其组合。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括DNMT1高表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括DNMT3a高表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括DNMT3b高表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述的肿瘤包括UHRF1高表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述肿瘤包括NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤。
在另一优选例中，所述肿瘤包括NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高的肿瘤。
在另一优选例中，所述肿瘤包括NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤。
在另一优选例中，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的1μg蛋白中通过NNMT抗体检测不到NNMT蛋白，更佳地是5μg，更佳地是10μg，更佳地是100μg，更佳地是1000μg。
在另一优选例中，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达水平小于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中NNMT基因的表达水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达水平E1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中NNMT基因的表达水平E0的比值(E1/E0)＜1.0。
在另一优选例中，所述NNMT基因低表达或未表达是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)＜1.0，较佳地≤0.7，更佳地≤0.6，更佳地≤0.5，更佳地≤0.4，更佳地≤0.3、更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，更佳地≤0.05，更佳地≤0.01，更佳地≤0.005，更佳地≤0.001，更佳地≤0.0001，更佳地≤0.00001，更佳地≤0.000001，更佳地≤0.0000001。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指NNMT基因正常表达的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但NNMT基因正常表达的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指NNMT基因正常表达的正常组织细胞(如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，E0为NNMT基因正常表达细胞的NNMT基因的表达水平。
在另一优选例中，所述的NNMT基因正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述DNA甲基化酶高表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的20μg蛋白中通过DNA甲基化酶抗体检测能够检测到DNA甲基化酶，更佳地是5μg，更佳地是1μg，更佳地是0.2μg，更佳地是0.05μg，更佳地是0.01μg。
在另一优选例中，所述DNA甲基化酶高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNA甲基化酶的表达水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNA甲基化酶的表达水平。
在另一优选例中，所述DNA甲基化酶高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNA甲基化酶的表达水平A1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNA甲基化酶的表达水平A0的比值(A1/A0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指DNA甲基化酶正常表达的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但DNA甲基化酶正常表达的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指DNA甲基化酶正常表达的正常组织细胞(如如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，A0为DNA甲基化酶正常表达细胞的DNA甲基化酶的表达水平。
在另一优选例中，所述的DNA甲基化酶正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述DNMT1高表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的20μg蛋白中通过DNMT1抗体检测能够检测到DNMT1蛋白，更佳地是5μg，更佳地是1μg，更佳地是0.2μg，更佳地是0.05μg，更佳地是0.01μg。
在另一优选例中，所述DNMT1高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNMT1的表达水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNMT1的表达水平。
在另一优选例中，所述DNMT1高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNMT1的表达水平B1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNMT1的表达水平B0的比值(B1/B0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指DNMT1正常表达的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但DNMT1正常表达的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指DNMT1正常表达的正常组织细胞(如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，B0为DNMT1正常表达细胞的DNMT1的表达水平。
在另一优选例中，所述的DNMT1正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述DNMT3a高表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的20μg蛋白中通过DNMT3a抗体检测能够检测到DNMT3a蛋白，更佳地是5μg，更佳地是1μg，更佳地是0.2μg，更佳地是0.05μg，更佳地是0.01μg。
在另一优选例中，所述DNMT3a高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNMT3a的表达水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNMT3a的表达水平。
在另一优选例中，所述DNMT3a高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNMT3a的表达水C1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNMT3a的表达水平C0的比值(C1/C0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指DNMT3a正常表达的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但DNMT3a正常表达的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指DNMT3a正常表达的正常组织细胞(如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，C0为DNMT3a正常表达细胞的DNMT3a的表达水平。
在另一优选例中，所述的DNMT3a正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述DNMT3b高表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的20μg蛋白中通过DNMT3b抗体检测能够检测到DNMT3b蛋白，更佳地是5μg，更佳地是1μg，更佳地是0.2μg，更佳地是0.05μg，更佳地是0.01μg。
在另一优选例中，所述DNMT3b高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNMT3b的表达水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNMT3b的表达水平。
在另一优选例中，所述DNMT3b高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNMT3b的表达水D1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNMT3b的表达水平D0的比值(D1/D0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指DNMT3b正常表达的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但DNMT3b正常表达的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指DNMT3b正常表达的正常组织细胞(如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，D0为DNMT3b正常表达细胞的DNMT3b的表达水平。
在另一优选例中，所述的DNMT3b正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述UHRF1高表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的20μg蛋白中通过UHRF1抗体检测能够检测到UHRF1蛋白，更佳地是5μg，更佳地是1μg，更佳地是0.2μg，更佳地是0.05μg，更佳地是0.01μg。
在另一优选例中，所述UHRF1高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的UHRF1的表达水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中UHRF1的表达水平。
在另一优选例中，所述UHRF1高表达的肿瘤是指肿瘤细胞的UHRF1的表达水平F1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中UHRF1的表达水平F0的比值(F1/F0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指UHRF1正常表达的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但UHRF1正常表达的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指UHRF1正常表达的正常组织细胞(如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，F0为UHRF1正常表达细胞的UHRF1的表达水平。
在另一优选例中，所述的UHRF1正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中NNMT基因核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平L1与同一细胞或正常细胞(如肿瘤旁组织细胞)中NNMT基因核苷酸位点甲基化水平L0的比值(L1/L0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平≥1％，较佳地≥3％，较佳地≥5％，较佳地≥10％，较佳地≥15％，较佳地≥20％，更佳地≥25％，更佳地≥30％，更佳地≥40％，更佳地≥50％。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指NNMT基因核苷酸位点甲基化水平为正常水平的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但NNMT基因核苷酸位点甲基化水平为正常水平的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指NNMT基因核苷酸位点甲基化水平为正常水平的正常组织细胞(如如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，所述的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平正常水平的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平(M％)≥3％且小于等于M1％，其中，M1为3-100之间的任一正整数。
在另一优选例中，M1为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95或100。
在另一优选例中，所述的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平是指NNMT基因区的甲基化的核苷酸数量占NNMT基因区所有核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括NNMT基因启动子区的核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因启动子区的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp区域内的核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的951-2500位。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp区域内的核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的951-1808位。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括NNMT基因转录起始位点前840bp到转录起始位点前469bp区域内的核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因转录起始位点前840bp到转录起始位点前469bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的1161-1532位。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括人11号染色体114165695位、114165730位、114165769位、114165804位、114165938位、114166050位和114166066位中任何两个位点之间的区域内(包括这两个位点本身)的核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括人11号染色体114165695位、114165730位、114165769位、114165804位、114165938位、114166050位和114166066位中的一个或多个(如2、3、4、5、6或7)位点的核苷酸甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括选自下组的位点的核苷酸甲基化水平：人11号染色体114165695位、人11号染色体114165730位、人11号染色体114165769位、人11号染色体114165804位、人11号染色体114165938位、人11号染色体114166050位、人11号染色体114166066位，或其组合。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括SEQ ID NO：1核苷酸序列的位点的第1161位、第1196位、第1235位、第1270位、第1404位、第1516位和第1532位中任何两个位点之间的区域内(包括这两个位点本身)的核苷酸位点甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平包括SEQ ID NO：1核苷酸序列位点的第1161位、第1196位、第1235位、第1270位、第1404位、第1516位和第1532位中的一个或多个(如2、3、4、5、6或7)位点的核苷酸甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括选自下组SEQ IDNO：1序列位点的核苷酸甲基化水平：第1161位、第1196位、第1235位、第1270位、第1404位、第1516位、第1532位，或其组合。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平大于同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平W1与同一细胞或正常细胞(如肿瘤旁组织细胞)中NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平W0的比值(W1/W0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平≥1％，较佳地≥3％，较佳地≥5％，较佳地≥10％，较佳地≥15％，较佳地≥20％，更佳地≥25％，更佳地≥30％，更佳地≥40％，更佳地≥50％。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平为正常水平的细胞(如同一类肿瘤细胞)。
在另一优选例中，所述的同一细胞是指同种类但NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平为正常水平的细胞。
在另一优选例中，所述的正常细胞是指NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平为正常水平的正常组织细胞(如如肿瘤细胞起源细胞、肿瘤邻近细胞或癌旁组织细胞)。
在另一优选例中，所述的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平正常水平的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平(M％)≥3％且小于等于M2％，其中，M2为3-100之间的任一正整数。
在另一优选例中，M2为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95或100。
在另一优选例中，所述的CpG位点甲基化水平是指某基因区域甲基化的CpG核苷酸数量占该基因区域所有核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因区的甲基化的CpG核苷酸数量占NNMT基因区所有核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述的CpG位点甲基化水平是指某基因区域甲基化的CpG核苷酸数量占该基因区域所有CpG核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因区的甲基化的CpG核苷酸数量占NNMT基因区所有CpG核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述的DNA CpG位点甲基化水平是指某区域DNA已甲基化的CpG位点数量占该区域DNA的全部CpG位点数量的比值。
在另一优选例中，所述的DNA CpG位点甲基化水平是指某区域DNA已甲基化的CpG核苷酸数量占该区域DNA的所有核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述的DNA CpG位点甲基化水平是指某区域DNA已甲基化的CpG核苷酸数量占该区域DNA的全部CpG核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因区DNA已甲基化的CpG位点数量占NNMT基因区DNA的全部CpG位点数量的比值。
