CN114591979A - 一种烟草泛素结合酶NtE2基因及其应用 - Google Patents

一种烟草泛素结合酶NtE2基因及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种烟草泛素结合酶NtE2基因及其在调控烟草叶片含氮组分含量中的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明提供的烟草泛素结合酶相关的基因NtE2，利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除NtE2基因的基因编辑植株；NtE2基因敲除编辑植株叶片中总植物碱和总氮含量显著降低，为烟草含氮组分含量调控提供遗传材料和参考借鉴。

Description

一种烟草泛素结合酶NtE2基因及其应用
技术领域
本发明涉及一种烟草泛素结合酶NtE2基因及其应用，属于植物基因工程技术领域。
背景技术
泛素蛋白酶体途径（Ubiquitin proteasome pathway, UPP）广泛存在于真核生物中，是真核生物体内蛋白质的重要降解机制。该途径主要由泛素Ub（Ubiquitin）、泛素活化酶E1（Ubiquitin activating enzyme）、泛素结合酶E2（Ubiquitin conjugating enzyme）、泛素连接酶E2（Ubiquitin ligases enzyme）、26S蛋白酶体和去泛素化酶DUB（Deubiquitinating enzyme）构成。研究表明，泛素蛋白酶体途径参与细胞功能、细胞周期运转、激素信号转导、生物和非生物胁迫等多种过程。泛素结合酶E2能够结合泛素并将泛素转移给E3，是泛素化的关键酶之一。
烤烟烟叶的总氮、蛋白质等含氮组分含量与主要挥发性香气物质含量之间存在一定的内在联系，而挥发性香气物质是影响烟叶香气质和香气量的重要组分，其含量高低在一定程度上可以反映烟叶的香气质量。因此，烟叶含氮组分的调控对改善烟叶香吃味品质具有重要作用。
因此，通过研究烤烟烟叶中含氮组分的相关基因，有望培育出含氮组分改变的烟草品种；为进一步阐明烟草含氮组分调控机理提供理论依据，为培育含氮组分改变的烟草品种提供新的遗传材料。
发明内容
本发明为了解决现有技术的不足，提供一种烟草泛素结合酶NtE2基因。该基因能够调控烟草叶片含氮组分的含量，可为烟草叶片含氮组分含量调控提供遗传材料和借鉴参考。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种烟草泛素结合酶NtE2基因，其碱基序例如SEQ ID NO:1所示：
ATGGCATCCAGGAGAATTCTCAAGGAGCTAAGGGATTTGCAAAGAGACCCTCCCACTTCATGTAGTGCAGGTACACTAAATATTAGTAACTAGTAGTATTTGCCAAGTGCAAACTAGAAGTTCTTGCCAAATTTAAAGATAGTTTCAGTTTTCAAGATTTTTGTAAATTTTTCAGGTCCAGTAGCTCAGGATATGTTCCATTGGCAAGCAACTATAATTGGTCCAAATGACAGCCCTTATGCTGGTGGTGTTTTCCAAGTCACCATCCATTTCCCCCCTGATTACCCTTTCAAACCTCCCAAGGTATGGTTTTCAACTAATCTCACACAATCATCTTTTTCCCCTCAAAGAAAGAAAAGAAGGGGAAATAACAAATGACTTGATGATGTTAAGTTCCATATATATATTGGCAGGTGGCTTTTAGGACAAGAGTTTTCCATCCAAATATAAACAATAATGGAAATATTTGTTTGGACATTCTTAAGGATCAATGGAGTCCTGCCCTCACCATATCCAAGGTACTGTTGGTTTCTACCTCTTTCCCCTCCACTCACATATATATTGTACCAATGATTTACTACATGAAACAAAAGGGTGAAATGGTCACTGACAATATAAAAGATTCATGTCACTTAAAAGATGACAATGTAATTATCCATAATAAGTGGAGCTAGTTACATCGGAAATTAGGCAAAGTGTTAAAACGGGTTAAATTGTACTGATAAAGTAAAAAATATTTAGATTATCAATATATATAAGCTAAATTCATTCTTTAATTACCGAAATTTAAACAAGCTTTCCCATAGTCTTGAGCATAATACAGTATAAGCCTTTATATTTCTCCCATAGTCTTGAGCATAATACAGTATAAGCCTTTATATTTCTACCAATTTTTGATGTATTTGCTGTTGGTTTTGTTGATGCAGGTTTTGCTCTCCATATGTTCATTGCTAACAGATCCAAATCCAGATGATCCATTGGTTCCAGAGATTGCTCATATGTGCAAGACTGATAGGAACAAGTATGAATCAATGGCTCGTAGTTGGACTCAAAAATATGCTATGAACTGA。
本发明上述技术方案中，烟草泛素结合酶NtE2基因，包括1070 bp个碱基，该基因来源于烟草（Nicotiana tabacum，命名为NtE2）。
本发明的另一个目的是提供上述烟草泛素结合酶NtE2基因编码的蛋白；该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，包括148个氨基酸。
SEQ ID NO.2：
MASRRILKELRDLQRDPPTSCSAGPVAQDMFHWQATIIGPNDSPYAGGVFQVTIHFPPDYPFKPPKVAFRTRVFHPNINNNGNICLDILKDQWSPALTISKVLLSICSLLTDPNPDDPLVPEIAHMCKTDRNKYESMARSWTQKYAMN。
采用烟草NtE2基因编码的氨基酸序列及其近缘序列构建系统发育树，结果显示烟草NtE2基因编码的氨基酸序列与烟草和辣椒的泛素结合酶E2的亲缘关系较近。
本发明的另一个目的是提供烟草泛素结合酶NtE2基因在烟草叶片含氮组分含量调控中的应用。
作为上述技术方案的优选，所述的含氮组分包括总植物碱和总氮。
本发明把目的基因从红花大金元中提取出来，设计sgRNA引物并构建质粒，又转化到红花大金元中，得到基因编辑的植株；该基因编辑植株，降低了NtE2基因的表达，可调控烟草叶片中含氮组分的含量，总植物碱和总氮含量显著降低。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1、本发明通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了含NtE2基因的sgRNA的CRISPR/Cas9编辑载体，转化到红花大金元中后得到基因编辑的植株，并通过分子检测鉴定，为NtE2基因敲除的烟草植株。
2、本发明利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除NtE2基因获得了叶片中总植物碱和总氮含量显著降低的编辑烟草素材，这为进一步阐明烟草含氮组分调控机理提供了理论依据，为培育含氮组分改变的烟草品种提供了新的遗传材料。
附图说明
图1为NtE2基因所编码氨基酸的系统发育树；
图2为NtE2基因编辑材料叶片中总植物碱和总氮含量降低示意图。
具体实施方式
以下通过实施例来详细说明本发明的技术方案，以下的实施例仅是示例性的，仅能用来解释和说明本发明的技术方案，而不能解释为是对本发明技术方案的限制。
在本申请的各实施例中，没有注明具体技术或条件者，按照本领域内现有技术或条件进行，所使用的材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
本发明除非另有说明，否则百分号为体积百分数，比例为体积比。
本申请中所使用的烟草品种为红花大金元，一种商品化烟草品种。
实施例1
本实施例主要就烟草泛素结合酶相关的基因NtE2的获得过程，简要介绍如下。
以栽培种烟草红花大金元叶片为样品，利用RNA提取试剂盒提取烟草叶片总RNA，反转录为cDNA备用：
按照植物RNA提取试剂盒说明书提取烟草总RNA。
1μg从叶片中提取总RNA用于反转录，转录体系如下：
Total RNA 1μg
Oligo(dT) (10μM) 1.5μL
ddH2O up to 15μL
将上述体系混匀后置于PCR中，70℃保温5min，去除后立即置于冰上5min，之后向体系中加入以下试剂：
M-MLV Buffer（5X） 5μL
M-MLV逆转录酶 0.5μL
RNase 抑制剂 0.5μL
dNTP Mixture 4μL
ddH2O up to 25μL
上述体系放入PCR仪中，42℃ 65min，65℃ 10min，4℃保温，然后置于-20℃冰箱中保存使用。
通过同源比对的方法，参考拟南芥基因的序列及已知烟草部分基因序列，设计扩增引物序列如下：
F：5'- TTTGAATTAAGTGGTGGT -3'，（SEQ ID No.3）
R：5'- TTCTTGATGTCTTCAGACT -3'；（SEQ ID No.4）
以上述所制备cDNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增：
扩增体系（50μL）：
cDNA 0.5μL
5×Reaction Buffer 10μL
上游引物（10mmol/L） 2.5μL
下游引物（10mmol/L） 2.5μL
dNTP (10 mM) 5μL
Phusion DNA Polymerase 0.5μL
ddH2O up to 50μL
混匀离心后进行PCR 扩增，PCR反应条件为：95℃ 10sec，52℃ 30sec，72℃2.5min，共35个循环；72℃ 10min；12℃ Hold。
对扩增产物进行提纯后测序，获得烟草泛素结合酶相关的基因NtE2序列，其碱基序列如SEQ ID No.1所示，共包括1070 bp个碱基。对该基因序列进行翻译后，其所编码蛋白序列如SEQ ID No.2所示，共包括148个氨基酸。
实施例2
利用实施例1中所获得烟草泛素结合酶相关的基因NtE2，本发明进一步构建了CRISPR/Cas9载体，以及利用叶盘法转化获得基因编辑植株。
选择NtE2基因中较特异的23nt核苷酸序列（SEQ ID No.5）为CRISPR/Cas9的引导序列，并将该序列片段与CRISPR/Cas9载体（由西南大学提供）进行连接、转化和PCR扩增检测，PCR阳性克隆送测序公司进行测序确认，最后得到CRISPR/Cas9-NtE2编辑载体。
利用上一步所构建的CRISPR/Cas9-NtE2编辑载体质粒，以红花大金元为例，进行遗传转化和组培，以获得烟草泛素结合酶相关的基因NtE2发生敲除编辑的植株，相关实验过程简要介绍如下。
将烟草种子表面消毒后点种至MS培养基上，待长到4片子叶（15-20 d），移入含MS固体培养基的培养瓶中，于25±1℃、光照强度30-50 μmol/(m2·s)，光照时间为16h/d条件继续培养35-40 d，备用。
取出-80℃保存的LBA4404电转化感受态农杆菌细胞，置于冰上冻融。待感受态刚刚解冻时，加入CRISPR/Cas9-NtE2编辑载体质粒2μL，混匀，置于冰上。后将混匀的感受态转移至预冷的电转杯中，将电转杯置于电转仪中进行转化，转化完成后加入1mL的YEB液体培养基与转化液进行混合，后置于摇床28℃，200rpm培养1.5-2h。8000rpm离心菌体弃掉上清培养基，然后用200μL的YEB液体培养基悬浮菌体，涂于含50mg/L利福平、50mg/L链霉素和50mg/L卡那霉素的YEB固体培养基上28℃倒置黑暗培养2-3d。
在超净工作台中制作烟草叶盘成边长为1cm的方形叶盘，用MS液体制备含有CRISPR/Cas9-NtE2编辑载体的农杆菌菌落成悬浮菌液（OD600约为0.6-0.8）。利用悬浮农杆菌菌液浸泡侵染烟草叶盘10min。之后将叶盘置于含2.0mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA的MS固体培养基上，28℃，黑暗，共培养3d。之后进行继代培养，放置于含2.0mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+250mg/L Cb+50mg/L Kan的MS固体培养基上，培养条件为：28℃光照培养16h/d，光照强度30-50μmol/(m2·s)，25℃黑暗培养8h/d，培养45-60d，直至分化芽形成，每7-10d更换一次分化培养基，更换3-4次；培养至分化芽形成；将已有分化芽形成的愈伤组织切下，置于含有500mg/L羧苄青霉素和50mg/L卡那霉素的MS培养基上进行培养，待愈伤组织上分化芽培养长至2-4cm高，培养条件与分化培养条件一致，培养8-14d；再生植株生根培养，将分化芽切下，插入含有500mg/L羧苄青霉素和50mg/L卡那霉素的MS培养基上进行生根培养，培养条件与分化培养条件一致，培养20-30d，再生移栽至花盆后进行培养，后进行转化植株叶片取样，送华大基因进行分子检测，确定获得NtE2基因编辑植株，之后进行收种获得T0代编辑植株种子。T0代种子按23倍进行自交纯合扩繁，待植株长到5-6片叶时，单株的叶片取样，送华大基因进行分子检测，确定获得NtE2基因发生纯合编辑的植株，之后进行收种获得NtE2基因纯合编辑的T1代种子。
本发明所述的烟草NtE2基因的应用为在烟草植株体内降低所述NtE2基因的表达，可调控烟草叶片中含氮组分的含量。现有技术领域内常用的降低基因表达或者基因沉默的方法均适用于本发明。
实施例3
采用NCBI的Protein Blast（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast），对烟草NtE2基因编码的氨基酸序列进行同源性比对并获得近缘序列，然后采用Clustal X 1.83进行多重序列比对（Thompson JD, Gibson TJ, Plewniak F, et al. The CLUSTAL_Xwindows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aidedby quality analysis tools. Nucleic Acids Research, 1997, 25(25):4876-82.），再采用Mega 6.0基于Maximum Likelihood法构建系统发育树（Tamura K, Stecher G,Peterson D, et al. MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version6.0. Molecular Biology and Evolution, 2013, 30(12):2725-2729.）。结果显示，烟草NtE2基因编码的氨基酸序列与烟草和辣椒的泛素结合酶E2的亲缘关系较近。
实施例4
利用实施例2中分子检测确定为NtE2基因纯合敲除的植株，进行收种获得基因纯合编辑素材。然后以流动分析仪进行NtE2基因纯合敲除素材的叶片中总氮的测定。
将新鲜烟叶冻干磨成粉末后，称取0.1 g烟末于消化管中，加入氧化汞0.1 g、硫酸钾1.0 g、浓硫酸5.0 mL；将消化管置于消化器上消化，消化器工作参数为：150℃ 1 h，370℃ 1 h；消化后稍冷，加入少量水冷却至室温，用水定容并摇匀；上样至流动分析仪进行测定。
总氮测定结果显示，与对照（未编辑）植株叶片中总氮含量相比，NtE2基因纯合编辑植株叶片中总氮含量显著降低（如图2）。
实施例5
利用实施例2中分子检测确定为NtE2基因纯合敲除的植株，进行收种获得基因纯合编辑素材。然后以流动分析仪进行NtE2基因纯合敲除素材的叶片中总植物碱的测定。
将新鲜烟叶冻干磨成粉末后，称取0.25 g烟末于三角瓶中，加入25 mL水，盖上塞子，在振荡器上振荡萃取30 min；用定性滤纸过滤，弃掉前几mL滤液，收集后续滤液作分析用；上样至流动分析仪进行测定。
总植物碱测定结果显示，与对照（未编辑）植株叶片中总植物碱含量相比，NtE2基因纯合编辑植株叶片中总植物碱含量显著降低（如图2）。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
序列表
<110> 云南中烟工业有限责任公司
<120> 一种烟草泛素结合酶蛋白基因NtE2及其应用
<141> 2022-04-08
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1070
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
atggcatcca ggagaattct caaggagcta agggatttgc aaagagaccc tcccacttca 60
tgtagtgcag gtacactaaa tattagtaac tagtagtatt tgccaagtgc aaactagaag 120
ttcttgccaa atttaaagat agtttcagtt ttcaagattt ttgtaaattt ttcaggtcca 180
gtagctcagg atatgttcca ttggcaagca actataattg gtccaaatga cagcccttat 240
gctggtggtg ttttccaagt caccatccat ttcccccctg attacccttt caaacctccc 300
aaggtatggt tttcaactaa tctcacacaa tcatcttttt cccctcaaag aaagaaaaga 360
aggggaaata acaaatgact tgatgatgtt aagttccata tatatattgg caggtggctt 420
ttaggacaag agttttccat ccaaatataa acaataatgg aaatatttgt ttggacattc 480
ttaaggatca atggagtcct gccctcacca tatccaaggt actgttggtt tctacctctt 540
tcccctccac tcacatatat attgtaccaa tgatttacta catgaaacaa aagggtgaaa 600
tggtcactga caatataaaa gattcatgtc acttaaaaga tgacaatgta attatccata 660
ataagtggag ctagttacat cggaaattag gcaaagtgtt aaaacgggtt aaattgtact 720
gataaagtaa aaaatattta gattatcaat atatataagc taaattcatt ctttaattac 780
cgaaatttaa acaagctttc ccatagtctt gagcataata cagtataagc ctttatattt 840
ctcccatagt cttgagcata atacagtata agcctttata tttctaccaa tttttgatgt 900
atttgctgtt ggttttgttg atgcaggttt tgctctccat atgttcattg ctaacagatc 960
caaatccaga tgatccattg gttccagaga ttgctcatat gtgcaagact gataggaaca 1020
agtatgaatc aatggctcgt agttggactc aaaaatatgc tatgaactga 1070
<210> 2
<211> 148
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 2
Met Ala Ser Arg Arg Ile Leu Lys Glu Leu Arg Asp Leu Gln Arg Asp
1 5 10 15
Pro Pro Thr Ser Cys Ser Ala Gly Pro Val Ala Gln Asp Met Phe His
20 25 30
Trp Gln Ala Thr Ile Ile Gly Pro Asn Asp Ser Pro Tyr Ala Gly Gly
35 40 45
Val Phe Gln Val Thr Ile His Phe Pro Pro Asp Tyr Pro Phe Lys Pro
50 55 60
Pro Lys Val Ala Phe Arg Thr Arg Val Phe His Pro Asn Ile Asn Asn
65 70 75 80
Asn Gly Asn Ile Cys Leu Asp Ile Leu Lys Asp Gln Trp Ser Pro Ala
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Lys Val Leu Leu Ser Ile Cys Ser Leu Leu Thr Asp
100 105 110
Pro Asn Pro Asp Asp Pro Leu Val Pro Glu Ile Ala His Met Cys Lys
115 120 125
Thr Asp Arg Asn Lys Tyr Glu Ser Met Ala Arg Ser Trp Thr Gln Lys
130 135 140
Tyr Ala Met Asn
145
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 3
tttgaattaa gtggtggt 18
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
ttcttgatgt cttcagact 19
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 5
aaccaacagt accttggata tgg 23

Claims (4)

1.一种烟草泛素结合酶NtE2基因，其特征在于：其碱基序列如SEQ ID NO:1所示：
ATGGCATCCAGGAGAATTCTCAAGGAGCTAAGGGATTTGCAAAGAGACCCTCCCACTTCATGTAGTGCAGGTACACTAAATATTAGTAACTAGTAGTATTTGCCAAGTGCAAACTAGAAGTTCTTGCCAAATTTAAAGATAGTTTCAGTTTTCAAGATTTTTGTAAATTTTTCAGGTCCAGTAGCTCAGGATATGTTCCATTGGCAAGCAACTATAATTGGTCCAAATGACAGCCCTTATGCTGGTGGTGTTTTCCAAGTCACCATCCATTTCCCCCCTGATTACCCTTTCAAACCTCCCAAGGTATGGTTTTCAACTAATCTCACACAATCATCTTTTTCCCCTCAAAGAAAGAAAAGAAGGGGAAATAACAAATGACTTGATGATGTTAAGTTCCATATATATATTGGCAGGTGGCTTTTAGGACAAGAGTTTTCCATCCAAATATAAACAATAATGGAAATATTTGTTTGGACATTCTTAAGGATCAATGGAGTCCTGCCCTCACCATATCCAAGGTACTGTTGGTTTCTACCTCTTTCCCCTCCACTCACATATATATTGTACCAATGATTTACTACATGAAACAAAAGGGTGAAATGGTCACTGACAATATAAAAGATTCATGTCACTTAAAAGATGACAATGTAATTATCCATAATAAGTGGAGCTAGTTACATCGGAAATTAGGCAAAGTGTTAAAACGGGTTAAATTGTACTGATAAAGTAAAAAATATTTAGATTATCAATATATATAAGCTAAATTCATTCTTTAATTACCGAAATTTAAACAAGCTTTCCCATAGTCTTGAGCATAATACAGTATAAGCCTTTATATTTCTCCCATAGTCTTGAGCATAATACAGTATAAGCCTTTATATTTCTACCAATTTTTGATGTATTTGCTGTTGGTTTTGTTGATGCAGGTTTTGCTCTCCATATGTTCATTGCTAACAGATCCAAATCCAGATGATCCATTGGTTCCAGAGATTGCTCATATGTGCAAGACTGATAGGAACAAGTATGAATCAATGGCTCGTAGTTGGACTCAAAAATATGCTATGAACTGA。
2.由权利要求1所述烟草泛素结合酶NtE2基因编码的蛋白质，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示：
MASRRILKELRDLQRDPPTSCSAGPVAQDMFHWQATIIGPNDSPYAGGVFQVTIHFPPDYPFKPPKVAFRTRVFHPNINNNGNICLDILKDQWSPALTISKVLLSICSLLTDPNPDDPLVPEIAHMCKTDRNKYESMARSWTQKYAMN。
3.权利要求1所述烟草泛素结合酶NtE2基因在烟草叶片含氮组分含量调控中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的含氮组分包括总植物碱和总氮。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110714013A (zh) * 2019-09-29 2020-01-21 南京农业大学 大豆E2泛素结合酶基因GmUBC1的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIANMIN WANG，等: "Characterization of cDNAs differentially expressed in roots of tobacco (Nicotiana tabacum cv Burley 21) during the early stages of alkaloid biosynthesis", 《PLANT SCIENCE》 *
SIERRO, N.等: ""NW_015795225（40728..42467）"", 《NCBI GENBANK》 *
毛卓卓 等: "大豆E2泛素结合酶基因GmUBC1的克隆及在拟南芥中的异源表达", 《遗传》 *

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