CN114574380B - 一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用 - Google Patents
一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114574380B CN114574380B CN202210006424.3A CN202210006424A CN114574380B CN 114574380 B CN114574380 B CN 114574380B CN 202210006424 A CN202210006424 A CN 202210006424A CN 114574380 B CN114574380 B CN 114574380B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pseudomonas
- saline
- petroleum hydrocarbon
- pseudomonas monteilii
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001291501 Pseudomonas monteilii Species 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003513 alkali Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 title abstract description 16
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims abstract description 13
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 6
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 11
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000009096 changqing Substances 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 4
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical group CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- GGYKPYDKXLHNTI-UHFFFAOYSA-N 2,6,10,14-tetramethylhexadecane Chemical compound CCC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C GGYKPYDKXLHNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 1,3,2,4$l^{2}-dioxathiaplumbetane 2,2-dioxide Chemical group [Pb+2].[O-]S([O-])(=O)=O KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003129 oil well Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 150000004965 peroxy acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 125000005575 polycyclic aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
- B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用，该菌株为蒙氏假单胞菌属(Pseudomonas monteilii)，命名为9‑2，该菌于2021年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23666，其ITS序列如序列表SEQ NO:1所示。本发明中的蒙氏假单胞菌抗逆性、适耐性高。可耐受pH值为5.0‑10.0，最高能耐受6％的盐度的生长环境；本发明中的蒙氏假单胞菌可在高盐碱环境下降解83.99％的石油烃，不但具有很高的石油烃降解效率，而且具有很好的抗盐碱性。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用。
背景技术
石油作为当代经济的一大工业命脉，在各大工业领域有着广泛的应用。但与此同时，石油开采、运输、生产和加工过程中的不当操作与泄露事故同时也造成了环境污染。石油烃是石油中的主要成分之一，其中正构烷烃经长期积累及地球化学作用下，对底栖生物造成影响；多环芳烃具有致癌性，威胁着人类的生命健康。
微生物修复作为低成本、低毒害的环境友好石油污染修复方法，近年来获得了国内外的广泛关注。但微生物的生长和修复性能往往受到pH、盐度等条件的限制。土壤微生物的最适pH值往往在7.0左右、盐度在0.2％左右，高盐度和过酸过碱环境都会抑制微生物的活性。玉门油田、长庆油田等油气开发地位于中国的西北地区。西北地区常年干旱少水，盐碱积累，土壤高pH、高盐度的特性成了石油烃污染微生物修复的主要阻力(本次实验所用长庆油田采样点土壤的PH为7.12-8.58；盐度为：1.4-2.1％)。截至2017年，长庆油田所在的陇东地区原油污染土壤面积已达1.02×104km2，造成了巨大的环境压力。 (王金成，等.石油烃污染对陇东黄土高原土壤生物学及非生物学特性的影响[J].水土保持通报，2017,37,(1):9-16.)因此，亟需一种高效方法针对性地解决该地区盐碱土壤的石油污染问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，本发明筛选出了一株耐盐碱的蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)，并应用于盐碱环境下石油烃污染修复。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一株耐盐碱的蒙氏假单胞菌，该菌株为蒙氏假单胞菌属(Pseudomonasmonteilii)，命名为9-2，该菌于2021年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23666，其ITS序列如序列表SEQ NO:1所示。
本发明得到的蒙氏假单胞菌，是从鄂尔多斯盆地长庆油田油井平台附近的土壤中，经以长庆油田原油为唯一碳源的培养基驯化、分离得到的菌株。
本发明得到的蒙氏假单胞菌生化理化特征如下：单菌呈杆状，革兰氏染色阴性，淀粉水解、乳糖发酵、甲基红、明胶液化、吲哚反应、甲基红试验为阴性，接触酶反应为阳性。菌落为白色，边缘不规则。
本发明得到的蒙氏假单胞菌能在30℃、150r/min、pH值8.0、盐度3.0％、原油浓度1％(v:v)的条件下，经14天的反应，可降解83.99％的石油烃。
本发明得到的蒙氏假单胞菌具有耐盐碱的特性。该菌株可耐受pH5.0-10.0的酸碱度及0.5％-6.0％的盐度范围。
本发明的优点和有益效果为：
1.本发明中的蒙氏假单胞菌抗逆性、适耐性高。可耐受pH值为5.0-10.0，最高能耐受6％盐度的生长环境；
2.本发明中的蒙氏假单胞菌可在高盐碱环境下降解83.99％的石油烃，不但具有很高的石油烃降解效率，而且具有很好的抗盐碱性。
附图说明
图1为本发明蒙氏假单胞菌的菌落形态照片。
图2为本发明蒙氏假单胞菌革兰氏染色后的显微照片。
图3为本发明蒙氏假单胞菌在不同盐度下的48小时生长曲线。
图4为本发明蒙氏假单胞菌在不同pH下的48小时生长曲线。
图5为原油降解前后气相色谱图。(A)接种本发明蒙氏假单胞菌前原油色谱图，(B)接种本发明蒙氏假单胞菌培养14天后提取的原油色谱图(Nap-D为内标物氘代萘，Pr为姥鲛烷，Ph为植烷)。
图6为降解前后不同碳数正构烷烃在饱和烃中的相对含量。
对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，可以根据以上附图获得其他的相关附图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
实施例1：
本实施例涉及蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii 9-2的分离鉴定。
具体步骤如下：
取长庆油田周边5-10cm深的含石油烃的表层土壤，称取5g加入到装有200ml无菌水的灭菌锥形瓶中，在30℃，130r/min下摇床震荡培养24小时。将震荡培养后的锥形瓶静置1小时，吸取5mL悬液接种于加入1％长庆油田原油的100mL无机盐培养基中，在温度为30℃，转速为180r/min下摇床培养10天。培养结束后吸取5mL培养液加入相同的1％原油无机盐培养基中，在相同条件下培养7天。以此类推，以7天为一个周期连续培养5次。将菌液用平板划线法接种到LB固体培养基中，使其在30℃的恒温培养箱中生长48小时。将平板上的纯化菌株接种至斜面保藏培养基中，于-18℃冰箱中保存。
对该纯化菌株进行革兰氏染色、生化理化特性鉴定、形态鉴定和扫描鉴定观察。结果如下：该菌株为革兰氏阴性菌，乳糖发酵、吲哚、淀粉水解、明胶液化、M.R.、V.P. 试验结果为阴性，接触酶、硝酸盐还原试验结果为阳性，菌落呈乳白色，边缘不规则，单菌呈杆状。
在纯化后的菌体中获取细菌的基因组DNA，使用相应的引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。扩增产物由广东美格基因科技有限公司使用ABI3730测序平台进行测序。将测序结果在NCBI上进行对比，根据blast结果用邻接法构建系统发育树。结果如下：本发明涉及的菌株9-2为蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)，其ITS序列如序列表中SEQ NO:1所示，与已发表菌株(CP043396.1)相似度为100％。该菌于2021年10 月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.23666。
实施例2：
本实施例涉及蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii 9-2的抗逆性，具体步骤如下：
用NaCl将100mL富集培养基的盐度分别调至：0.5％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％及8.0％，每个梯度设置三个平行组。将菌株接种到100mL富集培养基中培养48小时后，用灭菌的PBS溶液配制菌浓度为OD600＝0.5的纯菌液，以5％的接种量接种到培养基中，在30℃、150r/min下培养48小时，每四小时以灭菌的富集培养基作为对照组用紫外可见分光光度计测量其在波长600nm下的吸光度。结果如图3所示，蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii 9-2在盐度为0.5％时在对数生长期生长最快，在 0.5％-5.0％盐度下生长较适宜，在6.0％时生长相对减弱，因此，降解菌9-2可耐受6.0％以下的盐度，在7.0％盐度下生长迟缓。
同样用NaOH和HCl将富集培养基的pH值分别调至：3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、9.0、10.0及11.0，每个梯度设置三个平行组。将菌株接种到100mL富集培养基中培养48小时后，用灭菌的PBS溶液配制菌浓度为OD600＝0.5的纯菌液，以5％的接种量接种分别接种到不同PH值的培养基中，在30℃、150r/min下培养48小时，以灭菌的富集培养基作为空白组，每四小时用紫外可见分光光度计测量其在波长600nm下的吸光度。结果如图4所示，蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii 9-2在在pH范围5.0-10.0内生长较适宜，在pH11时，菌株生长迟缓，在pH3.0及pH4.0时几乎停止生长。
本实施例中涉及的培养基配方如下：
微量元素溶液：FeSO40.054g，MnSO42.3g，CuSO40.032g，超纯水1000mL。
无机盐培养基：KH2PO42.42g，K2HPO47.3g，(NH4)2SO42g，NaCl 2g，MgSO40.3g，CaCl20.03g，微量元素溶液1mL，超纯水1000mL，用NaOH和盐酸将pH调至7.0。于高压灭菌锅灭菌20分钟。
富集培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，超纯水1000mL，用NaOH和盐酸将pH调至7.4，于高压灭菌锅灭菌20分钟。
斜面保藏培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂粉15g，超纯水1000mL，用NaOH和盐酸将pH调至7.4，于高压灭菌锅灭菌15分钟。
实施例3：
本实施例涉及蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii 9-2在盐碱环境下的原油降解特性，具体步骤如下：
将新鲜菌株在100m L富集培养基中培养48小时后，用灭菌的PBS溶液配制菌浓度为OD600＝0.5的纯菌液，以5％的接种量接种到以1％原油为唯一碳源的无机盐培养基中，调整溶液PH值为8.0，盐度为3.0％的高盐碱环境。每组设置3个平行样，在30℃、 180r/min的条件下培养14天。然后用20mL 60-90沸程的石油醚进行萃取，每个样品萃取三次并合并萃取液。以未接种菌剂的原油培养基中萃取的原油作为对照组。将萃取液离心三次取上清液，用Na2SO4吸收水分转移至容量瓶，再用石油醚定容至20mL。充分摇匀后用移液枪取出200μL样品，加入100μL 0.3mg/mL C24D50和500μL 0.05mg/mL氘代萘作为内标备用。使用安捷伦6890N(GC)/5973B(MSD)气相色谱质谱联用仪对样品进行GC-MS分析。用气相色谱图积分峰面积算出石油烃各组分降解率。结果如图5 所示，经计算，Pseudomonas monteilii 9-2可在原油初始浓度为1％(v:v)的条件下在14 天内降解83.99％的石油烃。如表1所示，经过14d摇床培养，nC13到nC20的正构烷烃分别被降解了38.85％、69.88％、82.84％、90.38％、94.69％、98.13％、98.58％和98.45％。 nC21到nC33在降解后残油中的含量均小于检出限，该结果说明Pseudomonas monteilii 9-2对短链及长链正构烷烃均有很好的降解效果，且对长链正构烷烃降解效果更佳。经 Pseudomonas monteilii 9-2降解前后不同碳数正构烷烃在饱和烃中的相对含量如图6所示。
表1
以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院西北生态环境资源研究院
<120> 一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1125
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
ccgactaacc atgcaaagtc gagcggatga cgggagcttg ctccttgatt cagcggcgga 60
cgggtgagta atgcctagga atctgcctgg tagtggggga caacgtttcg aaaggaacgc 120
taataccgca tacgtcctac gggagaaagc aggggacctt cgggccttgc gctatcagat 180
gagcctaggt cggattagct agttggtggg gtaatggctc accaaggcga cgatccgtaa 240
ctggtctgag aggatgatca gtcacactgg aactgagaca cggtccagac tcctacggga 300
ggcagcagtg gggaatattg gacaatgggc gaaagcctga tccagccatg ccgcgtgtgt 360
gaagaaggtc ttcggattgt aaagcacttt aagttgggag gaagggcagt aagttaatac 420
cttgctgttt tgacgttacc gacagaataa gcaccggcta actctgtgcc agcagccgcg 480
gtaatacaga gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc gtaaagcgcg cgtaggtggt 540
ttgttaagtt ggatgtgaaa gccccgggct caacctggga actgcatcca aaactggcaa 600
gctagagtac ggtagagggt ggtggaattt cctgtgtagc ggtgaaatgc gtagatatag 660
gaaggaacac cagtggcgaa ggcgaccacc tggactgata ctgacactga ggtgcgaaag 720
cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgtcaactag 780
ccgttggaat ccttgagatt ttagtggcgc agctaacgca ttaagttgac cgcctgggga 840
gtacggccgc aaggttaaaa ctcaaatgaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca 900
tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggc cttgacatgc agagaacttt 960
ccagagatgg attggtgcct tcgggaactc tgacacagtg ctgcatggct gtcgtcagct 1020
cgtgtcttga gatgttgggt ttagtcccgt acgacgcaac cttgtcctta gtaccagcac 1080
gtatggtggg cactctagga aactgcgggt gacaaaccga aggaa 1125
Claims (2)
1.一株耐盐碱的蒙氏假单胞菌（Pseudomonas monteilii），其特征在于：该菌株为蒙氏假单胞菌属，命名为蒙氏假单胞菌9-2，该菌于2021年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No. 23666，其ITS序列如序列表SEQ NO:1所示。
2.一种如权利要求1所述的蒙氏假单胞菌在盐碱环境下降解石油烃的应用。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210006424.3A CN114574380B (zh) | 2022-01-05 | 2022-01-05 | 一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用 |
| US18/149,950 US11959066B2 (en) | 2022-01-05 | 2023-01-04 | Pseudomonas monteilii strain and application thereof in the degradation of petroleum hydrocarbons in saline-alkali environment |
| GB2300169.6A GB2614619A (en) | 2022-01-05 | 2023-01-05 | Pseudomonas monteilii strain and application thereof in the degradation of petroleum hydrocarbons in saline-alkali environment |
| CA3185879A CA3185879C (en) | 2022-01-05 | 2023-01-05 | Pseudomonas monteilii strain and application thereof in the degradation of petroleum hydrocarbons in saline-alkali environment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210006424.3A CN114574380B (zh) | 2022-01-05 | 2022-01-05 | 一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114574380A CN114574380A (zh) | 2022-06-03 |