在另一优选例中，所述的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因区DNA已甲基化的CpG核苷酸数量占NNMT基因区DNA的全部CpG核苷酸数量的比值。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括NNMT基因启动子区DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因启动子区的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的951-2500位。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的951-1808位。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括NNMT基因转录起始位点前840bp到转录起始位点前469bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因转录起始位点前840bp到转录起始位点前469bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的1161-1532位。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括人11号染色体114165695位、114165730位、114165769位、114165804位、114165938位、114166050位和114166066位中任何两个位点之间的区域内(包括这两个位点本身)的DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNACpG位点甲基化水平包括人11号染色体114165695位、114165730位、114165769位、114165804位、114165938位、114166050位和114166066位中的一个或多个(如2、3、4、5、6或7)位点的甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括选自下组的位点的甲基化水平：人11号染色体114165695位、人11号染色体114165730位、人11号染色体114165769位、人11号染色体114165804位、人11号染色体114165938位、人11号染色体114166050位、人11号染色体114166066位，或其组合。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括SEQ ID NO：1核苷酸序列位点的第1161位、第1196位、第1235位、第1270位、第1404位、第1516位和第1532位中任何两个位点之间的区域内(包括这两个位点本身)的DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括SEQ ID NO：1核苷酸序列位点的第1161位、第1196位、第1235位、第1270位、第1404位、第1516位和第1532位中的一个或多个(如2、3、4、5、6或7)位点的甲基化水平。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括选自下组的SEQID NO：1序列位点的甲基化水平：第1161位、第1196位、第1235位、第1270位、第1404位、第1516位、第1532位，或其组合。
在另一优选例中，所述的肿瘤选自下组：肺癌、肾癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、淋巴癌、白血病、胰腺癌、脑瘤、肝癌、前列腺癌、黑色素癌，或其组合。
在另一优选例中，所述的肺癌选自下组：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、转移性肺癌，或其组合。
在另一优选例中，所述的结肠癌包括结肠腺癌。
在另一优选例中，所述的直肠癌包括直肠腺癌。
在另一优选例中，所述的结直肠癌包括结直肠腺癌。
在另一优选例中，所述的淋巴癌选自下组：B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴癌、大细胞淋巴癌、组织细胞性淋巴癌，或其组合。
在另一优选例中，所述的淋巴癌包括弥漫大B细胞淋巴瘤。
在另一优选例中，所述的脑瘤选自下组：胶质母细胞瘤、神经胶质细胞瘤，或其组合。
在另一优选例中，所述的胶质母细胞瘤包括多形性胶质母细胞瘤。
在另一优选例中，所述的脑瘤包括髓母细胞瘤。
在另一优选例中，所述的肾癌选自下组：肾透明细胞腺癌、转移性肾癌，或其组合。
在另一优选例中，所述的肾癌的癌细胞包括肾癌Wilms细胞。
在另一优选例中，所述的白血病选自下组：T淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病，或其组合。
在另一优选例中，所述的T淋巴细胞白血病包括急性T淋巴细胞白血病。
在另一优选例中，所述的髓细胞性白血病包括急性髓细胞性白血病。
在另一优选例中，所述的髓细胞性白血病包括AML急性髓细胞性白血病。
在另一优选例中，所述的髓细胞性白血病包括M4级AML急性髓细胞性白血病。
在另一优选例中，所述的髓细胞性白血病包括FAB M4级AML急性髓细胞性白血病
在另一优选例中，所述的表达包括蛋白表达和/或mRNA表达。
在另一优选例中，所述的前列腺癌选自下组：转移性前列腺癌。
在另一优选例中，所述的转移性前列腺癌选自下组：脑转移前列腺癌、骨转移前列腺癌、或其组合。
在另一优选例中，所述的乳腺癌选自下组：乳腺导管癌、转移性乳腺癌，或其组合。
在另一优选例中，所述的乳腺导管癌包括原发性乳腺导管癌。
在另一优选例中，所述的乳腺导管癌包括3级原发性乳腺导管癌。
在另一优选例中，所述的胰腺癌包括肝转移胰腺癌。
在另一优选例中，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂包括式I化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐；
其中，
R1、R2、R3、R4、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基、取代或未取代的C6-C12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
R5为无、氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基、取代或未取代的C6-C12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
Z1为
其中，所述的任一“取代”是指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基、C6-C12芳基、5-10元杂芳基、甲磺酰基、磺酰基；
所述的杂环烷基、杂芳基的杂环上各自独立地具有1-4个(优选为1、2、3个或4个)选自N、O和S的杂原子。
在另一优选例中，R5为无，为双键。
在另一优选例中，R5不为无，为单键。
在另一优选例中，R5不为无且为双键，并且与R5相连的N原子为N+。
在另一优选例中，R5为无、氢或C1-C3烷基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C6芳基、取代或未取代的C7芳基、取代或未取代的C8芳基、取代或未取代的5-8元(例如5、6、7、8)杂芳基。
在另一优选例中，R1、R2、R3、R4、R7和R8各自独立地为氢。
在另一优选例中，R5为氢、甲基、乙基、丙基、或丁基。
在另一优选例中，R6为氢、甲基、乙基、丙基、丁基、苯基、三氟甲基-苯基-。
在另一优选例中，三氟甲基-苯基为为单取代的三氟甲基-苯基-。
在另一优选例中，三氟甲基-苯基中，三氟甲基为苯环的邻位、间位或对位取代。
在另一优选例中，三氟甲基-苯基为：
在另一优选例中，R6为氢、甲基、乙基、丙基、丁基、未取代的苯基、取代的苯基。
在另一优选例中，取代的苯基是指苯基的一个或多个(如2、3或4个)氢被三氟甲基取代。
在另一优选例中，取代的苯基是指苯基的一个或多个(如2、3或4个)氢被三氟甲基取代。
在另一优选例中，取代的苯基是指苯基的一个氢被三氟甲基取代。
在另一优选例中，取代的苯基是指苯基的一个邻位、间位或对位的氢被三氟甲基取代。
在另一优选例中，R6为氢、甲基、乙基、丙基、丁基、或
其中，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基、C6-C12芳基、5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷硫基、C6-C10芳基、5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷基、C1-C4卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷硫基、C6-C10芳基、5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C4卤代烷基(如三氟甲基)。
在另一优选例中，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、三氟甲基。
在另一优选例中，R10、R11、R12和R14各自独立地为氢。
在另一优选例中，R13为三氟甲基。
在另一优选例中，Z1为
在另一优选例中，Z1为
在另一优选例中，R9为取代或未取代的环已基。
在另一优选例中，所述取代的环已基是指环已基的一个或多个(如2、3或4个)氢各自独立地被C1-C4的烷基取代。
在另一优选例中，所述取代的环已基是指环已基的一个或多个(如2、3或4个)氢各自独立地被甲基、乙基、丙基、丁基取代。
在另一优选例中，所述取代的环已基是指环已基的1位和4位的氢被被C1-C4烷基取代。
在另一优选例中，所述取代的环已基是指环已基的1位和4位的氢被被甲基、乙基、丙基、丁基取代取代。
在另一优选例中，R9为1-丙基-4-甲基-环已基-。
在另一优选例中，R9为1-异丙基-4-甲基-环已基-。
在另一优选例中，R9为
其中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基、C6-C12芳基、5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷硫基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷基、C1-C4卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷硫基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、丁基。
在另一优选例中，丙基为异丙基。
在另一优选例中，R9为
其中，R16、R17、R18、R19、R20、R22、R23和R24如上所定义。
在另一优选例中，R9为
在另一优选例中，R9为
在另一优选例中，所述的杂环烷基、杂芳基的杂环上各自独立地具有1-4个(优选为1、2、3个或4个)选自N、O和S的杂原子。
在另一优选例中，当R5为无，所述的式I化合物的结构如下式I-1所示：
其中，R1、R2、R3、R4、R6、R7、R8、R9和Z1如上所定义。
在另一优选例中，当R5不为无时，式I化合物的一种盐的结构如下式I-2所示：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Z1如上所定义。
在另一优选例中，所述的式I化合物具有如下式I-3结构：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和如上所定义。
在另一优选例中，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂包括式II化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐；
其中，
R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基、取代或未取代的C1-C12卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C12卤代烷硫基、取代或未取代的C6-C12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C12亚芳基、取代或未取代的3-12元亚杂芳基；
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12；
所述的任一“取代”是指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基、C6-C12芳基、5-10元杂芳基、甲磺酰基、磺酰基；
所述的杂环烷基、杂芳基、亚芳基、亚杂芳基的杂环上各自独立地具有1-4个(优选为1、2、3个或4个)选自N、O和S的杂原子。
在另一优选例中，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基、取代或未取代的C1-C10卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C10卤代烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基、取代或未取代的C1-C8卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C8卤代烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基、取代或未取代的C1-C6卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C6卤代烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C1-C4卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C4卤代烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基。
在另一优选例中，R25、R26、R28、R29、R30、R31、R32、R34、R35和R36各自独立地为氢。
在另一优选例中，R27为取代或未取代的C1-C4卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C4卤代烷硫基。
在另一优选例中，R27为取代或未取代的C1-C3卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C3卤代烷硫基。
在另一优选例中，R27为取代或未取代的C1-C2卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C2卤代烷硫基。
在另一优选例中，R27为三氟甲基-O-、三氟甲基-S-、
在另一优选例中，R33为取代或未取代的3-10元(例如5、6、7、8、9、10)元杂环烷基。
在另一优选例中，所述的杂环烷基为全饱和的杂环烷基。
在另一优选例中，R33为取代或未取代的六氢吡啶基。
在另一优选例中，R33为取代或未取代的六氢吡啶基，所述的取代是指六氢吡啶基的一个或多个(如2、3、4、5或6个)氢各自独立地被选自下组的取代基所取代：甲磺酰基、磺酰基。
在另一优选例中，R33为
其中，
R37、R38、R39、R40、R41、R42、R43、R44、R45和R46各自独立地为氢、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、甲磺酰基、磺酰基。
在另一优选例中，R37、R38、R39、R40、R41、R43、R44、R45和R46各自独立地为氢。
在另一优选例中，R42为甲磺酰基、磺酰基。
在另一优选例中，n为0、1、2、3、4、5、6、7或8。
在另一优选例中，n为1。
在另一优选例中，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C10亚芳基、取代或未取代的3-10元亚杂芳基。
在另一优选例中，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C8亚芳基、取代或未取代的3-8元亚杂芳基。
在另一优选例中，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C8亚芳基、取代或未取代的3-7元亚杂芳基。
在另一优选例中，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6亚芳基、取代或未取代的C7亚芳基、取代或未取代的C8亚芳基、取代或未取代的3元亚杂芳基、取代或未取代的4元亚杂芳基、取代或未取代的5元亚杂芳基、取代或未取代的6元亚杂芳基、取代或未取代的7元亚杂芳基、取代或未取代的8元亚杂芳基、取代或未取代的9元亚杂芳基、取代或未取代的10元亚杂芳基。
在另一优选例中，Z2和Z3各自独立地为亚苯基、取代或未取代的亚恶二唑基、取代或未取代的亚三氮唑基。
在另一优选例中，Z2为取代或未取代的亚恶二唑基。
在另一优选例中，亚恶二唑基为亚1，2，4-恶二唑基、
在另一优选例中，亚三氮唑基为亚1H-1，2，4-三氮唑基。
在另一优选例中，Z2和Z3各自独立地为
其中，R47为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基。
在另一优选例中，R47为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基。
在另一优选例中，R47为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基。
在另一优选例中，R47为氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷基。
在另一优选例中，R47为氢、C1-C2烷基、C3-C8环烷基。
在另一优选例中，R47为氢、甲基、乙基、丙基、或丁基。
在另一优选例中，Z2为
在另一优选例中，Z3为其中，R47如上所定义。
在另一优选例中，所述的杂环烷基、杂芳基、亚芳基、亚杂芳基的杂环上各自独立地具有1-4个(优选为1、2、3个或4个)选自N、O和S的杂原子。
在另一优选例中，所述的式II化合物具有如下式II-1结构：
其中，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R47和n如上所定义。
在另一优选例中，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂包括式III化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐；
其中，
R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67、R68、R69、R70、R71、R72、R73、R74、R75、R76、R77、R78、R79、R80、R81、R82、R83、R84、R85、R86、R87、R88、R89、R90和R91各自独立地为氢、卤素、羟基、羟基-(C1-C12烷基)-、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基、取代或未取代的C6-C12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
所述的任一“取代”是指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基、C6-C12芳基、5-10元杂芳基、甲磺酰基、磺酰基；
所述的杂环烷基、杂芳基的杂环上各自独立地具有1-4个(优选为1、2、3个或4个)选自N、O和S的杂原子。
在另一优选例中，R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67、R68、R69、R70、R71、R72、R73、R74、R75、R76、R77、R78、R79、R80、R81、R82、R83、R84、R85、R86、R87、R88、R89、R90和R91各自独立地为氢、卤素、羟基、羟基-(C1-C10烷基)-、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67、R68、R69、R70、R71、R72、R73、R74、R75、R76、R77、R78、R79、R80、R81、R82、R83、R84、R85、R86、R87、R88、R89、R90和R91各自独立地为氢、卤素、羟基、羟基-(C1-C8烷基)-、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67、R68、R69、R70、R71、R72、R73、R74、R75、R76、R77、R78、R79、R80、R81、R82、R83、R84、R85、R86、R87、R88、R89、R90和R91各自独立地为氢、卤素、羟基、羟基-(C1-C6烷基)-、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基。
