CN114459859A - 基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置 - Google Patents

基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，包括底座、集成于所述底座一侧的样品净化组件、以及集成于所述底座另一侧的样品测定组件；本发明的检测装置集成了样品净化组件和样品测定组件，可以实现高通量二噁英样品的自动检测，大幅降低劳动强度、提高检测数据的重现性，为批量二噁英样品的快速检测提供了可靠的技术手段。

Description

基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置
技术领域
本发明涉及二噁英检测技术领域，尤其涉及一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置。
背景技术
二噁英是人类已知的毒性极高的物质，冶金、垃圾焚烧等行业广泛存在二噁英排放风险，因此需要对其开展检测。现有的检测方法包括高分辨质谱法和荧光素酶报告基因法。
高分辨质谱法主要流程包括样品净化和样品检测与计算；样品净化和检测均采用进口设备(如美国FMS或德国LCTech二噁英样品净化仪，美国Thermo高分辨质谱仪)，该种设备都是通过压力系统让溶剂通过净化柱，净化后的样品手工转入高分辨质谱仪进行检测。
荧光素酶报告基因法(即CALUX)二噁英检测技术是经过EPA认证的一种生物学筛查二噁英的方法((EPA SW-846-4435方法，METHOD FOR TOXIC EQUIVALENTS(TEQS)DETERMINATIONS FOR DIOXIN-LIKE CHEMICAL ACTIVITY WITH THE CALUX BIOASSAY))。这种技术是一种简便快捷的生物学二噁英筛查技术。
高分辨质谱法检测二噁英具有灵敏度高、结果准确等优点，是国际上公认的标准方法。这种方法需要专门的大面积实验室和超净环境、昂贵的检测设备、高水平的检测人员和高昂的运行成本。
其中，高分辨质谱法这套系统检测过程复杂，没有能够将样品净化和检测功能整合在一起的仪器设备，许多步骤不得不手工操作，因此出具检测报告速度较慢，工作强度较高，是一种高成本的检测技术。
CALUX是利用细胞株检测二噁英的一种生物检测方法，该细胞株可因芳香烃受体被激活而通过萤火虫荧光素酶表达。该细胞株和样品中的芳香烃二噁英类物质接触，使其增加合成CYP1A1蛋白质和荧光素酶蛋白质，通过测定荧光素酶的发光量，即可求得样品中的二噁英类物质的毒性当量(TEQs)浓度。
采用CALUX技术建立和运行二噁英实验室的成本都远低于高分辨质谱法实验室，但这种技术完全采用手工操作，费时费力，存在不同实验人员、不同实验室间的重现性问题。
因此，基于上述技术问题，本领域的技术人员亟需研发一种新型二噁英检测装置，即基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置。
发明内容
本发明的目的是提供一种主要功能包括自动加样、样品净化、收集、浓缩、复溶；样品转移；细胞培养；布板、洗板、读板、计算、报告等功能，能够实现二噁英样品的高通量自动检测的二噁英自动检测装置。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明是一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，该检测装置包括：
底座；
集成于所述底座一侧的样品净化组件；以及
集成于所述底座另一侧的样品测定组件；
所述样品净化组件包括柱箱组，所述柱箱组用以放置对应的容器，该样品净化组件具有能够移动任一柱箱的第一机械臂，且一个所述第一机械臂通过第一夹爪移动所述柱箱，另一个所述第一机械臂具有氮吹头；
具有所述第一夹爪的所述第一机械臂的侧面安装有移液头机构，所述移液头机构包括移液头，该装置外部配设有溶液容器和定量吸液泵，所述移液头通过导管与所述溶液容器连通以向对应的所述容器内输入溶液；
所述样品测定组件包括二氧化碳培养箱和酶标仪；
所述样品测定组件通过第二机械臂的第二夹爪移动96孔板，且所述样品测定组件具有液体工作站移液头，所述液体工作站移液头通过至少一个吸液头实现测定液体的移液。
进一步的，所述底座与所述第一机械臂配合的位置具有第一机械臂滑轨，所述第一机械臂能够沿所述第一机械臂滑轨的延伸方向滑动；
所述底座与所述第二机械臂配合的位置具有第二机械臂滑轨，所述第二机械臂能够沿所述第二机械臂滑轨的延伸方向滑动。
进一步的，所述柱箱组包括硅胶柱箱、活性炭柱箱、样品柱箱、PCB收集液柱箱、二噁英收集液柱箱；
所述硅胶柱箱、活性炭柱箱、样品柱箱、PCB收集液柱箱、二噁英收集液柱箱均放置有相同数量的所述容器，且所述移液头机构的移液头的数量与所述溶液容器数量匹配；
所述PCB收集液柱箱和所述二噁英收集液柱箱位于超声水浴装置内。
进一步的，所述溶液容器内分别存放有正己烷溶液、丙酮溶液、甲苯溶液、混合溶剂，且其中一个溶液容器为存放废液的废液瓶。
进一步的，所述孔板分为96孔板或96深孔板；
所述样品净化组件处具有第一工作位置，所述样品测定组件处具有第二工作位置；
所述第二工作位置为旋涡混合器和震荡器位；
所述样品净化组件的溶液储存位置用以存放标准溶液、磷酸盐缓冲液和细胞裂解液。
进一步的，所述样品测定组件还具有第三工作位置；
所述第二机械臂的第二夹爪夹持所述96孔板至所述第二工作位置进行震荡清洗作业，且经过震荡清洗的所述96孔板通过所述第二夹爪移动至所述第三工作位置，并通过所述液体工作站移液头吸走PBS。
在上述技术方案中，本发明提供的一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，具有以下有益效果：
本发明的检测装置集成了样品净化组件和样品测定组件，可以实现高通量二噁英样品的自动检测，大幅降低劳动强度、提高检测数据的重现性，为批量二噁英样品的快速检测提供了可靠的技术手段。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例提供的一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置的结构示意图。
附图标记说明：
1、底座；2、第一机械臂；4、超声水浴装置；5、容器A；7、溶液容器；8、废料盘；10、液体工作移液头；11、溶液储存位置；12、第二机械臂；13、二氧化碳培养箱；14、酶标仪；
201、第一机械臂滑轨；202、第一夹爪；203、氮吹头；204、移液头；
301、硅胶柱箱；302、活性炭柱箱；303、样品柱箱；304、PCB收集液柱箱；305、二噁英收集液柱箱；
601、第一工作位置；602、第二工作位置；603、第三工作位置；
901、96孔板；902、96深孔板；
1201、第二机械臂滑轨；1202、第二夹爪。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合附图对本发明作进一步的详细介绍。
参见图1所示；
本实施例的一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，该检测装置包括：
底座1；
集成于底座1一侧的样品净化组件；以及
集成于底座1另一侧的样品测定组件；
样品净化组件包括柱箱组，柱箱组用以放置对应的容器，该样品净化组件具有能够移动任一柱箱的第一机械臂2，且一个第一机械臂2通过第一夹爪202移动柱箱，另一个第一机械臂2具有氮吹头203；
具有第一夹爪202的第一机械臂2的侧面安装有移液头机构，移液头机构包括多根移液头204，该装置外部配设有溶液容器7和定量吸液泵，每根移液头204均通过导管与其中一个溶液容器7连通以向对应的容器内输入溶液；
样品测定组件包括二氧化碳培养箱13和酶标仪14；
样品测定组件通过第二机械臂12的第二夹爪1202移动孔板，且样品测定组件具有液体工作站移液头10，液体工作站移液头10通过至少一个吸液头实现测定液体的移液。
具体的，本实施例公开了一种新型高通量二噁英检测装置，其分为样品净化组件和样品测定组件；本实施例以每组柱箱内放置9个样品为例做进一步的解释和说明。
其中，本实施例的样品净化组件包括柱箱组，用作柱箱移动的第一机械臂2，以及对应作业用的氮吹头203、第一夹爪202和移液头机构。
优选的，本实施例的底座1与第一机械臂2配合的位置具有第一机械臂滑轨201，第一机械臂2能够沿第一机械臂滑轨201的延伸方向滑动；
底座1与第二机械臂12配合的位置具有第二机械臂滑轨1201，第二机械臂12能够沿第二机械臂滑轨1201的延伸方向滑动。
其中，上述的柱箱组包括硅胶柱箱301、活性炭柱箱302、样品柱箱303、PCB收集液柱箱304、二噁英收集液柱箱305；
硅胶柱箱301、活性炭柱箱302、样品柱箱303、PCB收集液柱箱304、二噁英收集液柱箱305均放置有相同数量的容器，且移液头机构的移液头204的数量与溶液容器7数量匹配；
PCB收集液柱箱304和二噁英收集液柱箱305位于超声水浴装置4内。
溶液容器7内分别存放有正己烷溶液、丙酮溶液、甲苯溶液、混合溶剂，且其中一个溶液容器7为存放废液的废液瓶。
本实施例的柱箱是用于放置各种类型净化柱和样品管的容器，第一机械臂2携带的第一夹爪202可以将柱箱整体移动到指定的位置。依据放置的净化柱、样品管、样品提取液收集管等不同的数量和尺寸，本实施例的柱箱的孔位和尺寸也可以做适当的调整。
在样品净化组件的容器A5处用以将复溶后的PCB和二噁英收集液配置和定容后作为样品溶液转入细胞培养和检测段。孔数可按照每批次样品数量自行定制。
优选的，本实施例的孔板分为标准96孔板901或96深孔板902(可根据溶液量自行选择)；
样品净化组件处具有第一工作位置601，样品测定组件处具有第二工作位置602；
第二工作位置602为旋涡混合器和震荡器位；
样品净化组件的溶液储存位置11用以存放标准溶液、磷酸盐缓冲液和细胞裂解液。
样品测定组件还具有第三工作位置603；
第二机械臂12的第二夹爪1202夹持96孔板901至第二工作位置602进行震荡清洗作业，且经过震荡清洗的96孔板901通过第二夹爪1202移动至第三工作位置603，并通过液体工作站移液头10吸走PBS。
作为拓展性的说明：考虑到样品净化在负压环境操作，样品测定为正压环境，可以将样品净化模块放在通风橱中，样品测定模块放在洁净台内，两者之间有挡板，在可伸缩轨道传送容器A时挡板打开，传送完毕轨道复原，挡板即关闭。
上述的混合溶剂为乙酸乙酯/甲苯/正己烷＝10％/10％/80％预先混合的溶剂。标准溶液为预先配制好的工作曲线溶液，包括阴性对照试剂(NC)、标准曲线绘制用标准溶液(使用2,3,7,8-TCDD标准溶液稀释配制)、质量控制溶液(QC)。
本实施例的二噁英自动检测装置的工艺方法包括：
1、样品净化方法：
S101、将装好硅胶柱的柱箱放在硅胶柱箱301，装好活性炭柱的柱箱放在活性炭柱箱302，装好样品溶液(S1—S9)的柱箱放在样品柱箱303，PCB收集液的柱箱放在PCB收集液柱箱304，二噁英收集液的柱箱放在二噁英收集液柱箱305；
S102、用移液头204向每根硅胶柱上加入50mL正己烷预淋洗硅胶柱，用移液头204在每根活性碳柱上依次加入丙酮5mL、甲苯20mL、正己烷10mL预淋洗活性炭柱；
S103、预淋洗溶剂滴完后用第一夹爪202将硅胶柱箱301架到活性炭柱箱302上；
S104、用移液头204从样品柱箱303吸取样品溶液，加入对应硅胶柱上，然后向每根硅胶柱中加入25mL正己烷；
S105、待步骤S104中加入的样品和正己烷溶液滴完后，用第一夹爪202将硅胶柱箱301移回硅胶柱箱301位置，然后用移液头204向每一根活性炭柱加入10mL正己烷；
S106、用第一夹爪202把活性炭柱箱302移到PCB收集液柱箱304处，架到PCB收集液柱箱304上，用移液头204向每一根活性炭柱加入15mL淋洗液，开始收集PCB收集液(编号为S1-P—S9-P)；
S107、PCB收集液收集完成后用第一夹爪202把活性炭柱箱302移到二噁英收集液柱箱305，架到二噁英收集液柱箱305上，用移液头204向每一根活性炭柱加入20mL甲苯淋洗液，开始收集二恶英收集液(编号为S1-D—S9-D)；
S108、二噁英收集液收集完成后，用第一夹爪202将活性炭柱箱302移回原位；
S109、第一机械臂2带动氮吹头203移动到二噁英收集液柱箱305上方，启动氮吹，直到二噁英收集液柱箱305的二恶英收集液吹干，用移液头204向每一支二噁英收集液管305中加入4ml正己烷复溶；
S110、第一机械臂2带动氮吹头203移动到PCB收集液柱箱304上方，开始启动氮吹，直到PCB收集液柱箱304的PCB收集液吹干，向每一支PCB收集液管中加入4ml正己烷复溶；
S111、启动超声水浴10分钟，促使PCB收集液柱箱304和二噁英收集液柱箱305的PCB和二恶英样品充分复溶。
2、样品测定方法：样品测定组件用于按照荧光素酶报告基因法检测二恶英和共平面PCB样品
S201、用第一夹爪202从容器A5位置把一个容器A5移到第二工作位置602(涡旋混合器和震荡器位)；
S202、用液体工作站移液头10向容器A5的A3:F5中分别加入4uL DMSO(参见下表)；
S203、用液体工作站移液头10向容器A5的A1:F2中分别加入4uL对应的阴性对照试剂(NC)、标液(STD1-STD9)、QC溶液(参见下表)；
Figure BDA0003507083330000081
S204、用第一夹爪202将容器A5移到第一工作位置601；
S205、用移液头204按照软件计算的加样量(加样量＝4000/样品稀释倍数uL，测定样品稀释倍数的实验与样品测定的硬件设备完全相同)；依次从PCB收集液柱箱304吸取PCB收集液(编号为S1-P—S9-P)或从二噁英收集液柱箱305吸取二恶英收集液(编号为S1-D—S9-D)分别加入容器A5对应的A3：F5样品孔中，每个样品都平行取两个样(收集液的编号与图中的S1-S9对应，例如：收集液S1-P第一次吸取加入A5中，第二次吸取同样同量的收集液加入到B5，以此类推)；
S206、用移液头204按照软件计算的加液量(加液量计算方法：A1:F2孔：加液量＝996uL；A3:F5孔：加液量＝(1000-4000/样品稀释倍数-4)uL)吸取正己烷加入到容器A对应的A1：F5孔中，定容至1mL；
S207、第一机械臂2带动氮吹头203移动到第一工作位置601的容器A5上方，开启氮吹，将容器A5的溶液吹干；
S208、用第一夹爪202将容器A5移到第二工作位置602(涡旋混合器和震荡器位)，使用液体工作站移液头10向容器A5的A1:F5中分别加入400uL培养基，然后振荡混匀；
S209、程序控制打开二氧化碳培养箱13，内置推送装置推出孔板，用第二机械臂12上的第二夹爪1202将孔板夹到第三工作位置603，确认细胞的培养状态正常后，用液体工作站移液头10吸走孔板中的培养基；
S210、使用液体工作站移液头10从第二工作位置602的容器A5的每个孔中吸取190uL已配制好的标液、QC、NC以及样品溶液分别加入孔板对应孔中(参见下表)；
Figure BDA0003507083330000091
S211、第一夹爪202将容器A5从第二工作位置602移到废料盘8中；
S212、用第二机械臂12上的第二夹爪1202将孔板夹到二氧化碳培养箱13打开的托盘上，程序控制二氧化碳培养箱13关闭托盘，开始培养；
S213、孔板在二氧化碳培养箱13中培养14小时后，用第二机械臂上的第二夹爪将它夹到液体工作站移液头下的第三工作位置，使用液体工作站移液头吸走培养基；
S214、使用液体工作站移液头向孔板的B2：G11每个孔中加入50uL磷酸盐缓冲液(PBS)，再用第二机械臂12上的第二夹爪1202将孔板移到第二工作位置602(涡旋混合器和震荡器位)振荡清洗后，用第二机械臂12上的第二夹爪1202将孔板移到第三工作位置603，然后用液体工作站移液头10吸走PBS；
S215、确认细胞状态正常后，使用液体工作站移液头10向孔板的B2：G11每个孔中加入30uL细胞裂解液，然后用第二机械臂12上的第二夹爪1202将孔板夹到第二工作位置602(涡旋混合器和震荡器位)，缓慢震动5分钟进行混合，再静置10分钟；
S216、用第二机械臂12上的第二夹爪1202将96孔板901夹到酶标仪96孔板托盘上，程序控制酶标仪14关闭托盘，然后用酶标仪14自带的自动进样器向孔板的B2：G11每个孔中自动添加30uL荧光素酶溶液，开始测定发光量RLU值；
S217、测定完成后，软件按照如下公式计算毒性当量，然后输出结果报告。
在该方法中二噁英的检出原理与酶反应式相同，酶反应的模型计算式适用于Hill公式，其Hill最简单的计算式为Michaelis-Menten公式：
在此方法中用[s]n代替[S],因此上述公式变为：
Figure BDA0003507083330000101
式中：
V：荧光素酶的生成浓度(RLU)；
Vmax：荧光素酶的最大生成量；
Km：V＝1/2Vmax时的基质浓度的自然对数值；
n：Hill系数、斜率变量；
b：截距。
将DMSO配制的9系列2，3，7，8-TCDD标准溶液，按照CALUX方法操作，得出RLU，带入理论式，使用软件计算，进行4参数Vmax、Km、n、b的最佳化(使所测的RLU和理论式的RLU之间的偏差的2次方最小)，从而得出四个参数：Vmax、n、Km以及b。
在上述技术方案中，本发明提供的一种基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，具有以下有益效果：
本发明的检测装置集成了样品净化组件和样品测定组件，可以实现高通量二噁英样品的自动检测，大幅降低劳动强度、提高检测数据的重现性，为批量二噁英样品的快速检测提供了可靠的技术手段。
以上只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述附图和描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。

Claims (8)

1.基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，该检测装置包括：
底座(1)；
集成于所述底座(1)一侧的样品净化组件；以及
集成于所述底座(1)另一侧的样品测定组件；
所述样品净化组件包括柱箱组，所述柱箱组用以放置对应的容器，该样品净化组件具有能够移动任一柱箱的第一机械臂(2)，且一个所述第一机械臂(2)通过第一夹爪(202)移动所述柱箱，另一个所述第一机械臂(2)具有氮吹头(203)；
具有所述第一夹爪(202)的所述第一机械臂(2)的侧面安装有移液头机构，所述移液头机构包括移液头(204)，该装置外部配设有溶液容器(7)，所述移液头(204)通过导管与所述溶液容器(7)连通以向对应的所述容器内输入溶液；
所述样品测定组件包括二氧化碳培养箱(13)和酶标仪(14)；
所述样品测定组件通过第二机械臂(12)的第二夹爪(1202)移动孔板，且所述样品测定组件具有液体工作站移液头(10)，所述液体工作站移液头(10)通过至少一个吸液头实现测定液体的移液。
2.根据权利要求1所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，所述底座(1)与所述第一机械臂(2)配合的位置具有第一机械臂滑轨(201)，所述第一机械臂(2)能够沿所述第一机械臂滑轨(201)的延伸方向滑动；
所述底座(1)与所述第二机械臂(12)配合的位置具有第二机械臂滑轨(1201)，所述第二机械臂(12)能够沿所述第二机械臂滑轨(1201)的延伸方向滑动。
3.根据权利要求1所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，所述柱箱组包括硅胶柱箱(301)、活性炭柱箱(302)、样品柱箱(303)、PCB收集液柱箱(304)、二噁英收集液柱箱(305)；
所述硅胶柱箱(301)、活性炭柱箱(302)、样品柱箱(303)、PCB收集液柱箱(304)、二噁英收集液柱箱(305)均放置有相同数量的所述容器，且所述移液头机构的移液头(204)的数量与所述溶液容器(7)匹配；
所述PCB收集液柱箱(304)和所述二噁英收集液柱箱(305)位于超声水浴装置(4)内。
4.根据权利要求3所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，所述溶液容器(7)内分别存放有正己烷溶液、丙酮溶液、甲苯溶液、混合溶剂，且其中一个溶液容器(7)为存放废液的废液瓶。
5.根据权利要求1所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，所述孔板分为96孔板(901)和96深孔板(902)；
所述样品净化组件处具有第一工作位置(601)，所述样品测定组件处具有第二工作位置(602)；
所述第二工作位置(602)为旋涡混合器和震荡器位；
所述样品净化组件的溶液储存位置(11)用以存放标准溶液、磷酸盐缓冲液PBS和细胞裂解液。
6.根据权利要求5所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，所述样品测定组件还具有第三工作位置(603)；
所述第二机械臂(12)的第二夹爪(1201)夹持所述96孔板(901)至所述第二工作位置(602)进行震荡清洗作业，且经过震荡清洗的所述96孔板(901)通过所述第二夹爪(1201)移动至所述第三工作位置(603)，并通过所述液体工作站移液头(10)吸走PBS。
7.根据权利要求1所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，该装置的样品净化组件的工艺方法主要包括以下步骤：
S101、将装好硅胶柱的柱箱放在硅胶柱箱(301)，装好活性炭柱的柱箱放在活性炭柱箱(302)，装好样品溶液管的柱箱放在样品柱箱(303)，装好PCB收集液管的柱箱放在PCB收集液柱箱(304)，装好二噁英收集液管的柱箱放在二噁英收集液柱箱(305)；
S102、用移液头(204)向每根硅胶柱上加入50mL正己烷预淋洗硅胶柱，用移液头(204)在每根活性碳柱上依次加入丙酮5mL、甲苯20mL、正己烷10mL预淋洗活性炭柱；
S103、预淋洗溶剂滴完后用第一夹爪(202)将硅胶柱箱(301)架到活性炭柱箱(302)上；
S104、用移液头(204)从样品柱箱(303)吸取样品溶液，加入对应硅胶柱上，然后向每根硅胶柱中加入25mL正己烷；
S105、待步骤S104中加入的样品和正己烷溶液滴完后，用第一夹爪(202)将硅胶柱箱(301)移回硅胶柱箱(301)位置，然后用移液头(204)向每一根活性炭柱加入10mL正己烷；
S106、用第一夹爪(204)把活性炭柱箱(301)移到PCB收集液柱箱(304)处，架到PCB收集液柱箱(304)上，用移液头(204)向每一根活性炭柱加入15mL淋洗液，开始收集PCB收集液；
S107、PCB收集液收集完成后用第一夹爪(202)把活性炭柱箱(302)移到二噁英收集液柱箱(305)，架到二噁英收集液柱箱(305)上，用移液头(204)向每一根活性炭柱加入20mL甲苯淋洗液，开始收集二恶英收集液；
S108、二噁英收集液收集完成后，用第一夹爪(202)将活性炭柱箱(302)移回原位；
S109、第一机械臂(2)带动氮吹头(203)移动到二噁英收集液柱箱(305)上方，启动氮吹，直到二噁英收集液柱箱(305)的二恶英收集液吹干，用移液头(204)向每一支二噁英收集液管中加入4ml正己烷复溶；
S110、第一机械臂(2)带动氮吹头(203)移动到PCB收集液柱箱(304)上方，开始启动氮吹，直到PCB收集液柱箱(304)的PCB收集液吹干，向每一支PCB收集液管中加入4ml正己烷复溶；
S111、启动超声水浴10分钟，促使PCB收集液柱箱(304)和二噁英收集液柱箱(305)的PCB和二恶英样品充分复溶。
8.根据权利要求1所述的基于荧光素酶报告基因法的高通量二噁英自动检测装置，其特征在于，该装置的样品测定组件的工艺方法主要包括以下步骤：
S201、用第一夹爪(202)从容器A(5)位置把一个容器A(5)移到第二工作位置(602)；
S202、用液体工作站移液头(10)向容器A(5)的A3:F5中分别加入4uL DMSO；
S203、用液体工作站移液头(10)向容器A(5)的A1:F2中分别加入4uL对应的阴性对照试剂、标液、QC溶液；
S204、用第一夹爪(202)将容器A(5)移到第一工作位置(601)；
S205、用移液头(204)按照软件计算的加样量，依次从PCB收集液柱箱(304)吸取PCB收集液或从二噁英收集液柱箱(305)吸取二恶英收集液分别加入容器A(5)对应的A3：F5样品孔中，每个样品都平行取两个样；
S206、用移液头(204)按照软件计算的加液量吸取正己烷加入到容器A(5)对应的A1：F5孔中，定容至1mL；
S207、第一机械臂(2)带动氮吹头(203)移动到第一工作位置(601)的容器A(5)上方，开启氮吹，将容器A(5)的溶液吹干；
S208、用第一夹爪(202)将容器A(5)移到第二工作位置(602)，使用液体工作站移液头(10)向容器A(5)的A1:F5中分别加入400uL培养基，然后振荡混匀；
S209、程序控制打开二氧化碳培养箱(13)，内置推送装置推出孔板(901)，用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将孔板夹到第三工作位置(603)，确认细胞的培养状态正常后，用液体工作站移液头(10)吸走孔板中的培养基；
S210、使用液体工作站移液头(10)从第二工作位置(602)的容器A(5)的每个孔中吸取190uL已配制好的标液、QC、NC以及样品溶液分别加入孔板对应孔中；
S211、第一夹爪(202)将容器A(5)从第二工作位置(602)移到废料盘(8)中；
S212、用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将孔板夹到二氧化碳培养箱(13)打开的托盘上，程序控制二氧化碳培养箱(13)关闭托盘，开始培养；
S213、孔板在二氧化碳培养箱(13)中培养14小时后，用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将它夹到液体工作站移液头(10)下的第三工作位置(603)，使用液体工作站移液头(10)吸走培养基；
S214、使用液体工作站移液头(10)向孔板的B2：G11每个孔中加入50uL磷酸盐缓冲液，再用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将孔板移到第二工作位置振荡清洗后，用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将孔板移到第三工作位置(603)，然后用液体工作站移液头(10)吸走PBS；
S215、确认细胞状态正常后，使用液体工作站移液头(10)向孔板的B2：G11每个孔中加入30uL细胞裂解液，然后用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将孔板夹到第二工作位置(602)，缓慢震动5分钟进行混合，再静置10分钟；
S216、用第二机械臂(12)上的第二夹爪(1202)将96孔板(901)夹到酶标仪(14)96孔板托盘上，程序控制酶标仪(14)关闭托盘，然后用酶标仪(14)自带的自动进样器向孔板(901)的B2：G11每个孔中自动添加30uL荧光素酶溶液，开始测定发光量RLU值；
S217、测定完成后，软件按照如下公式计算毒性当量，然后系统输出结果报告。
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