CN114437234A - Btnl2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用 - Google Patents

Btnl2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用，所述重组蛋白包括BTNL2‑Fc，为小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域和免疫球蛋白IgG的重链Fc结构域编码的融合多肽，所述小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为小鼠的BTNL2第27位天冬氨酸到第452位丝氨酸；或者：重组BTNL2‑his，为人的BTNL2基因细胞膜外区域和组氨酸标签结构域编码的融合多肽，所述人的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为人BTNL2第24位赖氨酸到第453位丝氨酸。本发明的重组蛋白可极大地减轻小鼠肠炎严重程度，减少死亡率，表明可作为治疗炎症性肠病的药物。

Description

BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病 药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用。
背景技术
炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)为累及全结肠的一种慢性自身免疫性疾病，主要包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn'sdisease，CD)。近年来，炎症性肠病在我国发病率逐年升高，已成为消化系统常见疾病和慢性腹泻的重要原因，且患者多为青壮年，因此日益受到重视。炎症性肠病目前缺乏特异有效地治疗方法，病情经常迁延不愈，而且慢性炎症性肠病极大地增加了患者罹患结直肠癌的风险1。因此对炎症性肠病分子、细胞机制的研究是自身免疫疾病研究中的热点。硫酸葡聚糖钠(DSS)被广泛用来在小鼠中建造炎症性肠病的模型，与人类的炎症性肠病具有较高的相似性，是研究人类炎症性肠病的理想模型2。
因此，有必要开发一种用于治疗炎症性肠病药物。
发明内容
本发明目的是提供一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种BTNL2重组蛋白，所述BTNL2重组蛋白包括：
重组蛋白BTNL2-Fc，为小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域和免疫球蛋白IgG的重链Fc结构域编码的融合多肽，所述小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为小鼠的BTNL2第27位天冬氨酸到第452位丝氨酸；所述免疫球蛋白IgG包括IgG1、IgG2、IgG4中的一种；或者
重组蛋白BTNL2-his，为人的BTNL2基因细胞膜外区域和组氨酸标签结构域编码的融合多肽，所述人的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为人BTNL2第24位赖氨酸到第453位丝氨酸。
在本发明的第二方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子为编码所述BTNL2重组蛋白的基因，其中，所述重组蛋白BTNL2-Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组蛋白BTNL2-his的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
在本发明的第三方面，提供了一种含有所述的核酸分子的表达载体。
所述表达载体的制备方法，
其中，所述重组蛋白BTNL2-Fc的表达载体的制备方法，包括：
通过合成获得小鼠BTNL2-Fc全cDNA序列；
利用EcoRI和NheI酶切pFUSE--hIgG1-Fc2载体，回收获得3424bp的载体片段；
将所述BTNL2-Fc全cDNA序列克隆到所述载体片段中，获得表达载体pINFUSE-mBTNL2-hIgG2-Fc2。
所述重组蛋白BTNL2-his的表达载体的制备方法，包括：
通过合成获得人BTNL2-His全cDNA序列；
利用BamHI和XhoI酶切PET28a载体，将所述人BTNL2-His全cDNA序列克隆到所述载体片段中，获得表达载体PET28a-hBTNL2-His。
在本发明的第五方面，提供了一种含有所述载体的宿主菌细胞。
进一步地，所述宿主细胞包括细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞中的一种。
更进一步地，所述宿主细胞包括293F、COS7和CHO细胞。
在本发明的第六方面，提供了所述的重组蛋白BTNL2-Fc、所述的核酸分子或所述的载体或者所述的宿主细胞在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用。
进一步地，所述用于治疗炎症性肠病药物包括用于治疗溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn's disease，CD)的药物。
在本发明的第七方面，提供了一种抗病毒的药物，所述药物的活性成分包括所述的重组蛋白BTNL2-Fc。
进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料和载体。
进一步地，所述辅料包括填充剂、崩解剂、粘合剂、赋形剂、稀释剂、润滑剂、甜味剂或着色剂中的至少一种。
进一步地，所述药物的剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂或分散剂中的至少一种。