在另一优选例中，R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67、R68、R69、R70、R71、R72、R73、R74、R75、R76、R77、R78、R79、R80、R81、R82、R83、R84、R85、R86、R87、R88、R89、R90和R91各自独立地为氢、羟基、羟基-(C1-C4烷基)-、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基。
在另一优选例中，R48、R49、R50、R51、R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、R60、R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67、R68、R69、R70、R71、R72、R73、R74、R75、R76、R77、R78、R79、R80、R81、R82、R83、R84、R85、R86、R87、R88、R89、R90和R91各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、丁基、羟基-丙基-、巯基-丙基-、羟基、巯基。
在另一优选例中，羟基-丙基-为单羟基-丙基-。
在另一优选例中，羟基-丙基-为
另一优选例中，巯基-丙基-为单巯基-丙基-。
在另一优选例中，巯基-丙基-为
在另一优选例中，所述的任一“取代”是指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷硫基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、甲磺酰基、磺酰基。
在另一优选例中，所述的任一“取代”是指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C4烷基、C3-C8环烷基、C1-C4卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷硫基、C6-C10芳基、5-10元杂芳基、甲磺酰基、磺酰基。
在另一优选例中，所述的杂环烷基、杂芳基的杂环上各自独立地具有1-4个(优选为1、2、3个或4个)选自N、O和S的杂原子。
在另一优选例中，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
在另一优选例中，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
在另一优选例中，所述的组合物为药物组合物。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂还包括药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的表达为mRNA或蛋白表达。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。在另一优选例中，所述的组合物或制剂的剂型为口服制剂、外用制剂或注射制剂
在另一优选例中，所述的组合物或制剂的剂型为片剂、注射剂、输液剂、膏剂、凝胶剂、溶液剂、微球或膜剂。
本发明第二方面，提供一种用于判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗的标志物，所述的标志物包括线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平。
本发明还提供了所述标志物(或其表达水平、或活性或甲基化水平)或其检测试剂的用途，它被用于制备用于一试剂盒，所述试剂盒用于断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，所述的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平包括NNMT基因启动子区DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，则该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，所述肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂包括肿瘤患者的肿瘤对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感。
在另一优选例中，所述肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂包括肿瘤患者的肿瘤对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感。
在另一优选例中，所述的DNA甲基化酶选自下组：DNMT1、DNMT3a、DNMT3b，或其组合。
在另一优选例中，所述线粒体氧化磷酸化通路上调的肿瘤如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述DNA甲基化酶(如DNMT1)高表达的肿瘤如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述UHRF1高表达的肿瘤如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高的肿瘤如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述线粒体氧化磷酸化通路下调是指某一细胞(如肿瘤细胞)的线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性H1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中的线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性H0的比值(H1/H0)＜1.0，较佳地≤0.7，更佳地≤0.6，更佳地≤0.5，更佳地≤0.4，更佳地≤0.3、更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，更佳地≤0.05，更佳地≤0.01，更佳地≤0.005，更佳地≤0.001，更佳地≤0.0001，更佳地≤0.00001，更佳地≤0.000001，更佳地≤0.0000001。
在另一优选例中，所述所述NNMT基因高表达是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)＞1.0，较佳地≥1.2，较佳地≥1.5，更佳地≥2，更佳地≥3，更佳地≥5，更佳地≥8，更佳地≥10，更佳地≥15，更佳地≥20，更佳地≥30，更佳地≥50。
在另一优选例中，所述DNA甲基化酶低表达的肿瘤是指肿瘤细胞的DNA甲基化酶的表达水平A1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中DNA甲基化酶的表达水平A0的比值(A1/A0)＜1.0，较佳地≤0.7，更佳地≤0.6，更佳地≤0.5，更佳地≤0.4，更佳地≤0.3、更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，更佳地≤0.05，更佳地≤0.01，更佳地≤0.005，更佳地≤0.001，更佳地≤0.0001，更佳地≤0.00001，更佳地≤0.000001，更佳地≤0.0000001。
在另一优选例中，所述UHRF1低表达的肿瘤是指肿瘤细胞的UHRF1的表达水F1与同一细胞或正常细胞(如癌旁组织细胞)中UHRF1的表达水平F0的比值(F1/F0)＜1.0，较佳地≤0.7，更佳地≤0.6，更佳地≤0.5，更佳地≤0.4，更佳地≤0.3、更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，更佳地≤0.05，更佳地≤0.01，更佳地≤0.005，更佳地≤0.001，更佳地≤0.0001，更佳地≤0.00001，更佳地≤0.000001，更佳地≤0.0000001。
在另一优选例中，所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平L1与同一细胞或正常细胞(如肿瘤旁组织细胞)中NNMT基因核苷酸位点甲基化水平L0的比值(L1/L0)＜1.0，较佳地≤0.7，更佳地≤0.6，更佳地≤0.5，更佳地≤0.4，更佳地≤0.3、更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，更佳地≤0.05，更佳地≤0.01，更佳地≤0.005，更佳地≤0.001，更佳地≤0.0001，更佳地≤0.00001，更佳地≤0.000001，更佳地≤0.0000001。
在另一优选例中，所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低是指某一细胞(如肿瘤细胞)的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平W1与同一细胞或正常细胞(如肿瘤旁组织细胞)中NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平W0的比值(W1/W0)＜1.0，较佳地≤0.7，更佳地≤0.6，更佳地≤0.5，更佳地≤0.4，更佳地≤0.3、更佳地≤0.2，更佳地≤0.1，更佳地≤0.05，更佳地≤0.01，更佳地≤0.005，更佳地≤0.001，更佳地≤0.0001，更佳地≤0.00001，更佳地≤0.000001，更佳地≤0.0000001。
本发明第三方面，提供一种检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括：
(i)用于检测线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNACpG位点甲基化水平的检测试剂。
在另一优选例中，所述检测试剂盒的检测样本包括肿瘤细胞。
在另一优选例中，NNMT基因表达是指该基因mRNA和该蛋白的表达；
在另一优选例中，NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因启动子区DNACpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点后499bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
在另一优选例中，NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平是指NNMT基因转录起始位点前840bp到转录起始位点前469bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
本发明第四方面，提供一种如发明第三方面所述的检测试剂盒的用途，用于制备一伴随诊断试剂盒，所述伴随诊断试剂盒用于判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，所述的伴随诊断试剂盒还包括说明书或标签
在另一优选例中，所述的说明书或标签记载：
当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，则该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，所述的说明书或标签记载：当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
本发明第五方面，提供一种药盒，所述的药盒包括：
(i)用于检测线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNACpG位点甲基化水平的检测试剂；和
(ii)线粒体氧化磷酸化通路抑制剂。
在另一优选例中，所述的药盒还包括说明书或标签。
在另一优选例中，所述的说明书或标签记载：
当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNACpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
本发明第六方面，提供一种预防和/或治疗肿瘤的方法，给所需的对象施用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂。
在另一优选例中，所述对象的肿瘤包括NNMT基因低表达或未表达的肿瘤。
在另一优选例中，所述对象的肿瘤包括NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤。
在另一优选例中，所述对象为人和非人哺乳动物(啮齿动物、兔、猴、家畜、狗、猫等)。
本发明第七方面，提供一种装置或系统，所述的装置或系统包括：
(i)检测模块，所述的检测模块用于检测线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平；
(ii)输出模块，所述的输出模块包括输出以下信息：
当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，则该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗；和/或
当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
在另一优选例中，所述的装置包括基因检测仪或蛋白检测仪。
在另一优选例中，所述的装置或系统还包括进样模块。
在另一优选例中，所述的进样模块用于进肿瘤细胞提取物。
在另一优选例中，所述的装置或系统还包括数据处理模块。
在另一优选例中，所述的数据处理模块处理得到线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性高低、NNMT基因表达高低、DNA甲基化酶表达高低、UHRF1表达高低、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高低。
在另一优选例中，所述的数据处理模块处理得到NNMT基因表达高低和/或NNMT基因启动子区DNA CpG位点甲基化水平高低。
在另一优选例中，所述的数据处理模块处理得到NNMT基因表达高低和/或NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点后499bp区域内DNA CpG位点甲基化水平高低。
在另一优选例中，所述的数据处理模块处理得到NNMT基因表达高低和/或NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp区域内DNA CpG位点甲基化水平高低。
在另一优选例中，所述的数据处理模块处理得到NNMT基因表达高低和/或NNMT基因转录起始位点前840bp到基因转录起始位点前469bp区域内DNA CpG位点甲基化水平。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了不同化合物对线粒体氧化磷酸化通路的抑制作用(平行重复3次)。
图2显示了线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin和Oligomycin A小分子作用于NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2肿瘤细胞后，肿瘤细胞中ATF4和p-s6蛋白表达情况。
图3显示了线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin和Oligomycin A小分子作用于SF126、CFPAC-1和786-O肿瘤细胞后，肿瘤细胞中ATF4和p-s6蛋白表达情况。
图4显示了细胞的基因表达信息显示的细胞间差异程度。
图5显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞的功能差异。
图6显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞的代谢通路差异。
图7显示了参与表达的氧化磷酸化通路蛋白复合体。
图8显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)的线粒体膜电差。
图9显示了不同肿瘤细胞的线粒体氧消耗速率(OCR)。
图10显示了不同细胞中筛选出的表达差异显著的基因。
图11显示了肿瘤细胞的平均NNMT基因转录水平和肿瘤细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的相关性。
图12显示了不同肿瘤细胞中的NNMT基因的mRNA和蛋白表达，上图显示了NNMT基因的mRNA表达，下图显示了NNMT基因的蛋白表达。
图13显示了不同肿瘤细胞的NNMT基因的表达和NNMT基因启动子区甲基化分析。
图14显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞NNMT基因启动子区DNA CpG位点甲基化水平。
图15显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp之间区域DNA CpG位点甲基化水平。
图16显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp之间区域DNA CpG位点甲基化水平。
图17显示了为对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞特定NNMT基因区即人11号染色体114165695、114165730、114165769、114165804、114165938、114166050、114166066等7个位点的DNA CpG位点甲基化情况，黑点表示相关位点已甲基化，白点表示相关位点未甲基化，SST指转录起始位点，Chr11指根据GCF_000001405.25(GRCh37.p13)人类基因组版本界定的人类11号染色体。
图18显示了对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感及不敏感肿瘤细胞中的腺苷甲硫氨酸(SAM)水平。
图19显示了肿瘤细胞中NNMT的表达和DNMT1、UHRF1、DNMT3a和DNMT3b的表达的相关性。
图20显示了肿瘤细胞DNMT1基因转录水平和肿瘤细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的相关性。
图21显示了通过转基因的方法过表达NCI-H82细胞NNMT蛋白和/或通过转染shRNA的方法敲低NCI-H82细胞DNMT1的表达后，肿瘤细胞对Gboxin的敏感性，其中，Vector为正常表达NNMT蛋白和DNMT1的NCI-H82细胞；ov-NNMT为通过转基因过表达NNMT蛋白的NCI-H82细胞；sh-DNMT1#1为通过sh-DNMT1#1敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞，sh-DNMT1#2为通过sh-DNMT1#2敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞，ov-NNMT/sh-DNMT1#1是同时通过转基因过表达NNMT蛋白和通过sh-DNMT1#1敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞；ov-NNMT/sh-DNMT1#2是同时通过转基因过表达NNMT蛋白和通过sh-DNMT1#2敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞。
图22显示了通过转基因的方法过表达NCI-H82细胞NNMT蛋白和/或通过转染shRNA的方法敲低NCI-H82细胞DNMT1的表达后，肿瘤细胞对Oligomycin A的敏感性，其中，Vector为正常表达NNMT蛋白和DNMT1的NCI-H82细胞；ov-NNMT为通过转基因过表达NNMT蛋白的NCI-H82细胞；sh-DNMT1#1为通过sh-DNMT1#1敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞，sh-DNMT1#2为通过sh-DNMT1#2敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞，ov-NNMT/sh-DNMT1#1是同时通过转基因过表达NNMT蛋白和通过sh-DNMT1#1敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞；ov-NNMT/sh-DNMT1#2是同时通过转基因过表达NNMT蛋白和通过sh-DNMT1#2敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞。
图23显示了Western Blot实验检测相对于正常NCI-H82(Vector)相比，过表达NNMT蛋白的NCI-H82(ov-NNMT)的NNMT蛋白含量，其中，Vector为正常表达NNMT蛋白和DNMT1的NCI-H82细胞；ov-NNMT为通过转基因过表达NNMT蛋白的NCI-H82细胞。
