CN114532412B - 一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法，包括如下步骤：取南瓜籽蛋白，溶解到磷酸缓冲液中，得到南瓜籽蛋白溶液；取磷脂，溶解到磷酸缓冲液中，得南瓜籽蛋白‑磷脂混合溶液，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白；称取改性南瓜籽蛋白，向其加入蒸馏水充分溶解，得改性蛋白溶液，再水合过夜，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液与南瓜籽油混合，得到混合相，进行高速剪切，得到乳化液；称取多糖，加入到乳化液中，得到南瓜籽油纳米乳液。该南瓜籽油的乳液递送体系制备方法简单，工艺安全，与直接服用南瓜籽油相比，能显著提升其改善良性前列腺增生的效果，最终产品能够实现南瓜籽油功能活性的高效递送。
Description
技术领域
本发明涉及生物质材料制备方法和食品加工技术领域，具体涉及一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法。
背景技术
南瓜籽油中含有丰富的生物活性成分，主要有不饱和脂肪酸、植物甾醇、生育酚、类胡萝卜素、矿物质元素等，具有预防动脉粥样硬化、预防和治疗泌尿系统疾病、抗衰老、抗肿瘤等功能，是世界上公认的药食两用植物油。但是其具有水溶性差的缺点，不易添加至食品基质中，而直接饮用又存在口感差、油腻感强等问题，在很大程度上限制了其作为功能性油脂的应用，因此开发南瓜籽油递送体系，对扩大其应用范围有重要意义。
在食品工业中，O/W型乳液可以将不饱和脂肪酸、维生素E等疏水活性成分包埋于内部的油相，从而提高被包埋物的稳定性，是递送必需脂肪酸和脂溶性营养成分的重要载体。然而，O/W型乳液是热力学不稳定体系，油-水界面的界面自由能较高，需要借助乳化剂降低界面张力来维持乳液稳定。在胃肠道消化中,脂肪酶水解油脂主要发生在油水界面,并且脂肪酶的活性取决于其到达界面的空间通路和覆盖在乳滴界面上的物质。不同于有一定毒害性的传统两亲性表面活性剂,天然生物大分子,比如蛋白质、多糖等,可以吸附在油水界面形成一定的界面结构以稳定乳液。这种界面结构在乳液油脂消化方面起到非常重要的作用。
综上，有必要研究一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法，充分发挥南瓜籽营养价值，充分利用南瓜籽油中生物活性物质，使其更大限度的发挥降血脂和改善前列腺疾病的功能。
发明内容
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺安全、制备便捷的高效递送南瓜籽油功能活性的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法，包括如下步骤：
步骤一、取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液，取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白；
步骤二、称取改性南瓜籽蛋白0.2-0.5份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得改性蛋白溶液，然后调剂其pH至9-11，再将其置于4℃冰箱中水合过夜，再调剂其pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；
步骤三、将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液20-50份与南瓜籽油50-80份混合，得到混合相，再将其进行高速剪切，得到乳化液；
步骤四、称取多糖0.1-0.5份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，再将其置于高压均质机中均质乳化，得到南瓜籽油纳米乳液。
优选的，所述步骤一中：南瓜籽蛋白溶液与磷脂溶液浓度均为5％。
优选的，所述步骤一中：南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1:10。
优选的，所述步骤二中：将蛋白溶液置于4℃冰箱中水合，所述水合时间为 24h。
优选的，所述步骤三中：得到乳化液的过程为：第一阶段，将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；第二阶段：将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。
优选的，所述步骤四中：二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为 12000r/min，时间为3min，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力 600bar。
优选的，所述南瓜籽油为超临界CO2萃取法制备所得，其脂肪酸组成如下：亚油酸含量40.13±0.05％、油酸含量35.65±0.07％、棕榈酸10.82±0.07％、硬脂酸13.40±0.09％。
优选的，所述南瓜籽蛋白是以脱脂南瓜籽粕为原料，采用碱溶酸沉法制备所得，其蛋白含量达98％左右。
优选的，所述磷脂为大豆磷脂、菜籽磷脂中的任意一种。
优选的，所述多糖包括壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠中的任意一种或两种组合。
本发明与现有技术相比，其有益效果是：本发明使用磷脂对南瓜籽蛋白进行改性，提高其乳化性和乳化稳定性；继而采用改性南瓜籽蛋白与多糖作为复合乳化剂，采用高压均质法制备出南瓜籽油纳米乳液，作为递送系统来递送南瓜籽油中功能活性成分。在经过2h小肠阶段的模拟体外消化后，南瓜籽油纳米乳液有较高的游离脂肪酸释放率(90％左右)；在动物实验中，其对大鼠前列腺湿重的抑制率达到60.0％-66.0％，对前列腺指数的抑制率为55.1％-65.9％。而南瓜籽油预防前列腺增生的作用，源于其含有植物甾醇。南瓜素、微量元素，氨基酸、维生素等活性物质。以上研究结果表明将南瓜籽油制备成纳米乳液达到了高效递送南瓜籽油中功能活性成分的目的。
附图说明
图1是本发明中游离脂肪酸释放率(FFA％)的示意图。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
步骤二、称取改性南瓜籽蛋白0.2-0.5份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得改性蛋白溶液，然后调剂其pH至9-11。再将其置于4℃冰箱中水合，所述水合时间为24h，再用调剂其pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；
步骤三、将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液20-50份与南瓜籽油50-80份混合，得到混合相，第一阶段：将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌 15min，使其充分混合后得到混合溶液；第二阶段：将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。
步骤四、称取多糖0.1-0.5份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液。二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，得到南瓜籽油纳米乳液，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar。
南瓜籽油纳米乳液由以下重量份的原料制成：南瓜籽油50-80份，南瓜籽蛋白0.2-0.5份，磷脂0.02-0.05份，多糖0.1-0.5份、蒸馏水20-50份。所述南瓜籽油为超临界CO2萃取法制备所得，其脂肪酸组成如下：亚油酸含量40.13 ±0.05％、油酸含量35.65±0.07％、棕榈酸10.82±0.07％、硬脂酸13.40±0.09％。所述南瓜籽蛋白是以脱脂南瓜籽粕为原料，采用碱溶酸沉法制备所得，其蛋白含量达98％左右。所述磷脂包括大豆磷脂和菜籽磷脂中的任意一种。所述多糖包括壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠中的任意一种或两种组合。
实施例1
取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
称取改性南瓜籽蛋白0.5份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于 2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至11，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用 0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液40份与南瓜籽油60份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取卡拉胶0.2份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
实施例2
取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
称取改性南瓜籽蛋白0.2份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于 2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至10，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用 0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液20-50份与南瓜籽油50-80份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取黄原胶0.1份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
实施例3
取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
称取改性南瓜籽蛋白0.3份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于 2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至9.5，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用 0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液50份与南瓜籽油50份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取壳聚糖0.3份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
实施例4
取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
称取改性南瓜籽蛋白0.4份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至11，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用 0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液30份与南瓜籽油70份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取羧甲基纤维素钠0.4份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
实施例5
取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
称取改性南瓜籽蛋白0.3份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于 2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至9，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液40份与南瓜籽油60份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取卡拉胶0.5份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
实施例6
取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，使其浓度为5％，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液。取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，使其中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1：10，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白。
称取改性南瓜籽蛋白0.2份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于 2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至9，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液50份与南瓜籽油50份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取海藻酸钠0.3份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min。再将二次乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
对比例1
称取未改性南瓜籽蛋白0.5份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于 2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至10，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用 0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液20-50份与南瓜籽油50-80份混合，得到混合相；将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。再将乳化液置于高压均质机中均质，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar，得到南瓜籽油纳米乳液。
对比例2
称取南瓜籽蛋白0.2份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于2000-3000r/min 的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得蛋白溶液，然后用0.1mol/L氢氧化钠溶液调剂蛋白溶液pH至11，再将其置于4℃冰箱中水合24h，然后用0.1mol/L盐酸溶液调剂蛋白溶液pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液30份与南瓜籽油70份混合，得到混合相；将所述的混合相于 2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，得到乳化液，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min。称取黄原胶0.2份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为 12000r/min，时间为3min。
对比例3
超临界CO2南瓜籽油。
如上实施例和对比例通过对比产品在体外模拟消化过程中游离脂肪酸 (Freefatty acids,FFA)释放率、动物实验过程中对大鼠前列腺湿重和指数的影响来综合评价纳米乳液作为南瓜籽油功能活性成分递送系统的递送效果。 FFA的释放率可直接表明南瓜籽油的消化程度；对大鼠前列腺湿重和前列腺指数的抑制率可从侧面反映出南瓜籽油功能活性成分的生物利用率。
图1给出了实施例1-6以及对比例1-3产品在体外模拟消化过程中的游离脂肪酸释放率(FFA％)。在经历模拟口腔和胃消化结束后，进入到肠消化阶段 (2h)，期间使用0.1mol/L的NaOH溶液滴定使混合体系的pH维持在7.0。
式中，Mlipid为脂肪的平均分子质量(g/moL)(南瓜籽油皂化值188.9mg/g，换算为890.9g/mol)
VNaOH为消化时间为t时所消耗的NaOH溶液的体积(mL)
CNaOH为滴定用NaOH溶液的浓度(mol/l)
从图1中可知，经过小肠阶段的模拟消化后，游离脂肪酸释放率的大小排序为实施例1-6＞对比例1＞对比例3＞对比例2，其中，实施例1-6与对比例1 均为南瓜籽油纳米乳液，但是对比例1中的乳化剂是未经改性的南瓜籽蛋白，且缺少与多糖类物质的结合，所制备的乳液各方面性质要差一点；而对比例2 在制备过程中减少了高压均质这一步骤，所得产品为微米级乳液。造成这一结果的原因可能是由于纳米级的乳液油水体系增大了脂肪酶与油滴的接触面积，从而提高脂肪的水解速度。这一结果证明，纳米乳液运载体系能有效地改善油脂的消化。
表1给出了实施例1-6以及对比例1-3产品对BHP大鼠前列腺湿重和指数的影响。雄激素诱导BPH大鼠模型的建立：适应性饲养7天后，将70只大鼠随机分成7组，每组10只。除①正常对照组(n＝10)腹部皮下注射溶剂玉米油外，其余各组动物腹部皮下注射丙酸睾酮5mg/kg，每天一次，连续28天。
①正常对照组：灌胃生理盐水，每天一次，连续28天。
②模型组：灌胃生理盐水，每天一次，连续28天。
③阳性对照组：灌胃非那雄胺1mg/kg，每天一次，连续28天。
④样品组：灌胃实施例1-6和对比例1-3相应的产品，每天一次，连续28天。其中，前列腺组织湿重检测方法：末次给药后次日清晨，称大鼠体重，处死大鼠，仔细分离各叶前列腺，用滤纸吸干，为了防水分蒸发，将前列腺置于加盖平皿中，用电子天平称取前列腺组织湿重。计算各组大鼠的前列腺湿重平均值，前列腺指数(PI)和抑制率[PI＝前列腺重(mg)/体重(g)，抑制率＝100-﹝(处理组- 阴性对照组)/(模型组-阴性对照组)×100﹞]。
表1、实施例和对比例产品对BHP大鼠前列腺湿重和指数的影响
从表1中可知，由表1可知，模型组、阳性对照组及样品组的大鼠体重在喂养28天后平均增加了61.5-74.0g，说明给药对大鼠体重整体无显著影响。与正常对照组相比，模型组的前列腺湿重和前列腺指数显著增大(p<0.01)。非那雄胺组及各给药组的前列腺指数和前列腺湿重均显著低于溶剂模型组。其中非那雄胺对前列腺湿重和前列腺指数的抑制率分别为60.0％和57.4％；实施例1-6 产品对前列腺湿重的抑制率分别为60.0％-66.0％，对前列腺指数的抑制率分别 55.1％-65.9％，与非那雄胺抑制率无显著性差异。对比例1-3也能显著降低BHP 大鼠前列腺湿重，但抑制效果相对实施例与非那雄胺偏低。表明南瓜籽油纳米乳液这一递送体系能高效递送南瓜籽油中功能活性成分，提高生物利用率。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，易实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (1)
1.一种高效递送南瓜籽油功能活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、取一定量南瓜籽蛋白，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，室温下搅拌1h，使其充分溶解后得到南瓜籽蛋白溶液；取适量的磷脂，溶解到一定量的pH值为7.2磷酸缓冲液中，在50℃恒温条件下搅拌1h，使其充分溶解后得到磷脂溶液，取上述南瓜籽蛋白溶液加入到一定量的磷脂溶液，得南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液，于室温下搅拌1h，经真空冷冻干燥后，即得改性南瓜籽蛋白；南瓜籽蛋白溶液与磷脂溶液浓度均为5%，南瓜籽蛋白-磷脂混合溶液中磷脂与南瓜籽蛋白的比例为1:10；
步骤二、称取改性南瓜籽蛋白0.2-0.5份，向其加入重量100倍的蒸馏水并于2000-3000r/min的速度下磁力搅拌2h充分溶解，得改性蛋白溶液，然后调剂其pH至9-11，再将其置于4℃冰箱中水合，所述水合时间为24h，再调剂其pH至中性，得南瓜籽蛋白纳米粒子溶液；
步骤三、将所述南瓜籽蛋白纳米粒子溶液20-50份与南瓜籽油50-80份混合，得到混合相，再将其进行高速剪切，得到乳化液;得到乳化液的过程为：第一阶段，将所述的混合相于2000r/min的速度下磁力搅拌15min，使其充分混合后得到混合溶液；第二阶段：将经第一阶段后的混合溶液迅速进行高速剪切，高速剪切机的条件设置为：转速10000r/min，时间2min；
步骤四、称取多糖0.1-0.5份，加入到所述乳化液中，进行二次剪切后制得二次乳化液，再将其置于高压均质机中均质乳化，得到南瓜籽油纳米乳液；
二次剪切的条件为：设置高速剪切机的转速为12000r/min，时间为3min，高压均质的条件设置为：均质次数5次、均质压力600bar；
其中，所述南瓜籽油为超临界CO2
萃取法制备所得，其脂肪酸组成如下：亚油酸含量40.13±0.05%、油酸含量35.65±0.07%、棕榈酸10.82±0.07%、硬脂酸13.40±0.09%；所述南瓜籽蛋白是以脱脂南瓜籽粕为原料，采用碱溶酸沉法制备所得，其蛋白含量达98%；所述磷脂为大豆磷脂、菜籽磷脂中的任意一种；所述多糖包括壳聚糖、黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠中的任意一种或两种组合。
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