进一步地，所述药物的给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本发明提供一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用中，我们通过哺乳动物细胞表达纯化了BTNL2-Fc，我们发现腹腔注射重组蛋白BTNL2-Fc能够极大减轻DSS诱导的小鼠肠炎，减轻体重下降，减少死亡率。表明重组蛋白BTNL2-Fc能够作为治疗炎症性肠病的候选药物；同时由于没有纯化得到人的BTNL2-Fc蛋白，我们在构建了PET28a-hBTNL2-his载体并原核纯化了人BTNL2-his蛋白，在细胞水平上发现人BTNL2-his蛋白对激活的人T细胞系Jurkat，以及激活的人PBMC(外周血单个核细胞)有抑制作用，提示人BTNL2蛋白对肠炎也有保护作用。综上可知，本发明的BTNL2重组蛋白可用于制备用于治疗炎症性肠病药物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为重组蛋白BTNL2-Fc给药组的小鼠体重变化图；
图2为重组蛋白BTNL2-Fc给药组小鼠的结肠组织进行H&E染色的结果；
图3A为人BTNL2-His蛋白的SDS-PAGE结果,图3B为人BTNL2-His蛋白对激活的人T细胞系Jurkat有抑制作用的结果，图3C为人BTNL2-His蛋白对激活的人PBMC(外周血单个核细胞)有抑制作用的结果；
图4为SDS-PAGE结果，其中，图4A为实施例1的重组蛋白BTNL2-Fc的SDS-PAGE结果；图4B为对比例1的Fc的SDS-PAGE结果。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。
本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
嗜乳脂样蛋白-2(BTNL2)属于嗜乳脂样蛋白家族成员，与PD-L1、B7-1、B7-H3等B7家族分子在结构上具有高度同源性。BTNL2主要参与T细胞的活化过程，其受体表达于活化的T细胞，BTNL2通过与其受体结合抑制活化T细胞的增殖及细胞因子的分泌，从而抑制过度激活的免疫反应，是T细胞活化的共抑制分子3。另外，BTNL2外显子上两个位点的错义突变及第4个内含子上的一个位点突变分别与前列腺癌和肺腺癌易感相关。相关研究显示，与PD-L1类似，BTNL2也与I型糖尿病、结节病、关节炎等多种自身免疫疾病相关4 5，但BTNL2在炎症性肠病中发挥的作用还不清楚。
本发明通过哺乳动物细胞表达纯化的重组蛋白BTNL2-Fc，并经腹腔注射，通过图1-图2小鼠体重变化和H&E染色结果可以看出重组蛋白BTNL2-Fc对DSS诱导的肠炎具有明显的保护作用。从而提示提示重组蛋白BTNL2-Fc能够作为治疗炎症性肠病的候选药物。
下面将结合实施例及实验数据对本申请的一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用进行详细说明。
实施例1、重组蛋白BTNL2-Fc的制备
1、表达载体的构建
通过合成获得小鼠BTNL2-Fc全cDNA序列，其中，小鼠BTNL2胞外区核酸序列(27-452)如SEQ ID NO.6所示，重组蛋白BTNL2-Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；利用EcoRI和NheI酶切pFUSE-hIgG2-Fc载体(购自Invivogen公司)，切除720bp的片段，回收3424bp的载体片段；将合成好含有EcoRI和NheI酶切位点的BTNL2-Fc全cDNA序列利用EcoRI和NheI酶切回收后通过T4 DNA连接酶克隆到回收的载体片段中，形成的载体命名为pINFUSE-mBTNL2-hIgG2-Fc。
2、转染、表达与纯化
构建好的表达载体转染入293F细胞(1L培养细胞，1×106/ml)，在37℃，5％CO2，130rpm摇6天。转染试剂为PolyPlus transfection公司的PolyPlus转染试剂，具体装染方法见产品说明。转染后第6天收取细胞培养上清，离心去除细胞(1500rpm，5分钟)，0.45μm滤膜过滤。
用protein G预装柱纯化重组蛋白(预装柱购自武汉汇研公司，货号HZ1012-1)，纯化方法见产品说明。纯化后的洗脱蛋白通过Milipore的超滤株超滤(货号为UFc501096)，超滤后融在1XPBS里，过0.22μm滤膜，测浓度，-80℃保存。SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色)如图4A所示，表明纯化获得重组蛋白BTNL2-Fc。所述重组蛋白BTNL2-Fc的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
实施例2、重组蛋白BTNL2-his的制备
1、表达载体的构建
通过合成获得人BTNL2全cDNA序列，其中，胞外区域编码的氨基酸为人BTNL2第24位赖氨酸到第453位丝氨酸，所述人BTNL2胞外区核酸序列(24-453)的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示；
利用BamHI和XhoI酶切PET28a载体，以合成获得人BTNL2全cDNA序列为模板，用引物F-5'-CGGGATCCATGAAGCAGTCAGAAGACTTTAG-3'(SEQ ID NO.3)，R-5'-CCGCTCGAGT CTAATGGTGATGGTGATGATGTGAGAGAGAAAAAGTTG-3'(SEQ ID NO.4)进行PCR得到人BTNL2-His全cDNA序列，用BamHI和XhoI酶切后通过T4DNA连接酶克隆到所述载体片段中，形成的载体命名为PET28a-hBTNL2-His。重组蛋白BTNL2-his的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2、转化、表达与纯化
构建好的载体转化到BL21感受态(购于武汉擎科公司)，扩大培养到菌密度为OD＝0.6,加入IPTG(1mM,购于Sigma公司)，28℃诱导表达过夜，利用试剂盒(购于碧云天公司，货号：P2233)纯化。SDS-PAGE如图3A所示，表明纯化获得人BTNL2-His蛋白。
对比例1
该对比例中，为Fc蛋白，Fc为pFUSE-hIgG2-Fc2载体(购自Invivogen公司)转染293T细胞表达纯化得到的hIgG2-Fc蛋白，命名为Fc，表达纯化方法与mBTNL-Fc方法相同。SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色)如图4B。
应用例1、重组蛋白BTNL2-Fc在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用
1、实验材料及方法
实验小鼠
购买特定的无病原体C57BL/6小鼠，购买自辽宁省长生生物，并在华中科技大学生命科学与技术学院SPF级动物实验室饲养。选取年龄和性别相符的小鼠做动物实验。
2、DSS诱导小鼠结肠炎模型的建立
产生急性结肠炎小鼠模型，DSS(36k-50kD；MP Biomedicals,LLC,Illkirch,France)被添加到小鼠饮用水中(浓度为2％)。小鼠暴露于DSS水5-7天，并每天称取小鼠体重，绘制成体重变化图。疾病活动指数(DAI)在此前公布的评分系统进行。结肠组织用石蜡包片染色。苏木精-伊红染色(H&E)。
3、通过注射实施例1制备得到的重组蛋白BTNL2-Fc治疗DSS诱导的肠炎
8周龄暴露于2％DSS水5-7天(5-7天后换成普通水)，第0天开始腹腔注射重组蛋白BTNL2-Fc(1XPBS溶液)，50ug/只/次，隔一天注射一次，一共注射5次。每天称取小鼠体重，绘制成体重变化图。第10天处死小鼠，取结肠组织做H&E染色。
同时注射对比例的Fc蛋白作为对照组，操作同上；
4、实验结果
将8周龄暴露于2％DSS水7天(7天后换成普通水)，第0天开始腹腔注射重组蛋白BTNL2-Fc，50ug/只/次，隔一天注射一次，一共注射5次。每天称取小鼠体重，绘制成体重变化图。如图1所示，可以看出注射重组蛋白BTNL2-Fc明显减轻DSS诱导的小鼠体重下降。
将8周龄暴露于2％DSS水7天(7天后换成普通水)，第0天开始腹腔注射重组蛋白BTNL2-Fc，50ug/只/次，隔一天注射一次，一共注射5次。第10天处死小鼠，取结肠组织进行H&E染色，如图2所示，可以看出注射重组蛋白BTNL2-Fc明显改善了DSS诱导的结肠炎症状况。
通过以上图1-图2小鼠体重变化和H&E染色结果可以看出腹腔注射重组蛋白BTNL2-Fc，可以明显减轻DSS诱导的小鼠肠炎，减轻体重下降，减少死亡率。重组蛋白BTNL2-Fc对DSS诱导的肠炎具有明显的保护作用。从而提示提示重组蛋白BTNL2-Fc能够作为治疗炎症性肠病的候选药物。
应用例2、重组蛋白BTNL2-His在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用
将实施例2中的纯化了人BTNL2-His蛋白进行细胞实验，具体操作为：
将Anti-CD3或者Anti-CD3和Anti-CD28(1ug/ml,购于Biolenged公司)包被到高亲和力的96孔板(购于Costar公司)中，4℃放置过夜，再将实施例2的hBTNL2-His蛋白(30ug/ml)包被到高亲和力的96孔板中，室温放置两个小时。然后种Jurkat细胞或者人的PBMC(1X105个/孔)到包被好的96孔板中，培养48小时后，收Jurkat细胞，提取RNA，反转录成cDNA，RT-PCR检测IL-2的表达或者收PBMC的培养上清ELISA检测IL-2的表达，表征细胞的激活程度。
结果如图3所示，表明在细胞水平上发现人BTNL2对激活的人T细胞系Jurkat有抑制作用，提示人BTNL2蛋白对肠炎也有保护作用。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
序列表
<110> 四川省医学科学院·四川省人民医院
<120> BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2176
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgacttcag agtggtcggt cctaacctcc caatcttggc taaagtcggg gaagatgccc 60
tgctaacgtg tcagctcctc cccaagagga ccacggcaca catggaggtg aggtggtacc 120
gctccgaccc tgacatgcca gtgattatgt accgggatgg agctgaggtg actgggctac 180
cgatggaggg gtacggaggc cgggcagagt ggatggagga cagcactgaa gagggcagtg 240
tggctctgaa gattcgccag gtccagccaa gtgacgatgg ccagtactgg tgccgcttcc 300
aggaggggga ctactggaga gagacaagcg tgctactcca agtggctgct ctaggatctt 360
ccccaaatat ccatgtggag ggactcggag aaggagaggt ccagcttgta tgcacgtccc 420
gaggctggtt ccctgagcct gaggtgcact gggaaggcat ctggggagaa aagttgatga 480
gtttctctga gaatcatgtg ccaggtgaag atgggctatt ctatgtggaa gacacactga 540
tggtcaggaa tgacagtgta gagaccattt cctgcttcat ctacagccat ggcctcagag 600
agacccagga ggccaccatc gctctgtcag agaggctcca gaccgaactg gcttccgtta 660
gcgtaatcgg acattcccag cccagccctg ttcaagtcgg agagaacata gaattaactt 720
gtcacctctc acctcaaacg gatgctcaga acttagaggt gaggtggctc cgatcccgct 780
attaccctgc agtccacgtg tatgcaaatg gcacccacgt ggctggagag cagatggtag 840
aatacaaagg gaggacttca ttggtgactg atgccatcca cgagggaaaa ctgaccctgc 900
aaattcacaa tgccagaact tcggatgaag ggcagtaccg gtgccttttt ggaaaagatg 960
gtgtctacca ggaggcccgt gtggatgtgc aggtgatggc ggtgggttcc accccacgga 1020
tcaccaggga ggtcttgaaa gatggaggca tgcagctgag gtgtacgtct gatgggtggt 1080
tcccacggcc ccatgtgcag tggagggaca gagatggaaa gacaatgcca tcgttttccg 1140
aggcctttca gcaagggagc caggagctgt tccaggtgga gacacttctg ctggtcacaa 1200
acggctccat ggtgaatgtg acctgctcca tcagcctccc tctgggccag gagaaaacag 1260
cccgtttccc tctctcactc gagagatctg tggagtgccc accgtgccca ggtaagccag 1320
cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg 1380
gacaggcccc agctgggtgc tgacacgtcc acctccatct cttcctcagc accacctgtg 1440
gcaggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 1500
acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc 1560
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag 1620
ttcaacagca cgttccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgttg tgcaccagga ctggctgaac 1680
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc cagcccccat cgagaaaacc 1740
atctccaaaa ccaaaggtgg gacccgcggg gtatgagggc cacatggaca gaggccggct 1800
cggcccaccc tctgccctgg gagtgaccgc tgtgccaacc tctgtcccta cagggcagcc 1860
ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt 1920
cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag 1980
caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc atgctggact ccgacggctc 2040
cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt 2100
ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct 2160
gtctccgggt aaatga 2176
<210> 2
<211> 1314
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atgaagcagt cagaagactt tagagtcatt ggccctgctc atcctatcct ggccggggtt 60
ggggaagatg ccctgttaac ctgccagcta ctccccaaga ggaccacaat gcacgtggag 120
gtgaggtggt accgctcaga gcccagcaca cctgtgtttg tgcacaggga tggagtggag 180
gtgactgaga tgcagatgga ggagtacaga ggctgggtag agtggataga gaatggcatt 240
gcaaagggaa atgtggcact gaagatacac aacatccagc cctccgacaa tggacaatac 300
tggtgccatt tccaggatgg gaactactgt ggagaaacaa gcttgctgct caaagtagca 360
ggtctggggt ctgcccctag catccacatg gagggacctg gggagagtgg agtccagctt 420
gtgtgcactg caaggggctg gttcccagag ccccaggtgt attgggaaga catccgggga 480
gagaagctgc tggccgtgtc tgagcatcgc atccaagata aagatggcct gttctatgcg 540
gaagccaccc tggtggtcag gaacgcctct gcagagtctg tgtcctgctt ggtccacaac 600
cccgtcctca ctgaggagaa ggggtcggtc atcagcctcc cagagaaact ccagactgag 660
ctggcttctt taaaagtgaa tggaccttcc cagcccatcc tcgtcagagt gggagaagat 720
atacagctaa cctgttacct gtcccccaag gcgaatgcac agagcatgga ggtgaggtgg 780
gaccgatccc accgttaccc tgctgtgcat gtgtatatgg atggggacca tgtggctgga 840
gagcagatgg cagagtacag agggaggact gtactggtga gtgacgccat tgacgagggc 900
agactgaccc tgcagatact cagtgccaga ccttcggacg acgggcagta ccgctgcctt 960
tttgaaaaag atgatgtcta ccaggaggcc agtttggatc tgaaggtggt aagtctgggt 1020
tcttccccac tgatcactgt ggaggggcaa gaagatggag aaatgcagcc gatgtgctct 1080
tcagatgggt ggttcccaca gccccacgtg ccatggaggg acatggaagg aaagacgata 1140
ccatcatctt cccaggccct gactcaaggc agccacgggc tgttccacgt gcagacattg 1200
ctaagggtca caaacatctc cgctgtggac gtcacttgtt ccatcagcat cccctttttg 1260
ggcgaggaga aaatcgcaac tttttctctc tcacatcatc accatcacca ttag 1314
<210> 3
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cgggatccat gaagcagtca gaagacttta g 31
<210> 4
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ccgctcgagt ctaatggtga tggtgatgat gtgagagaga aaaagttg 48
<210> 5
<211> 1290
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aagcagtcag aagactttag agtcattggc cctgctcatc ctatcctggc cggggttggg 60
gaagatgccc tgttaacctg ccagctactc cccaagagga ccacaatgca cgtggaggtg 120
aggtggtacc gctcagagcc cagcacacct gtgtttgtgc acagggatgg agtggaggtg 180
actgagatgc agatggagga gtacagaggc tgggtagagt ggatagagaa tggcattgca 240
aagggaaatg tggcactgaa gatacacaac atccagccct ccgacaatgg acaatactgg 300
tgccatttcc aggatgggaa ctactgtgga gaaacaagct tgctgctcaa agtagcaggt 360
ctggggtctg cccctagcat ccacatggag ggacctgggg agagtggagt ccagcttgtg 420
tgcactgcaa ggggctggtt cccagagccc caggtgtatt gggaagacat ccggggagag 480
aagctgctgg ccgtgtctga gcatcgcatc caagataaag atggcctgtt ctatgcggaa 540
gccaccctgg tggtcaggaa cgcctctgca gagtctgtgt cctgcttggt ccacaacccc 600
gtcctcactg aggagaaggg gtcggtcatc agcctcccag agaaactcca gactgagctg 660
gcttctttaa aagtgaatgg accttcccag cccatcctcg tcagagtggg agaagatata 720
cagctaacct gttacctgtc ccccaaggcg aatgcacaga gcatggaggt gaggtgggac 780
cgatcccacc gttaccctgc tgtgcatgtg tatatggatg gggaccatgt ggctggagag 840
cagatggcag agtacagagg gaggactgta ctggtgagtg acgccattga cgagggcaga 900
ctgaccctgc agatactcag tgccagacct tcggacgacg ggcagtaccg ctgccttttt 960
gaaaaagatg atgtctacca ggaggccagt ttggatctga aggtggtaag tctgggttct 1020
tccccactga tcactgtgga ggggcaagaa gatggagaaa tgcagccgat gtgctcttca 1080
gatgggtggt tcccacagcc ccacgtgcca tggagggaca tggaaggaaa gacgatacca 1140
tcatcttccc aggccctgac tcaaggcagc cacgggctgt tccacgtgca gacattgcta 1200
agggtcacaa acatctccgc tgtggacgtc acttgttcca tcagcatccc ctttttgggc 1260
gaggagaaaa tcgcaacttt ttctctctca 1290
<210> 6
<211> 1278
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gatgacttca gagtggtcgg tcctaacctc ccaatcttgg ctaaagtcgg ggaagatgcc 60
ctgctaacgt gtcagctcct ccccaagagg accacggcac acatggaggt gaggtggtac 120
cgctccgacc ctgacatgcc agtgattatg taccgggatg gagctgaggt gactgggcta 180
ccgatggagg ggtacggagg ccgggcagag tggatggagg acagcactga agagggcagt 240
gtggctctga agattcgcca ggtccagcca agtgacgatg gccagtactg gtgccgcttc 300
caggaggggg actactggag agagacaagc gtgctactcc aagtggctgc tctaggatct 360
tccccaaata tccatgtgga gggactcgga gaaggagagg tccagcttgt atgcacgtcc 420
cgaggctggt tccctgagcc tgaggtgcac tgggaaggca tctggggaga aaagttgatg 480
agtttctctg agaatcatgt gccaggtgaa gatgggctat tctatgtgga agacacactg 540
atggtcagga atgacagtgt agagaccatt tcctgcttca tctacagcca tggcctcaga 600
gagacccagg aggccaccat cgctctgtca gagaggctcc agaccgaact ggcttccgtt 660
agcgtaatcg gacattccca gcccagccct gttcaagtcg gagagaacat agaattaact 720
tgtcacctct cacctcaaac ggatgctcag aacttagagg tgaggtggct ccgatcccgc 780
tattaccctg cagtccacgt gtatgcaaat ggcacccacg tggctggaga gcagatggta 840
gaatacaaag ggaggacttc attggtgact gatgccatcc acgagggaaa actgaccctg 900
caaattcaca atgccagaac ttcggatgaa gggcagtacc ggtgcctttt tggaaaagat 960
ggtgtctacc aggaggcccg tgtggatgtg caggtgatgg cggtgggttc caccccacgg 1020
atcaccaggg aggtcttgaa agatggaggc atgcagctga ggtgtacgtc tgatgggtgg 1080
ttcccacggc cccatgtgca gtggagggac agagatggaa agacaatgcc atcgttttcc 1140
gaggcctttc agcaagggag ccaggagctg ttccaggtgg agacacttct gctggtcaca 1200
aacggctcca tggtgaatgt gacctgctcc atcagcctcc ctctgggcca ggagaaaaca 1260
gcccgtttcc ctctctca 1278

Claims (10)

1.一种BTNL2重组蛋白，其特征在于，所述BTNL2重组蛋白包括：
重组蛋白BTNL2-Fc，为小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域和免疫球蛋白IgG的重链Fc结构域编码的融合多肽，所述小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为小鼠的BTNL2第27位天冬氨酸到第452位丝氨酸，所述免疫球蛋白IgG包括IgG1、IgG2、IgG4中的一种；或者：
重组蛋白BTNL2-his，为人的BTNL2基因细胞膜外区域和组氨酸标签结构域编码的融合多肽，所述人的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为人BTNL2第24位赖氨酸到第453位丝氨酸。
2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为编码权利要求1所述BTNL2重组蛋白的基因，其中，所述重组蛋白BTNL2-Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组蛋白BTNL2-his的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种含有权利要求2所述的核酸分子的表达载体。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括原核表达载体、真核表达载体和病毒载体中的一种。
5.一种含有权利要求3所述载体的宿主细胞。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞中的一种。
7.一种含有权利要求4所述载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括293F、COS7和CHO细胞。
8.一种权利要求1所述的BTNL2重组蛋白、权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的载体或者权利要求5-7任一所述的宿主细胞在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述用于治疗炎症性肠病药物包括用于治疗溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn's disease，CD)的药物。
10.一种用于治疗炎症性肠病药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括如权利要求1所述的重组蛋白BTNL2-Fc。
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