| CN114574380B true CN114574380B (zh) | 2022-12-09 |
Family
ID=81769503
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210006424.3A Active CN114574380B (zh) | 2022-01-05 | 2022-01-05 | 一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11959066B2 (zh) |
| CN (1) | CN114574380B (zh) |
| CA (1) | CA3185879C (zh) |
| GB (1) | GB2614619A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006069035A2 (en) * | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Novozymes Biologicals, Inc. | Wastewater treatment compositions |
| CN110499264A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-11-26 | 威海科尼利合环保科技有限公司 | 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111205842B (zh) * | 2020-02-13 | 2022-11-15 | 陕西文岭微生物科技有限公司 | 一种提高石油采收率的微生物采油工艺技术 |
-
2022
- 2022-01-05 CN CN202210006424.3A patent/CN114574380B/zh active Active
-
2023
- 2023-01-04 US US18/149,950 patent/US11959066B2/en active Active
- 2023-01-05 CA CA3185879A patent/CA3185879C/en active Active
- 2023-01-05 GB GB2300169.6A patent/GB2614619A/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006069035A2 (en) * | 2004-12-21 | 2006-06-29 | Novozymes Biologicals, Inc. | Wastewater treatment compositions |
| CN110499264A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-11-26 | 威海科尼利合环保科技有限公司 | 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Extensively drug-resistant IMP-16-producing Pseudomonas monteilii isolated from cerebrospinal fluid;Anelise Stella Ballaben等;《Infect Genet Evol》;20201130;参见全文 * |
| 蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)对食用油脂的利用效率研究;李庆元等;《中国食物与营养》;20190828;参见全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20230365917A1 (en) | 2023-11-16 |
| CN114574380A (zh) | 2022-06-03 |
| US11959066B2 (en) | 2024-04-16 |
| CA3185879C (en) | 2023-11-28 |
| CA3185879A1 (en) | 2023-07-05 |
| GB2614619A (en) | 2023-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102533601B (zh) | 一株简单芽孢杆菌及其培养方法与应用 | |
| CN104388312B (zh) | 一种石油降解菌的筛选方法及由其筛选的菌制备石油降解菌菌剂的方法和该菌剂的应用 | |
| CN109971681B (zh) | 老窖梭状芽孢杆菌及其用途 | |
| CN109055282B (zh) | 一株肺炎克雷伯氏菌新菌株及其分离方法和应用 | |
| CN104830708A (zh) | 一株原油降解菌株及其应用 | |
| CN110283741A (zh) | 一株具有高效降解多环芳烃功能的玫瑰杆菌及其应用 | |
| CN108504585B (zh) | 一种治理大气污染的苯降解菌及其制备方法和应用 | |
| CN105838635B (zh) | 利用Pseudomonas fluorescens菌株LZ-4修复六价铬和萘复合污染环境的方法 | |
| CN113444661A (zh) | 一株新鞘氨醇杆菌及其在废水除磷中的应用 | |
| CN110484462B (zh) | 申氏杆菌属新物种及其应用 | |
| CN114164133B (zh) | 一种热反硝化地芽孢杆菌dc8菌株及其应用 | |
| CN113462622B (zh) | 一株高效降解多种芳香类污染物的假单胞菌及其应用 | |
| CN113234625B (zh) | 一株皮特不动杆菌及其应用 | |
| CN112094767B (zh) | 一株海洋沉积物来源的木质素降解菌及其在降解木质素中的应用 | |
| CN115449489A (zh) | 降油菌及其复合菌剂和制备方法及应用 | |
| CN114574380B (zh) | 一株蒙氏假单胞菌及其在盐碱环境下降解石油烃的应用 | |
| CN110885772A (zh) | 一株产海藻糖酶的分散泛菌及其分离筛选和应用 | |
| CN104745515A (zh) | 一种降解多环芳烃的不动杆菌及其应用 | |
| CN115161222A (zh) | 枯草芽孢杆菌jzxj-7菌株在降解生物胺中的应用 | |
| CN114410508A (zh) | 一种油脂降解菌及其筛选方法与应用 | |
| JP4614756B2 (ja) | 脱窒菌株およびこれを用いた硝酸の除去方法 | |
| CN103614324B (zh) | 一株短链脂肪酸降解菌及其应用 | |
| CN111269847B (zh) | 一种产丙酮酸的菌株Desemzia incerta及其应用 | |
| CN116496931B (zh) | 一种阴沟肠杆菌及其制备方法、培养基与应用 | |
| CN103849589A (zh) | 一株二氯喹啉酸高效降解菌及其用途和使用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |