CN114436888A

CN114436888A - 一种亚精胺生物碱类化合物及其制备方法、药物组合物和应用

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Publication number: CN114436888A
Application number: CN202210316078.9A
Authority: CN
Inventors: 张维库; 续洁琨; 赫军; 张佳; 李雅楠; 王玉伟
Original assignee: China Japan Friendship Hospital
Current assignee: China Japan Friendship Hospital
Priority date: 2022-03-29
Filing date: 2022-03-29
Publication date: 2022-05-06

Abstract

本发明公开了一种亚精胺生物碱类化合物及其制备方法、药物组合物和应用，具体公开了其在制备预防或治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。药理实验结果表明，其具有良好的BACE1抑制活性，其抑制效果均优于阳性药多奈哌齐，可以作为治疗阿尔茨海默症中的药物应用。

Description

一种亚精胺生物碱类化合物及其制备方法、药物组合物和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，更具体地，涉及一种亚精胺生物碱类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。

背景技术

阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease，AD)为中枢神经系统退行性疾病，常见表现为老年人的进行性认知功能和行为障碍，且发病率随着年龄的增长而上升。随着全球人口老龄化进程的发展，AD患者人数也呈现上升趋势；AD发病机制复杂，目前上市的药物仅能减缓疾病病程和缓解症状，却无法最终逆转病程治愈疾病。

造成AD患者大脑中特征性病理改变的主要成分β-淀粉样蛋白(β-Amyloidprotein,Aβ)，是一种神经毒性物质，能够导致神经元的损伤和死亡，被认为是AD发病机制中的关键环节。当β分泌酶-1(BACE1)与γ分泌酶共同作用切割淀粉样蛋白前体(APP)时，将会使APP降解从而导致Aβ增加并聚集形成淀粉样斑块，加速认知功能障碍，造成AD的发生或加重。

亚精胺生物碱类化合物是亚精胺上氨基或亚氨基上氢原子被不同官能团取代而生成的一系列衍生物，其广泛存在于植物的花粉、叶及果实中。

洋金花(Datura metel L)为茄科植物白花曼陀罗的干燥花，生物碱含量较为丰富。为了从洋金花中寻找高效低毒的生物活性成分，发明人从该植物中分离得到一类亚精胺生物碱类化合物，该类化合物具有显著的BACE1抑制活性，可作为治疗AD中的药物应用。

发明内容

针对现有技术所存在的不足，本发明提供了一种亚精胺生物碱类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种亚精胺生物碱类化合物，其是具有如下通式I和II所示的母核结构的化合物及其在药学上可接受的盐或化合物：

其中：

R选自

氢、酯基、甲基、乙基、丙基、异丙基、没食子酰基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙胺基、二乙胺基、异丙氨基、二异丙氨基、饱和的烃基、不饱和的烃基、取代的芳香环、不取代的芳香环、低聚糖、多聚糖、金属离子、有机酸酯基、硝基或卤素；

R₁和R₂分别选自

氢、酯基、甲基、乙基、丙基、异丙基、没食子酰基、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙胺基、二乙胺基、异丙氨基、二异丙氨基、饱和的烃基、不饱和的烃基、取代的芳香环、不取代的芳香环、低聚糖、多聚糖、金属离子、有机酸酯基、硝基或卤素。

具体地，在上述技术方案中，在通式I中，

R为

时，命名为daturaspermidine C；

R为

时，命名为daturaspermidine D；

R为H时，命名为daturaspermidine G。

具体地，在上述技术方案中，在通式II中，

R₁为

且R₂为

时，命名为daturaspermidine E；

R₁为H且R₂为

时，命名为daturaspermidine F。

本发明另一方面还提供了上述具有通式I和II的母核结构的亚精胺生物碱类化合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤S10，取洋金花干燥花，加入提取溶剂回流提取若干次，合并提取液，过滤，减压浓缩，得浓缩液；

步骤S11，依次采用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯作为有机溶剂对浓缩液进行萃取，分别回收有机溶剂后获得萃取物；

步骤S12，对步骤S11中采用二氯甲烷萃取后得到的萃取物进行硅胶柱层析，使用洗脱剂进行梯度洗脱，利用硅胶薄层板检识后，合并依次得到流分A、流分B、流分C、流分D、流分E、流分F、流分G和流分H；

将流分D进行反相硅胶柱色谱层析，梯度洗脱后利用硅胶薄层板检识，得到流分D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9、D10、D11和D12，对流分D10进行葡聚糖凝胶柱层析得到流分D10.1、D10.2、D10.3和D10.4，分别通过反相或正相制备液相色谱对流分D10.2进行纯化，得到化合物daturaspermidine C和daturaspermidine D；

将流分G进行反相硅胶柱色谱层析，梯度洗脱后利用硅胶薄层板检识，得到流分G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9和G10；对流分G7进行葡聚糖凝胶柱层析得到7个流分G7.1、G7.2、G7.3、G7.4、G7.5、G7.6和G7.7；分别通过反相或正相制备液相色谱对G7.5和G7.4进行纯化，得到化合物daturaspermidine E和daturaspermidine F；

步骤S13，对步骤S11中采用乙酸乙酯萃取后得到的萃取物进行硅胶柱层析，使用洗脱剂进行梯度洗脱，利用硅胶薄层板检识后，合并依次得到流分a、流分b、流分c、流分d、流分e、流分f、流分g、流分h和流分i；

将流分g进行反相硅胶柱色谱层析，通过硅胶薄层板检识获得流分g1、g2、g3、g4和g5，对流分g3进行葡聚糖凝胶柱层析得到6个流分g3.1、g3.2、g3.3、g3.4、g3.5和g3.6，分别通过反相或正相制备液相色谱对g3.4进行纯化，得到化合物daturaspermidine G；

其中，步骤S12和步骤S13的顺序可更换。

在上述技术方案中，步骤S10中，所述提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的至少一种。

在本发明的一个优选实施方式中，步骤S10中，所述提取溶剂为60-95v％的乙醇水溶液。

在上述技术方案中，步骤S10中，所述提取溶剂的加入质量为洋金花干燥花的质量的10-20倍。

在本发明的一个优选实施方式中，步骤S10中，所述提取溶剂的加入质量为洋金花干燥花的质量的15倍。

在上述技术方案中，步骤S10中，所述回流提取的温度、时间和次数分别为65-85℃、1-3h和2-4次。

在上述技术方案中，步骤S11中，所述有机溶剂的加入量体积为浓缩液的体积的1.5-2倍。

在上述技术方案中，步骤S11中，所述萃取的次数均为2-5次。

在上述技术方案中，步骤S12和步骤S13中，在硅胶柱层析后，所述梯度洗脱使用的洗脱剂为氯仿-甲醇、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯和环己烷-乙酸乙酯中的一种。

在上述技术方案中，步骤S12和步骤S13中，在反相硅胶柱色谱层析后，所述梯度洗脱使用的洗脱剂为乙醇-水或甲醇-水。

在上述技术方案中，步骤S12和步骤S13中，进行葡聚糖凝胶柱层析时洗脱剂为甲醇或二氯甲烷-甲醇，葡聚糖凝胶为Sephadex LH-20。

在上述技术方案中，步骤S12和步骤S13中，色谱纯化处理中的色谱柱为C4、C8、C6或C18，其中，流动相为甲醇-水或乙腈-水。

本发明又一方面还提供了上述亚精胺生物碱类化合物的药物组合物。

优选地，在上述技术方案中，所述药物组合物包括增效剂和药效学上可接受的载体。也就是说，含有作为活性成份的本发明的亚精胺生物碱类化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物亦包含在本发明内。

具体地，在上述技术方案中，所述增效剂为以下物质的任一种：

多奈哌齐、利斯的明、加兰他敏、他克林衍生物、亚甲蓝、石杉碱甲、美金刚胺、盐酸金刚烷胺、左旋多巴、卡比多巴、盐酸苄丝肼、盐酸司来吉兰、盐酸苯海索、托卡朋、甲磺酸溴隐亭、甲磺酸培高立特、甲磺酸苯扎托品、罗匹尼罗、普拉克、左旋丁基苯酞和二苯乙烯苷。

具体地，在上述技术方案中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、冲剂、滴丸或微丸。

具体地，在上述技术方案中，所述药物组合物中亚精胺生物碱类化合物的含量为0.01-95.00wt％。

具体地，在上述技术方案中，所述药物组合物的单元剂型中亚精胺生物碱类化合物的含量为0.01-50.00mg，优选为0.01-10.00mg。

本发明活性部位的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明活性部位与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为医药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明活性部位或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等，优选口服给药。

药物组合物给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等。固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明活性部位可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

本发明再一方面还提供了上述亚精胺生物碱类化合物在制备预防或治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

(1)本发明所提供的亚精胺生物碱类化合物为原料，经BACE1抑制活性筛选试验，结果显示，daturaspermidines C-G有良好的BACE1抑制活性(IC₅₀＝2.32～15.94μM)，其抑制效果均优于阳性药多奈哌齐(IC₅₀＝62.58±0.41μM)；

(2)本发明所提供的亚精胺生物碱类化合物，经BACE1抑制活性筛选试验，结果显示，其对BACE1具有明显的抑制作用，可以作为治疗AD中的药物应用。

附图说明

图1为本发明实施例中daturaspermidines C-G的结构。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。

应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例中，如无特别说明，所用手段均为本领域常规的手段。

本文中所用的术语“包含”、“包括”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

实施例1

本发明实施例提供了daturaspermidines C-G的制备方法，包括如下步骤：

步骤S10，取洋金花干燥花，加入10-20倍重量的提取溶剂，在65-85℃下回流提取1-3h，重复2-4次，合并提取液，过滤，减压浓缩，得浓缩液，其中，提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的至少一种，优选为为60-95v％的乙醇水溶液；

步骤S11，依次采用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯作为有机溶剂对浓缩液进行萃取(分别重复萃取2-5次，合并有机相)，分别回收有机溶剂后获得萃取物，其中，有机溶剂的加入量体积为浓缩液的体积的1.5-2倍；

步骤S12，对步骤S11中采用二氯甲烷萃取后得到的萃取物进行硅胶柱层析，使用洗脱剂(氯仿-甲醇、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯和环己烷-乙酸乙酯中的一种)进行梯度洗脱，利用硅胶薄层板检识后，合并为8个流分(包括流分A、流分B、流分C、流分D、流分E、流分F、流分G和流分H)；

随后，将流分D进行反相硅胶柱色谱层析，梯度洗脱后(洗脱剂为乙醇-水或甲醇-水)利用硅胶薄层板检识，得到12个流分(包括流分D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9、D10、D11和D12)，对流分D10进行葡聚糖凝胶柱层析(葡聚糖凝胶为Sephadex LH-20、Sephadex G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、G-200，洗脱剂为甲醇、氯仿-甲醇、二氯甲烷-甲醇、石油醚-氯仿-甲醇)得到流分D10.1、D10.2、D10.3和D10.4，分别通过反相或正相制备液相色谱对流分D10.2进行纯化，得到化合物daturaspermidine C和daturaspermidine D；

同时，将流分G进行反相硅胶柱色谱层析，梯度洗脱后(洗脱剂为乙醇-水或甲醇-水)利用硅胶薄层板检识，得到10个流分(包括流分G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9和G10)；对流分G7进行葡聚糖凝胶柱层析(葡聚糖凝胶为Sephadex LH-20、Sephadex G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、G-200，洗脱剂为甲醇、氯仿-甲醇、二氯甲烷-甲醇、石油醚-氯仿-甲醇)得到7个流分G7.1、G7.2、G7.3、G7.4、G7.5、G7.6和G7.7；分别通过反相或正相制备液相色谱对G7.5和G7.4进行纯化，得到化合物daturaspermidine E和daturaspermidineF；

步骤S13，对步骤S11中采用乙酸乙酯萃取后得到的萃取物进行硅胶柱层析，使用洗脱剂(氯仿-甲醇、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯和环己烷-乙酸乙酯中的一种)进行梯度洗脱，利用硅胶薄层板检识后，合并依次得到9个流分(流分a、流分b、流分c、流分d、流分e、流分f、流分g、流分h和流分i)；

将流分g进行反相硅胶柱色谱层析，梯度洗脱后(洗脱剂为乙醇-水或甲醇-水)利用硅胶薄层板检识获得5个流分(包括流分g1、g2、g3、g4和g5)，对流分g3进行葡聚糖凝胶柱层析(葡聚糖凝胶为Sephadex LH-20、Sephadex G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、G-200，洗脱剂为甲醇、氯仿-甲醇、二氯甲烷-甲醇、石油醚-氯仿-甲醇)得到6个流分g3.1、g3.2、g3.3、g3.4、g3.5和g3.6，分别通过反相或正相制备液相色谱对g3.4进行纯化，得到化合物daturaspermidine G。