图24显示了Western Blot实验检测相对于正常NCI-H82(shVector)相比，两种shRNA敲低肿瘤细胞的DNMT1表达的NCI-H82(sh-DNMT1#1或sh-DNMT1#2)的DNMT1蛋白含量，其中，shVector为正常表达DNMT1的NCI-H82细胞；shDNMT1#1为通过sh-DNMT1#1敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞，shDNMT1#2为通过sh-DNMT1#2敲低DNMT1表达的NCI-H82细胞。
图25显示了氧化磷酸化通路抑制剂S-Gboxin对NCI-H82荷瘤的抑制效果，其中，NCI-H82为正常表达NNMT蛋白细胞。
图26显示了氧化磷酸化通路抑制剂S-Gboxin对NCI-H82-NNMTov荷瘤的抑制效果，其中，NCI-H82-NNMTov为通过转基因过表达NNMT蛋白的NCI-H82细胞。
图27显示了氧化磷酸化通路抑制剂S-Gboxin对CFPAC-1荷瘤的抑制效果。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，首次意外地发现线粒体氧化磷酸化通路抑制剂对线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达(或未表达)、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤细胞具有显著的抑制作用。线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平和/或NNMT基因启动子区DNA CpG位点甲基化水平能够作为判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗的标志物。在此基础上，发明人完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“包含”、“包括”、“含有”可互换使用，不仅包括封闭式定义，还包括半封闭、和开放式的定义。换言之，所述术语包括了“由......构成”、“基本上由......构成”。如本文所用，术语“DNA CpG位点甲基化水平高”、“DNA CpG位点甲基化高水平”与“DNACpG位点高甲基化”可互换使用。
如本文所用，术语“DNA CpG位点甲基化低水平”、“DNA CpG位点甲基化水平低”与“DNA CpG位点低甲基化”可互换使用。
如本文所用，术语“IC50”与“IC50”可互换使用，是指半抑制浓度(50％inhibitingconcentration)，即达到50％抑制效果时抑制剂的浓度。
如本文所用，术语“CpG位点甲基化”、“CpG核苷酸甲基化”与“CpG甲基化”可互换使用。
如本文所用，“Oligomycin A”可简写为“Oligomycin”。
如本文所用，术语“P/S”是指在相关培养基中加入Penicillin(盘尼西林)以及Streptomycin(链霉素)”。
如本文所用，术语“某一细胞”指某个细胞(如某单个癌细胞)或包含多个类似细胞的一群细胞等(如某肿瘤组织)。
如本文所用，“肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂”包括肿瘤患者的肿瘤对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感。
如本文所用，“肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂”包括肿瘤患者的肿瘤对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感。
如本文所用，“线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNACpG位点甲基化水平”是指线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平和NNMT基因区DNACpG位点甲基化水平中的一种或多种。
如本文所用，“线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高”是指线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UFHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高和NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高中的一种或多种。
如本文所用，“线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低”是指线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低和NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低中的一种或多种。
如本文所用，术语“NNMT”的英文名为Nicotinamide N-Methyltransferase。
如本文所用，术语“bp”是指base pair，碱基对。
如本文所用，术语“SST”是指转录起始位点。
如本文所用，术语“Chr11”是指GCF_000001405.25(GRCh37.p13)人类基因组版本界定的人类11号染色体。
如本文所用，“人11号染色体”是指GCF_000001405.25(GRCh37.p13)人类基因组版本界定的人类11号染色体
如本文所用，术语“转录起始位点前”、“转录起始位点后”、“转录起始位点之前”、“转录起始位点之后”均不包括转录起始位点本身。
如本文所用，术语“人11号染色体114165695位”是指人11号染色体114165695位的核苷酸；“人11号染色体114165730位”是指人11号染色体114165730位的核苷酸；“人11号染色体114165769位”是指人11号染色体114165769位的核苷酸；“人11号染色体114165804位”是指人11号染色体114165804位的核苷酸；“人11号染色体114165938位”是指人11号染色体114165938位的核苷酸；“人11号染色体114166050位”是指人11号染色体114166050位的核苷酸；“人11号染色体114166066位”是指人11号染色体114166066位的核苷酸。
如本文所用，术语“S-腺苷甲硫氨酸”为S-adenosyl methionine，简称SAM。
如本文所用，基因表达包括该基因蛋白表达和/或该基因mRNA表达等。
如本文所用，术语“DNMT3a”是指DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a)。
如本文所用，术语“DNMT3b”是指DNA甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b)。
如本文所用，术语“DNMT1”是指DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1)。
如本文所用，术语“UHRF1”是指泛素样含PHD和环指域蛋白1。
应当理解，本领域的普通技术人员可以选择本发明的化合物上的取代基和取代型式以产生化学上稳定的化合物，所述化合物可以通过本领域己知的技术以及下文所阐述的方法合成。如果被超过一个(多个)取代基团取代，应当理解，这多个基团可以是在同一个碳上或在不同碳上，只要产生稳定的结构即可。
如本文所用，术语“取代”或“取代的”是基团上的氢原子被非氢原子基团取代，但需要满足其化合价要求并且由取代生成化学稳定的化合物，即不会自发进行诸如环化、消除等转变的化合物。
如本文所用，“R1”、“R1”和“R1”的含义相同，可相互替换，其它类似定义的含义相同。
如本文所用，表示基团的连接位点。
如本文所用，术语“烷基”指只含碳原子的直链(即，无支链)或支链饱和烃基，或直链和支链组合的基团。当烷基前具有碳原子数限定(如C1-C6烷基)指所述的烷基含有1-6个碳原子，例如，C1-C4烷基指含有1-4个碳原子的烷基，代表性实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
在本发明中，术语“卤素”指F、Cl、Br或I。
在本发明中，术语“卤代”是指被卤素取代。
如本文所用，术语“卤代烷基”是指烷基的一个或多个(优选为1、2、3或4个)氢被卤素取代，所述的烷基和卤素如上所定义，当烷基前具有碳原子数限定(如C1-C8卤代烷基)指所述的烷基含有1-8个碳原子，例如，C1-C6卤代烷基指含有1-6个碳原子的卤代烷基，代表性实例包括但不限于-CF3、-CHF2、单氟代异丙基、双氟代丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“环烷基”指具有饱和的或部分饱和的单元环，二环或多环(稠环、桥环或螺环)环系基团。当某个环烷基前具有碳原子数限定(如C3-C12)时，指所述的环烷基具有3-12个环碳原子。在一些优选实施例中，术语“C3-C8环烷基”指具有3-8个环碳原子的饱和或部分饱和的单环或二环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基、环庚基、或类似基团。
如本文所用，术语“卤代环烷基”是指环烷基的一个或多个(优选为1、2、3或4个)氢被卤素取代，所述的环烷基和卤素如上所定义，当环烷基前具有碳原子数限定(如C3-C8卤代烷基)指所述的环烷基含有3-8个环碳原子，例如，C3-C8卤代烷基指含有3-6碳原子的卤代环烷基，代表性实例包括但不限于单氟代环丙基、单氯代环丁基、单氟代环戊基、双氟代环庚基，或类似基团。
术语“烷氧基”指R-O-基团，其中R为烷基，烷基为如上本文所定义，当烷氧基前具有碳原子数限定，如C1-C8烷氧基指所述的烷氧基中的烷基具有1-8个碳原子。烷氧基的代表性示例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基，或类似基团。
如本文所用，术语“烷硫基”指R-S-基团，其中R为烷基，烷基为如上本文所定义，当烷硫基前具有碳原子数限定，如C1-C8烷硫基指所述的烷硫基中的烷基具有1-8个碳原子。烷硫基的代表性示例包括但不限于：甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、叔丁硫基，或类似基团。
术语“环烷氧基”指R-O-基团，其中R为环烷基，环烷基为如上本文所定义，当环烷氧基前具有碳原子数限定，如C3-C8环烷氧基基指所述的环烷氧基中的环烷基具有3-8个碳原子。环烷氧基的代表性示例包括但不限于：环丙氧基、环丁氧基，或类似基团。
术语“环烷硫基”指R-S-基团，其中R为环烷基，环烷基为如上本文所定义，当环烷硫基前具有碳原子数限定，如C3-C8环烷硫基基指所述的环烷硫基中的环烷基具有3-8个碳原子。环烷硫基的代表性示例包括但不限于：环丙硫基、环丁硫基，或类似基团。
如本文所用，术语“卤代烷氧基”是指卤代烷基-O-，所述的卤代烷基如上所定，例如，C1-C6卤代烷氧基指含有1-6个碳原子的卤代烷氧基，代表性实例包括但不限于、单氟代甲氧基、单氟代乙氧基、双氟代丁氧基、或类似基团。
如本文所用，术语“卤代烷硫基”是指卤代烷基-S-，所述的卤代烷基如上所定，例如，C1-C6卤代烷硫基指含有1-6个碳原子的卤代烷硫基，代表性实例包括但不限于、单氟代甲硫基、单氟代乙硫基、双氟代丁硫基、或类似基团。
术语“杂环烷基”是指完全饱和的或部分不饱和的的环状基团(包含但不限于如3-7元单环，7-11元双环，或8-16元三环系统)，其中至少有一个杂原子存在于至少有一个碳原子的环中。当杂环烷基前有元数限定时，指的是杂环烷基的环原子个数，例如3-16元杂环烷基指的是具有3-16个环原子的杂环烷基。每个含有杂原子的杂环上可以带有一个或多个(如1，2，3或4个)杂原子，这些杂原子各自独立地选自氮原子、氧原子或硫原子，其中氮原子或硫原子可以被氧化，氮原子也可以被季铵化。杂环烷基可以连接到环或环系分子的任何杂原子或碳原子的残基上。典型的单环杂环烷基包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基等。多环杂环烷基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环烷基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或两个以上的原子与其它环烷环、杂环进一步并环连接。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，是一种芳香环状烃类化合物基团，当芳基前面具有碳原子数限定，如C6-C12芳基，则指所述的芳基具有6-12个环碳原子，例如苯基和萘基。
术语“亚芳基”指芳基失去一个氢原子形成的基团，所述的芳基如上所定，当亚芳基前面具有碳原子数限定，如C6-C12亚芳基，则指所述的亚芳基具有6-12个环碳原子，亚芳基的代表性实例包括但不限于亚苯基和亚萘基等。
术语“杂芳基”指具有一个到多个(优选为1、2、3或4个)杂原子的芳族杂环系基团，其可以是单环(单环的)或者稠合在一起或共价地连接的多环(二环的、三环的或多环的)，每个含有杂原子的杂环上可以带有一个多个(如1、2、3、4个)各自独立选自下组的杂原子：氧、硫和氮。当杂芳基前有元数限定时，指的是杂芳基的环原子个数，例如5-12元杂芳基指的是具有5-12个环原子的杂芳基，代表性的例子包括但不限于：吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三氮唑基及四氮唑基等。
术语“亚杂芳基”指杂芳基失去一个氢原子形成的基团，所述的杂芳基如上所定，当亚杂芳基前面具有碳原子数限定，如C6-C12亚杂芳基，则指所述的亚杂芳基具有6-12个环碳原子，亚杂芳基的代表性实例包括但不限于亚吡咯基、亚吡唑基、亚咪唑基、亚三氮唑基、亚恶二唑基和亚噁唑基等等。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语″甲磺酰基″表示
在本说明书中，应解释为所有取代基为未取代的，除非在本文中明确描述为“取代的”。术语“取代”是指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基，优选地，所述的任一“取代”是指基团上的一个或多个(优选为1、2、3、或4个)氢原子被选自下组的取代基所取代：C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基(如三氟甲基)、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基、C6-C12芳基、5-10元杂芳基、甲磺酰基、磺酰基。除非特别说明，某个任意取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。
在本发明中，术语“预防”表示预防疾病和/或它的附随症状的发作或者保护对象免于获得疾病的方法。
本发明所述的“治疗”包括延缓和终止疾病的进展，或消除疾病，并不需要100％抑制、消灭和逆转。在一些实施方案中，与不存在本发明所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂时观察到的水平相比，本发明所述线粒体氧化磷酸化通路抑制剂将相关疾病(如肿瘤)及其并发症减轻、抑制和/或逆转了例如至少约10％、至少约30％、至少约50％、或至少约80％，或100％。
线粒体氧化磷酸化通路
氧化磷酸化通路(Oxidative Phosphorylation，OXPHOS)是线粒体最重要的通路之一，该通路利用三羧酸循环和脂肪氧化等通路来源的NADH和FADH等来合成ATP。线粒体氧化磷酸化通路有90余个蛋白组成，这些蛋白分别组成5个蛋白复合体，复合体I、II、III、IV和V。前4个蛋白复合体(复合体I、II、III和IV)又称为电子传递链，它们从电子供体NADH和FADH得到电子并将其传递给氧气。在传递电子的过程中，氢离子从线粒体内膜内侧泵到线粒体内膜和线粒体外膜间的膜间腔，从而在内膜内外形成氢离子梯度和电势差。储存于线粒体膜电势中的能量驱动氧化磷酸化通路中的复合体V，从而产生ATP。研究表明，线粒体氧化磷酸化通路对细胞生长非常重要，与许多疾病有关，例如癌症、免疫相关疾病、神经退行性疾病，抑制线粒体氧化磷酸化通路能够用于治疗癌症、免疫相关疾病、神经退行性疾病，尤其是恶性程度较高的具有干细胞特性的癌细胞极为依赖该通路存活，抑制该通路可有效杀伤此类癌细胞，从而可解决相关恶性癌症复发问题。
NNMT基因
在本发明中，NNMT英文名为Nicotinamide N-Methyltransferase，不同数据库对NNMT基因有不同的识别号：HGNC：7861；Entrez Gene：4837；Ensembl：ENSG00000166741；OMIM：600008；UniProtKB：P40261。
根据GCF_000001405.25(GRCh37.p13)人类基因组版本，NNMT基因区位于人类11号染色体第114,128,528位bp到114，184,258位bp，总长为55,731bp的DNA序列，包括NNMT基因启动子区、NNMT基因外显子区和NNMT基因内含子区，NNMT基因转录起始位点为第114,166,535位bp。
NNMT基因启动子区为人11号染色体第114,164,535位bp到114,167,034位bp的核苷酸序列，即NNMT基因转录起始位点前2000bp(粗体部分)至转录起始位点本身及其后499bp(下划线部分)之间的序列，总长为2500bp的区域为NNMT基因启动子区，NNMT基因启动子区的核苷酸序列如下面SEQ ID NO：1所示：
SEQ ID NO：1：
在本发明中，NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点后499bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的951-2500位。
在本发明中，NNMT基因转录起始位点前1050bp到基因转录起始位点前193bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的951-1808位。
在本发明中，NNMT基因转录起始位点前840bp到基因转录起始位点前469bp为SEQID NO：1所示核苷酸序列的1161-1532位。
在本发明中，人11号染色体114165695、114165730、114165769、114165804、114165938、114166050、114166066的位点对应于SEQ ID NO：1核苷酸序列的位点如下表1所示：
表1
人11号染色体的位点 对应于SEQ ID NO：1核苷酸序列的位点
114165695位 第1161位
114165730位 第1196位
114165769位 第1235位
114165804位 第1270位
114165938位 第1404位
114166050位 第1516位
114166066位 第1532位
DNA甲基化(DNA methylation)
DNA甲基化(DNA methylation)为DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而调控基因表达。
DNA甲基化是最早被发现、也是研究最深入的表观遗传调控机制之一。广义上的DNA甲基化是指DNA序列上特定的碱基在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)的催化作用下，以S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine，SAM)作为甲基供体，通过共价键结合的方式获得一个甲基基团的化学修饰过程。这种DNA甲基化修饰可以发生在胞嘧啶的C-5位、腺嘌呤的N-6位及鸟嘌呤的N-7位等位点。一般研究中所涉及的DNA甲基化主要是指发生在CpG二核苷酸中胞嘧啶上第5位碳原子的甲基化过程，其产物称为5-甲基胞嘧啶(5-mC)，是植物、动物等真核生物DNA甲基化的主要形式。DNA甲基化作为一种相对稳定的修饰状态，在DNA甲基转移酶的作用下，可随DNA的复制过程遗传给新生的子代DNA，是一种重要的表观遗传机制。
DNA甲基化反应分为2种类型。一种是2条链均未甲基化的DNA被甲基化，称为从头甲基化(denovo methylation)；另一种是双链DNA的其中一条链已存在甲基化，另一条未甲基化的链被甲基化，这种类型称为保留甲基化(maintenance methylation)。
典型地，DNA甲基化为DNA CpG位点甲基化。CpG双核苷酸在人类基因组中的分布很不均一，而在基因组的某些区段，CpG保持或高于正常概率。CpG位点富集区(又称CpG岛)主要位于基因的启动子(promotor)和外显子区域，是富含CpG二核苷酸的一些区域，约有60％以上基因的启动子含有CpG岛。这里CpG是胞嘧啶(C)-磷酸(p)-鸟嘌呤(G)的缩写。
细胞内基因表达受多种信号传导通路、转录因子和表观遗传修饰的调控。DNA甲基化修饰是表观遗传修饰调控基因表达的重要方式，特定基因区DNA甲基化水平往往影响该基因的表达水平。相对于信号传导通路和转录因子等对基因表达的调控，表观遗传修饰中的DNA甲基化修饰对基因表达的影响更加稳定，并不易被细胞外环境所影响，DNA甲基化修饰容易用现有技术精准检测，因此是较为理想的生物标志物。
线粒体氧化磷酸化通路抑制剂及其用途
本发明提供一种线粒体氧化磷酸化通路抑制剂，用于预防和/或治疗肿瘤(癌症)。
在本发明的一个优选例中，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂包括式I、式II和/或式III化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐.
具体地，本发明所述的式I、式II和/或式III化合物如本发明第一方面所述。
如本文所用，“本发明式I化合物”、或“式I化合物”可互换使用，指具有式I化合物，或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐。应理解，该术语还包括上述组分的混合物。
如本文所用，“本发明式II化合物”、或“式II化合物”可互换使用，指具有式II化合物，或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐。应理解，该术语还包括上述组分的混合物。
如本文所用，“本发明式III化合物”、或“式III化合物”可互换使用，指具有式III化合物，或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐。应理解，该术语还包括上述组分的混合物。
术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐，适合形成盐的酸包括(但并不限于)：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、氢氟酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的金属盐，适合形成盐的碱包括(但并不限于)：氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸钠等无机碱、氨水、三乙胺、二乙胺等有机碱。
本发明所述的如式I所示化合物可通过常规方法转化为其药学上可接受的盐，例如，可将相应的酸的溶液加入到上述化合物的溶液中，成盐完全后除去溶剂即得本发明所述化合物的相应的盐。
代表性地，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
本发明的研究表明，本发明化合物对线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达(或未表达)、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤细胞具有更显著的抑制作用，线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达(或未表达)、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤细胞对本发明线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感。
癌症
本发明研究表明，本发明所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂能够用于预防和/或治疗肿瘤。
在本发明中，术语“肿瘤”、“癌症”、“癌”和“瘤”可互换使用。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括线粒体氧化磷酸化通路上调的肿瘤。代表性地，本发明所述线粒体氧化磷酸化通路上调的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括NNMT基因低表达或未表达的肿瘤。代表性地，本发明所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括DNA甲基化酶高表达的肿瘤。代表性地，本发明所述DNA甲基化酶高表达的肿瘤如上本发明第一方面所述。
本发明所述的DNA甲基化酶包括(但不限于)DNMT1、DNMT3a、DNMT3b，或其组合。优选地，本发明所述的DNA甲基化酶包括DNMT1。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括DNMT1高表达的肿瘤。代表性地，本发明所述DNMT1高表达的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括DNMT3a高表达的肿瘤。代表性地，本发明所述DNMT3a高表达的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括DNMT3b高表达的肿瘤。代表性地，本发明所述DNMT3b高表达的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括UHRF1(泛素样含PHD和环指域蛋白1)高表达的肿瘤。代表性地，本发明所述UHRF1高表达的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高的肿瘤。代表性地，本发明所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的肿瘤包括NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤。代表性地，本发明所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤如上本发明第一方面所述。
更具体地，本发明所述的肿瘤如上本发明第一方面所述。
在本发明中，代表性的各肿瘤细胞系对应的肿瘤种类如下表2所示：
表2
标志物
本发明还提供一种用于判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗的标志物，所述的标志物包括线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平。
在一个实施方式中，线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平作为判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗的标志物，其方法包括但不限于：
当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，则该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗；和/或
当肿瘤患者的肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化通路下调、NNMT基因高表达、DNA甲基化酶低表达、UHRF1低表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
具体地，本发明所述线粒体氧化磷酸化通路上调的肿瘤、NNMT基因低表达或未表达的肿瘤、DNA甲基化酶(如DNMT1)高表达的肿瘤、UHRF1高表达的肿瘤、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高的肿瘤、
和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤如上本发明第一方面所述。
具体地，本发明所述线粒体氧化磷酸化通路下调的肿瘤、NNMT基因高表达的肿瘤、DNA甲基化酶(如DNMT1)低表达的肿瘤、UHRF1低表达的肿瘤、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低的肿瘤、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低的肿瘤如上本发明第二方面所述。
组合物或制剂、活性成分的组合和药盒和施用方法
本发明所述的组合物优选为药物组合物，本发明所述的组合物可以包括药学上可接受的载体。
如本文所用“药学上可接受的载体”是指一种或多种相容性固体、半固体、液体或凝胶填料，它们适合于人体或动物使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”是指药物组合物中的各组分和药物的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低药效。
应理解，在本发明中，所述的药学上可接受的载体没有特别的限制，可选用本领域常用材料，或用常规方法制得，或从市场购买得到。药学可接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等)、明胶、滑石粉、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油、等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、缓冲剂、螯合剂、增稠剂、pH调节剂、透皮促进剂、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、抑菌剂、无热原水等。
在本发明的一个优选例中，所述的组合物或制剂的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
在本发明的一个优选例中，所述的组合物或制剂的剂型为口服制剂、外用制剂或注射制剂
代表性地，所述的组合物或制剂的剂型为片剂、注射剂、输液剂、膏剂、凝胶剂、溶液剂、微球或膜剂。
药物制剂应与给药方式相匹配。本发明药剂还可与其他协同治疗剂一起使用(包括之前、之中或之后使用)。使用药物组合物或制剂时，是将安全有效量的药物施用于所需对象(如人或非人哺乳动物)，所述安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
本发明为线粒体氧化磷酸化通路抑制剂类药物提供可指导其精准用药的生物标志物，相关生物标志物可有效识别出对此类抗肿瘤药物敏感的肿瘤患者，提升其治疗效果，避免将该类药物施用于对其不敏感的肿瘤患者，从而可实现该类药物的精准化应用。
本发明首次意外通过系统研究发现线粒体氧化磷酸化通路表达水平或活性、NNMT基因表达水平、DNA甲基化酶表达水平、UHRF1表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平能够作为判断特定肿瘤细胞是否适合应用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂治疗的标志物。
线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂药物敏感性高，即氧化磷酸化通路抑制剂药物对线粒体氧化磷酸化通路上调、NNMT基因低表达或未表达、DNA甲基化酶高表达、UHRF1高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤具有优异的治疗作用。而且，DNA CpG位点甲基化水平的检测手段成熟、稳定、可靠，适合分子标记物的开发。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例
Oligomycin A、Gboxin、S-Gboxin、IACS-010759均是已知的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂。
Oligomycin A化合物的结构式如下：
Gboxin化合物的结构式如下：
S-Gboxin化合物的结构式如下：
IACS-010759化合物的结构式如下：
DNMT3a是指DNA甲基转移酶3a，NCBI entrez gene：1788；Uniprotkb/Swiss-port：Q9Y6K1。
DNMT3b是指DNA甲基转移酶3b，NCBI entrez gene：1789；Uniprotkb/Swiss-port：Q9UBC3。
DNMT1是指DNA甲基转移酶1，NCBI entrez gene：1786；Uniprotkb/Swiss-port：P26358。
UHRF1是指泛素样含PHD和环指域蛋白1，NCBI entrez gene：29128；Uniprotkb/Swiss-port：Q96T88。
NNMT基因英文名为Nicotinamide N-Methyltransferase。
NNMT基因启动子区核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的951-2500位。
NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的951-1808位。
NNMT基因转录起始位点前840bp到转录起始位点前469bp为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的1161-1532位。
实施例1
实验背景：细胞所需氧气主要由线粒体氧化磷酸化通路所消耗，对线粒体氧消耗速率(OCR)的分析可直接反映线粒体氧化磷酸化通路的活性。本实施例采用Seahorse XFe代谢分析仪检测NCI-H82细胞在线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Oligomycin A、Gboxin、S-Gboxin和IACS-010759存在以及不存在情况下其氧气消耗情况。
实验方法和结果：将NCI-H82(源自ATCC，编号HTB-175)细胞培养于添加10％FBS(加P/S)RPMI1640培养基，分别加入线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Oligomycin A(1μM)、Gboxin(2μM)、S-Gboxin(5μM)、IACS-010759(1μM)，并设有不加任何线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的对照组，在0.5小时内完成对细胞氧消耗的检测，实验结果如图1所示。
从图1中可以看出，相比不加任何线粒体氧化磷酸化抑制剂的对照组，在NCI-H82细胞中加入小分子化合物Oligomycin A、Gboxin、S-Gboxin以及IACS-010759可显著抑制其氧消耗，表明这些小分子可有效抑制线粒体氧化磷酸化通路。
实施例2
随机选取来源于不同组织并且基因型各异的细胞系，使用细胞活性检测试剂检测其对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin化合物的敏感性，结果发现一部分细胞株对Gboxin化合物敏感，IC50值较低，而另有一部分细胞株对Gboxin化合物不敏感，IC50值较高。
实验背景：细胞活力检测采用Promega CellTiter-Glo试剂盒，该试剂盒通过直接检测细胞内ATP含量反映所测细胞的活力。本实验检测线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin化合物对不同肿瘤细胞系细胞活力抑制的IC50值，各肿瘤细胞系名称、来源及培养条件如下：
细胞系NCI-H82(ATCC，编号HTB-175)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系G-401(ATCC，编号CRL-1441)培养于含10％胎牛血清的McCoy′s 5a培养基+P/S；
细胞系MDA-MB-453(ATCC，编号HTB-131)培养于含10％胎牛血清的Leibovitz′sL-15培养基+P/S；
细胞系WSU-DLCL2(DSMZ，编号ACC-575)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系SU-DHL-2(ATCC，编号CRL-2956)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系OCI-AML-3(DSMZ，编号ACC-582)培养于含20％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系SW48(ATCC，编号CCL-231)培养于含10％胎牛血清的Leibovitz′s L-15培养基+P/S；
细胞系ATN-1(RIKEN，编号RBRC-RCB1440)培养于含10％胎牛血清及0.1mM NEAA的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系HCC15(KCLB，编号70015)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系OCI-LY-19(DSMZ，编号ACC-528)培养于含10-20％h i FBS的80-90％alpha-MEM培养基+P/S；
细胞系22RV1(ATCC，编号CRL-2505)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系MIA PaCa-2(ATCC，编号CRL-1420)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基+P/S；
细胞系CCRF-CEM(ATCC，编号CCL-119)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系HH(ATCC，编号CRL-2105)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系OCI-AML-5(DSMZ，编号ACC-247)培养于alpha-MEM培养基(含20％胎牛血清及10％体积分数的经5637细胞系调整的培养基)+P/S；
细胞系G-402(ATCC，编号CRL-1440)培养于含10％胎牛血清的McCoy′s 5a培养基+P/S；
细胞系HCC1806(ATCC，编号CRL-2335)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系BT-549(ATCC，编号HTB-122)培养于含10％胎牛血清0.023IU/m1人胰岛素的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系OCI-AML-4(DSMZ，编号ACC-729)培养于alpha-MEM培养基(含20％胎牛血清及20％体积分数的经5637细胞系调整的培养基)+P/S；
细胞系H9(ATCC，编号HTB-176)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系Jurkat，Clone E6-1(ATCC，编号TIB-152)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系G-361(ATCC，编号CRL-1424)培养于含10％胎牛血清的McCoy′s 5a培养基+P/S。
细胞系U-937(ATCC，编号CRL-1593.2)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系SNU-398(ATCC，编号CRL-2233)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系NCI-H1048(ATCC，编号CRL-5853)培养于含5％胎牛血清的HITES培养基+P/S；
细胞系A-375(ATCC，编号CRL-1619)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基+P/S；
细胞系D283 Med(ATCC，编号HTB-185)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系GAK(JCRB，编号JCRB0180)培养于含20％胎牛血清的Ham′s F12培养基+P/S；
细胞系CHL-1(ATCC，编号CRL-9446)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基+P/S；
细胞系NCI-H1155(ATCC，编号CRL-5818)培养于无血清的ACL-4培养基+P/S；
细胞系LS180(ATCC，编号CL-187)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系Daoy(ATCC，编号HTB-186)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系DU 145(ATCC，编号HTB-81)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系AM-38(JCRB，编号IFO50492)培养于含20％热灭活胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系HCC70(ATCC，编号CRL-2315)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系PANC-1(ATCC，编号CRL-1469)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基+P/S；
细胞系U-87MG(ATCC，编号HTB-14)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系MJ(ATCC，编号CRL-8294)培养于含20％胎牛血清的IMDM培养基+P/S；
细胞系Gp2D(ECACC，编号95090714)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基+P/S；
细胞系SU.86.86(ATCC，编号CRL-1837)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系NCI-H2081(ATCC，编号CRL-5920)培养于含5％胎牛血清的HITES培养基+P/S；
细胞系NCI-H1793(ATCC，编号CRL-5896)培养于含5％胎牛血清的HITES培养基+P/S；
细胞系ACHN(ATCC，编号CRL-1611)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系U-251MG(ECACC，编号9063001)培养于含2mMGlutamine、1％NEAA、1mMSodium Pyruvate(NaP)以及10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系MDA-MB-231(ATCC，编号HTB-26)培养于含10％胎牛血清的Leibovitz′s L-15培养基+P/S；
细胞系NCI-H196(ATCC，编号CRL-5823)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系PC-3(ATCC，编号CRL-1435)培养于含10％胎牛血清的F-12K培养基+P/S；
细胞系OCI-M1(DSMZ，编号ACC-529)培养于含20％胎牛血清的IMDM培养基+P/S；
细胞系NCI-H1651(ATCC，编号CRL-5884)培养于含10％胎牛血清的ACL-4培养基+P/S；
细胞系C3A(ATCC，编号CRL-10741)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系SNU-449(ATCC，编号CRL-2234)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系GB-1(JCRB，编号IFO50489)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基+P/S；
细胞系769-P(ATCC，编号CRL-1933)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系COLO 320HSR(ATCC，编号CCL-220.1)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
细胞系CFPAC-1(ATCC，编号CRL-1918)培养于含10％胎牛血清的IMDM培养基+P/S；
细胞系SF126(JCRB，编号IFO50286)培养于含10％胎牛血清的EMEM培养基+P/S；
细胞系786-O(ATCC，编号CRL-1932)培养于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基+P/S；
实验方法和结果：上述各肿瘤细胞培养于相关培养基(加P/S)，传代3小时后加入梯度稀释的Gboxin化合物，培养3-4天后测定相关半抑制浓度IC50。
实验结果如下表3所示。
表3 Gboxin化合物对不同肿瘤细胞株的IC50(μM)
备注：IC50为半抑制浓度(50％inhibiting concentration)，即达到50％抑制效果时抑制剂的浓度。
由表3可知，对不同细胞进行线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin敏感性检测发现NCI-H82(人小细胞肺癌细胞)、G-401(人肾癌Wilms细胞)、MDA-MB-453(乳腺癌细胞)、WSU-DLCL2(人弥漫大B淋巴瘤细胞)和SW48(人结肠腺癌细胞)等对Gboxin敏感(IC50值较低)；而GB-1(人脑胶质母细胞瘤细胞)、CFPAC-1(人胰腺癌细胞)、SF126(人脑瘤细胞)、786-O(肾透明细胞腺癌细胞系)等对Gboxin不敏感(IC50值较高)。
实施例3
使用细胞活性检测试剂进一步检验实施例2中发现的对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin小分子敏感的肿瘤细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、WSU-DLCL2、SW48)和不敏感肿瘤细胞株(GB-1、CFPAC-1、SF126、786-O)对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Oligomycin A、IACS-010759的敏感性。
实验背景：细胞活力检测采用Promega CellTiter-Glo试剂盒，该试剂盒通过直接检测细胞内ATP含量反应细胞活力。本实验检测线粒体氧化磷酸化通路抑制剂小分子Oligomycin A和IACS-010759对不同肿瘤细胞活力抑制的IC50值。
实验方法和结果：各肿瘤细胞均培养于实施例2所述相关培养基中，细胞传代3小时后，分别加入梯度稀释的Oligomycin A和IACS-010759，培养3-4天后测定这两个线粒体氧化磷酸化通路抑制剂各自对相关细胞的半抑制剂量IC50。
实验结果如表4所示：
表4化合物Oligomycin A和IACS-010759对不同细胞株的抑制作用(IC50)
备注：IC50为半抑制浓度(50％inhibiting concentration)，即达到50％抑制效果时抑制剂的浓度。
由表4可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、WSU-DLCL2、SW48)同样对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Oligomycin A、IACS-010759敏感(IC50值相对较低)，而对Gboxin不敏感的细胞株(GB-1、CFPAC-1、SF126、786-O)同样对Oligomycin A、IACS-010759小分子不敏感(IC50值相对较高)。
实施例4
用Western Blot实验检测对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82，G-401和WSU-DLCL2)在Gboxin和Oligomycin A等线粒体氧化磷酸化通路抑制剂小分子作用后，ATF4(转录激活因子4，Activating Transcription Factor 4)和mTOR(雷帕霉素靶蛋白)通路的活性变化情况。
实验背景：对线粒体氧化磷酸化通路的抑制会导致ATF4应激通路的激活和mTOR通路活性的下降，mTOR通路活性由磷酸化核糖体蛋白S6(即p-S6)表达量反映。ATF4的表达增加表明ATF4应激通路的激活，而p-S6蛋白表达降低表明mTOR通路活性受到抑制。
实验方法和结果：NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2肿瘤细胞培养于含有10％FBS的相关培养基中(加p/s)，细胞传代过夜后，加入如图2所示1μM和3μM的Gboxin以及1μM的Oligomycin A，处理12小时后用Western Blot实验检测ATF4和p-S6蛋白的蛋白含量，实验结果如图2所示。
由图2可知，细胞株NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2在Gboxin和Oligomycin A等线粒体氧化磷酸化通路抑制剂小分子作用后，ATF4应激通路上调，而p-S6蛋白降低说明mTOR通路活性受到抑制，表明这些细胞中氧化磷酸化通路活跃，对氧化磷酸化通路抑制剂敏感。
实施例5
用Western Blot实验检测对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞(SF126、CFPAC-1和786-O)在Gboxin和Oligomycin A等线粒体氧化磷酸化通路抑制小分子作用后，ATF4和mTOR通路的活性变化情况。
实验背景：对线粒体氧化磷酸化通路的抑制会导致ATF4应激通路的激活和mTOR通路活性的下降，mTOR通路活性由磷酸化核糖体蛋白S6即p-S6表达量量反映。ATF4的表达增加表明ATF4应激通路的激活，而p-s6蛋白表达降低表明mTOR通路活性受到抑制。
实验方法和结果：SF126、CFPAC-1和786-O细胞培养于含有10％FBS的相关培养基中(加p/s)，细胞传代过夜后，加入如图3所示1μM和3μM的Gboxin以及1μM的Oligomycin A，处理12小时后Western Blot实验检测ATF4和p-S6蛋白的蛋白含量，实验结果如图3所示。
由图3可知，细胞株SF126、CFPAC-1和786-O在Gboxin和Oligomycin A等线粒体氧化磷酸化通路抑制剂小分子作用后，ATF4应激通路和mTOR通路活性无明显变化，对氧化磷酸化通路抑制剂不敏感。
实施例6
利用生物信息学的方法检测对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)基因转录表达情况。
实验背景：细胞的行为和特性是由该细胞所表达的基因决定的，通过全基因组基因转录测序可以精确获得某细胞各个基因mRNA的转录水平，对所有基因mRNA的转录水平进行生物信息学计算分析可以将不同细胞按基因表达的近似程度进行分类。
实验方法和结果：对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)进行全基因组mRNA转录水平进行测序，然后利用生物信息学的方法对各细胞mRNA转录组的相似性进行计算分析。
实验结果如图4所示，图中pc是指principal component，pc1表示综合各基因表达信息显示的细胞间差异程度。
由图4可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在基因转录水平上是明显不同的两类细胞。
实施例7
利用生物信息学的方法分析对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)差异表达基因的功能情况。
实验背景：细胞的行为和特性是由该细胞所表达的基因决定的，多个(或多组)细胞间差异表达基因往往决定了这些细胞的不同特性。对多个(或多组)细胞差异表达基因mRNA转录水平进行生物信息学计算分析可以获得这些细胞具有的不同特性。
实验方法和结果：利用生物信息学的方法分析得到对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)之间存在的差异表达基因，然后对这些差异表达基因进行功能分析以获得这两组细胞在功能方面的区别，实验结果如图5所示。
由图5可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)之间的差异表达上调基因主要集中在与代谢相关的通路上(如碳代谢、丙酮酸代谢、丙酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢等)，表明这两群细胞在细胞代谢方面存在明显的差异，敏感细胞中相关代谢通路上调。
实施例8
利用生物信息学的方法分析对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在代谢通路方面的主要差异。
实验背景：由实施例7可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在与代谢相关的通路上存在显著差异。细胞代谢是由多条代谢通路的活性(基因表达)决定的，深入分析这两组细胞间不同的代榭通路可更深入地知悉这两类细胞在代谢方面的不同之处。
实验方法和结果：利用生物信息学的方法分析得到对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的肿瘤细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)之间的差异表达基因，选取其中参与细胞代谢的差异基因分析这些基因所参与的代谢通路，实验结果如图6所示。
由图6可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)之间差异表达最显著的代谢通路是线粒体氧化磷酸化通路(oxidative phosphorylation)，其在敏感细胞中显著上调。
实施例9
利用生物信息学的方法分析对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的肿瘤细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的肿瘤细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在氧化磷酸化通路蛋白复合体方面的差异。
实验背景：据实施例8可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在线粒体氧化磷酸化通路上存在显著差异，氧化磷酸化通路是由包含90多个蛋白的5个蛋白复合体组成。
实验方法和结果：利用生物信息学的方法分析得到对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)之间的差异表达基因，选取与氧化磷酸化通路蛋白复合体有关的差异表达基因并分析得到这些基因所参与表达的氧化磷酸化通路蛋白复合体，实验结果如图7所示。
由图7可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在氧化磷酸化通路上的差异表达基因主要集中于氧化磷酸化通路蛋白复合体I，III，IV，和V，这些蛋白在敏感细胞中高表达。
实施例10
利用线粒体膜电差指示剂分析对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)之间在膜电差上的可能差异。
实验背景：线粒体膜电差可调控线粒体蛋白转运、自噬、ATP合成等多种重要线粒体功能，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1和SF126)在氧化磷酸化通路上存在显著差异，这些差异也会反映在线粒体膜电势差上。
实验方法和结果：使用线粒体膜电差指示剂TMRE(tetramethylrhodamine，ethylester)检测正常培养状态下对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1和SF126)的膜电差，实验结果如图8所示。
由图8可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)膜电差相对较高，不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1和SF126)线粒体膜电差相对较低，两组细胞在线粒体膜电差上存在显著差异。
实施例11
利用Seahorse细胞代谢分析仪分析对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)在氧气消耗方面的差异。
实验背景：细胞所需90％以上的氧气是由线粒体氧化磷酸化通路消耗的，因此细胞氧化磷酸化通路的活性和其氧气消耗水平紧密相关。对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1和SF126)在氧化磷酸化通路蛋白表达上存在显著差异，相关蛋白在敏感细胞上是高表达的，这些差异也会反映在以氧气消耗上。
实验方法和结果：按照Seahorse细胞代谢分析仪的标准流程检测正常培养状态下对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)的线粒体氧消耗速率(OCR)。实验结果如图9所示。
由图9可知，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401和WSU-DLCL2)有显著高于不敏感细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)的氧气消耗水平。
实施例12
利用转录组和生物信息学的方法筛选对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的肿瘤细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的肿瘤细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)之间表达差异显著的基因。
实验背景：精准用药是现代药物研发的方向，生物标记物为实现精准用药提供了极好的技术保障，一个好的生物标记物应具有能明确区分药物应答组和非应答组的能力，大部分生物标记物是某个基因或某组基因的表达。
实验方法和结果：通过对线粒体通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126、CFPAC)进行转录组测序，用生物信息学的方法筛选在这两组细胞中表达差异显著的基因，实验结果如图10所示。
从图10中可以看出，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1、GB-1、SF126)在NNMT基因表达方面有非常大的差异，氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞中NNMT基因是低表达的。
实施例13
在细胞水平检测NNMT基因转录水平作为对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感性生物标记物的可行性。
实验背景：精准用药是现代药物研发的方向。生物标记物为实现精准用药提供了极好的技术保障。一个好的生物标记物应具有能明确区分药物应答组和非应答组的能力，并且和所对应的生物特征成正比例或者反比例关系。
实验方法和结果：根据实施例2中获得的来自不同组织来源且基因型各异的57株肿瘤细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin的敏感性数据，按照IC50数值高低不同分成五组，即组一：IC50＜1μM；组二：1μM＜IC50＜3μM；组三：3μM＜IC50＜9μM；组四：9μM＜IC50＜27μM；组五：27μM＜IC50。测定每组所有肿瘤细胞的平均NNMT基因转录水平，分析肿瘤细胞NNMT基因转录水平和氧化磷酸化抑制剂敏感性的相关性。氧化磷酸化抑制剂Gboxin对肿瘤细胞的抑制效果(IC50)与NNMT基因转录水平的关系如图11所示。
从图11中可以看出各细胞NNMT基因转录水平和其对Gboxin的敏感性(IC50越小则越敏感)呈指数负相关，表明NNMT基因转录水平和肿瘤细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈负相关，即细胞NNMT基因转录水平越低则该肿瘤细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性越高。
实施例14
对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞和不敏感的细胞在mRNA和蛋白表达水平方面对NNMT基因进行验证。
实验背景：细胞中的基因通常是在蛋白水平行使其功能的，本实验检测NNMT基因的mRNA和蛋白水平。
实验方法和结果：利用RT-qPCR和western blot实验在对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞和不敏感的肿瘤细胞株中检测NNMT的mRNA和NNMT蛋白。实验结果如图12所示。
从图12中可以看出，NNMT基因的mRNA和蛋白在对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞(NCI-H82、G-401、SW48和WSU-DLCL2)中是低表达的，而在对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞(786-O、CFPAC-1和SF126)中是高表达的。
实施例15
实验方法和结果：通过对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1和SF126)进行全基因组转录组测序和DNA甲基化测序，用生物信息学的方法找出相对于不敏感肿瘤细胞而言敏感细胞株中基因低表达但其启动子区高甲基化的基因(红色圆点，Ddown-CpG_hyper，图13中左上部分)和敏感细胞株中高表达但其启动子区低甲基化的基因(深蓝色圆点，DEG_up-CpG_hypo，图13中右下部分)。
实验结果如图13所示，图中X轴表示某一基因转录表达水平在敏感细胞和不敏感细胞中的比值(敏感细胞/不敏感细胞)，Y轴表示某一基因启动子区CpG岛甲基化水平在敏感细胞和不敏感细胞中的比值(敏感细胞/不敏感细胞)。
从图13中可以看出，NNMT基因启动子区在对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)中是高甲基化、低表达的，而在不敏感的肿瘤细胞株(786-O、CFPAC-1、GB-1和SF126)是低甲基化、高表达的。
实施例16
对Oligomycin A、Gboxin等线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的5例肿瘤细胞系(NCI-H82、G-401、MDA-MB-453、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的4例肿瘤细胞系(786-O、CFPAC-1、GB-1和SF126)的NNMT基因启动子区、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp之间区域以及NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp之间区域进行重亚硫酸盐测序以检测相关区域内DNA CpG位点甲基化水平，首先利用重烟硫酸盐对基因组DNA进行处理，将未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基变成尿嘧啶，而发生了甲基化的胞嘧啶未发生脱氨基，因而可以基于此将经重亚硫酸盐处理的和未处理的测序样本进行比较来发现甲基化的位点，结果如图14、图15和图16所示。
如图14(NNMT基因启动子区)、图15(NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp之间区域)及图16(NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp之间区域)所示，线粒体氧化磷酸化通路抑制剂对NNMT基因启动子区、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp之间区域、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp之间区域内DNA CpG位点甲基化水平高的肿瘤细胞的抑制作用显著较强，对NNMT基因启动子区、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp之间区域、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp之间区域内DNA CpG位点甲基化水平低的肿瘤细胞的抑制作用显著较弱，表明肿瘤细胞NNMT基因启动子区、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点后499bp之间区域、NNMT基因转录起始位点前1050bp到转录起始位点前193bp之间区域内DNA CpG位点甲基化水平与其对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈正相关。
实施例17
对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的4例肿瘤细胞系(NCI-H82、G-401、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感的3例肿瘤细胞系(786-O、CFPAC-1和SF126)的NNMT基因转录起始位点前840bp(即人11号染色体第114165695位)到基因转录起始位点前469bp(即人11号染色体第114166066位)区域内特定DNA CpG位点甲基化情况进行研究。
首先对细胞基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，将未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基变成尿嘧啶，而发生了甲基化的胞嘧啶未发生脱氨基，因而可以基于此将经重亚硫酸盐处理的和未处理的测序样本进行比较来发现甲基化的位点，随后用相应引物对该区域进行PCR扩增、测序分析以检测该DNA区域内CpG位点的甲基化水平。
分析发现对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的G-401、SW48、NCI-H82、WSU-DLCL2细胞系中该区域内7个CpG位点(人11号染色体114165695位、114165730位、114165769位、114165804位、114165938位、114166050位、114166066位)几乎全部被甲基化，而对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的CFPAC-1、786-O、SF126细胞系中该区域这7个CpG位点都未被甲基化，相关位点甲基化情况如图17所示。
其中，人11号染色体114165695、114165730、114165769、114165804、114165938、114166050、114166066的位点对应于SEQ ID NO：1核苷酸序列的位点如下所示：
实施例18
用酶联免疫的方法检测对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感和不敏感细胞株内甲基化供体S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的水平。
实验方法和结果：通过酶联免疫的方法对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、SW48和WSU-DLCL2)和不敏感细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)的甲基化供体SAM水平进行检测。实验结果如图18所示：
从图18中可以看出，对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞株(NCI-H82、G-401、SW48和WSU-DLCL2)中甲基化供体SAM水平明显高于对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞株(786-O、CFPAC-1和SF126)中甲基化供体SAM的水平。
实施例19
细胞DNA的甲基化水平由DNA甲基化酶DNMT3a、DNMT3b和DNMT1维持，DNMT3a、DNMT3b能对DNA进行从头进行甲基化，而DNMT1能在蛋白UHRF1(泛素样含PHD和环指域蛋白1)的帮助下对已甲基化的DNA进行复制维持，本实施例检测肿瘤中NNMT表达与DNMT1、UHRF1、DNMT3a以及DNMT3b表达的相关性。
实验方法和结果：从公共数据库中(Cancer Cell Line Encyclopedia，CCLE，共1019株细胞)得到多种细胞中NNMT基因、DNMT1、UHRF1、DNMT3a以及DNMT3b的表达数据，然后用生物信息学的方法分析这些细胞中NNMT表达和DNMT1、UHRF1、DNMT3a、DNMT3b表达的相关性，分析各细胞NNMT基因表达水平和DNMT1、UHRF1、DNMT3a以及DNMT3b的表达水平的相关性，实验结果如附图19所示：
从图19中可以看出，各细胞中NNMT的表达和DNA甲基化酶、UHRF1的表达呈负相关。
实施例20
在细胞水平考察DNMT1(DNA Methyltransferase1)基因转录水平作为对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感性的生物标记物。
实验方法和结果：根据实施例2中获得的来自不同组织来源且基因型各异的57株肿瘤细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂Gboxin的敏感性数据，按照IC50数值高低不同分成五组，即组一：IC50＜1μM；组二：1μM＜IC50＜3μM；组三：3μM＜IC50＜9μM；组四：9μM＜IC50＜27μM；组五：27μM＜IC50。
测定每组内所有细胞平均DNMT1基因转录mRNA水平，分析各肿瘤细胞DNMT1基因转录水平和氧化磷酸化敏感性的相关性。实验结果如图20所示：
从图20中可以看出，DNMT1基因转录水平和这些细胞对Gboxin的敏感性(IC50越小则越敏感)呈指数正相关，表明DNMT1基因转录水平和相关细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈正相关，即肿瘤细胞DNMT1基因转录水平越高则其对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感性越高。
实施例21
相关细胞NNMT表达水平和其对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈显著负相关，而其DNMT1基因表达水平和其对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈显著正相关，可进一步检测NNMT和DNMT1在相关细胞对氧化磷酸化通路抑制剂敏感性中的作用。
实验方法和结果：通过病毒载体将NNMT基因导入到NCI-H82细胞中使得NCI-H82细胞过表达NNMT蛋白，通过转染shRNA的方法敲低NCI-H82细胞DNMT1的表达，用检测胞内ATP的方法检测过表达NNMT蛋白和/或敲低DNMT1的表达后，细胞对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂(Gboxin、Oligomycin A)敏感性的变化，实验结果如图21和图22所示，Vector为转染有空病毒的NCI-H82细胞对照组。
从图21和图22看出单独过表达对氧化磷酸化通路抑制剂敏感的NCI-H82细胞的NNMT蛋白(图中ov-NNMT)或分别使用两种不同针对DNMT1基因的shRNA敲低NCI-H82细胞的DNMT1表达(图中sh-DNMT1#1为一种针对DNMT1基因的shRNA，其对应的DNA序列为：GATCCGGCCCAATGAGACTGACATCAATTCAAGAGATTGATGTCAGTCTCATTGGGCTTTTTG(SEQ ID No：2)，sh-DNMT1#2为另外一种针对DNMT1基因的shRNA，其对应的DNA序列为：GATCCGGGATGAGTCCATCAAGGAAGATTCAAGAGATCTTCCTTGATGGACTCATCCTTTTTTG)(SEQ ID No：3)，发现NCI-H82细胞对Gboxin、Oligomycin A等线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性降低。当在NCI-H82细胞中过表达NNMT蛋白并且同时敲低DNMT1表达(图中ov-NNMT/sh-DNMT1#1和ov-NNMT/sh-DNMT1#2)，NCI-H82肿瘤细胞对Gboxin、Oligomycin A等线粒体抑制剂敏感性降低得更为显著。
其中，Western Blot实验检测相对于正常NCI-H82(Vector)相比，过表达NNMT蛋白的NCI-H82(ov-NNMT)的NNMT蛋白含量如图23所示。Western Blot实验检测相对于正常NCI-H82(shVector)相比，两种shRNA敲低肿瘤细胞的DNMT1表达的NCI-H82(sh-DNMT1#1或sh-DNMT1#2的-DNMT1)的DNMT1蛋白含量如图24所示。
因此，本实施例通过过表达NCI-H82细胞NNMT蛋白，以及敲低NCI-H82细胞DNMT1的表达，进一步证实肿瘤细胞的NNMT表达水平和其对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈显著负相关，而肿瘤细胞的DNMT1表达水平和其对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性呈显著正相关。
实施例22
为验证对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂敏感的细胞在体内是否仍然维持对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性，使用S-Gboxin对敏感细胞(NCI-H82)和不敏感细胞(CFPAC-1)接种的小鼠皮下肿瘤进行有效性检测。
实验方法和结果：将5x106个NCI-H82、NCI-H82-NNMTov(通过病毒载体将NNMT基因导入到NCI-H82细胞中使得NCI-H82细胞过表达NNMT蛋白)和CFPAC-1肿瘤接种于裸鼠皮下，构建荷瘤小鼠，各组荷瘤小鼠腹腔注射线粒体氧化磷酸化通路抑制剂化合物S-Gboxin，给药剂量为10mg/kg/day，检测S-Gboxin对这些肿瘤的抑制情况，对照组以同样腹腔注射方式给溶媒，其中，肿瘤体积计算方法为：肿瘤体积＝1/2长x宽2。实验结果如图25、图26和图27。
从图25、图26和图27中可以看出，化合物S-Gboxin可显著抑制敏感细胞NCI-H82接种的裸鼠皮下肿瘤，而对NCI-H82-NNMTov接种的裸鼠皮下肿瘤抑制效果显著差于NCI-H82接种的裸鼠皮下肿瘤的抑制效果，并且S-Gboxin对不敏感细胞CFPAC-1接种的裸鼠皮下肿瘤无明显抑制效果，从而表明氧化磷酸化通路抑制剂对NNMT低表达肿瘤的抑制作用更强，即NNMT低表达的肿瘤对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性强，NNMT高表达肿瘤对氧化磷酸化通路抑制剂的敏感性较差。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 南京施江医药科技有限公司
<120> 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物
<130> P2022-0895
<150> CN2020110345672
<151> 2020-09-27
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2500
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
tatccaagag ctatcagcac tcccatgttt attgtagcac tgttcacaat agccaagatt 60
tggaagtact ctaagtgtcc attagcagat gaatggataa agacaatgtg gtaatacaca 120
taatggagta ctattcagtc ataaagaaga attagatcct gtcatttgca ataacatgga 180
tggaactgga ggtcataatg ttgagtgaaa taaaccaggc acagaaagac aaactttgca 240
tgttctcact tatttatggg agctaaaaac taaaataact gaactcacag agatagagag 300
tagaaggatg gttacgagag gatgggaagg gtagcgaggt gggtaggggg gatgtgggga 360
tcattaatgg gtataaaaaa tagttagagg ccaggcgcag tggctcacgc ctgtaatccc 420
agcactttgg gaggccgagg taggcggaac acctgaggag ttcaagacca gcctggccaa 480
tatgatgaaa ccccgtctct actaaaaata caaaaattag ctgggcgtga tggtgtgcac 540
ctgtagtccc agctgcttgg gaggctgagg caggagaatc gctggaaccc aagaggtgaa 600
ggttgcagtg agctgagatc gcgtcactgc actccagcct gggtgacaga gtgagactcc 660
acatcaaaaa aaaaaaaaaa aagttagaaa gattgaataa gacctaatat ttgctagcac 720
aacagggtga atatagtaaa aaataattta tttgtacctt caaaaataac tagacaagta 780
taattgggtt gtttgtaaca cacaaaaaat aagtacttga agtggtggat accccattta 840
ccctgatgtg attattttgt attgcaggcc tctatcagaa tatctcatgt aacccataaa 900
tatatacacc tactctgtac ccacaaaaag tttttaaaaa gaaaaataaa tagcaaccga 960
aaaaaaaaga gagggagaaa agaaaaaaga aaaaaaaatc aagtgcctgg ctgggtagaa 1020
taaattctaa ggccacaatg ttactgacca tgggtttttt ggctctcagt gtatagaaat 1080
tgacacaagg ccaatagtct tcccaaacat gctttactgg aacttacgcc ctggcataag 1140
ggccacaaca aaagagagag cgaattctct ggcttgctga ctccttggaa aaaaccggta 1200
gggatttttt tattaggcaa agcacaggaa ttgacgtcag aggcaggatg tgctgctggg 1260
caaagcatac gagaagtggg gtatgcaggt cagcattact tggttgcaat ggttatcttg 1320
aggaatgggc caactggtgg tctggccagt ggcaacaagg ctgtaaatca attattcagc 1380
attccttccc aaggtgggac acccggcaac attgtttatc tcctaaggcc agttcctgga 1440
attaagtgaa aggatgacta atggacatgt tgtcagtgag gtagtggtgt gggttttgtg 1500
accagtggga atgcacgaaa gaatgcttta gcggggagtg agctgaagcc aagccccatc 1560
cctactctgt ctcaaagtga gttcagaaaa ggggatttaa agaattcttt tttttttttt 1620
tttttttttt gagacagagt cttgctctgt cgcccaggct ggagtgcagt ggcgccatct 1680
tggctcactg caagctccgc cccccgggtt catgccattc tcctgcctca gcctcccaag 1740
tagctgggac tgcaggtgcc taccaccaag cccagctaat tttttgtatt ttttttttag 1800
tagagacggg gtttcaccat gttagccagg atggtctcga tctcctgacc tcgtgatctg 1860
cccgccttag cctcccaaag tgctgggatt acaggcatga gcctccgccc ccggccttaa 1920
ataattctta aaggaagtaa agttaacttt gaaagaacta tcaggatttg gattgactga 1980
aaggagtggg gaagcttagg gaggaggtgc ttgccagaca ctgggtcatg gcagtggtcg 2040
gtgaagctgc agttgcctag ggcagggatg gagagagagt ctgggcatga ggagagggtc 2100
tcgggatgtt tggctggact agattttaca gaaagcctta tccaggcttt taaaattact 2160
ctttccagac ttcatctgag actccttctt cagccaacat tccttagccc tgaatacatt 2220
tcctatcctc atctttccct tctttttttt cctttctttt acatgtttaa atttaaacca 2280
ttcttcgtga ccccttttct tgggagattc atggcaagaa cgagaagaat gatggtgctt 2340
gttaggggat gtcctgtctc tctgaacttt ggggtcctat gcattaaata attttcctga 2400
cgagctcaag tgctccctct ggtctacaat ccctggcggc tggccttcat cccttgggca 2460
agcattgcat acagctcatg gccctccctc taccataccc 2500
<210> 2
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 2
gatccggccc aatgagactg acatcaattc aagagattga tgtcagtctc attgggcttt 60
ttg 63
<210> 3
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 3
gatccgggat gagtccatca aggaagattc aagagatctt ccttgatgga ctcatccttt 60
tttg 64

Claims (59)

1.一种线粒体氧化磷酸化通路抑制剂的用途，其特征在于，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于预防和/或治疗肿瘤；
所述的肿瘤为NNMT基因低表达或未表达的肿瘤；
所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂为式I-2化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐；
其中，
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基；
R6为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基、取代或未取代的C6-C12芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
Z1为
所述的杂环烷基、杂芳基的杂环上各自独立地具有1、2、3个或4个选自N、O和S的杂原子；
或，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂为式II化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐；
其中，
R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C3-C12环烷基、取代或未取代的3-12元杂环烷基、取代或未取代的C1-C12烷氧基、取代或未取代的C1-C12烷硫基、取代或未取代的C1-C12卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C12卤代烷硫基；
Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C12亚芳基、取代或未取代的3-12元亚杂芳基；
n为0、1、2、3、4、5或6；
所述的杂环烷基、杂芳基、亚杂芳基的杂环上各自独立地具有1、2、3个或4个选自N、O和S的杂原子；
或，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂为Oligomycin A，所述的Oligomycin A的结构如下：
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基；
或，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基；
或，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基；
或，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基；
或，R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8和R9各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R6为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基；
或，R6为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基；
或，R6为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基；
或，R6为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C6-C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基；
或，R6为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C5-C8环烷基、取代或未取代的5-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C6芳基、取代或未取代的C7芳基、取代或未取代的C8芳基、取代或未取代的5-8元杂芳基。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R1、R2、R3、R4、R7和R8各自独立地为氢；
R5为氢、甲基、乙基、丙基、或丁基；
R6为氢、甲基、乙基、丙基、丁基、或
其中，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基；
Z1为和/或
R9为
R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8卤代烷基、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C8卤代烷氧基、C1-C8卤代烷硫基。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷硫基；
或，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷硫基；
或，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、C1-C4卤代烷基；
或，R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氢、三氟甲基。
6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷硫基；
或，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C8卤代环烷基、卤素、硝基、-CN、羟基、巯基、氨基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C3-C8环烷氧基、C3-C8环烷硫基、C1-C4卤代烷氧基、C1-C4卤代烷硫基；
或，R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、丁基。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R9为
其中，R16、R17、R18、R19、R20、R22、R23和R24如权利要求4所述。
8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，丙基为异丙基。
9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C10烷氧基、取代或未取代的C1-C10烷硫基、取代或未取代的C1-C10卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C10卤代烷硫基；
或，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C1-C8烷硫基、取代或未取代的C1-C8卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C8卤代烷硫基；
或，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、取代或未取代的C1-C6烷硫基、取代或未取代的C1-C6卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C6卤代烷硫基；
或，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35和R36各自独立地为氢、卤素、羟基、巯基、氨基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的3-8元杂环烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C1-C4烷硫基、取代或未取代的C1-C4卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C4卤代烷硫基。
10.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R27为取代或未取代的C1-C4卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C4卤代烷硫基；
或，R27为取代或未取代的C1-C3卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C3卤代烷硫基；
或，R27为取代或未取代的C1-C2卤代烷氧基、取代或未取代的C1-C2卤代烷硫基；和/或
R33为取代或未取代的3-10元杂环烷基。
11.如权利要求1所述的用途，其特征在于，R25、R26、R28、R29、R30、R31、R32、R34、R35和R36各自独立地为氢；
R27为三氟甲基-O-、三氟甲基-S-；和/或
R33为
其中，
R37、R38、R39、R40、R41、R42、R43、R44、R45和R46各自独立地为氢、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、甲磺酰基、磺酰基。
12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，R37、R38、R39、R40、R41、R43、R44、R45和R46各自独立地为氢；
R42为甲磺酰基、磺酰基；和/或
n为0、1、2、3、4、5或6。
13.如权利要求1所述的用途，其特征在于，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C10亚芳基、取代或未取代的3-10元亚杂芳基；
或，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6-C8亚芳基、取代或未取代的3-8元亚杂芳基；
或，Z2和Z3各自独立地为取代或未取代的C6亚芳基、取代或未取代的C7亚芳基、取代或未取代的C8亚芳基、取代或未取代的3元亚杂芳基、取代或未取代的4元亚杂芳基、取代或未取代的5元亚杂芳基、取代或未取代的6元亚杂芳基、取代或未取代的7元亚杂芳基、取代或未取代的8元亚杂芳基、取代或未取代的9元亚杂芳基、取代或未取代的10元亚杂芳基；
或，Z2和Z3各自独立地为亚苯基、取代或未取代的亚恶二唑基、取代或未取代的亚三氮唑基；
或，Z2和Z3各自独立地为
其中，R47为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基。
14.如权利要求13所述的用途，其特征在于，R47为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基；
或，R47为氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基；
或，R47为氢、C1-C4烷基、C3-C8环烷基；
或，R47为氢、C1-C2烷基、C3-C8环烷基；
或，R47为氢、甲基、乙基、丙基、或丁基。
15.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式II化合物具有如下式II-1结构：
其中，R25、R26、R27、R28、R29、R30、R31、R32、R33、R34、R35、R36、R47和n如权利要求1所述；
R47为氢、C1-C8烷基、C3-C8环烷基。
16.如权利要求1所述的用途，其特征在于，n为0、1、2或3。
17.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
18.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
19.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤为人肿瘤。
20.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物或制剂的剂型为片剂。
21.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的NNMT基因为人NNMT基因。
22.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物或制剂的剂型为注射剂。
23.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物或制剂的剂型为输液剂。
24.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的1μg蛋白中通过NNMT抗体检测不到NNMT蛋白；和/或
所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)<1.0。
25.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的5μg蛋白中通过NNMT抗体检测不到NNMT蛋白。
26.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的10μg蛋白中通过NNMT抗体检测不到NNMT蛋白。
27.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的100μg蛋白中通过NNMT抗体检测不到NNMT蛋白。
28.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达的肿瘤是指从该肿瘤中提取的1000μg蛋白中通过NNMT抗体检测不到NNMT蛋白。
29.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.7。
30.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.6。
31.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.5。
32.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.4。
33.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.3。
34.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.2。
35.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.1。
36.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.05。
37.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.01。
38.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.005。
39.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.001。
40.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤≤0.0001。
41.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.00001。
42.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.000001。
43.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)≤0.0000001。
44.如权利要求24和29-43任一项所述的用途，其特征在于，所述的同一细胞是指NNMT基因正常表达的同一类肿瘤细胞；
所述的同一细胞是指同种类但NNMT基因正常表达的细胞；
所述的正常细胞是指NNMT基因正常表达的正常组织细胞；
E0为NNMT基因正常表达细胞的NNMT基因的表达水平；和/或
所述的NNMT基因正常表达的细胞包括对线粒体氧化磷酸化通路抑制剂不敏感的细胞。
45.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤选自下组：肺癌、肾癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、淋巴癌、白血病、胰腺癌、脑瘤、肝癌、前列腺癌、黑色素癌，或其组合。
46.如权利要求45所述的用途，其特征在于，所述的肺癌选自下组：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、转移性肺癌，或其组合；
所述的结肠癌为结肠腺癌；
所述的直肠癌为直肠腺癌；
所述的结直肠癌为结直肠腺癌；
所述的淋巴癌选自下组：B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴癌、大细胞淋巴癌、组织细胞性淋巴癌，或其组合；
所述的淋巴癌为弥漫大B细胞淋巴瘤；
所述的脑瘤选自下组：胶质母细胞瘤、神经胶质细胞瘤、髓母细胞瘤，或其组合；
所述的肾癌选自下组：肾透明细胞腺癌、转移性肾癌，或其组合；
所述的肾癌的癌细胞为肾癌Wilms细胞；
所述的白血病选自下组：T淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病，或其组合；
所述的前列腺癌选自下组：转移性前列腺癌；
所述的乳腺癌选自下组：乳腺导管癌、转移性乳腺癌，或其组合；和/或
所述的胰腺癌为肝转移胰腺癌。
47.如权利要求46所述的用途，其特征在于，所述的胶质母细胞瘤为多形性胶质母细胞瘤；
所述的T淋巴细胞白血病为急性T淋巴细胞白血病；
所述的髓细胞性白血病为急性髓细胞性白血病；
所述的髓细胞性白血病为AML急性髓细胞性白血病；
所述的髓细胞性白血病为M4级AML急性髓细胞性白血病；
所述的髓细胞性白血病为FAB M4级AML急性髓细胞性白血病
所述的转移性前列腺癌选自下组：脑转移前列腺癌、骨转移前列腺癌、或其组合；
所述的乳腺导管癌为原发性乳腺导管癌；和/或
所述的乳腺导管癌为3级原发性乳腺导管癌。
48.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的表达为mRNA或蛋白表达。
49.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物或制剂为药物组合物或药物制剂。
50.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物或制剂还包括药学上可接受的载体。
51.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述的组合物或制剂的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂；和/或
所述的组合物或制剂的剂型为口服制剂、外用制剂或注射制剂。
52.一种检测试剂盒的用途，其特征在于，用于制备一伴随诊断试剂盒，所述伴随诊断试剂盒用于判断肿瘤患者是否适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗；
所述的检测试剂盒包括：
(i)用于检测NNMT基因表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平的检测试剂；
所述的伴随诊断试剂盒还包括说明书或标签，所述的说明书或标签记载：
当肿瘤患者的肿瘤细胞中NNMT基因低表达或未表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，则该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗；和/或
当肿瘤患者的肿瘤细胞中NNMT基因高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
53.一种装置或系统，所述的装置或系统包括：
(i)检测模块，所述的检测模块用于检测NNMT基因表达水平、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平；
(ii)输出模块，所述的输出模块包括输出以下信息：当肿瘤患者的肿瘤细胞中NNMT基因低表达或未表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高，则该肿瘤患者适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗；和/或
当肿瘤患者的肿瘤细胞中NNMT基因高表达、NNMT基因核苷酸位点甲基化水平低、和/或NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平低，则该肿瘤患者不适合采用线粒体氧化磷酸化通路抑制剂进行预防和/或治疗。
54.如权利要求52所述的用途、和/或如权利要求53所述的装置或系统，其特征在于，
所述NNMT基因低表达或未表达是指肿瘤细胞的NNMT基因的表达E1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因的表达E0的比值(E1/E0)<1.0；
所述NNMT基因核苷酸位点甲基化水平高是指肿瘤细胞的NNMT基因核苷酸位点甲基化水平L1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因核苷酸位点甲基化水平L0的比值(L1/L0)>1.0；和/或
所述NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平高是指肿瘤细胞的NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平W1与同一细胞或正常细胞中NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平W0的比值(W1/W0)>1.0。
55.如权利要求54所述的用途、或装置或系统，其特征在于，所述的同一细胞是指NNMT基因正常表达的同一类肿瘤细胞；
所述的同一细胞是指NNMT基因核苷酸位点甲基化水平为正常水平的同一类肿瘤细胞；和/或
所述的同一细胞是指NNMT基因区DNA CpG位点甲基化水平为正常水平的同一类肿瘤细胞。
56.如权利要求52所述的用途、和/或如权利要求53所述的装置或系统，其特征在于，所述的肿瘤如权利要求45-47任一项所述的肿瘤。
57.如权利要求52所述的用途、和/或如权利要求53所述的装置或系统，其特征在于，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂如权利要求1-18任一项所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂。
58.如权利要求52所述的用途、和/或如权利要求53所述的装置或系统，其特征在于，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
59.如权利要求52所述的用途、和/或如权利要求53所述的装置或系统，其特征在于，所述的线粒体氧化磷酸化通路抑制剂选自下组：
CN202180006008.7A 2020-09-27 2021-09-27 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物 Active CN114630663B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011034567.2A CN114272236A (zh) 2020-09-27 2020-09-27 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物
CN2020110345672 2020-09-27
PCT/CN2021/121088 WO2022063311A1 (zh) 2020-09-27 2021-09-27 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114630663A CN114630663A (zh) 2022-06-14
CN114630663B true CN114630663B (zh) 2024-07-26

Family

ID=80844980

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011034567.2A Pending CN114272236A (zh) 2020-09-27 2020-09-27 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物
CN202180006008.7A Active CN114630663B (zh) 2020-09-27 2021-09-27 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011034567.2A Pending CN114272236A (zh) 2020-09-27 2020-09-27 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20230355647A1 (zh)
EP (1) EP4218752A4 (zh)
JP (1) JP2023544226A (zh)
KR (1) KR20230078715A (zh)
CN (2) CN114272236A (zh)
CA (1) CA3228855A1 (zh)
WO (1) WO2022063311A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114432307A (zh) * 2020-11-06 2022-05-06 南京施江医药科技有限公司 黄连碱类药物在治疗肿瘤中的应用
CN115721655A (zh) * 2021-08-27 2023-03-03 南京施江医药科技有限公司 四环素类药物在治疗肿瘤中的应用
WO2023174381A1 (zh) * 2022-03-16 2023-09-21 南京施江医药科技有限公司 一种含氮杂环类化合物及其用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106248946A (zh) * 2016-08-19 2016-12-21 浙江大学 一种酶联免疫检测试剂盒及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180044617A (ko) * 2016-10-24 2018-05-03 아주대학교산학협력단 Uhrf1 및 dnmt1을 포함하는 세포 노화 진단용 바이오마커 조성물
US11401243B2 (en) * 2017-03-30 2022-08-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Quinoline derived small molecule inhibitors of nicotinamide N-methyltransferase (NNMT) and uses thereof
EP3870104A4 (en) * 2018-10-26 2022-11-23 Mayo Foundation for Medical Education and Research METHODS AND SUBSTANCES FOR THE TREATMENT OF CANCER
CN114432307A (zh) * 2020-11-06 2022-05-06 南京施江医药科技有限公司 黄连碱类药物在治疗肿瘤中的应用
CN114644626A (zh) * 2020-12-18 2022-06-21 南京施江医药科技有限公司 一种苯环类化合物及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106248946A (zh) * 2016-08-19 2016-12-21 浙江大学 一种酶联免疫检测试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
David B Ramsden等.Nicotinamide N-Methyltransferase in Health and Cancer.International Journal of Tryptophan Research.2017,第10卷第1-19页，尤其是第10页左栏第1段、右栏最后一段. *
Yu’e Liu等.Mitochondria as A Target in Cancer Treatment.MedComm.2020,第129-139页，尤其是第129页左栏第1段、右栏第1段、第130页左栏第2段、右栏第1段、第134页Table 1、第135页右栏第1段、第136页图3. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114272236A (zh) 2022-04-05
WO2022063311A1 (zh) 2022-03-31
KR20230078715A (ko) 2023-06-02
EP4218752A1 (en) 2023-08-02
CA3228855A1 (en) 2022-03-31
CN114630663A (zh) 2022-06-14
JP2023544226A (ja) 2023-10-20
EP4218752A4 (en) 2024-04-10
US20230355647A1 (en) 2023-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114630663B (zh) 用于判断线粒体氧化磷酸化通路抑制剂抗癌效果的标志物
EP4265249A1 (en) Application of isoquinoline compound in tumor treatment
US20240124445A1 (en) Benzene ring compound and use thereof
EP3020828A1 (en) Method of predicting response of cancer to treatment
WO2023025011A1 (zh) 酰肼类化合物在治疗肿瘤中的应用
WO2023169567A1 (zh) 四环类化合物在治疗肿瘤中的应用
WO2023025146A1 (zh) 四环素类化合物在治疗肿瘤中的应用
WO2023020539A1 (zh) 苯甲酰苯胺类化合物在治疗肿瘤中的应用
US20220184195A1 (en) Inhibition of histone methyl transferases to treat cancer
WO2023025142A1 (zh) 吡咯类化合物在治疗肿瘤中的应用
WO2023020561A1 (zh) 苯并异喹啉二酮类化合物在治疗肿瘤中的应用
WO2023174377A1 (zh) 一种四环类化合物及其用途
CN115960018B (zh) 一种egfr抑制剂、组合物及其应用
Zhang et al. Glucose transporter 3 performs a critical role in mTOR-mediated oncogenic glycolysis and tumorigenesis Retraction in/ol/10/5/3332
Walton Targeting epigenetic regulation in clear cell renal cell carcinoma reveals PRMT1 as a novel target
Piscopo Effects of the isoprenoid derivative N6-benzyladenosine in cancer progression
WO2023141648A1 (en) 2-fluoroethyl procarbazine compounds
CN115369163A (zh) Ryr2及其下调剂在治疗转移性结直肠癌中的应用
McCall Molecular Mechanisms Regulating MYC and PGC1β Expression in Colon Cancer
Georgiadis Studies on the repair and conformation of DNA containing O6-alkylguanine and O4-alkylthymine

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Country or region after: China

Address after: 200333, Room 245, Building 147, No. 500 Zhennan Road, Putuo District, Shanghai

Applicant after: Shanghai Shijiang Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: Room 02, 13th Floor, Building A, Phase I, Yangzi Science and Technology Innovation Center, No. 211 Pubin Road, Jiangbei New District, Nanjing City, Jiangsu Province

Applicant before: Nanjing Shijiang Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.

Country or region before: China

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant