CN114585372A - 用于增强免疫系统的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于增强免疫系统的组合物，所述组合物包含角蛋白化合物和β‑乳球蛋白(LGB)。

Description

用于增强免疫系统的组合物

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体涉及一种物质激活或增强免疫系统反应的能力。

背景技术

免疫系统是一种细胞和分子机构，在防御感染方面具有专有功能。针对入侵病原体存在两种完全不同的反应类型。无论遭遇到多少次感染原，先天性(自然)反应的程度均相同，而获得性(适应性)反应在反复暴露于给定感染后会得到加强。

随着传染病和病原体种类仍在不断增加，急需可以增强免疫系统处理人群所遭遇的疾病的能力的解决方案。

暴露于有害病原体时更容易被感染或招致严重后果的特定人群是婴儿、老年人、免疫系统受损个体、动物和运动员等。

发明内容

根据一些示例性实施方式，提供了一种用于增强免疫系统的组合物，其包含角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)。

根据一些实施方式，所述角蛋白化合物可选自包括KRT33B、KRT13、KRT18、KRT17、KRT42、KRT28、KRT36、KRT12、KRT10、KRT24、KRT14、KRT4、KRT75、KRT6A、KRT6C、KRT5、KRT77、KRT1、KRT3、KRT2或这些化合物的组合的组。

根据一些实施方式，所述角蛋白化合物的浓度可以为0.01％至15.5％，优选地，为0.01％至10.0％，并且所述LGB的浓度可以为0.02％至23.4％。

根据一些实施方式，所述组合物还可以包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

根据一些实施方式，所述抗炎组分可选自包括乳铁蛋白、α-乳清蛋白、CD59糖蛋白、乳运铁蛋白、溶菌酶C、白介素-10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)、白介素-4(IL-4)和环氧合酶-1(Cox-1)的组。

根据一些实施方式，所述促炎组分可选自包括乳运铁蛋白、溶菌酶C、白介素-1B(IL-1B)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的组。

根据一些实施方式，所述抗菌组分可选自包括β-防御素1、乳过氧化物酶、乳运铁蛋白、α-乳清蛋白、组织蛋白酶G、溶菌酶C、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)的组。

根据一些实施方式，所述第一免疫刺激组分可选自包括内质蛋白(Endoplasmin)、中性粒细胞弹性蛋白酶、IgA、IgG、免疫球蛋白M(IgM)和乳运铁蛋白的组。

根据一些实施方式，所述第二免疫刺激组分可选自包括趋化因子(C-C基序)配体5(CCL5)、内质蛋白、中性粒细胞弹性蛋白酶、IgA、IgG、IgM、催乳素诱导蛋白和白细胞弹性蛋白酶抑制剂的组。

根据一些实施方式，所述组合物还包含初乳。

根据一些实施方式，提供本发明的所述组合物用于增强婴儿的免疫系统的用途。

根据一些实施方式，提供本发明的所述组合物用于增强免疫系统受损个体的免疫系统的用途。

根据一些实施方式，提供本发明的所述组合物用于增强动物的免疫系统的用途。

根据一些实施方式，提供本发明的所述组合物用于减少运动员中的炎症的用途。

根据一些实施方式，本发明提供一种食品，其选自包括奶制品、奶昔、饮料、婴儿配方食品、动物食品等的组。

根据一些示例性实施方式，本发明提供一种组合物，其包含角蛋白化合物、β-乳球蛋白(LGB)、抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

附图说明

本发明实施方式的示例性实施例是非限制性的，下面将结合本文附图进行描述，相关附图在本段后列出。

在多于一张附图中出现的相同结构、元件或部分通常在它们所出现的所有附图中均采用相同的数字标记。

图1示出了描绘根据本公开的一个方面的改善组合物的制备过程的流程图。

图2示出了显示使用和/或提取动物初乳的优缺点的图表。

图3示出了显示根据一些示例性实施方式的蛋白质浓度偏差相对于婴儿年龄的图表。

图4示出了根据一些示例性实施方式的蛋白凝胶的样本制备结果。

图5-7示出了表明人初乳和牛初乳之间的同源性的图表G1-G6。

图8示出了根据一些示例性实施方式的蛋白质的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。

图9示出了根据一些示例性实施方式的酸性沉淀后的脱脂初乳的阴离子交换(AE)色谱。

图10示出了根据一些示例性实施方式的酸性沉淀后的脱脂初乳的阳离子交换(CE)色谱。

图11是描绘根据一些示例性实施方式的富集因子的图表。

图12是根据一些示例性实施方式的PBMC的流式细胞术分析的正向和侧向散射图。

图13是描绘根据一些示例性实施方式的各种样本的T细胞活化的图表。

图14是显示根据一些示例性实施方式的各种样本72小时后IFN-γ分泌的图表。

图15是描绘根据一些示例性实施方式的不同测试组中IL-1β分泌的图表。

具体实施方式

根据一些示例性实施方式，本发明提供了一种用于增强免疫系统的组合物(在本文中也称为“配方”)，其包含至少一种角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)。

根据一些实施方式，角蛋白是典型的上皮的中间丝蛋白，具有广泛的分子多样性，而β-乳球蛋白(LGB)是牛奶和羊奶的主要乳清蛋白(～3g/L)，并且也存在于许多其他哺乳动物物种中，应注意一个例外情况是人类，并且与其他主要乳清蛋白不同，截至目前尚未确定β-乳球蛋白的明确功能。

然而，根据一些实施方式，角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)的特定组合可以提供协同效应，例如提供免疫刺激方面的协同效应。

根据一些实施方式，所述角蛋白化合物可选自包括KRT33B、KRT13、KRT18、KRT17、KRT42、KRT28、KRT36、KRT12、KRT10、KRT24、KRT14、KRT4、KRT75、KRT6A、KRT6C、KRT5、KRT77、KRT1、KRT3、KRT2或这些化合物的组合的组。

根据一些实施方式，所述角蛋白化合物的浓度可以为0.01％至15.5％，优选地为0.01％至10.0％，并且所述LGB的浓度可以为0.02％至23.4％。

根据一些实施方式，白介素(IL)可能涉及大多数免疫反应，例如炎症、T细胞增殖和增强抗菌反应。角蛋白可能涉及不同的细胞因子通路，因而可用于调节这些反应(例如促炎细胞因子)。β-乳球蛋白(LGB)是另一个可以诱导细胞因子生成和/或细胞增殖的因子。此外，β-乳球蛋白可用作天然镇痛和抗炎药物，LGB水解产物(LGBH)可能具有抗氧化、抗高血压、抗菌和阿片类物质活性。

根据一些实施方式，角蛋白和β-乳球蛋白的特定组合可以在人和/或动物单核细胞中引起强烈的促炎反应。因此，根据一些实施方式，角蛋白和LGB的协同作用可以引起大量的免疫反应。

根据一些优选的实施方式，本发明的组合物中可能包括一种以上的角蛋白化合物。

根据一些示例性实施方式，所述组合物还可以包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

根据一些实施方式，所述抗炎组分可选自包括乳铁蛋白、α-乳清蛋白、CD59糖蛋白、乳运铁蛋白、溶菌酶C、白介素-10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)、白介素-4(IL-4)和环氧合酶-1(Cox-1)的组。

根据一些实施方式，所述促炎组分可选自包括乳运铁蛋白、溶菌酶C、白介素-1B(IL-1B)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的组。

根据一些实施方式，所述抗菌组分可选自包括β-防御素1、乳过氧化物酶、乳运铁蛋白、α-乳清蛋白、组织蛋白酶G、溶菌酶C、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)的组。

根据一些实施方式，所述第一免疫刺激组分可选自包括内质蛋白、中性粒细胞弹性蛋白酶、IgA、IgG、免疫球蛋白M(IgM)和乳运铁蛋白的组。

根据一些实施方式，所述第二免疫刺激组分可选自包括趋化因子(C-C基序)配体5(CCL5)、内质蛋白、中性粒细胞弹性蛋白酶、IgA、IgG、IgM、催乳素诱导蛋白和白细胞弹性蛋白酶抑制剂的组。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可以显示协同效应。例如，根据一些实施方式，组合物中的每种组分和/或分子可以具有一种或多种免疫刺激特性，但是当将抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分组合在一起时，则提供比所有组分单独具有的免疫刺激效应的总和更大的免疫刺激效应。

根据一些实施方式，术语“协同效应”可以指更大程度激活免疫系统的特定部分和/或组分，和/或指激活免疫系统的多个部分和/或组分，而根据一些实施方式，协同效应可以指本发明组合物的组分之间的协同相互作用，例如，引起更大程度的免疫刺激作用，其强于各组分单独使用时观察到的免疫刺激作用。

根据一些示例性实施方式，本发明组合物使用的免疫球蛋白优选为IgA。根据这些优选实施方式，婴儿更易感于通过粘膜传播的感染和疾病，根据一些实施方式，因此优选使用IgA。

根据一些实施方式，术语“增强(enhancing)免疫系统”(在本文中也称为“增强(boosting)免疫系统”、“免疫刺激作用”、“免疫刺激”或“增强免疫刺激”)可以包括但不限于缩短患病和/或发作时间，降低生病的可能性，减少与疾病等相关的症状数量和/或严重程度，和/或免疫细胞的激活和/或增殖，和/或与炎症相关的细胞失活和/或活性降低。

根据一些示例性实施方式，具体使用促炎组分实现了出乎意料的有益效果。根据一些实施方式，通常优选避免人类出现炎症，然而，由于使用促炎免疫组分来对抗病原体，因此本发明的组合物提供了有益的免疫刺激作用。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可以进一步包含初乳和/或全初乳(例如合成的、人源和/或动物源)中的一种或多种组分。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包含两种或更多种初乳的组合。

根据一些实施方式，所述组合物可以包括两种或更多种分子的组合，所述分子来源于从两种不同哺乳动物中提取的至少两种不同的初乳。

根据一些实施方式，该组合物可以优选地包括两种牛初乳的组合，例如LALBA与CATHL1，以实现抗炎反应以及抗菌保护。

LALBA是α-乳清蛋白-抗炎组分，可抑制COX和磷脂酶A(2)活性。

CATHL1是一种由抗菌(革兰氏阴性)肽介导的抗菌体液免疫反应。其可以结合脂多糖(LPS)并提高渗透革兰氏阴性菌外膜的能力。

根据一些实施方式，2种牛初乳LALBA和CATHL1之间的比率可以优选为60:40。

根据一些实施方式，该组合物可以表现出抗炎特性。

根据一些实施方式，如下所述，用抗CD3刺激外周血单核细胞(PBMC)，并基于包括使用本发明组合物的处理的不同处理来测试T细胞的激活和增殖。结果明确显示，在本发明组合物的存在下，T细胞的激活和增殖显著下降。此外，在暴露于本发明组合物时，干扰素-γ(INFγ)的分泌显著下降。因此，根据一些实施方式，本发明的组合物具有明显的抗炎作用。

根据一些实施方式，提供了本发明的所述组合物用于减少炎症的用途。

例如，本发明的组合物可以施用于运动员，从而用于例如减轻其肌肉和/或关节处由压力引起的炎症。例如，根据一些实施方式，本发明的组合物可以添加到蛋白质奶昔和/或能量棒中，或以粉末形态、小袋和/或胶囊独立使用。

根据一些实施方式，提供了本发明组合物用于老年人以例如加强免疫系统。

根据一些实施方式，老年人群(通常定义为65岁及以上)对大多数疾病的第一免疫反应是炎症性的。

随着年龄增长，人体免疫系统会减弱并且出现功能降低。老年人免疫系统的第一反应是炎症反应，但通常没有作用，并会消耗身体能量。根据一些实施方式，本发明的组合物可以结合免疫系统刺激能力减弱这种反应，这可以有助于身体免疫系统抵抗疾病。

根据一些示例性实施方式，提供了本发明组合物用于增强动物、例如宠物的免疫系统的用途。

根据一些实施方式，尤其对于活跃的宠物、竞赛的动物和从事劳动的畜牲，其关节和肌肉经常出现炎症。通常通过休息、药膏以及可能非常昂贵的物理疗法(在极端情况下)来治疗这些炎症。根据一些实施方式，本发明的组合物可具有抗炎特性，因此使用该组合物可减少动物中炎症的发生和缩短恢复时间。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物还可具有促炎组分，例如，该组分与抗炎组分结合可起到协同免疫刺激作用。

根据一些实施方式，免疫反应包括不同因素，并且炎症反应对于募集许多免疫细胞非常关键。因此，根据一些实施方式，在一些情况下，可能优选地通过引发受控的炎症反应来刺激免疫系统。

根据一些实施方式，本发明的组合物可包括例如SERPINB4和SERPIND1的组合，其可导致胃中蛋白水解酶的显著降低和/或增强促炎通路并刺激免疫系统。

SERPINB4是一种促炎蛋白-内肽酶活性的负调节。

SERPIND1是一种可以刺激免疫系统并可能促进白细胞趋化因子释放的蛋白质。

根据一些实施方式，SERPIND1可以被CXCL12取代。其对淋巴细胞具有很强的趋化性，并且其信号传导调节B细胞上CD20的表达。

根据一些实施方式，组合物中SERPINB4和SERPIND1之间的比率分别可以为60:40。

根据一些实施方式，在本发明组合物的存在下进行孵育的单核细胞显示出增殖。此外，在本发明组合物的存在下，IL-10的分泌减少。根据一些实施方式，本发明的组合物可以通过刺激免疫系统而引起促炎反应。

根据一些实施方式，短期炎症是身体对许多疾病的自然反应。例如，最常见通过炎症反应来对抗感染。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包括一种以上的抗炎组分，例如，该组合物可以包括以下组分：ANXA1、APOE、BTN1A1、C4BPA、CD59、FCGR2、HBB、LALBA、LTF、PGLYRP1、PRDX4、SERPINB1、TNFRSF6B、LGB、KRT18、KRT17、KRT42、KRT36、KRT10、KRT24、KRT14、KRT75、KRT6A、KRT5、KRT1、KRT3和KRT2。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可具有受控的促炎活性，这可以有助于此类情况。

根据一些实施方式，优选地，促炎组合物的浓度为100pg/Kg-100ng/Kg。

根据一些实施方式，细菌是可直接或间接导致不同疾病的常见病原体。通常，免疫系统可以处理这些风险，但是在许多情况下免疫系统无法战胜细菌。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以具有抗菌活性。

根据一些实施方式，本发明的组合物可包括HSTN与C3的组合，例如，其可通过免疫反应连同增强的吞噬作用来产生强有力的抗菌反应。

HSTN是一种抗菌蛋白-参与先天免疫并具有抗菌和抗真菌活性的阳离子肽。

C3是补体组分3，在补体系统中起到关键作用并刺激先天免疫。

根据一些实施方式，组合物中HSTN和C3之间的比率分别可以为80:20。

根据一些实施方式，本发明的组合物的抗菌活性可能对老年人和免疫受损个体尤其有益，有助于抵抗病原体。

根据一些实施方式，施用本发明组合物能够靶向肠道免疫、加强肠道菌群和增加针对病原体的免疫反应，并且还可以靶向血流、增强免疫系统。

根据一些实施方式，还可以在出现细菌和/或病毒风险时，例如冬季，给广大人群施用低剂量的本发明组合物。

根据一些实施方式，免疫系统对于预防疾病和压力具有重要作用。因此，其运行正常至关重要。然而，在很多情况下，尤其是在幼儿和老年人群中，免疫系统需要进行一些增强和维护。

根据一些实施方式，本发明的组合物包含免疫刺激组分。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包括例如PDIA3和LBP的组合，其可以导致免疫系统的激活，而使炎症反应最小化。

PDIA3是刺激免疫系统的重要因子。PDIA3是主要组织相容性复合体(MHC)I类肽装载复合体的一部分。一种用于最终抗原构象的形成和呈递的系统。

LBP是脂多糖结合蛋白(LBP)-具有促炎作用。白细胞趋化作用通过脂多糖转运参与炎症反应和巨噬细胞激活，以引起免疫反应。

根据一些实施方式，已发现使用含PDIA3和LBP的本发明组合物培养的细胞对单核细胞具有刺激作用。

根据一些实施方式，组合物中PDIA3和LBP之间的比率分别可以为70:30。

根据一些实施方式，老年人和免疫受损个体倾向于对大多数疾病具有减弱/延迟的反应。根据一些实施方式，使用本发明组合物可以缩短反应时间并提高反应效力，从而降低使用者出现疾病的频率。

根据一些实施方式，职业运动员受试者在各类天气条件下进行严格训练，且休息时间很短。身体所经受的这种压力会降低免疫系统的效力并使身体暴露于各种疾病。根据一些实施方式，对运动员使用本发明组合物可以帮助消除运动员训练的不利影响，从而降低使用者遭受疾病的频率。

根据一些示例性实施方式，本发明提供了一种算法，用于预测构成本发明组合物的分子、所述分子例如为用于抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的分子。

根据一些实施方式，本文所用术语“算法”可以指用于计算构成本发明组合物的一种或多种蛋白质的免疫刺激作用的概率的方法。例如，该算法可以包括评估一种或多种人体蛋白质的有效免疫刺激作用的概率。

根据一些实施方式，该算法可以包括评估两种或多种蛋白质组合的有效免疫刺激作用的概率。

具体地，该算法可以计算两种或多种蛋白质的相容性水平，例如，基于此，当两种或多种蛋白质组合时，“相容性”涉及增强的和/或协同的免疫刺激作用。

根据一些实施方式，例如，该算法可以包括例如基于在动物中具有免疫刺激作用的蛋白质的同源性水平比较来评估蛋白质的有效免疫刺激作用的概率。

以下表1示出了特定蛋白质之间的示例性比较，由e值表示。

根据一些实施方式，值越低，进行比较的两种蛋白质的相容性越好。

表1

根据一些实施方式，本发明组合物具体使用IgG组分的选定部分和/或区域。

根据一些实施方式，使用IgG组分的选定部分和/或区域可以增强分子可及性，例如，在婴儿或新生儿摄食时。

根据一些实施方式，术语“分子可及性”可以涉及对分子的特定活性区域的消化，该分子可以通过口服供给婴儿并无需和/或避免在消化道中分解分子，并且增加分子的渗透性。

根据一些实施方式，IgG组分的选定部分和/或区域可以在进入肠道前被吸收，这可以提高这些分子的有效性，即帮助增强免疫系统(小分子吸收速度更快，因此可以在体内更快地开始发挥作用)。

根据一些示例性实施方式，该组合物可以口服使用和/或静脉或皮下施用。

根据一些其他实施方式，本发明组合物可用于美容目的，因此可以局部施用，例如通过乳膏、软膏等形式局部施用。

使用组合物增强婴儿的免疫系统

母乳是人类女性的乳房(或乳腺)产生的乳汁，用于喂养婴儿。大约40％的婴儿纯母乳喂养，然而50％以上的婴儿通过母乳和代乳品组合的方式喂养。

长期以来，人们熟知母乳喂养的各种健康益处。其中最大的健康益处为营养和免疫方面的益处。乳汁是新生儿在能够食用和消化其他食物之前的主要营养来源；较大的婴儿和学步儿童可继续母乳喂养，要么是纯母乳喂养，要么将母乳与其他食物如大约六个月大时可能引入的固体食物结合使用。此外，母乳是免疫球蛋白(即抗体)的重要来源，免疫球蛋白是出现于血液中的蛋白质，可用于针对诸如病毒和细菌的感染原进行免疫防御。一些类型的抗体(主要是sIgA，其功能是防止病原体通过粘膜组织侵入)从血浆或母体血液中转移到母乳中，或者由已迁移到该区域的细胞在乳腺中部分产生，并形成哺乳期婴儿的初级免疫防御机制。

当不能进行或不需要母乳喂养时，可以提供婴儿配方食品。婴儿配方食品是一种为喂养婴幼儿而设计和销售的加工食品，通常由粉末(与水混合)或液体(加或不加额外水)配制，通过奶瓶或杯子喂养。

如今，配方食品基于不同的阶段，婴儿根据其年龄从一个阶段的配方食品转移到另一个阶段的配方食品。如1-6月龄，6-12月龄和以上。根据平均值定义了这些阶段，没有具体衡量婴儿的需求。

根据生长曲线以及如有异常情况则进行具体测试(例如血液测试)来监测婴儿的发育。

由于婴儿的免疫系统发育不完善，因此婴儿更易感于病原体。虽然一些免疫球蛋白的确会通过脐带传递给婴儿，但通常会在6个月内减少。

因此，母乳提供了免疫组分，其可以保护婴儿免受许多疾病侵害。然而，营养不足或营养不良会使母乳成分不全，并且可能降低免疫保护作用。此外，现代生活和不同条件使许多女性无法提供全母乳喂养。因此，大多数婴儿被喂食缺乏免疫成分的配方食品，并且其暴露于病原体。

然而，不同的婴儿具有不同的营养和/或免疫需求，并且通常基于平均需求提供通用配方食品通常不能满足个体婴儿的具体需求。

具体地，新生婴儿极易感染上各种细菌或病毒感染，目前婴儿配方食品无法为婴儿脆弱的免疫系统提供解决方案。

根据一些示例性实施方式，本发明组合物可以适于婴儿经口摄食。

根据一些实施方式，该组合物可以增强婴儿的免疫系统。

根据一些示例性实施方式，角蛋白化合物、β-乳球蛋白(LGB)、抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分是不同分子。

根据一些示例性实施方式，本发明组合物可以显示协同效应。例如，根据一些实施方式，组合物中的每种组分和/或分子可以具有一种或多种免疫刺激特性，但是当将抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分组合在一起时，则提供比所有组分单独具有的免疫刺激效应的总和更大的免疫刺激效应。

根据一些实施方式，本发明提供的一种婴儿配方食品，包含本发明所述的组合物。

根据一些实施方式，该配方食品可以是粉末形态。

根据一些实施方式，该配方食品可以是液体形态。

根据一些实施方式，本发明提供一种液体浓缩物，包含本发明的组合物，其中该浓缩物可以适于与液态的“即食”婴儿配方食品混合。

根据一些实施方式，本发明提供了一种生产本发明所述的组合物的方法，该组合物包含可能提取自多种初乳的一种或多种组合物组分，该方法包括：

从多个个体采集初乳，其中多种初乳的组分的含量和/或活性在所述初乳之间差异显著；汇集初乳，过滤初乳或汇集的初乳。

下文描述的实施方式提供了用于喂养婴儿的改良的组合物。其他实施方式描述了适合于其他人群食用的组合物。

本文还提供了制备此类组合物的方法。

根据实施方式的一个方面，包含组合物中至少一种组分的组合物可以提取自一种或多种初乳，其中一种或多种初乳中的组分的含量和/或活性在初乳之间差异显著。

根据实施方式的另一方面，提供了一种生产组合物的方法，该组合物包含提取自多种初乳的至少一种初乳组分，该方法包括：

从多个个体、例如不同的奶牛、绵羊或山羊或这几者的组合收集初乳，其中多种初乳中的组分的含量和/或活性在初乳之间差异显著；汇集初乳；过滤初乳或汇集的初乳。

可选地，该方法还包括改变初乳中生物活性组分的含量，例如对初乳或预处理的初乳使用分离技术。

根据一些实施方式，所述方法可以选自色谱法和/或过滤法。制备色谱法可以选自以下中的一种或多种：亲和色谱法、尺寸排阻色谱法和离子色谱法。过滤法可以选自交叉过滤法、超滤法、反渗透法和透析法中的一种或多种。根据最终配方食品中的组分及其各自所需的含量，可以使用其他方法。

在讨论中，除非另行指出，否则修饰本发明实施方式的一个特征或多个特征的条件或关系特征的形容词，诸如“大量”和“约”，应理解为意指将所述条件或特征限定于进行实施方式预期应用的操作可接受的公差内。

根据一些示例性实施方式，如本文中所述，除了角蛋白和LGB之外，本发明的所述组合物可以包含五种组分的组合：抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分。

根据一些示例性实施方式，本发明组合物可以包括抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的特定组合，以例如专门针对容易感染婴儿的疾病，如耳部感染、脑膜炎等。

根据一些实施方式，在婴儿免疫系统中，细胞因子局部地和系统地起作用以开启、维持和消除炎症反应。

根据一些实施方式，促炎细胞因子、抗炎细胞因子和先天性细胞因子抑制剂之间的相互作用可以决定炎症反应及其有效性。根据一些实施方式，由于新生儿的免疫系统不成熟，细胞因子具有特异性。根据一些实施方式，肿瘤坏死因子-(TNF-)和白介素-6(Il-6)可优选用于通过激活细胞因子级联和产生其他促炎细胞因子和趋化因子来加强免疫反应。

根据一些实施方式，促炎分子还可以募集MAST细胞和补体系统，从而例如通过增强对病原体的攻击来例如进一步增强免疫刺激作用。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包含多种促炎分子。

根据一些示例性实施方式，本发明提供了一种算法，用于预测构成本发明组合物的分子的一种或多种有益组合，所述分子例如为用于抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的分子。

根据一些实施方式，本文所用术语“算法”可以指用于计算构成本发明组合物的一种或多种蛋白质的免疫刺激作用的概率的方法。例如，该算法可以包括评估一种或多种人体蛋白质的有效免疫刺激作用的概率。

根据一些实施方式，该算法可以包括评估两种或多种蛋白质组合的有效免疫刺激作用的概率。

具体地，该算法可以计算两种或多种蛋白质的相容性水平，例如，基于此，当两种或多种蛋白质组合时，“相容性”涉及增强的和/或协同的免疫刺激作用。

根据一些实施方式，例如，该算法可以包括例如基于在动物中具有免疫刺激作用的蛋白质)的同源性水平比较来评估蛋白质的有效免疫刺激作用的概率。

以上表1示出了特定蛋白质之间的示例性比较，由e值表示。

根据一些实施方式，值越低，进行比较的两种蛋白质的相容性越好。

根据一些实施方式，本发明组合物具体使用IgG组分的选定部分和/或区域。

根据一些实施方式，使用IgG组分的选定部分和/或区域可以例如在婴儿或新生儿摄食时增强分子可及性。

根据一些实施方式，术语“分子可及性”可以涉及对分子的特定活性区域的消化，该分子可以口服供给婴儿并无需和/或避免在消化道中分解分子，同时可以增加分子的渗透性。

根据一些实施方式，IgG组分的选定部分和/或区域可以在进入肠道前被吸收，这可以提高这些分子的有效性——帮助增强免疫系统(小分子吸收速度更快，因此可以在体内更快地开始发挥作用)。

根据一些实施方式，本发明的所述组合物包括一种或多种免疫组分，其可以有助于新生儿对抗病原体并改善免疫系统发育。

免疫球蛋白是免疫系统的重要因素，既可以直接作用于病原体，也可以募集免疫系统对抗病原体。然而，大多数口服的免疫球蛋白在消化系统中会被降解。婴儿的消化系统并未发育完善，因而很多免疫球蛋白可以保持完整。此外，一些免疫球蛋白可以在口腔中就已经被吸收。

此外，还有许多免疫球蛋白部分，尤其是来自具有高效力的IgG可变区。这些部分很小，因此对酶的蛋白水解活性表现出“惰性”。因此，将其用作本发明的所述组合物中的免疫组分可具有显著优势。

在生物化学领域，米-曼氏动力学(Michaelis–Menten kinetics)是最著名的酶动力学模型之一。1925年George Briggs和J.B.S.Haldane提供了米-曼氏方程的最佳推导，如下：

其中S是底物，E是酶，ES是酶-底物复合物，P是产物，k_开是酶-底物结合的双分子缔合速率常数；k_关是ES复合物解离以再生游离酶和底物的单分子速率常数；k_催化是ES复合物解离得到游离酶和产物P的单分子速率常数。

根据一些实施方式，一旦婴儿消化系统中的胃蛋白酶与其底物(例如抗体)相互作用，就立即形成了ES复合物并且反应向产物推进，例如抗体的活性片段。

根据一些实施方式，本发明的所述组合物包含抗体、例如IgG抗体的酶解后部分，因此这导致方程转向产物、例如抗体的活性片段的产生。

根据一些实施方式，到达血流及到达靶位点(例如婴儿体内的感染区域)的抗体的活性片段将会快速刺激和激活免疫系统，包括例如由这些片段与其他免疫刺激组分组合引发的协同效应。

例如，免疫系统包括不同的组分，例如抗原呈递细胞(例如树突状细胞)、募集细胞(例如CD4)和活性细胞(例如NK细胞)。这些不同的组分在一起工作时可以发起有效的免疫攻击。根据一些实施方式，例如通过使用本发明的组合物激活免疫系统的不同方面可以在对抗病原体和刺激免疫系统方面提供重要价值。

根据一些实施方式，本发明的所述组合物可以包括多种分子来处理和/或激活免疫系统的不同组分，例如以便实现免疫刺激增强的期望效果。

根据一些实施方式，可以单独激活免疫系统的某些组分，但在一起工作时可以产生更大的作用(协同作用)，例如，溶菌酶可以吞噬病原体，但是当促炎细胞因子加入时，溶菌酶也募集其他细胞，例如树突状细胞，这反过来又可以增强吞噬能力，并将NK和中性粒细胞召集到该区域从而进一步破坏病原体。

根据一些示例性实施方式，下表1描述了本发明组合物组分的可能浓度。

表2

根据一些示例性实施方式，本发明的所述组合物可用于例如通过提供免疫刺激作用来增强婴儿的免疫系统。

根据其他实施方式，本发明的所述组合物可以与食品和/或饮料混合，所述食品和/或饮料包括例如液态婴儿配方食品、粉末状婴儿配方食品、供运动员食用的奶制品和/或奶昔、供给患有各种免疫缺陷疾病的个体的食品等。

根据一些实施方式，本发明提供的一种强化免疫功能的婴儿配方食品，包含本发明所述的组合物。根据一些实施方式，所述配方食品可以刺激婴儿的免疫系统，并给婴儿提供更好的保护，例如，预防疾病、增强免疫机制、刺激免疫系统等。

根据一些实施方式，所述配方食品还可以包含关键的氨基酸和脂肪酸，以及生长和食欲调节剂，例如通过保证最佳的氨基酸和脂肪酸摄入来为婴儿提供认知生长和认知发育所需的有益健康的营养，从而支持器官和大脑发育等。

根据一些实施方式，所述配方食品可以预防婴儿和/或婴幼儿患疾病，保护婴儿的天然胃肠菌群并使得营养全面从而使婴儿更健康和更快乐，例如，通过减少肠胃胀气、保护天然菌群、改善睡眠和改善婴幼儿舒适度。

根据一些示例性实施方式，本发明的所述组合物可以采用任何合适的状态和/或形式，包括例如液态、粉末状、颗粒状等，以便最易于与婴儿配方食品混合。

根据一些实施方式，本发明的所述组合物可以包括两种或以上提取自至少两种不同初乳的分子，例如，提取自第一初乳的第一分子和提取自第二初乳的第二分子。

根据这些实施方式，本文还提供了一种生产本发明的所述组合物的方法。

根据一些实施方式，该方法可以包括从汇集的初乳中采集组分并且任选地添加从非初乳来源中采集的组分。

根据一些实施方式，该方法可以包括：

1、确定原始乳汁的组成。确定操作包括根据新生儿的发育阶段确定母乳的平均组成，因为母乳的成分会随着婴儿的发育而变化，而且由于遗传、环境和营养差异，母乳的成分也会因母体而异。因此，确定操作通常包括在分娩后的不同时间从几组母体采集和分析乳汁成分。可以通过多种分析方法进行该确定操作。

根据一些实施方式，质谱(MS)可用于确定各组分的结构。可选地，可以使用一种或多种联用或多种专门的MS技术，例如HPLC-MS(高效液相色谱法-MS)、电喷雾电离(ESI)、飞行时间MS、基质辅助激光解吸/电离(MALDI)。

2、提供市售配方食品中常见的一种或多种组分，例如各种矿物质和维生素A、D、E和K、维生素C、核黄素、烟酸和/或戊酸等。

3、提供一种或多种市售配方食品中不太常见的组分，但类似于母乳中的组分，包括例如：

a.免疫系统增强剂。免疫原性组分，例如IgA和各种细胞因子。免疫原性组分天然存在于婴儿的黏膜(呼吸和消化系统)，是婴儿身体与环境中病原体之间的第一道免疫屏障。根据实施方式的某些方面，通常从初乳中获得这些组分。

b.婴儿的总体发育和生长、血糖平衡和温度调节的促成剂，例如激素和生长因子：甲状腺激素、胰岛素和生长激素。根据实施方式的一些方面，通常也从初乳中获得这些组分。

c.促进大脑发育和/或调节食欲的激素，例如ω-3不饱和脂肪酸、大麻素、胃饥饿素和/或瘦素。根据实施方式的一些方面，这些组分从天然物质获取或者是合成的，例如食欲调节剂海沙瑞林。

d.细胞内脂肪水平降低剂和抗炎剂，例如脂联素。根据实施方式的一些方面，通常也从采集的初乳和/或乳汁中获得这些组分。

e.消化系统在消化乳汁中天然存在的脂肪、蛋白质和碳水化合物方面的适当活性以及预防消化不良的促进剂或增强剂。此类促进剂可以是各种酶。根据实施方式的某些方面，从天然物质中获得这些组分。

f.病毒和细菌生长抑制剂，例如乳铁蛋白，其与铁结合并提升其在细胞中的吸收，从而通过阻止细菌摄入关键的铁元素而阻止细菌生长。根据实施方式的某些方面，从天然物质(可能是采集的初乳)中获得这些组分。

g.乳糖，以增强钙的吸收并促进有益细菌的生长。乳糖用于抵抗病原体和减少牙菌斑。根据实施方式的某些方面，从天然物质中获得乳糖或通过合成获得乳糖。

h.基因突变预防剂。例如，用于对抗癌细胞生长的Hamlet蛋白。根据实施方式的某些方面，通常从采集初乳中获得这些组分。

根据一些实施方式，组分a)、b)、d)、f)和/或h)可选地与市售配方食品中常见的一种或多种组分组合，以构成我们改良后的婴儿配方食品中的组分。可选地，还添加组分c)、e)和/或g)作为改良后的配方中的组分。

根据一些实施方式，喷雾干燥器可用于由上述成分的混合物制备配方食品。

4、测试改良的婴儿配方食品。由汇集的初乳制成的配方食品的效力首先在蛋白质打印机(protein printer)(微阵列)上进行测试。随后，可以在人类细胞系和/或动物中测试这些配方食品。

根据一些实施方式，打印机可以检查类人基质中的非人体分子的活性或人类抗原的活性。

根据一些实施方式，打印机可分别包括由支撑表面组成的芯片，所述支撑表面例如为载玻片、硝酸纤维素膜、珠子或微量滴定板，其中捕获蛋白质的阵列结合到该支撑表面。将通常用荧光染料标记的探针分子添加到阵列中。探针和固定化蛋白质之间的任何反应都会发出荧光信号，以供激光扫描仪读取。

根据一些实施方式，可以进行进一步的测试以确定抗体-抗原活化正确。

参考图1，更具体地描述了根据实施实施方式的一个方面的粉状食品生产方法。该过程包括：

将乳清和初乳加入带有均质器的生物反应器中；

使其中的乳清和初乳均质化成大致均质的混合物；

错流过滤或切向流过滤(TFF)：例如，在低温(即不超过人体温度)下使混合物通过内衬有陶瓷过滤器的食品级认证的不锈钢管道系统。

进行过滤以从混合物中去除多余的脂肪。过滤步骤的渗余物是一种过滤后的液体物质，富含蛋白质并具有高营养价值。

将渗余物通过喷雾干燥器，通过蒸汽从外部加热，然后进行冻干。

冻干粉末和市售配方食品中常见营养成分，例如维生素、矿物质、淀粉和乳糖，可以通过Y型锥形体添加并混合，并且可以将所得混合物进行制粒。

可以测试粒状粉末的效力，并且可以采集额外的样本并测试稳定性和微生物生长情况。

一些实施方式中，提供了悬浮液的形式。例如，一些实施方式中，可以采用即饮奶昔的形式提供给使用者，或者采用易于悬浮在各种液体中的粉末，例如水、果汁或市售奶或酸奶。一些优选实施方式中，不暴露于高于体温的温度，即最高40℃，更优选不高于37℃。实施方式中，制备操作也优选在该温度下进行。

在实施方式的其他方面中，配方食品采用胶囊或糖浆的剂型。

适当调整含量和生产工艺后，该配方食品还可用于儿童、慢性病患者、老年人、孕妇和运动员的营养治疗或补充。该配方食品可用于治疗病症，如感染。之前曾已有初乳用于此用途，特别是在抗生素出现之前，然而目前我们可以为针对该用途选择特定的初乳，更具体地，在一些实施方式中，选择初乳的组合，其具有增强的用于治疗该病症的靶向制剂的水平或活性。

这些配方食品可以提供为食品级的或营养品。根据其含量和预期用途以及使用者的要求，该配方食品可以作为其他食物来源的补充，用于治疗饮食或其他缺乏症，或作为配方食品中的一种或多种组分的主要或唯一来源。在一些实施方式中，配方食品包含前药，例如用以帮助吸收配方食品中的其他组分或一同提供的其他营养源中的其他组分。作为替代或附加地，一些组分可由肠溶衣包覆，以避免其在胃中被消化。

在非人源免疫原性组分和人源免疫原性组分之间可能存在交叉反应。因此，实施方式的另一方面涉及提供对于非人源初乳和人源初乳或乳汁的免疫组分之间的高交叉反应性最佳或至少有利的条件，例如通过选择在此方面包含在配方食品中最合适的组分并排除不太合适的组分来实现。

作为选择范围的缩小，该选择可包括或者根据文献(如果有)或者通过我们自己的试验，比较不同(通常为2-4个)生产商提供的人源抗体与预期组分的反应。另一个初始指示是人源组分与预期的非人源组分之间的同源程度。

根据初始不精确但合理的假设(即，人源抗体的高反应性是预期组分的高交叉反应性的指示)，可进行搜索和/或试验。随后可以进行实际试验以确认假设，例如对人源细胞系的假设。

根据一些实施方式，本文提供了一种从动物提取初乳的方法。

根据一些实施方式，该方法可以包括：

物理方法

根据一些实施方式，物理方法可包括清洁方法，所述清洁方法可用于通过将初乳分出多个部分、丢弃含有不需要的组分的部分来浓缩和去除杂质。

根据一些实施方式，该物理方法不将初乳暴露于除初乳自身之外的组分，并且其组成基本保持不变。

根据一些实施方式，为了从初乳中净化掉所有不需要的分子，需要获知这些组分的分子大小、分子量和性质，并对应选择合适的清洁方法。

根据一些实施方式，如果两种组分的大小和物理属性相似，但一种组分是所需的，而另一种不需要，则去除杂质可能会出现问题。

根据一些实施方式，物理方法可使用电泳，根据一些实施方式，电泳可用于通过大小来分离溶液中的分子。只需知道初乳中需要的或不需要的每种组分的分子量，就可以用这种方法来清除杂质，并且只保留初乳的所需的部分。

根据一些实施方式，物理方法可使用透析，根据一些实施方式，透析可用于通过分子穿过半透膜的扩散速率从溶液中分离分子。最常用于去除小分子。

根据一些实施方式，物理方法可使用离心法，根据一些实施方式，离心法可用于根据分子大小、分子量和密度将溶液分成其多个部分。

根据一些实施方式，物理方法可使用离子色谱法，根据一些实施方式，离子色谱法可用于基于带电分子对离子交换剂的亲和力来对其进行分离。

根据一些实施方式，物理方法可以包括但不限于电泳、透析、离心法和离子色谱法。

化学方法：

根据一些实施方式，化学方法可以包括针对所需分子，将其与初乳的其余部分分离的特定清洁方法。这些方法具有更强的“侵入性”，意味着将外部组分引入初乳中，以促进所需分子与整体的分离。因此，这些方法可能会导致更复杂的调节过程，这些纯化后的分子不再被视为严格意义上的初乳。

根据一些实施方式，为应用这些方法，需要知道每个具体的目标分子具有的化学组分或至少一种化学相互作用，然后再应用合适的方法。

根据一些实施方式，这些方法需要进行额外的步骤以确保从最终产品中彻底清除任何引入到初乳中用于分离目标分子的额外组分。

根据一些实施方式，这些方法的优点是仅针对“所需的”分子，产生了应仅包含从初乳中选择的我们需要的那些组分的最终产品。

根据一些实施方式，化学方法可以采用免疫沉淀法，根据一些实施方式，免疫沉淀法可以用于使用与抗原相应的抗体与抗原结合来从溶液中分离抗原。

根据一些实施方式，化学方法可采用基于酶反应的分离方法，根据一些实施方式，基于酶反应的分离方法可用于利用特定的底物-酶相互作用，以通过例如将靶分子结合到表面来分离靶分子。

根据一些实施方式，化学方法可以采用色谱法，根据一些实施方式，色谱法可用于通过将溶液暴露于具有某种形式的结合剂的表面来从溶液中分离分子，所述结合剂利用了靶分子的特定属性。

参考图2，其示出了列明物理方法和化学方法的优点和缺点的图表。

根据一些实施方式，化学方法可以包括但不限于免疫沉淀法、基于酶反应的分离方法、色谱法(HPLC)等。

根据一些实施方式，提供了一种婴儿配方食品，包含本发明所述的组合物。

根据一些实施方式，婴儿配方食品可以包括设计和销售为喂养婴幼儿的任何适当的食品，通常由粉末(与水混合)或液体(具有或不具有额外的水)配制为通过奶瓶或杯子喂养。

根据一些示例性实施方式，本文提供了一种浓缩液，包含本发明的组合物，其中所述浓缩物适于与液态的“即食”婴儿配方食品混合。

根据一些实施方式，可以使用各种浓度的液态浓缩物，这取决于提供给婴儿的液态食物的量，例如，可需要将20mL浓缩物与100mL已制备的婴儿配方食品混合，从而提供整整120mL即食婴儿食品。

根据一些实施方式，例如，可需要将50mL浓缩物与100mL已制备的婴儿配方食品混合，从而提供整整150mL即食婴儿食品。

作为替代地，根据婴儿的年龄可以给予不同的浓度的液态浓缩物，例如：

(a)对于4周龄的婴儿，可需要将40mL浓缩物与80mL已制备的婴儿配方食品混合，从而得到整整120mL即食婴儿食品；而

(b)对于25周龄的婴儿，可需要将20mL浓缩物与100mL已制备的婴儿配方食品混合，从而提供整整120mL即食婴儿食品。

根据一些实施方式，例如：

(a)对于2至8周龄之间的婴儿，可需要将50mL浓缩物与90mL已制备的婴儿配方食品混合，从而得到整整140mL即食婴儿食品；而

(b)对于9至25周龄之间的婴儿，可需要将20mL浓缩物与100mL已制备的婴儿配方食品混合，从而提供整整120mL即食婴儿食品。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包括在个体动物之间例如牛和羊之间等的初乳的变化，以提供改良的婴儿配方食品。

根据下文详细描述的实施方式的一个方面，提供了包含提取自多种初乳的组分的组合物。所述多种初乳可以包含含量和/或活性差异显著的组分。

根据一些实施方式，术语“个体”和/或“多个个体”可以指可以获取初乳的任何适当的哺乳动物，包括例如人、野牛、家牛(例如奶牛)、山羊、绵羊；马、骆驼、野猪、水牛、牦牛、家猪、驯鹿、美洲驼、狗、羊驼等。

根据一些实施方式，初乳可以从多个非人源来源采集和汇集。然后可以处理汇集的初乳以生产适合人类婴儿食用的婴儿配方食品。

根据一些替代性的实施方式，处理第一个体的初乳，或初乳组分的含量和/或活性接近的第一组数个个体的初乳，例如来自一个农场的几头选定的奶牛的初乳，然后将加工后的产品混合与来自第二个体或第二组其他个体的其他加工后的初乳相混合，这些个体的初乳组分的含量和/或活性相似，但不同于第一组的初乳。

该处理可以包括去除选定的组分，例如通过使预加工的或未加工的初乳经过预备亲和柱，或使选定的组分发生反应从而改变其活性，这取决于该组分含量与其在乳汁中的预期含量或活性对比情况。

根据实施方式的一个方面，提供了一些产品，其是由多种汇集的初乳制成的婴儿配方食品，并且包含具有免疫原性分子的营养成分。一些实施方式包含例如促进婴儿生长和发育的额外成分，以预防疾病并提升婴儿的健康和强壮。一些实施方式可以构成具有类似于人类母乳的组分的婴儿代乳品。

特别地，实施方式包含至少一种细胞因子和至少一种抗体，例如IgA(免疫球蛋白A)，以便为新生儿提供免疫保护并保护婴儿免于疾病。

在替代的实施方式中，配方食品还来源于非野牛、非山羊和非绵羊的初乳，作为唯一或额外的初乳来源，例如，初乳的来源可以是犬。过对狗的测试显示出大多数白细胞介素与人初乳的同源性和交叉反应性高于上述任何牛。

如上简述，为了提高或降低其的免疫效力，可以清除和/或修改一些组分。特别地，这些组分可以是识别外源物质并将适当信号传递给免疫系统的杀伤细胞的toll样受体，例如存在于初乳中的TLR-2和TLR-4配体，或载脂蛋白E(ApoE)，这是一种主要的胆固醇载体，其支持脂质转运并抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-a)，从而增加免疫和总体效力。

根据一些实施方式，源自牛初乳的分子在给与人时可能会产生过敏性和/或非预期的免疫反应。根据一些实施方式，可以降低过敏性和/或非预期的免疫反应和/或进行甲基化、胶囊化、与盐分子的结合等。

根据实施方式的又一方面，本发明的所述组合物可以额外包含选自以下任意一组的一种或多种组分，例如，以进一步为婴儿提供适当的营养：

伪维生素–肌醇

维生素–烟酸(B3)、泛酸(B5)、吡哆醛、吡哆胺、吡哆醇(B6)、视黄醇(A1)、核黄素(B2)、生物素、胆碱、钴胺素(B12)、氟、叶酸、硫胺素、生育酚、维生素a、维生素b1(硫胺素)、维生素b12、维生素b2(核黄素)、维生素b3(烟酸)、维生素b5(泛酸)。维生素b6、维生素b7(生物素)、维生素c、维生素d、维生素d代谢产物、维生素d结合蛋白、维生素e、维生素e(α生育酚)、维生素k、

肽激素-胰岛素、催乳素、

蛋白质亚基-整合素αm、

肽-前激活多肽、

蛋白质-整合素β-2、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、乳凝集素、乳清蛋白、乳铁蛋白、乳运铁蛋白、亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1、富亮氨酸α-2糖蛋白-1、LIM和SH3结构域蛋白1、脂多糖结合蛋白、胰石蛋白、低亲和力免疫球蛋白γFc区受体II、淋巴细胞溶质蛋白1(L-网素)、淋巴细胞特异性蛋白1、巨噬细胞趋化蛋白1、巨噬细胞炎症蛋白1α、巨噬细胞封端蛋白、Matr3蛋白、Mgc165862蛋白、Mip-1β、也称作巨噬细胞炎症蛋白-1β、膜突蛋白、单核细胞趋化蛋白1、粘蛋白、肌球蛋白轻链多肽6、肌球蛋白调节轻链多肽9、豆蔻酰化富丙氨酸激酶c底物、中性粒细胞溶质因子2、核苷酸交换因子sil1、气味结合蛋白样、Olfm4蛋白、破骨细胞刺激因子1、骨桥蛋白、Pcyox1蛋白、Pdia6蛋白、肽聚糖识别蛋白、肽酰脯氨酰顺反异构酶a&b、过氧化物酶1、过氧化物酶4、过氧化物酶5、线粒体、磷酸载体蛋白、线粒体、色素上皮衍生因子、聚免疫球蛋白受体、多嘧啶束结合蛋白1、Pp1201蛋白、抑制蛋白1、抗增殖蛋白、抗增殖蛋白2、蛋白酶体亚基β-2型、蛋白os-9、蛋白s100-a12、蛋白s100-a4、蛋白s100-a9、蛋白脂质蛋白2、P-选择素、推定的未鉴定蛋白mgc137211、Qsox1蛋白、Rab14蛋白、Ras相关蛋白rab-1b、Ras相关蛋白rab-21、Ras相关蛋白rab-5c、Ras相关蛋白rab-7a、Ras相关蛋白rap-1b、受体表达增强蛋白5、抵抗素、视黄醇结合蛋白4、Rnase2蛋白、Rpn1蛋白、含SAM结构域和HD结构域的蛋白1、Scamp2蛋白、Scgb2a2蛋白、分泌珠蛋白、家族1d、成员2、血清转铁蛋白、Serpin a3-1、Serpina3-3(endopin 1b)、Serpina3-5、Serpina3-6、Serpina3-8、Serpinb4蛋白、Serpind1蛋白、血清白蛋白、SH3结构域谷氨酸富集样蛋白3、类似于s100的钙结合蛋白a11(s100a11蛋白)(片段)、Slc3a2蛋白、溶质载体家族3、Sparc/骨连接蛋白、cwcv和kazal样结构域蛋白多糖(睾丸蛋白聚糖)1、剪接因子3亚基1、Sqrdl蛋白、Stat1蛋白、Stefin-c、胱抑素-b(stefin-b)、cstb蛋白、Stom蛋白、Stomatin样蛋白2、14-3-3β/α蛋白、14-3-3epsilon蛋白、14-3-3γ蛋白、14-3-3theta蛋白、14-3-3zeta/delta蛋白、15kda硒蛋白、A2m蛋白、肌动蛋白、细胞质1、2、肌动蛋白相关蛋白2、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基1b、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基2、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基5、肌动蛋白相关蛋白3、肌动蛋白、α心肌1、ADAM10、腺苷酸环化酶相关蛋白1、脂联素、亲脂素、微丝切割蛋白、α-1-酸性糖蛋白、α-1-抗糜蛋白酶、α1-抗胰蛋白酶、α1b-糖蛋白、α-2巨球蛋白、α2-抗纤维蛋白溶酶、α-2-hs-糖蛋白、α辅肌动蛋白1、α辅肌动蛋白4、α乳清蛋白、α-乳球蛋白、淀粉样蛋白a、血管生成素-1、血管生成素相关蛋白4、血管紧张素原(丝氨酸蛋白酶抑制剂、分化枝a、成员8)、膜联蛋白a1、膜联蛋白a2、膜联蛋白a3、膜联蛋白a5、膜联蛋白a6、膜联蛋白a7、抗凝血酶iii、载脂蛋白aI、载脂蛋白a-iv、载脂蛋白c-iii、载脂蛋白d、载脂蛋白e、B12结合蛋白、整合素B4α6、整合素B5α、整合素B6α、整合素B7α4/lpam-1、整合素B8α、B细胞受体相关蛋白31、β-2-微球蛋白、β-细胞素(btc)、β-乳球蛋白、脑酸可溶性蛋白1、Btd蛋白、嗜乳脂蛋白、亚家族1成员a1、C5a过敏毒素受体、

钙网蛋白、Canx蛋白、酪蛋白、阳离子依赖性甘露糖6-磷酸受体、Cd177蛋白、Cd5l蛋白、Cd82蛋白、Cd9抗原、细胞分裂控制蛋白42同源物、含tcp1的伴侣蛋白、亚基5(ε)、几丁质酶3样蛋白1、网格蛋白重链1、凝聚素、丝切蛋白1、胶原凝素43、胶固素、冠蛋白1a、Cp蛋白(片段)、富含半胱氨酸的分泌蛋白2、细胞粘附素、细胞色素b-c1复合亚基2、线粒体、细胞色素c、血管扩张刺激磷蛋白、细胞色素c氧化酶子亚基4同型1、线粒体、细胞色素c1、血红素蛋白、线粒体、多萜醇二磷酸寡糖蛋白环糊精糖基转移酶亚基2、肌营养不良蛋白聚糖、含有Ef-hand结构域蛋白d2、电子转移黄素蛋白亚基β、延伸因子1-α1、延伸因子1-α2、延伸因子1-γ、延伸因子2、内质素、附睾分泌蛋白e1、E-选择素/elam-1、真核起始因子4a-I、真核翻译起始因子5a-1、埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白结合的磷蛋白50、F-肌动蛋白封端蛋白亚基α-1、F-肌动蛋白封端蛋白亚基β、因子xiia抑制剂、脂肪酸结合蛋白、脂肪细胞、脂肪酸结合蛋白、表皮、Fc受体、哺乳反馈抑制剂(fil)、胎球蛋白、纤维蛋白原γ链蛋白、纤维蛋白原α链、纤维蛋白原β链、纤连蛋白、细丝蛋白a、Fk506结合蛋白11、叶酸受体α、G蛋白偶联受体、家族c、组5、成员b、结合IgE的半乳糖特异性凝集素、Ganab蛋白、凝胶溶素、糖蛋白2(酶原颗粒膜)、糖基化依赖性细胞粘附分子1、磷脂酰肌醇蛋白聚糖1、Gnai2蛋白、粒细胞集落刺激因子、人α-乳清蛋白、Haptocorrin、结合珠蛋白、热休克70kda蛋白1a、1b、热休克同源物71kda蛋白、热休克蛋白β-1、热休克蛋白hsp 90-α、热休克蛋白hsp 90-β、热休克蛋白、线粒体、造血细胞-特定lyn底物1、血红素结合蛋白1、血红蛋白亚基α、血红蛋白亚基β、血红素结合蛋白、异质核核糖核蛋白a/b、异质性胞核核糖核蛋白a1、异质性胞核核糖核蛋白d、异质性胞核核糖核蛋白h2、异质性胞核核糖核蛋白、异质性胞核核糖核蛋白10a2/b1、冬眠蛋白20样、高迁移率族蛋白b2、富含组氨酸的糖蛋白、组蛋白h1.1(片段)、组蛋白h2a、组蛋白h2a1型、组蛋白h3.3、组蛋白h4、Endopin 2、2b、Endopin 2c、T复合蛋白1亚基δ、四连接素、Tgoln2蛋白、硫氧还蛋白、Tmed7蛋白、转化蛋白rhoa、含跨膜emp24结构域的蛋白10、转甲状腺素蛋白、微管蛋白α-1b链、原肌球蛋白α-3链、微管蛋白β-2c链、β-5链、波形蛋白、泛素、Upf0527跨膜蛋白、超长链特异性酰基辅酶a脱氢酶、线粒体、Vla、Vla-1、Vla-2、Vla-3、Vla-4、Vla-5、Vla-6、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1、Wap四二硫键核心结构域2、Wd重复蛋白1、Yip1结构域家族、成员3、斑联蛋白、α乳白蛋白、α-s1酪蛋白、β酪蛋白。化合物-补体c1、补体c1s亚组分、补体c2、补体c3、补体c4、补体c4(片段)、补体c5、补体c6、补体c7、补体c8、补体c9、补体因子b、补体因子h、补体因子i白介素-Il1、Il10、Il12、Il13、Il16、Il1β、Il2、Il20、Il3、Il4、Il5、Il6、Il7、Il8糖蛋白-血小板糖蛋白4、Tap相关糖蛋白、单核细胞集落刺激因子、血小板生成素、玻连蛋白、锌-α-2-糖蛋白肿瘤坏死因子：Tnf-α、Tnf-β糖类-乳糖、麦芽糖、单糖、低聚半乳糖、低聚乳糖、低聚糖、多糖淀粉、蔗糖、反式低聚半乳糖。

免疫球蛋白–细胞间粘附分子1、细胞间粘附分子2、细胞间粘附分子3、Siga(1和2)、免疫球蛋白a、免疫球蛋白a2、免疫球蛋白d、免疫球蛋白e、免疫球蛋白g、免疫球蛋白g1、免疫球蛋白g2、免疫球蛋白m。

矿物质和金属——碘、铁、镁、锰、钼、镍、磷、钾、硒、钠、硫、钙、氯化物、铜、钴、铬、锌。

酶-异柠檬酸脱氢酶[nadp]、细胞质、异柠檬酸脱氢酶[nadp]、线粒体、乳过氧化物酶、L-天冬酰胺酶、脂肪酶、L-丝氨酸脱水酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶、细胞质、苹果酸脱氢酶、线粒体、微粒体谷胱甘肽s-转移酶1、髓过氧化物酶、Nadh-细胞色素b5还原酶3、中性粒细胞、弹性蛋白酶、核酸酶敏感元件结合蛋白1、核苷二磷酸激酶a2、Paf-乙酰水解酶、磷酸酶、磷酸甘油酸激酶1、磷酸甘油酸变位酶1、前列腺素-h2 d-异构酶、蛋白质二硫键异构酶、蛋白质二硫键异构酶a3、蛋白质二硫键异构酶a4、凝血酶原、丙酮酸激酶、核糖核酸酶、胰核糖核酸酶、核糖核酸酶uk114、核糖磷酸焦磷酸激酶1、

丝氨酸蛋白酶、钠/钾转运ATP酶亚基α-1、超氧化物歧化酶、伯胺氧化酶、肝同工酶、腺苷高半胱氨酸酶、腺苷酸激酶同工酶2、线粒体、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、3-羟酰基辅酶a-2型脱氢酶、乌头酸水合酶、线粒体、Adp/atp转位酶2、Adp/atp转位酶3、醛脱氢酶、线粒体、α-1-抗蛋白酶、淀粉酶、α-烯醇化酶、抗蛋白酶、天冬氨酸氨基转移酶、线粒体、Atp合酶蛋白8、Atp合酶亚基α心异构体、线粒体、Atp合酶亚基β、线粒体、Atp合酶亚基δ、线粒体、Atp合酶亚基e、线粒体、Atp合酶亚基γ、线粒体、Atp合酶亚基o、线粒体、二肽基肽酶1、芳基硫酸酯酶、β-1,4-半乳糖基转移酶1、钙蛋白酶小亚基1、过氧化氢酶、组织蛋白酶b、组织蛋白酶d、组织蛋白酶h、组织蛋白酶s、组织蛋白酶z、柠檬酸合酶、线粒体、肌酸激酶b型、胞质氨肽酶、胞质非特异性二肽酶、烯酰辅酶a水合酶、线粒体、脂肪酸合酶、黄素还原酶、果糖二磷酸醛缩酶1和2、延胡索酸水化酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、葡萄糖苷酶2亚基β、谷氨酸脱氢酶1、线粒体、谷胱甘肽过氧化物酶1、谷胱甘肽s-转移酶p、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、糖原磷酸化酶、肝型、硫酸乙酰肝素(氨基葡萄糖)3-o-磺基转移酶1、组胺酶、硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、线粒体、转醛缩酶、过渡内质网磷酸酶、转酮酶、磷酸丙糖异构酶、色氨酰-tRNA合成酶、细胞质、泛素样修饰激活酶1、V型质子ATP酶催化亚基a、黄嘌呤脱氢酶/氧化酶、Utp葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶。

氨基酸——亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸。脯氨酸、丝氨酸、一磷酸腺苷(5”-amp)、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、肉碱、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、羟脯氨酸、牛磺酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸。

抑制分子-间α-胰蛋白酶抑制剂化合物组分II、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h1、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链h4。

激肽原-1、2、白细胞弹性蛋白酶抑制剂、巨噬细胞迁移抑制因子、Rho gdp-解离抑制剂1&2、血清转铁蛋白样、脾胰蛋白酶抑制剂I、细菌-鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌(乳酸杆菌)。

酸-乳酸、月桂酸、瘤胃酸(cla)、α-羟基酸。脂质–乳糖神经酰胺、甲基甾醇、磷脂酰肌醇、多不饱和脂肪、前列环素、前列腺素、鞘脂、鞘磷脂、血栓素、β羊毛甾醇。

磷脂–磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、缩醛磷脂、细胞–白细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤(nk)细胞、中性粒细胞、吞噬细胞嗜碱性粒细胞、B淋巴细胞、也称b细胞、树突状细胞、嗜酸性粒细胞、白三烯、T淋巴细胞(也称t细胞)。

细胞粘附分子-L-选择素、Madcam-1、Pecam-1、Vcam。

细胞部分-Lamin-B1前体、溶血磷脂酰乙醇胺、Nadh脱氢酶[泛醌]1α亚复合亚基8。

甾醇–羊毛甾醇、柱头和菜油甾醇、7-脱氢胆固醇、7-酮胆固醇、胆固醇。

激素和类固醇——瘦素、催产素、皮质酮、皮质醇、二甲基甾醇、类花生酸、胃饥饿素、促性腺激素释放激素(gnrh)、甲状腺释放激素、促甲状腺激素、甲状腺素、三碘甲状腺原氨酸。

生长因子-表皮生长因子(egf)、成纤维细胞生长因子1(fgf1)、成纤维细胞生长因子2(fgf2)、成纤维细胞生长因子结合蛋白1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、生长/分化因子8、胰岛素样生长因子1和2、胰岛素样生长因子结合蛋白7、转化生长因子β(tgf-β)。

核糖体蛋白-40s核糖体蛋白s3、40s核糖体蛋白sa、60s酸性核糖体蛋白p0、60s酸性核糖体蛋白p2、60s核糖体蛋白l12、60s核糖体蛋白l4、60s核糖体蛋白l5、60s核糖体蛋白l8。

过敏原：过敏原bos d 2

抗原-Lewis抗原a&b、淋巴细胞功能相关抗原1、Mhc抗原重链(片段)、Mhc ii类抗原、seq 1和2、Mhc ii类dr-α(片段)、单核细胞分化抗原cd14、非典型mhc i类抗原(片段)、蛋白酶体激活化合物亚基1&2、Scd14、Thy-1细胞表面25抗原、过敏原bos d 2。

色素(类胡萝卜素)-β-隐黄质、玉米黄质、β-胡萝卜素。

脂肪-饱和脂肪

脂肪酸-亚油酸(la)、单不饱和脂肪、肉豆蔻酸、十八碳二烯酸、油酸、棕榈酸、棕榈烯酸、十八碳四烯酸、硬脂酸、硬脂四烯酸(sda)、二十二碳五烯酸、癸酸(羊蜡酸)、二高-γ-亚麻酸(dgla)、二十二碳二烯酸、二十二碳六烯酸(dha)、二十碳二烯酸、二十碳五烯酸、二十碳四烯酸、二十碳四烯酸、二十碳三烯酸、芥酸、二十碳烯酸、γ-亚麻酸、红细胞糖苷酯(gb4)、二十碳五烯酸、十七碳烯酸、十六碳三烯酸、己酸(羊油酸)、肾上腺酸、花生酸、花生四烯酸、抗坏血酸、天冬氨酸、丁酸、金盏花酸、辛酸。二十四碳六烯酸(鲱油酸)、二十四碳五烯酸、十四碳烯酸、甘油三酯。α-亚麻酸(ala)抗体和抗菌剂-β-2-糖蛋白1、β-防御素11、12、13、抗菌肽(Cathelicidin)-1、抗菌肽-2、抗菌肽-4、抗菌肽-5、抗菌肽-6、抗菌肽-7、Cr6261、Fi6、血凝素抑制剂。

基因-脂蛋白脂肪酶、肌营养素、核连蛋白1&2、Pafah1b1蛋白、Ras同源基因家族、成员g(rho g)、丝氨酰tRNA合成酶、细胞质、蛋白质编码媒介-Loc511106蛋白质、Loc788112蛋白质。

类胡萝卜素-叶黄素、番茄红素。

受体-肾素受体、玻连蛋白受体。

趋化因子-基质细胞衍生因子4、Ccl11(嗜酸性粒细胞活化趋化因子-1)、Cxcl10、Ccl2，也称作mcp-1、Ccl24(嗜酸性粒细胞活化趋化因子-2)、Ccl26(嗜酸性粒细胞活化趋化因子-3)、Ccl5(rantes)。

碳水化合物：纤维素、链甾醇、二糖、果糖、低聚半乳糖、半乳糖、氨基葡萄糖、葡萄糖、葡萄糖神经酰胺、糖原、鸟苷二磷酸甘露糖、人乳低聚糖、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、尿苷二磷酸、尿苷二磷酸己糖、尿苷二磷酸-n-乙酰己糖胺、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸、尿苷25单磷酸盐(3'-ump)、尿苷单磷酸盐(5'-ump)。

微生物增效剂-双歧因子。

含氮有机酸：肌酸、肌酐。

信号分子：环磷酸腺苷(3':5'-cyclic amp)核苷酸：胞苷一磷酸(5'-cmp)、鸟苷二磷酸。

糖脂/鞘糖脂：半乳糖神经酰胺、神经节苷脂、酰基鞘鞍醇三己糖(gb3)、糖鞘脂、Gm1、Gm2、Gm3。

神经递质：内啡肽2、2b、内啡肽2c。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包括源自多个物种(例如绵羊、山羊和奶牛)的初乳的多个分子。已知由于处于大致相同的环境，处于某一场所的动物的初乳可至少部分地彼此相似。因此，在一些实施方式中，可以刻意从相距很远的场所采集单个物种的个体的初乳，以便获得不同的初乳。

使用组合物增强老年人和/或免疫系统受损的人的免疫系统

根据一些实施方式，老年人群和免疫系统受损的人群在暴露于有害微生物时往往容易生病。

根据一些示例性实施方式，本文提供了一种包含角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)的组合物，例如，以特异性靶向老年人和/或免疫系统受损个体的易患疾病，例如普通感冒等。

根据一些示例性实施方式，所述组合物还可以包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

根据一些示例性实施方式，术语“老年人”、“老年群体”可以指通常年长的人，他们往往比年轻的成年人更易遭受疾病、综合症、损伤和病痛的困扰。

根据一些示例性实施方式，术语“免疫系统受损的个体”或“免疫系统功能减弱的个体”可以指免疫系统非正常运作且不能有效保护其免受感染的人。某些条件和药物会削弱或损伤免疫系统。这可包括：酒精或药物滥用或停药；某些疾病或病症，例如糖尿病、癌症、艾滋病毒/艾滋病，或身体误将其自身组织识别为有害的(自身免疫性疾病)等；化学疗法或放射疗法；使用某些药物，例如皮质类固醇或器官移植后用于抑制免疫系统的药物；脾脏切除手术(脾切除术)；等等。

根据一些示例性实施方式，促炎组分的特定使用实现了出乎意料的有益效果。根据一些实施方式，通常优选避免老年人和/或免疫系统受损的个体出现炎症，然而，由于使用促炎免疫组分对抗病原体，本发明的组合物实现了有益的免疫刺激作用。

根据一些实施方式，在受损的免疫系统中，细胞因子可能难以局部地和/或系统地起作用以引发、维持和消除炎症反应。

根据一些实施方式，在促炎细胞因子、抗炎细胞因子和先天性细胞因子抑制剂之间的相互作用可以决定炎症反应及其有效性。根据一些实施方式，由于免疫系统的削弱或受损状态，细胞因子的使用可能尤为有益。

根据一些实施方式，肿瘤坏死因子-(TNF-)和白介素-6(IL-6)可优选地用于通过激活细胞因子瀑布级联和产生其他促炎细胞因子和趋化因子来加强免疫反应。

根据一些实施方式，促炎分子还可以募集MAST细胞和补体系统，例如，进一步增强免疫刺激作用，例如，通过增强对病原体的攻击。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以包含多种促炎分子。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可用于增强老年个体和/或免疫系统受损个体的免疫系统，例如，通过提供免疫刺激作用来实现。

根据其他实施方式，本发明的组合物可以与食物和/或饮料混合。

根据一些实施方式，本文提供了一种强化免疫功能的食品，包含本文描述的组合物。根据一些实施方式，配方食品可以通过为个体提供更好的保护，例如预防疾病、增强免疫机制、刺激免疫系统等来刺激老年个体和/或免疫系统受损的个体的免疫系统。

根据一些实施方式，本文提供了包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合物的用途，用于增强老年个体和/或免疫系统受损的个体的免疫系统。

根据一些实施方式，该用途可以包括向老年个体和/或免疫系统受损的个体给与一定剂量的组合物。

根据一些优选实施方式，该用途可以包括在特定时间段给与该组合物，例如，在老年个体和/或免疫系统受损的个体可能更容易感染传染病的时间，例如，冬季，在住院和/或其他医疗程序之前，在接触有害病原体之前或期间等。

根据一些实施方式，该用途可以包括向老年个体和/或免疫系统受损的个体给与初始负荷剂量以及继续给与维持剂量。

根据本发明的其他实施方式，该用途可以包括向老年人和/或免疫系统受损的个体给与至少每日一剂本发明的组合物，例如，以提供长效保护和/或增强免疫系统抵抗有害病原体。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以为微胶囊包装，例如，以保护组合物免于受胃肠道中的有害条件和/或能够控制或延迟释放组合物的组分。

根据一些示例性实施方式，本发明的所述组合物可以为任何合适的状态和/或形式，以便最佳地与食品混合，包括例如液态、粉末、颗粒等。

根据一些实施方式，本发明的组合物可额外地包括两种或以上源自至少两种不同初乳的分子，例如，源自第一初乳的第一分子和源自第二初乳的第二分子。

在整个说明书中详述了用于制备组合物、提取初乳及其组合物的方法。

使用组合物增强运动员的免疫系统和/或减少炎症

耐力项目运动员，例如参加跑步、自行车赛、游泳和铁人三项的个人比赛项目的运动员，每周都会进行数小时的有氧运动训练。耐力训练依赖于骨骼肌使用氧气，以为这些活动提供能量。这种训练的氧化性质可提高自由基的产生，自由基具有高反应性，因而需要抗氧化防御以保护细胞免于受到自由基损伤。这种对细胞的潜在损伤称为氧化应激，并且可导致免疫系统产生炎症反应以保护宿主组织。

本文所使用的术语“运动员”可以指从事体力活动、运动、健身等的任何人。

大量证据表明，高强度或长时间的耐力训练负荷会刺激自由基增加和氧化应激升高。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可适于运动员口服，包含一种或多种减轻炎症的组分的组合。

根据一些示例性实施方式，本文提供了包含角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)的组合物，例如，以针对性地减小运动员的炎症。

根据一些示例性实施方式，该组合物还可以包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可以进一步包含来自初乳的一种或多种组分和/或全初乳，例如来自合成的、人源和/或动物源，例如，以减轻运动员的关节、韧带和肌肉的炎症和疼痛。

根据一些实施方式，本发明的组合物可额外地包括两种或更多源自至少两种不同初乳的分子，例如，源自第一初乳的第一分子和源自第二初乳的第二分子。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可以包括角蛋白化合物、β-乳球蛋白(LGB)、抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的特定组合，例如，以针对性地减轻炎症，例如，由体力活动或锻炼引起的炎症。

根据一些实施方式，术语“减轻炎症”(本文也称为“炎症的减轻”)可包括但不限于缩短炎症持续时间、降低炎症标志物等。

根据一些示例性实施方式，促炎组分的特别使用实现了出乎意料的有益效果。根据一些实施方式，通常优选避免运动员出现炎症，然而，由于使用促炎免疫组分对抗病原体，本发明的组合物实现了有益的免疫刺激作用。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可用于增强运动员的免疫系统，例如，通过提供免疫刺激作用来实现。

根据其他实施方式，本发明的组合物可以与食物和/或饮料(包括例如供运动员食用的奶制品和/或奶昔)、食物产品等混合。

根据一些实施方式，本文提供了强化免疫功能的运动员配方食品，包含本文描述的组合物。

根据一些实施方式，配方食品还可以包含重要的氨基酸和脂肪酸，以及肌肉生长和食欲调节剂。

根据一些实施方式，本发明的组合物还可以包括两种或更多源自至少两种不同初乳的分子，例如，源自第一初乳的第一分子和源自第二初乳的第二分子。

使用组合物增强动物的免疫系统

与人类非常相似，动物易于感染疾病。

人畜共患病(也称为动物传染病和动物源性疾病)是由在动物(通常是脊椎动物)之间传播的细菌、病毒和寄生虫引起的传染病。

人畜共患病具有不同的传播方式。在直接人畜共患病中，疾病通过空气(流行性感冒)或通过叮咬和唾液(狂犬病)等媒介直接从动物传播给人类。反之，也可通过中间物种(称为带菌者)传播，该中间物种携带疾病病原体而不被感染。当人类感染动物时，称为反向人畜共患病或人类传染性疾病。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可适于动物口服，包含增强动物免疫系统的一种或多种组分的组合。

根据一些示例性实施方式，本文提供了包含角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)的组合物，例如，以针对性地增强动物的免疫系统。

根据一些示例性实施方式，组合物还可以包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可以进一步包含来自初乳和/或全初乳(例如来自合成的、人源和/或动物源的)的一种或多种组分，以例如协同增强动物的免疫系统。

根据一些实施方式，本发明的组合物还可以额外地包括两种或更多源自至少两种不同初乳的分子，例如，源自第一初乳的第一分子和源自第二初乳的第二分子。

本文所使用的术语“动物”可以指形成生物中动物界的任何生物。优选地，本文所用的术语“动物”是指家畜，例如小牛、羔羊和马驹；动物园动物；和家养动物，例如幼狗、幼猫以及猫和狗。

根据一些示例性实施方式，促炎组分的特别使用实现了出乎意料的有益效果。根据一些实施方式，通常优选避免动物出现炎症，然而，由于使用促炎免疫组分对抗病原体，本发明的组合物实现了有益的免疫刺激作用。

根据一些实施方式，以上公开的算法可包括对两种或多种蛋白质组合的有效免疫刺激作用的概率的评估。

具体地，该算法可以计算在两种或多种蛋白质之间的相容性程度，例如，通过此，“相容性”涉及当将两种或多种蛋白质组合时增强的和/或协同的免疫刺激作用。

根据一些实施方式，例如，该算法可以包括基于蛋白质(例如，该蛋白质在动物中具有免疫刺激作用)的同源性水平的比较来评估蛋白质的有效免疫刺激作用的概率。

根据一些示例性实施方式，本发明的组合物可用于增强动物的免疫系统，例如，通过提供免疫刺激作用来实现。

根据一些实施方式，本发明的组合物可以与食品和/或饮料混合，包括例如供给动物的含水食物制品和/或干食物制品、饮用水等。

根据一些实施方式，本文提供了强化免疫功能的动物配方食品，包含本文描述的本发明的组合物。

实施例

实施例1

A部分——蛋白质定量

方法

样本在4℃下解冻。由于样本含有脂肪，因此在处理样本前不进行离心。在涡旋后进行取样，即含有颗粒和脂肪的乳汁样本。

样本制备：

A.乳汁样本：每个样本取样两次并溶解在两种不同的溶液中：

1、将10uL溶解在40uL样本缓冲液中，其中包含：Tris-HCl、甘氨酸、SDS、2-巯基乙醇和痕量BPB，最终浓度为63mM Tris-cl 6.8、10％甘氨酸、2％SDS和1％2-巯基乙醇。将样本进行涡旋混合，在(95℃，10')下煮沸并在(-80℃)下冷冻。

2、从每个乳汁样本中取50uL与尿素、碳酸氢铵(ABC)和二硫苏糖醇(DTT)混合，最终浓度为8M尿素、100mM ABC和10mM DTT。将样品进行涡旋混合并离心(10'，10000rpm，RT)，以尽可能地将脂肪与蛋白质分离。(在下表3-4中标记为U)。用含有8M尿素、100mM ABC和10mM DTT的尿素缓冲液以1:1的比例稀释20uL“脂肪透明(fats clear)”样本。(在下表3-4中标记为UD)。

B.商业产品：

从每种产品中抽取约1.5-3mg粉末样本并溶解在含有以下组分的样本缓冲液中：63mM Tris-cl 6.8、10％甘氨酸、2％SDS、1％2-巯基乙醇和痕量BPB，浓度为2ug/uL。将样本进行涡旋混合，在(95℃，10')下煮沸，超声处理直到完全溶解，并在(-80℃)下冷冻。

蛋白质定量：(表#3-4)从每个“脂肪透明”尿素稀释样本中取出1uL，使用BradfordAssay进行蛋白质定量。注意：A.蛋白质浓度高于10ug/uL时，不会得到线状模式，因此结果不准确。B.脂肪会导致读数出现偏差。

结果

通过尿素稀释样本分析的蛋白质定量见下表：

表3：乳汁样本–G1

表4：乳汁样本–G2

表5：乳汁样本–G3

表6：乳汁样本–G4

注：排除样本125HZ4–序列号54817。将用样本257IK4替代，并标记为54817B

表7：乳汁样本–G5

表8：乳汁样本–G6

注：该组中的样本含有大量脂肪，需要重复读数。样本54849-50显示较大波动。

参考图3，示出了蛋白质浓度偏差相对于婴儿年龄的图表。

B部分——蛋白质鉴定

方法

含有样本缓冲液的乳汁和商业产品样本在室温下解冻。

A.根据下表，从每个乳汁样本中取2μL进行混合：

表9：

将2-巯基乙醇添加到每个混合物中，最终浓度为1％，然后将混合物进行涡旋混合，在(95℃，10')下煮沸并加入到4-15％

TGX预制凝胶(Bio-Rad,Cat#456-1084)。

B.每个商业产品样本在(95℃，10')下煮沸，并取15uL加到上述凝胶上。

在前端染料达到约95％的泳道长度后停止电泳。凝胶用PIERCE的Imperial蛋白质染色溶液染色。

现参考图4，其示出了样本制备结果，蛋白质凝胶。

在Ff中，每个泳道被分成3个切片：>80KDa，80-25KDa。

凝胶中的蛋白质在100mM碳酸氢铵[ABC]中用3mM DTT还原(60℃ 30分钟)，在100mM ABC中用10mM碘乙酰胺改性(避光，室温下30分钟)并在10％乙腈中分解，10mM ABC和10mM CaCl₂与改性胰蛋白酶(Promega)以1:10的酶与底物比例，在37℃下放置一夜。再进行4小时的额外的第二次分解。使用C18吸头(自制阶段吸头)对所得肽进行脱盐，并进行LC-MS-MS分析。在填充有Reprosil反相材料(Maisch GmbH博士，德国)的0.075×300-mm熔融石英毛细管(J&W)上通过反相色谱分离肽。对以上物质用5％至28％的线性梯度洗脱120分钟、28％至95％的梯度洗脱15分钟和95％乙腈和0.1％甲酸水溶液以0.15μL/min的流速洗脱15分钟。由Q Exactive plus质谱仪(Thermo)在正模式下通过重复的全MS扫描进行质谱分析，然后对从第一次MS扫描中选出的10种主要离子进行高碰撞解离(HCD)。使用MaxQuant软件V1.5.2.8(Mathias Mann小组)分析质谱数据，与Uniprot数据库的人类和牛的部分内容以及NCBI-Nr数据库的山羊部分内容对比，FDR为1％。使用Perseus V 1.5.2.4软件(MathiasMann小组)对鉴定和定量结果进行统计分析。所有强度(强度、IBAQ和LFQ强度)均基于log2表示。基于相等的乳汁体积进行人体样本的归一化。基于相等的重量体积比进行商业产品样本的归一化。

鉴定结果A部分

不同年龄组人体母乳的统计分析：

对列表1razor+独有多肽和3ms/ms鉴定的所有蛋白质进行统计分析。结果表明不同年龄组的蛋白质模式存在明显差异。在所有年龄组之间进行了ANOVA测试，最终337种蛋白质发生显著变化，p值为0.05。结果表明，G1-G2、G3-G4和G5-G6组具有高度相似性，但又不尽相同。

对第1组强度(G1)到第2-6组强度(G2-G6)进行学生t检验(Student’s t-test)。将以0.05的p值和+/-1差异变化的蛋白质进行着色。G1时蛋白质表达增加(正差值)以粗重颜色标记。G1时蛋白质表达降低(负差值)以轻淡颜色标记。在所有组中具有增加/减少显著变化的蛋白质在“Fasta Headers”列中分别以棕色和绿色标记。在列表1组中具有增加/减少显著变化的蛋白质在“基因名称”列中分别以棕色和绿色标记。(也用红色标记-例外情况)。使用“STRING-DB”软件对这些结果进行生物信息学分析。结果在“STRING-Go annotations-human”文件中显示。

鉴定结果B部分-不同年龄组人体母乳与牛&山羊来源的商业产品对比的统计分析

鉴定来源于不同生物体的所有蛋白质都合并到一张名为“55711-85-human-bovine-capra-B”的图表中。创建附加图表“55711-85-human-bovine-capra-IG”，其仅包含免疫球蛋白。示出的IBAQ值能够基于内部样本组成进行归一化。

现参考图5-7，其分别示出了初乳中的人体蛋白质和牛蛋白质之间的同源性。

图5示出了存在于人体初乳中的人体蛋白质(如G1表所示)与牛初乳中存在的牛蛋白(如G2表所示)对比情况。

蛋白质的英文缩写如下：

XDH＝黄嘌呤脱氢酶

PIGR＝聚免疫球蛋白受体

LTF＝乳运铁蛋白

ALB,LALBA＝白蛋白

KRT…＝角蛋白

FASN＝脂肪酸合酶

CSN…＝κ酪蛋白

CEL＝羧酸酯脂肪酶

IG…＝抗体

LYZ＝溶酶体

图6示出了存在于人体初乳中的人体蛋白质(如G3表所示)与牛初乳中存在的牛蛋白(如G4表所示)对比情况。

蛋白质的英文缩写如下：

XDH＝黄嘌呤脱氢酶

PIGR＝聚免疫球蛋白受体

LTF＝乳运铁蛋白

ALB,LALBA＝白蛋白

KRT…＝角蛋白

FASN＝脂肪酸合酶

CSN…＝κ酪蛋白

CEL＝羧酸酯脂肪酶

IG…＝抗体

LYZ＝溶酶体

图7示出了存在于人体初乳中的人体蛋白质(如G5表所示)与牛初乳中存在的牛蛋白(如G6表所示)对比情况。

蛋白质的英文缩写如下：

XDH＝黄嘌呤脱氢酶

PIGR＝聚免疫球蛋白受体

LTF＝乳运铁蛋白

ALB,LALBA＝白蛋白

KRT…＝角蛋白

FASN＝脂肪酸合酶

CSN…＝κ酪蛋白

CEL＝羧酸酯脂肪酶

IG…＝抗体

LYZ＝溶酶体

初乳纳米颗粒：

目的：制备初乳蛋白纳米颗粒。

方法：

1、初乳粉末的特性鉴定：4种商品初乳按A到D标记，并记录了生产商的成分说明。A-Surthrival(28％脂肪、45％蛋白质、糖)。B-Immune tree(无脂质、60％蛋白质)。C-Symbiotics(卵磷脂和甘油三酯、60％蛋白质、30％糖)。D-California gold nutrition(不含脂质、35％蛋白质)。每种初乳称取1g并溶解在纯净水(20mL)中并搅拌一夜。然后将液体以4000rpm离心30分钟，将上清液转移到新试管中，在4℃下以7500rpm进行第二次离心15分钟。通过醋酸纤维素滤器(0.45um)过滤上清液，然后冷藏并冻干。通过280nm处的UV吸光度、UV全光谱、质量产率和元素分析来对产物进行分析。

用牛血清白蛋白(BSA)作为纯蛋白质对照进行相同的操作流程。

2、纳米粒子制备

将60mg每种分离的初乳配方食品溶解在1.5mL纯净水中。每个样品的pH值约为7。然后将pH调至5.5。

将人血清白蛋白(BSA 60mg)溶解在1.5mL纯净水中，用作常见蛋白质对照。

将另外1.5mg每种材料添加到其溶液中作为核生长剂，并在室温下搅拌15分钟，然后以1mL/分钟的速度添加8mL乙醇(96％)，以形成颗粒，同时在室温下以500rpm搅拌。最后，分别在110℃或105℃下稳定15分钟和10分钟。在室温下搅拌颗粒溶液至冷却，然后通过以4000rpm离心15分钟进行纯化。使用干燥器干燥颗粒。

3、颗粒特性鉴定：

3.1质量产率：称重空离心管，并且还与干燥的颗粒一起称重。通过差值计算各种颗粒的总量。

3.2离散度和粒径：将2mg各种颗粒分散到2mL纯净水中并进行涡旋搅拌24小时。然后，向各溶液中加入2mL纯化水并转移到超声波仪中处理30分钟。添加6mL水，以使比例达到1∶5(mg样品∶水)并再次通过超声分散处理15分钟。使用DLS ZetaSizer(Malvern)测量分散后的溶液的粒径。

结果：

1、初乳特性鉴定

·蛋白质部分的定量：计算溶解、过滤和冻干的量与初始量相比的百分比，并在表10中列出。产率最高的是D型。

产品类型	最终分离出的重量(g)	％w/w
			A	0.738	74
B	0.652	65
			C	0.715	71
D	0.752	75
			BSA	0.932	93

表10：对于每种产品类型，分离的组分相对于初始量(1g)的质量产率。

·紫外吸光度：通过分光光度计测量每个过滤溶液在280nm处的吸光度，确定蛋白质含量(表11)。在纯化水中浓度范围为0.25-1.5mg/ml且R^2为0.99条件下，根据BSA校准曲线计算浓度。此后，在该分析中，进行了与该量相关的％w/w的加权转化。所有初乳溶液的紫外吸光度均高于100％w/w。这意味着存在另一种吸收相同波长的因子，这种因子不存在于白蛋白溶液中。或者白蛋白的组成与初乳的蛋白质差异较大。

产品类型	A(280nm)	％w/w
			A	0.705	233
B	0.591	198
			C	0.81	272
D	0.542	174
			BSA	0.292	97

表11：分离的初乳溶液在λ＝280nm处的吸光度和重量百分比。

·元素分析：分析分离产物以确定每个样品中C、H、N和O百分比，并计算氮碳比以进行归一化(表12)。理论上，蛋白质中N∶C的比值是0.3。

表12：分离样品的C、H、N和O的元素组成，以及计算的N与C比率。

正如预期一样，BSA的百分比与理论值最接近，并且N∶C比率相同，因为其是一种纯蛋白质。初乳B和C的比率与理论蛋白质更接近，而A和D则相差较大。

2、颗粒特性鉴定：

·质量产率：认为产生的颗粒量与用于制备颗粒的初始量有关(60mg-不能超过60mg，因为乙醇的量大，制备步骤速度慢。)。结果在表4中示出。

·分散能力：将干燥的颗粒重新分散在纯净水中，然后进行涡旋混合和超声处理。D样本(105℃)的分散效果最好。参考下表13。105℃下稳定处理的初乳D的百分率和分散能力最好。一些BSA颗粒堆积在小瓶壁上，因此制备过程的质量百分比较低。

颗粒类型	％w/w	重新分散
			A(100C)	34.89	中等
B(100C)	36.64	差
			C(100C)	41.5	中等
D(100C)	43.57	优
			BSA(100C)	*14.3	中等
A(105C)	39.53	优
			B(105C)	42.99	------
C(105C)	-----	------
			D(105C)	51.21	优
BSA(105C)	30.2*	中等

表13：在100℃和105℃稳定处理的颗粒重量百分比和分散能力。(105℃下小瓶中B和C样本在过程中破裂。*关于BSA，其大量堆积在小瓶壁上。)。

·粒径：每个样本的平均粒径的总结在表14中。初乳D(105℃)的平均粒径(526nm)和PDI值(0.566)的结果是最好的。

表14：通过ZetaSizer检测的分散处理后样本的粒径。

通过变性方法制备颗粒并在100℃或105℃进行稳定处理。

结论：

为了形成纳米颗粒，测试了四种初乳类型。第一步，通过从混合物中选择溶解的部分，从混合物中提取蛋白质部分。D型具有较高质量产率(75％)。生产商报告D产品中蛋白质含量为35％。因此，溶解的部分应该除蛋白质之外还含有另一种成分，这可能是糖类。一般来说，所有类型的初乳在溶解部分中的质量产率都高于生产商报告的量，而脂肪成分(A型和C型)预计不溶于水。所有初乳类型均在280nm波长处有吸收，这表明存在蛋白质成分，但吸光度比BSA高得多，这表明包含不同成分和缀合氨基酸组成。此外，BSA不适用于对初乳中蛋白质成分进行定量。鉴于氮与碳的元素比例，根据生产商报告的B和C中蛋白质含量为60％，与A和D相比，我们得到的结果与理论值更接近，报告的A和D的蛋白质含量较低，且N:C比较低。结果，根据我们的发现，发现初乳D的质量产率最高，但在分离的部分中除蛋白质外，还可能包含百分比比B和C高得多的其他成分。

关于通过变性方法制备颗粒和通过加热进行稳定化，我们没有获得小的纳米颗粒，但D在105℃下加热稳定10分钟后的结果是最好的，颗粒制备中的产率百分比更高，为51％w/w，在水中分散良好，预成型平均粒径为526nm。一般来说，与加热到100℃的样本相比，加热到105℃的样本在水中的再分散效果更好。

可以检查变量如溶液pH值、加热温度、加热时间和混合速度以获得适当的结果，例如粒径较小和多分散性降低。因此，很有希望可以继续研究并获得初乳纳米颗粒。

初乳颗粒制备流程：

蛋白质提取：

每种市售初乳称取1g并溶解在纯净水(20mL)中并搅拌一夜。然后将液体以4000rpm离心15分钟，将上清液转移到新试管中，在4℃下以7500rpm进行第二次离心15分钟。通过醋酸纤维素滤器(0.45um)过滤上清液，然后冷藏并冻干。

颗粒制备：

将60mg每种分离的初乳配方食品溶解在1.5mL纯净水中。每个样品的pH值约为7。然后将pH调至5.5。使用自动注射器，将另外1.5mg每种材料添加到其溶液中作为核生长剂，并在室温下搅拌15分钟，然后以1mL/分钟的速度添加8mL乙醇(96％)，以形成颗粒，同时在室温下以500rpm搅拌。最后，分别在100℃或105℃下稳定15分钟和10分钟。在室温下搅拌颗粒溶液至冷却，然后通过以4000rpm离心15分钟进行纯化。在真空条件下干燥粒料。

如前文详述，根据一些示例性实施方式，本发明提供了一种包含角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)的组合物。

根据一些示例性实施方式，所述组合物还可以包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

根据一些附加实施方式，所述组合物还包含初乳。

根据一些实施方式，初乳的形式是初乳纳米颗粒。

实施例2

我们已经确定了在免疫系统中具有抗炎功能的关键蛋白质。已鉴定的所述蛋白质包括：乳铁蛋白、α-乳清蛋白、CD59。我们已将这些蛋白质(乳铁蛋白、α-乳清蛋白和CD59)添加到β-乳球蛋白和KRT1的复合物中，以产生用于该试验的组合物1。

以下试验的目的包括：

a.通过离子交换色谱法从初乳样本中富集关键蛋白质。

b.证明分配系统的可行性。

c.展示组合物1对人PBMC的影响，而组合物1是本发明所述的组合物的示例性样本(在本文中也称为“MAO-部分”)。

在这些试验过程中，我们能够制作最多2g的检测的蛋白质。这2g被分成组分单元，可用于根据不同的需要创建一些混合物。

使用离子交换色谱进行分馏

为了提高所需初乳蛋白质的最终产率，进行了酸性沉淀的预处理，以便从初乳中去除酪蛋白。

酸性沉淀：

1、将100mg脱脂初乳粉末溶解在500mL DDW中(使用磁力搅拌器搅拌5分钟)。

2、酪蛋白的酸性沉淀——用1M HCl缓慢滴定溶液至pH 4.2。过滤(MilliporeExpress PLUS 0.22μm PES)去除沉淀物。

3、根据使用的色谱柱调节pH值(AE为pH 8，CE为pH 5)。

4、在每个步骤中取出样本进行分析。

现在参考图8，其示出了蛋白质的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。

如图8所示，成功去除酪蛋白(样本2中30kDa标记附近没有色带)。从初乳中去除酪蛋白也去除了脂质、磷脂和糖脂，并提升了初乳中关键蛋白质的浓度(见样本4中更深的色带)。得到的最终浓度可以实现更有效的分馏过程。酪蛋白在牛初乳蛋白占比较大，并倾向于形成聚集体(胶团)，从而降低离子色谱的整体精准度。最终溶液的溶解性更好并且视觉上更透明。

分馏过程

阴离子交换柱分馏

色谱柱–HiTrap Q FF 5ml×2,GE Healthcare

缓冲液：平衡缓冲液-20mM Tris-HCl pH 8

洗脱缓冲液-20mM Tris-HCl pH 8,1M NaCl

·使用0.45μm过滤器(Millipore Express PLUS 0.45μm PES)过滤200mL溶液。

·将过滤后的溶液以3mL/min速率加入到平衡后的HiTrap Q FF 5mL×2上。加入样本后，用3CV缓冲液20mM Tris-HCl pH 8(5mL/min)洗涤色谱柱。

·洗脱时，我们使用阶式梯度–100、400和1000mM NaCl。收集5mL分馏物。

·所有分馏物均采用Bradford法定量，并采用SDS-PAGE分析。

阳离子交换柱分馏

色谱柱–HiTrap SP FF 5ml,GE Healthcare

缓冲液：平衡缓冲液-20mM醋酸钠pH 5

洗脱缓冲液-20mM醋酸钠pH 5,1M NaCl

·200mL溶液以3mL/min加入到平衡后的HiTrap SP FF。加入样本后，用3CV缓冲液20mM醋酸钠pH 5(5mL/min)洗涤色谱柱。

·洗脱时，我们使用阶式梯度–100、400和1000mM NaCl。收集3mL分馏物。

·所有分馏物均采用Bradford法定量，并采用SDS-PAGE分析。

AE纯化表：

表15

现在参考图9，其示出了酸沉淀处理后脱脂初乳的AE色谱。

在采用400mM NaCl的第二次洗脱中发现了阴离子交换(AE)中的大部分蛋白质。流过(flow through)和第一次洗脱二者几乎完全没有蛋白质。

CE纯化表：

表16

现在参考图10，其示出了酸沉淀处理后脱脂初乳的CE色谱。

在阳离子交换中，第一次(100nM NaCl)和第二次(400nM NaCl)洗脱二者中可以发现等量的蛋白质。

富集因子

使用质谱分析离子交换色谱的所有样本，并将其组成与全初乳进行比较。

大于1的富集因子是正富集因子。这意味着最终分馏物中所讨论的蛋白质浓度高于其在整个初乳中的浓度。

表17

参考图11，其示出了富集因子的图表。

该图示出了与原始初乳相比每种蛋白质富集的倍增因子。例如，LGB在使用的原初乳中约为14.72％，酸化后约为22％，因此富集因子为1.5。

细胞培养物：

通过外周血单核细胞(PBMC)确认本发明的所述组合物是否具有抗炎活性目的：

1、测试初乳分馏物对人PBMC的免疫学作用(例如活化、增殖、凋亡等)。

2、具体研究该组合物减弱T细胞(CD3)对抗CD3(OKT3)–50ng/mL激活的进行炎症反应的能力。

流程概要：

1、通过ficol从健康的志愿者体内提取PBMC。

2、获得了120×10⁶个细胞，并为该试验接种了12×10⁶个细胞(每孔12×10⁶个)。通过不同处理在1mL RPMI全培养基(R-10)中孵育细胞。

3、将细胞在37℃和5％CO₂下孵育72小时。

	处理	ug/ml
			1	介质-无处理
2	组合物1	100
			3	全初乳	100
4	激活-介质-无处理
			5	激活-组合物1	100
6	激活-全初乳	100

表18

结果：

1、PBMC表明在初乳或组合物1存在下增殖细胞减少。图12是PBMC的流式细胞术分析的正向和侧向散射图，示出了在抗炎组合物或牛初乳(WC)存在下用抗CD3激活/增殖T细胞。当被激活/增殖时，细胞会向右上方移动。多边形将T细胞与PBMC中的其他细胞(例如单核细胞)区分开。

2、用抗CD3激活，引起T细胞显著激活/增殖。

3、如图13所示，在初乳存在下，T细胞的激活和增殖较低。

4、在组合物1存在下，这种激活/增殖的降低甚至更为显著。

说明：

免疫系统的显著反应之一是炎症反应，其表现为T细胞的显著激活/增殖。在PBMC中，用抗CD3激活T细胞，导致显著的增殖/激活。抗炎物质、例如初乳和组合物1降低了这种增殖/激活。

实施例3

为了确定本发明所述的组合物的各种组分的可能有效浓度，我们对可能的组合进行了多次试验。表19示出了每种测试组分的优选浓度范围：

表19

实施例4

细胞中的抗炎活性。

本发明的所述组合物可包含各类组合。

在该实施例中，进行了6个不同的试验，其中角蛋白化合物与LGB、CSN1S1、CSN2和ALB组合(本文称为组合物2)共同在外周血单核细胞(PBMC)上进行体外测试。通过ficol从健康的志愿者体内提取PBMC，并将12×106个细胞(每孔12×106个)接种到在24孔板中。在经不同方法处理的1mL RPMI全培养基中孵育细胞，在37℃和5％CO2，下孵育72小时。在存在或不存在抗CD3的情况下测试细胞是否出现被激活和增殖，并用初乳或所述组合物的抗炎组分处理。

各组分的浓度见下表20：

表20

结果

1、在抗CD3存在下细胞被激活和增殖——所有测试的细胞100％被激活。

2、在抗CD3和初乳的存在下55％的细胞被激活和增殖。

3、在抗CD3和组合物2的6种变异型之一的存在下，少于55％的细胞被激活和增殖，平均只有40％。

说明：

免疫系统的显著反应之一是炎症反应，其表现为T细胞的显著激活/增殖。在PBMC中，用抗CD3激活T细胞，导致显著的增殖/激活。组合物2的测试的变异型显著减少这种增殖/激活。

除了激活之外，还测定了培养基中是否存在抗/促炎细胞因子。如图14所示，测试的T细胞中最重要的炎症因子干扰素-γ(INFγ)在用抗CD3激活后出现了增加，而在初乳存在时显著降低，此外在组合物2存在时也显著降低(所有6次实验的平均结果)。

实施例5

免疫系统有不同组的激活方式。为了募集并刺激免疫系统以对细菌发起攻击，需要产生炎症。

炎症必须得到控制且是有益的，但必须发生。

制备包含浓度为7.7％的KRT1、浓度为11.7％的LGB和浓度分别为5.75％和3.83％的促炎组分SERPINB4和SERPIND1的组合物(在本文中统称为组合物3)。在从健康志愿者的PBMC制取的单核细胞中测试组合物3。

为了模拟炎症，在细胞中添加脂多糖(LPS)。IL-1β是一种促炎细胞因子，与疼痛、炎症和自身免疫疾病有关。其在LPS存在时由单核细胞分泌。

如图15所示，在LPS存在时，所有组都分泌了IL-1β，然而，在组合物3存在时，IL-1β的分泌显著，而没有LPS激活情况。

WC–初乳

Pro–组合物3

本申请中以举例的方式描述本发明实施方式，且所述描述不用于限制本发明的范围。所述实施方式包括不同的特征，并非所有的特征在本发明的所有实施例中都是必需的。一些实施方式仅利用一些特征或这些特征的可能组合。本领域技术人员应理解所描述的本发明的实施方式有多种变型，以及本发明的实施方式包括在所描述的实施方式中记录的特征的不同组合。本发明的范围仅由所附权利要求书限定。

Claims (15)

1.一种用于增强免疫系统的组合物，所述组合物包含角蛋白化合物和β-乳球蛋白(LGB)。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述角蛋白化合物选自包括KRT33B、KRT13、KRT18、KRT17、KRT42、KRT28、KRT36、KRT12、KRT10、KRT24、KRT14、KRT4、KRT75、KRT6A、KRT6C、KRT5、KRT77、KRT1、KRT3、KRT2或这些化合物的组合的组。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述角蛋白化合物的浓度为0.01％至15.5％，并且所述LGB的浓度为0.02％至23.4％。

4.根据权利要求1所述的组合物，还包含抗炎组分、促炎组分、抗菌组分、第一免疫刺激组分和第二免疫刺激组分的组合。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述抗炎组分选自包括乳运铁蛋白、溶菌酶C、白介素-10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)、白介素-4(IL-4)和环氧合酶-1(Cox-1)的组。

6.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述促炎组分选自包括乳运铁蛋白、溶菌酶C、白介素-1B(IL-1B)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的组。

7.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述抗菌组分选自包括β-防御素1、乳过氧化物酶、乳运铁蛋白、α-乳清蛋白、组织蛋白酶G、溶菌酶C、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)的组。

8.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述第一免疫刺激组分选自包括内质蛋白、中性粒细胞弹性蛋白酶、IgA、IgG、免疫球蛋白M(IgM)和乳运铁蛋白的组。

9.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述第二免疫刺激组分选自包括趋化因子(C-C基序)配体5(CCL5)、内质蛋白、中性粒细胞弹性蛋白酶、IgA、IgG、IgM、催乳素诱导蛋白和白细胞弹性蛋白酶抑制剂的组。

10.根据权利要求4所述的组合物，还包含初乳。

11.根据权利要求1所述的组合物用于增强婴儿的免疫系统的用途。

12.根据权利要求1所述的组合物用于增强免疫系统受损个体的免疫系统的用途。

13.根据权利要求1所述的组合物用于增强动物的免疫系统的用途。

14.根据权利要求1所述的组合物用于减少运动员中的炎症的用途。

15.一种包含权利要求1所述的组合物的食品，其中所述食品选自包括奶制品、奶昔、饮料、婴儿配方食品、动物食品等的组。

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