CN114539376B - 拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用 - Google Patents

拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114539376B
CN114539376B CN202210051038.6A CN202210051038A CN114539376B CN 114539376 B CN114539376 B CN 114539376B CN 202210051038 A CN202210051038 A CN 202210051038A CN 114539376 B CN114539376 B CN 114539376B
Authority
CN
China
Prior art keywords
gene
biomarker
scylla paramamosain
cyp2
reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210051038.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114539376A (zh
Inventor
程长洪
郭志勋
马红玲
刘广鑫
冯娟
邓益琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences
Original Assignee
South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences filed Critical South China Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy Fishery Sciences
Priority to CN202210051038.6A priority Critical patent/CN114539376B/zh
Publication of CN114539376A publication Critical patent/CN114539376A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114539376B publication Critical patent/CN114539376B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43509—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from crustaceans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/124—Animal traits, i.e. production traits, including athletic performance or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的应用。本发明从拟穴青蟹中克隆到拟穴青蟹生物标记物CYP2基因(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，该基因在肝胰腺、鳃、肠、血细胞、心脏、肌肉和胃组织中都有表达，其中在心脏中表达量最高，其次是在肝胰腺中，而在肠道中表达量最低，病原菌副溶血弧菌刺激拟穴青蟹后，SpCYP2基因表达量显著上调，在重金属镉胁迫下，SpCYP2基因表达量显著上调。CYP2基因在毒理学应用上可作为独特的生物标志物，在评价水产动物健康状态具有重要的应用价值。

Description

拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的 应用
技术领域：
本发明属于病害防治领域，具体涉及拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的应用。
背景技术：
拟穴青蟹俗称青蟹，具有肉质鲜美营、养价值高等特点，深受消费者喜爱。拟穴青蟹主要分布在我国东南沿海以及东南亚一些国家。拟穴青蟹是我国重要的养殖海水蟹类之一，养殖产量超过16.8万吨。我国拟穴青蟹养殖模式主要以池塘养殖为主，养殖模式相对粗放。近年来，由于青蟹细菌性疾病和水环境中重金属胁迫等因素，导致青蟹病害爆发严重，青蟹亩产量不高，严重阻碍了青蟹产业健康发展。因此，急需发展青蟹病害监测技术，及时防控病害爆发与传播，为提高青蟹产量提高有效手段。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种独特的生物标志物，在评价水产动物健康状态具有重要的应用价值的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其编码蛋白-CYP2蛋白。
所述的CYP2蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
编码上述CYP2蛋白的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因。
优选，所述的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个目的是提供上述拟穴青蟹生物标记物CYP2基因作为生物标志物在制备评价水产动物健康状态的病理检测试剂中的应用。
优选，是检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂在制备评价水产动物健康状态的病理检测试剂中的应用。
优选，所述的检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂是定量PCR试剂。
进一步优选，所述的定量PCR试剂，其定量引物是：
SpCYP2-F:5’-TGGTGGCAAGCAGACAGTTCG-3’,
SpCYP2-R:5’-GCCTTGTGCTTCTCGGTCTCAT-3’。
本发明的第三个目的是提供一种评价水产动物健康状态的病理检测试剂，含有检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂。
本发明从拟穴青蟹中克隆到拟穴青蟹生物标记物CYP2基因，该基因在肝胰腺、鳃、肠、血细胞、心脏、肌肉和胃组织中都有表达，其中在心脏中表达量最高，其次是在肝胰腺中，而在肠道中表达量最低，病原菌副溶血弧菌刺激拟穴青蟹后，SpCYP2基因表达量显著上调，在重金属镉胁迫下，SpCYP2基因表达量显著上调。CYP2基因在毒理学应用上可作为独特的生物标志物，在评价水产动物健康状态具有重要的应用价值。
附图说明：
图1是SpCYP2基因的cDNA序列和氨基酸序列；
图2是SpCYP2基因在不同组织中表达情况，不同字母表示不同组织间差异显著；
图3是在副溶血弧菌刺激下SpCYP2基因表达变化情况，星号(*)表示对照组和副溶血弧菌显著性差异；
图4是在重金属镉刺激下SpCYP2基因表达变化情况，不同字母表示不同组之间差异显著。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
1.材料方法
1.1 RNA提取和cDNA合成
采样Trizol从拟穴青蟹肝胰腺中提取总RNA。
(1)取0.1mg肝胰腺组织进行研磨，加1ml Trizol，冰上静置10min；
(2)12,000rpm离心5min，取上清液，加200ul氯仿，剧烈震荡，冰上静置5min；
(3)12,000rpm离心5min，吸取上层水相，加入等体积的异丙醇，冰上静置5-10min；
(4)12,000rpm离心5min，弃上清，加入1ml 75％酒精，冰上静置5-10min；
(5)8,000g离心5min，弃上清，室温晾干；
(6)加入50ul DEPC水进行溶解。
利用分光光度计测量提取RNA，采样琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。将检测合格的RNA利用Takara公司的逆转录试剂盒反转录成cDNA。
1.2CYP2基因全长合成
利用本实验室先前构建的拟穴青蟹转录组文库，通过序列比对、分析并确定拟穴青蟹CYP2(SpCYP2)部分基因序列，通过该序列，使用Primer5.0软件，分别设计SpCYP2的5’和3’端引物，使用SMARTTMRACE cDNAAmplification kit(Takara，中国大连)试剂盒，进行该基因5’和3’端PCR扩增，具体操作方法参考说明书。PCR扩增产物进行测序，分别得到5’和3’端，然后进行拼接、比对得到SpCYP2基因全长cDNA，其核苷酸序列如下所示：ATGCTGGTGGAGCTGCTTCTGTTCGTTGTGCTGGTGTTCCTGTTGTGGAAGACCTTCAGGAAACCCCCCGGACTGCCTCCAGGCAAGTGGGGGCTTCCTCTAGTGGGCTACATACCCTGGACCAGTAAGAGCTTTGAGGAGCAGGTGATGGACCTCCACGAGCAGTATGGAGACATCTTCCTGTGGAGGATGGGGACTCAGTTAATGGTTTTTATAAAGGACTACAAACTGATGAAAGAAGCTTTCTCCAGATCCGAGTTTACTCACAGACCAAACTGGGAGGTCCTGAAGTTTATAGAGGAAGTTCCACATGGAATCGTTTCAAGTAGTGGCATTATATGGCACAACAACCGGAGATTTACGCTGAGGCAGCTGCGTGACCTTGGCATGGGCAAGTCCTCCCTGGTGGGGGCGGTGCAGGACCAAGGCCTCAAGCTGCGGGAGACTCTCGCAGAGAGGGCTGGAACACCCGGAATGATTCCCCATCAGCTTCACCTGTCTTTGATCAACGTGATCTGGCACATGGTGGCAAGCAGACAGTTCGATGCAGAAGACGAAAGATTACATGAGTTTGTAAAACTTTTGTCAGAATTTGTTTTACTTTCAAATCGACTGGCCATCAAGGACTTCATGCCATGGATGCAAAATGTCATGCCGGATTTCCTCTTTAAACGCCTCATAAAGTATCATGAACTGATAGACTTGAAGGAAAAATTTATGCGATACTTTAAGGATGAGACCGAGAAGCACAAGGCCACTTTGGATCCAGACAACCCGCGGGACCTCATTGATAACTACCTGCTGGAGATGGAGGCCAAGAAAGATGATCCGGAGACAACCTGCAGCGAGGAGGATTTGTTGTTTATAATGTTTGAGTTGTTCAGTGCGGGGAGTGAGACCTCTGCCTACACTTTCATGTGGCTGTGTTGCTACCTGGCCGCACACCCGGAGGTTCAGCACAAGTTGCATGCTGAAGTTGACGAAGTGCTTCCCAATGGAGCTCTGCCCACTTTGGCGGAGAAGCCCAGGATGCCGTACACAGAGGCAGTGATCAACGAGGCGATGAGGGCTTGTGCACTGGTAAACTTCGGAGTACAGCACATGGCCGCCAGTGACACGCAGCTCGGGGGCTACACCATTCCCAAGGGAGCGGTCGTGAGCTCCACCGTCACGTCCATGCACTATGACAGTCTATACTGGGATCGACCCAAGGAGTTCAGGCCGGAGCGCTGGCTGGATGAGAACGGCAAATTCTTCATGGCCAAGGAGGGGTTCCTGCCCTTCGGTGTGGGAAAAAGAGTGTGTGTCGGGGAAAGTCTTGCCCGGATGGAGCTGTTCATCTTCACCACCATGGTCTTCCAAAGCTTCTCCATCGCTCCTGCGCCTGGCAAGTCCGTCAACTTGACACCTGATTTGAGGGGTTTCTTTTTCCGGAAGCCAGTGCCCAATGAGTTCGTCTTCACCGTCAGGAAACAGTAA，具体如SEQ ID NO.1所示。
1.3荧光定量PCR
跟据拟穴青蟹SpCYP2基因全长cDNA序列，使用Primer5.0软件，设计荧光定量引物，其引物序列为：SpCYP2-F:5’-TGGTGGCAAGCAGACAGTTCG-3’,SpCYP2-R:5’-GCCTTGTGCTTCTCGGTCTCAT-3’。
把拟穴青蟹18s rRNA当做内参基因，根据其核苷酸序列，同样使用Primer5.0软件，设计荧光定量引物，其引物序列为：Sp18s-F:5’-TTTTCTGAACCCGAGGTAATGAC-3’和Sp18s-R:5’-ATGCTTTCGCAGTAGTTCGTCTT-3’。利用上述反转录的cDNA模板，使用Takara TB
Figure BDA0003474354320000051
Premix Ex TaqTM荧光定量试剂盒，反应体系为：
Figure BDA0003474354320000052
在德国耶拿荧光定量PCR仪器中进行荧光定量PCR，循环条件如下：95℃30s，1个循环；接下来运行40个循环：95℃5s，59℃20s；进行溶解曲线分析。相对荧光定量使用2－ΔΔCT方法对结果进行分析和统计，实验组和对照组均设置6个平行反应。
1.4实时荧光定量PCR检测SpCYP2基因在不同组织中的分布及病原菌和重金属镉胁迫刺激SpCYP2基因的表达
分别选取6只拟穴青蟹，分离肝胰腺、鳃、肠、血细胞、心脏、肌肉和胃组织，并提取各个组织总RNA和进行反转录为cDNA(见步骤1.1)，荧光定量分析SpCYP2基因表达情况。
选取拟穴青蟹，每个分别注射1×106个病原菌副溶血弧菌，以注射PBS为对照组，在感染12、24、48和72h后取肝胰腺组织。对各个肝胰腺组织进行总RNA提取并反转录为cDNA(见步骤1.1)，依此为模版，进行荧光定量PCR，分析SpCYP2基因变化情况。
选取拟穴青蟹分为四组，对照组加0mg/L重金属镉，实验组分别加0.01mg/L重金属镉，0.05mg/L重金属和0.125mg/L重金属。在胁迫21天后，取肝胰腺组织。对各个肝胰腺组织进行总RNA提取并反转录为cDNA(见步骤1.1)，依此为模版，进行荧光定量PCR，分析SpCYP2基因在重金属镉胁迫下变化情况。
2实验结果
2.1拟穴青蟹SpCYP2基因生物信息学分析
SpCYP2基因全长为2259bp，其中5’非编码区长度为104bp，3’非编码区长度为676bp。开放阅读框长度为1479bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码492个氨基酸(图1)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。SpCYP2基因全长序列中含有一个多聚腺苷酸尾巴。SpCYP2蛋白分子量为56.98kDa，等电点为6.23。氨基酸比对发现SpCYP2具有细胞色素P450酶亚铁血红素蛋白结合位点。
2.2拟穴青蟹SpCYP2组织表达分析
拟穴青蟹SpCYP2在肝胰腺、鳃、肠、血细胞、心脏、肌肉和胃组织中都有表达，其中在心脏中表达量最高，其次是在肝胰腺中，而在肠道中表达量最低(图2)。
2.3 SpCYP2在病原菌副溶血弧菌刺激下基因变化情况
病原菌副溶血弧菌刺激拟穴青蟹后，SpCYP2基因表达量显著上调(图3)。
2.4 SpCYP2在重金属镉胁迫基因变化情况
与对照组相比，在重金属镉胁迫下，SpCYP2基因表达量显著上调(图4)。
序列表
<110> 中国水产科学研究院南海水产研究所
<120> 拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1479
<212> DNA
<213> 拟穴青蟹(Scylla paramamosain)
<400> 1
atgctggtgg agctgcttct gttcgttgtg ctggtgttcc tgttgtggaa gaccttcagg 60
aaaccccccg gactgcctcc aggcaagtgg gggcttcctc tagtgggcta cataccctgg 120
accagtaaga gctttgagga gcaggtgatg gacctccacg agcagtatgg agacatcttc 180
ctgtggagga tggggactca gttaatggtt tttataaagg actacaaact gatgaaagaa 240
gctttctcca gatccgagtt tactcacaga ccaaactggg aggtcctgaa gtttatagag 300
gaagttccac atggaatcgt ttcaagtagt ggcattatat ggcacaacaa ccggagattt 360
acgctgaggc agctgcgtga ccttggcatg ggcaagtcct ccctggtggg ggcggtgcag 420
gaccaaggcc tcaagctgcg ggagactctc gcagagaggg ctggaacacc cggaatgatt 480
ccccatcagc ttcacctgtc tttgatcaac gtgatctggc acatggtggc aagcagacag 540
ttcgatgcag aagacgaaag attacatgag tttgtaaaac ttttgtcaga atttgtttta 600
ctttcaaatc gactggccat caaggacttc atgccatgga tgcaaaatgt catgccggat 660
ttcctcttta aacgcctcat aaagtatcat gaactgatag acttgaagga aaaatttatg 720
cgatacttta aggatgagac cgagaagcac aaggccactt tggatccaga caacccgcgg 780
gacctcattg ataactacct gctggagatg gaggccaaga aagatgatcc ggagacaacc 840
tgcagcgagg aggatttgtt gtttataatg tttgagttgt tcagtgcggg gagtgagacc 900
tctgcctaca ctttcatgtg gctgtgttgc tacctggccg cacacccgga ggttcagcac 960
aagttgcatg ctgaagttga cgaagtgctt cccaatggag ctctgcccac tttggcggag 1020
aagcccagga tgccgtacac agaggcagtg atcaacgagg cgatgagggc ttgtgcactg 1080
gtaaacttcg gagtacagca catggccgcc agtgacacgc agctcggggg ctacaccatt 1140
cccaagggag cggtcgtgag ctccaccgtc acgtccatgc actatgacag tctatactgg 1200
gatcgaccca aggagttcag gccggagcgc tggctggatg agaacggcaa attcttcatg 1260
gccaaggagg ggttcctgcc cttcggtgtg ggaaaaagag tgtgtgtcgg ggaaagtctt 1320
gcccggatgg agctgttcat cttcaccacc atggtcttcc aaagcttctc catcgctcct 1380
gcgcctggca agtccgtcaa cttgacacct gatttgaggg gtttcttttt ccggaagcca 1440
gtgcccaatg agttcgtctt caccgtcagg aaacagtaa 1479
<210> 2
<211> 492
<212> PRT
<213> 拟穴青蟹(Scylla paramamosain)
<400> 2
Met Leu Val Glu Leu Leu Leu Phe Val Val Leu Val Phe Leu Leu Trp
1 5 10 15
Lys Thr Phe Arg Lys Pro Pro Gly Leu Pro Pro Gly Lys Trp Gly Leu
20 25 30
Pro Leu Val Gly Tyr Ile Pro Trp Thr Ser Lys Ser Phe Glu Glu Gln
35 40 45
Val Met Asp Leu His Glu Gln Tyr Gly Asp Ile Phe Leu Trp Arg Met
50 55 60
Gly Thr Gln Leu Met Val Phe Ile Lys Asp Tyr Lys Leu Met Lys Glu
65 70 75 80
Ala Phe Ser Arg Ser Glu Phe Thr His Arg Pro Asn Trp Glu Val Leu
85 90 95
Lys Phe Ile Glu Glu Val Pro His Gly Ile Val Ser Ser Ser Gly Ile
100 105 110
Ile Trp His Asn Asn Arg Arg Phe Thr Leu Arg Gln Leu Arg Asp Leu
115 120 125
Gly Met Gly Lys Ser Ser Leu Val Gly Ala Val Gln Asp Gln Gly Leu
130 135 140
Lys Leu Arg Glu Thr Leu Ala Glu Arg Ala Gly Thr Pro Gly Met Ile
145 150 155 160
Pro His Gln Leu His Leu Ser Leu Ile Asn Val Ile Trp His Met Val
165 170 175
Ala Ser Arg Gln Phe Asp Ala Glu Asp Glu Arg Leu His Glu Phe Val
180 185 190
Lys Leu Leu Ser Glu Phe Val Leu Leu Ser Asn Arg Leu Ala Ile Lys
195 200 205
Asp Phe Met Pro Trp Met Gln Asn Val Met Pro Asp Phe Leu Phe Lys
210 215 220
Arg Leu Ile Lys Tyr His Glu Leu Ile Asp Leu Lys Glu Lys Phe Met
225 230 235 240
Arg Tyr Phe Lys Asp Glu Thr Glu Lys His Lys Ala Thr Leu Asp Pro
245 250 255
Asp Asn Pro Arg Asp Leu Ile Asp Asn Tyr Leu Leu Glu Met Glu Ala
260 265 270
Lys Lys Asp Asp Pro Glu Thr Thr Cys Ser Glu Glu Asp Leu Leu Phe
275 280 285
Ile Met Phe Glu Leu Phe Ser Ala Gly Ser Glu Thr Ser Ala Tyr Thr
290 295 300
Phe Met Trp Leu Cys Cys Tyr Leu Ala Ala His Pro Glu Val Gln His
305 310 315 320
Lys Leu His Ala Glu Val Asp Glu Val Leu Pro Asn Gly Ala Leu Pro
325 330 335
Thr Leu Ala Glu Lys Pro Arg Met Pro Tyr Thr Glu Ala Val Ile Asn
340 345 350
Glu Ala Met Arg Ala Cys Ala Leu Val Asn Phe Gly Val Gln His Met
355 360 365
Ala Ala Ser Asp Thr Gln Leu Gly Gly Tyr Thr Ile Pro Lys Gly Ala
370 375 380
Val Val Ser Ser Thr Val Thr Ser Met His Tyr Asp Ser Leu Tyr Trp
385 390 395 400
Asp Arg Pro Lys Glu Phe Arg Pro Glu Arg Trp Leu Asp Glu Asn Gly
405 410 415
Lys Phe Phe Met Ala Lys Glu Gly Phe Leu Pro Phe Gly Val Gly Lys
420 425 430
Arg Val Cys Val Gly Glu Ser Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Ile Phe
435 440 445
Thr Thr Met Val Phe Gln Ser Phe Ser Ile Ala Pro Ala Pro Gly Lys
450 455 460
Ser Val Asn Leu Thr Pro Asp Leu Arg Gly Phe Phe Phe Arg Lys Pro
465 470 475 480
Val Pro Asn Glu Phe Val Phe Thr Val Arg Lys Gln
485 490

Claims (4)

1.CYP2蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种编码权利要求1所述的CYP2蛋白的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因，其特征在于，所述的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.检测权利要求2所述的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂在制备评价水产动物健康状态的病理检测试剂中的应用，所述的检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂是定量PCR试剂，所述的定量PCR试剂，其定量引物是：
SpCYP2-F:5 ’-TGGTGGCAAGCAGACAGTTCG-3 ’,
SpCYP2-R:5 ’-GCCTTGTGCTTCTCGGTCTCAT-3 ’；
所述的病理检测试剂是病原菌或重金属镉胁迫导致的病理病害检测试剂。
4.一种评价水产动物健康状态的病理检测试剂，其特征在于，含有检测权利要求2所述的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂，所述的检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂是定量PCR试剂，所述的定量PCR试剂，其定量引物是：
SpCYP2-F:5 ’-TGGTGGCAAGCAGACAGTTCG-3 ’,
SpCYP2-R:5 ’-GCCTTGTGCTTCTCGGTCTCAT-3 ’；
所述的病理检测试剂是病原菌或重金属镉胁迫导致的病理病害检测试剂。
CN202210051038.6A 2022-01-17 2022-01-17 拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用 Active CN114539376B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210051038.6A CN114539376B (zh) 2022-01-17 2022-01-17 拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210051038.6A CN114539376B (zh) 2022-01-17 2022-01-17 拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114539376A CN114539376A (zh) 2022-05-27
CN114539376B true CN114539376B (zh) 2023-06-13

Family

ID=81671038

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210051038.6A Active CN114539376B (zh) 2022-01-17 2022-01-17 拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114539376B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101063132A (zh) * 2006-05-15 2007-10-31 中国水产科学研究院南海水产研究所 花鲈白细胞介素8基因序列
CN110684776A (zh) * 2019-09-12 2020-01-14 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种斑节对虾Na+/K+/2Cl-协同转运蛋白NKCC基因及其应用
CN113383018A (zh) * 2018-09-05 2021-09-10 波赛达治疗公司 同种异体细胞组合物和使用方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050032070A1 (en) * 2003-08-05 2005-02-10 Sebastian Raimundo Polymorphisms in the human gene for CYP2D6 and their use in diagnostic and therapeutic applications
WO2009067581A1 (en) * 2007-11-20 2009-05-28 University Of Hawaii Nucleotide sequence of shrimp actin promoter and its use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101063132A (zh) * 2006-05-15 2007-10-31 中国水产科学研究院南海水产研究所 花鲈白细胞介素8基因序列
CN113383018A (zh) * 2018-09-05 2021-09-10 波赛达治疗公司 同种异体细胞组合物和使用方法
CN110684776A (zh) * 2019-09-12 2020-01-14 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种斑节对虾Na+/K+/2Cl-协同转运蛋白NKCC基因及其应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Aleksi Tornio.Cytochrome P450 in Pharmacogenetics: An Update.《Advances in Pharmacology 》.2018,第83卷第3-32页. *
Genbank."Accession No.:XP_045128269.1,cytochrome P450 2L1-like [Portunus trituberculatus]".《Genbank》.2021,Features. *
Genbank." XM_045272334.1，PREDICTED: Portunus trituberculatus cytochrome P450 2L1-like (LOC123514413), mRNA".《Genbank》.2021,Features. *
冯艳艳.三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CYP2基因的cDNA克隆及表达分析.《海洋与湖沼》.2014,第45卷(第5期),第997-1005页. *
张林姿. 拟穴青蟹CYP302a1基因的克隆及表达模式分析.《海洋渔业》.2021,第43卷(第1期),第31-41页. *
蒲红双. 中华绒螯蟹细胞色素CYP2基因的克隆与表达分析.《水产科学》.2017,第36卷(第2期),第153-159页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114539376A (zh) 2022-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Comparative transcriptome analyses of drought-resistant and-susceptible Brassica napus L. and development of EST-SSR markers by RNA-Seq
CN109576275B (zh) 一种半滑舌鳎抗细菌病相关基因及其应用方法
CN112266973B (zh) 一种与小麦穗发芽抗性相关的snp分子标记及其应用
CN103320517B (zh) 一种快速检测红鳍东方鲀幼鱼性别差异的引物和方法
CN110607359B (zh) 一种虾夷扇贝雌性特异性标记组合及应用
CN109694906B (zh) 一种鉴定中华绒螯蟹性别的特异性分子标记
CN110129452A (zh) 一种早期鉴定鸭屠体性能的分子标记及其鉴定方法和应用
CN112226518A (zh) 一种快速鉴定红螯螯虾遗传性别的分子标记c69483及其应用
CN115261489A (zh) 一种长春鳊微卫星标记的引物组及其运用和鉴评方法
CN114539376B (zh) 拟穴青蟹生物标记物cyp2基因及其在制备病理检测试剂中的应用
CN112226497B (zh) 一种快速鉴定红螯螯虾遗传性别的分子标记c98284及其应用
CN111206107B (zh) 鉴定鲟鱼性别的microRNA血清标志物、引物组、试剂盒及其应用
CN112322768A (zh) 一种沙棘枝干枯萎病诊断及病原菌的快速rpa检测方法
CN108588238B (zh) 一种快速鉴定锈斑蟳性别特异分子标记和遗传性别的方法
CN111394360A (zh) 一种飞蝗帽和领C型异构体基因dsRNA及其应用
CN114457085B (zh) 拟穴青蟹cap′n′collar基因及其在制备病理检测诊断试剂中的应用
CN111718941A (zh) 一种与芹菜非生物胁迫相关的转录因子AgbZIP16基因序列及其应用
CN113174441B (zh) 一种鸭剩余采食量相关的lncRNA及其应用
CN110669769B (zh) 砗磲免疫相关的saa基因及其在制备砗磲病理检测试剂中的应用
CN116789788A (zh) 一种拟穴青蟹hsc70基因及其在制备青蟹病理检测试剂中的应用
CN117088959A (zh) 拟穴青蟹内质网应激标记物atf6基因及其在制备病理检测试剂中的应用
CN118221795A (zh) 一种杂色鲍Hd-DMBT1基因及其在制备杂色鲍病理检测试剂中的应用
CN110894544A (zh) 鲑鱼甲病毒（sav）的raa恒温荧光检测方法及试剂
CN103509099A (zh) 一种半滑舌鳎雌性特异表达基因csw2及其应用
CN116042796B (zh) 鉴别山瑞鳖性别的分子标记、引物对及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant