CN114504642A - 一种含抗cldn18.2抗体的液体药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含抗CLDN18.2抗体的液体药物组合物，包括：治疗有效量的抗CLDN18.2抗体、表面活性剂、寡糖、水和缓冲剂，所述制剂的pH为5.2～6.2。本发明的液体药物组合物组分简单，并且具有良好的稳定性，适于储藏和运输，可以实现降低包材、运输和储藏等的成本，同时保持了抗体的生物学活性。

Description

一种含抗CLDN18.2抗体的液体药物组合物

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种含抗CLDN18.2抗体(或写为抗CLDN18_2抗体)的药物组合物。

背景技术

Claudins是密封蛋白，它可以调节细胞旁路离子通道。某些密封蛋白成员在恶性肿瘤中存在差异表达。对于Claudin18.2而言，它是在短期分化的胃上皮细胞专一性表达的高选择性胃家族抗原，其对抗体药物具有有限的可及性。

Claudin18.2在恶性转移过程中是持续存在的，因此经常显示在人胃癌细胞表面。Claudin18.2最近被发现作为抗体的靶点来治疗胃癌和食道癌，同时它也是胰腺癌开发抗体药物的靶点。WO2020/018852 已经公开了一种结合Claudin18.2的新型抗体。

生物技术领域的发展使得在过去二十多年间可以通过重组DNA技术制备用于药学应用的一系列蛋白质。蛋白质药物如单克隆抗体可以用于如肿瘤治疗，例如用于特异性免疫治疗或肿瘤接种。治疗性蛋白质比常规有机和无机活性成分在结构上更大且更复杂，它们具有复杂的三维结构和许多官能团，而三维结构和官能团会影响蛋白质的生物学活性或者引起其它不希望的效应。在制备、保存和运输过程中，蛋白质药物暴露于许多外界因素中，这些外界因素可能会减弱蛋白质活性成分的稳定性。为了使蛋白质保持生物活性，制剂必须保持蛋白质氨基酸的至少一个核心序列的构象完整性，同时保护蛋白质的多个官能团免遭降解。因此有必要采取一些措施来提高蛋白质的稳定性，例如通过添加某些药学上可接受的辅料。

虽然现有文献中公开了治疗性蛋白质的许多制剂，但是由于不同蛋白质的特定理化性质和降解反应，根据现有的蛋白质配方开发应用于新蛋白质活性成分具有一定的限制。因此，对于抗CLDN18.2的新型抗体而言，开发出具有高稳定性且组分适当的药物制剂对本领域技术人员来说仍然是一个严峻的挑战。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有高稳定性且组分适当的含抗CLDN18.2新型抗体的制剂。

本发明第一方面提供了一种含抗CLDN18.2抗体的液体药物组合物，所述药物组合物包括：

治疗有效量的抗CLDN18.2抗体；

表面活性剂；

寡糖；

水；和

缓冲剂；

任选地含有pH调节剂，其中，所述药物组合物的pH为5.2～6.2。

优选地，所述的抗CLDN18.2抗体为单克隆抗体。

优选地，所述的单克隆抗体为人源化抗体。

优选地，所述的单克隆抗体结合人CLDN18.2蛋白。

优选地，所述的表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯80。

优选地，所述的寡糖为蔗糖或海藻糖。

优选地，所述的缓冲剂为磷酸盐、组氨酸-醋酸盐或醋酸盐。

优选地，所述药物组合物中水为注射用水。

优选地，所述的药物组合物包括pH调剂剂。

更为优选地，所述的pH调节剂为冰醋酸。

进一步地，所述的抗CLDN18.2抗体含量为20～30mg/mL。

进一步地，所述的表面活性剂的含量为0.02wt％～0.08wt％。

进一步地，所述的寡糖的含量为6wt％～8wt％。

进一步地，所述的缓冲剂的浓度为20～50mmol/L。

更进一步地，所述药物组合物包括：

25～30mg/mL的抗CLDN18.2抗体；

0.02wt％～0.06wt％的聚山梨酯80；

6wt％～8wt％的蔗糖；和

20～30mmol/L的组氨酸-醋酸盐；

其中，所述制剂的pH为5.5～5.8。

更进一步地，所述药物组合物包括：

25mg/mL的抗CLDN18.2抗体；

0.04wt％的聚山梨酯80；

7wt％的蔗糖；和

20mmol/L的组氨酸-醋酸盐；其中，所述制剂的pH为5.8。

优选地，所述液体药物组合物还可以制备成冻干制剂。

本发明第二方面还提供了制备第一方面所述的药物组合物的方法，所述方法包括抗 CLDN18.2抗体制备，抗体换液至液体药物组合物的其他组分后，经除菌过滤、无菌灌装的步骤。

本发明第三方面还提供了一种冻干制剂，由第一方面所述液体药物组合物经冷冻干燥制得。

进一步地，所述冻干制剂的制备方法包括预冻，抽真空，一次干燥和解析干燥的步骤。

更进一步地，所述一次干燥的升温速度为0.2℃/min。

更进一步地，所述解析干燥的升温速度为0.1℃/min。

本发明第四方面提供了如第一方面所述的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。

优选地，所述的癌症为胃癌,食道癌，胰腺癌或肝癌。

有益效果：

本发明提供了一种优异的含抗CLDN18.2抗体的液体药物组合物，本发明的液体药物组合物组分简单，并且具有良好的稳定性，适于储藏和运输，可以实现降低包材、运输和储藏等的成本，同时保持了抗体的生物学活性。

本发明的抗CLDN18.2抗体液体药物组合物在震荡/振摇、25±2℃加速试验、5±3℃长期贮存稳定性试验中均呈现出良好的稳定性，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为第一轮处方筛选的DSF研究结果曲线图，其中1～7分别代表处方A1～A7；

图2为第一轮处方筛选的DLS研究结果曲线图，其中1～7分别代表处方A1～A7；

图3为第二轮处方筛选的DSF研究结果曲线图，其中1～6分别代表处方B1～B6；

图4为第二轮处方筛选的DLS研究结果曲线图，其中1～6分别代表处方B1～B6；

图5为第三轮处方筛选的DSF研究结果曲线图，其中1～6分别代表处方C1～C6；

图6为第三轮处方筛选的DLS研究结果曲线图，其中1～6分别代表处方C1～C6。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

术语

本文中抗体指多肽包含免疫球蛋白基因或其片段的骨架区，其可以特异性结合或识别抗原。本领域公知的免疫球蛋白基因包括κ,λ,α,γ,δ,ε和μ恒定区基因，和众多的免疫球蛋白可变区基因。轻链分为κ或λ。重链分为γ，μ，α，δ或ε，依次分别命名为免疫球蛋白IgG，IgM，IgA，IgD和IgE。通常，抗体的抗原结合域在结合的特异性和亲和性上是最具有决定性作用的。

一种典型的免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对包含一条轻链(约25kD)和一条重链(50～70kD)。每条链的N端是大约100～110或更多氨基酸的主要负责抗原识别的可变区。可变的轻链(VL)和可变的重链(VH)分别指的是这些轻链和重链。

抗体存在例如完整的免疫球蛋白或一些已经表征的由多种蛋白水解酶分解产生的片段。因此，例如胃蛋白酶分解抗体位于铰链区域的二硫键来产生F(ab)'2，Fab的二聚体其本身是轻链通过二硫键结合到VH--CH1。在温和条件下F(ab)'2切断位于铰链区的二硫键可能会减弱，因此要将F(ab)'2二聚体转化为一个Fab'单体。Fab'单体本质上就是 Fab和铰链区的一部分(见基础免疫学,保罗等,3d ed.1993)。多种抗体片段是根据完整抗体的分解来定义的，其中之一的技术为所述片段是用化学或重组DNA方法重新合成的。因此，本发明所用的抗体也包含通过全抗体改变产生或用重组DNA方法重新合成的抗体片段(例如单链Fv)，又或利用噬菌体展示库鉴定的(见，例如McCafferty等,自然科学348:552-554(1990))。

“抗体稳定性”是指一种抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和 /或生物学活性。贮藏期一般基于制剂的预定货架期来选择。多种用于测量抗体稳定性的分析技术是本领域所公知的。

通常，可以在选定温度下用选定时间测定稳定性，所述注射液制剂在2～8℃下稳定至少3个月、至少6个月，优选1年，更优选2年。

如果在通过对颜色和/或透明度进行肉眼检查，或通过UV光散射或通过大小排阻层析测定时基本没有表现出明显的聚集，沉淀和/或变性的迹象，则制剂中的抗体保持它的物理稳定性。

如果在特定时间化学稳定性使得抗体被认为仍然保留了下面所定义的生物学活性，则在制剂中，所述抗体保持它的化学稳定性。可以通过检测和定量所述抗体的化学改变形式评估化学稳定性。

如果一种制剂中的抗体具有它预期用途的生物学活性，则所述抗体在制剂中保持它的生物学活性。例如，如果所述制剂中的抗体的生物学活性为在制备所述制剂时所表现出的生物学活性的大约70％～130％(在测定的误差范围内)内，就认为保持了它的生物学活性(例如，通过抗原结合测定确定)。

对于制剂的稳定性而言，可以多种不同方法定性和/或定量评估液体制剂的稳定性，包括评估二聚体、多聚体和/或聚集体形成(例如使用尺寸排阻色谱法(SEC)、基质辅助激光脱附离子化飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)、分析性超速离心、光散射(光子相关光谱法、动态光散射(DLS)、静态光散射、多角激光光散射(MALLS))、基于流动的显微镜成像、电子阻抗(库尔特(coulter))计数、光遮蔽或其它液体颗粒计数系统、通过测量混浊度和/或通过目视检查)；通过使用阳离子交换色谱(CEX)、等电聚焦(IEF)(例如毛细管技术(cIEF))或毛细管带电泳评估电荷非均匀性；氨基端或羧基端序列分析；质谱分析； SDS-PAGE或SEC分析以比较片段化、完整和多聚(即二聚、三聚等)抗体；肽图(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合功能等。不稳定性可包括以下任何一个或多个：聚集(例如非共价可溶性聚集、共价可溶性聚集(例如二硫键重排/混杂)、不溶性聚集)、脱酰胺(例如Asn脱酰胺)、氧化(例如Met氧化)、异构化(例如Asp异构化)、截断/水解/片段化(例如铰链区片段化)、丁二酰亚胺形成、N端延长、C端加工、糖基化差异等。

“抗CLDN18.2抗体”是指以足够亲和力和特异性结合CLDN18.2蛋白的抗体。抗体亲和力可以通过例如基于表面等离子共振的测定法；酶联免疫吸附测定法(ELISA) 和竞争测定法(例如RIA)来测定。本发明所述抗CLDN18.2抗体优选地为Zolbetuximab、 WO2020/018852公开的分子M5。本发明中CLDN18.2也可以写为CLDN18_2。

“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是当单独使用或与另一种治疗剂组合使用时保护受试者免于疾病发作或促进疾病消退(由疾病症状严重程度的降低，疾病无症状时期的频率和持续时间的增加，或由于患疾病而导致的损伤或残疾的预防证明)的任何药物量。治疗剂促进疾病消退的能力可以使用本领域从业技术人员已知的各种方法来评估，例如在临床试验期间在人类受试者中评估，在预测人类中的功效的动物模型系统中评估，或通过在体外测定中测定药剂的活性评估。

“注射液制剂”是指如下形式的制备物，使得容许活性组分的生物学活性有效，且不含别的对会施用该制剂的受试者有不可接受的毒性的成分。

“寡糖”是指由2～20个单糖通过糖苷键连接而形成的糖类物质。本发明中优选地为二糖，包括但不限于蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖。

“缓冲剂”是指通过其酸-碱共轭组分的作用而耐受pH变化的缓冲剂。将pH控制在适当范围中的缓冲剂的例子包括醋酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨酸盐、草酸盐、乳酸盐、磷酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、甘氨酰甘氨酸和其它有机酸缓冲剂。

“组氨酸盐缓冲剂”是包含组氨酸根离子的缓冲剂。组氨酸盐缓冲剂的实例包括组氨酸-盐酸盐，组氨酸-醋酸盐，组氨酸-磷酸盐，组氨酸-硫酸盐等缓冲剂，其中组氨酸- 醋酸盐缓冲剂是组氨酸与醋酸配制而成，组氨酸-盐酸盐缓冲剂是组氨酸与盐酸配制而成。

“冻干制剂”表示液体或溶液形式的药物组合物或液体或溶液制剂经真空冷冻干燥步骤之后获得的制剂或药物组合物。

本文公开的冷冻干燥包括预冻，抽真空和干燥，其中干燥又包括一次干燥和解析干燥。预冻目的是冷冻产品，获得结晶固体。预冻温度和预冻速度是两个重要工艺参数，预冻速度可设定为1℃/min。一次干燥也称为主干燥，是样品冷冻干燥的主要阶段。目的是移除产品里水的同时，保持产品形状，最小程度的减少对产品的破坏。若一次干燥的温度和真空度选择不当，会导致制品的塌陷。较高的温度和真空度均会加快冻干效率，但同时也会增加制品塌陷的风险。本文公开所述一次干燥的温度可为本领域常规的温度。制剂、容纳样品的容器(例如，玻璃小瓶)的大小和类型以及液体的体积决定了一次干燥所需的时间，所述时间的范围可为几小时至几天。解析干燥是通过抽极限真空和升高温度除去制品中结合水的主要步骤。解析干燥时间由产物中的期望残余湿度水平决定，通常需要至少约5小时。冷冻干燥的时间与冷冻机，冻干制剂剂量，冻干药剂的容器有关。这种时间的调整是在本领域技术人员所熟知的。

本发明中所述的冻干剂施用于患者前，应使用水性重建成分重建。这个步骤允许冻干剂中的抗体和其它成分重新溶解，以得到适于注射给患者的溶液。

典型的用于冻干抗体的重建成分包括无菌水或缓冲液，任选地含有防腐剂。如果冻干剂包括缓冲剂，则重建成分可进一步包括缓冲剂(其可以是相同或不同的冻干剂的缓冲剂)，或者其也可以不包括缓冲剂(例如，WFI(注射用水)，或生理盐水)。

本文还提供了含抗CLDN18.2抗体注射液制剂在制备预防/治疗癌症、神经退行性疾病或传染病的药物中的用途。

“预防”是指控制或延缓疾病发生的所有举措。

“治疗”是指所有减轻、改善或缓解疾病症状的举措。在本说明书中，“治疗”是指通过使用本发明的抗体来减轻、改善或缓解癌症、神经变性或传染病的症状。

“受试者”是指那些被怀疑患有或诊断为癌症、神经退行性疾病或传染病的人。然而，本发明所公开的任何用该注射液制剂治疗的受试者均包括在内，但不限于此。本发明公开的注射液制剂包括抗CLDN18.2抗体，施用给被怀疑患有癌症、神经退行性疾病或传染病的受试者。

这里所述的癌症为胃癌,食道癌，胰腺癌或肝癌。

本发明处方设计主要依据抗体药物制剂可用辅料，结合抗CLDN18.2抗体分子的理化特征等，初步确定了处方组成。借助多种分析评价手段，进行了四轮制剂处方筛选，筛选过程如下：第一轮筛选确定了合适的溶液缓冲体系(组氨酸-醋酸盐)，并以此缓冲体系为基础进行了第二轮筛选，筛选出合适的寡糖(蔗糖或海藻糖)和表面活性剂(聚山梨酯80)，第三、四轮筛选以前两轮的筛选结果(组氨酸-醋酸盐，蔗糖或海藻糖，聚山梨酯80)为基础，结合稳定性研究对比和渗透压筛选结果，确定了制剂处方。

实施例1含抗CLDN18.2抗体液体药物组合物的制备

WO2020/018852中已经公开了抗CLDN18.2抗体重链和轻链的序列，选择分子M5 构建表达抗CLDN18.2抗体的CHO细胞，悬浮培养后取上清液，经三步层析分离纯化后得到抗体溶液，再通过透析作用将抗体换液到液体药物组合物的其他组分中制成原液后冻存，后续再将抗体原液解冻、双级除菌过滤及无菌灌装制成最终液体药物组合物成品。

表达抗CLDN18.2抗体(氨基酸序列已知)的CHO细胞可以按照本领域常用分子生物学进行构建。例如CN110862454A实施例1即公开了构建表达IMAB362(一种临床研究中的抗CLDN18.2抗体，通用名Zolbetuximab)的CHO细胞。

实施例2第一轮制剂处方筛选(糖、不同pH及缓冲体系选择)

根据抗体药物制剂处方及生物制品可用辅料，结合抗CLDN18.2抗体分子的性质及初期强制降解实验数据，初步选定7个处方。然后分别用差示扫描荧光(Differentialscanning fluorescence，DSF，测定蛋白质的热稳定性参数)和动态光散射(Dynamic lightscattering，DLS，测定蛋白质流体动力学粒径分布)对7种处方样品进行了测试。

表1第一轮处方筛选

DSF的结果表明，处方A3中抗CLDN18.2抗体蛋白固有荧光变化最小，表明热稳定性最高。DLS结果表明，7种处方中的抗CLDN18.2抗体蛋白质分子均具有相似的大小分布。处方A3和处方A4具有更小的流体力学直径，因此相对更稳定。

根据DSF和DLS的研究结果，处方A3热稳定性表现较好，初步选择pH5.8的组氨酸-醋酸盐缓冲体系及糖的组合，后续将在此基础上进一步研究。

实施例3第二轮制剂处方筛选(糖和表面活性剂的选择、缓冲体系的确定)

根据第一轮筛选的结果，选择pH为5.8的组氨酸-醋酸盐缓冲体系作为基础进行第二轮筛选，同时设置pH为5.8的组氨酸-盐酸盐缓冲体系作为对照。第二轮筛选实验主要是比较处方中不同的糖(蔗糖对比海藻糖)和不同的表面活性剂(聚山梨酯20对比聚山梨酯80)对蛋白稳定性的影响，设计了表中6种处方。

表2第二轮处方筛选

DSF结果表明，处方B3、B4对抗CLDN18.2抗体的荧光变化最小，热稳定性最高。 DLS结果表明，处方B2～B4相对稳定，而处方B1、B5和B6出现了新的聚体。

根据DSF和DLS研究结果，处方B3和B4表现较好，将确定20mmol/L组氨酸- 醋酸盐、0.04wt％聚山梨酯80、6wt％海藻糖或5wt％蔗糖作为基础，进一步结合其他条件的稳定性进行研究。

实施例4第三轮制剂处方筛选(糖和pH的确定)

根据实施例1第一轮和实施例2第二轮筛选的结果，以20mmol/L组氨酸-醋酸盐，0.04wt％聚山梨酯80，6wt％海藻糖或5wt％蔗糖作为抗CLDN18.2抗体较合适的处方。第三轮实验是进一步比较糖(蔗糖和海藻糖)和pH值的选择，为第三轮筛选设计了表中6种处方。

表3第三轮处方筛选

从DSF的研究结果可以看出6种处方无明显差异。DLS研究结果表明，处方C5具有更小的流体力学直径，因此相对更稳定。

实施例5高温40℃条件初步稳定性研究

对实施例4中的处方C1～C6的样品进行高温40℃条件初步稳定性研究，重点考察SEC-HPLC、WCX-HPLC和CE-SDS纯度。

SEC-HPLC：考察各处方在高温40℃条件下0天到4周的SEC-HPLC纯度变化。发现处方C3单体含量在4周时显著下降，其他处方无明显差异。

表4高温40℃条件下SEC-HPLC纯度变化(0天到4周)

还原CE-SDS：考察各处方在高温40℃条件下0天到4周的还原CE-SDS纯度变化。各处方无明显差异。

表5高温40℃条件下还原CE-SDS纯度变化(0天到4周)

非还原CE-SDS：考察各处方在高温40℃条件下0天到4周的非还原CE-SDS纯度变化。发现处方C6的非糖基化蛋白含量显著增加，其他处方无明显差异。

表6高温40℃条件下各处方非还原CE-SDS纯度变化(0天到4周)

WCX-HPLC：考察各处方在高温40℃条件下0天到4周的WCX-HPLC纯度变化。各处方无明显差异。

表7高温40℃条件下各处方WCX-HPLC纯度变化(0天到4周)

研究结果表明，处方C1、C2、C4、C5优于处方C3、C6，处方C1、C2、C4和C5 将作为候选处方进一步对比优化。

实施例6蔗糖和海藻糖的选择

在冷冻玻璃态下，海藻糖更容易与蛋白分离，从而失去蛋白的保护作用。由于本品抗体原液需储存于-80±10℃条件下，为有效保护蛋白，选择蔗糖更优。处方C4、C5优于处方C1、C2，因此处方C4和C5将作为候选处方进一步对比优化。

实施例7不同pH的选择

结合实施例2第一轮筛选和DLS的研究结果，发现pH5.8的蛋白溶液热稳定性相对比较稳健，故含抗CLDN18.2抗体液体药物组合物的优选处方初步拟定为处方C5 (20mmol/L组氨酸-醋酸盐、5wt％蔗糖、0.04wt％聚山梨酯80，pH5.8)。

实施例8第四轮制剂处方筛选(蔗糖用量)

正常人体血液的渗透压范围为285～310mOsmol/kg，为保证含抗CLDN18.2抗体注射液临床使用时(用0.9％氯化钠溶液稀释滴注)其渗透压水平同人体血液的渗透压相当，对第三轮筛选中的处方C5的小试样品进行了渗透压检测。

表8渗透压检测结果

研究结果表明含有5wt％蔗糖的制剂溶液渗透压偏低，为进一步提高制剂溶液的渗透压，分别对含6wt％、7wt％、8wt％、10wt％蔗糖的制剂溶液进行了渗透压检测。结果表明，提高制剂处方中蔗糖浓度，制剂溶液渗透压也随之升高。

表9渗透压检测结果

含抗CLDN18.2抗体注射液临床使用时，拟用0.9％氯化钠溶液稀释滴注，分别将含有6wt％和7wt％蔗糖的制剂溶液用0.9％氯化钠溶液进行稀释至1mg/ml和10mg/ml，并进行渗透压检测。

表10渗透压检测结果

结果表明，处方中蔗糖含量增加到6wt％～8wt％时，静脉给药时最终药液渗透压值接近人体血液的渗透压摩尔浓度，后续将结合稳定性研究继续对上述处方进行考察。

实施例9稳定性试验

试验样品信息：含抗CLDN18.2抗体注射液稳定性试验样品来源于江苏奥赛康药业有限公司，详细信息如下表所示。

表11稳定性试验样品信息

(1)影响因素试验(高温)

考察样品在高温(40±2℃)条件下的稳定性，重点考察SEC-HPLC、WCX-HPLC 和CE-SDS纯度。SEC-HPLC：考察各处方样品在高温(40±2℃)条件下0天到4周的 SEC-HPLC纯度变化。

表12高温(40±2℃)、正立考察结果(样品3-1)

表13高温(40±2℃)、倒置考察结果(样品3-1)

表14高温(40±2℃)、正立考察结果(样品3-2)

表15高温(40±2℃)、倒置考察结果(样品3-2)

表16高温(40±2℃)、正立考察结果(样品3-3)

表17高温(40±2℃)、倒置考察结果(样品3-3)

本实施例考察的3组样品在40±2℃(正立/倒置)考察4周，SEC-HPLC纯度、非还原CE-SDS纯度、WCX-HPLC纯度和聚山梨酯80含量均出现明显下降趋势，其中 WCX-HPLC主峰纯度和聚山梨酯80含量第2周时低于质量标准，故本品在40℃条件下暴露不宜超过1周。

(2)影响因素试验(光照)

考察样品在光照(4500±500lx/25±2℃)条件下的稳定性，重点考察SEC-HPLC、WCX-HPLC和CE-SDS纯度。

表18光照(4500±500lx/25±2℃)、水平考察结果(样品3-1)

表19光照(4500±500lx/25±2℃)、水平考察结果(样品3-2)

表20光照(4500±500lx/25±2℃)、水平考察结果(样品3-3)

本实施例考察的3组样品4500±500lx/25±2℃(水平)考察5天，非还原CE-SDS 纯度和WCX-HPLC纯度均出现下降趋势，其中WCX-HPLC纯度下降明显，2组样品在第3天时主峰纯度低于质量标准，1组样品在第5天主峰纯度低于质量标准，故本品在光照条件下暴露不宜超过1天。

(3)影响因素试验(运输模拟)

注射液制剂的储存，运输和临床使用过程中都会引起震荡，导致蛋白变性失活，考察注射液制剂的重要指标之一是考察期在震荡条件下的稳定性。本实施例中将样品放在 5±3℃条件下震荡(150rpm)1周，来评价不同处方样品的表现。

表21运输模拟(5±3℃/150rpm)，水平(样品3-1)

表22运输模拟(5±3℃/150rpm)，水平(样品3-2)

表23运输模拟(5±3℃/150rpm)，水平(样品3-3)

本实施例考察的3组样品在5±3℃/150rpm(水平)考察1周，各项考察结果均无明显变化，故本品可以在5±3℃条件下运输1周。

实施例10加速试验

本实施例中考察了加速稳定性，即在温度高于储存条件(储存温度为2～8℃)下的稳定性，考察的温度为25±2℃。加速稳定性有助于区分不同处方制剂，也可以用来预估产品在长期储存条件下的稳定性。另外，一定时间的室温稳定性有助于将来临床条件下的应用，减少对冷链的要求等。将放置在25±2℃下的样品储存0天、1月、2月、3 月和6月后取样，检测其在不同时间点的多聚体和碎片含量的变化，不溶性颗粒的改变以及热稳定性等的变化，从而考察不同处方在该条件下的表现。

表24成品加速试验(25±2℃/60±％RH)、正立考察结果(样品3-1)

表25成品加速试验(25±2℃/60±％RH)、倒置考察结果(样品3-1)

表26成品加速试验(25±2℃/60±％RH)、正立考察结果(样品3-2)

表27成品加速试验(25±2℃/60±％RH)、倒置考察结果(样品3-2)

表28成品加速试验(25±2℃/60±％RH)、正立考察结果(样品3-3)

表29成品加速试验(25±2℃/60±％RH)、倒置考察结果(样品3-3)

本实施例考察的3组样品在加速25±2℃(正立/倒置)条件考察6个月，≥10μm不溶性微粒数较放置前有增加趋势，SEC-HPLC和非还原CE-SDS纯度呈下降趋势， WCX-HPLC主峰纯度和聚山梨酯80含量下降明显，第3个月时低于质量标准，故本品在25±2℃条件下长时间存放不宜超过2个月。

实施例11长期试验

含抗CLDN18.2抗体注射液拟定的长期储存温度为2～8℃。本实施例中考察了不同处方样品在长期储存条件下的稳定性。分别在各样品正立或倒置储存第0天、第6个月、第12个月及第24个月取样，检测其在不同时间点的多聚体和碎片含量的变化，不溶性颗粒的变化以及热稳定性等的改变，考试不同处方样品在该条件下的表现。

表30成品长期试验(5±3℃)、正立考察结果(样品3-1)

表31成品长期试验(5±3℃)、倒置考察结果(样品3-1)

表32成品长期试验(5±3℃)、正立考察结果(样品3-2)

表33成品长期试验(5±3℃)、倒置考察结果(样品3-2)

表34成品长期试验(5±3℃)、正立考察结果(样品3-3)

表35成品长期试验(5±3℃)、倒置考察结果(样品3-3)

本实施例考察的3组样品在长期5±3℃(正立/倒置)条件下考察24个月，外观、澄清度、pH、可见异物、渗透压、蛋白质浓度、细菌内毒素、相对生物学活性放置前后均符合规定，SEC-HPLC纯度、还原CE-SDS纯度、非还原CE-SDS纯度、WCX-HPLC 纯度、聚山梨酯80含量各项考察结果较放置前无明显变化，≥10μm不溶性微粒数较放置前有所增加，但均符合质量标准。说明以上三组抗CLDN18.2抗体的药物组合物在 5±3℃的存储条件下具有长期稳定性。

实施例12制剂的冻干方法

(1)打板冷：开启循环泵、压缩机，再开启冷凝器阀，开启电加热，调节导热油温度使得隔板温度预冷至4℃；

(2)预冻：待产品进箱后，关闭箱门，关闭电加热，冷凝器阀，开启板冷阀，调节导热油使制品温度达-45℃(约1℃/min)时，保温2小时以上；

(3)冷阱：将压缩机切换至“冷阱”制冷；

(4)抽真空：“冷阱”温度降至-45℃以下时，开启真空泵，再开启小蝶阀，当后箱“冷阱”真空度达到约100mTorr(13.33pa)时，开启中隔阀；

(5)一次干燥：设定导热油温度在1.5～2小时内升温至-35℃，保温24～30小时；

(6)解析干燥：设定导热油温度在9小时内升温至20℃，真空降至50mTorr(6.67pa)，保温15～20小时或更长。

其中，步骤(5)中所述的一次干燥的升温速度可设定为0.2℃/min；步骤(6)中所述的解析干燥的升温速度可设定为0.1℃/min。

冻干保护工艺将需要干燥的制品在低温下使其所含的水分冻结，然后放在真空的环境下干燥，让水分由固体状态直接升华为水蒸气并从制品中排除而使制品活性干燥。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变，对生物组织和细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，有效保护了许多热敏性药物生物制品有效成份的稳定性。

本发明的液体药物组合物组分简单，并且具有良好的稳定性，适于储藏和运输，可以实现降低包材、运输和储藏等的成本，同时保持了抗体的生物学活性。

本发明的含抗CLDN18.2抗体液体药物组合物在震荡/振摇、25±2℃加速试验、5±3℃长期贮存稳定性试验中均呈现出良好的稳定性，具有良好的应用前景。

需要理解的是，尽管本说明书的某些方面通过提及具体的实施例而突出强调，但本领域的技术人员将很容易理解，这些公开的实施例仅用来说明本文所披露主题的原理。因此,需要理解的是，公开的主题决不限于本文所描述的特定化合物、组合物、产品、仪器、方法、程序和/或试剂等，除非有明确说明。此外，应该认识到可以根据这里的教导得到那些本领域技术中的普通技术的某些变化，修改，置换，改变，增加，删除和子组合，而不偏离本说明书的主旨。因此，下文所述的从属权利要求和权利要求被解释为包括在其真正主题和范围内的所有变化、修改、置换、变更、添加、删除和子组合。

本发明的某些实施例在此进行了描述，包括发明人已知的实施本发明的最佳方式。当然，阅读上述描述后，描述的实施方式的变化对那些本领域普通技术人员来说是显而易见的。发明人希望技术人员能适当的采用这些变化，并且发明人希望本发明的实施方式不限于本发明中的具体描述。因此，本发明包括适用法律允许的对本发明权利要求所述内容的所有修改和等同替换。而且，上述实施例的所有可能改变的任何组合均包括在本发明中，除非本发明中另有说明或与上下文明显矛盾的。

最后，这里使用的术语仅用于描述特定实施例,并不限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求确定。因此，本发明不局限于详细显示和描述的内容。

Claims (10)

1.一种含抗CLDN18.2抗体的液体药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：

治疗有效量的抗CLDN18.2抗体；

表面活性剂；

寡糖；

水；和

缓冲剂；

任选地含有pH调节剂，其中，所述药物组合物的pH为5.2～6.2。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的抗CLDN18.2抗体为单克隆抗体；

优选地所述的单克隆抗体为人源化抗体或结合人CLDN18.2蛋白。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，具备以下特征中的一项或多项：

(a)所述的表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯80；

(b)所述的寡糖为蔗糖或海藻糖；

(c)所述的缓冲剂为磷酸盐、组氨酸-醋酸盐、或醋酸盐。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述的pH调节剂为冰醋酸。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，具备以下特征中的一项或多项：

(e)所述的抗CLDN18.2抗体含量为20～30mg/mL；

(f)所述的表面活性剂的含量为0.02wt％～0.08wt％；

(g)所述的寡糖的含量为6wt％～8wt％；

(h)所述的缓冲剂的浓度为20～50mmol/L。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：

25～30mg/mL的抗CLDN18.2抗体；

0.02wt％～0.06wt％的聚山梨酯80；

6wt％～8wt％的蔗糖；和

20～30mmol/L的组氨酸-醋酸盐；

其中，所述药物组合物的pH为5.5～5.8。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：

25mg/mL的抗CLDN18.2抗体；

0.04wt％的聚山梨酯80；

7wt％的蔗糖；和

20mmol/L的组氨酸-醋酸盐；其中，所述药物组合物的pH为5.8。

8.制备如权利要求1至7中任一项所述的药物组合物的方法，其特征在于，所述方法包括抗CLDN18.2抗体制备，抗体换液至液体药物组合物的其他组分后，经除菌过滤、无菌灌装的步骤。

9.一种冻干制剂，其特征在于由权利要求1至7中任一项所述液体药物组合物经冷冻干燥制得。

10.权利要求1至7中任一项所述液体药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述的癌症为胃癌、食道癌、胰腺癌或肝癌。

Images