CN114502191A - 通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物 - Google Patents

通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN114502191A
CN114502191A CN202080068673.4A CN202080068673A CN114502191A CN 114502191 A CN114502191 A CN 114502191A CN 202080068673 A CN202080068673 A CN 202080068673A CN 114502191 A CN114502191 A CN 114502191A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
polymersomes
antigen
population
cov
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080068673.4A
Other languages
English (en)
Inventor
M·纳兰妮
T·A·康奈尔
A·K·汗
F·德卡约
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Acm Biological Laboratories Pte Ltd
Original Assignee
Acm Biological Laboratories Pte Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Acm Biological Laboratories Pte Ltd filed Critical Acm Biological Laboratories Pte Ltd
Publication of CN114502191A publication Critical patent/CN114502191A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1273—Polymersomes; Liposomes with polymerisable or polymerised bilayer-forming substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5152—Tumor cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。本发明还涉及包含本发明的两种聚合物囊泡群的组合物(比如疫苗)，引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，所述方法包括提供本发明的聚合物囊泡。

Description

通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂 的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合 物囊泡群的组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年8月1日提交的欧洲专利申请no.19189549.9和2020年4月24日提交的欧洲专利申请no.20171327.8的优先权的权益，它们的内容以引用的方式全文并入本文以用于全部目的。
序列表
本申请包含计算机可读形式的序列表，其以引用的方式并入本文。
技术领域
本发明涉及一种通过施用抗原和佐剂引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，并且其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于受试者。本发明还涉及包含这两种聚合物囊泡群的组合物和这两种聚合物囊泡群的治疗用途。抗原可以是能够引发免疫应答的任何抗原，并且可以是例如多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。
背景技术
虽然免疫是一个确立已久的过程，但是不同免疫原或抗原引发的应答水平存在差异。例如，膜蛋白形成一类产生低应答水平的抗原，这又意味着需要大量的膜蛋白来产生或引发所需水平的免疫应答。众所周知，膜蛋白很难合成，并且在没有去污剂的情况下膜蛋白不溶于水。这使得获得足够量的用于免疫的膜蛋白不仅昂贵而且困难。此外，膜蛋白需要适当折叠才能正常发挥其功能。通常，正确折叠的天然膜蛋白的免疫原性比不能以生理相关的方式折叠的膜蛋白的增溶形式的免疫原性要好得多。因此，即使可以使用佐剂来增强此类增溶的抗原的免疫原性，但这也是一种效率低下且没有太多优势的方法(如WO2014/077781A1)。
尽管已将转染的细胞和基于脂质的系统用来呈递膜蛋白抗原以增加分离可能在体内有效的抗体的机会，但这些系统通常是不稳定的(如，是氧化敏感的)、繁琐(tedious)且昂贵的。此外，此类膜蛋白抗原目前最先进的技术水平是将无活性的病毒样颗粒用于免疫接种。
另一方面，疫苗是预防疾病(主要是感染性疾病)最有效的方法[如，Liu等，2016]。截至目前，大多数获得许可的疫苗均是由活病毒或灭活的病毒制成的。尽管它们在产生体液应答(抗体介导的应答)以防止病毒增殖和进入细胞方面是有效的，但是此类疫苗的安全性仍然令人担忧。在过去的几十年中，科学进步已经通过使非复制型重组病毒的疫苗载体工程化从而帮助克服了这些问题。同时，将基于蛋白的抗原或亚单位抗原考察作为更安全的选择。然而，此类基于蛋白的疫苗通常会导致(illicit)较差的免疫(体液和细胞应答)。为了改善抗原的免疫原性，已经使用了若干种方法。例如，已经广泛研究了将抗原微包封到聚合物中，然而尽管这确实增强了免疫原性，但是抗原的聚集和变性问题仍然未得到解决[如，Hilbert等，1999]。此外，将佐剂(如水包油乳剂或聚合物乳剂)[如US9636397B2、US2015/0044242A1]与抗原一起使用以引发更明显的体液和细胞应答。尽管取得了这些进步，但它们在摄取和交叉呈递方面的效率较低。为了促进交叉呈递，基于免疫系统在病毒感染期间的可用信息，已经开发了模拟此类特性的病毒样颗粒。合成结构(比如具有包封的抗原的脂质体)是特别有吸引力的。脂质体是由脂质制成的单层自组装结构，并且作为递送媒介，阳离子脂质体更具吸引力和前景，因为它们能被抗原呈递细胞(APC)有效摄取[如，Maji等，2016]。此外，脂质体允许整合免疫调节剂比如单磷酰基脂质A(MPL)、CpG寡脱氧核苷酸，该免疫调节剂为可通过受体刺激免疫细胞的toll样受体(TLR)激动剂。尽管具有此类递送媒介的优势，但限制因素之一是在血清组分存在下的脂质体的稳定性。通过聚PEG化，负载高熔点的脂质，脂质体的稳定性问题得到了一定程度的解决(reduced)，其中一个充分表征的实例是通过用连接脂质的短共价交联稳定多层囊泡而形成的内双层交联多层囊泡(ICMV)[如，Moon等，2011]。采用纳米圆盘(nanodisc)[如Kuai等，2017]或pH敏感颗粒[如Luo等，2017]，其它纳米颗粒结构已实现了成功免疫接种。但是，此类策略要么仍需要佐剂，要么在原型卵清蛋白(OVA)模型之外效果不佳。
此外，聚合物囊泡可作为脂质体的稳定替代物，并且已经将它们用于整合膜蛋白以引发免疫应答[如，Quer等，2011，WO2014/077781A1]。蛋白抗原也被包封在经过化学改变的聚合物囊泡的膜中(但是，是对氧化敏感的膜)，以将抗原和佐剂释放到树突状细胞中[如，Stano等，2013]。
尽管通过使用聚合物已经取得了上述进步，但是仍然需要提供引发免疫应答的替代方法，特别是用于治疗和/或预防感染性疾病、癌症和自身免疫性疾病的替代方法。
发明内容
本发明涉及一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。
在此类方法中，通过将所述抗原包封在所述第一聚合物囊泡群中、通过将所述抗原整合到所述第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述抗原经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述抗原经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述抗原与所述第一聚合物囊泡群关联。
在此类方法中，同样通过将所述佐剂包封在所述第二聚合物囊泡群中、通过将所述佐剂整合到所述第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述佐剂经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述佐剂经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述佐剂与所述第二聚合物囊泡群关联。
在所述方法的实施方案中，所述抗原可以选自：多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。
本发明进一步涉及一种用于生产所述两种聚合物囊泡群的方法。本发明再进一步涉及包含本发明的两种聚合物囊泡群的组合物，暴露至本发明的聚合物囊泡或组合物的分离的抗原呈递细胞和杂交瘤细胞。本发明还涉及包含本发明的两种聚合物囊泡群的疫苗，引发免疫应答的方法或用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，此类方法包括向有此需要的受试者提供本发明的聚合物囊泡。
本发明还涉及所述两种聚合物囊泡群用于引发免疫应答的用途，其中至少一种聚合物囊泡群具有或两种群具有约120nm或140nm或更大的平均直径，其中所述聚合物囊泡群具有与聚合物囊泡关联的抗原或佐剂，例如可溶性包封抗原或包封佐剂，其中所述抗原可以选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子。
iv)脂质或
v)i)至iv)中任意的组合。
本发明还涉及所述两种聚合物囊泡群用于引发免疫应答的用途，其中至少一种群具有或两种群具有约120nm或140nm或更大的平均直径，所述聚合物囊泡群具有关联的抗原(例如可溶性包封抗原)或佐剂。所述抗原可以选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子。
iv)脂质或
v)i)至iv)中任意的组合。
在可选的实施方案中，本发明提供一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中第二聚合物囊泡群作为佐剂，并且其中将所述两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。
在本发明中发现，两种独立的聚合物囊泡群导致免疫应答的增加，其中一种聚合物囊泡群与抗原关联和另一种聚合物囊泡群仅与佐剂关联。此外，在本发明的过程中发现，提供本发明的聚合物囊泡允许可溶性(增溶的)包封(位于所述聚合物囊泡中)抗原产生(比具有或不具有佐剂的游离抗原)更强的体液免疫应答，以及引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答。由此，实现了受试者中抗体产生效率的提高。无论是否使用佐剂均可实现这种效率的提高。此外，本发明的聚合物囊泡引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答的能力使其作为免疫治疗性抗原递送和呈递系统的潜力显著增加。
由于由聚合物囊泡呈递可溶性(如增溶的)包封抗原，通过使用本发明的聚合物囊泡和方法产生的抗体不仅具有更高的产生成功率和对其相应的体外或体内靶标的更高的亲和力，并且当在各种基于溶液的抗体应用中使用时相应地提高了灵敏性，而且能够容易地针对通过使用游离抗原注射的常规方法不能触发抗体产生的困难抗原产生抗体和/或减少这种抗体产生过程所需的抗原量，从而降低此类生产的成本。此外，由本发明的聚合物囊泡呈递的可溶性(如增溶的)包封抗原还能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，这将相应的聚合物囊泡的用途扩展至细胞介导的免疫，并因此改善了所述聚合物囊泡的免疫治疗及抗原递送和呈递潜力。
因此，本申请通过提供(当施用时)改进了抗原免疫原性特性的两种独立的聚合物囊泡群、此两种聚合物囊泡群的生产方法和包含此两种聚合物囊泡群的组合物来满足该种需求，所述聚合物囊泡、其生产方法和包含此类聚合物囊泡的组合物在下文描述，特征在权利要求书中表征并通过所附的实施例和附图加以说明。
序列表概述
如本文所述，参考UniProtKB登录号(http://www.uniprot.org/，如在UniProtKBRelease 2017_12中获得，除非另有说明或其他固有的)。
SEQ ID NO:1为源自结肠癌MC-38小鼠模型的肿瘤新抗原多肽Reps1 P45A的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2为源自结肠癌MC-38小鼠模型的肿瘤新抗原肽Adpgk R304M的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3为源自结肠癌MC-38小鼠模型的肿瘤新抗原肽Dpagt1 V213L的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4为鸡卵清蛋白(OVA)的氨基酸序列，UniProtKB登录号：P01012。
SEQ ID NO:5为甲型流感病毒(influenza A virus)(A/纽约/38/2016(H1N1))血凝素的氨基酸序列，UniProtKB登录号：A0A192ZYK0。
SEQ ID NO:6为甲型流感病毒(A/猪/4/墨西哥/2009(H1N1))血凝素的氨基酸序列，UniProtKB登录号：D2CE65。
SEQ ID NO:7为甲型流感病毒(A/波多黎各/8/1934(H1N1))血凝素的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8为甲型流感病毒(A/加利福尼亚/07/2009(H1N1))血凝素的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9为源自黑色素瘤B16-F10小鼠模型的肿瘤新抗原多肽CD8 Trp2 173–196的氨基酸序列。
SEQ ID NO:10为源自黑色素瘤B16-F10小鼠模型的肿瘤新抗原多肽CD4 M30Kif18b K739N的氨基酸序列。
SEQ ID NO:11为源自黑色素瘤B16-F10小鼠模型的肿瘤新抗原多肽CD4 M44Cpsf3l D314N的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12为猪流行性腹泻病毒(PEDv)纤突(Spike)蛋白(S蛋白)(UniProtKB登录号：V5TA78)的可溶性部分(氨基酸残基19至1327)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13为PEDv纤突蛋白(S蛋白)的S1区(氨基酸残基19至739)的氨基酸序列，和
SEQ ID NO:14为PEDv纤突蛋白(S蛋白)的S2区(氨基酸残基739至1327)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15为增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的氨基序列。
SEQ ID NO:16为CD8T细胞肽表位(SIINFEKL)的序列。
SEQ ID NO:17为CD8T细胞肽表位(SVYDFFVWL)的序列。
SEQ ID NO:18为购自InvivoGen的B类CpG寡脱氧核苷酸CpG ODN1826(5'-tccatgacgttcctgacgtt-3')的序列。
SEQ ID NO:19为根据UniProtKB登录号no.P0DTC2的SARS-CoV-2纤突(Spike)蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:20为根据UniProtKB登录号no.QII57278.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:21为根据GenBank登录号no.YP_009724390.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:22为根据GenBank登录号no.QIO04367.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:23为根据GenBank登录号no.QHU79173.2的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:24为根据GenBank登录号no.QII87830.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:25为根据GenBank登录号no.QIA98583.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:26为根据GenBank登录号no.QIA20044.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27为根据GenBank登录号no.QIK50427.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:28为根据GenBank登录号no.QHR84449.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:29为根据GenBank登录号no.QIQ08810.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:30为根据GenBank登录号no.QIJ96493.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:31为根据GenBank登录号no.QIC53204.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:32为根据GenBank登录号no.QHZ00379.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:33为根据GenBank登录号no.QHS34546.1的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:34为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的16-1213位的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:35为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的14-1204位的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:36为SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:37为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的16-685位的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:38为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的686-1213位的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:39为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的646-1204位的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:40为SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:41为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的318-524位的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:42为根据UniProtKB登录号no.K0BRG7的MERS-CoV纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:43为对应于UniProtKB登录号no.K0BRG7的1-1297位的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:44为对应于UniProtKB登录号no.K0BRG7的18-725位的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:45为对应于UniProtKB登录号no.K0BRG7的726-1296位的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:46为对应于UniProtKB登录号no.K0BRG7的377-588位的MERS-CoV纤突蛋白的可溶片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:47为根据UniProtKB登录号no.P59594的SARS-CoV-1纤突蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:48为对应于UniProtKB登录号no.P59594的14-1195位的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:49为对应于UniProtKB登录号no.P59594的14-667位的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:50为对应于UniProtKB登录号no.P59594的668-1195位的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:51为对应于UniProtKB登录号no.P59594的306-527位的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:52为SARS-CoV-2纤突蛋白的弗林蛋白酶(furin)切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:53为SARS-CoV-2纤突蛋白的突变的弗林蛋白酶切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:54为foldon结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:55为GCN4结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:56为免疫沉默的GCN4结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:57为蜜蜂蜂毒肽前导序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO:58为MERS-CoV纤突蛋白的弗林蛋白酶切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:59为MERS-CoV纤突蛋白的突变的弗林蛋白酶切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:60为SARS-CoV-1纤突蛋白的弗林蛋白酶切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:61为SARS-CoV-1纤突蛋白的突变的弗林蛋白酶切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:62为CpG寡核苷酸ODN 2006的核苷酸序列。
SEQ ID NO:63为CpG寡核苷酸ODN 2007的核苷酸序列。
SEQ ID NO:64为CpG寡核苷酸ODN 2216的核苷酸序列。
SEQ ID NO:65为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的19-1204位，但具有突变的弗林蛋白酶切割位点的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:66为对应于UniProtKB登录号no.P0DTC2的19-1273位，但具有突变的弗林蛋白酶切割位点的SARS-CoV-2纤突蛋白的氨基酸序列。
附图说明
图1示出了采用包封抗原的本发明的聚合物囊泡进行免疫接种并测量体液和细胞应答的示意图。
图2示出了本发明的聚合物囊泡的动态光散射结果的结果。图2A示出了具有173.1nm(直径)的单分散群的包封OVA的聚合物囊泡的动态光散射图。图2B示出了通过DLS测量的包封不同抗原的不同聚合物囊泡的平均直径(Z平均值)表。将制剂的名称，如括号中所示的“ACM-OVA”、“ACM-CpG”、“ACM-OVA-CpG”和“ACM-Trp2”用于本申请的其它地方。
图3示出了在尺寸排阻色谱中包封OVA的聚合物囊泡的洗脱曲线。
图4示出了包封OVA的聚合物囊泡的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。
图5示出了在本发明的聚合物囊泡中核酸(此处是增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的编码基因)的包封以及具有包封的核酸的聚合物在细胞中的摄取的结果。图5A示出了细胞内部不同聚合物囊泡的荧光强度摄取和基于聚合物囊泡中包封的DNA的eGFP表达，而图5B和图5C示出了用包封DNA的聚合物囊泡转染的细胞的荧光图像。
图6示出了用PBS、仅OVA、具有SAS佐剂的OVA、无佐剂的包封OVA的聚合物囊泡免疫的小鼠血清的抗体效价。仅ACM包封的OVA(以下“ACM”是指本发明的聚合物囊泡)能够诱导IgG效价。
图7示出了用PBS、仅HA和无佐剂的包封HA的聚合物囊泡免疫的小鼠血清的抗体效价。仅ACM包封的HA(本发明的聚合物囊泡)能够诱导IgG效价。
图8示出了MC-38小鼠肿瘤模型的结果。在用游离肽(空心圆)、ACM包封的肽(实心正方形，本发明的聚合物囊泡)或用ACM包封的肽与抗-PD1抗体治疗一起(实心三角形)免疫的小鼠中监测肿瘤体积。与游离肽相比，ACM包封的肽(本发明的聚合物囊泡)改变了肿瘤的发展，通过添加抗-PD1抗体进一步增强了这种改变。任何组中均未添加佐剂。
图9示出了用PBS和用如本文所用的已经被包封在聚合物囊泡中的PEDv S蛋白的可溶性片段(“包封了SPIKE蛋白的聚合物囊泡”)免疫的小鼠血清的IgG抗体效价和病毒中和(针对毒株PEDv USA/科罗拉多/2013(CO/13))，并与用灭活的PED病毒(“灭活的PEDv”)和仅ACM聚合物囊泡(即不具有任何抗原，“仅聚合物囊泡”)免疫的小鼠血清的IgG抗体效价和病毒中和进行比较。从图9的IgG效价可以看出，ACM包封的PEDv S蛋白的片段以及灭活的病毒均诱导了IgG效价。病毒中和数据表明，只有ACM包封的PEDv S蛋白导致了显著的中和效价，而阴性对照(不具有任何抗原的ACM聚合物囊泡)和灭活的PED病毒的中和作用则可忽略不计。
图10示出了用PBS和不同的聚合物囊泡(如BD21(如下文所定义的)、PDMS46-PEO37(在图中仅标记为“PDMS”)、具有DSPE-PEG(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺[DSPE]聚乙二醇)作为添加的脂质的PDMS46-PEO37、添加了大豆磷脂(Asolectin lipid)(商购可获得的来自大豆的磷脂)包封全长可溶性PED纤突蛋白(在“具有可溶性S蛋白的BD21”的情况下)或其S1或S2片段(在所有其它情况下)的聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG))免疫后的小鼠产生的血清的病毒中和数据(针对毒株PEDv USA/科罗拉多/2013(CO/13))。从图10中可以看出，用PBS样品免疫的小鼠组未显示任何病毒中和，而无论是包封全长蛋白还是包封其片段，全部聚合物囊泡制剂均显示出不同程度的病毒中和。
图11示出了采用未使用佐剂的ACM包封的PEDv S蛋白口服免疫接种的猪的IgA抗体效价。效价来自粪便拭子。如图11所示效价随时间升高，这表明口服施用本发明的其中包封了PEDv S蛋白的聚合物囊泡能够在猪中引发免疫应答。
图12示出了猪流行性腹泻病毒(PEDv)纤突蛋白(S蛋白)(UniProtKB登录号：V5TA78)和SEQ ID NO:12(氨基酸残基19至1327)、SEQ ID NO:13(氨基酸残基19至739)和SEQ ID NO:14(氨基酸残基739至1327)的可溶性片段的示意图，已经将它们用于在聚合物囊泡中包封可溶性S蛋白并随后如本文对小鼠和猪进行免疫接种/疫苗接种。
图13示出了预防性疫苗接种ACM OVA制剂后的肿瘤生长曲线。施用不同OVA制剂并随后接种105B16-OVA细胞的小鼠的肿瘤生长曲线。图13A示出了PBS组、游离OVA和CpG施用组以及ACM包封的OVA和游离CpG共同施用组，图13B示出了PBS组、ACM包封的OVA和ACM包封的CpG共同施用组以及与包封了OVA和CpG的ACM。
图14示出了治疗性疫苗接种ACM OVA制剂后的肿瘤生长曲线。疫苗接种不同ACMOVA制剂并随后接种105B16-OVA细胞的小鼠的肿瘤生长曲线。图14A)PBS组，游离OVA和CpG施用组和ACM包封的OVA和游离CpG共同施用组，B)PBS组，游离OVA和包封CpG的ACM的共同施用以及ACM包封的OVA和ACM包封的CpG的共同施用，C)使用对CD8 T细胞SIINFEKL(SEQ IDNO:16)肽表位特异性的dextramer定量的OVA特异性CD8 T细胞。
图15示出了接种105B16F10细胞的小鼠治疗性疫苗接种ACM黑素瘤B16F10制剂的肿瘤生长曲线。图15A示出了PBS组、游离Trp2(SEQ ID NO：9)和CpG共同施用、包封Trp2的ACM和CpG共同施用、游离Trp2和ACM包封的CpG共同施用以及ACM包封的Trp2和ACM包封的CpG共同施用，图15B示出了使用对CD8 T细胞SVYDFFVWL(SEQ ID NO:17)肽表位异性的的五聚体(pentamer)在血液中定量的Trp2特异性CD8特异性T细胞，和图15C示出了肿瘤中的CD8T细胞浸润。
图16示出了OVA缀合的ACM的动态光散射(DLS)光谱。
图17示出了OVA缀合的ACM的表征，其中，图17A示出了OVA缀合的ACM的尺寸排阻色谱(SEC)曲线，图17B示出了加载了来自SEC峰的样品并使用银染染色的SDS-PAGE。
图18示出了HA缀合的ACM的DLS光谱。
图19示出了ACM缀合的HA样品的免疫印迹。偶联的HA和游离的HA的迁移不同。
图20示出了HA缀合的ACM的SEC曲线(mAU，浅灰色迹线)，叠加由在所有收集的级分上进行的ELISA信号(O.D.450，黑色迹线)。
图21示出了来自用PBS、游离OVA、游离OVA和SAS、BD21包封的OVA以及BD21缀合的OVA免疫的C57Bl/6小鼠的血清的抗体效价，p＜0.01。
图22示出了来自用PBS、游离HA、BD21包封的HA和BD21缀合的HA免疫的Balb/c小鼠的血清的抗体效价。
图23A示出了严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)纤突蛋白(S蛋白)(UniProtKB登录号：P0DTC2)和SEQ ID NO:34(氨基酸残基16至1213)、SEQ ID NO:37(氨基酸残基16至685)和SEQ ID NO:38(氨基酸残基685至1213)的可溶性片段的示意图。根据UniProtKB，1214-1234位氨基酸形成跨膜区，1235-1273位氨基酸形成病毒内区域。S1和S2区段、跨膜区和/或病毒内区域的终点可能因预测软件而变化。图23B示出了用具有包封的SARS-CoV-2纤突蛋白的ACM免疫小鼠的方案。图23C示出了在用下列制剂免疫的第35天在Balb/C小鼠中测量的IgG效价：与佐剂共同施用的BD21包封的可溶性S1和S2区段(组1)，BD21包封的可溶性S1和S2区段(组2)，与包封的佐剂共同施用的BD21包封的可溶性S2区段(组3)，作为阴性对照的PBS(组4)。
图24示出了用ACM包封的全长可溶性包封SARS-CoV-2纤突蛋白免疫小鼠的方案和结果。图24A示出了免疫方案。图24B示出了四组第一次免疫后28天的抗SARS-CoV-2纤突蛋白的IgG抗体的效价。制备了以下制剂：i)游离重组纤突蛋白(“fSpike”)；ii)BD21聚合物囊泡包封的纤突蛋白(“ACM-纤突”)；iii)游离纤突蛋白和游离CpG佐剂的混合物(“fSpikefCpG”)；iv)BD21聚合物囊泡包封的纤突蛋白和BD21聚合物囊泡包封的CpG的混合物(“ACM-纤突ACM-CpG”)。
图25示出了通过不同的途径施用，用混合有具有包封的CpG的ACM的具有包封的PEDv S2纤突蛋白的ACM免疫后豚鼠后病毒中和试验(PEDv)的结果。
图26示出了用具有包封的MERS纤突蛋白的ACM免疫小鼠的方案和结果。图26A示出了免疫方案，图26B示出了针对MERS-CoV纤突蛋白S1结构域的ELISA结果。图26C示出了病毒中和试验(MERS-CoV)的结果。
图27示出了用具有包封的PEDv纤突蛋白的S1结构域或S2结构域的ACM或具有包封的S1结构域和S2结构域的混合物的ACM免疫的小鼠的病毒中和试验(PEDv)的结果。
发明详述
以下详细的描述参照所附的实施例和附图，这些实施例和附图通过示例的方式示出了可以实施本发明的特定细节和实施方案。对这些实施方案进行了足够详细的描述，以使本领域技术人员能够实施本发明。可以使用其它实施方案，使得在不脱离本发明的范围的情况下进行结构、逻辑和折衷改变。本文描述的本发明的各个方面不一定相互排斥，因为本发明的各个方面可以与一个或多个其它方面组合以形成本发明的新的实施方案。
本发明基于这一惊人的发现，即当将两种独立的聚合物囊泡群(其中第一聚合物囊泡群仅与抗原关联和第二聚合物囊泡群仅与佐剂关联)一起施用时，改善对抗原的免疫应答，从而为例如感染性疾病或癌症提供免疫接种或治疗效果(参见本申请的实施例7至9或实施例19，其中，实施例8表明具有包封抗原的第一聚合物囊泡群与具有包封CpG(佐剂)的单独的第二聚合物囊泡群一起的施用在肿瘤负荷和T细胞浸润相关的小鼠中产生了免疫应答，其中，实施例9表明，包封在第一聚合物囊泡群中的免疫原性肿瘤新抗原Trp2肽与包封在第二(独立的)群中的CpG寡核苷酸(佐剂)一起的施用显示了比例如游离Trp2肽更强的抗-肿瘤应答，和其中当将Sars-CoV-2的纤突蛋白包封在第一聚合物囊泡群中并将CpG寡核苷酸(佐剂)包封在第二(独立的)群中时，实施例19显示针对Sars-CoV-2病毒的纤突蛋白的最高免疫应答。两种独立的聚合物囊泡群导致了改善的免疫应答的这一发现具有另外的优势，即其允许独立/单独地生产两种聚合物囊泡群。这又简化了例如相应疫苗或治疗性组合物的GMP生产，因为例如包含包封在聚合物囊泡中或缀合到聚合物囊泡表面的抗原的第一聚合物囊泡群可以在标准化GMP条件下生产，而例如包含包封在聚合物囊泡中或缀合到聚合物囊泡表面的佐剂的第二聚合物囊泡群也可以在标准化条件下生产。然后，这两种群可以在制造过程中组合(以产生将两种聚合物囊泡群组合以用于共同施用的组合物)，或者可以单独地施用于受试者。相比于例如将抗原和佐剂包封在相同的聚合物囊泡群中，这样的药物/疫苗制造方法更容易控制。
可以通过抗原与第一聚合物囊泡群的任何可能的相互作用使抗原与第一聚合物囊泡群关联。例如，可以将抗原包封在第一聚合物囊泡群中，如在2019年1月25日提交的共同未决的(co-pending)PCT申请PCT/EP2019/051853中描述的，该申请的全部内容通过引用并入本文。或者，可以如国际申请WO2014/077781中所述将抗原整合到第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内。还可以将抗原通过共价键缀合到第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的外表面，如在2018年9月12日提交的共同未决的欧洲专利申请18193946.3中描述的，该申请的全部内容通过引用并入本文。
还可以通过非共价键将抗原缀合到第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的外表面。这种非共价键的实例包括静电相互作用，比如存在于聚合物囊泡表面或抗原表面上的带正电荷和带负电荷的残基之间的盐桥。例如，可以在带正电荷的氨基(NH2基团)和带负电荷的羧基(COOH)之间形成盐桥。第一聚合物囊泡群与抗原之间的这种非共价相互作用的另一个示例性实例是链霉亲和素与生物素之间的结合对、抗生物素蛋白与生物素之间的结合对、链霉亲和素与链霉亲和素结合肽之间的结合对、或抗生物素蛋白与抗生物素蛋白结合肽之间的结合对。例如，在其表面具有生物素基团的聚合物囊泡可以按照Broz等的“Celltargeting by a generic receptor-targeted polymer nanocontainer platform”Journal of Controlled Release.2005；102(2):475–488制备，并且可以与缀合至链霉亲和素或抗生物素蛋白的抗原反应。也可以如Egli等“Functionalization of BlockCopolymer Vesicle Surfaces Polymers”2011,3(1),252-280”所述制备聚合物囊泡与抗原的非共价生物素-链霉亲和素缀合物。在本上下文中，如本文使用的术语“与第一聚合物囊泡群关联的抗原”不意味着仅一种特定抗原与第一聚合物囊泡群关联，而是还可以将包括多于一种，例如，两种或更多种抗原与第一聚合物囊泡关联。作为示例性实例，例如，可以将两种或更多种免疫原性肽与本发明的第一聚合物囊泡群关联。还可以将一种或多种免疫原性肽和编码这些肽的相应核酸分子与如本文所用的第一聚合物囊泡群关联。如本文所用的术语“与第一聚合物囊泡群关联的抗原”还意指两种或更多种第一聚合物囊泡群，其中的每一种均携带可以用于本发明的不同的抗原。例如，可以使用两种不同的抗原肽，并将它们中的每一种与本发明的独立的第一聚合物囊泡群关联。
还可以以与抗原和第一聚合物囊泡群可发生关联的相同方式，通过任何可能的相互作用使佐剂与第二聚合物囊泡群关联。这意味着，可以将佐剂包封在第一聚合物囊泡群中，如在2019年1月25日提交的共同未决的PCT申请PCT/EP2019/051853中描述的，该申请的全部内容通过引用并入本文。或者，可以如国际申请WO2014/077781中所述将佐剂整合到第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内。可以引入/整合到(第二聚合物囊泡群的)聚合物囊泡的周向膜中的佐剂的示例性实例包括合成的单磷酰脂A(对此参见Cluff“Monophosphoryl Lipid A (MPL)as an Adjuvant for Anti-Cancer Vaccines:ClinicalResults”in Lipid A in Cancer Therapy，由
Figure BDA0003571213200000141
Jeannin编辑,2009LandesBioscience and Springer)、聚山梨醇酯80、α-DL-生育酚、二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)、阳离子脂质1-[2-(油酰氧基)乙基]-2-油基-3-(2-羟乙基)咪唑啉氯化物(DOTIM)(参见Bernstein等，“The Adjuvant CLDC Increases Protection of a Herpes SimplexType 2Glycoprotein D Vaccine in Guinea Pig”Vaccine.2010May 7；28(21):3748–3753)或合成的两亲性二甲基双十八烷基铵(DDA)(参见Smith Korsholm等，“The adjuvantmechanism of cationic dimethyldioctadecylammonium liposomes”Immunology,121,216–226)，在此仅举几个例子。在本文中很明显，可以使一种或多种佐剂存在于本文所用的第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡中。例如，第二聚合物囊泡群可包含包封的佐剂(比如CpG寡核苷酸)和整合到聚合囊泡群的周向膜内的佐剂(比如例如单磷酰脂A或DOTAP)(然而，根据上述公开，第二聚合物囊泡群不含抗原，这意味着它不含任何抗原)。
与上述一致，当然也可以将佐剂通过共价键缀合至第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的外表面，如在2018年9月12日提交的共同未决的欧洲专利申请18193946.3中描述的，该申请的全部内容通过引用并入本文。或者，佐剂与聚合物囊泡的外表面的缀合还可以通过非共价键，比如生物素-链霉亲和素相互作用进行。在此需注意的是诸如B类CpG寡脱氧核苷酸CpG ODN1826(5'-tccatgacgttcctgacgtt-3'，SEQ ID NO:18)的CpG寡核苷酸可以生物素化的形式获得并因此可以容易地与生物素化的聚合物囊泡反应，所述聚合物囊泡是由如Broz等“Journal of Controlled Release.2005，同上”中所述的用链霉亲和素”修饰的。同样，从该实施例中，显然第二聚合物囊泡群可以携带多于一种(类)佐剂，例如，共价或非共价缀合至聚合物囊泡的外表面的CpG寡核苷酸和整合至聚合物囊泡的周向膜中的另外的佐剂，比如单磷酰脂A或DOTAP。进一步明显的是，可以以不同的方式将相同的佐剂与第二聚合物囊泡群关联，例如，可以将CpG寡核苷酸包封到聚合物囊泡中，并且同时将CpG寡核苷酸共价或非共价地缀合到聚合物囊泡的外表面。通过这样做，如果需要，可以提供更高量的佐剂以用于施用。
根据上述公开内容，无论抗原和佐剂是如何与第一和第二聚合物囊泡群关联的，任何种类的第一聚合物囊泡群均可以用于与任何种类的第二聚合物囊泡群施用。例如，第一聚合物囊泡群可以具有包封在聚合物囊泡内的抗原，并且第二聚合物囊泡群也可以具有包封在聚合物囊泡内的佐剂。或者，第一聚合物囊泡群可以具有通过共价键或非共价键缀合至聚合物囊泡外表面的抗原，而第二聚合物囊泡群也具有通过共价键或非共价键缀合至聚合物囊泡外表面的佐剂。作为进一步的单纯的示例性实例，第一聚合物囊泡群可以具有整合到聚合物囊泡的周向膜内的抗原，并且第二聚合物囊泡群也可以具有整合到聚合物周向膜内的佐剂。作为进一步的示例性实例，第一聚合物囊泡群可以具有包封在聚合物囊泡内的抗原，而第二聚合物囊泡群可以具有a)通过共价键或非共价键缀合至聚合物囊泡外表面的佐剂，或b)还可以具有整合到聚合物囊泡的周向膜内的佐剂。作为另一个示例性实例，第一聚合物囊泡群可以具有通过共价键缀合至聚合物囊泡外表面的抗原，并且第二聚合物囊泡群可以具有包封在聚合物囊泡内的佐剂。
现在更详细地阐述本发明的两种聚合物囊泡群的施用：可以将第一聚合物囊泡群和第二聚合物囊泡群同时(即，在相同的时间)或在不同时间施用于受试者。在同时施用两种群的情况下，可以(即通过共同施用)一起施用这两种聚合物囊泡群。在这种情况下，在施用之前将两种聚合物囊泡群组合或混合在一起，并且因此使它们存在于相同的组合物中，例如，药学上可接受的载体(比如，适合于口服施用的生理缓冲液或固体制剂)。在同时施用的情况下，也可以分别施用两种聚合物囊泡群中的每一种。在这种情况下，两种聚合物囊泡群在施用之前显然不彼此组合，并且例如可以将它们经由两次或更多次单独注射施用。
可以以已知用于在受试者中引发免疫应答并且适合于将聚合物囊泡群施用于给定受试者的任何方式将两种聚合物囊泡群施用于选定的受试者。在待免疫的为鱼或农场动物(比如鸡、猪或绵羊)的情况下，使用例如口服施用可能是有利的，并且配制含有本发明的两种聚合物囊泡群的组合物作为食品添加剂。或者，可以将通过注射枪或喷射注射器的皮内施用用于农场动物。对于人类，可以使用有创施用和无创施用。用于人和非人动物的合适的施用途径包括但不限于口服施用、经鼻腔施用、向粘膜表面施用、吸入、皮内施用、腹膜内施用、皮下施用、静脉内施用或肌肉内施用
更详细地，对于抗原和/或佐剂与第一或第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的外表面的缀合，共价键可以是能够将抗原(如，本发明的抗原)或佐剂缀合至本发明的聚合物囊泡的外表面的任何合适的共价键。产生本发明共价键的缀合反应是本领域熟知的(如NHS-EDC缀合、还原胺化缀合、巯基缀合、“点击(click)”和“光点击”缀合、吡唑啉缀合等)。下文列出了此类共价键及产生此类共价键的方法的非限制性实例。因此，在一些方面，经由使本发明的抗原或佐剂缀合至本发明的聚合物囊泡的外表面的共价键包括：i)酰胺部分(例如，如本文实施例部分中所述)；和/或ii)仲胺部分(例如，如本文实施例部分中所述)；和/或iii)1,2,3-三唑部分(例如，如van Dongen等，2008,Macromol.Rapid Communications,2008,29，321-325页中所述)，优选地，所述1,2,3-三唑部分为1,4-二取代的[1,2,3]三唑部分或1,5-二取代的[1,2,3]三唑部分(例如，如Boren等，2008中所述)；和/或iv)吡唑啉部分(例如，如de Hoog等，Polym.Chem.,2012,3,302-306中所述)和/或醚部分。在本上下文中需注意，可能需要修饰聚合物囊泡和抗原(例如蛋白质)两者，以便聚合物囊泡的外表面和抗原之间共价键的缀合/形成。除了如上所述的经典化学缀合化学(反应)之外，还可以通过酶促反应在聚合物囊泡的外表面和抗原之间形成共价键。
在一些方面，本发明涉及NHS-EDC缀合(即，基于N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)的缀合)，其是将抗原缀合至本发明的聚合物囊泡的示例性替代方式之一。在该方法中，羧酸基团与EDC反应生成中间体O-酰基异脲(O-acylisourea)，其然后与伯胺反应形成具有所述羧基的酰胺部分。
在一些方面，本发明涉及还原胺化缀合，其是将抗原或佐剂缀合至本发明的聚合物囊泡的另一种示例性替代方式。在该方法中，含醛化合物与含胺化合物缀合形成席夫碱中间体，该中间体又经还原形成稳定的仲胺部分。
在一些方面，本发明涉及巯基缀合，其是将抗原或佐剂缀合至本发明的聚合物囊泡的另一种示例性替代方式。在该方法中，通过烷基化或二硫键交换将含有巯基(-SH)的化合物(例如，存在于半胱氨酸的侧链中)缀合至巯基反应性化学基团(如，马来酰亚胺)，以分别形成硫醚键或二硫键。
在一些方面，本发明涉及在聚合物囊泡表面上的所谓的“点击”反应(也称为“叠氮化物-炔烃环加成”)(如，由van Dongen等，2008，同上，所述描述)，其是将抗原缀合至本发明的聚合物囊泡的另一示例性替代方式。根据该方法，如下生产1,2,3-三唑部分：通过将叠氮基官能化的抗原(如，多肽)的水性溶液加入到聚合物囊泡的分散体中，然后将Cu(II)SO4·5H2O与抗坏血酸钠和红菲咯啉配体的预混合水性溶液加入到得到的聚合物囊泡的分散体中，然后在4℃下放置60小时，随后用100nm的截留值过滤所述分散体并离心至干燥。在本上下文中，进一步需注意，铜催化的叠氮化物-炔烃环加成的反应(也称为CuAAC)允许特异性地合成1,4-二取代的区域异构体，而钌催化的叠氮化物-炔烃环加成反应(也称为RuAAC)(如，使用Cp*RuCl(PPh3)2作为催化剂)允许生产1,5-二取代的三唑(参见R.Johansson,Johan&Beke-Somfai,Tamás&Said
Figure BDA0003571213200000181
Anna&Kann,Nina.(2016).Ruthenium-Catalyzed Azide Alkyne Cycloaddition Reaction:Scope,Mechanism,andApplications.Chemical Reviews.116.10.1021/acs.chemrev.6b00466)。
在一些方面，本发明涉及光诱导的腈亚胺中间体的产生(如，由双芳基-四唑产生)及其与烯烃的环加成(所谓的光诱导的环加成或“光点击”反应，如由de Hoog等，同上，2011所描述的)，其是将抗原缀合至本发明的聚合物囊泡的另一示例性替代方式。根据该方法，ABA嵌段共聚物为采用四唑通过光诱导的腈亚胺中间体产生的甲基丙烯酸酯(MA)封端或羟基封端的，产生含有MA-ABA和羟基封端的ABA共聚物的ABA聚合物囊泡，然后使所述聚合物囊泡与含抗原(HRP)的四唑在UV照射下反应生成吡唑啉部分。
将抗原或佐剂缀合至聚合物囊泡的外表面的共价键可以在分子的原子/基团之间形成，比如作为聚合物囊泡的周向膜的一部分(存在于聚合物囊泡的周向膜中)的两亲性聚合物。可选地，抗原或抗原与聚合物的外表面之间的共价键经由连接子部分形成，所述连接子部分附接至作为聚合物囊泡的周向膜的一部分(存在于聚合物囊泡的周向膜中)的分子上。所述连接子可具有任何合适的长度并可以具有一个主链原子的长度(例如，如果连接子为简单的产生形成共价连接的酰胺或酯部分的羰基(C＝O))。此类“一个具有一个主链原子的原子/连接子部分”的示例性实例为通过在实施例部分中进行的Dess-Martin氧化剂(periodinane)对两亲性聚合物BD21的修饰以产生BD21-CHO(即末端醛基)，然后将其用于与所选抗原(在实验部分，血凝素用作单纯示例性抗原)形成胺键。可选地，例如，如果通常使用诸如聚乙二醇(PEG)的部分来使多肽与目的分子缀合(共价偶联)，则连接子部分可具有数百个或更多个主链原子的长度。作为单纯示例性的实例，参见下文讨论的并在本申请的实施例部分中使用的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺[DSPE]聚乙二醇(DSPE-PEG)缀合物。实施例部分中使用的DSPE-PEG(3000)连接子部分具有约65个氧化乙烯(CH2-CH2-O)-亚基，因此仅在PEG部分中就有约325个主链原子，总长度为约408个主链原子。与上述一致的示例性实施方案，连接子部分可包含1至约550个主链原子、1至约500个主链原子、1至约450个主链原子、1至约350个主链原子、1至约300个主链原子、1至约250个主链原子、1至约200个主链原子、1至约150个主链原子、1至约100个主链原子、1至约50个主链原子、1至约30个主链原子、1至约20个主链原子、1至约15个主链原子、或1至约12个主链原子、或1至约10个主链原子，其中主链原子是任选地被选自N、O、P和S的一个或多个杂原子替换的碳原子。
同样根据上述公开内容，连接子部分可以是肽连接子或直链或支链的基于烃的连接子。连接子部分也可以是具有不同嵌段长度的聚合物或共聚物。本发明中使用的连接子部分可包含将所述连接子部分整合至聚合物囊泡的膜中的膜锚定结构域。此类膜锚定结构域可包含诸如磷脂或糖脂的脂质。在膜锚定结构域中使用的糖脂可包含已被广泛用于膜锚定结构域的糖基磷脂酰肌醇(GPI)(参见，例如，国际专利申请WO2009/127537和WO2014/057128)。用在本发明的连接子中的磷脂可为鞘磷脂或甘油磷脂。在此类连接子的示例性实例中，鞘磷脂可包含作为膜锚定结构域的与聚乙二醇(PEG)缀合的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺[DSPE](DSPE-PEG)。在此类缀合物中，所述DSPE-PEG可包含任意合适数量的氧化乙烯，例如2至约500个氧化乙烯单元。示例性实例包括DSPE-PEG(1000)、DSPE-PEG(2000)或DSPE-PEG(3000)，仅举几个例子。可选地，所述磷脂(鞘磷脂或甘油磷脂)可包含作为膜锚定结构域的胆固醇。在例如Achalkumar等，“Cholesterol-based anchors and tethers forphospholipid bilayers and for model biological membranes”,Soft Matter,2010,6,6036-6051中描述了基于胆固醇的膜锚定结构域。在示例性实施方案中，此类膜锚定结构域的连接子部分包括1至约550个主链原子、1至约500个主链原子、1至约450个主链原子、1至约350个主链原子、1至约300个主链原子、1至约250个主链原子、1至约200个主链原子、1至约150个主链原子、1至约100个主链原子、1至约50个主链原子、1至约30个主链原子、1至约20个主链原子、1至约15个主链原子、或1至约12个主链原子、或1至约10个主链原子，其中主链原子是任选地被选自N、O、P和S的一个或多个杂原子替换的碳原子。
可以将任何类型的聚合物囊泡用于本发明，只要该聚合物囊泡能够作为用于关联抗原或佐剂的载体发挥功能即可。所述聚合物囊泡可以是，例如氧化敏感性聚合物囊泡，如Stano等“Tunable T cell immunity towards a protein antigen using polymersomesvs.solid-core nanoparticles,Biomaterials 34(2013):4339-4346”或Hubbel的美国专利8,323,696中描述的。或者，聚合物囊泡也可以对氧化不敏感。在本发明中，不考虑化学稳定性(包括它们对氧化的可能的敏感性或不敏感性)，聚合物囊泡为具有聚合物膜的囊泡，这些聚合物囊泡通常但非必需地由一种或多种两亲性嵌段共聚物的稀溶液的自组装形成，所述两亲性嵌段共聚物可以是不同类型的，比如二嵌段和三嵌段(A-B-A或A-B-C)。本发明的聚合物囊泡也可以由四嵌段或五嵌段共聚物形成。对于三嵌段共聚物，中央嵌段通常由其侧面嵌段与环境隔离，而二嵌段共聚物自组装成双层，将两个疏水性嵌段尾对尾放置，效果大致相同。在多数情况下，囊泡膜具有不溶性中间层和可溶性外层。将通过自组装形成聚合物囊泡的驱动力看作是不溶性嵌段的微相分离，其倾向于结合以便保护自身不与水接触。由于成分共聚物的分子量大，因此，本发明的聚合物囊泡具有显著的性能。嵌段共聚物的总分子量的增加有利于囊泡的形成。由此，与由脂质和表面活性剂形成的囊泡相比，(聚合的)两亲性物质在这些囊泡中的扩散非常低。由于聚集在囊泡结构中的聚合物链的迁移率(mobility)较低，因此可以获得稳定的聚合物囊泡形态。除非另有明确说明，否则将本文所用的术语“聚合物囊泡(polymersome)”和“囊泡(vesicle)”看作相似的并且可以互换使用。重要的是，本发明的聚合物囊泡可以由一种pf嵌段共聚物或由两种或更多种嵌段共聚物形成，这意味着聚合物囊泡也可以由聚合物囊泡的混合物形成，并由此可以包含两种或更多种嵌段共聚物。在一些方面，本发明的聚合物囊泡是氧化稳定的。
在一些方面，本发明涉及一种用于在受试者中引发对可溶性(如增溶的)包封抗原的免疫应答的方法。该方法适合于向受试者注射组合物，该种组合物包含具有两亲性聚合物的膜(如，周向膜(circumferential membrane))的聚合物囊泡(如，载体或媒介)。所述组合物包含可溶性(如增溶的)抗原，该抗原由本发明的聚合物囊泡的两亲性聚合物的膜(如周向膜)包封。所述抗原可以是以下的一种或多种：i)多肽；ii)碳水化合物；iii)多核苷酸(如所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或信使RNA(mRNA)分子)或i)和/或ii)和/或iii)的组合。
在另一些方面，本发明涉及能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答的聚合物囊泡。
在一些方面，本发明涉及能够靶向淋巴结驻留性巨噬细胞和/或B细胞的聚合物囊泡。本发明设想的示例性的非限制性靶向机制包括：i)将包封的抗原(如多肽等)递送至树突状细胞(DC)以使T细胞活化(CD4和/或CD8)。另一机制为：ii)完整折叠的抗原(例如蛋白质等)的递送，这些抗原将转移至DC并也会触发效价(B细胞)。
在一些方面，本发明涉及包封抗原的聚合物囊泡，所述抗原选自：i)自身抗原，ii)非自身抗原，iii)非自身免疫原和iv)自身免疫原。因此，本发明的产品和方法适合用在诱导耐受性的环境(setting)(如临床环境)中，如当靶向自身免疫性疾病时。
在一些方面，本发明涉及包含脂质聚合物的本发明的聚合物囊泡。
本发明的聚合物囊泡还可以具有共包封的(即除了抗原外，包封的)一种或多种佐剂。佐剂的实例包括含有未甲基化CpG基序的合成寡脱氧核苷酸(ODN)，所述未甲基化CpG基序可触发表达Toll样受体9的细胞(包括人浆细胞样树突状细胞和B细胞)以启动先天免疫应答，所述先天免疫应答的特征在于产生Th1和促炎性细胞因子，比如白介素-1、白介素-2或白介素-12的细胞因子，匙孔血蓝蛋白(KLH)，血清白蛋白，牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂，仅列举了几个示例性的实例。
只要所述聚合物囊泡能够引发免疫应答，本发明的聚合物囊泡可以是任何尺寸。例如，所述聚合物囊泡可具有大于70nm的直径。所述聚合物囊泡的直径的范围可为约100nm至约1μm，或约100nm至约750nm，或约100nm至约500nm。所述聚合物囊泡的直径的范围还可为约125nm至约175nm，或约125nm至约250nm，约140nm至约240nm，约150nm至约235nm，约170nm至约230nm，或约220nm至约180nm，或约190nm至约210nm。例如，所述聚合物囊泡的直径可以为约200nm；约205nm或约210nm。当用作(第一或第二)群来引发免疫应答时，所述聚合物囊泡的群通常为单分散群。所采用的聚合物囊泡群的平均直径通常在70nm以上、或在120nm以上、或在125nm以上、或在130nm以上、或在140nm以上、或在150nm以上、或在160nm以上、或在170nm以上、或在180nm以上、或在190nm以上(对此还参见图2)。所述聚合物囊泡群的平均直径可以，例如在上述单个聚合物囊泡的范围内，即所述聚合物囊泡群的平均直径可以处于100nm至约1μm、或约100nm至约750nm、或约100nm至约500nm、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。所述聚合物囊泡群的平均直径也可以为，例如约200nm、约205nm或约210nm。可以例如通过动态光散射(DLS)仪器，使用Z平均值(d,nm)(一种优选的DLS参数)来确定直径。Z平均尺寸是强度加权调和平均颗粒直径(intensity weightedharmonic mean particle diameter)(参见实施例1和2)。在本上下文中，应注意，根据Hubbel等的美国专利8,323,696，聚合物囊泡的集合/群应当具有小于70nm的平均直径才能引发免疫应答。类似地，Stano等，同上，2013，尽管希望使用较小的聚合物囊泡，但由于技术限制，他们使用了直径为125nm+/-15nm的聚合物囊泡来引发免疫应答。因此，令人惊讶的是，具有例如大于150nm的平均直径的本发明的聚合物囊泡的群/集合能够诱导细胞和体液免疫应答(参见实施例部分)。此类聚合物囊泡群可以是适合例如通过注射或口服给药引发免疫应答的形式。
在一些方面，本发明涉及本发明的组合物，其适合于皮内、腹膜内、皮下、静脉内或肌肉内注射或无创施用本发明的抗原，所述无创施用例如口服施用、吸入施用或经鼻腔施用。所述组合物可包括本发明的聚合物囊泡(如载体)，其具有两亲性聚合物的膜(如周向膜)。所述组合物进一步包含由所述聚合物囊泡的两亲性聚合物的膜包封的可溶性(如增溶的)抗原。本发明的组合物可用于治疗目的(例如，通过例如疫苗接种的手段来治疗患有疾病的受试者或预防患有疾病)或用于抗体发现、疫苗发现或靶向递送。
在一些方面，本发明的聚合物囊泡在其表面具有羟基。在另一些方面，本发明的聚合物囊泡在其表面不具有羟基。
在本发明的上下文中，术语“包封的”意指被膜包裹(如，本发明的聚合物囊泡的膜，如内嵌在所述聚合物囊泡的腔内)。对于抗原，术语“包封的”进一步意指所述抗原既未整合到、也未共价结合至、也未缀合至(如，本发明的聚合物囊泡的)所述膜上。对于如本文所述的聚合物囊泡的囊泡结构的隔室化，术语“包封的”意指内部囊泡完全包含在外部囊泡内部，并被外部囊泡的囊泡膜包围。由外部囊泡的囊泡膜包围的密闭空间形成一个隔室。由内部囊泡的囊泡膜包围的密闭空间形成另一个隔室。
在本上下文中，术语“抗原”意指可以被免疫系统的组分特异性结合的任何物质。只有能够引发(或引起或诱导)免疫应答的抗原才被认为具有免疫原性，并被称为“免疫原”。示例的非限制性抗原是源自蛋白质的可溶部分的多肽、可变得可溶的用于包封的疏水性多肽以及可作为聚集体可溶的聚集多肽。所述抗原可以来自体内(“自身抗原”)或来自外部环境(“非自身”)。
膜蛋白形成一类通常产生低免疫应答水平的抗原。值得注意的是，可溶性(如增溶的)膜蛋白(MP)和膜相关肽(MAP)及其片段(即部分)(如本文提到的抗原)是由聚合物囊泡包封的，所述聚合物囊泡可允许它们以生理相关的方式折叠。这极大地增强了此类抗原的免疫原性，因此，与游离抗原相比，可以使用更少量的相应抗原来产生相同水平的免疫应答。此外，(与游离膜蛋白相比)更大尺寸的聚合物囊泡允许免疫系统更容易地检测到它们。
在本发明的上下文中，术语“B16肽”是指源自自发C57BL/6衍生的B16黑色素瘤模型(例如，黑色素瘤B16-F10小鼠模型)的任何新抗原多肽。其非限制性实例包括肽SEQ IDNO:9、10和11。
在本发明的上下文中，术语“MC38肽”是指源自结肠癌MC38小鼠模型的任何新抗原多肽。其非限制性实例包括肽SEQ ID NO:1、2和3。
在本发明的上下文中，术语“流感血凝素(HA)”是指一种在流感病毒表面发现的糖蛋白。HA具有至少18种不同的抗原，这些抗原均在本发明的范围内。将这些亚型命名为H1至H18。“流感血凝素(HA)”亚型H1的非限制性实例包括多肽SEQ ID NO:5、6、7和8。
在本发明的上下文中，术语“猪流感血凝素(HA)”是指一种在猪流感病毒表面发现的糖蛋白，其是一种在猪中流行的流感病毒家族。“猪流感血凝素(HA)”的非限制性实例包括亚型H1 SEQ ID NO:6。
在本发明的上下文中，术语“冠状病毒”指一种冠状病毒亚科的病毒，其是包膜的、正义单链RNA病毒家族。冠状病毒可以在哺乳动物和鸟类中引起疾病。在该亚科中有四个属，即α冠状病毒、β冠状病毒、γ冠状病毒和δ冠状病毒。在人类中，冠状病毒可以引起轻度的呼吸道感染，以及其它致死的呼吸道感染，比如SARS、MERS和COVID-19。人致病性冠状病毒通常属于α冠状病毒或β冠状病毒属。属于α冠状病毒属的病毒是，例如PEDV、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猫冠状病毒(FCoV)(包括猫肠冠状病毒(FECV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV))、犬冠状病毒(CCoV)，或人类-致病性冠状病毒人冠状病毒229E(HCoV-229E)和人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)。在β冠状病毒属中，Sarbecovirus和Merbecovirus亚属与本发明的内容最相关，其包括SARS-CoV-1、SARS-CoV-2和MERS-CoV种。其它人致病性β冠状病毒是人冠状病毒OC43(HCoV-OC43)人冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1)。Corman VM,Muth D,NiemeyerD,Drosten C.,Hosts and Sources of Endemic Human Coronaviruses.Adv VirusRes.2018；100:163-188给出了对人致病性冠状病毒的综述。
在本发明的上下文中，术语“SPIKE蛋白”涉及存在于病毒衣壳或病毒包膜表面上的糖蛋白。SPIKE蛋白结合宿主细胞上的一些受体，因此其对于宿主特异性和病毒感染性都是重要的。
在本发明的上下文中，术语“PEDv S蛋白”是指猪流行性腹泻病毒(PEDV)表面上存在的SPIKE糖蛋白，该病毒属于猪的冠状病毒家族。可用于本发明的可溶性“PEDv S蛋白”的非限制性实例包括猪流行性腹泻病毒(PEDv)纤突蛋白(S蛋白)(UniProtKB登录号：V5TA78)的由具有氨基酸序列SEQ ID NO:12的S1和S2区域组成的完整可溶性片段，S1区SEQ ID NO:13的可溶性片段，或S2区SEQ ID NO:14的可溶性片段。当然也可以使用S1和S2区的完整可溶性片段的较短片段，或者仅单独使用S1区或S2区(对此参见图12)。当然也可以在本发明的聚合物囊泡中使用包含部分S1和部分S2的片段，例如，纤突蛋白的保藏(deposited)序列的氨基酸500至939。在此还应注意，本发明的聚合物囊泡可具有包封的所述纤突蛋白的一种或多种不同可溶性片段，例如S1区、S2区和/或完整的S1和S2区。在本发明的聚合物囊泡的示例性实施方案中，所述聚合物囊泡在其中包封了一种类型的可溶性片段(例如，仅S1区)、两种不同类型的可溶性片段(例如，S1和S2区)，三种不同类型的可溶性片段(S1区、S2区域和SEQ ID NO:12(氨基酸残基19至1327)的S1和S2的完整可溶性片段)或甚至四种不同类型的片段(例如，S1区、S2区、SEQ ID NO:12(氨基酸残基19至1327)的S1和S2的完整可溶性片段，以及作为第四种类型，包含部分S1和部分S2的上述片段，例如，纤突蛋白序列的氨基酸500至939)。在此还应注意，在一个优选的实施方案中，将其中包封了一种或多种不同的纤突蛋白的可溶性片段的本发明的聚合物囊泡用作针对猪流行性腹泻病毒的口服疫苗。
在本发明的上下文中，术语“MERS-CoV S蛋白”或“MERS-CoV SPIKE蛋白”是指中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERS-CoV)表面上存在的SPIKE糖蛋白，所述中东呼吸综合征相关冠状病毒是一种人致病性冠状病毒。本发明的MERS-CoV纤突蛋白具有UniProtKB登录号：K0BRG7，2020年2月26日40版(GenBank登录号No.AFS88936，AFS88936.1版)或SEQ ID NO:42所示的序列。可用于本发明的可溶性“MERS-CoV S蛋白”的非限制性实例包括MERS-CoV纤突蛋白(S蛋白)的S1和S2区的完整可溶性片段，其可对应于MERS-CoV纤突蛋白的1至1297位或具有SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列。可用于本发明的可溶性“MERS-CoV S蛋白”的非限制性实例还包括S1区，其对应于MERS-CoV纤突蛋白(S蛋白)的18至725位或具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列。可以用于本发明的可溶性“MERS-CoV S蛋白”的非限制性实例还包括S2区的可溶性片段，其可以对应于MERS-CoV纤突蛋白(S蛋白)的726至1296位或具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列。当然还可以使用S1和S2区的完整可溶性片段的较短片段，或仅单独使用S1或S2区，例如片段可以包括受体结合结构域(RBD)，其对应于MERS-CoV纤突蛋白的377-588位或具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在此还应注意，本发明的聚合物囊泡可具有包封的所述纤突蛋白的一种或多种不同可溶性片段，例如S1区、S2区或其可溶性片段、S1和S2区的完整可溶性片段和/或RBD。在本发明的聚合物囊泡的示例性实施方案中，所述聚合物囊泡在其中包封了一种类型的可溶性片段(例如，仅S1和S2区的完整可溶性片段)、两种不同类型的可溶性片段(例如，S1和S2区的完整可溶性片段以及S1区或S2区的可溶性片段)，三种不同类型的可溶性片段(S1区、S2区的可溶性片段以及SEQ ID NO:42(氨基酸残基1至1297)的S1和S2的完整可溶性片段)或甚至四种不同类型的片段(例如，S1区、S2区的可溶性片段、SEQ ID NO:42(氨基酸残基1至1297)的S1和S1的完整可溶性片段以及作为第四种类型的RBD)。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，所述可溶性片段包含对应于于全长MERS-CoV SPIKE蛋白的氨基酸残基18至725的S1区，或基本上由其组成或由其组成。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，所述可溶性片段包含应于于全长MERS-CoV SPIKE蛋白的氨基酸残基726至1296的S2区，或基本上由其组成或由其组成。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，所述可溶性片段包含对应于全长MERS-CoV SPIKE蛋白的氨基酸残基1至1297的S1区和S2区，或基本上由其组成或由其组成。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了片段，所述片段包含应于全长MERS-CoV SPIKE蛋白的氨基酸残基1至1327的S1区和S2区，或基本上由其组成或由其组成。在本上下文中，“基本上由…组成”意指片段的N末端和/或C末端端点可以在有限程度上变化，比如至多25个氨基酸位置，比如至多20个氨基酸位置，比如至多15个氨基酸位置、至多10个氨基酸位置、至多5个氨基酸位置、至多4个氨基酸位置、至多3个氨基酸位置、至多2个氨基酸位置、或至多1个氨基酸位置。作为示例性实例，基本上由全长MERS-CoV SPIKE蛋白的氨基酸726至1296组成的片段可以由全长MERS-CoV SPIKE蛋白的位置716至1296位、736至1296位、726至1286位、或726至1306位、716至1286位、736至1286位、736至1306位、或716至1306位组成。
本发明的MERS-CoV纤突蛋白还可以包含上述序列的变体，其包括MERS-CoV的其他分离物的天然变体以及可以被引入MERS-CoV S蛋白的序列中的人工修饰。作为示例性实例，可以引入突变以改变表达蛋白的形成。为此，可以使位于SEQ ID NO:42的754至757位的弗林蛋白酶切割位点突变。通过降低该氨基酸序列的碱性性质，可以实现表达后切割的减少。例如，可以将残基精氨酸754和/或757突变为碱性较弱的氨基酸，如甘氨酸(位置编号对应于SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列)，或其它碱性较弱的氨基酸。因此，可将具有RSVR天然序列(SEQ ID NO:58)的弗林蛋白酶切割位点突变为序列GSVG(SEQ ID NO:59)。进一步的修饰可包括添加三聚化结构域，优选地添加到蛋白质的C末端，该三聚化结构域有助于增加S1和/或S2结构域的天然折叠。此类三聚化结构域可包括foldon结构域(如SEQ ID NO:54)、基于GCN4的三聚化结构域(例如SEQ ID NO:55或56)或本领域技术人员熟知的其它基序。此外，可以将能够改善生产和/或下游加工(比如分离和纯化)的分泌前导序列添加到蛋白质的N末端。此类前导序列的示例性实例是蜜蜂蜂毒肽前导序列(SEQ ID NO:57)。其它有用的前导序列是本领域技术人员熟知的。因此，本发明的纤突蛋白的可溶性片段还包括本文明确或隐含公开的纤突蛋白的可溶性片段的特定序列的高度相同变体。例如，与本发明的纤突蛋白的可溶性片段，特别是本发明的MERS-CoV S蛋白的可溶性片段具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的变体。作为示例性实例，本发明的S片段的可溶性片段可包含与选自SEQ ID NO:43-46的序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的序列，基本上由其组成或由其组成。
可选地或另外地，本发明的聚合物囊泡可包封一种或多种核酸，比如mRNA、自扩增mRNA、编码一种或多种根据本发明所述的MERS-CoV纤突蛋白或其可溶性片段的DNA。
在此还注意到，在一个优选的实施方案中，将其中包封了一种或多种不同的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长MERS-CoV纤突蛋白的核酸的本发明的聚合物囊泡用作针对人类疾病的疫苗，所述人类疾病特别是由人致病性冠状病毒感染，特别是中东呼吸综合征(MERS)。因此，可以将其中包封了一种或多种不同的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长MERS-CoV纤突蛋白的核酸的本发明的聚合物囊泡用于治疗(包括预防)发热、咳嗽、咳痰、呼吸急促、肺炎和/或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
在一个优选的实施方案中，肌肉内地施用其中包封了一种或多种不同的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长MERS-CoV纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。在一个优选的实施方案中，鼻内地施用其中包封了一种或多种不同的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长MERS-CoV纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。在一个优选的实施方案中，通过吸入施用其中包封了一种或多种不同的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长MERS-CoV纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。
在本发明的上下文中，术语“SARS-CoV-2 S蛋白”或“SARS-CoV-2 SPIKE蛋白”是指严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)表面上存在的SPIKE糖蛋白，其是一种人致病性冠状病毒。本发明的SARS-CoV-2纤突蛋白具有UniProtKB登录号：P0DTC2，2020年4月22日版本1(GenBank登录号MN908947，版本MN908947.3)或SEQ ID NO:19所示的序列。可以用于本发明的可溶性“SARS-CoV-2S蛋白”的非限制性实例包括由SARS-CoV-2纤突蛋白(S蛋白)的S1和S2区域组成的完整可溶性片段，其对应于SARS-CoV-2纤突蛋白的16至1213或14至1204或19至1204位，或者具有SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列。可用于本发明的可溶性“SARS-CoV-2 S蛋白”的非限制性实例还包括S1区，其对应于SARS-CoV-2纤突蛋白(S蛋白)的16至685位或具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列。可以用于本发明的可溶性“SARS-CoV-2 S蛋白”的非限制性实例还包括S2区，其对应于SARS-CoV-2纤突蛋白(S蛋白)的686至1213或646至1204位或具有SEQ ID NO:38或39的氨基酸序列。当然也可以使用S1和S2区的完整可溶性片段的较短片段，或者仅单独使用S1或S2区，例如使SARS-CoV-2蛋白的318-524的氨基酸序列作为受体结合结构域(SEQ ID NO:41，在这方面参见图23A)。作为示例性实例，S2区的较短片段可以包含对应于SEQ ID NO:19的686至1204位的氨基酸，基本上由所述氨基酸组成或由所述氨基酸组成。在示例性实例中，纤突蛋白的可溶性片段可以包含对应于SEQ ID NO:19的646至1204位的氨基酸，基本上由所述氨基酸组成或由所述氨基酸组成。在示例性实例中，纤突蛋白的可溶性片段可以包含SEQ ID NO:34-36和65中任一所示的序列，基本上由其组成或由其组成。在此还应注意，本发明的聚合物囊泡可以包封纤突蛋白的一种或多种不同的可溶性片段，例如S1区或其片段、S2区或其片段和/或完整S1和S2区或其包含部分S1区和部分S2区的片段。在本发明的聚合物囊泡的示例性实施方案中，所述聚合物囊泡在其中包封了一种类型的可溶性片段(例如，仅S1区或其片段)，两种不同类型的可溶性片段(例如，S1和S2区或S1和/或S2区的片段)，三种不同类型的可溶性片段(S1区或其片段，S2区或其片段和SEQ ID NO:19的S1和S2的完整可溶性片段)或甚至四种不同类型的片段(例如，S1区或其片段，S2区或其片段，SEQ ID NO:19的S1和S2的完整可溶性片段或其包含部分S1区和部分S2区的片段，和作为第四种类型包含部分S1和部分S2的上述片段，例如纤突蛋白序列的氨基酸14至1204)。
本领域已知SARS-CoV-2 S蛋白的几种变体，例如GeneBank登录号No.QII57278.1(SEQ ID NO:20)、GeneBank登录号No.YP_009724390.1(SEQ ID NO:21)、GeneBank登录号No.QIO04367.1(SEQ ID NO:22)、GeneBank登录号No.QHU79173.2(SEQ ID NO:23)、GeneBank登录号No.QII87830.1(SEQ ID NO:24)、GeneBank登录号No.QIA98583.1(SEQ IDNO:25)、GeneBank登录号No.QIA20044.1(SEQ ID NO:26)、GeneBank登录号No.QIK50427.1(SEQ ID NO:27)、GeneBank登录号No.QHR84449.1(SEQ ID NO:28)、GeneBank登录号No.QIQ08810.1(SEQ ID NO:29)、GeneBank登录号No.QIJ96493.1(SEQ ID NO:30)、GeneBank登录号No.QIC53204.1(SEQ ID NO:31)、GeneBank登录号No.QHZ00379.1(SEQ IDNO:32)和GeneBank登录号No.QHS34546.1(SEQ ID NO:33)。与SEQ ID NO:19相比，在这些变体中可以发现对应于位置28、49、74、145、157、181、221、307、408、528、614、655、797、930的序列位置处的突变。可以将进一步的修饰引入SARS-CoV-2 S蛋白的序列中。作为示例性实例，可以引入突变以改变表达蛋白的形成。为此，可以使位于SEQ ID NO:19的679至685位的弗林蛋白酶切割位点突变。通过降低该氨基酸序列的碱性性质可以实现表达后切割的减少。例如，将残基Pro 681、Arg 682和/或Arg 683可以突变为碱性较弱的氨基酸，例如Pro681-＞Asn、Arg 682-＞Gln和/或Arg 683-＞Ser(对应于SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的位置编号)，或其他碱性较弱的氨基酸。因此，可以将具有天然NSPRRAR序列(SEQ IDNO:52)的弗林蛋白酶切割位点可突变为NSNQSAR序列(SEQ ID NO:53)。SEQ ID NO:65示出了具有突变的弗林蛋白酶切割位点的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段的示例性实例。SEQ ID NO:66示出了具有突变的弗林蛋白酶切割位点的SARS-CoV-2纤突蛋白的示例性实例。进一步的修饰可以包括添加三聚化结构域，优选地添加到蛋白的C-末端，该三聚化结构域有助于增加S1和/或S2结构域的天然折叠。此类的三聚化结构域可以包括foldon结构域(GYIPEAPRDG QAYVRKDGEW VLLSTFL，SEQ ID NO:54，例如在Güthe等，J.Mol.Biol.(2004)337,905–915中所描述的)、包括其免疫沉默变体的基于GCN4的三聚化结构域(例如GGGTGGGGTG RMKQIEDKIEE ILSKIYHIEN EIARIKKLIG ERGGR,SEQ ID NO:55,或GGGTGGNGTGRMKQIEDKIE NITSKIYNITN EIARIKKLIG NRTGGR,SEQ ID NO:56，如在Sliepen等，J.Biol.Chem.(2015)290(12):7436–7442中所描述的)或本领域技术人员熟知的其它基序。。此外，可以将能够改善生产和/或下游加工(比如分离和纯化)的分泌前导序列添加到蛋白质的N末端。此类前导序列的示例性实例是蜜蜂蜂毒肽前导序列(MKFLVNVALVFMVVYISYIY A，SEQ ID NO:57)。其它有用的前导序列是本领域技术人员熟知的。因此，本发明的纤突蛋白的可溶性片段还包括本文明确或隐含公开的纤突蛋白的可溶性片段的特定序列的高度相同变体。例如与本发明的纤突蛋白的可溶性片段，特别是本发明的SARS CoV-2 S蛋白的可溶性片段具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的变体。作为示例性实例，本发明的S片段的可溶性片段可包含与选自以下序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的序列，基本上由该序列组成或由该序列组成：对应于SEQ ID NO:19(SARS-CoV-2纤突蛋白)的16至1213位、16至685位、686至1213位、686至1204位、646至1204位、或14至1204位的序列。作为另一个示例性实例，本发明的S片段的可溶性片段可与选自SEQ ID NO:34-41和65的序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性。
在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQ ID NO:19所示的全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸残基16至685的S1区、基本上由S1区组成或由S1区组成，或者具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQID NO:19所示的全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸残基686至1213的S2区、基本上由S2区组成或由S2区组成，或者具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQ ID NO:19所示的全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸残基16至1213的S1和S2区、基本上由其组成或由其组成，或者具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQ ID NO:19所示的全长SARS-CoV-2SPIKE蛋白的氨基酸残基686至1204的氨基酸、基本上由其组成或由其组成。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQ IDNO:19所示的全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸残基646至1204的氨基酸、基本上由其组成或由其组成，或者具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQ ID NO:19所示的全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸残基14至1204的氨基酸、基本上由其组成或由其组成，或具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于SEQ ID NO:19所示的全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸残基19至1204的氨基酸、基本上由其组成或由其组成，或具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含与选自如下的序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％的序列同一性的序列、基本上由该序列组成或由该序列组成：对应于SEQ ID NO:19(SARS-CoV-2纤突蛋白)的16至1213位、16至685位、686至1213位、686至1204位、646至1204位、14至1204位或19至1204位的序列。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含与选自SEQ ID NO:36、40和/或65的序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的序列、基本上由该序列组成或由该序列组成。在本上下文中，“基本上由…组成”意指片段的N末端和/或C末端端点可以在有限程度上变化，比如至多25个氨基酸位置，比如至多20个氨基酸位置，比如至多15个氨基酸位置、至多10个氨基酸位置、至多5个氨基酸位置、至多4个氨基酸位置，至多3个氨基酸位置、至多2个氨基酸位置、或至多1个氨基酸位置。作为示例性实例，基本上由全长SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的氨基酸646至1204组成的片段可以由全长SARS-CoV-2SPIKE蛋白的641至1204位、651至1204位、646至1209位、或646至1199位、641至1209位、或651至1199位组成。
可选地或另外地，本发明的聚合物囊泡可包封一种或多种核酸，比如mRNA、自扩增mRNA、编码一种或多种根据本发明所述的SARS-CoV-2纤突蛋白或其可溶性片段的DNA。
在此还注意到，在一个优选的实施方案中，将其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其的核酸的本发明的聚合物囊泡用作针对人类疾病的疫苗，所述人类疾病特别是由人致病性冠状病毒感染，冠状病毒疾病2019(COVID-19)。因此，可以将其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其的核酸的本发明的聚合物囊泡用于治疗(包括预防)发热、咳嗽、呼吸急促、肺炎、器官衰竭、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、疲劳、肌肉疼痛、腹泻、咽喉痛、嗅觉丧失和/或腹痛。
在一个优选的实施方案中，肌肉内地施用其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-2纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。在一个优选的实施方案中，鼻内地施用其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-2纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。在一个优选的实施方案中，通过吸入施用其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-2纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。
在本发明的上下文中，术语“SARS-CoV-1 S蛋白”或“SARS-CoV-1纤突(Spike)蛋白”是指严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV或SARS-CoV-1)表面上存在的纤突糖蛋白，其是一种人致病性冠状病毒。本发明的SARS-CoV-1纤突蛋白具有UniProtKB登录号：P59594，2019年12月11日版本134或SEQ ID NO:48所示的序列。可以用于本发明的可溶性“SARS-CoV-1 S蛋白”的非限制性实例包括SARS-CoV-1纤突蛋白(S蛋白)的S1和S2区域的完整可溶性片段，其对应于SARS-CoV-1纤突蛋白的14至1195位，或者具有SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。可用于本发明的可溶性“SARS-CoV-1 S蛋白”的非限制性实例还包括S1区，其对应于SARS-CoV-1纤突蛋白(S蛋白)的14至667位或具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列。可以用于本发明的可溶性“SARS-CoV-1 S蛋白”的非限制性实例还包括S2区，其对应于SARS-CoV-1纤突蛋白(S蛋白)的668至1198位或具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列。当然也可以使用S1和S2区的完整可溶性片段的较短片段，或者仅单独使用S1或S2区，例如片段可包括受体结合结构域(RBD)，其对应于SARS-CoV-1纤突蛋白的306-527位的氨基酸序列或具有SEQID NO:51的氨基酸序列。在此还应注意，本发明的聚合物囊泡可以包封纤突蛋白的一种或多种不同的可溶性片段，例如S1区、S2区或其片段、S1和S2区的完整可溶性片段和/或RBD。在本发明的聚合物囊泡的示例性实施方案中，所述聚合物囊泡在其中包封了一种类型的可溶性片段(例如，仅S1和S2区的完整可溶性片段)，两种不同类型的可溶性片段(例如，S1和S2区的完整可溶性片段以及S1区或S2区的可溶性片段)，三种不同类型的可溶性片段(S1区，S2区的可溶性片段和SEQ ID NO:47(氨基酸残基14至1195)的S1和S2的完整可溶性片段)或甚至四种不同类型的片段(例如，S1区，S2区的可溶性片段，SEQ ID NO:47(氨基酸残基14至1195)的S1和S2的完整可溶性片段，和作为第四种类型的RBD)。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于全长SARS-CoV-1纤突蛋白的氨基酸残基14至667的氨基酸残基的S1区、基本上由S1区组成或由S1区组成。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于全长SARS-CoV-1纤突蛋白的氨基酸残基668至1195的氨基酸残基的S2区的可溶性片段、基本上由其组成或由其组成。在优选的实施方案中，本发明的聚合物囊泡在其中包封了可溶性片段，该可溶性片段包含对应于全长SARS-CoV-1纤突蛋白的氨基酸残基14至1255的S1和S2区、基本上由其组成或由其组成。在本上下文中，“基本上由…组成”意指片段的N末端和/或C末端端点可以在有限程度上变化，比如至多25个氨基酸位置，比如至多20个氨基酸位置，比如至多15个氨基酸位置、至多10个氨基酸位置、至多5个氨基酸位置、至多4个氨基酸位置，至多3个氨基酸位置、至多2个氨基酸位置、或至多1个氨基酸位置。
本发明的SARS-CoV-1纤突蛋白还可以包含上述序列的变体，其包括SARS-CoV-1的其他分离物的天然变体以及可以被引入SARS-CoV-1 S蛋白的序列中的人工修饰。作为示例性实例，可以引入突变以改变表达蛋白的形成。为此，可以使位于SEQ ID NO:47的761至767位的弗林蛋白酶切割位点突变。通过降低该氨基酸序列的碱性性质，可以实现表达后切割的减少。例如，可以将残基精氨酸764和/或767突变为碱性较弱的氨基酸，如Gly(位置编号对应于SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列)，或其它碱性较弱的氨基酸。因此，可将具有EQDRNTR天然序列(SEQ ID NO:60)的弗林蛋白酶切割位点突变为序列EQDGNTG(SEQ ID NO:61)。进一步的修饰可包括添加三聚化结构域，优选地添加到蛋白质的C末端，该三聚化结构域有助于增加S1和/或S2结构域的天然折叠。此类三聚化结构域可包括foldon结构域(如SEQ ID NO:54)、基于GCN4的三聚化结构域(例如SEQ ID NO:55或56)或本领域技术人员熟知的其它基序。此外，可以将能够改善生产和/或下游加工(比如分离和纯化)的分泌前导序列添加到蛋白质的N末端。此类前导序列的示例性实例是蜜蜂蜂毒肽前导序列(SEQ ID NO:57)。其它有用的前导序列是本领域技术人员熟知的。因此，本发明的纤突蛋白的可溶性片段还包括本文明确或隐含公开的纤突蛋白的可溶性片段的特定序列的高度相同变体。例如，与本发明的纤突蛋白的可溶性片段，特别是本发明的SARS-CoV-1S蛋白的可溶性片段具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的变体。作为示例性实例，本发明的S片段的可溶性片段可包含与选自SEQ ID NO:48-51的序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性的序列，基本上由其组成或由其组成。
可选地或另外地，本发明的聚合物囊泡可包封一种或多种核酸，比如mRNA、自扩增mRNA、编码一种或多种根据本发明所述的SARS-CoV-1纤突蛋白或其可溶性片段的DNA。
在此还注意到，在一个优选的实施方案中，将其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-1纤突蛋白的核酸的本发明的聚合物囊泡用作针对人类疾病的疫苗，所述人类疾病特别是由人致病性冠状病毒感染，特别是严重急性呼吸综合征(SARS)。因此，可以将其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-1纤突蛋白的核酸的本发明的聚合物囊泡用于治疗(包括预防)发热、肌肉疼痛、嗜睡、咳嗽、咽喉痛、呼吸急促、肺炎和/或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
在一个优选的实施方案中，肌肉内地施用其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-1纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。在一个优选的实施方案中，鼻内地施用其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长MERS-CoV纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。在一个优选的实施方案中，通过吸入施用其中包封了一种或多种不同的SARS-CoV-1纤突蛋白的可溶性片段和/或编码其或全长SARS-CoV-1纤突蛋白的核酸的聚合物囊泡。
在本发明的上下文中，术语“氧化稳定的”是指采用例如Scott等，2012描述的方法对聚合物囊泡(或相应的聚合物或膜)的抗氧化性的度量。在该种方法中，将具有包封的抗原的聚合物囊泡在0.5％的过氧化氢溶液中温育并且游离(释放)的抗原的量可通过UV/荧光HPLC进行定量。将在这些氧化条件下释放大量或全部的包封抗原的聚合物囊泡看作是对氧化敏感的。在美国专利8,323,696的第16栏描述了另一种确定嵌段共聚物和由此得到的聚合物囊泡是氧化稳定的还是氧化敏感的方法。根据该方法，通过温和的氧化剂对具有氧化敏感的官能团的聚合物进行化学改变，其检验标准是在体外达20小时针对10％过氧化氢的溶解增强了。例如，聚(硫化丙烯)(PPS)是一种氧化敏感的聚合物(参见例如Scott等，2012，同上和US 8,323,696)，PPS可以用作确定目标聚合物以及相应的目标聚合物囊泡是氧化敏感的还是氧化稳定的参照物，例如，若与其中包封了相同抗原的PPS聚合物囊泡中释放的抗原量相比，从目标聚合物囊泡中释放了相同或更高量的抗原，或所述量的约90％或更多，或所述量的约80％或更多，或所述量的约70％或更多，或所述量的约60％或更多，则将该聚合物囊泡看作是氧化敏感的。若与其中包封了相同抗原的PPS聚合物囊泡中释放的抗原量相比，从目标聚合物囊泡中释放了仅约0.5％或更少，或仅约1.0％或更少，或约2％或更少，或约5％或更少，或约10％或更少，或约20％或更少，或约30％或更少，或约40％或更少或约50％或更少的抗原，则将该聚合物囊泡看作是氧化稳定的。因此，与此一致，如美国专利8,323,696描述的PPS聚合物囊泡或如由Stano等人描述的由聚(硫化丙烯)(PPS)和聚(乙二醇)(PEG)作为组分制成的PPS-bl-PEG聚合物囊泡不是本发明意义上的氧化稳定的聚合物囊泡。类似地，PPS30-PEG17聚合物囊泡不是本发明意义上的氧化稳定的聚合物囊泡。测量氧化稳定性的其他非限制性实例包括例如在血清组分(如哺乳动物血清，如人血清组分)存在下的稳定性或核内体内部的稳定性的测量。
在本发明的上下文中，术语“还原稳定的”是指在还原环境下聚合物囊泡的抗还原性的度量。
在本发明的上下文中，术语“血清”是指已经从中移除凝结蛋白的血浆。
在本发明的上下文中，术语“不依赖于氧化的释放”是指在形成聚合物囊泡的聚合物没有或基本上没有氧化的情况下聚合物囊泡内容物的释放。
在本文中术语“多肽”与术语“蛋白”等同使用。蛋白(包含其片段，优选生物活性片段，以及通常具有少于30个氨基酸的肽)包含通过共价肽键彼此相连的一个或多个氨基酸(从而产生一个氨基酸链)。本文所用术语“多肽”描述了一组由例如超过30个氨基酸组成的分子。多肽可更进一步形成多聚体比如二聚体、三聚体及更高的低聚体，即由大于一个多肽分子组成。形成此类二聚体或三聚体等的多肽分子可以相同或不同。这种多聚体对应的较高阶结构因此称为同二聚体或异二聚体，同三聚体或异三聚体等。一个异多聚体的实例是抗体分子，在其天然存在的形式中由两个相同的轻多肽链和两个相同的重多肽链组成。术语“多肽”和“蛋白”也指经天然修饰的多肽/蛋白，其中所述修饰由如翻译后修饰(如糖基化、乙酰化、磷酸化等)实现。这些修饰是本领域熟知的。
在本上下文中，术语“碳水化合物”是指具有化学计量式Cn(H2O)n的化合物(如，因此也称为“碳的水合物”)，如醛糖和酮糖。该上位术语“碳水化合物”包括但不限于单糖、寡糖和多糖以及由通过羰基还原(醛糖醇)，通过将一个或多个末端基团氧化为羧酸或通过用氢原子、氨基、硫醇基或类似基团取代一个或多个羟基衍生的物质。还包括这些化合物的衍生物。
在本上下文中，术语“多核苷酸”(也称为“核酸”，其可与术语“多核苷酸”互换使用)是指由核苷酸单元组成的大分子，这些核苷酸单元如可以水解为某些嘧啶或嘌呤碱基(通常为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、d-核糖或2-脱氧-d-核糖和磷酸。“多核苷酸”的非限制性实例包括DNA分子(如cDNA或基因组DNA)、RNA(mRNA)、它们的组合或由DNA和RNA组成的杂合分子。核酸可以是双链或单链的，并且可以同时包含双链和单链的片段。最优选的多核苷酸的实例是双链DNA分子和mRNA分子。
在本上下文中，术语“反义寡核苷酸”是指核酸聚合物，其至少一部分与正常细胞或受累细胞(affected cell)中存在的核酸互补。示例性“反义寡核苷酸”包括反义RNA、siRNA、RNAi。
在本上下文中，术语“CD8(+)T细胞介导的免疫应答”是指由细胞毒性T细胞(也称为TC、细胞毒性T淋巴细胞、CTL、T杀伤细胞、溶细胞性T细胞、CD8(+)T细胞或杀伤性T细胞)介导的免疫应答。细胞毒性T细胞的实例包括但不限于抗原特异性效应CD8(+)T细胞。为了使T细胞受体(TCR)与I类MHC分子结合，前者必须伴有称为CD8的糖蛋白，该种糖蛋白与I类MHC分子的恒定部分结合。因此，将这些T细胞称为CD8(+)T细胞。一旦被激活，TC细胞将在细胞因子白介素2(IL-2)的帮助下进行“克隆扩增”，所述IL-2是T细胞的生长和分化因子。这使得对靶抗原具有特异性的细胞的数量增加，随后这些细胞可以在全身各处寻找抗原阳性的体细胞。
在本上下文中，术语“抗原特异性CD8(+)T细胞的克隆扩增”是指对靶抗原具有特异性的CD8(+)T细胞的数量增加。
在本上下文中，术语“细胞免疫应答”是指不涉及抗体而是涉及吞噬细胞、抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的活化以及在针对抗原的应答中各种细胞因子的释放的免疫应答。
在本上下文中，术语“抗原特异性CD8(+)T细胞的细胞毒性表型”是指抗原特异性CD8(+)T细胞的一组可观察特征，这些特征与它们的细胞毒性功能相关。
在本上下文中，术语“淋巴结驻留性巨噬细胞”是指巨噬细胞，所述巨噬细胞是大的白血细胞，作为我们免疫系统不可分割的一部分，这些巨噬细胞利用吞噬作用过程吞噬并消化存在于淋巴结中的颗粒，所述淋巴结是遍布全身的小、豆状腺体。
在本上下文中，术语“体液免疫应答”是指由在细胞外液中发现的大分子介导的免疫应答，所述大分子比如分泌的抗体、补体蛋白和某些抗微生物肽。其涉及抗体的方面通常称为抗体介导的免疫。
在本上下文中，术语“B细胞”也称为B淋巴细胞，其是一种淋巴细胞亚型的白血细胞。它们通过分泌抗体在适应性免疫系统的体液免疫组分中发挥作用。
本文所用“抗体”是包含一个或多个基本上或部分地由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码的多肽(其包含一个或多个结合结构域，优选抗原结合结构域)的蛋白质。本文所述术语“免疫球蛋白”(Ig)与“抗体”可互换使用。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因。特别地，本文所用的“抗体”是典型地由两个轻(L)链(每个约25kDa)和两个重(H)链(每个约50kDa)组成的四聚体糖基化蛋白。在抗体中可以发现两种类型的轻链，称作λ和κ。根据重链恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白划分为五个主要类别：A、D、E、G和M，这些中若干类别可进一步划分成亚类(同种型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2，其中IgG在本发明的上下文中是优选的。还设想了与本发明有关的抗体，其具有由Fcε受体I结合的IgE恒定结构域或其部分。IgM抗体由5个基本异四聚体单元连同一个另外的称为J链的多肽组成，并含有10个抗原结合位点，而IgA抗体包含与J链组合的2-5个可聚合形成多价聚集体(assemblage)的基本4-链单元。在IgG的情况下，4-链单元通常为约150,000道尔顿。每个轻链包括N端可变(V)结构域(VL)和恒定(C)结构域(CL)。每个重链包括N端V结构域(VH)、三或四个C结构域(CH)和铰链区。所述恒定结构域并不直接参与抗体与抗原的结合，而是可表现出多种效应物作用，诸如参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。如果抗体应施加ADCC，则其优选为IgG1亚类，而IgG4亚类不会具有施加ADCC的能力。
术语“抗体”还包括但不限于单克隆、单特异性、聚-或多-特异性抗体比如双特异性抗体、人源化的、骆驼化的、人的、单链、嵌合的、合成的、重组的、杂交的、突变的、移植的和在体外产生的抗体，其中优选嵌合的或人源化的抗体。术语“人源化的抗体”通常被定义为其中HC和LC的特异性编码CDR已经被转移到适当的人可变框架(“CDR移植”)的抗体。术语“抗体”还包括scFv、单链抗体、双体或四体、结构域抗体(dAb)和纳米抗体。就本发明而言，术语“抗体”应还包含具有若干抗原结合位点的双、三或多聚体抗体或者双、三或多功能抗体。
此外，本文中所用术语“抗体”还涉及本文所述抗体(包括片段)的衍生物。抗体的“衍生物”包含通过引入氨基酸残基置换、缺失或添加而被改变的氨基酸序列。此外，衍生物涵盖由任意类型的分子共价连接到抗体或蛋白质而被修饰的抗体。这样的分子的实例包括糖、PEG、羟基、乙氧基、羧基或氨基，但不限于这些。实际上，所述抗体的共价修饰导致糖基化、聚乙二醇化、乙酰化、磷酸化和酰胺化，而又不限于这些。
本发明涉及的抗体优选为“分离的”抗体。本文用于描述所公开抗体的“分离的”意指已经从其产生环境的组分中识别、分离和/或回收的抗体。优选地，所述分离的抗体不与来自其产生环境的全部其他组分关联。其产生环境的污染物组分，比如由重组转染细胞引起的，是典型地会干扰多肽的诊断或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质性或非蛋白质性的溶质。在优选的实施方案中，所述抗体将被纯化(1)至足以通过使用旋转杯测序仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或者(2)至使用考马斯蓝或优选地使用银染在非还原或还原条件下通过SDS-PAGE同质。然而，通常分离的抗体将通过至少一个纯化步骤制备。
术语“基本上非免疫原性的”意指本发明的嵌段共聚物或两亲性聚合物不引发适应性免疫应答，即，与包封的免疫原相比，该嵌段共聚物或两亲性聚合物显示出小于30％、优选地20％、更优选地10％、特别优选地小于9、8、7、6或5％的免疫应答。
术语“基本上非抗原性的”意指本发明的嵌段共聚物或两亲性聚合物不与具有适应性免疫的某些产物组(如T细胞受体或抗体)特异性结合，即，与包封的抗原相比，该嵌段共聚物或两亲性聚合物显示出小于30％、优选地20％、更优选地10％、特别优选地小于9、8、7、6或5％的结合。
通常，当结合亲和力高于10-6M时，则认为结合是特异性的。优选地，当结合亲和力为约10-11至10-8M(KD)，优选地为约10-11至10-9M时，认为结合是特异性的。如有必要，可以通过改变结合条件来减少非特异性结合，而基本不会对特异性结合产生影响。
术语“氨基酸”或“氨基酸残基”通常是指具有其本领域公知定义的氨基酸，比如选自以下的氨基酸：丙氨酸(Ala或A)；精氨酸(Arg或R)；天冬酰胺(Asn或N)；天冬氨酸(Asp或D)；半胱氨酸(Cys或C)；谷氨酰胺(Gln或Q)；谷氨酸(Glu或E)；甘氨酸(Gly或G)；组氨酸(His或H)；异亮氨酸(He或I)；亮氨酸(Leu或L)；赖氨酸(Lys或K)；甲硫氨酸(Met或M)；苯丙氨酸(Phe或F)；脯氨酸(Pro或P)；丝氨酸(Ser或S)；苏氨酸(Thr或T)；色氨酸(Trp或W)；酪氨酸(Tyr或Y)；及缬氨酸(Val或V)，尽管可以根据需要使用修饰、合成或罕见的氨基酸。通常，可以根据所具有的非极性侧链(如Ala、Cys、He、Leu、Met、Phe、Pro、Val)；具有负电荷的侧链(如Asp、Glu)；具有正电荷的侧链(如Arg、His、Lys)或不带电荷的极性侧链(如Asn、Cys、Gln、Gly、His、Met、Phe、Ser、Thr、Trp和Tyr)将氨基酸分组。
“效应细胞”，优选地人效应细胞，是表达一种或多种FcR并发挥效应子功能的白细胞。优选地，所述细胞表达至少FcyRm，并发挥ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞。可以自天然来源如血液中分离效应细胞。
术语“免疫”是指以下的一个或多个步骤：向人非人动物施用一种或多种抗原从而在该动物中可产生抗体。
具体地，优选地用任选地与佐剂混合的所述多肽(抗原)免疫非人动物至少2次，更优选3次。“佐剂”是非特异性的免疫应答刺激剂。佐剂可以是包含以下组分中任一种或两种的组合物的形式：(a)设计成形成保护(多种)抗原不被迅速代谢的储剂的物质(例如，矿物油、明矾、氢氧化铝、脂质体或表面活性剂(如普朗尼克多元醇(pluronic polyol)))；和(b)非特异性地刺激进行免疫的宿主动物的免疫应答(如，通过增加其中淋巴因子水平)的物质。
如本文所用，“癌症”是指以体内异常细胞不可控生长为特征的一大类疾病。不受调节的细胞分裂会导致形成恶性肿瘤或细胞，其侵入相邻组织，并可以通过淋巴系统或血流转移至身体的远部。
癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非NSCLC、神经胶质瘤、胃肠癌、肾癌(如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、子宫颈癌、胃癌(stomachcancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌和头颈癌(或肿瘤)、胃癌(gastric cancer)、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤、黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤，如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门区癌症、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症，包括石棉诱导的癌症、病毒相关癌症(例如人乳头瘤病毒(HPV)相关肿瘤)和源自两种主要血细胞谱系中任一种的血液恶性肿瘤(两种主要血细胞谱系即髓细胞系(其产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴样细胞系(其产生B、T、NK和浆细胞))，比如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，如急性、慢性、淋巴细胞性和/或骨髓性白血病，比如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、未分化AML(MO)、成骨髓细胞性白血病(Ml)、成骨髓细胞性白血病(M2；细胞成熟)、早幼粒细胞性白血病(M3或M3变体[M3V])、骨髓单核细胞性白血病(M4或嗜酸性粒细胞增多的M4变体[M4E])、单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、成巨核细胞性白血病(M7)、分离的粒细胞肉瘤和绿色癌；淋巴瘤，比如霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、间变性(例如Ki 1+)大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管中心淋巴瘤、肠T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞性淋巴瘤、T淋巴母细胞性淋巴瘤；和淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后、淋巴增生性疾病、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、成淋巴细胞性淋巴瘤(LBL)、淋巴样谱系血液系统肿瘤、急性成淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt's)淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(也称为蕈样真菌病或塞扎里(Sezary)综合征)和具有Waldenstrom巨球蛋白血症的淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)；骨髓瘤，比如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、郁积性骨髓瘤(也称为无痛性骨髓瘤)、单发性、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛发细胞淋巴瘤；骨髓系血液细胞肿瘤、间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸胎瘤、中枢和外周神经肿瘤，包括星形细胞瘤、神经鞘瘤；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和其它肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎瘤、淋巴样谱系血液细胞肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞疾病，比如T前淋巴细胞性白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑形细胞类型；大颗粒淋巴细胞性白血病(LGL)，优选T细胞类型；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形和免疫母细胞性亚型)；血管中心(鼻)T细胞淋巴瘤；头或颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓性淋巴瘤，以及上述癌症的任何组合。本文所述方法还可用于治疗转移性癌症、难治性癌症(如，用先前的免疫疗法例如用阻断CTLA-4或PD-1或PD-L1的抗体难治的癌症)和复发性癌症。
术语“受试者”旨在包括活的生物体。受试者的实例包括哺乳动物，如人、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人动物。然而，受试者(动物)可以是比如鸟类或鱼类的非哺乳动物。在本发明的一些优选实施方案中，所述受试者是人，而在另一些其它优选实施方案中，所述受试者可以是农场动物，其中所述农场动物可以是哺乳动物或非哺乳动物。此类非哺乳动物的实例是鸟类(比如鸡、鸭、鹅或火鸡的禽类)、鱼类(例如在鲑鱼、鳟鱼或罗非鱼等水产养殖中养殖的鱼类)或甲壳类动物(比如虾或对虾)。哺乳动物(牲畜)的实例包括山羊；绵羊；牛；马；猪；或驴。其它哺乳动物包括例如猫、狗、小鼠和兔子。在说明性实施方案中，将本发明的聚合物囊泡用于上述农场动物(哺乳动物类农场动物和非哺乳动物类农场动物(鸟类、鱼类、甲壳类动物))的疫苗接种或免疫接种，以抵抗病毒感染(对此参见实施例部分)。因此，在这种情况下，本发明的聚合物囊泡中可以在其中包封可溶性病毒全长蛋白或病毒全长蛋白的可溶性片段。
当用于人或非人动物的疫苗接种时，本发明的聚合物囊泡或包含聚合物囊泡的组合物可仅溶解在合适的(药学上可接受的)缓冲液(比如磷酸盐缓冲盐水(PBS)或0.9％生理盐水溶液(0.90％w/v NaCl的等渗溶液，摩尔渗透压浓度为308mOsm/L))中口服施用于相应的受试者(也参见实施例部分)。聚合物囊泡可以进一步与佐剂混合。如果口服施用，佐剂可以帮助保护聚合物囊泡对抗胃中的酸性环境。此类佐剂可以是水可混溶的或能够形成水-油乳剂，比如水包油乳液或油包水乳剂。此类佐剂的示例性实例是水包油乳剂、油包水乳剂、单磷酰脂A和/或海藻糖棒杆菌分枝菌酸二酯(trehalose dicorynomycolate)，其中所述油优选包含矿物油、二甲硅油、司盘80、角鲨烯或其组合、基本上由其组成或由其组成。其它说明性实例是单磷酰脂A(如来自明尼苏达沙门氏菌)、海藻糖棒杆菌分枝菌酸二酯(trehalose dicorynomycolate)或其混合物，其可以是水包油(如角鲨烯)乳剂形式。所述乳剂可以包含乳化剂(如聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯80)。可选地，可以通过比如采用天然聚合物的包衣来修饰聚合物囊泡，或也可以将聚合物囊泡配制在天然聚合物的颗粒或合成聚合物的颗粒中，所述天然聚合物比如海藻酸或壳聚糖，所述合成聚合物比如聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(d,l-乳酸-共-羟基乙酸)(PLGA)、聚(g-谷氨酸)(g-PGA)[31,32]或聚(乙二醇)(PEG)。这些颗粒可以是微米范围内的颗粒(“宏珠”)或纳米颗粒，或掺入到宏珠中的纳米颗粒，所有这些都是本领域熟知的。参见例如，Hari等人，“Chitosan/calcium–alginate beads for oral delivery of insulin”,Applied Polymer Science,Volume59,Issue11,14March 1996,1795-1801；Sosnik“Alginate Particles as Platform forDrug Delivery by the Oral Route:State-of-the-Art”ISRN Pharmaceutics Volume2014,Article ID 926157的综述；Machado等人，Encapsulation of DNA in Macroscopicand Nanosized Calcium Alginate Gel Particles”,Langmuir 2013,29,15926-15935；国际专利申请WO 2015/110656；Liang Zhao等人的综述“Nanoparticle vaccines”Vaccine32(2014)327-337)或Li等人，“Chitosan-Alginate Nanoparticles as a Novel DrugDelivery System for Nifedipine”Int J Biomed Sci vol.4no.3September 2008,221-228。在这些聚合物囊泡和口服制剂的示例性实施方案中，用于疫苗接种的聚合物囊泡具有包封于其中的病毒抗原，所述病毒抗原包括流感血凝素、猪流感血凝素、口蹄疫(FMD)病毒蛋白(比如VP1，VP2或VP3外壳蛋白(VP1外壳蛋白包含FMD病毒体的主要抗原决定簇，因此其序列的改变应是该病毒的高抗原变异性的原因))、卵清蛋白(OVA)、SPIKE蛋白(比如猪流行性腹泻(PED)病毒SPIKE蛋白)、人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白(比如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白)。从包含流感血凝素或口蹄疫(FMD)病毒蛋白(比如VP1、VP2或VP3外壳蛋白)的可溶性部分的聚合物囊泡的使用可以明显地看出，病毒性疾病可以影响包括鸟类和哺乳动物在内的任何动物，其中哺乳动物还可以是人。
术语“有效剂量”或“有效量”定义为足以实现或至少部分实现所需效果的量。术语“治疗有效剂量”定义为在已经患有疾病的患者中足以治愈或至少部分阻止疾病及其并发症的量。有效用于该用途的量将取决于感染的严重程度和受试者自身免疫系统的一般状态。术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人和其它哺乳动物受试者。
抗体或其抗原结合部分的合适剂量或治疗有效量将取决于待治疗的病状、病状的严重程度、先前疗法和患者的临床病史和对治疗剂的反应。可以根据主治医师的判断来调整适当的剂量，使得可以一次或经一系列给药将其给予患者。药物组合物可以作为唯一的治疗剂施用或根据需要与另外的疗法联合施用。
如果药物组合物已经被冻干，则在施用之前首先将冻干的材料重构于合适的液体中。冻干的材料可以在如抑菌注射用水(BWFI)、生理盐水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)或与蛋白质在冻干前所处的制剂相同的制剂中重构。
注射用药物组合物可以以单位剂型存在，如在安瓿或多剂量容器中，其中加入防腐剂。此外，已经开发了多种最近的药物递送方法，本发明的药物组合物适于使用这些新方法施用，如Inject-ease、Genject、比如Genen的注射器笔和比如MediJector和BioJector的无针装置。本发明的药物组合物也可以适用于有待发现的施用方法。还参见Langer,1990,Science,249:1527-1533。
可以将药物组合物制备为用于鼻腔内或吸入施用，例如局部施用至呼吸道和/或肺。用于物质的吸入施用的手段和装置是本领域技术人员熟知的，例如为在WO 94/017784A和Elphick等，(2015)Expert Opin Drug Deliv,12,1375-87中公开的那些。这些手段和装置包括喷雾器、定量吸入器、粉末吸入器和鼻喷剂。适于引导药物或疫苗的吸入施用的其它手段和装置也是本领域熟知的。优选地向呼吸道和/或肺的局部施用途径是通过气雾剂吸入。在例如Patton,J.S.，等(2004)Proc.Amer.Thoracic Soc.,1,338-344中给出了关于肺部药物递送(即经由雾化器的吸入(其也可以用在经鼻腔的施用中)或气管内滴入)的综述。喷雾器可用于从溶液中产生气溶胶，而定量吸入器、干粉吸入器等可有效产生小颗粒气溶胶。因此，可以将药物组合物配制成气雾剂(混合物)、喷雾剂、粉雾剂(mist)或粉末的形式。
针对粘膜病原体(比如呼吸道冠状病毒，如SARS-CoV-2、MERS或SARS-CoV1)的药物组合物应在系统和粘膜水平上赋予持续的保护性免疫。因此，优选地将本发明的药物组合物制备为用于粘膜施用，比如吸入或鼻腔内施用。如实施例14所示，冠状病毒疫苗的鼻腔内施用不仅能够引发粘膜免疫应答，而且能够引发系统性免疫应答。还优选地将本发明的药物组合物制备为用于系统性施用，比如肌内施用。
喷雾器是一种用于以吸入肺部的粉雾形式施用药物的药物递送装置。不同类型的喷雾器是本领域技术人员已知的，包括射流式喷雾器、超声波喷雾器、振动网筛技术和软雾吸入器。一些喷雾器提供连续的雾化溶液流，即，无论受试者是否从其吸入，它们将在长时间段内提供连续的雾化，而其它的喷雾器是呼吸致动的，即，受试者仅在从其吸入时获得一些剂量。可以将本发明的疫苗，特别是用于人致病性冠状病毒感染(如MERS、COVID-19或SARS)的疫苗，配制以用于喷雾器中，配制为包含在喷雾器中或配制为通过使用喷雾器施用。
定量吸入器(MDI)是一种以液体雾化药物的短脉冲形式将特定量的药物递送到肺部的装置。这种定量吸入器通常由三个主要部件组成；包含待施用的制剂的筒、允许每次致动时分配计量数量的制剂的计量阀、以及允许患者操作该装置并将液体气溶胶导入患者肺中的致动器(或接口)。可以将本发明的疫苗，特别是用于人致病性冠状病毒感染(如MERS、COVID-19或SARS)的疫苗配制以用于MDI中，配制为包含在MDI中，特别是包含在MDI的筒中，或配制为通过使用MDI施用。
干粉吸入器(DPI)是一种以干粉形式将药物递送到肺部的装置。干粉吸入器是基于气雾剂的吸入器的替代物，例如定量吸入器。通常将药物保持在用于手动装载的胶囊中或位于吸入器内部的专有泡罩包装中。可以将本发明的疫苗，特别是用于人致病性冠状病毒感染(如MERS、COVID-19或SARS)的疫苗配制以用于DPI中，配制为包含在DPI中，特别是包含在MDI的胶囊或泡罩包装中，或配制为通过使用MDI施用。
一种可以用于鼻腔施用的鼻喷雾剂，通过其可以将药物经由鼻子吹入体腔。可以将本发明的疫苗，特别是用于人致病性冠状病毒感染(如MERS、COVID-19或SARS)的疫苗配制为鼻喷雾剂、配制为包含在鼻喷雾剂瓶中或配制为作为鼻喷雾剂来施用。
药物组合物也可以配制成贮库(depot)制剂。这样的长效制剂可以通过植入(例如皮下、植入韧带或肌腱、滑膜下或肌内)、滑膜下注射或肌内注射来施用。因此，例如，制剂可以用合适的聚合或疏水材料(例如，作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂改性，或者改性成难溶衍生物，例如，改性成难溶盐。
药物组合物也可以是许多种用于给药的常规贮库形式，以提供反应性组合物。这些包括，例如，固体、半固体和液体剂型，比如液体溶液或悬浮液、浆液、凝胶、乳膏、香脂(balm)、乳液剂、洗剂、粉剂、喷雾剂、泡沫、糊剂、油膏、药膏(salve)、香脂和滴剂。
如果需要，药物组合物可以存在于小瓶、包装或分配器装置中，其可以含有一个或多个包含活性成分的单位剂型。在一个实施方案中，分配器装置可以包括注射器，该注射器具有单一剂量的注射备用的液体制剂。注射器可以随附施用说明书。
药物组合物可以进一步包括其它的药学上可接受的组分。其它药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，比如Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中描述的那些也可以包括在本文所述的蛋白质制剂中，只要它们不会对制剂的所需特性产生不利影响即可。如本文所用，“药学上可接受的载体”意指与药物施用相容的任何和全部溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂。将这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，其包括：另外的缓冲剂；防腐剂；助溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；螯合剂，如EDTA；金属络合物(如锌-蛋白质络合物)；可生物降解的聚合物，比如聚酯；成盐的抗衡离子，比如钠、多元糖醇；氨基酸，比如丙氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、2-苯基丙氨酸和苏氨酸；糖或糖醇，比如乳糖醇、水苏糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌醇糖、肌醇、半乳糖、半乳糖醇、甘油、环醇(如肌醇)、聚乙二醇；含硫的还原剂，比如谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、[α]-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量蛋白质，比如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或其它免疫球蛋白；和亲水性聚合物，比如聚乙烯吡咯烷酮。
本文所述的制剂在对有此需要的患者中用作药物组合物，用于治疗和/或预防本文所述的病理性医学状况。术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防止性措施。治疗包括将制剂应用于或施用于来自具有疾病/病症、疾病/病症的症状或者易患疾病/病症的倾向的患者的身体、分离的组织或细胞，目的在于治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、好转或影响疾病、疾病症状或易患疾病的倾向。
如本文所用，术语“治疗”和“处理”是指向受试者施用治疗有效量的根据本发明的药物组合物。“治疗有效量”是指足以治疗或减轻疾病或病症、延迟疾病发作或在疾病的治疗或管理中提供任何治疗益处的药物组合物或抗体的量。
如本文所用，术语“预防”是指药剂用于预防疾病或病症的发作的用途。“预防有效量”定义了足以预防疾病发作或复发的活性成分或药剂的量。
如本文所用，术语“病症”和“疾病”可互换使用，指受试者的病状。特别地，术语“癌症”与术语“肿瘤”可互换地使用。
本发明的试剂盒通常将包括上述容器和一个或多个包含从商业和用户角度而言所需的材料的其他容器，上述材料包括缓冲剂、稀释剂、滤器、针头、注射器和带有使用说明书的包装插页。
在本上下文中，术语“脂质体”是指具有至少一个脂质双层的球形囊泡。
在本上下文中，术语“核内体”是指真核细胞内部的膜结合隔室(即液泡)，通过内吞作用摄入的物质被递送至该处。
在本上下文中，术语“晚期核内体”是指由早期核内体通过较低的管腔pH和不同的蛋白质组成而分化的前溶酶体内吞细胞器。晚期核内体比早期核内体更呈球形，并且大多为近核的，集中在微管组织中心附近。
在本上下文中，术语“T辅助细胞”(也称为TH细胞或“效应CD4(+)T细胞”)是指在免疫学过程中协助其它白细胞的T淋巴细胞，包括进入浆细胞的B细胞和记忆B细胞的成熟，和细胞毒性T细胞和巨噬细胞的活化。这些细胞也被称为“CD4(+)T细胞”，因为它们在其表面表达CD4糖蛋白。当在抗原呈递细胞(APC)表面表达的MHC II类分子将例如肽抗原呈递给辅助T细胞时，辅助T细胞被激活。
如本文所用，术语“自身抗原”是指一个生物体的任何分子或化学基团，其作为抗原在另一生物体中诱导抗体形成，但是亲本生物体的健康免疫系统对其耐受。
如本文所用，术语“％同一性”是指当使用任选的序列比对(如可获自www.clustal.org的ClustalW或X技术或者等同的技术所示例)时序列内对应位置处相同氨基酸残基的百分比。因此，比对两个序列(参照序列和目标序列)，识别两个序列之间相同的氨基酸残基，将相同氨基酸的总数量除以氨基酸的总数量(氨基酸长度)。该除法的结果是百分比数值，即，同一性值/程度百分比。
本发明的免疫方法可以在允许其适当折叠的合成环境中采用全长可溶性包封抗原(如蛋白)或该蛋白的片段来实施，并由此在体内分离出能够检测到相应抗原(如膜蛋白)的抗体的概率会更高。此外，可以在不了解膜蛋白结构的情况下进行免疫和抗体的产生，而当采用基于肽的免疫方法时则可能需要了解膜蛋白的结构。
此外，相比于其它技术，本发明的方法可以快速且经济地生产包封在氧化稳定的膜环境中的膜蛋白。
在一些方面，本发明涉及一种用于在受试者中引发针对抗原(如免疫原)的免疫应答的方法。所述方法可包括向受试者施用一种组合物，该组合物包含具有两亲性聚合物的膜(如周向膜)的本发明的聚合物囊泡。该组合物进一步包括由本发明的聚合物囊泡的两亲性聚合物的膜包封的可溶性抗原。该免疫原可以是膜相关蛋白。在一些其他方面，本发明的聚合物囊泡包含脂质聚合物。施用可以任何合适的方式进行，例如口服施用、局部施用、呼吸道局部施用、肺部局部施用、吸入施用、鼻腔内施用或注射。
根据所需的应答水平，本领域技术人员可以确定并调整施用(如口服施用或注射)的频率。例如，可将本发明的聚合物囊泡每周一次或每两周一次(如口服地或通过注射)施用于受试者，该受试者可包括哺乳动物。通过针对本发明的聚合物囊泡包封的抗原的初始量定量哺乳动物中抗体的血浓度水平(效价)来测量免疫应答(参见实施例部分)。
聚合物囊泡的结构可包括自组装成囊泡形式并包封各种抗原(如，可溶性蛋白等)的两亲性嵌段共聚物，所述各种抗原通过溶剂再水化、直接分散或自发的自组装方法而被包封(如，如本文所述的实施例1)。
在本发明的上下文中，本文所用术语“可溶性抗原”意指能够溶解或液化的抗原。作为示例性实例，可溶性抗原可以由膜蛋白的胞外和/或胞内区的氨基酸组成。然而，可溶性抗原也可以包含来自膜蛋白的胞外和/或胞内区的氨基酸以及属于该膜蛋白的跨膜区的一个或多个氨基酸，只要该抗原仍然能够被溶解或液化即可。作为示例性实例，SEQ ID NO:43的MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段是本发明含义内的可溶性抗原，而其包含一个属于跨膜区的氨基酸(1297位)。然而，可以设想可溶性抗原优选缺失至少一部分跨膜区或整个跨膜区。术语“可溶性抗原”包括通过去污剂或其他试剂的作用而被“增溶”的抗原(尤其是在水中)，所述增溶即使抗原变得可溶或更可溶。本发明的示例性非限制性可溶性抗原包括：源自蛋白质的非可溶性部分的多肽、变得可溶的用于包封的疏水性多肽以及可作为聚集体可溶的聚集多肽。
在一些方面，借助于去污剂、表面活性剂、温度改变或pH改变来使本发明的抗原(如，膜蛋白)增溶。由两亲性嵌段共聚物提供的囊泡结构允许抗原(如膜蛋白)以生理学上正确和功能性的方式折叠，从而允许目标哺乳动物的免疫系统检测到所述抗原，由此产生强的免疫应答。
在一些方面，本发明的组合物的注射可包括腹膜内、皮下或静脉、肌内或无创给药。在一些其它方面，本发明的组合物的注射可以包括皮内注射。
在一些其它方面，可以通过在包含本发明的聚合物囊泡的组合物中包含佐剂来进一步提高或增强免疫应答水平。佐剂可以是包封的佐剂或非包封的佐剂。佐剂可以与本发明的聚合物囊泡或组合物混合。佐剂可以是可溶于水的或可以是水-油乳液的形式。在这方面，可以将聚合物囊泡和佐剂同时施用于受试者。
在一些方面，本发明的聚合物囊泡的嵌段共聚物或两亲性聚合物既非免疫刺激剂也非佐剂。
在一些其它方面，本发明的聚合物囊泡的嵌段共聚物或两亲性聚合物为免疫刺激剂和/或佐剂。
在另一些方面，本发明的聚合物囊泡是免疫原性的。
在又一些方面，本发明的聚合物囊泡是非免疫原性的。
在一些方面，佐剂可以与包含本发明的聚合物囊泡的本发明的组合物的施用分开施用。可以在施用包含包封了本发明的抗原的聚合物囊泡的组合物之前、同时或之后施用佐剂。例如，可以在注射包含包封了本发明的抗原的聚合物囊泡的组合物之后向受试者注射佐剂。在一些方面，可以将佐剂与抗原一起包封在聚合物囊泡中。在其它优选的方面，将佐剂包封在单独的聚合物囊泡中，意味着佐剂与抗原单独包封，因此抗原包封在第一种聚合物囊泡中，而佐剂包封在第二种聚合物囊泡中。在此应注意，可以将佐剂和聚合物囊泡包封在由相同的两亲性聚合物形成的聚合物囊泡中。参见本申请的实施例7至9或14或18，其中相应的抗原和作为示例性佐剂的CpG寡脱氧核苷酸(例如，CpG ODN1826:5’-tccatgacgttcctgacgtt-3’,SEQ ID NO:18或CpG ODN 2007:5’-TCGTCGTTGTCGTTTTGTCGTT-3’,SEQ ID NO:63)均被包封在BD21聚合物囊泡中。或者，用于包封抗原的两亲性聚合物可以不同于用于包封佐剂的两亲性聚合物囊泡。作为单纯的示例性实例，抗原可以包封在BD21聚合物囊泡中，而佐剂可以包封在PDMS12-PEO46或PDMS47PEO36聚合物囊泡中。
可以将任意已知的佐剂用于本发明中且本领域技术人员将容易认识并了解，待注射的佐剂的类型取决于用于引发免疫应答的待使用的抗原的类型。佐剂可以是细菌、病毒或真菌来源的抗原。佐剂可以是核酸，比如CpG寡脱氧核苷酸(也称为“CpG ODN”或本文也称为“CpG”)，CpG分子是来自细菌的天然寡核苷酸，其含有未甲基化的CpG二核苷酸，特别是本上下文的序列(CpG基序)。相比于哺乳动物DNA，这些CpG基序以20倍更高的频率存在于细菌DNA中。CpG ODN由Toll样受体9(TLR9)识别(其导致强的免疫刺激作用)并且可广泛地商购获得。市售CpG ODN的示例性实例包括ODN 2006，其是一种具有序列TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT(SEQ ID NO:62，从Miltenyi Biotech以目录号130-100-106商购可获得)的24mer；ODN 2007，其是一种具有序列5’-TCGTCGTTGTCGTTTTGTCGTT-3’(SEQ IDNO:63)的22mer；前文所述的ODN 1826，其是一种具有序列5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’(SEQ ID NO:18)的20mer；或ODN 2216，一种具有序列5’-GGGGGACGA:TCGTCGGGGGG-3’(SEQID NO:64)的20mer，后三种都可从InvivoGen获得。作为天然DNA分子，碱基通过磷酸二酯键(PO4)连接在一起。然而，这种键易于被核酸酶降解。当在没有任何保护性元素(element)情况下用作佐剂时，天然CpG分子在体内的半衰期非常短。为了避免这种短的半衰期，可以通过将氧原子之一改变为硫原子而将磷酸二酯键用硫代磷酸酯键替代。这种置换防止了核酸酶的降解并延长了修饰的CpG的半衰期。例如，以具有完整的硫代磷酸酯骨架形式提供CpG分子ODN2006、ODN 2007或ODN 1826以使它们具有核酸酶抗性。或者，将CpG包封在阳离子脂质体中以避免核酸酶的降解。在本发明中，除了CpG以外，可以将许多其它广泛使用的Toll样受体激动剂，比如聚肌苷：聚胞苷酸(聚(I:C))(TLR3)、脂多糖(LPS)(TLR4)、单磷酰基脂(MPL)(TLR5)用作一种或多种佐剂。此外。来源于细菌和分枝杆菌细胞壁的组分，例如存在于Sigma佐剂系统或弗氏佐剂中的组分，或诸如匙孔血蓝蛋白(KLH)的蛋白是也可用于本发明的佐剂的进一步示例性实例。可用于本发明的合适佐剂的其它示例性实例包括Sigma佐剂系统(SAS)或西甲硅油或α-生育酚。其它抗原-佐剂对也适用于本发明的方法。
在本上下文中，如本文所用的术语“佐剂”不限于修饰其它药剂的作用(如，如上所述的佐剂那样)的药理学或免疫学药剂，而是意指“刺激免疫系统的作用的任何物质”。因此，刺激免疫系统的作用的检查点抑制剂也涵盖在本文所用术语佐剂的含义内。例如，存在于细胞表面上的PD-L1结合免疫细胞表面上的PD1，其抑制免疫细胞活性。因此，例如，结合PD-1或PD-L1并阻断PD1与PD-L1的相互作用的抗体是“这样的阳性检查点抑制剂”，因为它们可以允许T细胞攻击肿瘤。
在一些方面，在本发明中用作抗原的膜蛋白可包括片段或跨膜蛋白的胞外结构域。抗原还可以是(全长)跨膜蛋白、G蛋白偶联受体、神经递质受体、激酶、孔蛋白、ABC转运蛋白、离子转运蛋白、乙酰胆碱受体和细胞粘附受体。膜蛋白也可以与标签融合或偶联，或者也可以是无标签的。如果膜蛋白带有标签，则该标签可以例如选自众所周知的亲和标签，比如VSV、His-标签、
Figure BDA0003571213200000491
Flag-标签、Intein-标签或GST-标签，或高亲和力结合对的配偶体，比如生物素或抗生物素蛋白，或选自标记，比如荧光标记、酶标记、NMR标记或同位素标记。
在一些方面，膜蛋白或其片段(或部分)可在包封之前呈现，或在通过无细胞表达系统产生蛋白的同时被包封。无细胞表达系统可以是体外转录和翻译系统。
无细胞表达系统也可以是真核的无细胞表达系统，比如基于兔网织红细胞、小麦胚芽提取物或昆虫提取物的TNT系统，可以是原核的无细胞表达系统或古老的无细胞表达系统。
可在体内产生本发明的抗原或其片段(或部分)。可以例如在细菌或真核宿主生物体中产生抗原或其片段(或部分)，然后将其从该宿主生物体或其培养物中分离。也可以例如通过使用体外翻译系统在体外产生抗原或其片段(或部分)。优选的表达系统是杆状病毒表达系统。杆状病毒蛋白表达系统的使用经常被忽视，因为它被认为是缓慢且昂贵的。然而，杆状病毒系统的主要优点之一是可以不依赖于病毒而产生和维持细胞系。鉴于MERS-CoV和SARS-CoV-1等病毒序列的快速变化，这允许快速产生新的亚基抗原，而无需获得对作为有用工具的新细胞系的监管批准。此外，杆状病毒系统产生与已经显示增强免疫应答的哺乳动物系统相比具有新的糖基化特征的抗原。例如，SARS-CoV-1和MERS-CoV的纤突蛋白的完全可溶性(S1-S2)结构域都可以在Sf9细胞中表达。无论这些蛋白是单独给予，还是与明矾Matrix M1佐剂一起，这些蛋白一旦免疫进入Balb/c小鼠均显示了高病毒中和效价，并且这种中和可持续至少45天。因此，本发明的抗原优选使用真核宿主细胞，优选昆虫细胞，如Sf9细胞，或优选使用杆状病毒表达系统产生。
如上所述，聚合物囊泡可以由两亲性的二嵌段或三嵌段共聚物形成。在各个方面，两亲性聚合物可包括羧酸、酰胺、胺、烯属烃(alkylene)、二烷基硅氧烷、醚或亚烷基硫化物(alkylene sulfide)的至少一个单体单元。
在一些方面，两亲性聚合物可以是选自如下的聚醚嵌段：低聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧乙烯)嵌段、低聚(氧丙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段、低聚(氧丁烯)嵌段和聚(氧丁烯)嵌段。可包含在聚合物中的嵌段的其它实例包括但不限于：聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸甲酯)、聚苯乙烯、聚(丁二烯)、聚(2-甲基噁唑啉)、聚(二甲基硅氧烷)、聚(ε-己内酯)、聚(丙烯硫醚)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(2-乙烯基吡啶)、聚(甲基丙烯酸2-(二乙氨基)乙酯)、聚(甲基丙烯酸2-(二异丙基氨基)乙酯)、聚(2-甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱、聚(异戊二烯)、聚(异丁烯)、聚(乙烯-共-丁烯)和聚(乳酸)。合适的两亲性聚合物的实例包括但不限于：聚(乙基乙烯)-b-聚(氧化乙烯)(PEE-b-PEO)、聚(丁二烯)-b-聚(氧化乙烯)(PBD-b-PEO)、聚(苯乙烯)-b-聚(丙烯酸)(PS-PAA)、聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(本文称为PDMS-PEO)也称为聚(二甲基硅氧烷-b-氧化乙烯)、聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMA-PAA)、聚(2-甲基噁唑啉)-b-聚(二甲基硅氧烷)-b-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-bPDMS-bPMOXA)(包括例如三嵌段共聚物，比如May等人2013年使用的PMOXA20-PDMS54-PMOXA20(ABA))、聚(2-甲基噁唑啉)-b-聚(二甲基硅氧烷)-b-聚(氧化乙烯)(PMOXA-b-PDMS-b-PEO)、聚(氧化乙烯)-b-聚(硫化丙烯)-b-聚(氧化乙烯)(PEO-b-PPS-b-PEO)和聚(氧化乙烯)-聚(氧化丁烯)嵌段共聚物。可以进一步通过共聚物中包含的各嵌段的平均嵌段长度来确定嵌段共聚物。因此，PBMPEON表示存在长度为M的聚丁二烯嵌段(PB)和长度为N的聚氧化乙烯(PEO)嵌段。M和N独立地选自整数，例如可选自约6至约60范围内的整数。因此，PB35PEO18表示存在平均长度为35的聚丁二烯嵌段和平均长度为18的聚氧化乙烯嵌段。在一些方面，PB-PEO二嵌段共聚物包含5-50个嵌段PB和5-50个嵌段PEO。类似地，PB10PEO24表示存在平均长度为10的聚丁二烯嵌段和平均长度为24的聚氧化乙烯嵌段。可以用在本发明中的合适的PB-PEO二嵌段共聚物的示例性实例包括二嵌段共聚物PBD21-PEO14(其也可商购获得)和[PBD]21-[PEO]12(参见WO2014/077781A1和Nallani等人，2011)。作为进一步的实例，EOBp表示存在长度为O的氧化乙烯嵌段(E)和长度为P的丁二烯嵌段(B)。因此，O和P独立地选自整数，如选自约10至约120范围内的整数。因此，E16E22表示存在平均长度为16的氧化乙烯嵌段和平均长度为22的丁二烯嵌段。
对于用于形成本发明的聚合物囊泡的另一优选的嵌段共聚物，聚(二甲基硅氧烷-b-氧化乙烯)(PDMS-PEO)，应注意，线性和梳型PDMS-PEO均可用在本文中(参见，Gaspard等人，“Mechanical Characterization of Hybrid Vesicles Based on Linear Poly(Dimethylsiloxane-b-Ethylene Oxide)and Poly(Butadiene-b-Ethylene Oxide)BlockCopolymers”Sensors 2016,16(3),390，其描述了由PDMS-PEO形成的聚合物囊泡)。
线性PDMS-PEO的结构如以下式(I)所示：
Figure BDA0003571213200000521
而梳型PDMS-PEO的结构如以下式(II)所示：
Figure BDA0003571213200000522
按照结构式(I)，用语“PDMSn-PEOm”表示存在长度为n的聚二甲基硅氧烷(PDMS)嵌段和长度为m的聚氧化乙烯(PEO)嵌段。m和n独立地选自整数，它们中的每一个均可例如选自约5或约6至约100、约5至约60、或约6至约60、或约5至50范围内的整数。例如，可以从Polymer Source Inc.,Dorval(Montreal)Quebec,Canada商购获得比如PDMS12-PEO46或PDMS47PEO36的线性PDMS-PEO。因此，PDMS-PEO嵌段共聚物可包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PEO、6-100个嵌段PDMS和6-100个嵌段PEO、5-100个嵌段PDMS和5-60个嵌段PEO或5-60个嵌段PDMS和5-60个嵌段PEO。
根据以上所述，本发明一方面涉及一种在受试者中引发免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用携带抗原的由PDMS-PEO形成的聚合物囊泡。该抗原可以以任何合适的方式与PDMS-PEO聚合物囊泡关联/物理连接。例如，PDMS-PEO聚合物囊泡可具有如本发明所述的包封于其中的可溶性抗原。可选地或另外地，聚合物囊泡可具有如WO2014/077781A1中所述的整合至/引入至该聚合物囊泡的周向膜中的抗原。在该种情况下，抗原是一种以其(一个或多个)跨膜结构域整合到PDMS-PEO聚合物囊泡的周向膜中的膜蛋白。遵循如WO2014/077781A1或Nallani等人，"Proteopolymersomes:in vitro production of amembrane protein in polymersome membranes",Biointerphases,1December 2011,153页中所述可以实现上述整合。若抗原是包封在PDMS-PEO聚合物囊泡中的，则其可以是选自如下的可溶性抗原：多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。本发明进一步涉及一种用于生产由PDMS-PEO形成的其中包封抗原的聚合物囊泡的方法以及涉及由所述方法生产的聚合物囊泡。
本发明进一步涉及组合物，所述组合物包含携带抗原的PDMS-PEO聚合物囊泡。此外，在这些组合物中，抗原可以以任何合适的方式与PDMS-PEO聚合物囊泡关联/物理连接。例如，PDMS-PEO聚合物囊泡可具有如本发明所述的包封于其中的可溶性抗原。可选地或另外地，聚合物囊泡可具有如WO2014/077781A1中所述的整合至/引入至该聚合物囊泡的周向膜中的抗原。本发明还涉及包含此类携带抗原的PDMS-PEO聚合物囊泡的疫苗、引发免疫应答的方法、用于治疗、改善、预防或诊断癌症、自身免疫性疾病或感染性疾病的方法，此类方法包括向有此需要的受试者提供携带抗原的PDMS-PEO聚合物囊泡。
根据以上所述，本发明还涉及以适于引发免疫应答的方式在体外或体内应用携带(或转运)抗原的PDMS-PEO聚合物囊泡。抗原可以包封在PDMS-PEO聚合物囊泡内，或例如如WO2014/077781A1中所述引入至该聚合物囊泡的周向膜中。
另一优选的嵌段共聚物是聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)。PDMS-PAA可以是PDMSM-PAAN，其表示存在长度为M的聚(二甲基硅氧烷)(PDMS)嵌段和长度为N的聚(丙烯酸)(PAA)嵌段。M和N是独立地选自整数，其可以例如选自约5至约100的范围内的整数，并且表示嵌段的平均长度。PDMS-PAA优选包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PAA。优选地，PDMS-PAA包含5-50个、优选10-40个PDMS嵌段和/或5-30个、优选地5-25个、优选5-20个PAA嵌段。PDMS-PAA优选选自PDMS30-PAA14、PDMS15-PAA7或PDMS34-PAA16。
在一些方面，本发明的聚合物囊泡可包含一个或多个隔室(或称为“多隔室”)。聚合物囊泡的囊泡结构的隔室化允许活细胞中的复杂的反应途径共存在并且有助于提供细胞内的许多活动在空间和时间上的分离。因此，本发明的聚合物囊泡可以包封多于一种类型的抗原。不同的抗原可具有相同或不同的同种型。每个隔室也可以由相同或者不同的两亲性聚合物形成。在各方面中，将两种或更多种不同的抗原整合到两亲性聚合物的周向膜内。每个隔室可包封肽、蛋白质和核酸中的至少一种。所述肽、蛋白质、多核苷酸或碳水化合物可以是免疫原性的。
在WO20121018306中可以找到合适的多隔室化的聚合物囊泡的进一步细节，该申请的全部内容以引用的方式并入本文以用于全部目的。
聚合物囊泡也可以是独立的或固定在表面上，比如WO2010/1123462中描述的那些，该申请的全部内容以引用的方式并入本文以用于全部目的。
若聚合物囊泡载体包含多于一个的隔室，则该隔室可包含外部嵌段共聚物囊泡和至少一个内部嵌段共聚物囊泡，其中所述至少一个内部嵌段共聚物囊泡被包封在外部嵌段共聚物囊泡的内部。在一些方面，所述外部囊泡和所述内部囊泡的嵌段共聚物中的每一个包括聚醚嵌段，比如聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段和聚(氧丁烯)嵌段。可包含在共聚物中的嵌段的其他实例包括但不限于：聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸甲酯)、聚苯乙烯、聚(丁二烯)、聚(2-甲基噁唑啉)、聚(二甲基硅氧烷)、聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)、聚(ε-己内酯)、聚(丙烯硫醚)、聚(N-异丙基丙烯酰胺)、聚(2-乙烯基吡啶)、聚(甲基丙烯酸2-(二乙氨基)乙酯)、聚(甲基丙烯酸2-(二异丙基氨基)乙酯)、聚(2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱)和聚(乳酸)。合适的外部囊泡和内部囊泡的实例包括但不限于：聚(乙基乙烯)-b-聚(氧化乙烯)(PEE-b-PEO)、聚(丁二烯)-b-聚(氧化乙烯)(PBD-b-PEO)、聚(苯乙烯)-b-聚(丙烯酸)(PS-b-PAA)、聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-b-PCL)、聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-b-PLA)、聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-b-PEO)、聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-b-PEO)、聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-b-PNIPAm)、聚(乙二醇)-聚(硫化丙烯)(PEG-b-PPS)、聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)、聚(甲基苯基硅烷)-聚(氧化乙烯)(PMPS-b-PEO-b-PMPS-b-PEO-b-PMPS)、聚(2-甲基噁唑啉)-b-聚-(二甲基硅氧烷)-b-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-b-PDMS-b-PMOXA)、聚(2-甲基噁唑啉)-b-聚(二甲基硅氧烷)-b-聚(氧化乙烯)(PMOXA-b-PDMS-b-PEO)、聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-b-PIAT)、聚(氧化乙烯)-b-聚(硫化丙烯)-b-聚(氧化乙烯)(PEO-b-PPS-b-PEO)和聚(氧化乙烯)-聚(氧化丁烯)(PEO-b-PBO)嵌段共聚物。可以进一步通过共聚物中包含的各嵌段的平均长度来确定嵌段共聚物。因此，PSMPIATN表示存在具有M个重复单元的聚苯乙烯(PS)嵌段和具有N个重复单元的聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)(PIAT)嵌段。因此，M和N独立地选自整数，例如可选自约5至约95范围内的整数。因此，PS40PIAT50表示存在具有平均40个重复单元的PS嵌段和具有平均50个重复单元的PIAT嵌段。
在一些方面，本发明的聚合物囊泡包括脂质，其优选地与嵌段共聚物或两亲性聚合物混合。与嵌段共聚物或两亲性聚合物的量相比，脂质的含量通常较低。一般而言，脂质是形成聚合物囊泡膜的组分(百分数按重量计给出)的至多约50％、至多约45％、至多约40％、至多约35％、至多约30％、至多约20％、至多约15％、至多约10％、至多约5％、至多约2％、至多约1％、至多约0.5％、至多约0.2％、至多约0.1％。脂质的添加可以提高包封效率。脂质可以是合成脂质、天然脂质、脂质混合物或合成和天然脂质的组合。脂质的非限制性实例是磷脂，如磷脂酰胆碱，如POPC、卵磷脂、脑磷脂或磷脂酰肌醇，或包含磷脂(比如大豆磷脂，如asolectin)的脂质混合物。脂质的其它非限制性实例包括胆固醇、硫酸胆固醇、1,2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)。脂质优选地是非抗原性的。在一些方面，本发明的聚合物囊泡包含少于约20％、少于约15％、少于约10％、少于约5％、少于约2％、少于约1％、少于约0.5％、少于约0.2％、少于约0.1％或基本上不含皂苷(百分数按重量计给出)。
在一些方面，本发明涉及一种用于生产其中包封抗原的聚合物囊泡的方法，所述方法包括：i)将本发明的两亲性聚合物溶解在氯仿中，优选地，所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)；ii)使所述溶解的两亲性聚合物干燥以形成聚合物膜；iii)向步骤ii)的所述干燥的两亲性聚合物膜添加增溶的抗原，其中所述抗原选自：(a)多肽；优选地所述多肽为根据本发明所述的抗原；(b)碳水化合物；(c)a)和/或b)和/或c)的组合；iv)使步骤iii)的所述聚合物膜再水化以形成聚合物囊泡；v)任选地，过滤步骤iv)的聚合物囊泡以纯化聚合物囊泡单分散囊泡；和/或vi)任选地，使步骤iv)或v)的所述聚合物囊泡与未包封的抗原相分离。
在一些其它方面，本发明涉及用于生产其中包封抗原的聚合物囊泡的其它方法，包括基于将聚合物的非水性溶液在抗原的水性溶液中混合、将相应的聚合物和抗原的混合溶液进行声波处理或挤压相应的聚合物和抗原的混合溶液的方法。示例性方法包括在Rameez等人，Langmuir 2009和Neil等人，Langmuir 2009,25(16),9025–9029中描述的那些方法。
与现有的摄取和交叉呈递媒介以及基于其的方法相比，本发明的聚合物囊泡特别提供了以下优点，这些优点也是本发明的一些方面：
-聚合物囊泡在摄取及交叉呈递至免疫系统方面非常有效；
-免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答；
-聚合物囊泡是氧化稳定的；
-与在具有或不具有佐剂的情况下通过基于游离抗原的技术产生的体液应答相比，体液应答更强；
-使用佐剂甚至仍可以进一步增强由本发明的聚合物囊泡诱导的免疫应答；
-本发明的聚合物囊泡的聚合物本质上是坚固(robust)的，并且可经过定制或功能化以增加其在体内循环的时间；
-在血清组分存在下本发明的聚合物囊泡是稳定的；
-聚合物囊泡的聚合物价格低廉且合成迅速；
-与在具有或不具有佐剂的情况下基于游离抗原的技术相比，采用本发明的聚合物囊泡通过本发明的方法引发免疫应答所需的抗原量更少。
本发明的特征还在于以下项目：
1、一种聚合物囊泡(如氧化稳定的聚合物囊泡)，所述聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
2、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述引发为体内、离体或体外引发。
3、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、和SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。
4、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中在血清组分存在下所述聚合物囊泡是稳定的，优选地，所述稳定为体内、离体或体外稳定。
5、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡在核内体内部是稳定的，优选地，所述稳定为体内、离体或体外稳定。
6、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中与脂质体的相应的氧化稳定性相比，所述聚合物囊泡具有改进的氧化稳定性，优选地，所述改进的稳定性为体内、离体或体外改进的稳定性。
7、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够以不依赖于氧化的方式释放其包含所述可溶性包封抗原的内容物并触发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。
8、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
9、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够引发细胞和/或体液免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
10、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述体液免疫应答包含特异性抗体的产生，进一步优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
11、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强效应CD4(+)T细胞的频率，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。
12、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述细胞免疫应答包含T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
13、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中与游离抗原相比，所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的克隆扩增，优选地，所述扩增为体内、离体或体外扩增。
14、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够诱导抗原特异性效应CD8(+)T细胞，优选地，所述诱导为体内、离体或体外诱导。
15、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的细胞毒性表型，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。
16、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够靶向淋巴结驻留性巨噬细胞和/或B细胞，优选地，所述靶向为体内、离体或体外靶向。
17、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡为还原稳定的，优选地，在血清组分存在下所述聚合物囊泡是还原稳定的，进一步优选地，所述还原稳定为体内、离体或体外还原稳定。
18、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡具有降低的渗透性，优选地，所述降低的渗透性是与脂质体的相应的渗透性相比较的，进一步优选地，所述渗透性为体内、离体或体外渗透性。
19、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够在核内体内部释放其内容物，优选地，所述核内体为晚期核内体，进一步优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。
20、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡能够进行如下的一种或多种：
i)引发细胞免疫应答；优选地，所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答；进一步优选地，所述细胞免疫应答为CD8(+)T细胞介导的免疫应答；最优选地，所述细胞免疫应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步最优选地，所述细胞免疫应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ii)在核内体内部释放聚合物囊泡内容物，优选地，所述核内体为晚期核内体；进一步优选地，所述内容物包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，最优选地，所述内容物包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)以不依赖于氧化的方式释放聚合物囊泡内容物并触发CD8(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述内容物包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述内容物包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iv)刺激对所述抗原的免疫应答；优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
v)触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoVSPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vi)将肽或蛋白递送至抗原呈递细胞(APC)；优选地，所述肽或蛋白包含或衍生自流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述肽或蛋白包含或衍生自多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vii)触发免疫应答，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
viii)在受试者中刺激免疫应答；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ix)免疫非人动物；优选地，所述免疫针对流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述免疫针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
x)与在不具有所述聚合物囊泡的情况下所述抗原的相应的抗原性相比，所述聚合物囊泡具有改变的抗原性；优选地，所述抗原为流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原为多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
xi)与在不具有所述聚合物囊泡的情况下所述抗原的相应的免疫原性相比，所述聚合物囊泡具有改变的免疫原性；优选地，所述免疫原为流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述免疫原为多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。
21、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡具有以下性质的一种或多种：
i)所述聚合物囊泡包含氧化稳定的膜；和/或
ii)所述聚合物囊泡是合成的；和/或
iii)所述聚合物囊泡不含未包封的抗原或与游离的未包封的抗原混合；和/或
iv)所述聚合物囊泡包含两亲性聚合物的膜；和/或
v)所述聚合物囊泡包含形成囊泡膜的两亲性合成嵌段共聚物；和/或
vi)所述聚合物囊泡的直径大于70nm，其中优选地，所述直径在约100nm至约1μm的范围内、或约120nm至约250nm的范围内、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内；和/或
vii)所述聚合物囊泡具有囊泡形态；
viii)所述聚合物囊泡是自组装的。
22、根据项目21所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡为聚合物囊泡的集合的形式，其中所述聚合物囊泡的集合的平均直径在约100nm至约1μm的范围内、或约100nm至约750nm的范围内、或约100nm至约500nm、或约120nm至约250nm、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。
23、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原为免疫原。
24、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：i)自身抗原，ii)非自身抗原，iii)非自身免疫原和iv)自身免疫原。
25、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：
i)多肽，所述多肽与病毒多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述病毒多肽序列为流感血凝素或猪流感血凝素，进一步优选地，所述病毒多肽序列选自：SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；
ii)多肽，所述多肽与细菌多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)多肽，所述多肽与哺乳动物或禽类多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列为卵清蛋白(OVA)，与SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性的多肽，进一步优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列选自：SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ IDNO:65。
26、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述哺乳动物多肽序列选自人、啮齿类动物、兔和马多肽序列。
27、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原为抗体或其片段。
28、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自：
i)流感血凝素(HA)，优选地，选自：SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQID NO:8；
ii)猪流感血凝素(HA)，优选地，为SEQ ID NO:6；
iii)卵清蛋白(OVA)，优选地，为SEQ ID NO:4；
iv)纤突蛋白，比如猪流行性腹泻病毒(PED)，纤突蛋白或人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白，比如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白，优选地，为SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQID NO:65；
v)B16肽，优选地，选自：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；
vi)MC38肽，优选地，选自：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；
vii)B16和MC38肽，优选地，所述肽独立地选自：i)SEQ ID NO:1-3和ii)SEQ IDNO:9-11。
29、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡选自阳离子聚合物囊泡、阴离子聚合物囊泡、非离子聚合物囊泡及它们的混合物。
30、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的；优选地，所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为非免疫原性的或非抗原性的。
31、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述嵌段共聚物或两亲性聚合物是氧化稳定的。
32、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述嵌段共聚物或所述两亲性聚合物既非免疫刺激剂也非佐剂。
33、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物。
34、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N-乙烯吡咯烷酮)-b-PLA。
35、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物包含羧酸、酰胺、胺、烯属烃、二烷基硅氧烷、醚或亚烷基硫化物的至少一个单体单元。
36、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为选自如下的聚醚嵌段：低聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧乙烯)嵌段、低聚(氧丙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段、低聚(氧丁烯)嵌段和聚(氧丁烯)嵌段。
37、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PB-PEO)二嵌段共聚物。
38、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述PB-PEO二嵌段共聚物包含5-50个嵌段PB和5-50个嵌段PEO。
39、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(PDMS-PEO)二嵌段共聚物，其中优选地，所述PB-PEO二嵌段共聚物优选包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PEO。
40、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡可仅包含嵌段共聚物或两亲性聚合物或包含嵌段共聚物或两亲性聚合物与脂质的混合物。
41、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述脂质包含合成脂质或天然脂质或合成脂质和天然脂质的脂质混合物或组合。
42、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(丙交酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PLA-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PLA-PEO/POPC具有50:50及以上(如50/50或75/25或90/10)的PLA-PEO与POPC(如PLA-PEO/POPC)的比率。
43、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚(己内酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PCL-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PCL-PEO/POPC具有50:50及以上(如50/50或75/25或90/10)的PCL-PEO与POPC(如PCL-PEO/POPC)的比率。
44、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)或聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(PDMS-PEO)二嵌段共聚物或聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)二嵌段共聚物。
45、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含二嵌段共聚物PBD21-PEO14(下文称为“BD21”)、PDMS47-PEO36(PDMS-PEO)或三嵌段共聚物PMOXA12-PDMS55-PMOXA12。
46、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含一个或多个隔室。
47、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含一个或多个隔室，其中所述一个或多个隔室中的每一个均包封至少一种肽、蛋白和核酸，优选地，所述肽、蛋白和核酸中的至少一种为免疫原性或抗原性的，进一步优选地，所述一个或多个隔室中的每一个均由相同或不同的两亲性聚合物组成。
48、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含多于一个隔室，其中所述隔室包含外部嵌段共聚物囊泡和至少一个内部嵌段共聚物囊泡，其中所述至少一个内部嵌段共聚物囊泡被包封在所述外部嵌段共聚物囊泡的内部，优选地，所述外部嵌段共聚物囊泡为由独立地选自以下的共聚物形成的聚合物囊泡：
i)聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-PIAT)，
ii)聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PBD-PEO)，
iii)聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-PCL)，
iv)聚(乙基乙烯)-聚(氧化乙烯)(PEE-PEO)，
v)聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-PLA)，
vi)聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-PEO)，
vii)聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-PEO)，
viii)聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-PNIPAm)，
ix)聚(苯乙烯)-聚(丙烯酸)(PS-PAA)，
x)聚(乙二醇)-聚(硫化丙烯)(PEG-PPS)，
xi)聚(2-甲基噁唑啉)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-PDMS-PMOXA)，
xii)聚(氧化乙烯)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PEO-PDMS-PMOXA)，
xiii)聚(甲基苯基硅烷)-聚(氧化乙烯)(PMPS-PEO-PMPS-PEO-PMPS)；和
xiv)聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)；
进一步优选地，所述至少一个内部嵌段共聚物囊泡为由独立地选自以下的共聚物形成的聚合物囊泡：
xv)聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-PIAT)，
xvi)聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PBD-PEO)，
xvii)聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-PCL)，
xviii)聚(乙基乙烯)-聚(氧化乙烯)(PEE-PEO)，
xix)聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-PLA)，
xx)聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-PEO)，
xxi)聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-PEO)，
xxii)聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-PNIPAm)，
xxiii)聚(苯乙烯)-聚(丙烯酸)(PS-PAA)，
xxiv)聚(乙二醇)-聚(硫化丙烯)(PEG-PPS)，
xxv)聚(2-甲基噁唑啉)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-PDMS-PMOXA)，
xxvi)聚(氧化乙烯)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PEO-PDMS-PMOXA)，
xxvii)聚(甲基苯基硅烷)-聚(氧化乙烯)(PMPS-PEO-PMPS-PEO-PMPS),和
xxviii)聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)。
49、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡包含脂质聚合物。
50、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡，其中所述聚合物囊泡进一步包含包封的佐剂。
51、一种用于生产其中包封抗原的聚合物囊泡的方法，所述方法包括：
i)将两亲性聚合物溶解在氯仿中，优选地，所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)；
ii)使所述溶解的两亲性聚合物干燥以形成聚合物膜；
iii)向步骤ii)的所述干燥的两亲性聚合物膜添加增溶的抗原，其中所述抗原选自：
a)多肽；优选地，所述多肽抗原为前述项目中的任一项所述，进一步优选地，所述多肽抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，最优选地，所述多肽抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
b)碳水化合物；
c)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
d)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；
iv)使步骤iii)的所述聚合物膜再水化以形成聚合物囊泡；
v)任选地，过滤步骤iv)的聚合物囊泡以纯化聚合物囊泡单分散囊泡；和/或
vi)任选地，使步骤iv)或v)的所述聚合物囊泡与未包封的抗原相分离。
52、根据前述项目中任一项所述的用于生产其中包封抗原的聚合物囊泡的方法，其中所述聚合物囊泡为前述项目中任一项所述的聚合物囊泡。
53、通过根据前述项目中任一项所述的生产其中包封抗原的聚合物囊泡的方法生产的聚合物囊泡。
54、一种组合物，其包含根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡。
55、根据前述项目中任一项所述的组合物，其中所述组合物为药物或诊断组合物。
56、根据前述项目中任一项所述的组合物，其中所述组合物为免疫原性、抗原性或免疫治疗性组合物。
57、根据前述项目中任一项所述的组合物，其进一步包含一种或多种免疫刺激剂和/或一种或多种佐剂。
58、根据前述项目中任一项所述的组合物，其中所述组合物为疫苗。
59、根据前述项目中任一项所述的组合物，其被配制为用于皮内、腹膜内、肌内、皮下、静脉注射或粘膜表面的无创给药。
60、分离的抗原呈递细胞或杂交瘤细胞，其被暴露于前述项目中任一项所述的聚合物囊泡或组合物。
61、根据前述项目中任一项所述的抗原呈递细胞，其中所述抗原呈递细胞包含树突状细胞。
62、根据前述项目中任一项所述的抗原呈递细胞，其中所述抗原呈递细胞包含巨噬细胞。
63、根据前述项目中任一项所述的抗原呈递细胞，其中所述抗原呈递细胞包含B-细胞。
64、一种疫苗，其包含前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞或杂交瘤，和进一步包含药学上可接受的赋形剂或载体。
65、根据前述项目中任一项所述的疫苗，其中：
i)所述抗原包含流感血凝素(HA)，其中所述疫苗为流感疫苗，优选地，所述流感血凝素(HA)与选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的多肽具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ii)所述抗原包含猪流感血凝素(HA)，其中所述疫苗为猪流感疫苗，优选地，所述猪流感血凝素(HA)与SEQ ID NO:6具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)所述抗原包含卵清蛋白(OVA)，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述卵清蛋白(OVA)与SEQ ID NO:4具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iv)所述抗原包含SPIKE蛋白(PEDv S)，其中所述疫苗为PED疫苗，优选地，所述猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白(S蛋白)与SEQ ID NO:12-14具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
v)所述抗原包含B16肽，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述肽选自：SEQ IDNO:9-11；
vi)所述抗原包含MC38肽，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述肽选自：SEQ IDNO:1-3；
vii)所述抗原包含B16和MC38肽，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述肽独立地选自：i)SEQ ID NO:1-3和ii)SEQ ID NO:9-11；
viii)所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；其中所述疫苗为癌症疫苗；
ix)所述抗原包含人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白，比如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白，其与选自SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；其中所述疫苗为针对诸如MERS-CoV、SARS-CoV-2或SARS-CoV-1的人致病性冠状病毒的疫苗。
66、一种试剂盒，其包含前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗。
67、一种在受试者(如人)中引发免疫应答的方法，所述方法包括：
i)向所述受试者提供根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗，
ii)向所述受试者施用所述聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗，优选地，所述施用为皮内、腹膜内、肌内、皮下、静脉注射或粘膜表面的无创给药。
68、根据前述项目中任一项所述的引发免疫应答的方法，其中所述免疫应答为广泛的免疫应答。
69、根据前述项目中任一项所述的引发免疫应答的方法，其中所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答。
70、一种用于在有此需要的受试者(如人)中治疗或预防感染性疾病、癌症或自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗，优选地，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病。
71、一种用于免疫非人动物的方法，所述方法包括如下步骤：
i)提供前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗；
ii)用所述聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗免疫所述非人动物。
72、一种用于制备抗体的方法，所述方法包括：
i)用前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗免疫非人动物；
ii)分离步骤(i)得到的抗体。
73、根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体(mAb)。
74、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗，其用作药物。
75、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗，其用在如下方法的一种或多种中：
i)用在抗体发现和/或筛选和/或制备的方法中；
ii)用在疫苗发现和/或筛选和/或制备的方法中；
iii)用在生产或制备免疫原性或免疫刺激剂组合物的方法中；
iv)用在靶向递送蛋白质和/或肽的方法中，优选地，所述靶向递送为靶向递送根据前述项目中任一项所述的抗原性蛋白和/或肽；进一步优选地，所述抗原性蛋白和/或肽包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，最优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；再进一步最优选地，所述靶向递送在受试者中实施；
v)用在刺激对抗原的免疫应答的方法中，优选地，所述抗原为前述项目中任一项所述，进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分；进一步最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；进一步最优选地，其用于在受试者中刺激对所述抗原的免疫应答；
vi)用在触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护的方法中，优选地，用在触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护的方法中，所述免疫应答针对前述项目中任一项所述的抗原；进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分；最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ IDNO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vii)用在将肽和/或蛋白递送至前述项目中任一项所述的抗原呈递细胞(APC)的方法中；优选地，所述肽和/或蛋白为前述项目中任一项所述的抗原；进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分；最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
viii)用在触发免疫应答的方法中，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述应答针对前述项目中任一项所述的抗原；进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分；更进一步优选地，所述应答针对抗原，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ix)用在用于治疗、改善、预防或诊断感染性疾病的方法中，优选地，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病；进一步优选地，所述病毒感染性疾病选自：流感病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、疱疹病毒感染；
x)用在用于治疗、改善、预防或诊断癌症或自身免疫性疾病的方法中；
xi)用在用于使癌细胞对化学疗法敏感的方法中；
xii)用在用于在癌细胞中诱导凋亡的方法中；
xiii)用在用于在受试者中刺激免疫应答的方法中；
xiv)用在用于免疫非人动物的方法中；
xv)用在用于制备杂交瘤的方法中；
xvi)用在根据前述项目中任一项所述的方法中；
xvii)用在根据前述i)-xvi)中任一项所述的方法中，其中所述方法为体内和/或离体和/或体外方法；
xviii)用在根据前述i)-xvii)中任一项所述的方法中，其中所述抗原对所述抗原使用的环境而言是异源的。
76、根据前述项目中任一项所述的聚合物囊泡、组合物、抗原呈递细胞、杂交瘤或疫苗用于以下的一种或多种的用途：
i)用于抗体发现和/或筛选和/或制备；
ii)用于疫苗发现和/或筛选和/或制备；
iii)用于免疫原性或免疫刺激剂组合物的生产或制备；
iv)用于蛋白质和/或肽的靶向递送，优选地，所述靶向递送为抗原性蛋白和/或肽的靶向递送；进一步优选地，所述靶向递送在受试者中实施；
v)用于刺激对抗原的免疫应答，优选地，用于在受试者中刺激对抗原的免疫应答；
vi)用于触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护；
vii)用于将肽或蛋白递送至抗原呈递细胞(APC)；优选地，所述肽或蛋白为抗原，进一步优选地，所述肽或蛋白为免疫原性的或免疫治疗性的；
viii)用于触发免疫应答，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；
ix)在用于治疗、改善、预防或诊断感染性疾病的方法中，优选地，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病；进一步优选地，所述病毒感染性疾病选自：流感病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、疱疹病毒感染；
x)用于治疗、改善、预防或诊断癌症或自身免疫性疾病；
xi)用于使癌细胞对化学疗法敏感；
xii)用于在癌细胞中诱导凋亡；
xiii)用于在受试者中刺激免疫应答；
xiv)用于免疫非人动物；
xv)用于制备杂交瘤；
xvi)在根据前述项目中任一项所述的方法中；
xvii)用于根据前述i)-xvi)中任一项所述的用途，其中所述用途为体内和/或离体和/或体外用途；
xviii)用于根据前述i)-xvii)中任一项所述的用途，其中所述抗原对所述抗原使用的环境而言是异源的。
77、一种在受试者中引发免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用携带抗原的由PDMS-PEO形成的聚合物囊泡。
78、根据项目77所述的方法，其中所述抗原被包封在所述PDMS-PEO聚合物囊泡中。
79、根据项目78所述的方法，其中包封在所述PDMS-PEO聚合物囊泡中的抗原为可溶性抗原。
80、根据项目79所述的方法，其中所述抗原选自多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。
81、根据项目77所述的方法，其中将所述抗原整合至所述PDMS-PEO聚合物囊泡的周向膜中。
82、一种携带抗原的PDMS-PEO聚合物囊泡。
83、根据项目82所述的聚合物囊泡，其中所述抗原被包封在所述PDMS-PEO聚合物囊泡中。
84、根据项目83所述的聚合物囊泡，其中包封在所述PDMS-PEO聚合物囊泡中的抗原为可溶性抗原。
85、根据项目84所述的聚合物囊泡，其中所述抗原选自多肽、碳水化合物、多核苷酸以及它们的组合。
86、根据项目85所述的聚合物囊泡，其中将所述抗原整合至所述PDMS-PEO聚合物囊泡的周向膜中。
87、根据项目86所述的聚合物囊泡，其中所述抗原为膜相关蛋白或脂质抗原。
88、根据项目87所述的聚合物囊泡，其中所述膜相关蛋白选自跨膜蛋白、G蛋白偶联受体、神经递质受体、激酶、孔蛋白、ABC转运蛋白、离子转运蛋白、乙酰胆碱受体和细胞粘附受体。
89、一种药物组合物，其包含项目82至88中任一项所述的聚合物囊泡。
90、根据项目82至88中任一项所定义的PDMS-PEO或项目89所述的药物组合物用于引发免疫应答的体外和体内用途。
91、一种聚合物囊泡，优选项目1-50中任一项的聚合物囊泡用于引发免疫应答的用途，所述聚合物囊泡包含可溶性包封抗原、直径为约120nm或更大，其中所述可溶性包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；或
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
92、根据项目91所述的用途，其中所述聚合物囊泡的直径在约120nm至约1μm、或约140nm至约750nm、或约120nm至约500nm、或约140nm至约250nm、约120nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。
93、一种聚合物囊泡的集合、优选地为项目1至50中任一项所述的聚合物囊泡的集合用于引发免疫应答的用途，所述聚合囊泡的平均直径为约120nm或更大，所述集合的聚合物囊泡包含可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；或
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
94、根据项目93所述的用途，其中所述聚合物囊泡的集合的平均直径在约120nm至约1μm、或约120nm至约750nm、或约120nm至约500nm、或约120nm至约250nm、约120nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。
95、项目91至94中任一项所述的用途，其中所述受试者针对病毒感染进行疫苗接种。
96、项目91至95中任一项所述的用途，其中所述聚合物囊泡或聚合物囊泡的集合通过选自以下的施用途径施用：口服施用、鼻腔内施用、施用于粘膜表面、吸入、皮内施用、腹膜内施用、皮下施用、静脉内施用和肌肉内施用。
97、根据项目91至96中任一项所述的用途，其中所述受试者是哺乳动物，包括人或非哺乳动物。
98、根据项目97所述的用途，其中所述受试者是哺乳动物，并且针对选自癌症、病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种。
99、根据项目98所述的用途，其中所述受试者是人，且针对冠状病毒感染进行疫苗接种。
100、根据项目99所述的用途，其中所述冠状病毒是人致病性的。
101、根据项目99或100所述的用途，其中所述冠状病毒是β-冠状病毒。
102、根据项目99-101中任一项所述的用途，其中所述冠状病毒是Sarbecovirus或Merbecovirus。
103、20.根据项目99所述的用途，其中所述冠状病毒是MERS-CoV、SARS-CoV-2或SARS-CoV-1。
104、根据项目97所述的用途，其中所述受试者是非哺乳动物，并且针对选自病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种。
105、根据项目104所述的用途，其中非哺乳动物是鸟类(如家禽，比如鸡、鸭、鹅或火鸡)、鱼类或甲壳类动物。
106、根据项目105所述的用途，其中所述鸟类为鸡、鸭、鹅或火鸡。
107、根据项目105所述的用途，其中鱼类为鲑鱼、鳟鱼或罗非鱼。
108、根据项目105所述的用途，其中甲壳类动物是虾、对虾或螃蟹。
109、根据项目97所述的用途，其中哺乳动物是山羊、绵羊、牛或猪。
110、根据项目109所述的用途，其中所述动物是猪，并且所述动物针对猪流行性腹泻病毒进行疫苗接种。
111、根据项目109所述的用途，其中所述动物是有蹄的动物，并且针对口蹄疫病毒进行疫苗接种。
本发明的特征还在于以下实施方案。
1、一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。
2、根据实施方案1所述的方法，其中，通过将所述抗原包封在所述第一聚合物囊泡群中、通过将所述抗原整合到所述第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述抗原经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述抗原经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述抗原与所述第一聚合物囊泡群关联。
3、根据实施方案1或2所述的方法，其中，通过将所述佐剂包封在所述第二聚合物囊泡群中、通过将所述佐剂整合到所述第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述佐剂经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述佐剂经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述佐剂与所述第二聚合物囊泡群关联。
4、根据实施方案2或3所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的抗原，并且所述第二聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的佐剂。
5、根据实施方案2或3所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有通过共价键或非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面的抗原，并且其中所述第二聚合物囊泡群具有通过共价键或非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面的佐剂。
6、根据实施方案2或3所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有整合到所述聚合物囊泡的周向膜内的抗原，并且其中所述第二聚合物囊泡群具有整合到所述聚合物的周向膜内的佐剂。
7、根据实施方案2或3所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的抗原，和所述第二聚合物囊泡群具有通过共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面的佐剂。
8、根据实施方案2或3所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有通过共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面的抗原，和所述第二聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的佐剂。
9、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中将所述第一聚合物囊泡群和所述第二聚合物囊泡群同时(在相同时间)或在不同时间施用于受试者。
10、根据实施方案9所述的方法，其中同时施用第一聚合物囊泡群和第二聚合物囊泡群包括一起施用(共同施用)两种聚合物囊泡群或单独施用两种聚合物囊泡群中的每一种。
11、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中分别地制备所述两种聚合物囊泡群。
12、根据实施方案11所述的方法，其中在施用前将所述两种聚合物囊泡群混合在一起。
13、根据实施方案1至12中任一项所述的方法，其中所述两种聚合物囊泡群通过选自以下的施用途径施用：口服施用、鼻腔内施用、施用于粘膜表面、吸入、皮内施用、腹膜内施用、皮下施用、静脉内施用和肌肉内施用。
14、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物，包括人或非哺乳动物。
15、根据实施方案14所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物并且针对选自癌症、病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种。
16、根据实施方案15所述的方法，其中所述受试者是人并且针对冠状病毒感染进行疫苗接种。
17、根据实施方案16所述的方法，其中所述冠状病毒是人致病性的。
18、根据实施方案16或17所述的方法，其中所述冠状病毒是β-冠状病毒。
19、根据实施方案16-18中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒是Sarbecovirus或Merbecovirus。
20、根据实施方案19所述的方法，其中所述冠状病毒是MERS-CoV、SARS-CoV-2或SARS-CoV-1。
21、根据实施方案14所述的方法，其中所述受试者是非哺乳动物，并且针对选自病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种。
22、根据实施方案21所述的方法，其中所述非哺乳动物是鸟类(如家禽，比如鸡、鸭、鹅或火鸡)、鱼类或甲壳类动物。
23、根据实施方案21所述的方法，其中所述鸟类是鸡、鸭、鹅或火鸡。
24、根据实施方案21所述的方法，其中所述鱼类是鲑鱼、鳟鱼或罗非鱼。
25、根据实施方案1621所述的方法，其中所述甲壳类动物是虾、对虾或螃蟹。
26、根据实施方案14所述的方法，其中所述哺乳动物是山羊、绵羊、牛或猪。
27、根据实施方案26所述的方法，其中所述动物是猪并且所述动物针对猪流行性腹泻病毒进行疫苗接种。
28、根据实施方案26所述的方法，其中所述动物是有蹄动物，并且所述动物针对口蹄疫病毒进行疫苗接种。
29、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述包封抗原是可溶性抗原或增溶的抗原。
30、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗原，优选地所述可溶性抗原或增溶的包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
31、根据实施方案14所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群和/或第二聚合物囊泡群是包含可溶性包封抗原或包封佐剂的氧化稳定的聚合物囊泡，或其中所述第一聚合物囊泡群和/或第二聚合物囊泡群是包含可溶性包封抗原或包封佐剂的氧化敏感的聚合物囊泡。
32、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中酰胺部分；和/或ii)仲胺部分；和/或iii)1,2,3-三唑部分，优选地，所述1,2,3-三唑部分为1,4-二取代的[1,2,3]三唑部分或1,5-二取代的[1,2,3]三唑部分；和/或iv)吡唑啉部分；和/或vi)酯部分；vii)氨基甲酸酯和/或碳酸酯部分。
33、根据实施方案32所述的方法，其中通过使存在于所述聚合物囊泡的外表面上的反应性基团与所述抗原或佐剂的反应性基团反应而形成将所述抗原或佐剂缀合到所述第一和/或第二聚合物囊泡群的外表面的共价键。
34、根据实施方案33所述的方法，其中所述共价键选自：i)甲酰胺键；ii)1,4-二取代的[1,2,3]三唑部分或1,5-二取代的[1,2,3]三唑部分；iii)取代的吡唑啉键。
35、根据实施方案34所述的方法，其中：i)存在于聚合物囊泡外表面上的反应性基团是醛基和所述抗原或佐剂的反应性基团是胺基，从而形成甲酰胺基；或ii)存在于所述聚合物囊泡的外表面上的反应性基团是炔基和所述抗原或佐剂的反应性基团是叠氮基，从而形成1,2,3-三唑基，优选地，经由铜或钌催化的叠氮化物-炔烃环加成，进一步优选地，所述1,2,3-三唑为1,4-二取代的或1,5-二取代的；或者iii)存在于所述聚合物囊泡的外表面上的反应性基团是甲基丙烯酸酯-和/或羟基基团和所述抗原或佐剂的反应性基团为四唑基团，从而形成所述吡唑啉基团，优选地，所述吡唑啉基团的形成包括腈亚胺中间体。
36、根据实施方案35所述的方法，其中所述甲酰胺键已进一步与还原剂反应以形成仲胺。
37、根据实施方案32至36中任一项所述的方法，其中经由连接子部分形成所述共价键。
38、根据实施方案37所述的方法，其中所述连接子部分L为肽连接子或直链或支链的基于烃的连接子。
39、根据实施方案37或38所述的方法，其中所述连接子部分包含1至约550个主链原子、1至约500个主链原子、1至约450个主链原子、1至约350个主链原子、1至约300个主链原子、1至约250个主链原子、1至约200个主链原子、1至约150个主链原子、1至约100个主链原子、1至约50个主链原子、1至约30个主链原子、1至约20个主链原子、1至约15个主链原子，或1至约12个主链原子，或1至约10个主链原子，其中所述主链原子是任选地被一个或多个选自N、O、P和S的杂原子替换的碳原子。
40、根据实施方案37至39中任一项所述的方法，其中所述连接子部分包含将所述连接子部分整合到所述聚合物囊泡的膜中的膜锚定结构域。
41、根据实施方案40所述的方法，其中所述膜锚定结构域包含脂质。
42、根据实施方案41所述的方法，其中所述脂质为磷脂或糖脂。
43、根据实施方案42所述的方法，其中所述糖脂包括糖基磷脂酰肌醇(GPI)。
44、根据实施方案42所述的方法，其中所述磷脂为鞘磷脂或甘油磷脂。
45、根据实施方案44所述的方法，其中所述鞘磷脂包括与聚乙二醇(PEG)缀合的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺[DSPE](DSPE-PEG)或基于胆固醇的缀合物。
46、根据实施方案45所述的方法，其中所述DSPE-PEG包含2至约500个氧化乙烯单元。
47、根据实施方案32至46中任一项所述的方法，其中所述连接子在生理条件下是不可水解的和/或不可氧化的。
48、根据实施方案2至47中任一项所述的方法，其中整合到所述聚合物囊泡的周向膜内的抗原是膜相关蛋白或脂质抗原。
49、根据实施方案48所述的方法，其中所述膜相关蛋白包含跨膜蛋白的胞外片段或结构域。
50、根据实施方案48或49所述的方法，其中所述膜相关蛋白是跨膜蛋白、G蛋白偶联受体、神经递质受体、激酶、孔蛋白、ABC转运蛋白、离子转运蛋白、乙酰胆碱受体或细胞粘附受体。
51、根据实施方案48至50中任一项所述的方法，其中所述脂质抗原是合成脂质或天然脂质。
52、根据实施方案2至51中任一项所述的方法，其中用于将所述抗原和/或所述佐剂缀合至所述第一聚合物囊泡群和/或所述第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的外表面的非共价键包括选自以下的结合对：链霉亲和素和生物素、抗生物素蛋白和生物素、链霉亲和素和链霉亲和素结合肽、以及抗生物素蛋白和抗生物素蛋白结合肽，或者所述非共价键是静电相互作用。
53、根据实施方案1至52中任一项所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群和所述第二聚合物囊泡群包含相同的至少一种两亲性聚合物或由相同的至少一种两亲性聚合物形成。
54、根据实施方案1至52中任一项所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群和所述第二聚合物囊泡群包含不同的至少一种两亲性聚合物或由不同的至少一种两亲性聚合物形成。
55、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合体群是氧化稳定的。
56、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群和/或所述第二聚合物囊泡群的施用能够引发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述引发为体内、离体或体外引发。
57、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述包封抗原包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQID NO:14、SEQ ID NO:43-46、和SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。
58、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述包封抗原包含病毒SPIKE蛋白的片段，其中所述片段包含SPIKE蛋白的S1部分、SPIKE蛋白的S2部分、SPIKE蛋白的S1部分和S2部分的组合、SPIKE蛋白的受体结合结构域(RBD)或其组合，基本上由其组成或由其组成。59、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中在血清组分存在下所述第一和/或第二聚合物囊泡群是氧化稳定的，优选地，所述氧化稳定为体内、离体或体外氧化稳定。
60、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群在核内体内部是稳定的，优选地，所述稳定为体内、离体或体外稳定。
61、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与脂质体的相应的氧化稳定性相比，所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有改进的氧化稳定性，优选地，所述改进的稳定性为体内、离体或体外改进的稳定性。
62、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够以不依赖于氧化的方式释放其包含所述可溶性包封抗原的内容物并触发CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。
63、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够引发细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
64、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够引发细胞和/或体液免疫应答，其中所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答，优选地，免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
65、根据实施方案64所述的方法，其中所述体液免疫应答包含特异性抗体的产生，进一步优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
66、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够增强效应CD4(+)T细胞的频率，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。
67、根据实施方案64所述的方法，其中所述细胞免疫应答包含T细胞介导的免疫应答，优选地，所述免疫应答为体内、离体或体外免疫应答。
68、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中与游离抗原相比，所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的克隆扩增，优选地，所述扩增为体内、离体或体外扩增。
69、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够诱导抗原特异性效应CD8(+)T细胞，优选地，所述诱导为体内、离体或体外诱导。
70、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够增强抗原特异性CD8(+)T细胞的细胞毒性表型，优选地，所述增强为体内、离体或体外增强。
71、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够靶向淋巴结驻留性巨噬细胞和/或B细胞，优选地，所述靶向为体内、离体或体外靶向。
72、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群为还原稳定的，优选地，在血清组分存在下所述第一和/或第二聚合物囊泡群是还原稳定的，进一步优选地，所述还原稳定为体内、离体或体外还原稳定。
73、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有降低的渗透性，优选地，所述降低的渗透性是与脂质体的相应的渗透性相比较的，进一步优选地，所述渗透性为体内、离体或体外渗透性。
74、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够在核内体内部释放其内容物，优选地，所述核内体为晚期核内体，进一步优选地，所述释放为体内、离体或体外释放。
75、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群能够进行如下的一种或多种：
i)引发细胞免疫应答；优选地，所述细胞免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答；进一步优选地，所述细胞免疫应答为CD8(+)T细胞介导的免疫应答；最优选地，所述细胞免疫应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步最优选地，所述细胞免疫应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ii)在核内体内部释放聚合物囊泡内容物，优选地，所述核内体为晚期核内体；进一步优选地，所述内容物包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，最优选地，所述内容物包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)以不依赖于氧化的方式释放聚合物囊泡内容物并触发CD8(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述内容物包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述内容物包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iv)刺激对所述抗原的免疫应答；优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
v)触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ IDNO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vi)将肽或蛋白递送至抗原呈递细胞(APC)；优选地，所述肽或蛋白包含或衍生自流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoVSPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述肽或蛋白包含或衍生自多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vii)触发免疫应答，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、卵清蛋白(OVA)、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:43-46、SEQ IDNO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
viii)在受试者中刺激免疫应答；优选地，所述应答针对流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述应答针对多肽，所述多肽与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ IDNO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ix)免疫非人动物；优选地，所述免疫针对流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述免疫针对多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
x)与在不具有所述聚合物囊泡的情况下所述抗原的相应的抗原性相比，所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有改变的抗原性；优选地，所述抗原为流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原为多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
xi)与在不具有所述聚合物囊泡的情况下所述抗原的相应的免疫原性相比，所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有改变的免疫原性；优选地，所述免疫原为流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述免疫原为多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。
76、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有以下性质的一种或多种：
i)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含氧化稳定的膜；和/或
ii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群是合成的；和/或
iii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群不含未包封的抗原或与未包封的抗原混合；和/或
iv)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含两亲性聚合物的膜；和/或
v)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含形成囊泡膜的两亲性合成嵌段共聚物；和/或
vi)所述第一和/或第二聚合物囊泡群的直径大于70nm，其中优选地，所述直径在约100nm至约1μm、或约100nm至约750nm、或约100nm至约500nm、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内；最优选地，所述直径为约200nm；和/或
vii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有囊泡形态；
viii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群是自组装的。
77、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中第一和/或第二聚合物囊泡群的集合的平均直径在约100nm至约1μm的范围内、或约100nm至约750nm、或约100nm至约500nm、或约125nm至约250nm、约140nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。
78、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗原为免疫原。
79、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗原选自：i)自身抗原，ii)非自身抗原，iii)非自身免疫原和iv)自身免疫原。
80、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗原选自：
i)多肽，所述多肽与病毒多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述病毒多肽序列为流感血凝素、猪流感血凝素、猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白、MERS-CoV SPIKE蛋白或SARS-CoV-2 SPIKE蛋白，进一步优选地，所述病毒多肽序列选自：SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65；
ii)多肽，所述多肽与细菌多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)多肽，所述多肽与哺乳动物或禽类多肽序列具有至少80％或更高(如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列为卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽，进一步优选地，所述哺乳动物或禽类多肽序列选自：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11。
81、根据实施方案3至80中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物抗原包含选自人、啮齿类动物、兔和马多肽序列的多肽序列。
82、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗原为抗体或其片段。
83、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗原选自：
i)流感血凝素(HA)，优选地，选自：SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQID NO:8；
ii)猪流感血凝素(HA)，优选地，为SEQ ID NO:6；
iii)卵清蛋白(OVA)，优选地，为SEQ ID NO:4；
iv)B16肽，优选地，选自：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11；
v)MC38肽，优选地，选自：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；
vi)B16和MC38肽，优选地，所述肽独立地选自：i)SEQ ID NO:1-3和ii)SEQ ID NO:9-11；
vii)猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白及其可溶性片段，优选地为SEQ ID NO:12、13或14的片段；
viii)MERS-CoV SPIKE蛋白及其可溶性片段，优选地为SEQ ID NO:42-46中任一项的纤突蛋白(片段)；
ix)SARS-CoV-2 SPIKE蛋白及其可溶性片段，优选地为SEQ ID NO:19-41和65-66中任一项的纤突蛋白(片段)；和
x)SARS-CoV-1 SPIKE蛋白及其可溶性片段，优选地为SEQ ID NO:47-51中任一项的纤突蛋白(片段)。
84、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群选自阳离子聚合物囊泡、阴离子聚合物囊泡、非离子聚合物囊泡及它们的混合物。
85、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的；优选地，所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为非免疫原性的或非抗原性的。
86、根据实施方案85所述的方法，其中所述嵌段共聚物或所述两亲性聚合物既非免疫刺激剂也非佐剂。
87、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含两亲性聚合物或由两亲性聚合物形成，所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物或由其组成。
88、根据实施方案21至87中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N-乙烯吡咯烷酮)-b-PLA。
89、根据实施方案21至88中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物包含羧酸、酰胺、胺、烯属烃、二烷基硅氧烷、醚或亚烷基硫化物的至少一个单体单元。
90、根据实施方案21至89中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物为选自如下的聚醚嵌段：低聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧乙烯)嵌段、低聚(氧丙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段、低聚(氧丁烯)嵌段和聚(氧丁烯)嵌段。
91、根据实施方案21至90中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PB-PEO)二嵌段共聚物，或其中所述两亲性聚合物为聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(PDMS-PEO)二嵌段共聚物，或聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)。
92、根据实施方案91所述的方法，其中所述PB-PEO二嵌段共聚物包含5-50个嵌段PB和5-50个嵌段PEO或其中所述PB-PEO二嵌段共聚物优选地包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PEO。
93、根据实施方案21至92中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物为聚(丙交酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PLA-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PLA-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PLA-PEO与POPC(如PLA-PEO/POPC)的比率。
94、根据实施方案21至93中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物为聚(己内酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PCL-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PCL-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PCL-PEO与POPC(如PCL-PEO/POPC)的比率。
95、根据实施方案21至94中任一项所述的方法，其中所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)。
96、根据实施方案21至95中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含二嵌段共聚物PBD21-PEO14(BD21)和/或三嵌段共聚物PMOXA12-PDMS55-PMOXA12。
97、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含一个或多个隔室。
98、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含一个或多个隔室，其中所述一个或多个隔室中的每一个均包封至少一种肽、蛋白和核酸，优选地，所述肽、蛋白和核酸中的至少一种为免疫原性或抗原性的，进一步优选地，所述一个或多个隔室中的每一个均由相同或不同的两亲性聚合物组成。
99、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含多于一个隔室，其中所述隔室包含外部嵌段共聚物囊泡和至少一个内部嵌段共聚物囊泡，其中所述至少一个内部嵌段共聚物囊泡被包封在所述外部嵌段共聚物囊泡的内部，优选地，所述外部嵌段共聚物囊泡为由独立地选自以下的共聚物形成的聚合物囊泡：
i)聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-PIAT)，
ii)聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PBD-PEO)，
iii)聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-PCL)，
iv)聚(乙基乙烯)-聚(氧化乙烯)(PEE-PEO)，
v)聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-PLA)，
vi)聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-PEO)，
vii)聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-PEO)，
viii)聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-PNIPAm)，
ix)聚(苯乙烯)-聚(丙烯酸)(PS-PAA)，
x)聚(乙二醇)-聚(硫化丙烯)(PEG-PPS)，
xi)聚(2-甲基噁唑啉)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-PDMS-PMOXA)，
xii)聚(氧化乙烯)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PEO-PDMS-PMOXA)，
xiii)聚(甲基苯基硅烷)-聚(氧化乙烯)(PMPS-PEO-PMPS-PEO-PMPS)；和
xiv)聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)；
进一步优选地，所述至少一个内部嵌段共聚物囊泡为由独立地选自以下的共聚物形成的聚合物囊泡：
i)聚[苯乙烯-b-聚(L-异氰基丙氨酸(2-噻吩-3-基-乙基)酰胺)](PS-PIAT)，
ii)聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PBD-PEO)，
iii)聚(氧化乙烯)-聚(己内酯)(PEO-PCL)，
iv)聚(乙基乙烯)-聚(氧化乙烯)(PEE-PEO)，
v)聚(氧化乙烯)-聚(乳酸)(PEO-PLA)，
vi)聚(异戊二烯)-聚(氧化乙烯)(PI-PEO)，
vii)聚(2-乙烯基吡啶)-聚(氧化乙烯)(P2VP-PEO)，
viii)聚(氧化乙烯)-聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PEO-PNIPAm)，
ix)聚(苯乙烯)-聚(丙烯酸)(PS-PAA)，
x)聚(乙二醇)-聚(硫化丙烯)(PEG-PPS)，
xi)聚(2-甲基噁唑啉)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PMOXA-PDMS-PMOXA)，
xii)聚(氧化乙烯)-聚(二甲基硅氧烷)-聚(2-甲基噁唑啉)(PEO-PDMS-PMOXA)，
xiii)聚(甲基苯基硅烷)-聚(氧化乙烯)(PMPS-PEO-PMPS-PEO-PMPS),和
xiv)聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)。
100、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含脂质聚合物。
101、根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中在所述第二聚合物囊泡群中关联的佐剂选自CpG寡脱氧核苷酸(或CpG ODN)、衍生自细菌和分枝杆菌细胞壁的组分和蛋白。
102、一种用于生产其中包封抗原或包封佐剂的聚合物囊泡的方法，所述方法包括：
i)将两亲性聚合物溶解在氯仿中，优选地，所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)；
ii)使所述溶解的两亲性聚合物干燥以形成聚合物膜；
iii)向步骤ii)的所述干燥的两亲性聚合物膜添加增溶的抗原或可溶性佐剂，其中，优选地所述佐剂选自CpG寡脱氧核苷酸(或CpG ODN)、衍生自细菌和分枝杆菌细胞壁的组分和蛋白，和其中所述抗原选自：
a)多肽；优选地，所述多肽抗原为前述实施方案中的任一项所述，进一步优选地，所述多肽抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白或SARS-CoV-2 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，最优选地，所述多肽抗原与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
b)碳水化合物；
c)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
d)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；
iv)使步骤iii)的所述聚合物膜再水化以形成聚合物囊泡；
v)任选地，过滤步骤iv)的聚合物囊泡以纯化聚合物囊泡单分散囊泡；和/或
vi)任选地，使步骤iv)或v)的所述聚合物囊泡与未包封的抗原相分离。
103、用于生产其中包封抗原或包封佐剂的实施方案1至101中任一项所述的聚合物囊泡的方法。
104、一种聚合物囊泡，其由根据实施方案102或13所述的用于生产其中包封抗原或包封佐剂的聚合物囊泡的方法生产。
105、一种组合物，其包含根据实施方案1至102中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群。
106、根据实施方案105所述的组合物，其中所述组合物为药物或诊断组合物。
107、根据实施方案105或106所述的组合物，其中所述组合物为免疫原性、抗原性或免疫治疗性组合物。
108、根据实施方案105或106所述的组合物，其中所述组合物为疫苗。
109、根据实施方案105至108中任一项所述的组合物，其被配制为用于口服、鼻腔内、吸入、皮内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内或粘膜表面施用。
110、一种疫苗，其包含实施方案1至101中任一项所述的第一和/或第二聚合物囊泡群或实施方案105至109所定义的组合物，和进一步包含药学上可接受的赋形剂或载体。
111、根据实施方案110所述的疫苗，其中：
i)所述抗原包含流感血凝素(HA)，其中所述疫苗为流感疫苗，优选地，所述流感血凝素(HA)与选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的多肽具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ii)所述抗原包含猪流感血凝素(HA)，其中所述疫苗为猪流感疫苗，优选地，所述猪流感血凝素(HA)与SEQ ID NO:6具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iii)猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白，其中所述疫苗为PED疫苗，优选地，所述SPIKE蛋白与SEQ ID NO:12、13或14的多肽具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
iv)所述抗原包含卵清蛋白(OVA)，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述卵清蛋白(OVA)与SEQ ID NO:4具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
v)所述抗原包含B16肽，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述肽选自：SEQ IDNO:9-11；
vi)所述抗原包含MC38肽，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述肽选自：SEQ IDNO:1-3；
vii)所述抗原包含B16和MC38肽，其中所述疫苗为癌症疫苗，优选地，所述肽独立地选自：i)SEQ ID NO:1-3和ii)SEQ ID NO:9-11；
viii)所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；其中所述疫苗为癌症疫苗；
ix)所述抗原包含MERS-CoV SPIKE蛋白或其片段，其中所述疫苗为MERS疫苗，优选地，所述SPIKE蛋白与SEQ ID NO:42-46中任一多肽具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
x)所述抗原包含SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或其片段，其中所述疫苗为COVID-19疫苗，优选地，所述SPIKE蛋白与SEQ ID NO:19-41和65-66中任一多肽具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；或
xi)所述抗原包含SARS-CoV-1 SPIKE蛋白或其片段，其中所述疫苗为COVID-19疫苗，优选地，所述SPIKE蛋白与SEQ ID NO:19-41中任一多肽具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。
112、一种试剂盒，其包含实施方案1至101中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群或实施方案105至109所定义的组合物。
113、一种用于在有此需要的受试者(如人)中治疗或预防感染性疾病、癌症或自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如实施方案1至101定义的第一和第二聚合物囊泡群或如实施方案105至109定义的组合物，其中优选地，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病。
114、一种用于免疫人或非人动物的方法，所述方法包括如下步骤：
i.提供如实施方案1至101定义的第一和第二聚合物囊泡群或如实施方案105至109定义的组合物；
ii.向所述非人动物施用所述第一和第二聚合物囊泡群或组合物。
115、根据实施方案1至101中任一项所定义的第一和第二聚合物囊泡群或实施方案105至109定义的组合物，其用作药物。
116、根据实施方案1至101中任一项所定义的第一和第二聚合物囊泡群或实施方案105至109定义的组合物，其用在如下方法的一种或多种中：
i)用在抗体发现和/或筛选和/或制备的方法中；
ii)用在疫苗发现和/或筛选和/或制备的方法中；
iii)用在生产或制备免疫原性或免疫刺激剂组合物的方法中；
iv)用在靶向递送蛋白质和/或肽的方法中，优选地，所述靶向递送为靶向递送根据前述实施方案中任一项所述的抗原性蛋白和/或肽；进一步优选地，所述抗原性蛋白和/或肽包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，最优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQID NO:14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；再进一步最优选地，所述靶向递送在受试者中实施；
v)用在刺激对抗原的免疫应答的方法中，优选地，所述抗原为前述实施方案中任一项所述，进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分；进一步最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:43-46、SEQ IDNO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；进一步最优选地，其用于在受试者中刺激对所述抗原的免疫应答；
vi)用在触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护的方法中，优选地，用在触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护的方法中，所述免疫应答针对前述实施方案中任一项所述的抗原；进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分；最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
vii)用在将肽和/或蛋白递送至前述实施方案中任一项所述的抗原呈递细胞(APC)的方法中；优选地，所述肽和/或蛋白为前述实施方案中任一项所述的抗原；进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1 SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分；最优选地，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
viii)用在触发免疫应答的方法中，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；优选地，所述应答针对前述实施方案中任一项所述的抗原；进一步优选地，所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2 SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分；更进一步优选地，所述应答针对抗原，所述抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
ix)用在用于治疗、改善、预防或诊断感染性疾病的方法中，优选地，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病；进一步优选地，所述病毒感染性疾病选自：流感病毒感染、PED病毒感染、口蹄疫病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、疱疹病毒感染；
x)用在用于治疗、改善、预防或诊断癌症或自身免疫性疾病的方法中；
xi)用在用于使癌细胞对化学疗法敏感的方法中；
xii)用在用于在癌细胞中诱导凋亡的方法中；
xiii)用在用于在受试者中刺激免疫应答的方法中；
xiv)用在用于免疫人或非人动物的方法中；
xv)用在用于制备杂交瘤的方法中；
xvi)用在根据前述实施方案中任一项所述的方法中；
xvii)用在根据前述i)-xvi)中任一项所述的方法中，其中所述方法为体内和/或离体和/或体外方法；
xviii)用在根据前述i)-xvii)中任一项所述的方法中，其中所述抗原对所述抗原使用的环境而言是异源的。
117、根据实施方案1至101中任一项所定义的第一和第二聚合物囊泡群或根据实施方案105至109所定义的组合物用于以下的一种或多种的用途：
i)用于抗体发现和/或筛选和/或制备；
ii)用于疫苗发现和/或筛选和/或制备；
iii)用于免疫原性或免疫刺激剂组合物的生产或制备；
iv)用于蛋白质和/或肽的靶向递送，优选地，所述靶向递送为抗原性蛋白和/或肽的靶向递送；进一步优选地，所述靶向递送在受试者中实施；
v)用于刺激对抗原的免疫应答，优选地，用于在受试者中刺激对抗原的免疫应答；
vi)用于触发由CD8(+)T细胞介导的免疫应答诱导的交叉保护；
vii)用于将肽或蛋白递送至抗原呈递细胞(APC)；优选地，所述肽或蛋白为抗原，进一步优选地，所述肽或蛋白为免疫原性的或免疫治疗性的；
viii)用于触发免疫应答，所述免疫应答包含CD8(+)T细胞介导的免疫应答和/或CD4(+)T细胞介导的免疫应答；
ix)在用于治疗、改善、预防或诊断感染性疾病的方法中，优选地，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病；进一步优选地，所述病毒感染性疾病选自：流感病毒感染、PED病毒感染、呼吸道合胞病毒感染、疱疹病毒感染；
x)用于治疗、改善、预防或诊断癌症或自身免疫性疾病；
xi)用于使癌细胞对化学疗法敏感；
xii)用于在癌细胞中诱导凋亡；
xiii)用于在受试者中刺激免疫应答；
xiv)用于免疫人或非人动物；
xv)用于制备杂交瘤；
xvi)在根据前述实施方案中任一项所述的方法中；
xvii)用于根据前述i)-xvi)中任一项所述的用途，其中所述用途为体内和/或离体和/或体外用途；
xviii)用于根据前述i)-xvii)中任一项所述的用途，其中所述抗原对所述抗原使用的环境而言是异源的。
118、一种聚合物囊泡群用于引发免疫应答的用途，所述聚合物囊泡群具有月120nm或更大的平均直径，所述聚合物囊泡群仅与佐剂或抗原关联，优选地所述聚合物囊泡群在所述聚合物囊泡中进包封了可溶性包封佐剂或可溶性包封抗原，其中所述可溶性包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，优选地，所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，进一步优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；或
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
119、根据实施方案118所述的用途，其中所述聚合物囊泡群的平均直径在约120nm至约1μm、或约140nm至约750nm、或约120nm至约500nm、或约140nm至约250nm、约120nm至约240nm、约150nm至约235nm、约170nm至约230nm、或约220nm至约180nm、或约190nm至约210nm的范围内。
120、根据实施方案118至119中任一项所述的用途，其中所述聚合物囊泡选自阳离子聚合物囊泡、阴离子聚合物囊泡、非离子聚合物囊泡及它们的混合物。
121、根据实施方案120所述的用途，其中所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的；优选地，所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为非免疫原性的或非抗原性的。
122、根据实施方案118至121中任一项所述的用途，其中所述嵌段共聚物或所述两亲性聚合物既非免疫刺激剂也非佐剂。
123、根据实施方案118至122中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物
124、根据实施方案118至123中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N-乙烯吡咯烷酮)-b-PLA。
125、根据实施方案118至124中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物包含羧酸、酰胺、胺、烯属烃、二烷基硅氧烷、醚或亚烷基硫化物的至少一个单体单元。
126、根据实施方案118至124中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物为选自如下的聚醚嵌段：低聚(氧乙烯)嵌段、聚(氧乙烯)嵌段、低聚(氧丙烯)嵌段、聚(氧丙烯)嵌段、低聚(氧丁烯)嵌段和聚(氧丁烯)嵌段。
127、根据实施方案118至126中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PB-PEO)二嵌段共聚物，或聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(PDMS-PEO)二嵌段共聚物，或聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)。
128、根据实施方案127所述的用途，其中所述PB-PEO二嵌段共聚物包含5-50个嵌段PB和5-50个嵌段PEO或其中优选地所述PB-PEO二嵌段共聚物优选地包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PEO。
129、根据实施方案118至128中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物为聚(丙交酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PLA-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PLA-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PLA-PEO与POPC(如PLA-PEO/POPC)的比率。
130、根据实施方案118至129中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物为聚(己内酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PCL-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PCL-PEO/POPC具有75:25(如75/25)的PCL-PEO与POPC(如PCL-PEO/POPC)的比率。
131、根据实施方案118至130中任一项所述的用途，其中所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)。
132、根据实施方案118至131中任一项所述的用途，其中所述聚合物囊泡包含二嵌段共聚物PBD21-PEO14(BD21)、或PDMS47PEO36或三嵌段共聚物PMOXA12-PDMS55-PMOXA12。
133、一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中第二聚合物囊泡群作为佐剂，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。
发明实施例
为了本发明可以被容易地理解并付诸实际效果，现将通过以下非限制性实施例来描述本发明的一些方面。
材料和方法
实施例1：聚合物囊泡中卵清蛋白、佐剂、肽、可溶性HA、PEDv SPIKE蛋白和eGFPDNA的包封
将100mg/ml的聚丁二烯-聚氧化乙烯(本文称为“BD21”)储备液溶解在氯仿中。然后将100μL 100mg/ml的BD21储备液沉积到硼硅酸盐(12x75mm)培养管中，并在氮气流中缓慢干燥以形成聚合物薄膜。在干燥器中将该膜于真空下进一步干燥6小时。然后将1mL的1-5mg/ml在1x PBS缓冲液中溶解的卵清蛋白(OVA)蛋白溶液添加到培养管中。将混合物在4℃下以600rpm搅拌至少18小时以使膜再水化并形成聚合物囊泡。然后用挤压机(Avanti 1mL脂质体挤压机，21冲程)通过200nm孔径的Whatman Nucleopore膜将混浊悬液挤出以得到单分散囊泡[如，Fu等人，2011，Lim.S.K等人，2017]。通过使用透析膜(300kDa MWCO，纤维素酯膜)针对1L的1x PBS对混合物进行透析，从未包封的蛋白中纯化含有蛋白质的BD21聚合物囊泡。
使用尺寸排阻色谱法分析最终的囊泡混合物中未包封的蛋白。将来自SEC的囊泡峰的级分用于通过SDS-PAGE定量蛋白质包封的量。采用动态光散射仪(Malvern,UnitedKingdom)(用1x PBS的100x稀释液)表征囊泡的尺寸和单分散性。为了定量包封在聚合物囊泡中的OVA，先用20％DMSO然后用样品缓冲液预处理样品，之后将样品上样进行SDS-PAGE分析。
对于肽包封(以SEQ ID NO:1、2和3的MC38新抗原肽为示例)，遵循相似的方案。将溶解在PBS中的浓度为0.5-0.3mg/ml的肽用于包封。透析后，采用Cary Eclipse分光光度计(Agilent)通过苯丙氨酸荧光(ex270nm/em 310nm)确定包封的肽的量。分别进行3种肽的包封并且所有肽的浓度经测定为20-30ug/ml。在注射到小鼠中之前，将等体积的3种包封肽中的每一种混合在一起。
对于Trp2肽包封，遵循共溶剂或纳米沉淀方法。将0.4mg Trp2 173-196肽(QPQIANCSVYDFFVWLHYYSVRDT,SEQ ID NO:9)稀释在1ml含有10mM硼酸盐缓冲液、125mMNaCl、10％甘油、pH 8.5的缓冲液中。将溶解在THF中的4.25μmol的BD21/0.75μmol二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP脂质)混合物缓慢加入到溶液中，同时剧烈涡旋4-5小时。如上所述进行挤出和透析，其中在透析步骤中有轻微改变。简言之，然后通过0.22μm过滤器(PES膜，Millipore)过来囊泡并采用3次缓冲液交换使其经受透析达48小时。通过HPLC测定包封的Trp2的浓度，Trp2的终浓度为160μg/ml。
对于佐剂CpG包封(使用购自InvivGen的SEQ ID NO:18的B类CpG-寡脱氧核苷酸)，将4.25μmol BD21/0.75μmol二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP脂质)混合物溶解在氯仿中。然后将所得混合物沉积到硼硅酸盐(12x75 mm)培养管中，并在氮气流中缓慢干燥以形成聚合物薄膜。在干燥器中将该膜于真空下进一步干燥6小时。将100μg CpG溶解在10mM硼酸盐缓冲液、125mM NaCl、10％甘油中。然后将挤出的样品采用3次缓冲液交换透析48小时。通过采用使用用SYBR-Safe染料的已知量的CpG产生标准曲线来定量CpG。将ACM样品破裂并于室温下温育30分钟，并转移至黑色平板上进行定量(Ex500 nm:Em 530nm)。通常，包封的CpG浓度约为70-90μg/ml。
对于HA包封，遵循相似的方案。将重组HA(H1N1/A/波多黎各/8/1934株)以10ug/ml的浓度溶解在PBS中以用于包封。透析后，通过蛋白质印记来确定包封肽的量。包封后HA浓度经测定为约1ug/ml。将100ul注射到小鼠体内。
对于在BD21聚合物囊泡中PEDv SPIKE蛋白的包封，遵循与如上所述相似的方案。使用杆状病毒表达系统表达PEDv SPIKE蛋白(不同的构建体，SEQ ID No:12-14)。添加从昆虫细胞分离的蛋白质用于包封。而对于在由聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(自PolymerSource,Quebec,Canada获得的PDMS46-PEO37)或由嵌段共聚物和脂质的混合物(比如PDMS46-PEO37(/DSPE-PEG、PLA-PEG/POPC、PLA-PEG/大豆磷脂)制备的聚合物囊泡中PEDv SPIKE蛋白的包封，采用了不同的方法以表明这些方法的通用性。将聚合物和/或聚合物脂质混合物溶于乙醇或任何与水混溶的溶剂中，然后滴加到蛋白质溶液中进行自组装，并在自组装过程中将蛋白质包封到聚合物囊泡中。通过用PBS透析除去未包封的蛋白质。透析后，通过密度计确定每种聚合物囊泡样品包封的蛋白的量。对于这些聚合物囊泡制剂中的每一种，包封后蛋白的浓度经测定为约1μg/ml。聚合物囊泡包封有可溶性SPIKE蛋白(SEQ 12)或SPIKE蛋白的S1区(SEQ 13)和SPIKE蛋白的S2区(SEQ14)。将100-200μl的聚合物囊泡(仅具有可溶性SPIKE蛋白或具有SPIKE蛋白的S1和S2区的聚合物囊泡的混合物)注射到小鼠中，并且将1ml的该种聚合物囊泡口服施用至猪。
对于eGFR DNA包封，遵循与OVA包封相似的方案。简言之，将比如聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(BD21)、在聚(氧化乙烯)链末端用官能团(如NH2、COOH)修饰的聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(BD21-NH2)的嵌段共聚物，诸如PLA-PEG/POPC、PLA-PEG/大豆磷脂、二甲基氨基乙烷氨基甲酰基(DC)-胆固醇、1,2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)的嵌段共聚物和脂质的混合物溶解在氯仿中并转移至玻璃管中，在氮气流下缓慢干燥以形成薄膜。在干燥器中将该膜于真空下进一步干燥6小时。然后将1μg的eGFP DNA添加到薄膜中并再水化过夜。之后，将样品用0.2um聚碳酸酯过滤器挤出并用HEPES缓冲液透析。
实施例2：用包封eGFP DNA的聚合物囊泡转染HEK293T细胞
将HEK293T细胞以50,000个细胞/孔的密度接种到48孔板中。对于转染(Lipofectamine 2000转染)，将1,000μL Opti-MEM I(Invitrogen)、2μLLipofectamine2000(Invitrogen)和1μg SF-GFP PC DNA(或含1μg SF-GFP PC DNA的聚合物囊泡制剂)混合。在室温下温育20分钟形成转染复合物。为了转染，将脂质体(lipofectamine)复合物加入细胞中，并在37℃和5％CO2下温育24小时至72小时。通过GFP荧光(Ex 485nm，Em 520nm)测量转染效率。对于细胞摄取，在Ex 530nm和Em 560nm处测量荧光。为了成像，抽出细胞培养基，然后用DPBS(含Ca2+/Mg2+)洗涤细胞，并用4％对甲醛固定。然后，取下玻璃盖玻片并放到载玻片上，该载玻片包含一滴20ul的具有DAPI的封片剂(mounting medium)。最后，用指甲油密封盖玻片，并保存在4℃下以用于进一步成像。将荧光显微镜用于成像。
实施例3：免疫接种包封OVA的聚合物囊泡以测定抗体效价
采用具有或不具有Sigma佐剂系统(SAS)的游离OVA和包封OVA的ACM(聚合物囊泡)，通过进行初免和21天后的加强来免疫C57bl/6小鼠。所有免疫接种均以最终量的OVA进行：5-10ug OVA/注射/小鼠。初免后42天采集最终血样。然后进行ELISA以评估效价：将OVA包被在MaxiSorp平板(1ug/ml)上过夜。在室温下使用PBS中的3％BSA封闭板达1小时。将所有血清以1:100稀释，并在室温下在平板上温育1小时。用PBS+0.05％Tween 20洗涤3次后，将偶联的二抗抗-小鼠IgG HRP以1:10,000的稀释度在室温下温育1h。用PBS/Tween 20缓冲液洗涤3次后，加入TMB底物，并使用1M HCl终止反应。在450nm处定量光密度。
实施例4：免疫接种包封HA的聚合物囊泡以测定抗体效价
类似地，采用PBS中游离HA蛋白(SEQ ID NO:7)、ACM包封的HA(聚合物囊泡)或PBS对照免疫Balb/c小鼠。所有免疫接种均以相同的最终量的HA进行：100ng HA/注射/小鼠。初免后42天采集最终血样并按照如上所述采用1ug/ml HA用于包被平板以进行ELISA。
实施例5：免疫接种包封MC38新抗原肽的聚合物囊泡以测定细胞应答
为了观察免疫后的特定CD8 T细胞应答，我们采用了MC-38同源肿瘤模型。在C57bl/6小鼠的右侧皮下接种0.1ml PBS中的MC-38肿瘤细胞(3×105个)，来发展肿瘤。将接种日定义为第0天。基于体重将动物随机化，并在接种后第4天开始免疫接种。免疫接种包括：游离肽、在有或没有可商购获得的抗-PD-1抗体共处理情况下的ACM包封的肽(聚合物囊泡)。肽为：Reps1 P45A(SEQ ID NO:1)、Adpgk R304M(SEQ ID NO:2)和Dpagt1 V213L(SEQID NO:3)，获自Genscript。在第4、11和18天皮下免疫200ul肽和ACM中的肽。ACM中的肽的浓度经测定为20-30μg/ml，而对于单独的肽，采用每只小鼠每次注射10μg。在第5、8、12、15、19和22天以5mg/kg的剂量腹膜内注射抗PD1抗体。检查动物的肿瘤生长和治疗对其正常行为的任何影响，所述正常行为比如活动能力、食物和水的消耗、体重增加/减少(体重每周测量3次)。使用卡尺每周3次测量肿瘤的二维尺寸，并使用以下公式以mm3表示体积：V＝0.5a×b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。
实施例6：用包封PEDv纤突蛋白的聚合物囊泡免疫接种小鼠和猪
用ACM包封的PEDv纤突蛋白(作为对抗冠状病毒的疫苗的示例性实例)免疫小鼠并在21天后采用第二剂量加强，免疫150ul-200μl的包封了PEDv纤突蛋白的聚合物囊泡。从最终血样中收集血清并将其用于ELISA。此外，通过常规病毒中和测试了这些血清中和PEDV毒株USA/科罗拉多/2013(CO/13)的能力。另外，给断奶仔猪口服接种1ml包封了PED SPIKE蛋白的聚合物囊泡(在第1天初免和第14天加强免疫后)。将简单的生理溶液用于口服疫苗接种。
实施例7：用包封OVA蛋白的聚合物囊泡与佐剂CpG(共同注射)或包封CpG的聚合物囊泡一起免疫接种小鼠以作为预防性B16-OVA肿瘤模型
用四种不同的OVA蛋白免疫接种方案：1、游离OVA与游离CpG共同施用，2、由BD21聚合物囊泡包封的OVA与游离CpG共同施用，3、游离OVA与由BD21聚合物囊泡包封的CpG，以及4、由BD21聚合物囊泡包封的OVA(代表本发明中使用的第一聚合物囊泡群)与由BD21聚合物囊泡包封的CpG(代表本发明中使用的第二聚合物囊泡群)共同施用，作为初免施用于小鼠并在间隔7天后对C57BI/6小鼠皮下加强，然后在免疫接种同一侧的右侧接种105个B16-OVA细胞。监测肿瘤发展30天。
实施例8：用包封OVA蛋白的聚合物囊泡与佐剂CpG(共同注射)或包封CpG的聚合物囊泡一起免疫接种小鼠以作为治疗性B16-OVA肿瘤模型
将105个B16-OVA细胞接种小鼠用于肿瘤生长，并在接种B16-OVA细胞后，将三种不同的OVA蛋白制剂(1、游离OVA与CpG共同施用，2、包封OVA的BD21聚合物囊泡与游离CpG共同施用，3、包封OVA的BD21聚合物囊泡(代表本发明中使用的第一聚合物囊泡群)与单独的包封CpG的聚合物囊泡(代表本发明中使用的第二聚合物囊泡群))作为初免和2次加强(在第5天、第10天和第14天)免疫。所有免疫接种样品由每只小鼠5-10μg OVA、8μg CpG组成。监测肿瘤发展超过20天，并且为了将肿瘤应答与不同的OVA制剂直接关联，在第20天收集血样用于dextramer染色。
实施例9：用包封Trp2肽的聚合物囊泡与佐剂CpG(共同注射)或包封CpG的聚合物囊泡免疫接种小鼠以作为治疗性黑素瘤B16F10肿瘤模型
首先将105个B16F10细胞接种到C57BI/6小鼠中，然后将不同的Trp2(酪氨酸酶相关蛋白-2，作为抗原)制剂用于免疫接种。所有制剂均由每只小鼠注射16μg Trp2肽组成。免疫接种后，监测肿瘤生长，为了将肿瘤应答与不同的Trp2制剂直接关联，在第17天通过处死动物(n＝4)收集肿瘤样品，并在第21天收集被监测肿瘤生长的动物的血样。
实施例10：CpG佐剂与ACM聚合物囊泡的缀合
CpG ODN可以在5'或3'端与官能团缀合。胺(-NH2)和游离硫醇(-SH)官能ODN可以在5'或3'末端定制合成。以下更详细描述的三种缀合策略都可以用于有效地将佐剂(如CpGODN)缀合到功能性聚合物和表面功能性ACM颗粒上。(1)SH-ODN/ACM-马来酰亚胺缀合，(2)NH2-ODN/ACM-NHS(N-羟基琥珀酰亚胺酯)，(3)NH2-ODN/ACM-醛。除了ODN与ACM的共价缀合之外，可以将可水解的连接子或可切割的连接子引入到ODN和聚合物链之间。可以引入酸可切割的连接子(腙、肟)、酶可切割的连接子(基于二肽的连接子Val-Cit-PABC和Phe-Lys)或谷胱甘肽可切割的二硫化物连接子以在抗原呈递细胞中释放CpG。
使用SH-ODN和聚合物-马来酰亚胺(聚合物-MAL)的ACM-ODN缀合策略：用700mM三-(2-羧乙基)膦(TCEP)溶液处理5'巯基ISS CpG-ODN或3'巯基ISS CpG-ODN的二硫化物前体，该溶液在pH 7的HBSE(用含有1mM EDTA的10mM HEPES缓冲的140mM NaCl)中制备，并以五摩尔过量使用以在40℃下还原二硫化物-ODN达2小时。使用PD-10脱盐柱(GE Healthcare)移除残留的TCEP，并在pH 6.5的HBSE中洗脱。还原的SH-ODN立即使用或在-80℃下储存直至使用。使用胺官能聚合物和NHS-PEG-MAL连接子基团预先制备聚合物-MAL。可以通过将ODN预缀合到聚合物上然后形成ACM，或者将ODN缀合到预形成的ACM上来制备ACM-ODN复合物。对于SH-ODN和聚合物-MAL的预缀合，可以在DMF存在下在HBSE缓冲液中于40℃，pH 7、黑暗中进行4小时，或通过油包水乳液(HBSE缓冲液：乙醚，2:1比率)于40℃下黑暗中进行4小时。通过转子蒸发器除去有机溶剂和水，然后冻干。将干燥ODN-聚合物用于在与非官能聚合物混合后形成ACM。对于预先形成的ACM-MAL，使用10-20％功能聚合物-MAL与80-90％非功能聚合物经由薄膜再水化技术，在pH 7的HBSE缓冲液中再水化来制备。将还原的SH-ODN与预先形成的ACM-MAL在pH 7的HBSE缓冲液中在40℃下缀合4小时。通过Sepharose CL-4B尺寸排阻色谱或通过透析从ACM-ODN缀合物中除去未缀合的SH-ODN。
使用NH2-ODN和聚合物-N-羟基琥珀酰亚胺酯(聚合物-NHS)的ACM-ODN缀合策略：胺官能的5'CpG-ODN或3'CpG-ODN与N-羟基琥珀酰亚胺基酯官能化的聚合物(聚合物-NHS)缀合。聚合物-NHS是在DMAP存在下，在无水丙酮/二恶烷混合物下，由羟基官能聚合物和N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯预先制备的。
可以通过将ODN预缀合到聚合物上然后形成ACM，或者将ODN缀合到预形成的ACM上来制备ACM-ODN复合物。对于NH2-ODN和聚合物-NHS的预缀合，可以在无水DMF存在下、室温下进行8小时。通过冻干除去有机溶剂。通过薄膜再水化技术，通过与与未官能化的聚合物混合来将干燥的ODN-聚合物用于形成ACM-ODN。
对于预先形成的ACM-NHS，使用20-30％功能聚合物-NHS和70-80％非功能聚合物，通过在pH 6.8的磷酸盐缓冲液中的薄膜再水化技术来制备。在4℃下，将NH2-ODN加入到在pH 6.8的PB缓冲液中预先形成的ACM-NHS中，反应过夜。通过Sepharose CL-4B尺寸排阻色谱或通过透析从ACM-ODN缀合物中除去未缀合的NH2-ODN。
使用NH2-ODN和聚合物-醛(聚合物-CHO)的ACM-ODN缀合策略：
胺官能的5'CpG-ODN或3'CpG-ODN与醛官能化的聚合物(聚合物-CHO)缀合以形成亚胺键，该亚胺键通过氰基硼氢化钠(NaCNBH4)处理被进一步还原成稳定的胺键形成。聚合物-CHO是通过在Dess-Martin过碘烷存在下将醇选择性氧化为醛预先由羟基官能聚合物制备的。
可以通过将ODN预缀合到聚合物上然后形成ACM，或者将ODN缀合到预形成的ACM上来制备ACM-ODN复合物。
对于NH2-ODN和聚合物-CHO的预缀合，可以在干燥DMF的存在下在室温下进行16小时，这导致亚胺键形成，该亚胺键之后通过NaCNBH4被还原为胺。使用PD-10脱盐柱(GEHealthcare)除去残余的NaCNBH4，并在水/DMF混合物中洗脱。通过冻干除去有机溶剂。通过薄膜再水化技术，通过与非功能聚合物混合将干燥的ODN-聚合物用于形成ACM-ODN。
对于预先形成的ACM-CHO，使用30-40％的功能聚合物-CHO和60-70％的非功能聚合物通过薄膜再水化技术制备，在pH 8.2的10mM硼酸盐缓冲液中再水化来制备。将NH2-ODN加入预先形成的在硼酸盐缓冲液(pH 8.2)中的ACM-CHO中，并在室温下反应过夜以形成亚胺键。通过在4℃下用NaCNBH4处理过夜进一步将亚胺键还原成稳定的胺键。通过SepharoseCL-4B尺寸排阻色谱或通过透析从ACM-ODN缀合物中除去未缀合的NH2-ODN和游离NaCNBH4。
BD21囊泡与卵清蛋白(OVA)的缀合：
BD21+5％DSPE-PEG(3000)-马来酰亚胺囊泡形成：
将在CHCl3中的100μL BD21(100mg/mL)转移到25mL单颈RBF(圆底烧瓶)中，向其中添加80.89μL DSPE-PEG-马来酰亚胺(在CHCl3中为10mg/mL)。在35℃、减压下使溶剂缓慢蒸发，得到宽展的薄膜(wide-spread thin-film)，并在真空下于干燥器中干燥6小时。将1mLNaHCO3缓冲液(10mM，0.9％NaCl，pH 6.5)添加至薄膜中进行再水化，并在25℃下搅拌16-20小时，以形成乳状均匀溶液。再水化16-20小时后，将溶液在25℃下用200nm Whatman膜挤压21次。将溶液转移至透析袋(MWCO(重量截留)：300KD)并在NaHCO3缓冲液(10mM,0.9％NaCl,pH 6.5)中透析(2x 500mL和1x 1L；前两次透析各进行3小时，最后一次进行16小时)。用动态光散射仪(Malvern，英国)表征囊泡的大小和单分散性(用1x PBS稀释100x)。
BD21+DSPE-PEG(3000)-马来酰亚胺(5％)与OVA的缀合：
将OVA(0.5mg)溶解于200μL的NaHCO3缓冲液(10mM,0.9％NaCl,pH 6.5)中，向其中加入2.5mg的TCEP-HCl(溶解在100μL相同的NaHCO3缓冲液中)并温育20分钟。使用1N NaOH溶液(～10μL)将反应物的pH从～2.0调节至6-7。然后将350μL聚合物囊泡(在10Mm NaHCO3(0.9％NaCl缓冲液，pH 7.0)中的10mg/mL BD/DSPE-PEG(3000)-马来酰亚胺5％)添加至蛋白质混合物并将反应物的pH再次调节至pH 7.0(如果反应物的pH不是7的话)。在24℃下将反应物避光温育3小时。将反应溶液(～660μL)转移至透析袋(MWCO：1000KD)并在NaHCO3缓冲液(10mM,0.9％NaCl,pH 7.0)中透析(3x 1L；前两次透析各进行3小时，最后一次进行16小时)。将100μL透析溶液通过SEC色谱法纯化，并收集在96孔板中。将相应的ACM峰级分合并并冻干以通过SDS-PAGE定量。
为了比较，还将OVA单独包封在BD21中。为此，使用溶解在CHCl3中的100μl 100mg/ml BD21储备液如上所述生产膜。然后，通过添加在1X PBS缓冲液中的0.5mg/ml增溶的OVA蛋白的1mL溶液进行再水化。将混合物在4℃下，以600rpm搅拌至少18小时以允许形成聚合物囊泡，并如上所述挤压和透析。
BD21囊泡与血凝素(HA)的缀合：
由BD21制备BD21-CHO：
将单颈RBF中BD21(100mg)的搅拌溶液溶于无水CH2Cl2(6mL)中，并在0℃下以一份加入Dess-Martin氧化剂(10mg，0.4当量)。将反应物在25℃下搅拌4小时。然后加入饱和NaHCO3和Na2S2O3的1:1混合物(20mL)，并在相同温度下搅拌2小时。将有机层分离，并将水层用CH2Cl2(20mL)萃取并分离有机层。将合并的有机层用饱和NaHCO3和Na2S2O3的1:1混合物(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并在减压条件下蒸发，得到无色粘稠油状物(100mg，定量的)。通过NMR估算修饰收率为约30％。
BD-CHO与HA的缀合：
将10mg修饰的BD21-CHO(无色粘稠油状物)溶解于0.5mL置于25mL的单颈RBF的CHCl3中，然后在35℃下采用Rotavap于减压下使溶剂缓慢蒸发10分钟，得到宽展的薄膜。将所述膜在真空下于干燥器中干燥6小时。在400μl硼酸盐缓冲液(硼酸盐10mM，150mM NaCl，pH 7.5)中将膜再水化30分钟，然后添加0.5mg HA(通过透析将HA在硼酸盐缓冲液中预先平衡，从而制备出150μl的HA)。将反应物在25℃下搅拌16小时。然后将20μL NaCNBH4添加至溶液(制备：将126mg NaCNBH4溶在1mL Millipore水中，并通过在25℃下搅拌溶液30分钟来脱除多余的H2气体)并在25℃下继续搅拌另外的8-16小时。将缀合的聚合物囊泡在25℃下用200nm Whatman膜挤压21次。将反应物溶液转移至透析袋(MWCO：1000KD)并在PBS缓冲液(1x，pH 7.4)中透析(3x 1L；前两次透析各进行3小时，最后一次进行16小时)。透析后，将400μL透析溶液通过SEC色谱法(尺寸排阻色谱)纯化，并收集在96孔板中。使用蛋白质印迹和ELISA分析(酶联免疫吸附分析)检测偶联的HA的存在。用动态光散射表征囊泡的大小和单分散性(用1x PBS稀释100x)。
为了比较，还将HA单独包封在BD21中。为此，使用溶解在CHCl3中的100μl 100mg/mlBD21储备液如上所述生产膜。然后，通过添加在1X PBS缓冲液中的含20μg HA的1mL溶液进行再水化。将混合物在4℃下，以600rpm搅拌至少18小时以允许形成聚合物囊泡，并如上所述挤压和透析。
偶联的HA和OVA的定量：
为了检测偶联的蛋白的存在，采用了若干技术。将100至300μl透析的样品加载至具有Sephacryl柱的尺寸排阻色谱(SEC，Akta)上。将与ACM囊泡峰相应的SEC级分合并或原样用于通过SDS-PAGE或/和ELISA进行分析。对于SDS-PAGE，将20-40μl每种级分与DMSO混合(20％v/v)并充分涡旋，然后加载缓冲液。加入不同量的游离BSA(牛血清白蛋白)、HA或OVA进行定量。迁移后，通过银染(OVA)使凝胶染色或将凝胶用于膜转移和兔多克隆抗体(HA)的免疫印迹。为了进一步确保HA与聚合物偶联，将25μl全部SEC级分涂布至Maxisorp 384-孔板，在4℃下过夜。在采用3％BSA封闭后，将兔多克隆抗-HA抗体用作一级抗体，然后HRP(辣根过氧化物酶)偶联的抗-兔抗体作为第二抗体。加入TMB底物，并使用1M HCl终止反应。在450nm处定量光密度。
小鼠免疫接种和效价测定(mAb)：
采用不同的OVA制剂免疫C57bl/6小鼠：PBS(阴性对照)、具有或不具有Sigma佐剂系统(SAS)的游离OVA、包封OVA的ACM或缀合OVA的ACM。采用不同的HA制剂免疫Balb/c小鼠：PBS(阴性对照)、游离HA、包封HA的ACM或缀合HA的ACM。两个实验均通过进行初免和21天后的加强来进行。所有免疫接种均以各实验中相同最终量的抗原进行：5-10μg OVA/注射/小鼠或100-200ng HA/注射/小鼠。初免后42天采集最终血样。然后进行ELISA以评估效价：将OVA或HA涂覆在MaxiSorp平板(1μg/ml，在碳酸盐缓冲液中)上过夜。在室温下使用PBS中的3％BSA封闭板达1h。将所有血清以1:100稀释，并在室温下在平板上温育1h。用PBS+0.05％Tween 20洗涤3次后，将偶联HRP的二抗抗-小鼠IgG以1:10,000的稀释度在RT(室温)下温育1h。用PBS/Tween 20缓冲液洗涤3次后，加入TMB底物，并使用1M HCl终止反应。在450nm处定量光密度。
实施例11：与OVA偶联的ACM聚合物囊泡
将采用5％DSPE-PEG(3000)-马来酰亚胺制备的聚合物囊泡(也称为ACM(人工细胞膜))用于通过可用的半胱氨酸偶联OVA。已证明，对溶剂而言至少一个半胱氨酸是可及的(Tatsumi等人，1997)。在pH控制的环境中达到了偶联条件。
实施例12：HA偶联的BD21-CHO多聚体
如在上述方法中所述对BD21聚合物进行改性，通过NMR估算醛改性百分比为约30-40％。添加到BD21上的醛部分将与HA的赖氨酸和精氨酸残基的伯胺反应。过夜偶联后，进行充分透析，表征所得囊泡。
实施例13：免疫接种和血清效价
用下列制剂免疫C57bl/6小鼠：阴性对照(PBS)，阴性对照(PBS)、具有或不具有Sigma佐剂系统(SAS)的游离OVA、包封OVA的BD21或缀合OVA的BD21。所有免疫接种均具有4μgOVA/注射/小鼠的相同量。加强免疫后21天，收集血清用于通过ELISA的效价。
此外，用下列制剂免疫Balb/c小鼠：阴性对照(PBS)、游离HA、包封HA的BD21和缀合HA的BD21。由于甚至在充分透析后仍在HA缀合的聚合物囊泡样本中可观察到一些残留的游离HA，因此将SEC的合并级分用于免疫接种。所有免疫接种均具有100-200ng HA/注射/小鼠的相同量。
结果
实施例1的蛋白和DNA的包封：
将包封OVA的聚合物囊泡通过透析和尺寸排阻柱(SEC)纯化以移除未包封的蛋白并通过动态光散射进行分析。如图2A、图3和图4所示，观察到来自SEC和单分散群的包封OVA的聚合物囊泡的洗脱曲线。
图2B呈现了其中包封了OVA、PEDv SPIK蛋白或eGFP DNA的各种不同的聚合物囊泡的动态光散射(DLS)数据。使用Z平均值(d,nm)，优选的DLS参数，所有聚合物囊泡的平均直径为120nm-180nm。Z平均尺寸是强度加权调和平均颗粒直径(intensity weightedharmonic mean particle diameter)，其值与聚合物囊泡的较早数据[Fu等人，2011，Lim.S.K,等人，2017]良好吻合。
实施例2的包封的eGFP DNA及转染数据：
使包封eGFP DNA的聚合物囊泡转染HEK293T细胞，转染后，通过荧光读板器在Ex530nm和Em 560nm下测量ACM聚合物囊泡的摄取并通过GFP荧光(Ex 485nm，Em 520nm)测量转染的效率。如图5所示，很明显，具有DNA的聚合物囊泡能够渗透到细胞中并释放DNA以将DNA表达成蛋白质，所有的聚合物囊泡制剂均被细胞摄取并能够释放DNA，而聚合物囊泡的释放与蛋白质表达的比率与其稳定性和可生物降解性良好关联(图5A)。与可生物降解的聚合物囊泡相比，诸如BD21之类的不可生物降解的聚合物囊泡的摄取量较小，并且表达水平较低。从细胞的荧光图像也观察到了相似的结果(图5B和图5C)。
实施例3的包封的OVA和效价：
通过进行初免和21天后的加强在C57bl/6小鼠中进行包封OVA的聚合物囊泡的免疫。将最终血样用于实施ELISA。如图6所示，很明显，与游离的OVA、具有佐剂的OVA或对照样品(单独的PBS)相比，包封OVA的聚合物囊泡是唯一能够触发效价的制剂。具有SAS的OVA未产生效价的原因可能是由于试验中使用的OVA量很少(每次注射约5ug)。因此，ACM包封的OVA能够以卵清蛋白特异性IgG血清效价形式触发针对OVA的B细胞应答。
实施例4的包封的HA和效价：
通过进行初免和21天后的加强在Balb/c小鼠中进行包封HA(H1N1/A/波多黎各/8/1934株，SEQ ID NO:7)的聚合物囊泡的免疫。将最终血样用于实施ELISA。如图7所示，很明显，与游离的HA或对照样品(单独的PBS)相比，包封HA的聚合物囊泡是唯一能够触发效价的制剂。游离HA未产生效价的原因可能是由于试验中使用的HA量很少(每次注射约100ng)。因此，ACM包封的HA能够以HA特异性IgG血清效价形式触发针对HA的B细胞应答。
实施例5的包封的MC-38新抗原肽和CD8 T细胞应答：
为了表明ACM包封的抗原能够触发CD8 T细胞应答，我们使用了定义明确的MC-38同源小鼠肿瘤模型，该模型依赖于已知CD8抗原肽的递送。已显示高量的与佐剂组合的这些肽在治疗性小鼠模型中触发肿瘤控制(例如Kuai等人，2017；Luo等人，2017)。此外，这些作用显然与小鼠血液中肽特异性CD8 T细胞的存在有关。因此，各组之间的任何肿瘤发展差异可直接归因于CD8 T细胞的肽特异性库(pool)的存在。MC-38细胞系接种后4天，按照本文“材料和方法”部分所述，用游离肽、具有或不具有抗PD1抗体治疗的ACM包封的肽(聚合物囊泡)免疫小鼠。如图8所示，与游离肽相比，采用包封的肽的免疫接种能够触发对肿瘤发展的抑制作用。当添加抗PD1抗体注射时，这种效果就会显著增强。该数据表明，ACM包封的肽(聚合物囊泡)最有可能是通过将这些肽递送至树突状细胞而得以触发肽特异性CD8 T细胞应答，从而控制了肿瘤。通过添加比如抗PD1抗体的检查点抑制剂增强了这一效果。事实上，已经表明MC-38在其细胞表面表达PD-L1分子，已知该分子可抑制肿瘤内T细胞的杀伤活性。因此，已知通过阻断PD1/PD-L1相互作用的抗体来抑制这种相互作用甚至进一步揭示了肿瘤特异性T细胞的存在。总而言之，这些数据清楚地表明，ACM包封的抗原(聚合物囊泡)无需添加佐剂即可触发抗原特异性CD8 T细胞应答。
实施例6的包封的PEDv纤突蛋白和IgG、IgA及病毒中和应答：
用ACM包封的PEDv纤突蛋白免疫接种小鼠并在21天后采用第二剂量加强。从最终血样中收集血清并将其用于ELISA。从图8可以看出，与用ACM疫苗接种的小鼠相比，与包被在ELISA平板上的SPIKE蛋白结合的抗体及效价与接种了灭活病毒的动物的水平相似。此外，通过常规病毒中和实验测试了这些血清中和PEDV毒株USA/科罗拉多/2013(CO/13)的能力(图9)。在此观察到，仅在用ACM疫苗(即ACM包封的PED Spike蛋白)免疫的小鼠的血清中发生了病毒中和，而在用灭活病毒疫苗接种的小鼠的血清中未观察到中和。此外，免疫接种了不同的包封了全长可溶性蛋白的聚合物囊泡(如BD21、PDMS46-PEO37(在图10中仅标记为“PDMS”)，PDMS46-PEO37/DSPE-PEG，PLA-PEG/大豆磷脂)和含有S1和S2区的聚合物囊泡混合物，并对血清进行病毒中和测试(图10)。从图10可以明显看出，用PBS样品免疫的小鼠组未显示任何病毒中和，而所有其它聚合物囊泡制剂均显示不同程度的病毒中和。此外，当给断奶仔猪进行ACM包封的PED SPIKE蛋白的口服疫苗接种时(在第1天初免和第14天加强免疫后)，从收集和经ELISA测量的粪便拭子中观察到针对该病毒的特异性IgA抗体增加(参见图11)。
实施例7的包封OVA和CpG的包封聚合物囊泡制剂及其在预防性B16-OVA模型中对肿瘤生长的作用
用不同的制剂作为初免施用于小鼠并在间隔7天后对C57BI/6小鼠皮下加强，然后在免疫接种的同一侧的右侧接种105个B16-OVA细胞。在除PBS对照组之外的所有组中，均将CpG用作佐剂。所有用PBS对照免疫的小鼠都发展了肿瘤(图13A和13B)。尽管免疫接种有明显的效果，但接受可溶性OVA的小鼠也倾向于发展肿瘤。在ACM-OVA组中，由于ACM的靶向作用，肿瘤的发展甚至被进一步延迟。更引人注目的是，在将OVA和CpG共同包封在同一聚合物囊泡中或单独包封(即在两个单独的BD21聚合物囊泡群中，然后共同施用)的组中，小鼠从未发生任何肿瘤(图13B)。这里使用的图例(以及在其它图中适用的图例)如下：“PBS”＝磷酸盐缓冲盐水对照，“游离OVA+CpG”＝游离OVA与游离CpG共同施用，“ACM-OVA+CpG”＝由BD21聚合物囊泡包封的OVA与游离CpG共同施用，“ACM-OVA-CpG”＝被BD21聚合物囊泡共同包封的游离OVA和CpG，以及“ACM-OVA+ACM-CpG”＝由BD21聚合物囊泡包封的OVA(代表本发明的第一聚合物囊泡群)与由BD21聚合物囊泡包封的CpG的单独的群(代表本发明的第二聚合物囊泡群)一起共同施用。这些结果表明，与诸如CpG的佐剂一起或平行于佐剂配制的ACM抗原产生了显著更大的T细胞库，其能够有效地杀伤肿瘤细胞。
实施例8的包封OVA和CpG的包封聚合物囊泡制剂及其在治疗性B16-OVA模型中对肿瘤生长的作用
按实施例8所述对小鼠进行处理。在本实验中，除PBS对照组外，各组中均将CpG用作佐剂。与PBS对照组相比，可溶性OVA以及ACM-OVA的皮下免疫接种(图14A和14B)能够延迟肿瘤的出现，但是两组都没有改善小鼠的总体存活。然而，游离OVA与ACM-CpG(包封在BD21聚合物囊泡中的CpG)共同施用的组和包封OVA的ACM(包封在BD21聚合物囊泡中的OVA，代表本发明的第一聚合物囊泡群)与包封CpG的ACM(代表本发明的第二聚合物囊泡群)共同施用的组在延缓肿瘤方面是缓慢的，并且8只小鼠中有4只在39天内保持无肿瘤(数据未示出)。这些结果表明ACM中的CpG提高了ACM包封的抗原的免疫原性。为了将上述数据与OVA特异性T细胞的存在直接关联，在第20天收集血样用于dextramer染色(图14C)。在与肿瘤负荷获得的相关结果，只有具有ACM包封的OVA或ACM包封的OVA与ACM包封的CpG的组合的组显示了显著的dextramer染色。此外，仅施用ACM包封的OVA(OVA包封在BD21聚合物囊泡中)和单独的ACM包封的CpG(CpG包封在BD21聚合物囊泡中)的组与肿瘤负荷和dextramer染色都相关。图14中的图例与图13中描述的那些相同。
实施例9的包封的Trp2和CpG包封聚合物囊泡制剂及其在治疗性黑素瘤B16F10模型中对肿瘤生长的作用
在致瘤性依赖于内源性表达的肿瘤肽抗原的B16F10肿瘤模型中用不同的ACM制剂处理小鼠。因此，选择在该模型中已经描述为免疫原性的SEQ ID NO:9的肽(酪氨酸酶相关蛋白-2，Trp2)作为用于免疫接种的抗原。首先将105个B16F10细胞接种到C57BI/6小鼠中，然后用下列不同的制剂免疫接种：1、PBS，2、游离Trp2与CpG共同施用(图例“游离Trp2+CpG”)，3、ACM(BD21)包封的Trp2与游离CpG共同施用(图例“ACM Trp2+CpG”)，4、游离Trp2与ACM(BD21)包封的CpG共同施用(图例“游离Trp2+ACM-CpG”)，和5、ACM(BD21)包封的Trp2与ACM(BD21)包封的CpG的单独群共同施用(图例“ACM-Trp2+ACM-CpG”)，检测各组的肿瘤生长(图15A)。在所有组中，用ACM包封的Trp2与CpG共同施用处理的小鼠，以及用ACM包封的Trp2与单独的ACM包封的CpG共同施用处理的小鼠显示了显著更强的肿瘤应答。这与第17天血液中CD8肿瘤细胞(图15B)和肿瘤中CD8 T细胞浸润(图15C)良好相关。
实施例11的与OVA偶联的ACM聚合物囊泡
图16示出了OVA偶联的聚合物囊泡的动态光散射(DLS)谱图，所述OVA偶联的聚合物囊泡与本发明的这些示例性聚合物囊泡的标准特征(聚合物囊泡的群/集合的平均尺寸：152nm；pdi：0.229)相匹配。
在充分透析后，使用SEC分离100μl的样品(图17A)，并收集了约180μl的48种级分。将对应于峰的合并级分冻干并重悬至500μl。将20μl与一些BSA标准品一起加载至SDS-PAGE上(图17B)。在对应于OVA蛋白的尺寸处检测到一条条带，表明OVA已成功偶联至ACM囊泡。将偶联的OVA的量评估为约20μg/ml。应注意，如对HA所观察到的(参见下文)，与OVA蛋白偶联的BD21并未改变迁移特性。这可能是由于以下事实：可能仅在每个OVA蛋白的一个半胱氨酸处修饰OVA，而所有其它五个半胱氨酸都被埋藏或参与二硫键结合。
实施例12的与HA偶联的BD21-CHO聚合物囊泡
DLS显示了略小的尺寸(平均尺寸：104nm)和可接受的pdi(pdi：0.191)(图18)。
如上所述通过SEC分离400μl终产物(参见图19，浅灰色迹线)。将对应于峰的级分分别加载至SDS-PAGE，然后膜转移以进行免疫印迹。检测到具有高分子量的条带，并且该条带似乎在该峰之外的之后的级分中减弱，表明该条带对应于缀合的HA。所观察到的高分子量可能是由于与HA偶联的众多聚合物分子增加了其分子量。此外，与游离HA相比，共价结合的聚合物可以部分地与加载缓冲液的SDS的结合竞争，从而降低了最终电荷状态。采用较低的负电荷，将预期缀合的HA蛋白迁移的更少，这将导致明显更高的分子量。透析样本(在SEC上未分离的)显示了残留的游离HA可能来自无法透析的聚集的HA。测定缀合的HA的浓度为约1μg/ml。
为了确定HA蛋白在颗粒表面是可及的，对在能够捕获BD21囊泡的Maxisorp板上涂覆过夜的全部收集的级分进行了ELISA。清楚地检测到了HA蛋白并当将ELISA谱图叠加在SEC上时，两个谱图恰好相关(图20，黑色迹线)，证实HA已与BD21偶联并且可用于抗体检测。
实施例13的免疫接种和血清效价测定(tittering)
如图21所示，具有或不具有佐剂的游离OVA不能引发IgG应答。有趣的是，在相似的剂量下，缀合的OVA能够比包封的OVA触发更强的效价应答。
采用以下制剂免疫Balb/c小鼠：阴性对照(PBS)、游离HA、BD21包封的HA和BD21缀合的HA。由于即使在充分透析之后的缀合HA的聚合物囊泡样品中还能观察到一些残余的游离HA，因此将SEC的合并级分用于免疫接种。所有免疫接种均具有相同量，即每只小鼠每次注射100-200ng HA。如图22所示，鉴于注射的HA的量很低，预期游离HA不能引发IgG应答。在这种情况下，缀合的HA能够比包封的HA触发仅稍高的应答。如在实施例7至9(佐剂包封)或实施例10(佐剂缀合)中所示例的，通过添加与佐剂关联的第二聚合物囊泡群，应答应当甚至更高。
实施例14：通过不同的施用途径用包封PEDV纤突蛋白的聚合物囊泡免疫接种豚鼠
使用杆状病毒系统表达PEDv纤突蛋白。使细胞溶液澄清，并加入ACM聚合物以及所需的添加剂以包封目的蛋白质。如实施例1所述进行包封。使用CpG ODN 2007(5'-TCG TCGTTG TCG TTT TGT CGT T-3'，SEQ ID NO:63，可从InvivoGen以目录号tlrl-2007商购获得)，如实施例1所述同样对CpG包封。
以3种不同的方式(口服、经鼻和I.M.)免疫豚鼠(I.M.组：N＝4；其它组：N＝5)。每种方法均给予40μl的ACM包封的PEDv纤突蛋白和ACM包封的CpG的1:1混合物。21天后用第二剂量加强。从最终的血样中收集血清并用于ELISA(数据未示出)。此外，通过常规的病毒中和测试这些血清中和PEDV毒株USA/科罗拉多/2013(CO/13)的能力(图25)。
实施例15：用包封MERS纤突蛋白的聚合物囊泡免疫接种小鼠
使用杆状病毒系统表达MERS-CoV纤突蛋白的可溶性片段(SEQ ID NO:43，对应于UniProtKB登录号No.K0BRG7的位置1-1297)并将其纯化。在10ml圆底烧瓶中形成10mg BD21聚合物的薄膜并将其充分干燥。将1ml蛋白溶液加入到圆底烧瓶中，并在旋转蒸发仪上以150rpm旋转4小时。从烧瓶中取出样品，并通过400nm过滤器，然后通过200nm过滤器挤出。然后使用尺寸排阻色谱分离含有ACM-蛋白质和游离蛋白质的挤出样品。收集对应于ACM/蛋白质级分的级分并将其用于免疫接种小鼠。通过进行初免和21天后加强采用包封的ACM-MERS-CoV和对照ACM免疫C57bl/6小鼠。在初免后42天收集最终血样。然后进行ELISA以评估效价：将MERS-CoV包被在Maxisorp平板(1μg/ml)上过夜。在室温下使用3％BSA封闭板达1小时。将所有血清以1:100稀释，并在室温下在平板上室温1小时。用PBS+0.05％Tween 20洗涤3次后，将二抗抗-小鼠HRP以1:10,000的稀释度室温温育1小时。加入TMB底物，并用1M HCl终止反应。在450nm下定量光密度(图26A)。使用蚀斑减少中和试验(PRNT)测试所有血清样品的MERS-CoV中和抗体(图26B)。
实施例16：采用PEDV纤突蛋白的不同结构域免疫接种小鼠
在杆状病毒系统(Baculo)中表达不同的纤突蛋白结构域。使细胞培养物澄清，并将该溶液用于ACM形成。将PEDV纤突蛋白S1结构域、S2结构域以及S1与S2结构域的混合物用于在无佐剂的情况下以200μl的剂量I.M.免疫接种至年龄为6-8周龄(n＝5)的Balb/c雌性小鼠中。
21天后用第二剂量加强动物。从最终的血样中收集血清并用于ELISA。此外，通过常规的病毒中和测试这些血清中和PEDV毒株USA/科罗拉多/2013(CO/13)的能力(图27)。
实施例17：使用杆状病毒表达系统的SPIKE蛋白SARS-CoV-2的表达和纯化
使用杆状病毒系统表达SARS-CoV-2纤突蛋白的可溶性片段(SEQ ID NO:36、40和65)，并使用传统的Ni-NTA亲和纯化从培养基中将其纯化。在10ml圆底烧瓶中形成10mgBD21聚合物薄膜并将其充分干燥。将1ml蛋白溶液加入到圆底烧瓶中，并在旋转蒸发仪上以150rpm旋转4小时。从烧瓶中取出样品，并通过400nm过滤器，然后通过200nm过滤器挤出。然后使用尺寸排阻色谱分离含有ACM-蛋白质和游离蛋白质的挤出样品。
实施例18：采用SARS-CoV-2纤突蛋白的不同结构域免疫接种小鼠
在第一项研究中，使用了具有或不具有佐剂的具有包封的S1-S2区域(SEQ ID NO:36)的ACM。在具有佐剂的情况下，ACM包封的SPIKE蛋白以1:1的比率与Sigma佐剂系统(一种由0.5mg来自明尼苏达沙门氏菌的单磷酰脂A(解毒的内毒素)和0.5mg在2％油(角鲨烯)-吐温80-水中的合成的海藻糖棒杆菌分枝菌酸二酯组成的水包油乳液)混合。将具有或不具有佐剂的包封S1-S2区(SEQ ID NO:36)的ACM与具有佐剂的包封S2区(SEQ ID NO:40)的ACM和PBS对照进行比较。
通过进行初免和21天后的加强，用包封的ACM-SARS-CoV2和对照ACM免疫小鼠。在初免35天后收集最终血样(图23B)。然后进行ELISA以评估针对SARS-CoV-2的IgG抗体效价。图23C示出了在第35天，在用下列制剂免疫的Balb/C小鼠中测得的IgG效价：BD21聚合物囊泡包封的可溶性S1和S2区段与佐剂共同施用(组1)，BD21聚合物囊泡包封的可溶性S1和S2区段(组2)，BD21聚合物囊泡包封的可溶性S2区段与佐剂共同施用(组3)，以及作为阴性对照的PBS(组4)。在通过具有包封的可溶性S1和S2区段的BD21聚合物囊泡，或者通过具有包封的可溶性S2区段的BD21聚合物囊泡与佐剂共同施用(分别为组1和组3)的疫苗接种中观察到了最高的IgG1效价，而通过单独施用包封在BD21聚合物囊泡中的可溶性S1和S2区段而不施用佐剂(组2)诱导的免疫应答较低。
此外，使用蚀斑减少中和试验(PRNT)评估SARS-CoV-2中和抗体。
在第二项研究中，对具有包封的S1-S2区(SEQ ID NO:65)的ACM、具有包封的S2区(SEQ ID NO:40)的ACM，单独或与ACM包封的CpG组合时的不同施用模式(即IM和IN)进行了比较。
通过进行初免和14天后的加强，用包封的ACM-SARS-CoV2和对照ACM免疫小鼠。在初免56天后收集最终血样。然后进行ELISA以评估针对SARS-CoV-2的抗体效价，此外，使用蚀斑减少中和试验(PRNT)评估SARS-CoV-2中和抗体。另外，通过冲洗肺气道收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。BALF将用于测量分泌型IgA和中和抗体。对于中和试验，将用连续稀释的血清或BALF温育SARS-CoV-2假病毒。
实施例19：采用ACM包封的SARS-CoV-2纤突蛋白和ACM包封的CpG佐剂免疫接种小鼠
在该实验中，将使用或不使用CpG佐剂的BD21包封的SARS-CoV-2纤突蛋白作为疫苗进行测试。对于该实验，使用了在杆状病毒/昆虫细胞系统中产生的全长可溶性SARS-CoV-2纤突蛋白(SEQ ID NO:65)。使用切向流过滤和离子交换色谱的组合从培养基中纯化蛋白质。为了确定包封对纤突蛋白抗原以及CpG佐剂的免疫原性的影响，制备了以下制剂：i)游离重组纤突蛋白(SEQ ID NO:65，“fSpike”)；ii)BD21聚合物囊泡包封的纤突蛋白(“ACM-Spike”)；iii)游离纤突蛋白和游离CpG佐剂(“fSpike fCpG”)的混合物；iv)BD21聚合物囊泡包封的纤突蛋白和BD21聚合物囊泡包封的CpG(ACM-Spike ACM-CpG)的混合物。
此后，在第0和14天通过皮下途径用四种制剂免疫6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠(参见图24A)。在第28天收集血液以评估针对SARS-CoV2纤突蛋白的抗体效价。与PBS阴性对照相比，在所有免疫小鼠中观察到血清IgG的明显增加，这表明了血清转化(图24B)。在fSpike和BD21聚合物囊泡纤突组之中，在后者中观察到IgG效价增加的趋势，这表明聚合物囊泡包封在改善纤突蛋白的免疫原性方面的益处。虽然与单独的fSpike相比，fSpike和fCpG的共同施用导致更高的IgG效价，但是图24B表明，通过共同施用聚合物囊泡包封的纤突蛋白(作为第一聚合物囊泡群)和聚合物囊泡包封的CpG(作为第二聚合物囊泡群的佐剂)实现了抗体应答的量级和均匀性的进一步改进。总之，这些数据表明，与单独或组合递送的未包封材料相比，作为抗原的聚合物囊泡包封的纤突蛋白和作为佐剂的聚合物囊泡包封的CpG的共同施用赋予了可测量的益处。
本领域技术人员将易于认识到，本发明非常适于实现所述的目的和获得其结果和优点以及其内固有的那些。此外，对于本领域技术人员显而易见的是，可以进行本文描述的本发明的不同取代和修饰，而不脱离本发明的范围和精神。本文所述的组合物、方法、操作程序、治疗、分子和具体化合物目前是某些实施方案的代表，是示例性的，而不意在限制本发明的范围。本领域技术人员将想到的其中的变化和其它用途将被包括在本发明的精神内，由权利要求书的范围限定。本说明书中之前公开的文献的列出或讨论不应一定理解为承认该文献为本领域现有技术的一部分或者为公知常识。
本文示例性地描述的发明可以适于在不存在本文未具体公开的任何一个或多个元件、一种或多种限制的情况下实施。因此，例如术语“包含”、“包括”、“含有”等应被广泛地理解且无限制。此外，本文采用的术语和表述用作描述性的术语而非限制，并且无意使用排除所示和所述特征的任何等同物或其部分的此类术语和表述，而是应该认识到，各种修改形式都在要求保护的发明的范围内。因而，应该理解，尽管本发明通过示例性实施方案和任选的特征进行了具体公开，本领域技术人员可能进行本文其中实施的发明的修改和变化，并且此类修改和变化认为是在本发明的范围内。
本发明在本文中已经作了广泛且概括性的描述。落入上位公开内容中的每一个较窄类别和亚类分组也构成本发明的部分。这包括本发明的概括性描述，条件是或者否定性限制是从类属中去除了任何主题内容，无论排除的材料是否在本文中具体描述。本文提及的所有的文献，包括专利申请和科学出版物均以引用方式并入文本以用于全部目的。
其它实施方案在权利要求之内。此外，在所述发明的特征或方面按照马库什组进行描述的情况下，本领域技术人员应认识到本发明也因此按照马库什组的任何单个成员或成员的亚组进行描述。
参考文献
Liu等人，Immune responses to vaccines delivered by encapsulation intoand/or adsorption onto cationic lipid-PLGA hybrid nanoparticles,Journal ofControlled Release,225(2016):230-239。
Hilbert等人，Biodegradable microspheres containing influenza Avaccine:immune response to mice,Vaccine 17(1999):1065-1073。
Miller等人，Adjuvant compositions and related methods,US9636397B2,Gerber等人，Adjuvant and vaccine compositions,US2015/0044242A1。
Maji等人，A lipid based antigen delivery system efficientlyfacilitates MHC class-I Antigen Presentation in Dendritic Cells to StimulateCD8+T cells,Scientific Reports 6(2016):27206。
Moon等人，Interlayer-crosslinked multilamellar vesicles as syntheticvaccines for potent humoral and cellular responses,Nature Materials 10(2011):243-251。
May等人，“In Vitro Expressed GPCR Inserted in Polymersome Membranesfor Ligand-Binding Studies”(2013)Angew.Chem.Int.Ed.,52,pages749-753Kuai等人，Designer vaccine nanodiscs for personalized cancer immunotherapy,Nat Mater.(2017)16(4):489-496。
Luo等人，A STING-activating nanovaccine for cancer immunotherapy,NatNanotechnol.(2017)12(7):648-654。
Quer等人，"Polymersomes enhance the immunogenicity of influenzasubunit vaccine",POLYMER CHEMISTRY,GB,(2012),vol.2,no.7,page1482。
Nallani等人，Method for eliciting an immune response to an immunogen,WO2014/077781A1。
Nallani等人，Proteopolymersomes:In vitro production of a membraneprotein in polymersome membranes(2011),Biointerphases,6(4),pages 153-157。
Neil等人，A Novel Method for the Encapsulation of Biomolecules intoPolymersomes via Direct Hydration,Langmuir(2009),25(16),9025–9029。
Rameez等人，Large Scale Production of Vesicles by Hollow FiberExtrusion:A Novel Method for Generating Polymersome Encapsulated HemoglobinDispersions Langmuir(2010)26(7),pp 5279–5285。
Stano等人，Tunable T cell immunity towards a protein antigen usingpolymersomes vs.solid-core nanoparticles,Biomaterials 34(2013):4339-4346。
Fu等人，Multicompartmentalized polymersomes for selectiveencapsulation of biomacromolecules,Chemical Communication,2011,47,2862-2864。
Lim.S.K,等人，Spontaneous formation of nanometer scale tubularvesicles in aqueous mixtures of lipid and block copolymer amphiphiles,SoftMatter 2017,1107-1115。
Scott等人，Dendritic cell activation and T cell priming with adjuvant-and antigen-loaded oxidation-sensitive polymersomes,Biomaterials 33(2012)6211e6。
Vasievich.E等人，Enantiospecific adjuvant activity of cationic lipidDOTAP in vancer vaccine,Cancer Immunol Immunother(2011)60:629-638。
Watson.D等人，Design considerations for liposomal vaccines:Influenceof formulation parameters on antibody and cell-mediated immune responses toliposome associated antigens,Vaccine(2012),30:2256-2272。
De Titta A,等人，Nanoparticle condjugation of CpG enhances adjuvancyfor cellular immunity and memory recall at low dose,PNAS(2013),110(49):19902-7。
Gursel.I等人，Sterically Stabilized Cationic Liposomes Improve theUptake and Immunostimulatory Activity of CpG Oligonucleotide,Journal ofImmunology 2001,167,3324-3328。
序列表
<110> ACM生物实验室私人有限公司
<120> 通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物
<130> LC22310001P
<150> EP19189549.9
<151> 2019-08-01
<150> EP20171327.8
<151> 2020-04-24
<160> 66
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Reps1 P45A肽
<400> 1
Gly Arg Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val
1 5 10 15
Val Leu Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg
20 25
<210> 2
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Adpgk R304M肽
<400> 2
Gly Ile Pro Val His Leu Glu Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu
1 5 10 15
Met Ser Ser Ile Val His Gln Gln Val Phe Pro Thr
20 25
<210> 3
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Dpagt1 V213L肽
<400> 3
Glu Ala Gly Gln Ser Leu Val Ile Ser Ala Ser Ile Ile Val Phe Asn
1 5 10 15
Leu Leu Glu Leu Glu Gly Asp Tyr Arg
20 25
<210> 4
<211> 386
<212> PRT
<213>原鸡
<400> 4
Met Gly Ser Ile Gly Ala Ala Ser Met Glu Phe Cys Phe Asp Val Phe
1 5 10 15
Lys Glu Leu Lys Val His His Ala Asn Glu Asn Ile Phe Tyr Cys Pro
20 25 30
Ile Ala Ile Met Ser Ala Leu Ala Met Val Tyr Leu Gly Ala Lys Asp
35 40 45
Ser Thr Arg Thr Gln Ile Asn Lys Val Val Arg Phe Asp Lys Leu Pro
50 55 60
Gly Phe Gly Asp Ser Ile Glu Ala Gln Cys Gly Thr Ser Val Asn Val
65 70 75 80
His Ser Ser Leu Arg Asp Ile Leu Asn Gln Ile Thr Lys Pro Asn Asp
85 90 95
Val Tyr Ser Phe Ser Leu Ala Ser Arg Leu Tyr Ala Glu Glu Arg Tyr
100 105 110
Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Val Lys Glu Leu Tyr Arg Gly
115 120 125
Gly Leu Glu Pro Ile Asn Phe Gln Thr Ala Ala Asp Gln Ala Arg Glu
130 135 140
Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile Ile Arg Asn
145 150 155 160
Val Leu Gln Pro Ser Ser Val Asp Ser Gln Thr Ala Met Val Leu Val
165 170 175
Asn Ala Ile Val Phe Lys Gly Leu Trp Glu Lys Ala Phe Lys Asp Glu
180 185 190
Asp Thr Gln Ala Met Pro Phe Arg Val Thr Glu Gln Glu Ser Lys Pro
195 200 205
Val Gln Met Met Tyr Gln Ile Gly Leu Phe Arg Val Ala Ser Met Ala
210 215 220
Ser Glu Lys Met Lys Ile Leu Glu Leu Pro Phe Ala Ser Gly Thr Met
225 230 235 240
Ser Met Leu Val Leu Leu Pro Asp Glu Val Ser Gly Leu Glu Gln Leu
245 250 255
Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asn
260 265 270
Val Met Glu Glu Arg Lys Ile Lys Val Tyr Leu Pro Arg Met Lys Met
275 280 285
Glu Glu Lys Tyr Asn Leu Thr Ser Val Leu Met Ala Met Gly Ile Thr
290 295 300
Asp Val Phe Ser Ser Ser Ala Asn Leu Ser Gly Ile Ser Ser Ala Glu
305 310 315 320
Ser Leu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn
325 330 335
Glu Ala Gly Arg Glu Val Val Gly Ser Ala Glu Ala Gly Val Asp Ala
340 345 350
Ala Ser Val Ser Glu Glu Phe Arg Ala Asp His Pro Phe Leu Phe Cys
355 360 365
Ile Lys His Ile Ala Thr Asn Ala Val Leu Phe Phe Gly Arg Cys Val
370 375 380
Ser Pro
385
<210> 5
<211> 566
<212> PRT
<213> 甲型流感病毒
<400> 5
Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Thr Thr Ala Asn
1 5 10 15
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val
50 55 60
Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Ser Asn Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asn Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp
130 135 140
Ser Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Leu Asn Gln Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Thr Ala Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Thr Ser Arg Tyr Ser
210 215 220
Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln
225 230 235 240
Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe
260 265 270
Thr Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Glu Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His
405 410 415
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu
500 505 510
Asn Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 6
<211> 566
<212> PRT
<213> 甲型流感病毒
<220>
<221> misc_feature
<222> (239)..(240)
<223> Xaa可以为任何天然存在的氨基酸
<400> 6
Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn
1 5 10 15
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val
50 55 60
Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Ser Ser Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp
130 135 140
Ser Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Ile His His Pro Pro Thr Ser Ala Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Thr Tyr Val Phe Val Gly Ser Ser Arg Tyr Ser
210 215 220
Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Ile Arg Pro Lys Val Arg Xaa Xaa
225 230 235 240
Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe
260 265 270
Ala Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His
405 410 415
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu
500 505 510
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 7
<211> 565
<212> PRT
<213> 甲型流感病毒
<400> 7
Met Lys Ala Asn Leu Leu Val Leu Leu Cys Ala Leu Ala Ala Ala Asp
1 5 10 15
Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Ser His Asn Gly Lys Leu Cys Arg Leu Lys Gly Ile
50 55 60
Ala Pro Leu Gln Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Asp Pro Leu Leu Pro Val Arg Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Pro Asn Ser Glu Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Glu Ser Ser Trp Pro Asn His Asn
130 135 140
Thr Asn Gly Val Thr Ala Ala Cys Ser His Glu Gly Lys Ser Ser Phe
145 150 155 160
Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Leu Thr Glu Lys Glu Gly Ser Tyr Pro Lys
165 170 175
Leu Lys Asn Ser Tyr Val Asn Lys Lys Gly Lys Glu Val Leu Val Leu
180 185 190
Trp Gly Ile His His Pro Pro Asn Ser Lys Glu Gln Gln Asn Leu Tyr
195 200 205
Gln Asn Glu Asn Ala Tyr Val Ser Val Val Thr Ser Asn Tyr Asn Arg
210 215 220
Arg Phe Thr Pro Glu Ile Ala Glu Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln Ala
225 230 235 240
Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ile
245 250 255
Ile Phe Glu Ala Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Met Tyr Ala Phe Ala
260 265 270
Leu Ser Arg Gly Phe Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Ser Met
275 280 285
His Glu Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Ser
290 295 300
Ser Leu Pro Tyr Gln Asn Ile His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro
305 310 315 320
Lys Tyr Val Arg Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn
325 330 335
Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe
340 345 350
Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His
355 360 365
His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr
370 375 380
Gln Asn Ala Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Thr Val Ile Glu
385 390 395 400
Lys Met Asn Ile Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu
405 410 415
Glu Lys Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu
420 425 430
Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu
435 440 445
Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys
450 455 460
Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys
465 470 475 480
Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Arg
485 490 495
Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn
500 505 510
Arg Glu Lys Val Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Ile Tyr Gln
515 520 525
Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Leu Val
530 535 540
Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln
545 550 555 560
Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 8
<211> 566
<212> PRT
<213> 甲型流感病毒
<400> 8
Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn
1 5 10 15
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val
50 55 60
Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Pro Ser Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp
130 135 140
Ser Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Leu Ser Lys Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Ser Ala Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Ser Ser Arg Tyr Ser
210 215 220
Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Ile Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln
225 230 235 240
Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe
260 265 270
Ala Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His
405 410 415
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu
500 505 510
Asn Arg Glu Glu Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 9
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8 Trp2 173-196肽
<400> 9
Gln Pro Gln Ile Ala Asn Cys Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu
1 5 10 15
His Tyr Tyr Ser Val Arg Asp Thr
20
<210> 10
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD4 M30 Kif18b K739N肽
<400> 10
Pro Ser Lys Pro Ser Phe Gln Glu Phe Val Asp Trp Glu Asn Val Ser
1 5 10 15
Pro Glu Leu Asn Ser Thr Asp Gln Pro Phe Leu
20 25
<210> 11
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD4 M44 Cpsf3l D314N肽
<400> 11
Glu Phe Lys His Ile Lys Ala Phe Asp Arg Thr Phe Ala Asn Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro Met Val Val Phe Ala Thr Pro Gly Met
20 25
<210> 12
<211> 1309
<212> PRT
<213> 猪流行性腹泻病毒
<400> 12
Leu Pro Gln Asp Val Thr Arg Cys Ser Ala Asn Thr Asn Phe Arg Arg
1 5 10 15
Phe Phe Ser Lys Phe Asn Val Gln Ala Pro Ala Val Val Val Leu Gly
20 25 30
Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Glu Asn Gln Gly Val Asn Ser Thr Trp Tyr
35 40 45
Cys Ala Gly Gln His Pro Thr Ala Ser Gly Val His Gly Ile Phe Leu
50 55 60
Ser His Ile Arg Gly Gly His Gly Phe Glu Ile Gly Ile Ser Gln Glu
65 70 75 80
Pro Phe Asp Pro Ser Gly Tyr Gln Leu Tyr Leu His Lys Ala Thr Asn
85 90 95
Gly Asn Thr Asn Ala Thr Ala Arg Leu Arg Ile Cys Gln Phe Pro Ser
100 105 110
Ile Lys Thr Leu Gly Pro Thr Ala Asn Asn Asp Val Thr Thr Gly Arg
115 120 125
Asn Cys Leu Phe Asn Lys Ala Ile Pro Ala His Met Ser Glu His Ser
130 135 140
Val Val Gly Ile Thr Trp Asp Asn Asp Arg Val Thr Val Phe Ser Asp
145 150 155 160
Lys Ile Tyr Tyr Phe Tyr Phe Lys Asn Asp Trp Ser Arg Val Ala Thr
165 170 175
Lys Cys Tyr Asn Ser Gly Gly Cys Ala Met Gln Tyr Val Tyr Glu Pro
180 185 190
Thr Tyr Tyr Met Leu Asn Val Thr Ser Ala Gly Glu Asp Gly Ile Ser
195 200 205
Tyr Gln Pro Cys Thr Ala Asn Cys Ile Gly Tyr Ala Ala Asn Val Phe
210 215 220
Ala Thr Glu Pro Asn Gly His Ile Pro Glu Gly Phe Ser Phe Asn Asn
225 230 235 240
Trp Phe Leu Leu Ser Asn Asp Ser Thr Leu Val His Gly Lys Val Val
245 250 255
Ser Asn Gln Pro Leu Leu Val Asn Cys Leu Leu Ala Ile Pro Lys Ile
260 265 270
Tyr Gly Leu Gly Gln Phe Phe Ser Phe Asn Gln Thr Ile Asp Gly Val
275 280 285
Cys Asn Gly Ala Ala Val Gln Arg Ala Pro Glu Ala Leu Arg Phe Asn
290 295 300
Val Asp Asp Thr Ser Val Ile Leu Ala Glu Gly Ser Ile Val Leu His
305 310 315 320
Thr Ala Leu Gly Thr Asn Phe Ser Phe Val Cys Ser Asn Ser Ser Asp
325 330 335
Pro His Leu Ala Thr Phe Ala Ile Pro Leu Gly Ala Thr Gln Val Pro
340 345 350
Tyr Tyr Cys Phe Leu Lys Val Asp Thr Tyr Asn Ser Thr Val Tyr Lys
355 360 365
Phe Leu Ala Val Leu His Pro Thr Val Arg Glu Ile Val Ile Thr Lys
370 375 380
Tyr Gly Asp Val Tyr Val Asn Gly Phe Gly Tyr Leu His Leu Gly Leu
385 390 395 400
Leu Asp Ala Val Thr Ile Asn Phe Thr Gly His Gly Thr Asp Asp Asp
405 410 415
Val Pro Gly Phe Trp Thr Ile Ala Ser Thr Asn Phe Val Asp Ala Leu
420 425 430
Ile Glu Val Gln Gly Thr Ala Ile Gln Arg Ile Leu Tyr Cys Asp Asp
435 440 445
Pro Val Ser Gln Leu Lys Cys Ser Gln Val Ala Phe Asp Leu Asp Asp
450 455 460
Gly Phe Tyr Pro Ile Ser Ser Arg Asn Leu Leu Ser His Glu Gln Pro
465 470 475 480
Ile Ser Phe Val Thr Leu Pro Ser Phe Asn Asp His Ser Phe Val Asn
485 490 495
Ile Thr Val Ser Ala Ser Phe Gly Gly His Ser Gly Ala Asn Leu Ile
500 505 510
Ala Ser Asp Thr Thr Ile Asn Gly Phe Ser Ser Phe Cys Val Asp Thr
515 520 525
Arg Gln Phe Thr Ile Ser Leu Phe Tyr Asn Val Thr Asn Ser Tyr Gly
530 535 540
Tyr Val Ser Lys Ser Gln Asp Ser Asn Cys Pro Phe Thr Leu Gln Ser
545 550 555 560
Val Asn Asp Tyr Leu Ser Phe Ser Lys Phe Cys Val Ser Thr Ser Leu
565 570 575
Leu Ala Ser Ala Cys Thr Ile Asp Leu Phe Gly Tyr Pro Glu Phe Gly
580 585 590
Ser Gly Val Lys Phe Thr Ser Leu Tyr Phe Gln Phe Thr Lys Gly Glu
595 600 605
Leu Ile Thr Gly Thr Pro Lys Pro Leu Glu Gly Val Thr Asp Val Ser
610 615 620
Phe Met Thr Leu Asp Val Cys Thr Lys Tyr Thr Ile Tyr Gly Phe Lys
625 630 635 640
Gly Glu Gly Ile Ile Thr Leu Thr Asn Ser Ser Phe Leu Ala Gly Val
645 650 655
Tyr Tyr Thr Ser Asp Ser Gly Gln Leu Leu Ala Phe Lys Asn Val Thr
660 665 670
Ser Gly Ala Val Tyr Ser Val Thr Pro Cys Ser Phe Ser Glu Gln Ala
675 680 685
Ala Tyr Val Asp Asp Asp Ile Val Gly Val Ile Ser Ser Leu Ser Asn
690 695 700
Ser Thr Phe Asn Ser Thr Arg Glu Leu Pro Gly Phe Phe Tyr His Ser
705 710 715 720
Asn Asp Gly Ser Asn Cys Thr Glu Pro Val Leu Val Tyr Ser Asn Ile
725 730 735
Gly Val Cys Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Val Pro Ser Gln Ser Gly
740 745 750
Gln Val Lys Ile Ala Pro Thr Val Ile Gly Asn Ile Ser Ile Pro Thr
755 760 765
Asn Phe Ser Met Ser Ile Arg Thr Glu Tyr Leu Gln Leu Tyr Asn Thr
770 775 780
Pro Val Ser Val Asp Cys Ala Thr Tyr Val Cys Asn Gly Asn Ser Arg
785 790 795 800
Cys Lys Gln Leu Leu Thr Gln Tyr Thr Ala Ala Cys Lys Thr Ile Glu
805 810 815
Ser Ala Leu Gln Leu Ser Ala Arg Leu Glu Ser Val Glu Val Asn Ser
820 825 830
Met Leu Thr Ile Ser Glu Glu Ala Leu Gln Leu Ala Thr Ile Ser Ser
835 840 845
Phe Asn Gly Asp Gly Tyr Asn Phe Thr Asn Val Leu Gly Val Ser Val
850 855 860
Tyr Asp Pro Ala Ser Gly Arg Val Val Gln Lys Arg Ser Phe Ile Glu
865 870 875 880
Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Val Thr Asn Gly Leu Gly Thr Val Asp
885 890 895
Glu Asp Tyr Lys Arg Cys Ser Asn Gly Arg Ala Val Ala Asp Leu Val
900 905 910
Cys Ala Gln Tyr Tyr Ser Gly Val Met Val Leu Pro Gly Val Val Asp
915 920 925
Ala Glu Lys Leu His Met Tyr Ser Ala Ser Leu Ile Gly Gly Met Val
930 935 940
Phe Gly Gly Phe Thr Ala Ala Ala Ala Leu Pro Phe Ser Tyr Ala Val
945 950 955 960
Gln Ala Arg Leu Asn Tyr Leu Ala Leu Gln Thr Asp Val Leu Gln Arg
965 970 975
Asn Gln Gln Leu Leu Ala Glu Ser Phe Asn Ser Ala Ile Gly Asn Ile
980 985 990
Thr Ser Ala Phe Glu Ser Val Lys Glu Ala Ile Ser Gln Thr Ser Lys
995 1000 1005
Gly Leu Asn Thr Val Ala His Ala Leu Thr Lys Val Gln Glu Phe Val
1010 1015 1020
Asn Ser Gln Gly Ala Ala Leu Thr Gln Leu Thr Val Gln Pro Gln His
1025 1030 1035 1040
Asn Phe Gln Ala Ile Ser Ser Ser Ile Asp Asp Ile Tyr Ser Arg Leu
1045 1050 1055
Asp Ile Leu Ser Ala Asp Val Gln Val Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg
1060 1065 1070
Leu Ser Ala Leu Tyr Cys Phe Val Ala Gln Thr Leu Thr Lys Tyr Thr
1075 1080 1085
Glu Val Gln Ala Ser Arg Lys Leu Ala Gln Gln Lys Val Asn Glu Cys
1090 1095 1100
Val Lys Ser Gln Ser Gln Arg Tyr Gly Phe Cys Gly Gly Asp Gly Glu
1105 1110 1115 1120
His Ile Phe Ser Leu Val Gln Ala Ala Pro Gln Gly Leu Leu Phe Leu
1125 1130 1135
His Thr Val Leu Val Pro Gly Asp Phe Val Asn Val Ile Ala Ile Ala
1140 1145 1150
Gly Leu Cys Val Asn Asp Glu Ile Ala Leu Thr Leu Arg Glu Pro Gly
1155 1160 1165
Leu Val Leu Phe Thr His Glu Leu Gln Asn Tyr Asn Ala Thr Glu Tyr
1170 1175 1180
Phe Val Ser Ser Arg Arg Met Phe Glu Pro Arg Lys Pro Thr Ala Ser
1185 1190 1195 1200
Asp Phe Val Gln Ile Glu Ser Cys Val Val Thr Tyr Val Asn Leu Thr
1205 1210 1215
Arg Asp Gln Leu Pro Asp Val Ile Pro Asp Tyr Ile Asp Val Asn Lys
1220 1225 1230
Thr Leu Asp Glu Ile Leu Ala Ser Leu Pro Asn Arg Thr Gly Pro Ser
1235 1240 1245
Leu Pro Leu Asp Val Phe Asn Ala Thr Tyr Phe Asn Leu Thr Gly Glu
1250 1255 1260
Met Ala Asp Leu Glu Leu Arg Ser Glu Ser Leu Arg Asn Asn Thr Glu
1265 1270 1275 1280
Glu Leu Gln Ser Leu Ile Tyr Asn Ile Asn Asn Thr Leu Val Asp Leu
1285 1290 1295
Glu Trp Leu Asn Arg Val Glu Thr Tyr Ile Lys Trp Pro
1300 1305
<210> 13
<211> 719
<212> PRT
<213> 猪流行性腹泻病毒
<400> 13
Leu Pro Gln Asp Val Thr Arg Cys Ser Ala Asn Thr Asn Phe Arg Arg
1 5 10 15
Phe Phe Ser Lys Phe Asn Val Gln Ala Pro Ala Val Val Val Leu Gly
20 25 30
Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Glu Asn Gln Gly Val Asn Ser Thr Trp Tyr
35 40 45
Cys Ala Gly Gln His Pro Thr Ala Ser Gly Val His Gly Ile Phe Leu
50 55 60
Ser His Ile Arg Gly Gly His Gly Phe Glu Ile Gly Ile Ser Gln Glu
65 70 75 80
Pro Phe Asp Pro Ser Gly Tyr Gln Leu Tyr Leu His Lys Ala Thr Asn
85 90 95
Gly Asn Thr Asn Ala Thr Ala Arg Leu Arg Ile Cys Gln Phe Pro Ser
100 105 110
Ile Lys Thr Leu Gly Pro Thr Ala Asn Asn Asp Val Thr Thr Gly Arg
115 120 125
Asn Cys Leu Phe Asn Lys Ala Ile Pro Ala His Met Ser Glu His Ser
130 135 140
Val Val Gly Ile Thr Trp Asp Asn Asp Arg Val Thr Val Phe Ser Asp
145 150 155 160
Lys Ile Tyr Tyr Phe Tyr Phe Lys Asn Asp Trp Ser Arg Val Ala Thr
165 170 175
Lys Cys Tyr Asn Ser Gly Gly Cys Ala Met Gln Tyr Val Tyr Glu Pro
180 185 190
Thr Tyr Tyr Met Leu Asn Val Thr Ser Ala Gly Glu Asp Gly Ile Ser
195 200 205
Tyr Gln Pro Cys Thr Ala Asn Cys Ile Gly Tyr Ala Ala Asn Val Phe
210 215 220
Ala Thr Glu Pro Asn Gly His Ile Pro Glu Gly Phe Ser Phe Asn Asn
225 230 235 240
Trp Phe Leu Leu Ser Asn Asp Ser Thr Leu Val His Gly Lys Val Val
245 250 255
Ser Asn Gln Pro Leu Leu Val Asn Cys Leu Leu Ala Ile Pro Lys Ile
260 265 270
Tyr Gly Leu Gly Gln Phe Phe Ser Phe Asn Gln Thr Ile Asp Gly Val
275 280 285
Cys Asn Gly Ala Ala Val Gln Arg Ala Pro Glu Ala Leu Arg Phe Asn
290 295 300
Val Asp Asp Thr Ser Val Ile Leu Ala Glu Gly Ser Ile Val Leu His
305 310 315 320
Thr Ala Leu Gly Thr Asn Phe Ser Phe Val Cys Ser Asn Ser Ser Asp
325 330 335
Pro His Leu Ala Thr Phe Ala Ile Pro Leu Gly Ala Thr Gln Val Pro
340 345 350
Tyr Tyr Cys Phe Leu Lys Val Asp Thr Tyr Asn Ser Thr Val Tyr Lys
355 360 365
Phe Leu Ala Val Leu His Pro Thr Val Arg Glu Ile Val Ile Thr Lys
370 375 380
Tyr Gly Asp Val Tyr Val Asn Gly Phe Gly Tyr Leu His Leu Gly Leu
385 390 395 400
Leu Asp Ala Val Thr Ile Asn Phe Thr Gly His Gly Thr Asp Asp Asp
405 410 415
Val Pro Gly Phe Trp Thr Ile Ala Ser Thr Asn Phe Val Asp Ala Leu
420 425 430
Ile Glu Val Gln Gly Thr Ala Ile Gln Arg Ile Leu Tyr Cys Asp Asp
435 440 445
Pro Val Ser Gln Leu Lys Cys Ser Gln Val Ala Phe Asp Leu Asp Asp
450 455 460
Gly Phe Tyr Pro Ile Ser Ser Arg Asn Leu Leu Ser His Glu Gln Pro
465 470 475 480
Ile Ser Phe Val Thr Leu Pro Ser Phe Asn Asp His Ser Phe Val Asn
485 490 495
Ile Thr Val Ser Ala Ser Phe Gly Gly His Ser Gly Ala Asn Leu Ile
500 505 510
Ala Ser Asp Thr Thr Ile Asn Gly Phe Ser Ser Phe Cys Val Asp Thr
515 520 525
Arg Gln Phe Thr Ile Ser Leu Phe Tyr Asn Val Thr Asn Ser Tyr Gly
530 535 540
Tyr Val Ser Lys Ser Gln Asp Ser Asn Cys Pro Phe Thr Leu Gln Ser
545 550 555 560
Val Asn Asp Tyr Leu Ser Phe Ser Lys Phe Cys Val Ser Thr Ser Leu
565 570 575
Leu Ala Ser Ala Cys Thr Ile Asp Leu Phe Gly Tyr Pro Glu Phe Gly
580 585 590
Ser Gly Val Lys Phe Thr Ser Leu Tyr Phe Gln Phe Thr Lys Gly Glu
595 600 605
Leu Ile Thr Gly Thr Pro Lys Pro Leu Glu Gly Val Thr Asp Val Ser
610 615 620
Phe Met Thr Leu Asp Val Cys Thr Lys Tyr Thr Ile Tyr Gly Phe Lys
625 630 635 640
Gly Glu Gly Ile Ile Thr Leu Thr Asn Ser Ser Phe Leu Ala Gly Val
645 650 655
Tyr Tyr Thr Ser Asp Ser Gly Gln Leu Leu Ala Phe Lys Asn Val Thr
660 665 670
Ser Gly Ala Val Tyr Ser Val Thr Pro Cys Ser Phe Ser Glu Gln Ala
675 680 685
Ala Tyr Val Asp Asp Asp Ile Val Gly Val Ile Ser Ser Leu Ser Asn
690 695 700
Ser Thr Phe Asn Ser Thr Arg Glu Leu Pro Gly Phe Phe Tyr His
705 710 715
<210> 14
<211> 590
<212> PRT
<213> 猪流行性腹泻病毒
<400> 14
Ser Asn Asp Gly Ser Asn Cys Thr Glu Pro Val Leu Val Tyr Ser Asn
1 5 10 15
Ile Gly Val Cys Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Val Pro Ser Gln Ser
20 25 30
Gly Gln Val Lys Ile Ala Pro Thr Val Ile Gly Asn Ile Ser Ile Pro
35 40 45
Thr Asn Phe Ser Met Ser Ile Arg Thr Glu Tyr Leu Gln Leu Tyr Asn
50 55 60
Thr Pro Val Ser Val Asp Cys Ala Thr Tyr Val Cys Asn Gly Asn Ser
65 70 75 80
Arg Cys Lys Gln Leu Leu Thr Gln Tyr Thr Ala Ala Cys Lys Thr Ile
85 90 95
Glu Ser Ala Leu Gln Leu Ser Ala Arg Leu Glu Ser Val Glu Val Asn
100 105 110
Ser Met Leu Thr Ile Ser Glu Glu Ala Leu Gln Leu Ala Thr Ile Ser
115 120 125
Ser Phe Asn Gly Asp Gly Tyr Asn Phe Thr Asn Val Leu Gly Val Ser
130 135 140
Val Tyr Asp Pro Ala Ser Gly Arg Val Val Gln Lys Arg Ser Phe Ile
145 150 155 160
Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Val Thr Asn Gly Leu Gly Thr Val
165 170 175
Asp Glu Asp Tyr Lys Arg Cys Ser Asn Gly Arg Ala Val Ala Asp Leu
180 185 190
Val Cys Ala Gln Tyr Tyr Ser Gly Val Met Val Leu Pro Gly Val Val
195 200 205
Asp Ala Glu Lys Leu His Met Tyr Ser Ala Ser Leu Ile Gly Gly Met
210 215 220
Val Phe Gly Gly Phe Thr Ala Ala Ala Ala Leu Pro Phe Ser Tyr Ala
225 230 235 240
Val Gln Ala Arg Leu Asn Tyr Leu Ala Leu Gln Thr Asp Val Leu Gln
245 250 255
Arg Asn Gln Gln Leu Leu Ala Glu Ser Phe Asn Ser Ala Ile Gly Asn
260 265 270
Ile Thr Ser Ala Phe Glu Ser Val Lys Glu Ala Ile Ser Gln Thr Ser
275 280 285
Lys Gly Leu Asn Thr Val Ala His Ala Leu Thr Lys Val Gln Glu Phe
290 295 300
Val Asn Ser Gln Gly Ala Ala Leu Thr Gln Leu Thr Val Gln Pro Gln
305 310 315 320
His Asn Phe Gln Ala Ile Ser Ser Ser Ile Asp Asp Ile Tyr Ser Arg
325 330 335
Leu Asp Ile Leu Ser Ala Asp Val Gln Val Asp Arg Leu Ile Thr Gly
340 345 350
Arg Leu Ser Ala Leu Tyr Cys Phe Val Ala Gln Thr Leu Thr Lys Tyr
355 360 365
Thr Glu Val Gln Ala Ser Arg Lys Leu Ala Gln Gln Lys Val Asn Glu
370 375 380
Cys Val Lys Ser Gln Ser Gln Arg Tyr Gly Phe Cys Gly Gly Asp Gly
385 390 395 400
Glu His Ile Phe Ser Leu Val Gln Ala Ala Pro Gln Gly Leu Leu Phe
405 410 415
Leu His Thr Val Leu Val Pro Gly Asp Phe Val Asn Val Ile Ala Ile
420 425 430
Ala Gly Leu Cys Val Asn Asp Glu Ile Ala Leu Thr Leu Arg Glu Pro
435 440 445
Gly Leu Val Leu Phe Thr His Glu Leu Gln Asn Tyr Asn Ala Thr Glu
450 455 460
Tyr Phe Val Ser Ser Arg Arg Met Phe Glu Pro Arg Lys Pro Thr Ala
465 470 475 480
Ser Asp Phe Val Gln Ile Glu Ser Cys Val Val Thr Tyr Val Asn Leu
485 490 495
Thr Arg Asp Gln Leu Pro Asp Val Ile Pro Asp Tyr Ile Asp Val Asn
500 505 510
Lys Thr Leu Asp Glu Ile Leu Ala Ser Leu Pro Asn Arg Thr Gly Pro
515 520 525
Ser Leu Pro Leu Asp Val Phe Asn Ala Thr Tyr Phe Asn Leu Thr Gly
530 535 540
Glu Met Ala Asp Leu Glu Leu Arg Ser Glu Ser Leu Arg Asn Asn Thr
545 550 555 560
Glu Glu Leu Gln Ser Leu Ile Tyr Asn Ile Asn Asn Thr Leu Val Asp
565 570 575
Leu Glu Trp Leu Asn Arg Val Glu Thr Tyr Ile Lys Trp Pro
580 585 590
<210> 15
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 增强型GFP
<400> 15
Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu
1 5 10 15
Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Arg Gly Glu Gly
20 25 30
Glu Gly Asp Ala Thr Asn Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr
35 40 45
Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr
50 55 60
Tyr Gly Val Leu Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Arg His
65 70 75 80
Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr
85 90 95
Ile Ser Phe Lys Asp Asp Gly Thr Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys
100 105 110
Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp
115 120 125
Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Phe
130 135 140
Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Thr Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile
145 150 155 160
Lys Ala Tyr Phe Lys Ile Arg His Asn Val Glu Asp Gly Ser Val Gln
165 170 175
Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val
180 185 190
Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Val Leu Ser Lys
195 200 205
Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Asp Val Thr
210 215 220
Ala Ala Gly Ile Thr His Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys
225 230 235
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8 T细胞表位
<400> 16
Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8 T细胞表位
<400> 17
Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu
1 5
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 寡核苷酸ODN1826
<400> 18
tccatgacgt tcctgacgtt 20
<210> 19
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 19
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 20
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 20
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Leu Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 21
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 21
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 22
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 22
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Lys Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 23
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 23
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 24
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 24
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu Tyr Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 25
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 25
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Val Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 26
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 26
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Asn Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 27
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 27
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Gly Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 28
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 28
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Arg Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 29
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<220>
<221> misc_feature
<222> (528)..(528)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 29
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Xaa
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 30
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 30
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Val Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 31
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 31
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Cys Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 32
<211> 1273
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 32
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Trp Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 33
<211> 1272
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 33
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser
145 150 155 160
Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met
165 170 175
Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val
180 185 190
Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro
195 200 205
Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro
210 215 220
Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu
225 230 235 240
Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly
245 250 255
Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg
260 265 270
Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val
275 280 285
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
290 295 300
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
305 310 315 320
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
325 330 335
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
340 345 350
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
355 360 365
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
370 375 380
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
385 390 395 400
Ile Arg Gly Asp Glu Val Ile Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
405 410 415
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
420 425 430
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
435 440 445
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
450 455 460
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
465 470 475 480
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
485 490 495
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
500 505 510
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
515 520 525
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly
530 535 540
Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro
545 550 555 560
Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg
565 570 575
Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly
580 585 590
Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala
595 600 605
Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His
610 615 620
Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser Asn
625 630 635 640
Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val Asn
645 650 655
Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser
660 665 670
Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala Ser
675 680 685
Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val
690 695 700
Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser
705 710 715 720
Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp
725 730 735
Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu
740 745 750
Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly
755 760 765
Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val
770 775 780
Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn
785 790 795 800
Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe
805 810 815
Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe
820 825 830
Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu
835 840 845
Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu
850 855 860
Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr
865 870 875 880
Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro
885 890 895
Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln
900 905 910
Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser
915 920 925
Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu
930 935 940
Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr
945 950 955 960
Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu
965 970 975
Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile
980 985 990
Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr
995 1000 1005
Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu
1010 1015 1020
Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg
1025 1030 1035
Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln
1040 1045 1050
Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro
1055 1060 1065
Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp
1070 1075 1080
Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly
1085 1090 1095
Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile
1100 1105 1110
Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val
1115 1120 1125
Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu
1130 1135 1140
Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His
1145 1150 1155
Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala
1160 1165 1170
Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val
1175 1180 1185
Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly
1190 1195 1200
Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly
1205 1210 1215
Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu
1220 1225 1230
Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys Ser
1235 1240 1245
Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val
1250 1255 1260
Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 34
<211> 1198
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 34
Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser
1 5 10 15
Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val
20 25 30
Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr
35 40 45
Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe
50 55 60
Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr
65 70 75 80
Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp
85 90 95
Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val
100 105 110
Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val
115 120 125
Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val
130 135 140
Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe
145 150 155 160
Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu
165 170 175
Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His
180 185 190
Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu
195 200 205
Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln
210 215 220
Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser
225 230 235 240
Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln
245 250 255
Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp
260 265 270
Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu
275 280 285
Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg
290 295 300
Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu
305 310 315 320
Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr
325 330 335
Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val
340 345 350
Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser
355 360 365
Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser
370 375 380
Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr
385 390 395 400
Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly
405 410 415
Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly
420 425 430
Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro
435 440 445
Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro
450 455 460
Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr
465 470 475 480
Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val
485 490 495
Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
500 505 510
Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe
515 520 525
Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe
530 535 540
Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala
545 550 555 560
Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser
565 570 575
Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln
580 585 590
Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala
595 600 605
Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly
610 615 620
Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His
625 630 635 640
Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys
645 650 655
Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val
660 665 670
Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn
675 680 685
Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr
690 695 700
Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser
705 710 715 720
Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn
725 730 735
Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu
740 745 750
Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala
755 760 765
Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly
770 775 780
Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg
785 790 795 800
Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala
805 810 815
Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg
820 825 830
Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro
835 840 845
Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala
850 855 860
Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln
865 870 875 880
Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val
885 890 895
Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe
900 905 910
Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser
915 920 925
Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu
930 935 940
Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser
945 950 955 960
Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val
965 970 975
Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr
980 985 990
Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
995 1000 1005
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1010 1015 1020
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1025 1030 1035
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1040 1045 1050
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1055 1060 1065
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1070 1075 1080
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1085 1090 1095
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1100 1105 1110
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1115 1120 1125
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1130 1135 1140
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1145 1150 1155
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1160 1165 1170
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1175 1180 1185
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro
1190 1195
<210> 35
<211> 1191
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 35
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys
530 535 540
Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr
545 550 555 560
Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro
565 570 575
Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser
580 585 590
Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro
595 600 605
Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser
610 615 620
Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala
625 630 635 640
Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly
645 650 655
Ile Cys Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg
660 665 670
Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala
675 680 685
Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn
690 695 700
Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys
705 710 715 720
Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys
725 730 735
Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg
740 745 750
Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val
755 760 765
Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe
770 775 780
Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser
785 790 795 800
Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala
805 810 815
Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala
820 825 830
Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu
835 840 845
Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu
850 855 860
Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala
865 870 875 880
Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile
885 890 895
Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn
900 905 910
Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr
915 920 925
Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln
930 935 940
Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile
945 950 955 960
Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala
965 970 975
Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln
980 985 990
Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser
995 1000 1005
Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln
1010 1015 1020
Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser
1025 1030 1035
Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr
1040 1045 1050
Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile
1055 1060 1065
Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val
1070 1075 1080
Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu
1085 1090 1095
Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys
1100 1105 1110
Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu
1115 1120 1125
Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe
1130 1135 1140
Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly
1145 1150 1155
Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu
1160 1165 1170
Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln
1175 1180 1185
Glu Leu Gly
1190
<210> 36
<211> 1192
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 36
Met Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr
1 5 10 15
Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg
20 25 30
Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser
35 40 45
Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr
50 55 60
Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe
65 70 75 80
Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr
85 90 95
Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr
100 105 110
Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe
115 120 125
Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu
130 135 140
Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser
145 150 155 160
Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn
165 170 175
Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr
180 185 190
Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe
195 200 205
Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr
210 215 220
Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly
225 230 235 240
Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly
245 250 255
Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr
260 265 270
Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys
275 280 285
Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser
290 295 300
Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile
305 310 315 320
Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala
325 330 335
Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp
340 345 350
Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr
355 360 365
Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr
370 375 380
Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro
385 390 395 400
Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp
405 410 415
Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys
420 425 430
Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn
435 440 445
Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly
450 455 460
Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu
465 470 475 480
Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr
485 490 495
Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val
500 505 510
Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn
515 520 525
Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn
530 535 540
Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr
545 550 555 560
Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr
565 570 575
Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr
580 585 590
Ser Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val
595 600 605
Pro Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr
610 615 620
Ser Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly
625 630 635 640
Ala Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala
645 650 655
Gly Ile Cys Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Asn Gln Ser Ala
660 665 670
Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly
675 680 685
Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr
690 695 700
Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr
705 710 715 720
Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu
725 730 735
Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn
740 745 750
Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu
755 760 765
Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp
770 775 780
Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro
785 790 795 800
Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu
805 810 815
Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile
820 825 830
Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val
835 840 845
Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala
850 855 860
Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala
865 870 875 880
Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly
885 890 895
Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala
900 905 910
Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser
915 920 925
Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala
930 935 940
Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala
945 950 955 960
Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu
965 970 975
Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu
980 985 990
Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala
995 1000 1005
Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly
1010 1015 1020
Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met
1025 1030 1035
Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val
1040 1045 1050
Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala
1055 1060 1065
Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe
1070 1075 1080
Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr
1085 1090 1095
Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn
1100 1105 1110
Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro
1115 1120 1125
Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr
1130 1135 1140
Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser
1145 1150 1155
Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg
1160 1165 1170
Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu
1175 1180 1185
Gln Glu Leu Gly
1190
<210> 37
<211> 670
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 37
Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser
1 5 10 15
Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val
20 25 30
Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr
35 40 45
Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe
50 55 60
Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr
65 70 75 80
Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp
85 90 95
Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val
100 105 110
Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val
115 120 125
Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val
130 135 140
Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe
145 150 155 160
Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu
165 170 175
Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His
180 185 190
Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu
195 200 205
Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln
210 215 220
Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser
225 230 235 240
Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln
245 250 255
Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp
260 265 270
Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu
275 280 285
Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg
290 295 300
Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu
305 310 315 320
Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr
325 330 335
Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val
340 345 350
Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser
355 360 365
Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser
370 375 380
Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr
385 390 395 400
Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly
405 410 415
Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly
420 425 430
Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro
435 440 445
Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro
450 455 460
Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr
465 470 475 480
Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val
485 490 495
Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
500 505 510
Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe
515 520 525
Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe
530 535 540
Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala
545 550 555 560
Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser
565 570 575
Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln
580 585 590
Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala
595 600 605
Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly
610 615 620
Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His
625 630 635 640
Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys
645 650 655
Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg
660 665 670
<210> 38
<211> 528
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 38
Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn
20 25 30
Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys
35 40 45
Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys
50 55 60
Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg
65 70 75 80
Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val
85 90 95
Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe
100 105 110
Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser
115 120 125
Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala
130 135 140
Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala
145 150 155 160
Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu
165 170 175
Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu
180 185 190
Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala
195 200 205
Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile
210 215 220
Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn
225 230 235 240
Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr
245 250 255
Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln
260 265 270
Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile
275 280 285
Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala
290 295 300
Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln
305 310 315 320
Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser
325 330 335
Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser
340 345 350
Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
355 360 365
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro
370 375 380
Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly
385 390 395 400
Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His
405 410 415
Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr
420 425 430
Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val
435 440 445
Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys
450 455 460
Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp
465 470 475 480
Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys
485 490 495
Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu
500 505 510
Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro
515 520 525
<210> 39
<211> 559
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 39
Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu
1 5 10 15
Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr Gln Thr Gln
20 25 30
Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile
35 40 45
Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn
50 55 60
Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu
65 70 75 80
Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr
85 90 95
Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly
100 105 110
Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu
115 120 125
Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr
130 135 140
Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile
145 150 155 160
Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu
165 170 175
Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr
180 185 190
Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln
195 200 205
Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met
210 215 220
Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly
225 230 235 240
Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln
245 250 255
Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr
260 265 270
Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys
275 280 285
Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln
290 295 300
Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln
305 310 315 320
Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu
325 330 335
Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile
340 345 350
Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile
355 360 365
Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met
370 375 380
Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys
385 390 395 400
Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val
405 410 415
Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr
420 425 430
Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly
435 440 445
Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe
450 455 460
Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn
465 470 475 480
Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu
485 490 495
Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys
500 505 510
Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
515 520 525
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val
530 535 540
Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly
545 550 555
<210> 40
<211> 581
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 40
Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr Ile
1 5 10 15
Ser Tyr Ile Tyr Ala Leu Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His
20 25 30
Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys
35 40 45
Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Asn Gln Ser Ala Arg Ser Val
50 55 60
Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn
65 70 75 80
Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr
85 90 95
Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser
100 105 110
Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn
115 120 125
Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu
130 135 140
Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala
145 150 155 160
Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly
165 170 175
Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg
180 185 190
Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala
195 200 205
Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg
210 215 220
Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro
225 230 235 240
Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala
245 250 255
Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln
260 265 270
Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val
275 280 285
Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe
290 295 300
Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser
305 310 315 320
Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu
325 330 335
Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser
340 345 350
Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val
355 360 365
Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr
370 375 380
Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
385 390 395 400
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg
405 410 415
Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser
420 425 430
Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln
435 440 445
Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala
450 455 460
His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe
465 470 475 480
Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn
485 490 495
Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn
500 505 510
Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu
515 520 525
Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly
530 535 540
Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile
545 550 555 560
Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp
565 570 575
Leu Gln Glu Leu Gly
580
<210> 41
<211> 207
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 41
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
1 5 10 15
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
20 25 30
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
35 40 45
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
50 55 60
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
85 90 95
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
100 105 110
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
115 120 125
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
130 135 140
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
145 150 155 160
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
165 170 175
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
180 185 190
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val
195 200 205
<210> 42
<211> 1353
<212> PRT
<213> MERS
<400> 42
Met Ile His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu
1 5 10 15
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys Ile Glu
20 25 30
Val Asp Ile Gln Gln Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro Ile
35 40 45
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly Ile Ile Tyr Pro Gln Gly Arg Thr Tyr
50 55 60
Ser Asn Ile Thr Ile Thr Tyr Gln Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp
65 70 75 80
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr
85 90 95
Pro Gln Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gln Asp Val Lys Gln Phe
100 105 110
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg Ile Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly
115 120 125
Thr Val Ile Ile Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr Ile Arg Lys Ile Tyr
130 135 140
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys
145 150 155 160
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys
165 170 175
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys Ile Leu Glu Pro Arg Ser Gly
180 185 190
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His
195 200 205
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser
210 215 220
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met
225 230 235 240
Tyr Thr Tyr Asn Ile Thr Glu Asp Glu Ile Leu Glu Trp Phe Gly Ile
245 250 255
Thr Gln Thr Ala Gln Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp
260 265 270
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gln Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp
275 280 285
Thr Ile Lys Tyr Tyr Ser Ile Ile Pro His Ser Ile Arg Ser Ile Gln
290 295 300
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro
305 310 315 320
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr Ile Arg Arg Ala
325 330 335
Ile Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser Gln Leu His Cys Ser Tyr Glu
340 345 350
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala
355 360 365
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp
370 375 380
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys
385 390 395 400
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser
405 410 415
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala
420 425 430
Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr
435 440 445
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile
450 455 460
Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile
465 470 475 480
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys
485 490 495
Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr
500 505 510
Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser
515 520 525
Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln
530 535 540
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr
545 550 555 560
Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln
565 570 575
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn
580 585 590
Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu
595 600 605
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly
610 615 620
Val Arg Gln Gln Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly
625 630 635 640
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser
645 650 655
Val Pro Val Ser Val Ile Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr
660 665 670
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His Ile Ser Ser Thr Met Ser Gln
675 680 685
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr
690 695 700
Gly Pro Leu Gln Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser
705 710 715 720
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly Gln Ser Leu Cys
725 730 735
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser
740 745 750
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser Ile Ala Phe Asn His Pro Ile
755 760 765
Gln Val Asp Gln Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser Ile Pro Thr
770 775 780
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gln Glu Tyr Ile Gln Thr Thr Ile Gln
785 790 795 800
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys Gln Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gln Lys
805 810 815
Cys Glu Gln Leu Leu Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys Ile Asn
820 825 830
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gln Asp Asp Ser Val Arg Asn
835 840 845
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro Ile Ile Pro Gly
850 855 860
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser Ile Ser
865 870 875 880
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp
885 890 895
Lys Val Thr Ile Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys
900 905 910
Met Gln Gln Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Tyr
915 920 925
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu
930 935 940
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser Ile Ala Gly Val Gly Trp
945 950 955 960
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala Ile Pro Phe Ala Gln Ser Ile
965 970 975
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly Ile Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu
980 985 990
Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Lys Phe Asn Gln Ala Leu Gly Ala Met
995 1000 1005
Gln Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gln Lys Val Gln
1010 1015 1020
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gln Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser
1025 1030 1035
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala Ile Ser Ala Ser Ile Gly Asp
1040 1045 1050
Ile Ile Gln Arg Leu Asp Val Leu Glu Gln Asp Ala Gln Ile Asp
1055 1060 1065
Arg Leu Ile Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala
1070 1075 1080
Gln Gln Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gln Leu
1085 1090 1095
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala Gln Ser Lys Arg
1100 1105 1110
Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His Ile Val Ser Phe Val Val
1115 1120 1125
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro
1130 1135 1140
Ser Asn His Ile Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala
1145 1150 1155
Ala Asn Pro Thr Asn Cys Ile Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe Ile
1160 1165 1170
Lys Thr Asn Asn Thr Arg Ile Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly
1175 1180 1185
Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro Ile Thr Ser Leu Asn Thr Lys
1190 1195 1200
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Thr Asn Leu
1205 1210 1215
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ile Asp Phe Gln Asp
1220 1225 1230
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile Pro Asn
1235 1240 1245
Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ile Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr
1250 1255 1260
Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gln Gln Val Val Lys Ala Leu Asn Glu
1265 1270 1275
Ser Tyr Ile Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn
1280 1285 1290
Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Val
1295 1300 1305
Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe Ile Leu Cys Cys Thr Gly Cys
1310 1315 1320
Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp
1325 1330 1335
Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp Leu Glu Pro His Lys Val His Val His
1340 1345 1350
<210> 43
<211> 1297
<212> PRT
<213> MERS
<400> 43
Met Ile His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu
1 5 10 15
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys Ile Glu
20 25 30
Val Asp Ile Gln Gln Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro Ile
35 40 45
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly Ile Ile Tyr Pro Gln Gly Arg Thr Tyr
50 55 60
Ser Asn Ile Thr Ile Thr Tyr Gln Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp
65 70 75 80
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr
85 90 95
Pro Gln Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gln Asp Val Lys Gln Phe
100 105 110
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg Ile Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly
115 120 125
Thr Val Ile Ile Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr Ile Arg Lys Ile Tyr
130 135 140
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys
145 150 155 160
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys
165 170 175
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys Ile Leu Glu Pro Arg Ser Gly
180 185 190
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His
195 200 205
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser
210 215 220
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met
225 230 235 240
Tyr Thr Tyr Asn Ile Thr Glu Asp Glu Ile Leu Glu Trp Phe Gly Ile
245 250 255
Thr Gln Thr Ala Gln Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp
260 265 270
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gln Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp
275 280 285
Thr Ile Lys Tyr Tyr Ser Ile Ile Pro His Ser Ile Arg Ser Ile Gln
290 295 300
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro
305 310 315 320
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr Ile Arg Arg Ala
325 330 335
Ile Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser Gln Leu His Cys Ser Tyr Glu
340 345 350
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala
355 360 365
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp
370 375 380
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys
385 390 395 400
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser
405 410 415
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala
420 425 430
Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr
435 440 445
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile
450 455 460
Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile
465 470 475 480
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys
485 490 495
Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr
500 505 510
Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser
515 520 525
Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln
530 535 540
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr
545 550 555 560
Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln
565 570 575
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn
580 585 590
Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu
595 600 605
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly
610 615 620
Val Arg Gln Gln Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly
625 630 635 640
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser
645 650 655
Val Pro Val Ser Val Ile Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr
660 665 670
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His Ile Ser Ser Thr Met Ser Gln
675 680 685
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr
690 695 700
Gly Pro Leu Gln Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser
705 710 715 720
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly Gln Ser Leu Cys
725 730 735
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser
740 745 750
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser Ile Ala Phe Asn His Pro Ile
755 760 765
Gln Val Asp Gln Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser Ile Pro Thr
770 775 780
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gln Glu Tyr Ile Gln Thr Thr Ile Gln
785 790 795 800
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys Gln Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gln Lys
805 810 815
Cys Glu Gln Leu Leu Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys Ile Asn
820 825 830
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gln Asp Asp Ser Val Arg Asn
835 840 845
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro Ile Ile Pro Gly
850 855 860
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser Ile Ser
865 870 875 880
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp
885 890 895
Lys Val Thr Ile Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys
900 905 910
Met Gln Gln Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Tyr
915 920 925
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu
930 935 940
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser Ile Ala Gly Val Gly Trp
945 950 955 960
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala Ile Pro Phe Ala Gln Ser Ile
965 970 975
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly Ile Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu
980 985 990
Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Lys Phe Asn Gln Ala Leu Gly Ala Met
995 1000 1005
Gln Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gln Lys Val Gln
1010 1015 1020
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gln Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser
1025 1030 1035
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala Ile Ser Ala Ser Ile Gly Asp
1040 1045 1050
Ile Ile Gln Arg Leu Asp Val Leu Glu Gln Asp Ala Gln Ile Asp
1055 1060 1065
Arg Leu Ile Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala
1070 1075 1080
Gln Gln Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gln Leu
1085 1090 1095
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala Gln Ser Lys Arg
1100 1105 1110
Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His Ile Val Ser Phe Val Val
1115 1120 1125
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro
1130 1135 1140
Ser Asn His Ile Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala
1145 1150 1155
Ala Asn Pro Thr Asn Cys Ile Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe Ile
1160 1165 1170
Lys Thr Asn Asn Thr Arg Ile Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly
1175 1180 1185
Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro Ile Thr Ser Leu Asn Thr Lys
1190 1195 1200
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Thr Asn Leu
1205 1210 1215
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ile Asp Phe Gln Asp
1220 1225 1230
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile Pro Asn
1235 1240 1245
Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ile Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr
1250 1255 1260
Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gln Gln Val Val Lys Ala Leu Asn Glu
1265 1270 1275
Ser Tyr Ile Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn
1280 1285 1290
Lys Trp Pro Trp
1295
<210> 44
<211> 708
<212> PRT
<213> MERS
<400> 44
Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys Ile Glu Val
1 5 10 15
Asp Ile Gln Gln Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro Ile Asp
20 25 30
Val Ser Lys Ala Asp Gly Ile Ile Tyr Pro Gln Gly Arg Thr Tyr Ser
35 40 45
Asn Ile Thr Ile Thr Tyr Gln Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp His
50 55 60
Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr Pro
65 70 75 80
Gln Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gln Asp Val Lys Gln Phe Ala
85 90 95
Asn Gly Phe Val Val Arg Ile Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly Thr
100 105 110
Val Ile Ile Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr Ile Arg Lys Ile Tyr Pro
115 120 125
Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys Met
130 135 140
Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys Gly
145 150 155 160
Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys Ile Leu Glu Pro Arg Ser Gly Asn
165 170 175
His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His Thr
180 185 190
Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser Leu
195 200 205
Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met Tyr
210 215 220
Thr Tyr Asn Ile Thr Glu Asp Glu Ile Leu Glu Trp Phe Gly Ile Thr
225 230 235 240
Gln Thr Ala Gln Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp Leu
245 250 255
Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gln Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp Thr
260 265 270
Ile Lys Tyr Tyr Ser Ile Ile Pro His Ser Ile Arg Ser Ile Gln Ser
275 280 285
Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro Leu
290 295 300
Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr Ile Arg Arg Ala Ile
305 310 315 320
Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser Gln Leu His Cys Ser Tyr Glu Ser
325 330 335
Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala Lys
340 345 350
Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp Phe
355 360 365
Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys Arg
370 375 380
Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser Leu
385 390 395 400
Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala Ile
405 410 415
Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr Pro
420 425 430
Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile Ser
435 440 445
Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile Leu
450 455 460
Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys Tyr
465 470 475 480
Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr Glu
485 490 495
Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser Ile
500 505 510
Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln Leu
515 520 525
Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr Val
530 535 540
Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln Tyr
545 550 555 560
Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn Asp
565 570 575
Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu Tyr
580 585 590
Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly Val
595 600 605
Arg Gln Gln Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly Tyr
610 615 620
Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser Val
625 630 635 640
Pro Val Ser Val Ile Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr Leu
645 650 655
Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His Ile Ser Ser Thr Met Ser Gln Tyr
660 665 670
Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr Gly
675 680 685
Pro Leu Gln Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser Ser
690 695 700
Leu Phe Val Glu
705
<210> 45
<211> 571
<212> PRT
<213> MERS
<400> 45
Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly Gln Ser Leu Cys Ala Leu Pro Asp Thr
1 5 10 15
Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser Val Pro Gly Glu Met
20 25 30
Arg Leu Ala Ser Ile Ala Phe Asn His Pro Ile Gln Val Asp Gln Leu
35 40 45
Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser Ile Pro Thr Asn Phe Ser Phe Gly
50 55 60
Val Thr Gln Glu Tyr Ile Gln Thr Thr Ile Gln Lys Val Thr Val Asp
65 70 75 80
Cys Lys Gln Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gln Lys Cys Glu Gln Leu Leu
85 90 95
Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys Ile Asn Gln Ala Leu His Gly
100 105 110
Ala Asn Leu Arg Gln Asp Asp Ser Val Arg Asn Leu Phe Ala Ser Val
115 120 125
Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro Ile Ile Pro Gly Phe Gly Gly Asp Phe
130 135 140
Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser Ile Ser Thr Gly Ser Arg Ser
145 150 155 160
Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp Lys Val Thr Ile Ala
165 170 175
Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys Met Gln Gln Gly Pro
180 185 190
Ala Ser Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Tyr Val Ala Gly Tyr Lys
195 200 205
Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu Ala Ala Tyr Thr Ser
210 215 220
Ser Leu Leu Gly Ser Ile Ala Gly Val Gly Trp Thr Ala Gly Leu Ser
225 230 235 240
Ser Phe Ala Ala Ile Pro Phe Ala Gln Ser Ile Phe Tyr Arg Leu Asn
245 250 255
Gly Val Gly Ile Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ile
260 265 270
Ala Asn Lys Phe Asn Gln Ala Leu Gly Ala Met Gln Thr Gly Phe Thr
275 280 285
Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gln Lys Val Gln Asp Ala Val Asn Asn Asn
290 295 300
Ala Gln Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly
305 310 315 320
Ala Ile Ser Ala Ser Ile Gly Asp Ile Ile Gln Arg Leu Asp Val Leu
325 330 335
Glu Gln Asp Ala Gln Ile Asp Arg Leu Ile Asn Gly Arg Leu Thr Thr
340 345 350
Leu Asn Ala Phe Val Ala Gln Gln Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala
355 360 365
Leu Ser Ala Gln Leu Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala
370 375 380
Gln Ser Lys Arg Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His Ile Val Ser
385 390 395 400
Phe Val Val Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr
405 410 415
Tyr Pro Ser Asn His Ile Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp
420 425 430
Ala Ala Asn Pro Thr Asn Cys Ile Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe Ile
435 440 445
Lys Thr Asn Asn Thr Arg Ile Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly Ser
450 455 460
Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro Ile Thr Ser Leu Asn Thr Lys Tyr Val
465 470 475 480
Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Thr Asn Leu Pro Pro Pro
485 490 495
Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ile Asp Phe Gln Asp Glu Leu Asp Glu
500 505 510
Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile Pro Asn Phe Gly Ser Leu Thr
515 520 525
Gln Ile Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr Tyr Glu Met Leu Ser Leu
530 535 540
Gln Gln Val Val Lys Ala Leu Asn Glu Ser Tyr Ile Asp Leu Lys Glu
545 550 555 560
Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn Lys Trp Pro
565 570
<210> 46
<211> 212
<212> PRT
<213> MERS
<400> 46
Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr
1 5 10 15
Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn
20 25 30
Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr
35 40 45
Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser
50 55 60
Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu
65 70 75 80
Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser
85 90 95
Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu
100 105 110
Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser
115 120 125
Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala
130 135 140
Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu
145 150 155 160
Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly
165 170 175
Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln
180 185 190
Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val
195 200 205
Cys Pro Lys Leu
210
<210> 47
<211> 1255
<212> PRT
<213> SARS-CoV-1
<400> 47
Met Phe Ile Phe Leu Leu Phe Leu Thr Leu Thr Ser Gly Ser Asp Leu
1 5 10 15
Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn Tyr Thr Gln
20 25 30
His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu Ile Phe Arg
35 40 45
Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser
50 55 60
Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Gly Asn Pro Val
65 70 75 80
Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn
85 90 95
Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln
100 105 110
Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys
115 120 125
Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met
130 135 140
Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr
145 150 155 160
Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser
165 170 175
Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly
180 185 190
Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp
195 200 205
Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu
210 215 220
Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala Phe Ser Pro
225 230 235 240
Ala Gln Asp Ile Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys
275 280 285
Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser
420 425 430
Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu
435 440 445
Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly
450 455 460
Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp
465 470 475 480
Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
485 490 495
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
500 505 510
Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn
515 520 525
Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg
530 535 540
Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp
545 550 555 560
Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile Ser Pro Cys
565 570 575
Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser
580 585 590
Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp Val Ser Thr
595 600 605
Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile Tyr Ser Thr
610 615 620
Gly Asn Asn Val Phe Gln Thr Gln Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu
625 630 635 640
His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile
645 650 655
Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln Lys
660 665 670
Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser Ile Ala
675 680 685
Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Ser Ile Ser Ile
690 695 700
Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys
705 710 715 720
Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu
725 730 735
Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly Ile
740 745 750
Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gln Val Lys
755 760 765
Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe
770 775 780
Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe Ile
785 790 795 800
Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met
805 810 815
Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg Asp Leu Ile
820 825 830
Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr
835 840 845
Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala
850 855 860
Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe
865 870 875 880
Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn
885 890 895
Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala
900 905 910
Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly
915 920 925
Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu
930 935 940
Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn
945 950 955 960
Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp
965 970 975
Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln
980 985 990
Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala
995 1000 1005
Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp
1010 1015 1020
Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala
1025 1030 1035
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln
1040 1045 1050
Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys
1055 1060 1065
Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser
1070 1075 1080
Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr
1085 1090 1095
Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly
1100 1105 1110
Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp
1115 1120 1125
Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser
1130 1135 1140
Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val
1145 1150 1155
Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys
1160 1165 1170
Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr
1175 1180 1185
Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile
1190 1195 1200
Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys Cys
1205 1210 1215
Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys Gly
1220 1225 1230
Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys
1235 1240 1245
Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1250 1255
<210> 48
<211> 1182
<212> PRT
<213> SARS-CoV-1
<400> 48
Ser Asp Leu Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn
1 5 10 15
Tyr Thr Gln His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu
20 25 30
Ile Phe Arg Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
35 40 45
Phe Tyr Ser Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Gly
50 55 60
Asn Pro Val Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu
65 70 75 80
Lys Ser Asn Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn
85 90 95
Lys Ser Gln Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile
100 105 110
Arg Ala Cys Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser
115 120 125
Lys Pro Met Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe
130 135 140
Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser
145 150 155 160
Glu Lys Ser Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn
165 170 175
Lys Asp Gly Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val
180 185 190
Val Arg Asp Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys
195 200 205
Leu Pro Leu Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala
210 215 220
Phe Ser Pro Ala Gln Asp Ile Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe
225 230 235 240
Val Gly Tyr Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn
245 250 255
Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu
260 265 270
Leu Lys Cys Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln
275 280 285
Thr Ser Asn Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro
290 295 300
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys
305 310 315 320
Phe Pro Ser Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val
325 330 335
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys
340 345 350
Cys Tyr Gly Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn
355 360 365
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile
370 375 380
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
385 390 395 400
Asp Asp Phe Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp
405 410 415
Ala Thr Ser Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His
420 425 430
Gly Lys Leu Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser
435 440 445
Pro Asp Gly Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro
450 455 460
Leu Asn Asp Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro
465 470 475 480
Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr
485 490 495
Val Cys Gly Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val
500 505 510
Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser
515 520 525
Ser Lys Arg Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp
530 535 540
Phe Thr Asp Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile
545 550 555 560
Ser Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn
565 570 575
Ala Ser Ser Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp
580 585 590
Val Ser Thr Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile
595 600 605
Tyr Ser Thr Gly Asn Asn Val Phe Gln Thr Gln Ala Gly Cys Leu Ile
610 615 620
Gly Ala Glu His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly
625 630 635 640
Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr
645 650 655
Ser Gln Lys Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser
660 665 670
Ser Ile Ala Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Ser
675 680 685
Ile Ser Ile Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser
690 695 700
Val Asp Cys Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn
705 710 715 720
Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu
725 730 735
Ser Gly Ile Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala
740 745 750
Gln Val Lys Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly
755 760 765
Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg
770 775 780
Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala
785 790 795 800
Gly Phe Met Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg
805 810 815
Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro
820 825 830
Leu Leu Thr Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser
835 840 845
Gly Thr Ala Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln
850 855 860
Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val
865 870 875 880
Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe
885 890 895
Asn Lys Ala Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr
900 905 910
Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu
915 920 925
Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser
930 935 940
Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val
945 950 955 960
Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr
965 970 975
Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
980 985 990
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg
995 1000 1005
Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln
1010 1015 1020
Ala Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro
1025 1030 1035
Ser Gln Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu
1040 1045 1050
Gly Lys Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly
1055 1060 1065
Thr Ser Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile
1070 1075 1080
Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val
1085 1090 1095
Ile Gly Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu
1100 1105 1110
Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His
1115 1120 1125
Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala
1130 1135 1140
Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val
1145 1150 1155
Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly
1160 1165 1170
Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro
1175 1180
<210> 49
<211> 654
<212> PRT
<213> SARS-CoV-1
<400> 49
Ser Asp Leu Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn
1 5 10 15
Tyr Thr Gln His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu
20 25 30
Ile Phe Arg Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
35 40 45
Phe Tyr Ser Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Gly
50 55 60
Asn Pro Val Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu
65 70 75 80
Lys Ser Asn Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn
85 90 95
Lys Ser Gln Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile
100 105 110
Arg Ala Cys Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser
115 120 125
Lys Pro Met Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe
130 135 140
Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser
145 150 155 160
Glu Lys Ser Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn
165 170 175
Lys Asp Gly Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val
180 185 190
Val Arg Asp Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys
195 200 205
Leu Pro Leu Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala
210 215 220
Phe Ser Pro Ala Gln Asp Ile Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe
225 230 235 240
Val Gly Tyr Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn
245 250 255
Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu
260 265 270
Leu Lys Cys Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln
275 280 285
Thr Ser Asn Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro
290 295 300
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys
305 310 315 320
Phe Pro Ser Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val
325 330 335
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys
340 345 350
Cys Tyr Gly Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn
355 360 365
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile
370 375 380
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
385 390 395 400
Asp Asp Phe Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp
405 410 415
Ala Thr Ser Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His
420 425 430
Gly Lys Leu Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser
435 440 445
Pro Asp Gly Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro
450 455 460
Leu Asn Asp Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro
465 470 475 480
Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr
485 490 495
Val Cys Gly Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val
500 505 510
Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser
515 520 525
Ser Lys Arg Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp
530 535 540
Phe Thr Asp Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile
545 550 555 560
Ser Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn
565 570 575
Ala Ser Ser Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp
580 585 590
Val Ser Thr Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile
595 600 605
Tyr Ser Thr Gly Asn Asn Val Phe Gln Thr Gln Ala Gly Cys Leu Ile
610 615 620
Gly Ala Glu His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly
625 630 635 640
Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg
645 650
<210> 50
<211> 528
<212> PRT
<213> SARS-CoV-1
<400> 50
Ser Thr Ser Gln Lys Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ser Ser Ile Ala Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Ile Ser Ile Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys
35 40 45
Thr Ser Val Asp Cys Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys
50 55 60
Ala Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg
65 70 75 80
Ala Leu Ser Gly Ile Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val
85 90 95
Phe Ala Gln Val Lys Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe
100 105 110
Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr
115 120 125
Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala
130 135 140
Asp Ala Gly Phe Met Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn
145 150 155 160
Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu
165 170 175
Pro Pro Leu Leu Thr Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu
180 185 190
Val Ser Gly Thr Ala Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala
195 200 205
Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile
210 215 220
Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn
225 230 235 240
Gln Phe Asn Lys Ala Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr
245 250 255
Ser Thr Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln
260 265 270
Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile
275 280 285
Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala
290 295 300
Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln
305 310 315 320
Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser
325 330 335
Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser
340 345 350
Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
355 360 365
Gln Ala Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro
370 375 380
Ser Gln Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly
385 390 395 400
Lys Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser
405 410 415
Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr Thr
420 425 430
Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Ile
435 440 445
Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys
450 455 460
Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp
465 470 475 480
Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys
485 490 495
Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu
500 505 510
Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro
515 520 525
<210> 51
<211> 222
<212> PRT
<213> SARS-CoV-1
<400> 51
Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Met
100 105 110
Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser Thr
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu Arg
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly Lys
145 150 155 160
Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp Tyr
165 170 175
Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val
180 185 190
Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
195 200 205
Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe
210 215 220
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SARS-CoV-2纤突蛋白的弗林蛋白酶切割位点
<400> 52
Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg
1 5
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SARS-CoV-2纤突蛋白的突变的弗林蛋白酶切割位点
<400> 53
Asn Ser Asn Gln Ser Ala Arg
1 5
<210> 54
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> foldon结构域
<400> 54
Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys
1 5 10 15
Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
20 25
<210> 55
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GCN4结构域
<400> 55
Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Gly Arg Met Lys Gln Ile Glu
1 5 10 15
Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys Ile Tyr His Ile Glu Asn Glu
20 25 30
Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly Glu Arg Gly Gly Arg
35 40 45
<210> 56
<211> 47
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 免疫沉默(immunosiclenced)的GCN4结构域
<400> 56
Gly Gly Gly Thr Gly Gly Asn Gly Thr Gly Arg Met Lys Gln Ile Glu
1 5 10 15
Asp Lys Ile Glu Asn Ile Thr Ser Lys Ile Tyr Asn Ile Thr Asn Glu
20 25 30
Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly Asn Arg Thr Gly Gly Arg
35 40 45
<210> 57
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 蜜蜂蜂毒肽
<400> 57
Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr Ile
1 5 10 15
Ser Tyr Ile Tyr Ala
20
<210> 58
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MERS-CoV纤突蛋白的弗林蛋白酶切割位点
<400> 58
Arg Ser Val Arg
1
<210> 59
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MERS-CoV纤突蛋白的突变的弗林蛋白酶切割位点
<400> 59
Gly Ser Val Gly
1
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SARS-CoV-1纤突蛋白的弗林蛋白酶切割位点
<400> 60
Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg
1 5
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SARS-CoV-1纤突蛋白的突变的弗林蛋白酶切割位点
<400> 61
Glu Gln Asp Gly Asn Thr Gly
1 5
<210> 62
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CpG 寡核苷酸
<400> 62
tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24
<210> 63
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CpG 寡核苷酸
<400> 63
tcgtcgttgt cgttttgtcg tt 22
<210> 64
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CpG 寡核苷酸
<400> 64
gggggacgat cgtcgggggg 20
<210> 65
<211> 1186
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 65
Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg
1 5 10 15
Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser
20 25 30
Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His
35 40 45
Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro
50 55 60
Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser
65 70 75 80
Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr
85 90 95
Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val
100 105 110
Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His
115 120 125
Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser
130 135 140
Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp
145 150 155 160
Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe
165 170 175
Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile
180 185 190
Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu
195 200 205
Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu
210 215 220
Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp
225 230 235 240
Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr
245 250 255
Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp
260 265 270
Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe
275 280 285
Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro
290 295 300
Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe
305 310 315 320
Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn
325 330 335
Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn
340 345 350
Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys
355 360 365
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile
370 375 380
Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile
385 390 395 400
Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile
405 410 415
Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn
420 425 430
Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg
435 440 445
Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly
450 455 460
Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln
465 470 475 480
Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser
485 490 495
Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser
500 505 510
Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu
515 520 525
Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe
530 535 540
Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp
545 550 555 560
Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly
565 570 575
Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val
580 585 590
Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala
595 600 605
Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Val
610 615 620
Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val Asn Asn
625 630 635 640
Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr
645 650 655
Gln Thr Gln Thr Asn Ser Asn Gln Ser Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln
660 665 670
Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala
675 680 685
Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val
690 695 700
Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys
705 710 715 720
Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu
725 730 735
Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile
740 745 750
Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys
755 760 765
Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe
770 775 780
Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile
785 790 795 800
Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile
805 810 815
Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile
820 825 830
Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr
835 840 845
Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile
850 855 860
Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe
865 870 875 880
Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn
885 890 895
Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala
900 905 910
Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly
915 920 925
Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu
930 935 940
Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn
945 950 955 960
Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp
965 970 975
Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln
980 985 990
Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala
995 1000 1005
Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp
1010 1015 1020
Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala
1025 1030 1035
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln
1040 1045 1050
Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys
1055 1060 1065
Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His
1070 1075 1080
Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr
1085 1090 1095
Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly
1100 1105 1110
Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp
1115 1120 1125
Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser
1130 1135 1140
Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val
1145 1150 1155
Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys
1160 1165 1170
Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly
1175 1180 1185
<210> 66
<211> 1255
<212> PRT
<213> SARS-CoV-2
<400> 66
Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg
1 5 10 15
Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser
20 25 30
Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His
35 40 45
Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro
50 55 60
Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser
65 70 75 80
Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr
85 90 95
Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val
100 105 110
Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His
115 120 125
Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser
130 135 140
Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp
145 150 155 160
Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe
165 170 175
Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile
180 185 190
Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu
195 200 205
Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu
210 215 220
Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp
225 230 235 240
Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr
245 250 255
Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp
260 265 270
Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe
275 280 285
Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro
290 295 300
Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe
305 310 315 320
Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn
325 330 335
Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn
340 345 350
Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys
355 360 365
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile
370 375 380
Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile
385 390 395 400
Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile
405 410 415
Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn
420 425 430
Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg
435 440 445
Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly
450 455 460
Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln
465 470 475 480
Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser
485 490 495
Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser
500 505 510
Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu
515 520 525
Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe
530 535 540
Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp
545 550 555 560
Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly
565 570 575
Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val
580 585 590
Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala
595 600 605
Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Val
610 615 620
Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val Asn Asn
625 630 635 640
Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr
645 650 655
Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Gln Gln Ala Gln Ser Val Ala Ser Gln
660 665 670
Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala
675 680 685
Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val
690 695 700
Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys
705 710 715 720
Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu
725 730 735
Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile
740 745 750
Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys
755 760 765
Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe
770 775 780
Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile
785 790 795 800
Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile
805 810 815
Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile
820 825 830
Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr
835 840 845
Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile
850 855 860
Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe
865 870 875 880
Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn
885 890 895
Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala
900 905 910
Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly
915 920 925
Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu
930 935 940
Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn
945 950 955 960
Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp
965 970 975
Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln
980 985 990
Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala
995 1000 1005
Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp
1010 1015 1020
Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala
1025 1030 1035
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln
1040 1045 1050
Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys
1055 1060 1065
Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His
1070 1075 1080
Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr
1085 1090 1095
Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly
1100 1105 1110
Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp
1115 1120 1125
Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser
1130 1135 1140
Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val
1145 1150 1155
Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys
1160 1165 1170
Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr
1175 1180 1185
Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile
1190 1195 1200
Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu Cys Cys
1205 1210 1215
Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys Ser Cys Gly
1220 1225 1230
Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys
1235 1240 1245
Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1250 1255

Claims (23)

1.一种通过施用抗原和佐剂在受试者中引发免疫应答的方法，其中所述抗原与第一聚合物囊泡群关联，和其中所述佐剂与第二聚合物囊泡群关联，并且其中将两种聚合物囊泡群施用于所述受试者。
2.根据权利要求1所述的方法，
(a)其中，通过将所述抗原包封在所述第一聚合物囊泡群中、通过将所述抗原整合到所述第一聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述抗原经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述抗原经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述抗原与所述第一聚合物囊泡群关联；和/或
(b)通过将所述佐剂包封在所述第二聚合物囊泡群中、通过将所述佐剂整合到所述第二聚合物囊泡群的聚合物囊泡的周向膜内、通过将所述佐剂经由共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面和/或通过将所述佐剂经由非共价键缀合到所述聚合物囊泡的外表面使所述佐剂与所述第二聚合物囊泡群关联。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的抗原，并且所述第二聚合物囊泡群具有包封在所述聚合物囊泡内的佐剂。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述两种聚合物囊泡群通过选自如下的施用途径施用：口服施用、经鼻腔施用、施用至黏膜表面、吸入、皮内施用、腹膜内施用、皮下施用、静脉内施用和肌肉内施用。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者是包括人的哺乳动物，或非哺乳动物。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物并且针对选自癌症、病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种，其中所述受试者优选地是人并且优选地针对冠状病毒感染进行疫苗接种，其中所述冠状病毒优选地为MERS-CoV、SARS-CoV-2或SARS-CoV-1。
7.根据权利要求5所述的方法，
(a)其中所述受试者是非哺乳动物并且针对选自病毒感染和细菌感染的疾病进行疫苗接种；或
(b)其中所述哺乳动物是山羊、绵羊、牛或猪，其中所述动物优选地为
(i)猪并且针对猪流行性腹泻病毒进行疫苗接种；或
(ii)有蹄动物并且针对口蹄疫病毒进行疫苗接种。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包封抗原是可溶性或增溶的抗原。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗原，优选地所述可溶性或增溶的包封抗原选自：
i)多肽；
ii)碳水化合物；
iii)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
iv)i)和/或ii)和/或iii)的组合。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群是氧化稳定的。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包封抗原包含膜蛋白(MP)或膜相关肽(MAP)的可溶性部分，优选地所述抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白、SARS-CoV-2SPIKE蛋白或SARS-CoV-1SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，进一步优选地，所述抗原包含多肽，所述多肽与选自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有以下性质中的一种或多种：
i)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含氧化稳定的膜；和/或
ii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群是合成的；和/或
iii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群不含未包封的抗原或与未包封的抗原混合；和/或
iv)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含两亲性聚合物的膜；和/或
v)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含形成囊泡膜的两亲性合成嵌段共聚物；和/或
vi)所述第一和/或第二聚合物囊泡群的直径大于70nm，优选地，所述直径范围为约100nm至约1μm，或约100nm至约750nm，或约100nm至约500nm，或约125nm至约250nm，约140nm至约240nm，约150nm至约235nm，约170nm至约230nm，或约220nm至约180nm，或约190nm至约210nm，最优选地，所述直径为约200nm；和/或
vii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群具有囊泡形态；
viii)所述第一和/或第二聚合物囊泡群是自组装的；
ix)所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为基本上非免疫原性的或基本上非抗原性的，优选地，所述嵌段共聚物或两亲性聚合物为非免疫原性的或非抗原性的。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含两亲性聚合物或由两亲性聚合物形成，所述两亲性聚合物包含二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物或由二嵌段或三嵌段(A-B-A或A-B-C)共聚物组成。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中
(a)所述两亲性聚合物包含共聚物聚(N-乙烯吡咯烷酮)-b-PLA；
(b)所述两亲性聚合物为聚(丁二烯)-聚(氧化乙烯)(PB-PEO)二嵌段共聚物，或其中所述两亲性聚合物为聚(二甲基硅氧烷)-聚(氧化乙烯)(PDMS-PEO)二嵌段共聚物，或聚(二甲基硅氧烷)-聚(丙烯酸)(PDMS-PAA)，其中所述PB-PEO二嵌段共聚物优选包含5-50个嵌段PB和5-50个嵌段PEO，或其中所述PB-PDMS二嵌段共聚物优选包含5-100个嵌段PDMS和5-100个嵌段PEO；
(c)所述两亲性聚合物为聚(丙交酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PLA-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PLA-PEO/POPC具有75：25(如75/25)的PLA-PEO与POPC(例如PLA-PEO/POPC)的比率；
(d)所述两亲性聚合物为聚(己内酯)-聚(氧化乙烯)/1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(PCL-PEO/POPC)共聚物，优选地，所述PCL-PEO/POPC具有75：25(如75/25)的PCL-PEO与POPC(如PCL-PEO/POPC)的比率；
(e)所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)；和/或
(f)所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含二嵌段共聚物PBD21-PEO14(BD21)和/或三嵌段共聚物PMOXA12-PDMS55-PMOXA12。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一和/或第二聚合物囊泡群包含脂质聚合物。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述与第二聚合物囊泡群关联的佐剂选自CpG寡脱氧核苷酸(或CpG ODN)、衍生自细菌和分枝杆菌细胞壁的组分和蛋白。
17.一种用于生产其中包封抗原或其中包封佐剂的聚合物囊泡的方法，所述方法包括：
i)将两亲性聚合物溶解在氯仿中，优选地，所述两亲性聚合物为聚丁二烯-聚氧化乙烯(BD)；
ii)使所述溶解的两亲性聚合物干燥以形成聚合物膜；
iii)向步骤ii)的所述干燥的两亲性聚合物膜添加增溶的抗原或可溶性佐剂，其中，优选地所述佐剂选自CpG寡脱氧核苷酸(或CpG ODN)、衍生自细菌和分枝杆菌细胞壁的组分和蛋白，和其中所述抗原选自：
a)多肽；优选地，所述多肽抗原为前述权利要求中的任一项所述，进一步优选地，所述多肽抗原包含流感血凝素、猪流感血凝素、诸如猪流行性腹泻病毒SPIKE蛋白的SPIKE蛋白、诸如MERS-CoV SPIKE蛋白或SARS-CoV-2SPIKE蛋白的人致病性冠状病毒的SPIKE蛋白、卵清蛋白(OVA)、B16肽或MC38肽的可溶性部分，最优选地，所述多肽抗原与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12-14、SEQ ID NO:43-46、SEQ ID NO:34-41、SEQ ID NO:48-51和SEQ ID NO:65的多肽序列具有至少60％或更高(如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的同一性；
b)碳水化合物；
c)多核苷酸，其中所述多核苷酸不是反义寡核苷酸，优选地，所述多核苷酸是DNA或mRNA分子；
d)(a)和/或(b)和/或(c)的组合；
iv)使步骤iii)的所述聚合物膜再水化以形成聚合物囊泡；
v)任选地，过滤步骤iv)的聚合物囊泡以纯化聚合物囊泡单分散囊泡；和/或
vi)任选地，使步骤iv)或v)的所述聚合物囊泡与未包封的抗原相分离。
18.一种聚合物囊泡，其通过根据权利要求17所述的用于生产其中包封抗原或其中包封佐剂的聚合物囊泡的方法生产。
19.一种组合物，其包含根据权利要求1至16中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群。
20.一种疫苗，其包含根据权利要求1至16中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群或根据权利要求19所述的组合物，并且进一步包含药学上可接受的赋形剂或载体。
21.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至16中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群或根据权利要求19所述的组合物。
22.一种用于在有此需要的受试者(如人)中治疗或预防感染性疾病、癌症或自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至16中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群或根据权利要求19所述的组合物，其中，所述感染性疾病为病毒或细菌感染性疾病。
23.根据权利要求1至16中任一项所述的第一和第二聚合物囊泡群或根据权利要求19所述的组合物，其用作药物。
CN202080068673.4A 2019-08-01 2020-08-03 通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物 Pending CN114502191A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP19189549 2019-08-01
EP19189549.9 2019-08-01
EP20171327 2020-04-24
EP20171327.8 2020-04-24
PCT/EP2020/071809 WO2021019102A2 (en) 2019-08-01 2020-08-03 A method of eliciting an immune response by administering a population of polymersomes having an associated antigen together with a population of polymersomes having an associated adjuvant as well as compositions comprising the two populations of polymersomes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114502191A true CN114502191A (zh) 2022-05-13

Family

ID=72148072

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080068673.4A Pending CN114502191A (zh) 2019-08-01 2020-08-03 通过施用具有关联的抗原的聚合物囊泡群和具有关联的佐剂的聚合物囊泡群来引发免疫应答的方法以及包含这两种聚合物囊泡群的组合物

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20220273792A1 (zh)
EP (1) EP4007597A2 (zh)
JP (1) JP2022543038A (zh)
CN (1) CN114502191A (zh)
AU (1) AU2020322107A1 (zh)
BR (1) BR112022001185A2 (zh)
CA (1) CA3143533A1 (zh)
WO (1) WO2021019102A2 (zh)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014077781A1 (en) * 2012-11-19 2014-05-22 Agency For Science, Technology And Research Method for eliciting an immune response to an immunogen
US20180128545A1 (en) 2016-11-08 2018-05-10 Berry Metal Company Modular furnace cooling wall
KR102657261B1 (ko) * 2020-04-03 2024-04-15 조선대학교산학협력단 Ｃｏｖｉｄ－１９ 진단을 위한 재조합 코로나－１９ 바이러스 스파이크 단백질의 생산 및 이의 용도
AU2021260857A1 (en) * 2020-04-24 2022-11-03 Acm Biolabs Pte Ltd Vaccine against human-pathogenic coronaviruses
CN116075315A (zh) 2020-05-08 2023-05-05 刘扶东 嵌合流感疫苗
US20230398207A1 (en) * 2020-12-11 2023-12-14 Acm Biolabs Pte Ltd Modulating th1/th2 immune response by administering two populations of polymersomes having an associated antigen and an associated adjuvant
CN117597109A (zh) * 2021-02-02 2024-02-23 Acm 生物实验室私人有限公司 聚合物囊泡相关联的佐剂用于刺激免疫应答的单独使用
CN115427432A (zh) * 2021-02-10 2022-12-02 斯微(上海)生物科技股份有限公司 一种治疗或者预防冠状病毒病突变株的疫苗试剂
WO2022197840A1 (en) * 2021-03-16 2022-09-22 The Wistar Institute Adenovirus sars-cov-2 vaccine
US20240158763A1 (en) * 2021-03-30 2024-05-16 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Optimal production of sars-cov-2 virus-like particles (vlps) produced in mammalian cells
MX2023003762A (es) * 2021-04-12 2023-06-01 Academia Sinica Vacunas de arn mensajero contra un amplio espectro de variantes de coronavirus.
MX2023000578A (es) * 2021-04-12 2023-04-26 Academia Sinica Vacuna mejorada contra el coronavirus.
CN115337404A (zh) * 2021-05-12 2022-11-15 中国医学科学院基础医学研究所 细胞微颗粒在治疗呼吸道病毒性肺炎上的应用
US20230043887A1 (en) * 2021-05-24 2023-02-09 Venkataramanan Soundararajan Compositions and methods related to surge-associated sars-cov-2 mutants
WO2023004415A2 (en) * 2021-07-22 2023-01-26 University Of Miami Sars-cov-2 vaccine using bacterial spores expressing antigenic fragments
CN113633764B (zh) * 2021-09-02 2024-05-14 中国食品药品检定研究院 一种含佐剂的新冠dna疫苗
IT202100023816A1 (it) * 2021-09-16 2023-03-16 Takis S R L Anticorpo contro SARS-CoV-2 e suoi usi in campo medico.
TW202334429A (zh) 2021-10-01 2023-09-01 中央研究院 Sars-cov-2棘蛋白特異性抗體及其用途
WO2023060220A1 (en) * 2021-10-07 2023-04-13 BioVaxys Inc. Methods of immunization against coronavirus
CN114470186B (zh) * 2022-02-17 2023-10-20 唐颐控股(深圳)有限公司 一种可吸入式纳米新冠疫苗的制备方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5354934A (en) 1993-02-04 1994-10-11 Amgen Inc. Pulmonary administration of erythropoietin
EP2281033B1 (en) 2008-04-17 2014-10-15 Vin de Bona Trading Co Pte Post release modification of viral envelopes
US8323696B2 (en) 2008-08-29 2012-12-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
US10364350B2 (en) 2009-04-20 2019-07-30 Agency For Science, Technology And Research Vesicular system and uses thereof
WO2012018306A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Agency For Science, Technology And Research A multicompartmentalized vesicular structure and a method for forming the same
CA3081072A1 (en) 2012-03-12 2013-09-19 Advanced Bioadjuvants, Llc Adjuvant and vaccine compositions
EP2906717B8 (en) 2012-10-11 2019-03-27 Vin-de-Bona Trading Company Pte Ltd Method of painting microvesicles
WO2014077781A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Agency For Science, Technology And Research Method for eliciting an immune response to an immunogen
EP2898894A1 (en) 2014-01-27 2015-07-29 LTS LOHMANN Therapie-Systeme AG Nano-in-micro particles for intradermal delivery
WO2016055611A1 (en) * 2014-10-09 2016-04-14 Universität Basel Self-assembled nanostructures and methods of use thereof
CA2979556C (en) 2015-03-24 2023-07-18 VaxLiant, LLC Adjuvant compositions and related methods

Also Published As

Publication number Publication date
BR112022001185A2 (pt) 2022-03-15
JP2022543038A (ja) 2022-10-07
CA3143533A1 (en) 2021-02-04
US20220273792A1 (en) 2022-09-01
WO2021019102A2 (en) 2021-02-04
EP4007597A2 (en) 2022-06-08
WO2021019102A3 (en) 2021-03-11
AU2020322107A1 (en) 2022-02-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220273792A1 (en) A method of eliciting an immune response by administering a population of polymersomes having an associated antigen together with a population of polymersomes having an associated adjuvant as well as compositions comprising the two populations of polymersomes
JP7542257B2 (ja) 可溶化された封入抗原を含むポリマーソーム、ならびにその作製および使用方法
Nevagi et al. Peptide-based vaccines
Barrett et al. Modular peptide amphiphile micelles improving an antibody-mediated immune response to group A streptococcus
KR20140043348A (ko) 리포솜 제제
US20230398207A1 (en) Modulating th1/th2 immune response by administering two populations of polymersomes having an associated antigen and an associated adjuvant
Li et al. Nasal immunization with mannan-decorated mucoadhesive HPMCP microspheres containing ApxIIA toxin induces protective immunity against challenge infection with Actinobacillus pleuropneumoiae in mice
US20230256082A1 (en) Vaccine against human-pathogenic coronaviruses
US20220105176A1 (en) Polymersomes comprising a covalently bound antigen as well as methods of making and uses thereof
US20240108720A1 (en) Sole use of polymersome associated adjuvant for stimulating an immune response
US20220387461A1 (en) Cancer vaccine
WO2015153883A1 (en) Vaccination using plant virus particles linked to her2 antigens
Jarzebska et al. Protamine for RNA transfection: from heparin antagonist to RNA delivery
Sylvestre Engineering pH-Responsive Biomaterials for Cancer Immunotherapy
JP2024518710A (ja) 可溶性封入ポリヌクレオチドとイオン化可能脂質とを含むポリマーソームならびにその作製および使用方法
Platt Surface functionalization of liposomes with proteins and carbohydrates for use in anti-cancer applications

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination