CN114480561B - 一种超氧化物歧化酶检测试剂盒 - Google Patents

一种超氧化物歧化酶检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种超氧化物歧化酶检测试剂盒，涉及体外检测技术领域。所述检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的成分和含量如下：碱性缓冲液：10～200mmol/L，加速剂：2～20g/L，表面活性剂：10～20g/L，异丙醇：1～10mL/L，叠氮钠：0.2～1g/L；所述试剂R2的成分和含量如下：酸性缓冲液：10～300mmol/L，邻苯三酚：1～10g/L，丙三醇：1～5mL/L，表面活性剂：2～20g/L，分散剂：5～10g/L，盐酸普鲁卡因：0.2～1g/L。本发明在保证了较高准确度情况下，提高了产品的稳定性。

Description

一种超氧化物歧化酶检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外检测技术领域，具体涉及一种超氧化物歧化酶检测试剂盒。
背景技术
超氧化物歧化酶，英文名为Superoxide Dismutase,简称：SOD。超氧化物歧化酶是自由基O2清除剂，它广泛存在于生物体的各种组织中，能清除自由基O2，而自由基O2具有细胞毒性，能使脂质过氧化，损伤细胞膜，引起炎症、肿瘤和自身免疫性疾病，并可能促使机体衰老。
超氧化物歧化酶对人体有着重要的作用，可清除人体内过多的有害的自由基O2，具有调节血脂的保健作用，可预防动脉粥样硬化，预防高血脂引起的心脑血管疾病；可以延缓衰老；可防治红斑狼疮、硬皮病和皮肌炎等自身免疫性疾病；有着抗氧化、抗疲劳和抗辐射的作用；能够增强肝肾功能，对糖尿病患者有较好的恢复作用。
在临床上，超氧化物歧化酶检测虽然是一种非特异的辅助诊断指标，但对机体自由基代谢紊乱、自由基清除干预对策、以及对于患者病程转归的判断，超氧化物歧化酶测定具有重要参考价值。
目前常见的超氧化物歧化酶检测方法有细胞色素C还原法(McCord法)与邻苯三酚底物法，但是细胞色素C还原法(McCord法)存在准确性不高的缺点；邻苯三酚底物法存在试剂盒不稳定的缺点。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：
本发明提供一种有着较高准确度的高稳定性超氧化物歧化酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
进一步的，所述试剂盒还包括校准品与质控品，其中：
所述校准品的成分和含量如下：
所述质控品的成分和含量如下：
进一步的，所述碱性缓冲液为甘氨酸缓冲液和Tris缓冲液的一种或多种组合；所述酸性缓冲液为柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液和PIPES缓冲液的一种或多种组合。
进一步的，所述缓冲液为PBS缓冲液和MES缓冲液的一种或多种组合。
进一步的，所述加速剂为氯化钠、氯化钾、聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000和聚乙二醇-20000中的一种或多种组合。
进一步的，所述表面活性剂为壬基酚聚氧乙烯醚、AEO9和Emulgen A90中的一种或多种组合。
进一步的，所述分散剂为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠和焦磷酸钠中的一种或多种组合。
进一步的，所述试剂R1和试剂R2的比例为3:1。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1)准确度高：本发明通过重新配比试剂R1和试剂R2各组成物的成分与含量，通过优化表面活性剂与加速剂对邻苯三酚的辅助作用，使得本发明的超氧化物歧化酶检测试剂盒的相对偏差小于5％，表示本发明保证了较高的准确度。
2)稳定性好：本发明优化试剂R1和试剂R2配比，试剂R1利用异丙醇增加表面活性剂的溶解性，达到维持试剂R1碱性环境稳定的目的，试剂R2利用分散剂将邻苯三酚形成小分子颗粒，在表面活性剂的活化下，丙三醇将其包裹形成稳定基团，从而避免了邻苯三酚因接触空气而发生反应的问题，试剂R1和试剂R2分别选择叠氮钠与盐酸普鲁卡因，增加试剂的抗干扰能力，使得试剂盒的稳定性显著提高。
附图说明
图1为本发明实施例1、实施例2、实施例3的试剂盒与对照组的试剂盒的开瓶60天稳定性试验曲线图；
图2为本发明实施例1、实施例2、实施例3的试剂盒与对照组的试剂盒的37℃热30天稳定性试验曲线图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
实施例1：
本发明的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒包括质控品、校准品、试剂R1和试剂R2，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
所述校准品的成分和含量如下：
所述质控品的成分和含量如下：
检测方法：校准品复溶后在全自动生化分析仪(HITACHI-7180)上校准，检测质控品样本、新鲜血清样本，将试剂R1和试剂R2分别进行开瓶和37℃水浴热处理，每天检测质控品样本，跟踪稳定性，记录检测结果。
实施例2：
本发明的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒包括质控品、校准品、试剂R1和试剂R2，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
所述校准品的成分和含量如下：
所述质控品的成分和含量如下：
检测方法同实施例1的检测方法。
实施例3：
本发明的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒包括质控品、校准品、试剂R1和试剂R2，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
所述校准品的成分和含量如下：
所述质控品的成分和含量如下：
检测方法同实施例1的检测方法。
对照组:
采用市场上常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的超氧化物歧化酶测定试剂盒(邻苯三酚底物法)。
结果与分析：
准确度试验：
采用实施例1、实施例2、实施例3和对照组的试剂分别进行定标，分别检测质控品(靶值为145U/mL，范围为130-160U/mL)，并计算其相对偏差，检测结果如表1所示：
表1试剂盒质控品检测结果
次数 实施例1 实施例2 实施例3 对照组
1 146.1 142.6 148.2 159.6
2 144.3 140.4 150.1 149.8
3 147.3 138.9 147.5 156.7
平均值 145.9 140.6 148.6 155.4
相对偏差 0.62％ -3.01％ 2.48％ 7.17％
相对偏差(％)＝(测定均值－质控品靶值)/质控品靶值×100％。
由表1可以看出，上述实施例1、2、3所得试剂与质控品的相对偏差均小于5％，实施例1试剂整体最佳，而对照组试剂的质控偏差超出了5％，表明了本发明的超氧化物歧化酶检测试剂盒保证了较高的准确度。
相关性试验：
采用实施例1、实施例2、实施例3和对照组的试剂进行对照检测，在HITACHI-7180上同时检测了40个临床血清样本，检测结果如表2所示。
表2相关性试验结果
由表2可以看出，上述实施例1、2和3所得试剂与对照组在HITACHI-7180上的相关系数为分别为0.9984、0.9932和0.9979，说明了本发明与对照组具有极大的相关性，进一步表明了本发明的超氧化物歧化酶检测试剂盒的可靠性。
稳定性试验：
采用实施例1、实施例2、实施例3和对照组的试剂进行开瓶和37℃热处理，在HITACHI-7180上同时检测质控品样本，开瓶稳定性跟踪两个月，热稳定性跟踪一个月，检测结果如表3、4所示，并形成开瓶60天稳定性试验和37℃热稳定性试验趋势图，如图1、2所示。
表3开瓶60天稳定性试验结果
/>
表4 37℃热稳定性试验结果
由表3可以看出，上述实施例1、2和3所得试剂在经过60天开瓶处理后，其稳定性相对偏差分别为-5.69％、-6.40％、-8.14％，表示试剂检测重复性的CV值分别为1.15％、1.55％、1.71％，均小于10％，而对照试剂在经过60天开瓶处理后，其稳定性相对偏差高达-32.38％，表示试剂检测重复性的CV值也超过了10％，说明了本发明的开瓶稳定性更好。
同样，由表4可以看出，上述实施例1、2和3所得试剂在经过30天37℃热处理后，其稳定性相对偏差分别为-6.06％、-7.01％、-8.02％，CV值分别为2.07％、1.92％、2.221％，均小于10％，而对照试剂其稳定性相对偏差高达-32.04％，表示试剂检测重复性的CV值也超过了10％，说明了本发明的热稳定性更好。
综上所述，本发明的超氧化物歧化酶检测试剂盒在确保可靠性的前提下，保证了较高准确度、更好的稳定性。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种超氧化物歧化酶检测试剂盒，其特征在于，包括试剂 R1 和试剂 R2，其中： 所述试剂 R1 的成分和含量如下： 碱性缓冲液 10~200 mmol/L； 加速剂 2~20 g/L ；表面活性剂 10~20 g/L； 异丙醇 1~10 mL/L； 叠氮钠 0.2~1 g/L；所述试剂 R2 的成分和含量如下： 酸性缓冲液 10~300 mmol/L；邻苯三酚 1~10 g/L；丙三醇 1~5mL/L；表面活性剂 2~20g/L；分散剂 5~10 g/L；盐酸普鲁卡因 0.2~1 g/L；
所述加速剂为氯化钠、氯化钾、聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚 乙二醇-8000 和聚乙二醇-20000 中的一种或多种组合；
所述试剂R1中的表面活性剂为AEO9；
所述试剂 R2中的表面活性剂为壬基酚聚氧乙烯醚和Emulgen A90 中的一 种或多种组合；
所述分散剂为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠和焦磷酸钠中的一种或多种组合。
2. 根据权利要求 1 所述的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品与质控品，其中：所述校准品的成分和含量如下： 缓冲液 100 mmol/L；超氧化物歧化酶 200 U/mL；牛血清蛋白 5 g/L；甘露醇10 g/L；MIT 0.5g/L；所述质控品的成分和含量如下：缓冲液 100 mmol/L；超氧化物歧化酶 150 U/mL；牛血清蛋白 2g/L；甘露醇5 g/L；MIT 0.2g/L。
3.根据权利要求 1 所述的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒，其特征在于，所述碱性缓冲液为甘氨酸缓冲液和 Tris 缓冲液一种或多种组合；所述酸性缓冲液为柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液和 PIPES 缓冲液一种或多种组 合。
4.根据权利要求 2 所述的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为 PBS 缓冲液和 MES 缓冲液一种或多种组合。
5. 根据权利要求 1 所述的一种超氧化物歧化酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1 和试剂 R2 的比例为 3:1。
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