CN112773779B - 氨溴索、千金藤和汉防已在治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症中的应用 - Google Patents

氨溴索、千金藤和汉防已在治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及三种小分子，包括氨溴索、千金藤、汉防已在制备治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的药物中的应用。本发明通过大量的细胞实验得出氨溴索、千金藤、汉防已能有效治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症，包括升高其酶活性、减少底物贮积。与其他治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的药物相比，更为安全有效，且由于是小分子药物，能透过血脑屏障。

Description

氨溴索、千金藤和汉防已在治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症中的 应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地说，涉及三种小分子，包括氨溴索、千金藤和汉防已在治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症中的应用。
背景技术
酸性鞘磷脂酶缺乏症是酸性鞘磷脂酶基因突变导致溶酶体内酸性鞘磷脂酶活性缺陷，其底物鞘磷脂不能被降解，贮积在肝、脾、肺等，造成相应器官功能异常的一种溶酶体贮积病。临床表现为肝脾增大、肝功能异常，逐渐进展到肝硬化、肝功能衰竭，严重缩短了患者寿命。
目前，酸性鞘磷脂酶缺乏症仅能对症治疗，比如肝脏移植，脾切除，辅助呼吸，造血干细胞移植等。然而肝脏移植和造血干细胞移植治疗,对减少大脑神经鞘磷脂贮积的效果有限，无法阻止神经系统症状恶化，且可能存在严重的移植并发症。酶替代治疗(如专利文献CN105999238A公开了一种用于治疗酸性鞘磷脂酶缺乏的剂量递增酶替代疗法)药物目前正在进行临床试验,酶替代治疗需要每两周静脉输液，终身治疗，价格昂贵，且无法通过血脑屏障，对神经系统症状没有治疗效果，对呼吸系统症状有限。
因此，寻找安全有效的防治措施成为临床上亟需解决的问题，也是临床上需迫切解决的一大难点。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供三种小分子，包括氨溴索、千金藤和汉防已在治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症中的应用。本发明首次应用氨溴索于酸性鞘磷脂酶缺乏症的治疗，丰富了ASMD的治疗方案，为临床治疗研究提供了进一步的支持。
本发明通过大量的细胞实验得出氨溴索、千金藤、汉防已能有效治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症，包括升高其酶活性、减少底物贮积。与其他治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的药物相比，更为安全有效，且由于是小分子药物，能透过血脑屏障。
活性物质的用途，其特征在于：
所述活性物质选自如下A-C中的一种或几种：
A.氨溴索，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、消旋体、水合物、溶剂化物、代谢产物以及药学上可接受的盐或前药或载体；
B.千金藤，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、消旋体、水合物、溶剂化物、代谢产物以及药学上可接受的盐或前药或载体；
C.汉防已，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、消旋体、水合物、溶剂化物、代谢产物以及药学上可接受的盐或前药或载体；
所述用途包含如下I-II用途中的至少一种：
I.用于制备能够提高酸性鞘磷脂酶的活性的药物；
II.用于制备能够降低酸性鞘磷脂酶缺乏症异常代谢底物含量的药物。
进一步地，本发明提供的活性物质的用途，其特征还在于：
所述用途为用于制备治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的药物。
进一步地，本发明提供的活性物质的用途，其特征还在于：
所述药物，还包括药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
进一步地，本发明提供的活性物质的用途，其特征还在于：
所述活性物质的有效浓度为0.1-1000μmol/L。
进一步地，本发明提供的活性物质的用途，其特征还在于：
所述活性物质的有效浓度为0.1-60μmol/L。
进一步地，本发明提供的活性物质的用途，其特征还在于：
所述药物的剂型为经胃肠道给药剂型，以及经胃肠道以外给药途径剂型。
进一步地，本发明提供的活性物质的用途，其特征还在于：
所述药物的给药剂型选自注射给药剂型、呼吸道给药剂型、滴鼻剂、皮肤给药剂型、黏膜给药剂型、腔道给药剂型、自散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂。
另外，本发明提供了一种细胞模型，其特征在于：包含酸性鞘磷脂酶缺乏症症状的B淋巴细胞。
进一步地，本发明提供的细胞模型的构建方法，其特征在于：
以酸性鞘磷脂酶缺乏症患者外周血为原材，加入淋巴细胞分离液分离获得淋巴细胞后，加入含EB病毒和环孢霉素培养基培养，获得酸性鞘磷脂酶缺乏症患者的B淋巴细胞系。
本发明的作用和效果：
1)氨溴索可作为分子伴侣提高酸性鞘磷脂酶的活性，而这一点对于治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症起着至关重要的作用。
2)氨溴索、千金藤和汉防已能降低酸性鞘磷脂酶缺乏症异常代谢底物含量。
基于此，发明人将氨溴索、千金藤和汉防已应用于治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的治疗。
附图说明
图1为各组别酶活性对比图；
图2为经DMSO处理和氨溴索处理后的对比图；
图3为对照组的电镜图；
图4为ASMD组的电镜图；
图5为氨溴索治疗组的电镜图；
图6为千金藤治疗组的电镜图；
图7为汉防己治疗组电镜图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
将氨溴索、千金藤和汉防已粉末制成胶囊、片剂、或者溶液，即为治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的药物。
效果验证：氨溴索、千金藤和汉防已在治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症中的效果。
1.实验细胞模型建立
以正常人及酸性鞘磷脂酶缺乏症患儿外周血为原材，加入淋巴细胞分离液分离获得淋巴细胞，加入含EB病毒和环孢霉素培养基培养，获得正常人、酸性鞘磷脂酶缺乏症患儿的B淋巴细胞系。建立细胞模型后，使用人工荧光底物方法检测正常人和酸性鞘磷脂酶缺乏症患者细胞的酸性鞘磷脂酶活性，活性较正常人显著降低以验证造模成功。
2.处理方法
对照组：正常人B淋巴细胞正常培养，未做任何处理；
ASMD造模组：酸性鞘磷脂酶缺乏症患者B淋巴细胞正常培养，未做任何处理；
ASMD造模组+DMSO处理组：酸性鞘磷脂酶缺乏症患者B淋巴细胞正常培养，同时给与DMSO溶液治疗，给药5天，每天给药1次，每次给药量为3％DMSO；
ASMD造模组+氨溴索(将氨溴索溶于DMSO溶液，氨溴索浓度为10μmol/L、 30μmol/L、60μmol/L)治疗组：酸性鞘磷脂酶缺乏症患者B淋巴细胞正常培养，同时给予与ASMD造模组+DMSO治疗组等量等疗程的氨溴索治疗。
ASMD造模组+千金藤(将千金藤溶于DMSO溶液，千金藤浓度为0.1μmol/L、 0.5μmol/L、10μmol/L)治疗组：酸性鞘磷脂酶缺乏症患者B淋巴细胞正常培养，同时给予与ASMD造模组+DMSO治疗组等量等疗程的千金藤治疗。
ASMD造模组+汉防己(将汉防己溶于DMSO溶液，汉防己浓度为0.1μmol/L、 0.5μmol/L、10μmol/L)治疗组：酸性鞘磷脂酶缺乏症患者B淋巴细胞正常培养，同时给予与ASMD造模组+DMSO治疗组等量等疗程的汉防己治疗。
3.结果
3.1酶活性：
对照组：正常人酶活性高；
ASMD造模组：如图1所示酸性鞘磷脂酶缺乏症患者细胞酶活性较正常对照细胞显著降低；
ASMD造模组+DMSO处理组：与单纯造模组无统计学差异；
ASMD造模组+氨溴索治疗组：如图2所示，采用浓度为30μmol/L的氨溴索处理后，细胞酶活性均较ASMD造模组+DMSO处理组显著增高且有统计学差异，酶活性增高约3倍(p＜0.05)。
3.2鞘磷脂去乙酰化产物SPC含量：
对照组：正常人SPC含量低，约为2ng/ml；
ASMD造模组：酸性鞘磷脂酶缺乏症患者细胞SPC含量较正常对照细胞显著增加,约为30ng/ml；
ASMD造模组+DMSO处理组：与单纯造模组无统计学差异；
ASMD造模组+氨溴索治疗组：采用浓度为30μmol/L的氨溴索处理后，细胞SPC含量均较ASMD造模组+DMSO处理组显著降低且有统计学差异,降低幅度为 60％(p＜0.05)。
ASMD造模组+千金藤治疗组：采用浓度为0.5μmol/L的千金藤处理后，细胞SPC含量均较ASMD造模组+DMSO处理组显著降低且有统计学差异,降低幅度为 80％(p＜0.05)。
ASMD造模组+汉防己治疗组：采用浓度为0.5μmol/L的汉防己处理后，细胞SPC含量均较ASMD造模组+DMSO处理组显著降低且有统计学差异,降低幅度为 70％(p＜0.05)。
3.3电镜下结果：
对照组：如图3所示，正常人细胞状态正常，可见细胞胞体成圆形，由胞体伸出若干小的突起；细胞核大，形态不规则；胞浆内含有内质网及线粒体，可见极少量点状、圆形的线粒体；
ASMD造模组：如图4所示，电镜下可见胞浆内含有异常丰富的内质网及线粒体,部分肿胀的线粒体内部可见断裂的线粒体嵴，可见部分空泡，点状、圆形致密颗粒即溶酶体较正常人明显增多；
ASMD造模组+氨溴索治疗组：与ASMD造模组相比，如图5所示，采用浓度为30μmol/L的氨溴索治疗后胞浆内线粒体较前完整，肿胀程度轻，溶酶体总数量减少。
ASMD造模组+千金藤治疗组：与ASMD造模组相比，如图6所示，采用浓度为0.5μmol/L的千金藤治疗后胞浆内线粒体较前完整，肿胀程度轻，溶酶体总数量减少。
ASMD造模组+汉防己治疗组：与ASMD造模组相比，如图7所示，采用浓度为30μmol/L的汉防己治疗后胞浆内胞浆内线粒体较前完整，肿胀程度轻，溶酶体总数量减少。
由此，与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明通过大量的细胞实验得出结论——氨溴索、千金藤和汉防已能有效治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症，包括升高其酶活性、减少底物贮积、恢复受损的线粒体功能。
(2)氨溴索、千金藤和汉防已作广泛应用于呼吸内科，是治疗肺病的常用药，从临床应用的角度来看，与其他治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症的药物相比，更为安全有效，且由于是小分子药物，能透过血脑屏障，对神经系统症状有效。

Claims (5)

1.活性物质在制备治疗酸性鞘磷脂酶缺乏症药物中的应用，其特征在于：所述活性物质选自如下A-B中的一种或几种：
A.千金藤；
B.汉防已。
2.如权利要求1所述的活性物质的用途，其特征在于：
所述药物，还包括药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
3.如权利要求1所述的活性物质的用途，其特征在于：
所述活性物质的有效浓度为0.1-1000μmol/L。
4.如权利要求1所述的活性物质的用途，其特征在于：
所述活性物质的有效浓度为0.1-60μmol/L。
5.如权利要求1所述的活性物质的用途，其特征在于：
所述药物的剂型为经胃肠道给药剂型，以及经胃肠道以外给药途径剂型。
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