CN114560937B - 一种抗fgl1抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种FGL1抗体或其抗原结合片段，所述FGL1抗体或其抗原结合片段对FGL1蛋白具有高的结合活性，能实现对FGL1蛋白与LAG3蛋白结合的阻断、以及对FGL1蛋白与表达LAG3蛋白的细胞结合的阻断。本发明还涉及编码所述FGL1抗体或其抗原结合片段的核酸；含有所述核酸的细胞；含有所述FGL1抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述细胞的组合物；含有所述FGL1抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述组合物的试剂盒；以及所述FGL1抗体或其抗原结合片段、所述核酸、所述组合物在制备检测、诊断肿瘤的试剂或治疗肿瘤的药物中的应用。

Description

一种抗FGL1抗体及其用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗FGL1抗体及其用途。
背景技术
LAG-3，淋巴细胞活化基因-3（Lymphocyte activation gene-3）属于免疫球蛋白超家族，是一种由498个氨基酸构成的I型跨膜蛋白，可以选择性地表达在活化的T淋巴细胞、NK细胞和树突状细胞上。LAG-3蛋白对T细胞的调节功能与PD-1类似，主要作为递送抑制信号的受体起作用。
目前大多数科学家认为MHC-II是癌细胞用来结合LAG-3分子从而降低T细胞活性的主要配体，因此阻断LAG3与MHC-II结合将有助于激活T细胞的抗癌能力，然而，几种不阻断LAG-3与MHC-II结合的单克隆抗体却表现出了激活T细胞的能力，例如，针对鼠LAG-3 D2结构域的特异性单克隆抗体C9B7W在体外和体内表现出了增强T细胞的增殖和效应功能。因此研究人员认为LAG-3的免疫功能可能通过其他未知配体介导。陈列平教授团队在发表于Cell的一篇文章中证实了纤维蛋白样蛋白1（FGL1）是一种独立于MHC-II的LAG-3的主要功能配体，FGL1与LAG-3具有特异性的高亲和力相互作用；同时表明抗FGL1抗体和抗LAG-3抗体都能激活T细胞发挥抗肿瘤作用，且证实了抗FGL1抗体的抗肿瘤作用依赖于阻断FLG1蛋白与LAG-3蛋白的结合，而抗LAG-3抗体的抗肿瘤作用依赖于阻断LAG-3与FGL1而不是MHC-II或其他配体的结合。阻断FLG1蛋白与LAG-3蛋白相互作用可以增强抗肿瘤作用，对发展下一代癌症免疫疗法具有重要意义（Cell, 2019, Volume176, P334-347）。然而现有技术中，关于抗FGL1抗体的报道较少。
因此，如何提供一种抗FGL1抗体，对FGL1蛋白具有良好的亲和力，能阻断FLG1蛋白与LAG-3蛋白相互作用，发挥抗肿瘤作用，成为有待解决的问题。
发明内容
本申请提供了一种FGL1抗体或其抗原结合片段，该FGL1抗体或其抗原结合片段对FGL1蛋白具有高的结合活性，能实现对FGL1蛋白与LAG3蛋白结合的阻断，以及对FGL1蛋白与表达LAG3蛋白的细胞结合的阻断，可用于制备具有抗肿瘤作用的药物。
本申请的第一方面，提供了一种FGL1抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，其中，
所述重链可变区包括SEQ ID NO: 1所示的HCDR1，SEQ ID NO: 2所示的HCDR2和SEQ ID NO: 3所示的HCDR3，并且所述轻链可变区包括SEQ ID NO: 4所示的LCDR1，SEQ IDNO: 5所示的LCDR2和SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
在一个具体实施方式中，所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和/或轻链可变区，其中
所述重链可变区包括与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少约95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列，和/或所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列具有至少约95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。
在一个具体实施方式中，本申请提供的所述FGL1抗体或其抗原结合片段包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
在一个具体实施方式中，所述抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv和dsFv片段。
此外，本申请的所述抗体包括轻链恒定区，以及可选的一个重链恒定区。
在另一个具体实施方式中，所述抗体是一个单克隆抗体。
在另一个具体实施方式中，所述单克隆抗体可包括IgG抗体，包括两条重链和两条轻链，并根据其重链恒定区进一步分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4四个亚类，而轻链可以是λ型或kappa型。优选的，所述重链恒定区是人IgG4重链恒定区，或者轻链恒定区是kappa恒定区。优选地，该重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示。优选的，该轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO: 10所示。
具体地，本发明提供的抗体或其抗原结合片段优选包含SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列的重链可变区，SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列的轻链可变区，SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列的重链恒定区和SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列的轻链恒定区。
在第二方面，本申请还提供了一种核酸，包括编码所述的FGL1抗体或其抗原结合片段的核酸序列。
在另一个方面，本申请还提供了一种载体，包含编码所述的FGL1抗体或其抗原结合片段的核酸，或可表达前述任一方面所述的抗体或其抗原结合片段。进一步的，所述载体可以是病毒载体，例如慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或逆转录病毒载体等。进一步的，所述载体可以是非病毒载体，例如哺乳细胞表达载体，细菌表达载体或真菌表达载体。
在另一个方面，本申请还提供了一种宿主细胞，包含所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或所述核酸，或所述载体。
在另一个具体实施方式中，本申请的单克隆抗体可以由表达载体转化的宿主细胞产生，所述表达载体经基因工程技术改造为携带编码所述的FGL1抗体或其抗原结合片段的核酸的载体。
在另一个具体实施方式中，本发明还提供了一种表达所述FGL1抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，所述宿主细胞由上述表达载体转化得到。
在另一个具体实施方式中，进一步的，所述细胞为细菌细胞，例如大肠杆菌细胞等。进一步的，所述细胞为哺乳动物细胞，例如：中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人胚胎肾细胞（293）、B细胞、T细胞、DC细胞或NK细胞等。
在另一个方面，本申请还提供了一种产生FGL1抗体或其抗原结合片段的方法，包括培养所述宿主细胞，使其产生FGL1抗体或其抗原结合片段的步骤。进一步的，所述方法还包括回收由所述宿主细胞产生的FGL1抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本申请还提供了一种由所述方法产生的FGL1抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本申请还提供了一种药物组合物，包括所述FGL1抗体或其抗原结合片段，或通过所述方法产生的FGL1抗体或其抗原结合片段，或所述核酸，或所述载体，或所述宿主细胞。进一步，所述药物组合物包括一种或多种药学上的载体，优选地，所述药学上可接受的载体包括以下中的一种或多种：药学上可接受的溶剂、分散剂、附加剂、塑形剂、药物辅料。
在本发明的一方面，所述药物组合物还可以包含其他治疗剂。在一些实施方式中，其他治疗剂包括化疗剂、免疫治疗剂或激素治疗剂。所述抗体或抗原结合片段与其他治疗剂的联合施用能够增强治疗效果。
在本发明的一方面，所述“增强治疗效果”是指增强其他治疗剂或疗法的治疗效果。本发明提供的所述抗体或抗原结合片段可以单独施用，也可以与其他治疗剂或疗法联合施用。在一些实施方式中，其他治疗剂或疗法包括化疗剂、免疫治疗剂、激素治疗剂、放射治疗、手术治疗。
在另一方面，本申请提供了一种试剂盒，含有所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或所述的核酸，或所述的载体，或所述的宿主细胞，或所述的药物组合物。
在另一方面，本申请提供了所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或所述的核酸，或所述的载体，或所述的宿主细胞，或所述的药物组合物，或所述试剂盒在制备检测、诊断肿瘤的试剂或治疗肿瘤的药物中的应用。
在本发明的一方面，本发明涉及前述任一方面所述的抗体或其抗原结合片段在制备诊断或检测试剂盒中的应用。
在另一个具体实施方式中，所述肿瘤包括胃癌、食道癌、头颈癌、膀胱癌、宫颈癌、肉瘤、细胞瘤、肺癌、结肠癌、卵巢癌、肾脏癌、结肠直肠癌、胰脏癌、肝癌、黑色素瘤、乳腺癌、骨髓瘤、神经胶质瘤、白血病和淋巴瘤等。
本发明提供的抗体或其抗原结合片段具有以下一种或多种有益效果：
1.本发明提供的FGL1抗体对FGL1蛋白具有高的结合活性；
2. 本发明提供的FGL1抗体能阻断FGL1蛋白与LAG3蛋白的结合，以及阻断FGL1蛋白与表达LAG3蛋白的细胞的结合；
3. 本发明提供的FGL1抗体在体内的半衰期为118小时，具有良好的稳定性；
4. 本发明提供的FGL1抗体，可以通过阻断FGL1蛋白与表达LAG3的细胞的结合，增强抗肿瘤效果，可用于制备具有抗肿瘤作用的药物。
附图说明
图1示出了ELISA检测各FGL1抗体与FGL1蛋白的结合活性。
图2示出了各FGL1抗体在细胞水平的阻断活性。
图3示出了CA352抗体在BALB/c小鼠体内的PK代谢曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。应理解，列举以下实施例是为了向本领域技术人员就如何利用本发明的方法和产品提供一个完整的公开和说明，并非用于限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另外定义，本文中使用的全部技术和科学术语具有与本发明所属领域中的一般技术人员通常理解的相同的含义。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规试剂公司购买得到。
实施例1. 抗FGL1单克隆抗体的产生
1.1 免疫
用FGL1（百普赛斯，FG1-H52Hy）与mGM-CSF（义翘神州，51048-M07H）、弗氏佐剂乳化后免疫全人抗体转基因小鼠BoAn-hMab（山东博安生物技术有限公司）。共免疫11只小鼠，首免使用弗氏完全佐剂，二免至五免使用弗氏不完全佐剂，均为皮下注射。将与二至五免相同剂量的抗原和佐剂腹腔注射至11只小鼠加强免疫，3天后处死，取出脾脏进行噬菌体库建立。
1.2 噬菌体库的建立
取免疫小鼠的脾脏细胞，提取RNA后反转录获得cDNA，噬菌体库的建立步骤参照Carlos F.Barbas III，Phage display：A laboratory manual中记载的方法进行，用PCR的方法从cDNA中获得重链和轻链的可变区，再将重链和轻链的可变区通过重叠延伸PCR的方法获得单链抗体（scFv），scFv酶切后与质粒pCOMB3x（购自中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，BIOVECTOR510837）连接，并将连接产物电转染至大肠杆菌TG1感受态细胞（Lucigen，目录号：A96595-2）中，TG1经培养后加入噬菌体侵染，然后回收培养物上清即为噬菌体库。
1.3噬菌体库的筛选
1.3.1 平板筛选：用FGL1-His蛋白（义翘神州，13484-H08B）包被平板，第二天加入噬菌体库孵育2 h，洗涤4-10次后用洗脱缓冲液洗脱特异性结合的噬菌体。
1.3.2 磁珠筛选：将FGL1-His蛋白（百普赛斯，FG1-H5258）按照试剂盒步骤进行生物素化，再与Thermo的磁珠结合，经BSA封闭后与噬菌体库孵育2 h，洗涤4-10次后用洗脱缓冲液洗脱特异性结合的噬菌体。
通过筛选获得了5个具有结合活性的抗体，详情见表1。
表1
Figure 774716DEST_PATH_IMAGE001
1.4 抗体分子的构建与生产
将获得的BA20、BA34、CA74、CA352、BA359进行测序，表2显示了各抗体可变区的氨基酸序列（CDR以下划线标出，分析系统为IMGT系统）。
表2
Figure 895118DEST_PATH_IMAGE002
通过常规的分子生物学技术如可变区基因扩增（2*Phanta Max Master Mix 厂家：Vazyme 货号：P515-AA 批号：TE211GB）、信号肽与可变区重叠延伸、同源重组（ClonExpress Ⅱ One Step Cloning Kit 厂家：Vazyme 货号：C112-01 批号：TE211L8）等，最终把编码抗体重链可变区的核酸片段插入带有编码抗体重链恒定区氨基酸序列（SEQID NO: 9）的核酸序列的pCDNA3.4（Life Technology）载体中，把编码抗体轻链可变区的核酸片段插入带有编码抗体轻链恒定区氨基酸序列（SEQ ID NO: 10）的核酸序列的pCDNA3.4（Life Technology）载体中，转染进入HEK293细胞在37℃\8% CO2\125rpm摇床中培养，6-7天后的瞬时表达上清通过Protein A亲和层析，纯化获得FGL1抗体，并通过UV280结合消光系数确定抗体浓度。本申请实施例中各抗体的重链恒定区和轻链恒定区氨基酸序列见表3。
表3
Figure 878118DEST_PATH_IMAGE003
1.5 利用Elisa检测小鼠/人IgG4FGL1抗体与FGL1蛋白的结合活性
纯化的5个嵌合小鼠/人IgG4 FGL1抗体（BA20、BA34、CA74、CA352、BA359）对FGL1蛋白的结合能力通过ELISA进行检测。用CBS稀释FGL1-His蛋白（义翘神州，13484-H08B）至0.2μg/mL，包被酶标板，100μL/孔，4℃孵育过夜。3%脱脂奶粉封闭，300μL/孔，37℃孵育1h后洗板2次。用PBST梯度稀释抗体，0.2μg/mL起始按照四倍梯度稀释，共8个梯度，每孔加入100μL抗体。37℃孵育1h，洗板2次。加入羊抗人IgG(H+L)/HRP（KPL, 474-1006） (1:5000稀释)100μL/孔，37℃孵育1h，洗板4次。每孔加100μL TMB，显色10min后，每孔加50μL 2M H2SO4终止反应。在多功能酶标仪上读取OD450值。结果见图1及表4, 其中，表4显示了ELISA检测各FGL1抗体与FGL1蛋白结合活性数据。可以看出：CA352与FGL1蛋白具有最高的结合力。
表4
Figure 476589DEST_PATH_IMAGE004
1.6 BiAcore检测小鼠/人IgG4FGL1抗体与FGL1蛋白的亲和力
抗体结合动力学使用基于表面等离振子共振(surface plasmon resonance，SRP)技术的BIAcore 8K 仪器测量。通过GE抗人IgG Fc 氨基偶联试剂盒（cytiva，cat#29234600），将抗人IgG Fc 抗体氨基偶联到CM5 生物传感器芯片上以获得大约5000 应答单位(response units，RU)。对于动力学测量，将FGL1蛋白（义翘神州，13484-H08B）用HBS-EP+1×(cytiva，BR-1006-69)缓冲液2倍连续稀释，50 nM起始，2倍稀释4个浓度梯度，并设置0浓度。抗体：2 μg/mL，进样时间70 s ，流速10 μL/min；FGL1蛋白：结合60 s，流速30 μL/min ，解离600 s；再生：用3 M MgCl2 buffer再生30 s，流速30 μL/min ，Startup 3次。使用简单1:1 binding结合模型或两态反应（two state reaction）模型(BIAcore InsightEvaluation Software version 2.0.15.12933) 计算结合常数（ka）和解离常数（kd），平衡解离常数（KD）以比率kd/ka 计算。BiAcore检测各候选抗体结合动力学数据见表5，可以看出：CA352抗体与FGL1亲和力最高，KD为2.14E-10。
表5
Figure 19126DEST_PATH_IMAGE005
1.7 候选FGL1抗体在蛋白水平的阻断活性
FGL1抗体对hLAG3和hFGL1的阻断使用Octet RED96（Fortebio）检测。用两个ProA传感器结合抗体，结合高度为3nm。然后用其中一个传感器同hFGL1（北京义翘神州，货号：13484-H08B）孵育，另外一个传感器同PBST孵育作为空白对照。再用这两个传感器结合hLAG3（北京义翘神州，货号：16498-H08H）。最后用第一个传感器得到的响应（Response）数值减去空白传感器的响应（Response）数值，得到“实际响应值”，表6显示了候选抗体在蛋白水平的阻断活性，结果显示各抗体均可以阻断hLAG3与hFGL1的结合。
表6
Figure 44851DEST_PATH_IMAGE006
1.8 候选FGL1抗体在细胞水平的阻断活性
用生物素试剂盒（Thermo，21335）对FGL1-his（义翘神州，13484-H08B）进行生物素化。将40μL不同浓度的各FGL1抗体（60μg/mL、15μg/mL、3.75μg/mL）与40μL 生物素化FGL1-his在4℃条件下孵育30min后，加入准备好的293T-LAG3（康源博创）细胞，每孔8x104个细胞/20μL，4℃孵育30min后用PBS洗涤一次，然后加入100μL 二抗FITC-SA（InvitrogeneBioscience，11-4317-87），4℃孵育30min，用PBS洗涤一次，最后用100μL FACS 缓冲液重悬，用流式细胞仪（艾森，NovoCyte 2060）进行检测，使用人IgG4同型对照抗体（与FGL1IgG4抗体可变区不同，恒定区相同的无关抗体），结果如图2所示，图2显示了各FGL1抗体在细胞水平的阻断活性，可以看出CA352具有最优秀的阻断活性。
实施例2. CA352抗体在小鼠体内的PK活性
取3只BALB/c小鼠，静脉注射5mg/kg的CA352抗体后，在给药前（0 h）及给药后5min、30min、1h、3h、6h、24h、48h、96h、168h、240h、336h、384h、432h于小鼠眼眶取血，置血样于收集管中，在冰盒内让其自然凝固，于血样取出后8h内置离心机中，1000 ~3000 g离心10min，分离血清，置样本保存管中，利用Elisa检测CA352抗体在BALB/c小鼠的代谢情况，结果见图3和表7。从图3和表7的CA352在BALB/c小鼠体内的PK数据可以看出，CA352在体内的半衰期为118小时，比较稳定。
表7
Figure 515147DEST_PATH_IMAGE007
应当理解的是，虽然已经结合实施例对本申请内容进行了描述，但上述描述旨在说明而不是限制本申请内容的范围，本申请内容由随附权利要求的范围界定。对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明实质和范围的情况下可以做出多种其他改变和变型。因此，在随附的权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些改变和变型。
序列表
<110> 山东博安生物技术股份有限公司
<120> 一种抗FGL1抗体及其用途
<130> 0
<150> 202110584925.5
<151> 2021-05-27
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ala Arg Ala His Trp Arg Ser Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Trp Ala Ser
1
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 7
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Ser Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala His Trp Arg Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 9
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 11
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Glu Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Thr Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Asn Tyr His Tyr Gly Ser Gly Ser Pro Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 13
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Glu Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Asp Val Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Gly Ile Ala Pro Arg Thr Ile Val Pro Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 15
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Glu Gln Gln Leu Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 16
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 17
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Leu Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Gly Ser Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Ile Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys

Claims (14)

1.一种FGL1抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于,
所述重链可变区包括SEQ ID NO: 1所示的HCDR1，SEQ ID NO: 2所示的HCDR2和SEQ IDNO: 3所示的HCDR3，并且所述轻链可变区包括SEQ ID NO: 4所示的LCDR1，SEQ ID NO: 5所示的LCDR2和SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
2.根据权利要求1所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于，
所述重链可变区包括与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列，和/或所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述FGL1抗体或其抗原结合片段包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
4.根据权利要求3所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv。
5.根据权利要求4所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述Fv包括scFv或dsFv片段。
6.根据权利要求1或2所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述FGL1抗体或其抗原结合片段包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区氨基酸序列如SEQ IDNO: 9所示，所述轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO: 10所示。
7.一种核酸，其特征在于，包括编码权利要求1-6中任一项所述的FGL1抗体或其抗原结合片段的核酸序列。
8.一种载体，其特征在于，包含权利要求7所述的核酸。
9.一种宿主细胞，其特征在于，包括权利要求1-6中任一项所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求7所述的核酸，或权利要求8所述的载体。
10.一种产生FGL1抗体或其抗原结合片段的方法，其特征在于，包括培养权利要求9所述的宿主细胞，使其产生FGL1抗体或其抗原结合片段的步骤。
11.一种FGL1抗体或其抗原结合片段，其特征在于，由权利要求10所述方法产生。
12.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-6中任一项所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求11所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求7所述的核酸，或权利要求8所述的载体，或权利要求9所述的宿主细胞。
13.一种试剂盒，其特征在于，含有权利要求1-6中任一项所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求11所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求7所述的核酸，或权利要求8所述的载体，或权利要求9所述的宿主细胞，或权利要求12所述的药物组合物。
14.权利要求1-6中任一项所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求11所述的FGL1抗体或其抗原结合片段，或权利要求7所述的核酸，或权利要求8所述的载体，或权利要求9所述的宿主细胞，或权利要求12所述的药物组合物，或权利要求13所述的试剂盒在制备检测、诊断肿瘤的试剂或治疗肿瘤的药物中的应用。
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