CN114438247A

CN114438247A - 花生蔗糖含量主效位点的连锁分子标记组合、引物组合物、鉴定方法及其应用

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Publication number: CN114438247A
Application number: CN202210145714.6A
Authority: CN
Inventors: 雷永; 廖伯寿; 王志慧; 晏立英; 陈玉宁; 淮东欣; 王欣; 康彦平
Original assignee: Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
Current assignee: Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
Priority date: 2022-02-17
Filing date: 2022-02-17
Publication date: 2022-05-06
Anticipated expiration: 2042-02-17
Also published as: CN114438247B

Abstract

本发明属于花生分子遗传育种技术领域，具体地，涉及一种花生蔗糖含量主效QTL位点qSCA06.2和qSCB06.2连锁的分子标记组合、引物组合物、鉴定方法及其应用。本发明首次筛选并公开了花生蔗糖含量相关的QTL位点qSCA06.2和qSCB06.2及其连锁分子标记，可以有效的应用于花生高蔗糖的育种和筛选。提高育种效率，加速花生高蔗糖遗传改良。

Description

花生蔗糖含量主效位点的连锁分子标记组合、引物组合物、鉴定方法及其应用

技术领域

本发明属于花生分子遗传育种技术领域，具体地，涉及一种花生蔗糖含量主效QTL位点qSCA06.2和qSCB06.2连锁的分子标记组合、引物组合物、鉴定方法及其应用。

背景技术

花生(Arachis hypogaea L.)作为我国重要的油料作物和经济作物，是食用植物油、蛋白质等的重要来源，其籽仁富含油脂、蛋白质、维生素、白藜芦醇和其他优异的矿质元素等，还含有平均约1.5％的蔗糖。我国花生主要用于榨油和食品加工，鲜食花生消费量也在逐年提升。花生籽仁的品尝甜味主要来源于蔗糖(占总糖的90％左右)，甜度与花生籽仁的口味品质高度相关，当花生籽仁中蔗糖含量达到50mg/g以上时，口感较好，蔗糖含量也与烘烤花生果、花生仁的最佳烘烤时间、烘烤后的色泽和烘烤前后的籽仁硬度、脆度等加工特性密切相关，因此，蔗糖含量是决定和影响花生食用品质和加工特性的重要指标。为此，开展花生蔗糖含量QTL定位研究，鉴定蔗糖含量相关的QTL并开发成分子标记，对于揭示花生蔗糖含量差异形成的形成分子机理、建立高效的蔗糖含量分子标记辅助选择技术，对于当前急需的高蔗糖食用型花生种质创制，以及将来开展精准调控和高效培育具有不同蔗糖含量、不同用途的专用花生品种具有重要意义。

研究表明，花生籽仁蔗糖含量是主基因控制的复杂数量性状，具有较高的遗传力，同时也容易受到低温、干旱等环境因子的影响，通过常规方法筛选优异材料的效果不好、准确性差、效率较低。随着分子遗传学的发展和测序成本的降低，通过重测序、简化基因组测序等从全基因组水平开发高密度的分子标记，构建高密度的遗传连锁图，结合表型数据，利用连锁分析方法可以在基因组上定位到多个控制目标性状的QTL。通过QTL紧密连锁的标记对表型性状进行选择，可以提高目标性状的育种效率。

目前，花生中蔗糖含量相关QTL位点或连锁分子标记的报道较少，限制了分子标记辅助培育高蔗糖甜花生的进展。因此，本领域需求花生中蔗糖含量相关QTL位点或连锁分子标记。

发明内容

第一方面，一种花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合，其包括以下三种情况中的任一种：

a、位于花生第6号染色体上的qSCA06.2；

b、位于花生第16号染色体上的qSCB06.2；或者

c、位于花生第6号染色体上的qSCA06.2，和位于花生第16号染色体上的qSCB06.2；

其中，所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ IDNO.2所示的SCM06-11，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13中的至少一个；以及

所述qSCB06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:4所示的SCM16-4，和如SEQ ID NO:5所示的SCM16-5中的至少一个；

其中，与所述分子标记SCM06-11、SCM06-12、SCM06-13、SCM16-4，和SCM16-5具有多态性差异的序列如SEQ ID NO:6～10所示。

在一个具体的实施方案中，本发明提供了花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合，其包括：位于花生第6号染色体上的qSCA06.2，其中，

所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ ID NO.2所示的SCM06-12，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13中的至少一个。

在一个具体的实施方案中，本发明提供了花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合，其包括：位于花生第16号染色体上的qSCB06.2，其中，

所述qSCB06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:4所示的SCM16-4，和如SEQ ID NO:5所示的SCM16-5中的至少一个。

在一个具体的实施方案中，本发明提供了花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合，其包括：位于花生第6号染色体上的qSCA06.2，和位于花生第16号染色体上的qSCB06.2，其中，

所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ ID NO.2所示的SCM06-12，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13中的至少一个；以及

进一步地，所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQID NO.2所示的SCM06-12，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13中的至少两个。

更进一步地，所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ ID NO.2所示的SCM06-12，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13。

进一步地，所述qSCB06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:4所示的SCM16-4，和如SEQID NO:5所示的SCM16-5。

在一些具体的实施方案中，与分子标记SCM06-11具有多态性差异的序列如SEQ IDNO:6所示。

在一些具体的实施方案中，与分子标记SCM06-12具有多态性差异的序列如SEQ IDNO:7所示。

在一些具体的实施方案中，与分子标记SCM06-13具有多态性差异的序列如SEQ IDNO:8所示。

在一些具体的实施方案中，与分子标记SCM16-4具有多态性差异的序列如SEQ IDNO:9所示。

在一些具体的实施方案中，与分子标记SCM16-5具有多态性差异的序列如SEQ IDNO:10所示。

第二方面，本发明提供了用于鉴定上述花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合的引物组合物。

术语“引物组合物”指的是用于扩增QTL位点的连锁分子标记组合的上下游引物。

在一些具体的实施方案中，分子标记SCM06-11的上下游引物为：

正向引物，SCM06-11-F：5'-TGTCTCACCCCGGTAAACA-3'(SEQ ID NO:11)

反向引物，SCM06-11-R：5'-GTGGATGTATATTCAACACGTA-3'(SEQ ID NO:12)。

在一些具体的实施方案中，分子标记SCM06-12的上下游引物为：

正向引物，SCM06-12-F：5'-TGCTCGATAATTAATAGCTTC-3'(SEQ ID NO:13)

反向引物，SCM06-12-R：5'-GCTTACCTTGTTTACCGAAA-3'(SEQ ID NO:14)。

在一些具体的实施方案中，分子标记SCM06-13的上下游引物为：

正向引物，SCM06-13-F：5'-TAATGTCTATGCAAAGCACGAG-3'(SEQ ID NO:15)

反向引物，SCM06-13-R：5'-ATTGAATTCTTGATCTTTCGGA-3'(SEQ ID NO:16)。

在一些具体的实施方案中，分子标记SCM16-4的上下游引物为：

正向引物，SCM16-4-F：5'-TAATAATCAACGGTCGGCTA-3'(SEQ ID NO:17)

反向引物，SCM16-4-R：5'-AGAAGTATAGAAATCGGACT-3'(SEQ ID NO:18)。

在一些具体的实施方案中，分子标记SCM16-5的上下游引物为：

正向引物，SCM16-5-F：5'-TATTCTCCTTCATGCGTTC-3'(SEQ ID NO:19)

反向引物，SCM16-5-R：5'-ACTCTAAATAAAGCACATCC-3'(SEQ ID NO:20)。

第三方面，本发明提供了上述连锁分子标记组合和引物组合物在花生蔗糖含量的主效QTL的基因分型中的应用。

第四方面，本发明提供了上述连锁分子标记组合和引物组合物在鉴定和筛选花生蔗糖含量的花生材料中的应用。

第五方面，本发明提供了一种花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合的鉴定方法，所述方法包括：

提取待鉴定花生材料的基因组DNA，并以基因组DNA为模板，利用上述引物组合物对模板进行PCR扩增，对扩增产物进行分析，根据扩增结果判断所述连锁分子标记的多态性。

进一步地，在一些具体的实施方案中，所述扩增产物进行分析包括分析扩增产物的片段大小。

进一步地，在一些具体的实施方案中，下述情况则判断待鉴定花生具有高蔗糖含量：

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量；

利用分子标记SCM06-11的引物对扩增得到270bp的DNA片段、分子标记SCM06-12的引物对扩增得到460bp的DNA片段、分子标记SCM06-13的引物对扩增得到304bp的DNA片段、分子标记SCM16-4的引物对扩增得到181bp的DNA片段和分子标记SCM16-5的引物对扩增得到367bp的DNA片段，判断待鉴定花生具有高蔗糖含量。

本发明首次筛选并公开了花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记qSCA06.2和qSCB06.2，可以有效的应用于花生高蔗糖的育种和筛选。提高育种效率，加速花生高蔗糖的遗传改良。

附图说明

图1为基于“中花16”和“卢旺达花生”构建的重组自交系群体的蔗糖含量表型分布图；

图2～3为花生蔗糖含量主效QTL位点定位；

图4为qSCA06.2的分子标记扩增产物在亲本及其RIL群体中的电泳胶图；

图5为qSCB06.2的分子标记扩增产物在亲本及其RIL群体中的电泳胶图；

图6～11为花生RIL群体中蔗糖含量高低与两个主效位点分子标记组合之间的关联性。

具体实施方式

针对本发明提供的目标区域(例如，SEQ ID NO:1所示的区域、SEQ ID NO:2所示的区域、SEQ ID NO:3所示的区域、SEQ ID NO:4所示的区域、SEQ ID NO:5所示的区域等)，可以设计特异性扩增引物。例如，可采用以下方式来进行。

对于PCR引物，通常遵从以下原则：1、引物应在区域内设计并具有特异性；2、扩增产物长度在80～150bp，最长不要超过300bp；3、产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol)；4、引物长度：一般在17～25碱基之间，上下游引物不宜相差太大；5、引物自身不能有连续4个碱基的互补，避免形成发卡结构；6、引物之间不能有连续4个碱基的互补，避免形成引物二聚体；7、引物G+C含量在40％～60％之间，45～55％最好；引物中碱基要随机分布，尽量均匀；8、引物Tm值在58～62度之间。

根据上述原则，针对本发明提供的目标区域，可以设计出例如包括但不限于如SEQID NO:11～20所示的引物。

下文将结合具体实施方案和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方案和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。

实施例1、花生蔗糖含量连锁分子标记的获得

1、供试材料：以花生品种“中花16”为母本，种质资源材料“卢旺达花生”为父本进行杂交，并通过单粒传法构建包含242个株系的重组自交系(RIL)群体F₇(2017)、F₈(2018)、F₉(2019)代。

2、表型鉴定：2017～2019年在中国农业科学院油料作物研究所武昌试验基地种植“中花16”、“卢旺达花生”及F₇(2017)、F₈(2018)和F₉(2019)代RIL群体242个株系。采用完全随机区组试验设计至少两次重复。每次是重复每个株系种植1行12株，行距30厘米，株距20厘米。采取标准的田间管理方式，收获生长正常的8-10株典型植株的成熟荚果。每个株系挑选15～20粒饱满成熟无病斑的籽仁，采用近红外法或液相色谱法检测籽仁中的蔗糖含量，每个株系测定3个重复，且每个重复会重复装样3次，多次检测的平均值作为该家系的蔗糖含量。通过对亲本蔗糖含量的差异进行分析，发现在代表性种质中“卢旺达花生”和“中花16”的蔗糖含量相对较高，且“卢旺达花生”的蔗糖含量稳定高于“中花16”。对F₇、F₈和F₉代RIL群体的蔗糖含量进行次数分布分析发现，群体中均存在双向超亲分离现象和偏态分布的规律(见图1)，表明蔗糖含量是由多基因控制的数量性状且存在高效应的主效QTL位点。

3、遗传连锁图的构建：利用全基因组重测序的方法，对两个亲本和242个家系进行测序，获得的测序数据经过质控和数据过滤后比对到栽培花生Tifrunner的参考基因组(https://www.peanutbase.org/data/v2/Arachis/hypogaea/genomes/Tifrunner.gnm2.J5K5/)，筛选亲本间多态性SNP标记，再通过过滤获得子代的基因型；以100kb为一个bin窗口，滑动所有子代样本的每条染色体，根据每个样品基因型来源，以bin为单位得到该群体每个子代的marker信息，其中“aa×bb”类型的差异多态性位点可用于RIL群体遗传图谱的构建；利用JoinMap4.0软件构建了全基因组20条染色体的分子连锁图谱。该图谱包含2042个bin-markers，总长度为2181.52cM，标记间平均距离为1.07cM。

4、蔗糖含量QTL的定位：利用Windows QTL Cartographer 2.5软件的复合区间作图法开展蔗糖含量QTL分型(见图2)，利用遗传分离群体三年的花生籽仁蔗糖含量表型数据，均在第6号染色体(Arahy.06)上Ah06_1150～Ah06_1161区间检测到主效QTL位点qSCA06.2，在2017～2019三年间的LOD值分别为25.82、22.84和27.22，表型解释率分别为30.14％、26.56％和31.41％，其增效等位基因来源于“卢旺达花生”；在第16号染色体(Arahy.16)上Ah16_1479～Ah16_1486区间检测到主效QTL位点qSCB06.2，在2017～2019三年间的LOD值分别为16.54、17.22和21.45，表型解释率分别为18.68％、19.63％和24.13％，其增效等位基因来源于“中花16”。利用本发明中群体的重测序数据，筛选并开发在亲本间存在差异的InDel标记，在QTL区间内设计并开发出5个InDel标记(见图3)，3个与主效QTL位点qSCA06.2紧密连锁的分子标记，2个与主效QTL位点qSCB06.2紧密连锁的分子标记。

本实施例中，所述PCR扩增体系为10μl，包括：2×

PCRSuperMix(+dye)，5μl；10μM正向引物，0.2μl；10μM反向引物，0.2μl；待测花生样品的DNA模板10～25ng。

本实施例中，所述PCR扩增反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，58℃复性45s(每个循环降低1℃)，72℃延伸45s，共10个循环；95℃变性30s，55℃复性45s，72℃延伸45s，共30个循环；最后72℃延伸5min，12℃。

表1、花生蔗糖含量主效QTL位点qSCA06.2紧密连锁的分子标记

表2、花生蔗糖含量主效QTL位点qSCB06.2紧密连锁的分子标记

实施例2、花生蔗糖含量连锁分子标记的验证

利用实施例1中得到的3个与花生蔗糖含量主效QTL位点qSCA06.2紧密连锁的分子标记和2个与花生蔗糖含量主效QTL位点qSCB06.2紧密连锁的分子标记对“中花16”和“卢旺达花生”的242个F₁₀(2021年)株系进行PCR扩增。利用InDel标记SCM06-11,SCM06-12或SCM06-13引物对扩增出与母本“中花16”相同的带型，均记为aa，扩增出父本“卢旺达花生”相同的带型均记为AA(优异等位位点)。分析该RIL群体(2017～2019年)的表型数据发现，aa基因型材料的籽仁蔗糖含量平均值为1.58±0.03％，AA基因型材料的籽仁蔗糖含量平均值为2.69±0.04％。三年数据显示具有qSCA06.2优异等位位点能够提高的1.11个百分点的蔗糖含量，提高率70.25％。

利用InDel标记SCM16-4或SCM16-5的引物对进行PCR扩增，扩增出与母本“中花16”相同带型均记为BB(优异等位位点)，与父本“卢旺达花生”带型相同的均记为bb；分析该RIL群体(2017～2019年)的表型数据发现，bb基因型材料的籽仁蔗糖含量平均值为1.53±0.11％，BB基因型材料的籽仁蔗糖含量平均值为2.30±0.04％。三年数据显示具有qSCA06.2优异等位位点能够提高的0.76个百分点的蔗糖含量，提高率50.33％。

同时具有两个优异等位位点AABB的材料有29份，其中蔗糖含量大于5％的有11份材料，蔗糖含量最高接近7％；两个位点均为非优异等位位点aabb的材料有53份。分析这些材料的蔗糖含量的三年表型数据发现，AABB基因型材料蔗糖含量的平均值为4.32±0.95％，aabb基因型材料蔗糖含量的平均值为1.40±0.54％。三年数据显示具有双优异等位位点能够提高的蔗糖含量为2.92个百分点，提高率208.57％(见图6～11)。

以上结果说明使用蔗糖含量主效QTL位点qSCA06.2紧密连锁的InDel标记SCM06-11,SCM06-12和SCM06-13，及qSCB06.2的紧密连锁的InDel标记SCM16-4和SCM16-5可以有效的选择出高蔗糖含量的花生材料。

序列表

<110> 中国农业科学院油料作物研究所

<120> 花生蔗糖含量主效位点的连锁分子标记组合、引物组合物、鉴定方法及其应

用

<160> 20

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2001

<212> DNA

<213> 花生

<400> 1

ataagtttca catttaggta aataagttga aatgattgtt agtaaaataa gagaattgat 60

attattaatt atataatagt attaaaagtt taacaatatc aataaatatt taaatcaaat 120

taaattattc ttaaataacc cgaggttttg cacctctttc ttgcatccat gattagttat 180

gtatatgtta tgttagctag agttatggaa ctatttcttc cattctagaa tttcgttcaa 240

gaattagcat aagatgaaaa atcttttata ttaggactta agttctttaa ctctaataac 300

aatagatttt agaaatgtaa ttgtcctacg ttcttgtact cgtcatcacc attaccatgc 360

atatatagat agttaggtga tattttgttg acaatgccta aacaacagtg tgatacttac 420

aaaatcattt aaaaattatc taaaaaaaca tagcaagctg tataatttac aattagatat 480

ataatttatt gataaatttt ccgatcccaa aatattatat atcaaacaaa atttgacaat 540

gtcaccaaaa aaaaaaaaaa aacaaaattt gacaatttca atataaaaat acaagccacc 600

aaagaattgg ccattttata aagataatgc tataataaaa aagtgaagtt tttgtgaaaa 660

ataaaaaaaa tattatatac tataattata ttttttaaaa tctaataaaa aaaattattt 720

ttcactcaat tttaccgaaa attatttttc ttatggaaaa gtagttggtg ttttgggaga 780

atattggagg atgggaagat ttatcgggtg gtggagctgc cggtcaacac gcaggggcgt 840

ggtgactctg ctatggtgca acgtgtacca ccacgcaggg gcgatatgac gtggtggagc 900

tggcgtggca gagtcccgat gcaccacggg gggcgtgctg aagctgatgg catgcaggag 960

acatgtctca ccccggtaaa cagcgtgcag gacattccca gctctatata aacggaagct 1020

tttgttacaa tgagataaaa agaatgttag tgaggggaag gagggcttgc tctatataaa 1080

cagaagcgtt cttttaagga gggcttgctg gctgctgctt caccgggctt gctctatatc 1140

acgcccccac gttttgagtt agcacgcccc cacattttgc caccgtatct cactcatcct 1200

gcgccacgtc atctcacctg acactcgttg caatcaccac gcccctacgt gttgaatata 1260

catccaccat tgagtaaaat acaatatttc cccatttcta accaaaacac taatttactt 1320

cccatattaa aatttttgag cccaatttta ctcttcagca aaaaaatttg cattttataa 1380

ttaggattac caacttaaca tccgatcctt tggtttattg ataccatatg gcaaaatata 1440

tatgtggagc atgatcattg caaagatggt gatttgaccc ttgttattgt cctattggcc 1500

atttgaatat ccttctctct ttttttttct ttttattgtt cacgatattt tttactctgg 1560

tagactaatt attaatatat ggcaaatcta aactaattat taatatatgg caaatttaaa 1620

ctctaattaa ggatatatta ctgactaata aattattaca tacgtaaaat aaaattcaaa 1680

tctttgatac ttatgtaaat tagggatgtg catggccggg tgaaatcgga tttgatgtga 1740

ttcagacccg actcgaaata tataccgagc ctatttatta gacccgaact cggtcctaga 1800

tccgataaaa cctatacact ttcggaccac gattataccg ggtaaaaatc gggtgaaaac 1860

cgcgccgtta acattatatt accttgatac cttcttataa gttagcatgt aaaaatatct 1920

aaattttcaa gactccaacc attatttgac atggtaaaat tcacttagaa aaatataaca 1980

agaaccaact cttctctaaa a 2001

<210> 2

<211> 2001

<212> DNA

<213> 花生

<400> 2

tgctgagttg ctcttaaatg atgggaggaa tcgttgtctg caatactggt gaaataggaa 60

agtgccaact acaaggggaa aggtgaatcc agatgccact ggtgaatgct tcactccaaa 120

caccccaagt gcaataattt gagcaaagat caatgagaac actgttgtgt tgtgaacaat 180

tggccagtac tgtcccccgc tatcgtattt tgcgacgtac acattcagaa actgaaattc 240

aaagataaaa aacaaattat cacctcagct agctagcaaa ttattccaga aacagaggaa 300

ctcaactaca taatatgcat agatgcaggc atacatctct atatttgtta tttggttgtt 360

cttttttctt ttttttggac catctacgcc accccaatta aactctttcc gttagagaac 420

ctaagagact tgttggatta tatgaagctg taaacatact agacaatcag aactgagttg 480

tattcttaga tgaagtgagt cccatgattt catatcgaaa ttctggttgt aattttctga 540

ctatttagta ttcctggtat aacaatcata ctctaatagg accctcaacc ctttatgaat 600

caatctatat acggttttat ttctaattca tgaaacttgt acttaaaggt cccatgcaag 660

caataagaat ttatgtaagt tccagtaatc attttccttt ctatcataaa aaactccttt 720

gtgatgaata aggtacgcat gacctatgta gcaatctgca gtcccttcct caacttattg 780

ctcgataatt aatagcttcc atctcatatc atatacaatt gtggaaaaat tactacccaa 840

accctagtac ttatttatga ctaaaaagta aaaacttgtt tgagaaccat taagttgtta 900

caaaaaaaat ttttttttta atcttttaga acttgtttgg atgtcattaa attattcgaa 960

ttttttttta ttacatttag caaaatttta aaagtaaaac taaaagcact aaaaaattaa 1020

aaaaacattt gttttagaag ttacaattta tatatttaaa aaaaagatat tttcaacatt 1080

ataaataata aaaaagtatg gtaaattatg ttaatgcatt aaatgaaata aaacaaaaga 1140

aacgagaaaa aaattccaac atgcaaatta gggaagttta gtgcggtaaa caaacacaag 1200

gcagaagtac aaacctggtt tcggtaaaca aggtaagcaa ggaaaaagta gattattaag 1260

aaaggcaaca ttatgggagc cagaatagca ttggtgaacc caaggaatcc aaatagtaag 1320

atccttggaa cttctgtgtg gtaagggaaa ttttgggttc cattctgtga atcatcatta 1380

agcttgagta atctctgaat aaaattgcat aggagtggat aaatttgcat aatttcacat 1440

cccaaacttg cccagccaga tgtaaaaata tatgttgtga agaaggtggc ctgcataaca 1500

taaaaatcac aatcaagtga atcaataatc aagacttacc gatttatctc cactaaaaat 1560

ctccagaaaa gggaatcaag taaataactg tgtattatcc ggttctgctc aaatatatgt 1620

tgcagtcaag tgcataaaat catgtcaaca agaacatgta ttagtttata cggtaaccaa 1680

aacaataaat tgaaacgagg aatgtgtaac gtagcttaaa atagacacta ttccatagtt 1740

atatatcagt taattttatt gatccaatgg taaaattctc ttacttatct ctaatgtgag 1800

atccccactt cagaggatca caattcgaat aaaaatatat cacctgtgat ggcactgcct 1860

tcgcaagttg gacaggcagg tctgctacac tagagaagac tgagagttga ctgatgacag 1920

atccggtaaa gacattaaca aaaaatacat tccagattaa aaagtacaag actttccagc 1980

atgcactctt cttccttcca c 2001

<210> 3

<211> 2001

<212> DNA

<213> 花生

<400> 3

agatactatg tatatatggg gtgatattag ttttgaattc tatgatgata ttacttggat 60

ttgacttgtc acttatgtat caatggagat gatgattaat tgatgatgat gatggcggtg 120

ttaatattaa attgtttttc tataatgact ttgtctttgt aaacactaat taaaagattt 180

agactttgaa tttatgttta tgattgcgtt caacgcggaa tatatattct tcaatacgcc 240

caaatttctc tgtacatttt ttttagtatt actatttaaa atgaaagttt ttttccctct 300

aaaaaaatta gagattttag aatttttttt cccgaataac cataaagaga atacgaattc 360

caaccaaaat caagcaactt ttcaattagg ctatttcgtt tatagttgtt agaattgaat 420

cactctaaaa aaataaattt atgctatcat ctaaatatat aattataaat tatttagtta 480

atttttttag ggttaagtat aattttattt tttaaggtag ggattgaaaa atttttttag 540

tttcgacttt tttttgccta caaaatcacc acctcttcga agatgatgag gaacgcgacc 600

aggcgcgtcg cggcaaggta agggtgggtt gcggcaaggc tagggctcaa gttacggcgc 660

tgcaaggttg aagtacggca agagacgaga cgaaggctga acgaggaaga ggggcgacgt 720

atacagtgta taatgattta aactatacta ataaacttaa ggtttaattc aataaaatat 780

tcgtgttaat tatttttcaa aattatttga cctggaaata aagcatttac aattttttta 840

tattgatttt cttgatgcat aataatgtct atgcaaagca cgagtaatct cctaattcat 900

aaatagttgt caaaattaaa ttgataatta atctgattag attactaatt ttttaattca 960

acaagcaaat cactggttaa gccatttaat atatgggaaa gtatgaagaa ttaatggaat 1020

atttatacaa tgtgtacaat ggaggtttag agaatattag agatataatc attagtgtta 1080

cattttttca tcagttaaag cttttgggat cagtggtacc atgacatggt attagagcgt 1140

tagatccgaa agatcaagaa ttcaatcttt ggtgaactcc aaaatcagtt taaacttttg 1200

ggaagatgtt tattatcgct attacacgaa tggttattct agatagtatg agagatgttc 1260

attttgtaac tcaataaccc attgtataca ttgtacaaat agttcattgt ctccctcgcg 1320

aaatcctata taattatata tttttgttaa aaaaaagtat agatactgta gtgaaattaa 1380

atgttcggat aaaataattt aaaaaaaaag gttgaatgac tgttgagatg gtagctaact 1440

tgctatactt aaagtgtgaa ctaagactca agtttgaagt ccacgttacc ccgcaagttg 1500

tttctgactt tagagatgaa taatcaaaca tcttggtaac tccgatgaga atcaacaaca 1560

acatgatcat gaagagttct ccaagatctt cttcaacacc aatggatcca agaatctgga 1620

gcaagctacc tccagagatc ttagaataca tcctctcttt tcttcccctc aaaaccttcc 1680

tcaatctcag gtcaacttgc aagtctttct ggtctctcat cttcactcct cctttcataa 1740

acaaacactc ttcttcttct tcttcttctt cttcaccttt ctctaacttc ctcttcctct 1800

cacaccctca gttccaccat agccacttca ctctctatga ctgcaaccac gccacgtggc 1860

gcaacatctc cctctccctc accaccaatg attcttcctc ccttcaccat tcttctccat 1920

catcatcatg cttcaccaca cttgtttcat ccggtgggtt gttctgtctc tccgatccaa 1980

cctcatgttc tttgcttgtg t 2001

<210> 4

<211> 2001

<212> DNA

<213> 花生

<400> 4

aagaggctag ctattaccag gttctacaac gtttgtcatg tcttcttttg taattttttt 60

tttcaaaatc aaaccatgtt aaaaaaaata ttctctctca ctttttttat tttttttcat 120

cttttaatga aactggagtg atagagttta agtagcttga atagatagct attaatctta 180

tatcgtaata ttttttggtt ccatatttag atggtaatat aataaaagag agatgcaact 240

tgataaccaa tttttatttt tttatatatt atttattaat tatatatttt aatttatata 300

tattaacttg attaactttg ataattcaat atttattctc tctaaataaa ttttgaatat 360

taaaagaata ttgttaaaag aattttactc ttttttgagt aaaataaaga gtaaaattaa 420

ttagaagtcc atgactttca attgctaaat gctaataatc caacaaaaat aaaaagaaat 480

tttactaaat taataaaata ttaattatta attaatatac atataattat cttcgaaata 540

cgattttcca cgggatgggg acatataatc cttatcccat aaaatttgca acaaaaatta 600

ttgccctcat cttatcctta tttttgaata ttcccacaaa tacccacaat tacattgata 660

ttgaggcatt gtttgttagc aaaaattaga gcgacaaaaa caaagagaca catacataaa 720

aagtattgtc cttatatttg atttggtagt aataagaagt agtgatagat gtttattaat 780

taagtaaaca tgattataaa aaaggcaact caactcggat aaacatgatt attctgttaa 840

tctagtcgag caatcaattt ctattcattt ttaggtatat atttttaaag aaacttacag 900

caaaatctca tatttatcat gcatgatctt ctttttggag atacacaaaa cataaaaaaa 960

aaatttagta ttaataataa tcaacggtcg gctaattttt ttttttatgg aaatagaagt 1020

ggtgatatac tttaatatcg taatttttga tattttttaa aattgtagaa gtacataaat 1080

tgtagggttc gatttctgta cctcaaattt ttttattttt taacacaaat cgaacagtcc 1140

gatttctata cttctacaaa tcggacggtc caatttctgt acctctaata aatcaaatgg 1200

tccaatttct ttttttctag ttaaataatt ccacatttaa gtataacact ccaacaatcc 1260

acattttaaa aaaatatcac taccactgca atattaaaaa taaaaaattc tgaagggtct 1320

ataataattt tattttttgt aagggatgcg gtgtatatat ggtactaaaa acaataatat 1380

tattttatta gtatgtgcga gagatatata ccatgtctag tcataagctt cttcttccat 1440

catattatat atactttaaa tttctctctc tatctctatc tctatctcca attattttat 1500

ccttggcaaa gaacaaaacc attccggttt ctagtttcag ctaagtagct ttaaaggtgt 1560

cacaaaaact agtagcatat ctatcttctc ttctctctct ctctttctct attcccccca 1620

tttataatat gttcctttca agggacattg tgtactttta ttctcgttat tgttgttgtt 1680

ccaactaaag aacaagatgc atcattttaa tttttctcct atatagttta agtctttttt 1740

tttttttgaa tagttatatt tatagttgta ttaatttgtg gtgttatatg gatcttggtg 1800

tggtgggttt tgatgggttg gtgggttcag aagctgggtt tgttccattt ggatctgggt 1860

tccttaagca tcaaagatct gaagaggagg tgagtaataa tgatcataat aatagaagag 1920

gggcaaaact gtcaaaggtt aatattacta gtgatgatga tgatgatgtc atcacaacaa 1980

caacatcaaa aggaatgttg t 2001

<210> 5

<211> 2001

<212> DNA

<213> 花生

<400> 5

tcccggtaag ccaagcattt aggtttcctc aattttgtta cccttcccct ttttaaaccc 60

taaaactaac gctaagtctt gatttgattg caagtcccga aaggttcaga gcctacatga 120

tggagaagaa aataaaactt attggcggca tcattgaagc accaaatgtt gagaagatga 180

tctttcttga gatgatttct cctagcaatg tcgcaccaag aagaactcgc tagattataa 240

gttgatgcag aggtcatatt ccacttcttc agaacctgat catcatggca cacttcacct 300

gacggttcta tgagccctac tttcatccca atcagccgcc ccttcccatc ccgagcctca 360

agagccctca taatcgctgc gtctttgtgt gccaagaact tgcactcctc gtttatctgc 420

ttctccggca tcgctaaccg gctgttatta ggctccaagt ctgtctttgt taacttcctt 480

tgcatcacaa aagttacatc aactcctttc agtgaagcga taatcacctt gaaaatttcc 540

ggaagctctg gaatatcact ctttgttgtt gatgtagatg ccaatgtgga tcctgttgaa 600

ggcgatgtaa atgccaatgt ggatgttgaa ggcaatgtca atgtggattc tgttgaaggc 660

gatgtcaatg ccaatgtgga tcctgatgat gccgatgtag atgccaatgt ggattctgtt 720

gaaggcgatg atgcagcatt cttcttattc agctttctct tgcctttatt ctccttcatg 780

cgttcctttc caagagagtg gtgcagcttc aacgctttgg agaacctctt gagtaccgca 840

cggtcctctt cgcagtagag actcttgttt gccttaattg ctgcccggtt cactttgcag 900

tactccgggt cttgcaggga cactacgacg tcaaatcttg taaggcggaa tggattcgga 960

gccatagctt ctattgtttt caaatccagc ttcaacaact ccttcaaagt tttcttgctt 1020

ctcatcttgg caaccatgac actagaaaca ctttccaaaa acaggttaga ctttttttca 1080

caagaatgtg agactcataa atcagaattt ataggatgtg ctttatttag agtttaagct 1140

atgatagaat taaatacttt ctgtttttaa aaatcaatta cggaagattt tgattaattt 1200

aaacctgtat aagtttaatt taagatatga tatgatatga taagatactg tttcaaaata 1260

attatctttc caaatttgtt ttcgttctag tttaactgga tagtggatac acacattttt 1320

aattcttaat tgaatgttag atatgatttt aattttgatt tgaaaatttt tcttgtgtaa 1380

ggttttaact gatttttcaa cccaagcatt tttctatcac ttaactgttt ttttttccca 1440

cgtaaagaaa agaaacggat tttcttttat ttcccttttt ttgttctctc gtctttttgt 1500

tgtttccaag ttggttttca atttttcatt caagtttaac tggatgttag tagtttttat 1560

tttgactttt gacacgtttg caagaccaga ggaagccatg tctgttttaa tgactctttt 1620

agtagtttga actaaaaatt tgaatttata tttcatacta tattttattt aaatttaaat 1680

taagataatt ctgtatttat atttgtgttt taaaattaat aaatgataaa ataaataaaa 1740

attgtgttct tcatttgaga aaatttagat aagctctttt tttcctgaaa aaaaaaaaaa 1800

gaaaacaaag ttttgtagaa gcaattcctc attttttaat atcttcactt tgttgatttc 1860

caatctttta taccgagact agtatttaaa caaagtttct actacacttt tttttttagt 1920

gtttcctgtt agttgatgtg tgtatcattt ctattagtgt gttgtgcaga ctggactatt 1980

tgtatatgac attttctggg t 2001

<210> 6

<211> 477

<212> DNA

<213> 花生

<400> 6

gtggtggagc tggcgtggca gagtcccgat gcaccacggg gggcgtgctg aagctgatgg 60

catgcaggag acatgtctca ccccggtaaa cagcgtgcag gacattccca gtaaaaagaa 120

tgttagtgag gggaaggagg gcttgctcta tataaacaga agcgttcttt taaggagggc 180

ttgctggctg ctgcttcacc gggcttgctc tatatcacgc ccccacgttt tgagttagca 240

cgcccccaca ttttgccacc gtatctcact catcctgcgc cacgtcatct cacctgacac 300

tcgttgcaat caccacgccc ctacgtgttg aatatacatc caccattgag taaaatacaa 360

tatttcccca tttctaacca aaacactaat ttacttccca tattaaaatt tttgagccca 420

attttactct tcagcaaaaa aatttgcatt ttataattag gattaccaac ttaacat 477

<210> 7

<211> 590

<212> DNA

<213> 花生

<400> 7

taagaattta tgtaagttcc agtaatcatt ttcctttcta tcataaaaaa ctcctttgtg 60

atgaataagg tacgcatgac ctatgtagca atctgcagtc ccttcctcaa cttattgctc 120

gataattaat agcttccatc tcatatcata tacaattgtg gaaaaattac tacccaaacc 180

ctagtactta tttatgacta aaaagtaaaa acttgtttga gaaccattaa gttgttacaa 240

aaaaaatttt ttttttaatc ttttagaact tgtttggatg tcattaaatt attcgaattt 300

ttttttatta catttagcaa aattttaaaa gtaaaactaa aagcactaaa aaattaaaaa 360

aacatttgtt ttagaagtta caatttatat atttaaaaaa aagatatttt caacattata 420

aataataaaa aagtatggta aattatgtta atgcattaaa tgaaataaaa caaaagaaac 480

gagaaaaaaa ttccaacatg caaattaggg aagtttagtg cggtaaacaa acacaaggca 540

gaagtacaaa cctggtttcg gtaaacaagg taagcaagga aaaagtagat 590

<210> 8

<211> 342

<212> DNA

<213> 花生

<400> 8

gaaataaagc atttacaatt tttttatatt gattttcttg atgcataata atgtctatgc 60

aaagcacgag taatctccta attcataaat agttgtcaaa attaaattga taattaatct 120

gattagatta ctaatttttt aattcaacaa gcaaatcact ggttaagcca tttaatatat 180

gggaaagata taaaatggag gtttagagaa tattagagat ataatcatta gtgttacatt 240

ttttcatcag ttaaagcttt tgggatcagt ggtaccatga catggtatta gagcgttaga 300

tccgaaagat caagaattca atctttggtg aactccaaaa tc 342

<210> 9

<211> 270

<212> DNA

<213> 花生

<400> 9

aatctcatat ttatcatgca tgatcttctt tttggagata cacaaaacat aaaaaaaaaa 60

tttagtatta ataataatca acggtcggct aatttttttt taatatcgta atttttgata 120

ttttttaaaa ttgtagaagt acataaattg tagggttcga tttctgtacc tcaaattttt 180

ttatttttta acacaaatcg aacagtccga tttctatact tctacaaatc ggacggtcca 240

atttctgtac ctctaataaa tcaaatggtc 270

<210> 10

<211> 427

<212> DNA

<213> 花生

<400> 10

atgcagcatt cttcttattc agctttctct tgcctttatt ctccttcatg cgttcctttc 60

caagagagtg gtgcagcttc aacgctttgg agaacctctt gagtaccgca cggtcctctt 120

cgcagtagag actcttgttt gccttaattg ctgcccggtt cactttgcag tactccgggt 180

cttgcaggga cactacgacg tcaaatcttg taaggcggaa tggattcgga gccatagctt 240

ctattgtttt caaatccagc ttcaacaact ccttgcttct catcttggca accatgacac 300

tagaaacact ttccaaaaac aggttagact ttttttcaca agaatgtgag actcataaat 360

cagaatttat aggatgtgct ttatttagag tttaagctat gatagaatta aatactttct 420

gttttta 427

<210> 11

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

tgtctcaccc cggtaaaca 19

<210> 12

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

gtggatgtat attcaacacg ta 22

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tgctcgataa ttaatagctt c 21

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

gcttaccttg tttaccgaaa 20

<210> 15

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

taatgtctat gcaaagcacg ag 22

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

attgaattct tgatctttcg ga 22

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

taataatcaa cggtcggcta 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

agaagtatag aaatcggact 20

<210> 19

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

tattctcctt catgcgttc 19

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

actctaaata aagcacatcc 20

Claims

1.一种花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合，其包括以下三种情况中的任一种：

a、位于花生第6号染色体上的qSCA06.2；

b、位于花生第16号染色体上的qSCB06.2；或者

其中，所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ ID NO.2所示的SCM06-11，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13中的至少一个；以及

2.根据权利要求1所述的连锁分子标记组合，其中，所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ ID NO.2所示的SCM06-12，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13中的至少两个。

3.根据权利要求1所述的连锁分子标记组合，其中，所述qSCA06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:1所示的SCM06-11、如SEQ ID NO.2所示的SCM06-12，和如SEQ ID NO.3所示的SCM06-13。

4.根据权利要求1所述的连锁分子标记组合，其中，所述qSCB06.2的分子标记包括如SEQ ID NO:4所示的SCM16-4，和如SEQ ID NO:5所示的SCM16-5。

5.一种用于鉴定如权利要求1～4所述的连锁分子标记组合的引物组合物。

6.根据权利要求5所述的引物组合物，其中，所述引物组合物包括SEQ ID NO:11～12、SEQ ID NO:13～14、SEQ ID NO:15～16、SEQ ID NO:17～18，以及SEQ ID NO:19～20中的一对或多对。

7.如权利要求1～4所述的连锁分子标记组合和如权利要求5或6所述的引物组合物在花生蔗糖含量的主效QTL的基因分型中的应用。

8.如权利要求1～4所述的连锁分子标记组合和如权利要求5或6所述的引物组合物在鉴定和筛选花生蔗糖含量的花生材料中的应用。

9.一种花生蔗糖含量相关的QTL位点的连锁分子标记组合的鉴定方法，所述方法包括：

提取待鉴定花生材料的基因组DNA，并以基因组DNA为模板，利用如权利要求5或6所述的引物组合物对模板进行PCR扩增，对扩增产物进行分析，根据扩增结果判断所述连锁分子标记的多态性。

10.根据权利要求9所述的鉴定方法，其中，所述扩增产物进行分析包括分析扩增产物的片段大小。