CN114470338A - 一种真皮层、人工皮肤及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明特别涉及一种真皮层、人工皮肤及其制备方法，属于人工皮肤技术领域，真皮层的原料包括：重组人源胶原蛋白、维替泊芬和酶，其原料中维替泊芬提供了有效的机械转导机制，调节伤口愈合过程中的En1的表达，诱导正常真皮超微结构的恢复，解决了皮肤愈合过程中疤痕产生，无法生成毛囊、皮脂腺和其他真皮附属物的问题。

Description

一种真皮层、人工皮肤及其制备方法

技术领域

本发明属于人工皮肤技术领域，特别涉及一种真皮层、人工皮肤及其制备方法。

背景技术

胶原蛋白是人体皮肤细胞外基质的主要组成成分，一般为白色、透明、无分支的原纤维，可以占到蛋白质总量的25％～35％，发挥着重要的生理功能。因此，胶原蛋白被广泛应用在医药和化妆品等行业中。

传统胶原蛋白主要是从动物组织中提纯而来，常见的主要是从猪皮、牛跟腱和鱼皮等动物组织中化工提纯而来，但从中提纯出来的胶原蛋白为异种提纯，难以避免病毒感染以及致敏性的危险。此外，生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织，提取胶原蛋白衍生物。这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原本的生物学活性，无法应用于生物医学领域发挥真正的功能。

而重组人源胶原蛋白，是通过基因工程的方式生成的，完全避免了病毒性和致敏性的风险。现阶段对重组胶原蛋白的研究已经证实，重组Ⅲ型人源胶原蛋白，与人体胶原蛋白序列相似度达到了100％，这就确保了基础的三肽识别信号(GER、GEK)还另有更多的整合素识别位点GLSGER、RGD保证更加高效的细胞活性识别。而重组XVII型人源胶原蛋白溶液则具有修复角质和维持角质完整的功效，在促进角质细胞分化和维持皮肤正常功能方面达到促进作用。

现在的人工皮肤产品在治疗后，皮肤伤口通常会产生大量瘢痕(即疤痕)，疤痕与正常未受伤的皮肤有三方面的不同：(1)它们缺乏毛囊、皮脂腺和其他真皮附属物；(2)它们含有密集的、平行的细胞外基质纤维，而不是未受损皮肤的篮状结构；(3)由于这种基质结构的改变，它们缺乏皮肤正常的柔韧性和强度。因此，有效的疤痕治疗将通过促进真皮附属物的再生、正常基质超微结构的重建和机械稳健性的恢复来解决这三个差异。

发明内容

本申请的目的在于提供一种真皮层、人工皮肤及其制备方法，以解决目前的人工皮肤治疗后产生大量疤痕的问题。

本发明实施例提供了一种真皮层，所述真皮层的原料包括：重组人源胶原蛋白、维替泊芬和酶。

可选的，所述重组人源胶原蛋白包括重组Ⅲ型人源胶原蛋白和重组XVII型人源胶原蛋白。

可选的，以质量份数计，所述真皮层的原料包括：重组Ⅲ型人源胶原蛋白0.4-0.6份、重组XVII型人源胶原蛋白0.2-0.3份和维替泊芬0.01-0.03份。

可选的，所述酶包括谷氨酰胺转氨酶。

可选的，所述真皮层中，每1g蛋白添加0.5U～1U所述谷氨酰胺转氨酶。

基于同一发明构思，本发明实施例还提供了一种如上所述的真皮层的制备方法，所述方法包括：

将重组人源胶原蛋白、维替泊芬和溶剂进行混合，得到混合物；

将所述混合物和酶进行混合，后进行脱泡和组装，得到组装产物；

将所述组装产物进行冻干和热交联处理，得到真皮层。

可选的，所述组装的温度为4℃～8℃，所述组装的湿度为80％～90％，所述组装的时间为24h～48h；

所述冻干包括预冷、预冻、第一冻干和第二冻干，所述预冷的温度为0℃～4℃，所述预冷的时间为2h～4h，所述预冻的温度为-45℃～-35℃，所述预冻的时间为4h～6h，所述第一冻干的温度为-30℃～-20℃，所述第一冻干的气压为10Pa～30Pa，所述第一冻干的时间为24h-48h，所述第二冻干的温度为30℃～37℃，所述第二冻干的气压为1Pa～10Pa，所述第二冻干的时间为12h-24h；

所述热交联的温度为100℃～110℃，所述热交联的气压为1Pa～10Pa，所述热交联的时间为14h～34h。

基于同一发明构思，本发明实施例还提供了一种人工皮肤，所述人工皮肤包括真皮层，所述真皮层为如上所述的真皮层。

可选的，所述人工皮肤还包括表皮层，所述表皮层为丝素蛋白膜。

基于同一发明构思，本发明实施例还提供了一种如上所述的人工皮肤的制备方法，所述方法包括：

将真皮层和表皮层结合，得到人工皮肤。

本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

本发明实施例提供的真皮层，其原料中维替泊芬提供了有效的机械转导机制，调节伤口愈合过程中的En1的表达，诱导正常真皮超微结构的恢复，解决了皮肤愈合过程中疤痕产生，无法生成毛囊、皮脂腺和其他真皮附属物的问题。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本发明的具体实施方式。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1是本发明实施例提供的方法的流程图。

具体实施方式

下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。

本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：

申请人在发明过程中发现：现在的人工皮肤产品在治疗后，皮肤伤口通常会产生大量瘢痕，这是一种由En1成纤维细胞谱系介导的纤维化过程。疤痕与正常未受伤的皮肤有三方面的不同：(1)它们缺乏毛囊、皮脂腺和其他真皮附属物；(2)它们含有密集的、平行的细胞外基质纤维，而不是未受损皮肤的篮状结构；(3)由于这种基质结构的改变，它们缺乏皮肤正常的柔韧性和强度。因此，有效的疤痕治疗将通过促进真皮附属物的再生、正常基质超微结构的重建和机械稳健性的恢复来解决这三个差异。维替泊芬这种化学药物可以有效的机械转导机制，调节伤口愈合过程中的En1的表达，诱导正常真皮超微结构的恢复，抑制疤痕产生，促进了正常皮肤结构的恢复。

重组Ⅲ型人源胶原蛋白、重组XVII型人源胶原蛋白和维替泊芬的联合使用，能有效的诱导伤口再生和修复，抑制疤痕形成、促进毛囊和汗腺再生。

根据本发明一种典型的实施方式，提供了一种真皮层，所述真皮层的原料包括：重组人源胶原蛋白、维替泊芬和酶。

重组人源胶原蛋白，是通过基因工程的方式生成的，完全避免了病毒性和致敏性的风险。

维替泊芬可以有效的机械转导机制，调节伤口愈合过程中的En1的表达，诱导正常真皮超微结构的恢复，抑制疤痕产生，促进了正常皮肤结构的恢复。

在一些实施例中，重组人源胶原蛋白包括重组Ⅲ型人源胶原蛋白和重组XVII型人源胶原蛋白。

在一些实施例中，以质量份数计，所述真皮层的原料包括：重组Ⅲ型人源胶原蛋白0.4-0.6份、重组XVII型人源胶原蛋白0.2-0.3份和维替泊芬0.01-0.03份；优选的，控制重组Ⅲ型人源胶原蛋白和重组XVII型人源胶原蛋白的质量比为2：1。

重组Ⅲ型人源胶原蛋白，与人体胶原蛋白序列相似度达到了100％，这就确保了基础的三肽识别信号(GER、GEK)还另有更多的整合素识别位点GLSGER、RGD保证更加高效的细胞活性识别，控制重组Ⅲ型人源胶原蛋白0.4-0.6份是为了保持真皮层冻干后良好的孔隙结构，该份数取值过大会导致冻干后真皮层孔隙过密，硬度过高，不利于细胞长入，过小会导致冻干后真皮层孔隙过于疏松，力学强度无法满足。

重组XVII型人源胶原蛋白溶液则具有修复角质和维持角质完整的功效，在促进角质细胞分化和维持皮肤正常功能方面达到促进作用；控制重组XVII型人源胶原蛋白0.2-0.3份，以促进适宜的角质细胞分化，该份数取值过大会导致促进角质细胞分化过多，易造成皮肤表面角质层厚，失去光泽，产生皱纹等，过小会导致缺少角质细胞，角质层过薄，无法起到皮肤保护作用。

控制维替泊芬0.01-0.03份是为了维持正常的系阴性成纤维细胞表达，该份数取值过大不利于系阴性成纤维细胞表达，可能会延缓真皮层的快速修复，过小会产生大量疤痕，无法生成毛囊、皮脂腺和其他真皮附属物。

一般而言，在配制的混合物中，所述重组Ⅲ型人源胶原蛋白的质量浓度为0.4％～0.6％，所述重组XVII型人源胶原蛋白的质量浓度为0.2％～0.3％，所述维替泊芬的质量浓度为0.01％～0.03％。

在一些实施例中，酶可以选自谷氨酰胺转氨酶。具体的，谷氨酰胺转氨酶的添加量可以为：真皮层中，每1g蛋白添加0.5U～1U所述谷氨酰胺转氨酶。

控制谷氨酰胺转氨酶的添加量为0.5～1U(酶)/g(总蛋白)以控制真皮层的交联程度，该添加量取值过大导致交联程度过高，降解过于缓慢，过小则交联程度过低，导致降解过快。

根据本发明另一种典型的实施方式，提供了一种如上所述的真皮层的制备方法，所述方法包括：

S1.将重组人源胶原蛋白、维替泊芬和溶剂进行混合，得到混合物；

一般而言，溶剂采用纯化水、乙酸水溶液等。

S2.将所述混合物和酶进行混合，后进行脱泡和组装，得到组装产物；

在一些实施例中，组装的温度为4℃～8℃，所述组装的湿度为80％～90％，所述组装的时间为24h～48h。

S3.将所述组装产物进行冻干和热交联处理，得到真皮层。

在一些实施例中，所述冻干包括预冷、预冻、第一冻干和第二冻干，所述预冷的温度为0℃～4℃，所述预冷的时间为2h～4h，所述预冻的温度为-45℃～-35℃，所述预冻的时间为4h～6h，所述第一冻干的温度为-30℃～-20℃，所述第一冻干的气压为10Pa～30Pa，所述第一冻干的时间为24h-48h，所述第二冻干的温度为30℃～37℃，所述第二冻干的气压为1Pa～10Pa，所述第二冻干的时间为12h-24h。

在一些实施例中，热交联的温度为100℃～110℃，所述热交联的气压为1Pa～10Pa，所述热交联的时间为14h～34h。

根据本发明另一种典型的实施方式，提供了一种人工皮肤，所述人工皮肤包括真皮层，所述真皮层为如上所述的真皮层。

在一些实施例中，人工皮肤还包括表皮层，所述表皮层为丝素蛋白膜。

根据本发明另一种典型的实施方式，提供了一种如上所述的人工皮肤的制备方法，所述方法包括：

S1.将重组人源胶原蛋白溶液和维替泊芬溶液进行混合，得到混合物；

S2.将所述混合物和酶进行混合，后进行脱泡和组装，得到组装产物；

S3.将所述组装产物进行冻干和热交联处理，得到真皮层。

S4.将真皮层和表皮层结合，得到人工皮肤。

下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请的真皮层、人工皮肤及其制备方法进行详细说明。

实施例1

一种人工皮肤的制备方法，方法包括：

以占组装产物质量百分比计，依次配制0.4％重组Ⅲ型人源胶原蛋白溶液、0.2％重组XVII型人源胶原蛋白溶液和0.01％维替泊芬溶液，在温度4℃、湿度80％、混合24h，按照0.5U(酶)/g(总蛋白)的比例加入谷氨酰胺转氨酶，继续混合0.5h，混匀，真空脱泡，得到组装产物；

按照冻干工艺参数为：0℃预冷2h；-45℃预冻4h；-30℃、10Pa冻干24h；30℃、1Pa冻干12h，设置冻干工艺参数，冻干组装产物；

在105℃、1Pa的条件下交联24h，对所得冻干产物进行热交联处理，得到真皮层；

将得到的真皮层和丝素蛋白膜结合，得到人工皮肤。

实施例2

一种人工皮肤的制备方法，方法包括：

以占组装产物质量百分比计，依次配制0.5％重组Ⅲ型人源胶原蛋白溶液、0.25％重组XVII型人源胶原蛋白溶液和0.02％维替泊芬溶液，在温度6℃、湿度85％、混合36h，按照0.75U(酶)/g(总蛋白)的比例加入谷氨酰胺转氨酶，继续混合0.75h，混匀，真空脱泡，得到组装产物；

按照冻干工艺参数为：2℃预冷3h；-40℃预冻5h；-25℃、15Pa冻干36h；37℃、5Pa冻干18h，设置冻干工艺参数，冻干组装产物；

在105℃、5Pa的条件下交联24h，对所得冻干产物进行热交联处理，得到真皮层；

将得到的真皮层和丝素蛋白膜结合，得到人工皮肤。

实施例3

一种人工皮肤的制备方法，方法包括：

以占组装产物质量百分比计，依次配制0.6％重组Ⅲ型人源胶原蛋白溶液、0.3％重组XVII型人源胶原蛋白溶液和0.03％维替泊芬溶液，在温度8℃、湿度90％、混合48h，按照1U(酶)/g(总蛋白)的比例加入谷氨酰胺转氨酶，继续混合1h，混匀，真空脱泡，得到组装产物；

按照冻干工艺参数为：4℃预冷4h；-35℃预冻6h；-20℃、30Pa冻干48h；37℃、10Pa冻干24h，设置冻干工艺参数，冻干组装产物；

在105℃、10Pa的条件下交联24h，对所得冻干产物进行热交联处理，得到真皮层；

将得到的真皮层和丝素蛋白膜结合，得到人工皮肤。

对比例1

一种新型人工皮肤及其制备方法，方法如下：

(1)取新鲜的猪离体头层中厚皮500g，加入1000mL浓度为0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡10h，去离子水冲洗干净，沥干水分。刮除多余的体毛及皮下附带的脂肪组织，将得到的真皮剪碎成0.3cm的小块，去离子水振荡冲洗5次，每次20min；

(2)依次用60U/mL的DNA酶、0.25％w/v胰蛋白酶溶液(含0.1％w/v EDTA)振荡处理2h，0.3％十二烷基硫酸钠振荡处理1.5h，0.4％过氧乙酸溶液振荡处理1h，PBS溶液振荡处理1h，每一步骤结束都用去离子水漂洗干净，沥干水分。将得到的脱细胞真皮基质冷冻干燥；

(3)取步骤(2)制得的脱细胞真皮基质20g溶于400mL浓度为0.5mg/mL的胃蛋白酶液中，37℃振荡处理25h，得到脱细胞真皮基质溶液。一边振荡一边向该基质溶液中滴加适量氢氧化钠溶液，调节pH值为7.4；

(4)将1.2g氧化石墨烯粉末与步骤(3)中获得的脱细胞真皮基质溶液混合，用超声细胞破碎仪以25％强度、超声时间2min、间隔时间4s在冰浴条件下进行超声混匀，得到均匀的氧化石墨烯-脱细胞真皮基质溶液；

(5)将步骤(4)中获得的氧化石墨烯-脱细胞真皮基质溶液倒入光滑的平底模具中，冷冻干燥，得到一种疏松多孔的脱细胞真皮基质；

(6)取废弃的人包皮组织标本，用无钙镁的磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.2)浸泡3次，除去皮下脂肪并剪成约0.5×1cm²的片状，再用PBS清洗，然后放入0.25％胰蛋白酶溶液中，于4℃消化18～22h后取出，从真皮上揭下表皮，置于盛有5mL国产DMEM培养液的小瓶内，用滴管轻轻吹打培养液，使表皮细胞离散到培养液中，用滤网过滤，弃去残余的表皮，获得表皮细胞的培养液。通过负压吸引装置，使含表层细胞的培养液反复流经上述制备好的脱细胞真皮基质，使细胞生长因子高效富集于基质材料内部，32℃烘干后得到一种新型人工皮肤。

对比例2

一种微纳仿生人工皮肤修复膜，方法如下：

基底膜直接与创面进行接触，由质量分数为20-30％的丝胶蛋白水溶液电纺丝而成，直径为50-500nm，厚度为1-5μm。

支架层为质量浓度为9％的PLA静电纺液和质量浓度为8.5％的PCL静电纺液按1:1进行混纺喷织而成，厚度为0.15-0.8mm，直径为0.2-5μm；将PLA静电纺液和PCL静电纺液分别安装在电纺正负极，通过喷丝头进行射流交汇后到达收集板，在收集板上形成混纺静电纺丝，喷丝交汇处距离收集板的距离为8-10cm，纺丝电压为18kV。

表皮膜为生物可降解聚氨酯薄膜，厚度为0.05-0.12mm，在表皮膜上装载有纳米银，设置有透湿透气微孔。

可分离表膜由丙纶丝编织而成，设置有粘附外沿。粘附外沿环绕可分离表膜设置。在粘附外沿对应位置未叠设有基底膜、支架层和聚氨酯表皮膜。在粘附外沿表面涂覆有透气微孔胶。可分离表膜由细旦丙纶丝采用平纹组织结构编织而成；可分离表膜的编织孔径不小于0.15mm，外表面涂覆有拒水拒油涂层。

使用时，先根据创面的形状，分别对基底膜、支架层和表皮膜形成的复合膜以及可分离表膜进行裁剪，可分离表膜的外缘比复合膜的外缘大0.5-1.5mm，在复合膜的双面涂覆细胞冻存液，并将可分离表膜复合在复合膜的外表面上；对创面表面进行清理，通过可分离表膜将复合膜贴覆在创面上；根据3-10天后根据恢复情况，将可分离表膜撕去。

对比例3

一种人工皮肤的制备方法，步骤如下：

将粒径30～90μm的猪皮脱细胞真皮基质微粒用0.10M乙酸配制成浓度10％(w/w)的溶液，充分溶解混匀，转入打印针筒，真空脱泡，在温度37℃、湿度40％的条件下组装12h，制得异种脱细胞真皮基质凝胶。

构建真皮层三维结构模型，设置打印参数。具体的，真皮层下层的打印参数为：纤维束直径100μm，喷嘴移动速度5～10mm/s，纤维间距100×100×100μm，打印气压5～15kPa，打印平台温度为0℃，厚度3000μm；真皮层上层的打印参数为：纤维束直径20μm，喷嘴的移动速度5～10mm/s，纤维间距40×40×40μm，打印气压20～40kPa，打印平台的温度0℃，厚度500μm。将上述打印参数导入打印机，利用两个喷嘴分别打印S1中的凝胶，所得打印物依次经过酒精浸泡、冷冻干燥、戊二醛蒸汽交联、热交联、解析工艺，得到真皮层。具体的，酒精浸泡条件为：体积浓度10％的酒精、0℃下浸泡24h；戊二醛蒸汽交联工艺条件为：密闭容器中，10％的戊二醛蒸汽、40℃下交联5h；热交联条件为：真空干燥箱中，100Pa、100℃下交联48h；解析条件为：鼓风干燥箱中，37℃下解析2d。

将医用微孔硅胶膜，通过粘合剂与S2中得到真皮层的上层结合，制得人工皮肤，所用粘合剂为聚二甲基硅氧烷。

本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少还具有如下技术效果或优点：

(1)本发明实施例提供的人工皮肤中重组Ⅲ型人源胶原蛋白和重组XVII型人源胶原蛋白，与人体胶原蛋白序列相似度达到了100％，具有修复角质和维持角质完整的功效，在促进角质细胞分化和维持皮肤正常功能方面达到促进作用，解决了现有技术中动物源性胶原蛋白可能有的病毒感染以及致敏性的风险问题；

(2)本发明实施例提供的人工皮肤中维替泊芬提供了有效的机械转导机制，调节伤口愈合过程中的En1的表达，诱导正常真皮超微结构的恢复，解决了皮肤愈合过程中疤痕产生，无法生成毛囊、皮脂腺和其他真皮附属物的问题；

(3)本发明实施例提供的人工皮肤通过重组Ⅲ型人源胶原蛋白、重组XVII型人源胶原蛋白和维替泊芬的联合使用，能有效的诱导伤口再生和修复，抑制疤痕形成、促进毛囊和汗腺再生。

最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (10)

1.一种真皮层，其特征在于，所述真皮层的原料包括：重组人源胶原蛋白、维替泊芬和酶。

2.根据权利要求1所述的真皮层，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白包括重组Ⅲ型人源胶原蛋白和重组XVII型人源胶原蛋白。

3.根据权利要求2所述的真皮层，其特征在于，以质量份数计，所述真皮层的原料包括：重组Ⅲ型人源胶原蛋白0.4-0.6份、重组XVII型人源胶原蛋白0.2-0.3份和维替泊芬0.01-0.03份。

4.根据权利要求1所述的真皮层，其特征在于，所述酶包括谷氨酰胺转氨酶。

5.根据权利要求4所述的真皮层，其特征在于，所述真皮层中，每1g蛋白添加0.5U～1U所述谷氨酰胺转氨酶。

6.一种权利要求1至5中任意一项所述的真皮层的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

将重组人源胶原蛋白、维替泊芬和溶剂进行混合，得到混合物；

将所述混合物和酶进行混合，后进行脱泡和组装，得到组装产物；

将所述组装产物进行冻干和热交联处理，得到真皮层。

7.根据权利要求6所述的真皮层的制备方法，其特征在于，所述组装的温度为4℃～8℃，所述组装的湿度为80％～90％，所述组装的时间为24h～48h；

所述冻干包括预冷、预冻、第一冻干和第二冻干，所述预冷的温度为0℃～4℃，所述预冷的时间为2h～4h，所述预冻的温度为-45℃～-35℃，所述预冻的时间为4h～6h，所述第一冻干的温度为-30℃～-20℃，所述第一冻干的气压为10Pa～30Pa，所述第一冻干的时间为24h-48h，所述第二冻干的温度为30℃～37℃，所述第二冻干的气压为1Pa～10Pa，所述第二冻干的时间为12h-24h；

所述热交联的温度为100℃～110℃，所述热交联的气压为1Pa～10Pa，所述热交联的时间为14h～34h。

8.一种人工皮肤，其特征在于，所述人工皮肤包括真皮层，所述真皮层为权利要求1至5中任意一项所述的真皮层。

9.根据权利要求8所述的人工皮肤，其特征在于，所述人工皮肤还包括表皮层，所述表皮层为丝素蛋白膜。

10.一种权利要求8至9中任意一项所述的人工皮肤的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

将真皮层和表皮层结合，得到人工皮肤。

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