CN114617882A - 苦马豆素在抗缺氧活性中的应用 - Google Patents

苦马豆素在抗缺氧活性中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开苦马豆素在制备治疗抗缺氧活性或其相关障碍病症的药物中的应用。本发明出人预料地发现，苦马豆素具有良好的抗缺氧作用，能够减缓缺氧造成的机体损伤，如减轻脑水肿与肺水肿情况。苦马豆素还可以通过改变海马组织ChAT和AChE的活性，影响脑皮层组织中乙酰胆碱含量，进而对脑组织因缺氧性引起的认知功能障碍起到一定程度的保护作用。

Description

苦马豆素在抗缺氧活性中的应用
技术领域
本发明属于药用用途领域，具体涉及苦马豆素在抗缺氧活性中的应用。
背景技术
机体的运行与氧气紧密相关，大脑、中枢神经系统以及新陈代谢过程的正常运行离不开氧气，并且要求苛刻，大脑正常运行时的耗氧量相对巨大，但脑组织对低氧环境的适应力极差。缺氧相关研究表明，长期或短期处于缺氧环境下都将在一定程度上导致机体大脑、心脏等重要器官的正常功能发生严重障碍，各系统记忆器官的功能产生紊乱，如肺动脉压力升高、机体逐渐出现食欲不振甚至幻听症状、后期甚至会出现右心室衰竭等症状。缺氧环境下由于脑组织供氧不足，使脑组织传导与物质代谢功能受阻，缺氧时间达到2min时会降低机体组织细胞膜内的氧化酶的活性，比如Na+-K+-ATP的酶活性，而一旦机体中出现氧化酶活性被降低的情况，对氧最敏感的脑组织会出现体积增加等非正常现象，同时脑组织周围的脑细胞间隙会发生变窄现象。在此情况下机体继续缺氧则会使脑血管扩张，直接导致脑内血流量增加，流体静压力升高，冗余液体会出现泄漏，形成脑水肿现象，也称HACE。机体一旦缺氧脑组织不进行适应性调节，反而会直接破坏中枢神经系统的正常功能，导致大脑认知能力、机体组织的调节功能和神经心理学健康受损，并引发认知障碍等多种病理发生，甚至会导致大脑认知活动受损严重。
因此，寻找一种具有抗缺氧活性的化合物成为本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
为了改善上述技术问题，本发明提供苦马豆素在制备治疗抗缺氧活性或其相关障碍病症的药物中的应用。
其中，苦马豆素(又名八倾吲嗪三醇，分子式为C8H15NO3)，具有如式I所示的结构：
Figure BDA0003558348360000021
根据本发明的应用，所述苦马豆素能够延长对象在缺氧环境下的抗缺氧存活时间。例如，所述缺氧环境可以由密闭环境造成或由中毒导致，比如亚硝酸中毒。
根据本发明的应用，所述相关障碍病症包括但不限于脑水肿、肺水肿、缺氧性认知功能障碍等。
根据本发明的应用，所述苦马豆素能够降低缺氧性导致的脑水含量。
根据本发明的应用，所述苦马豆素能够降低缺氧性导致的肺水含量。
本发明提供所述苦马豆素在制备治疗缺氧性认知功能障碍药物中的应用。
根据本发明的应用，在缺氧环境下，所述苦马豆素能够相对提高SOD(超氧化物歧化酶，别名肝蛋白)降低MDA(丙二醛)含量。
根据本发明的应用，在缺氧环境下，所述苦马豆素能够相对降低AchE(乙酰胆碱酯酶)活力，提高ChAT(乙酰胆碱转移酶)活力。
根据本发明的应用，在缺氧环境下，所述苦马豆素能够相对提高乙酰胆碱含量。
本发明还提供一种含有苦马豆素的药物组合物或药物制剂。优选地，所述药物组合物或药物制剂用于治疗抗缺氧活性或其相关障碍病症。
有益效果
本发明出人预料地发现，苦马豆素具有良好的抗缺氧作用，能够减缓缺氧造成的机体损伤，如减轻脑水肿与肺水肿情况。苦马豆素还可以通过改变海马组织ChAT和AChE的活性，影响脑皮层组织中乙酰胆碱含量，进而对脑组织因缺氧性引起的认知功能障碍起到一定程度的保护作用。
附图说明
图1为苦马豆素对缺氧小鼠脑含水量的影响(
Figure BDA0003558348360000031
n＝12)；
与空白对照组相比较：*P<0.05,**P<0.01；与人参皂苷阳性对照组比较：#P<0.05,##P<0.01；
G：人参皂苷组，SW1-SW5分别代表苦马豆素1组-5组。
图2为苦马豆素对缺氧小鼠肺含水量的影响(
Figure BDA0003558348360000032
n＝12)；
与空白对照组相比较：*P<0.05,**P<0.01；与人参皂苷阳性对照组比较：#P<0.05,##P<0.01；
G：人参皂苷组，SW1-SW5分别代表苦马豆素1组-5组。
图3为苦马豆素对缺氧小鼠海马组织中SOD活力的影响(n＝12,mean±SD)；
与常压常氧组比较:*P<0.05，**P<0.01；与缺氧组比较:#P<0.05，##P<0.01；SW代表苦马豆素。
图4为苦马豆素对缺氧小鼠海马组织中MDA含量的影响(n＝12,mean±SD)；
与常压常氧组比较:*P<0.05，**P<0.01；与缺氧组比较:#P<0.05，##P<0.01；SW代表苦马豆素。
图5为苦马豆素对缺氧小鼠海马组织中AchE活力的影响(n＝12,mean±SD)；
与常压常氧组比较:*P<0.05，**P<0.01；与缺氧组比较:#P<0.05，##P<0.01；SW代表苦马豆素。
图6为苦马豆素对缺氧小鼠海马组织中ChAT活力的影响(n＝12,mean±SD)注：与常压常氧组比较:*P<0.05，**P<0.01；与缺氧组比较:#P<0.05，##P<0.01；SW代表苦马豆素。
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
实施例1
通过模拟小鼠常压密闭抗缺氧和亚硝酸钠缺氧研究，以用于临床治疗缺氧药物人参皂苷为阳性对照，通过观察苦马豆素对缺氧小鼠存活时间的影响，从小鼠整体水平初步评价苦马豆素对小鼠在缺氧环境下的抗缺氧作用，考察苦马豆素的抗缺氧作用。
(一)材料与方法
1.1主要试剂
苦马豆素购于Sigma公司，纯度≥98％；人参皂苷购于山西亚宝药业集团股份有限公司，纯度为≥98％。
1.2实验动物
SPF级KM小鼠共72只，(由湖南斯莱克景达实验动物有限公司出品，具有许可证号为：SCXK(湘)2019-0004，于2020-09-17质量检测)。
1.3动物分组与处理
将饲养的小鼠随机分为人参皂苷阳性对照组(G)；生理盐水空白对照组，苦马豆素浓度为0mg/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg等6组，每组处理12只KM小鼠。常温条件下常规方式饲养，适应性喂养5d后用于研究，连续灌胃注射7d，每天1次，每只小鼠的灌胃剂量为0.1ml/10g。
(二)结论
2.1常压密闭缺氧实验分析
对各组中的一部分小鼠进行常压密闭缺氧实验，并整理出各小鼠的缺氧模型造模，通过抗缺氧时间检测分析其在缺氧状态下的存活时间(表1)，发现与未给予任何药物治疗的对照组小鼠相比较，经苦马豆素浓度为SW2和SW3处理后的小鼠，会显著增加在缺氧状态下的存活时间，分别增加了2.93min、9.04min(P<0.01)，相对应的存活率分别增加了10.99％、33.90％(P<0.01)，并且其中SW3浓度组的小鼠存活延长率比人参皂苷阳性对照组显著提高了19.99％(P<0.05)，延长效果明显比人参皂苷阳性对照组更佳，而苦马豆素SW2浓度组的小鼠缺氧存活时间与人参皂苷阳性对照组相比没有显著差异。表明苦马豆素可通过延长小鼠在缺氧环境下的抗缺氧存活时间，具有一定的抗缺氧能力。
表1苦马豆素对常压密闭抗缺氧小鼠存活时间的影响(
Figure BDA0003558348360000051
n＝12)
Figure BDA0003558348360000052
注：与正常对照组相比较：*P<0.05,**P<0.01；与人参皂苷阳性对照组比较：#P<0.05,##P<0.01。
2.2苦马豆素对亚硝酸中毒缺氧小鼠存活时间及死亡率的影响分析
在连续一周对各组小鼠进行灌胃注射后，对各组中的另一部分小鼠进行亚硝酸中毒实验并统计得表2，如表2所示与未给予苦马豆素治疗的正常对照组相比，阳性对照组，SW2苦马豆素组、SW3苦马豆素组的小鼠，在亚硝酸中毒情况下的生存时间均有明显延长，且在苦马豆素组中，SW3组下的小鼠存活时间最长，延长率为48.15％(P<0.01)；与阳性对照组缺氧时间比较，SW3苦马豆素组的存活时间延长率增加了26.96％；表明苦马豆素可以提高亚硝酸中毒缺氧小鼠存活时间。
表3苦马豆素对亚硝酸中毒缺氧小鼠存活时间的影响(
Figure BDA0003558348360000053
n＝12)
Figure BDA0003558348360000054
Figure BDA0003558348360000061
注：与正常对照组相比较：*P<0.05,**P<0.01；与人参皂苷阳性对照组比较：#P<0.05,##P<0.01。
2.3苦马豆素对缺氧小鼠脑含水量、肺含水量的影响分析
将实验后的小鼠进行脑水肿测定和肺水肿测定后发现，与G组(阳性对照组)相比，SW2和SW3组无明显差异。表明苦马豆素能有效降低缺氧性小鼠死亡时的脑含水量(如图1所示)。
SW3与阳性对照组相比，肺含水量降低了20.52％(图2)。表明苦马豆素可以降低小鼠缺氧性导致的脑水肿与肺水肿，在抗缺氧方面具有一定的防治作用。
为初步探讨苦马豆素的抗缺氧耐力作用，本发明模拟了不同的动物缺氧模型，常压密闭抗缺氧实验是通过模拟密闭环境，使动物在该环境下不能直接获得外界氧气，机体发生缺氧现象，进而使机体内的能量代谢等功能发生改变，并给予缺氧动物苦马豆素治疗，观察经苦马豆素暴露处理后动物的存活时间，进而以此来初步评价用于暴露处理的苦马豆素是否具有抗缺氧活性。亚硝酸钠中毒模拟的缺氧模型是由于亚硝酸钠进入到小鼠体内后，便会直接改变血红蛋白输送氧气的正常作业，发生机体缺氧。
在所模拟的两种经典动物缺氧模型实验中，从缺氧小鼠行为以及生理反应可以看出，自造模初始到结束，各组小鼠的饮食情况、活动状态、体重等均无显著变化，说明所给予的苦马豆素浓度不会阻碍小鼠的正常生长，可以开启后续研究。
上述实验中常压密闭缺氧研究结果表明，人参皂苷阳性对照组和SW2对小鼠的存活时间延长率相似，但均低于SW3组，说明二者均具有抗缺氧时间，且SW3的抗缺氧时间高于SW3剂量下的人参皂苷阳性对照组。而亚硝酸中毒研究中小鼠的存活时间与延长率结果和常压密闭抗缺氧研究的结果基本一致，小鼠最高存活延长率分别为33.90％和48.15％。因此表明苦马豆素具有延长机体在缺氧状态下存活时间的作用。
在对缺氧小鼠脑含水量与肺含水量的测定实验中，给予苦马豆素治疗的缺氧组小鼠与人参皂苷阳性对照组均可明显降低缺氧性导致的小鼠脑含水量，其中SW3组效果最显著(P<0.05)。表明苦马豆素可以在一定程度上降低脑水肿的发生，减缓缺氧导致的脑组织损伤。
综合苦马豆素对缺氧小鼠的体重变化、存活时间以及脑、肺含水量变化分析，可初步确定，苦马豆素具有抗缺氧作用。
实施例2苦马豆素对缺氧小鼠认知功能障碍的研究
(一)材料
1.1主要试剂
苦马豆素购于Sigma公司，纯度≥98％；
1.2实验动物
SPF级KM小鼠(48只)(来源同1.2)，饲养环境需干净、通风且温度与湿度适宜，雌雄分开饲养，充足的饮水，自由采食，垫料为木屑，适应性饲养5d后，按体重进行随机分组。
(二)方法
2.1动物分组
实验动物分为常压常氧+生理盐水组、缺氧模型组+生理盐水组、缺氧+苦马豆素1.5mg/kg组与缺氧+苦马豆素2.2mg/kg组。每日灌注1次，每次灌注剂量0.1ml/10g，连续14d。
2.2对实验动物的海马组织中的SOD、MDA含量进行测定、以及海马组织中的AchE、ChAT活力进行测定。
(三)结果
缺氧状态下，机体内SOD氧化酶活性发生改变，MDA含量升高。如图3、4所示，缺氧组小鼠海马组织中SOD含量显著要低于常压常氧组(P<0.01)，MDA含量显著高于常压常氧组(P<0.01)；而给予苦马豆素干预治疗后发现，苦马豆素低、高剂量组的SOD含量均显著高于缺氧组(P<0.01)，分别增加了57.61％和34.36％；其对应的MDA含量显著低于缺氧组(P<0.01)，分别降低了38.03％和27.19％。
如图5所示，与常压常氧组相比较，缺氧组以及苦马豆素低、高剂量组小鼠海马组织AchE活力均显著上升(P<0.01)，ChAT活性均显著下降(P<0.01)(图6)，而苦马豆素低、高剂量组的AchE活力要显著低于缺氧组，分别为0.501±0.01、0.591±0.05U/mgprot(P<0.01)，ChAT活力则显著上升，分别为273.51±33.52、205.4±10.33U/g(P<0.01)。表明缺氧小鼠海马组织中乙酰胆碱的含量会减少，而经过苦马豆素干预治疗后，乙酰胆碱的含量会增加。
上述实验发现，缺氧+苦马豆素低剂量组、缺氧+高剂量组与缺氧+生理盐水组相比，小鼠海马组织中ChAT活性上升，AChE活性下降，表明大脑皮层组织中乙酰胆碱含量高于缺氧组。因此，苦马豆素可以通过改变海马组织ChAT和AChE的活性，影响脑皮层组织中乙酰胆碱含量，进而对脑组织因缺氧性引起的认知功能障碍起到一定程度的保护作用。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.苦马豆素在制备治疗抗缺氧活性或其相关障碍病症的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述苦马豆素能够延长对象在缺氧环境下的抗缺氧存活时间。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述缺氧环境由密闭环境造成或由中毒导致。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述相关障碍病症包括但不限于脑水肿、肺水肿、缺氧性认知功能障碍。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述苦马豆素能够降低缺氧性导致的脑水含量。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述苦马豆素能够降低缺氧性导致的肺水含量。
7.苦马豆素在制备治疗缺氧性认知功能障碍药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，在缺氧环境下，所述苦马豆素能够相对提高SOD含量/活力，降低MDA含量。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，在缺氧环境下，所述苦马豆素能够相对降低AchE(乙酰胆碱酯酶)活力，提高ChAT(乙酰胆碱转移酶)活力。
10.一种含有苦马豆素的药物组合物或药物制剂，所述药物组合物或药物制剂用于治疗抗缺氧活性或其相关障碍病症。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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何纤: "苦马豆素对小鼠抗缺氧及认知障碍的影响", 苦马豆素对小鼠抗缺氧及认知障碍的影响, no. 3, pages 26 *

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