其中，色谱纯化处理中的色谱柱为C4、C8、C6或C18(优选C18)，其中，流动相为甲醇-水或乙腈-水。

实施例2

本发明实施例提供了daturaspermidines C，其分子式如下：

daturaspermidine C的物理性质和核磁数据如下：

黄色无定型粉末；UV(MeOH)λ_max 205,280nm；IR(KBr)ν_max 3403,1652cm^–1；HR-ESI-MS:m/z 480.2469[M+H]⁺(cal.480.2493)；¹H NMR(600MHz,CD₃OD):δ_H 3.09(1H,m,H-2α),3.18(1H,m,H-2β),1.79(1H,m,H-3α),1.63(1H,m,H-3β),3.43(1H,m,H-4α),3.65(1H,t,J＝9.5Hz,H-4β),3.32(2H,m,H-6),1.66(1H,m,H-7α),1.48(1H,m,H-7β),1.42(1H,m,H-8α),1.58(1H,m,H-8β),3.34(1H,m,H-9α),3.34(1H,m,H-9β),1.93(3H,s,H-12),7.21(1H,d,J＝8.7Hz,H-2’),6.71(1H,m,H-3’),6.71(1H,m,H-5’),7.21(1H,d,J＝8.8Hz,H-6’),6.57(1H,d,J＝12.6Hz,H-7’),5.94(1H,d,J＝12.6Hz,H-8’),7.39(1H,m,H-2”),6.78(1H,d,J＝8.6Hz,H-3”),6.77(1H,d,J＝8.6Hz,H-5”),7.39(1H,m,H-6”),7.45(1H,d,J＝15.7Hz,H-7”),6.34(1H,d,J＝15.7Hz,H-8”)；¹³C NMR(150MHz,CD₃OD):δ_c 37.9/38.2(C-2),28.1/29.5(C-3),44.0/47.7(C-4),46.0/49.7(C-6),25.7/27.0(C-7),27.6/28.1(C-8),39.9/40.1(C-9),173.3(C-11),22.5/22.6(C-12),128.2(C-1’),131.2(C-2’),116.4(C-3’),159.3/159.4(C-4’),116.4(C-5’),131.2(C-6’),134.6/134.9(C-7’),121.0(C-8’),171.9/172.0(C-9’),127.7(C-1”),130.6(C-2”),116.7(C-3”),160.6/160.5(C-4”),116.7(C-5”),130.6(C-6”),141.9/141.8(C-7”),118.4(C-8”),169.3/169.2(C-9”)。

实施例3

本发明实施例提供了daturaspermidine D，其分子式如下：

daturaspermidine D的物理性质和核磁数据如下：

黄色无定型粉末；UV(MeOH)λ_max 204,274nm；IR(KBr)ν_max 3403,1652cm^–1；HR-ESI-MS:m/z 480.2478[M+H]⁺(cal.480.2493)；¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ_H 3.05(1H,t,J＝6.8Hz,H-2α),3.19(1H,t,J＝6.9Hz,H-2β),1.79(1H,m,H-3α),1.63(1H,m,H-3β),3.41(1H,m,H-4α),3.65(1H,t,J＝9.5Hz,H-4β),3.29(2H,m,H-6),1.69(1H,m,H-7α),1.41(1H,m,H-7β),1.52(1H,m,H-8α),1.38(1H,m,H-8β),3.13(1H,t,J＝6.5Hz,H-9α),3.27(1H,t,J＝6.7Hz,H-9β),1.95(3H,s,H-12),7.23(1H,s,H-2’),6.72(1H,m,H-3’),6.72(1H,m,H-5’),7.22(1H,s,H-6’),6.58(1H,d,J＝12.6Hz,H-7’),5.93(1H,d,J＝12.6Hz,H-8’),7.39(1H,d,J＝3.9Hz,H-2”),6.72(1H,m H-3”),6.72(1H,m,H-5”),7.38(1H,d,J＝4.0Hz,H-6”),6.62(1H,d,J＝12.6Hz,H-7”),5.79(1H,d,J＝12.6Hz,H-8”)；¹³C NMR(125MHz,CD₃OD):δ_c37.8/38.2(C-2),28.1/29.5(C-3),43.9/47.7(C-4),45.9/49.6(C-6),25.8/27.0(C-7),27.3/27.7(C-8),39.7/39.9(C-9),173.3(C-11),22.5/22.6(C-12),128.1/128.2(C-1’),132.2(C-2’),116.4(C-3’),159.4(C-4’),116.4(C-5’),132.2(C-6’),134.6/134.9(C-7’),121.0(C-8’),171.9/172.0(C-9’),128.1(C-1”),131.2(C-2”),116.0(C-3”),159.2/159.3(C-4”),116.0(C-5”),131.2(C-6”),137.8(C-7”),121.7/121.8(C-8”),170.5/170.6(C-9”)。

实施例4

本发明实施例提供了daturaspermidine E，其分子式如下：

daturaspermidine E的物理性质和核磁数据如下：

黄色无定型粉末；UV(MeOH)λ_max 203,286,324nm；IR(KBr)ν_max3404,1678cm^–1；HR-ESI-MS:m/z 472.2448[M+H]⁺(cal.472.2442)；¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ_H 3.23(2H,t,J＝6.1Hz,H-2),1.74(2H,m,H-3),2.64(2H,t,J＝6.9Hz,H-4),2.87(2H,m,H-6),1.62(2H,m,H-7),1.62(2H,m,H-8),3.27(2H,t,J＝5.9Hz,H-9),6.64(1H,d,J＝2.2Hz,H-2’),6.68(1H,d,J＝8.0Hz,H-5’),6.54(1H,dd,J＝8.0,2.2Hz,H-6’),2.87(2H,t,J＝7.1Hz,H-7’),2.49(2H,d,J＝7.1Hz,H-8’),7.06(1H,d,J＝2.0Hz,H-2”),6.72(1H,d,J＝8.2Hz,H-5”),6.86(1H,dd,J＝8.2,2.0Hz,H-6”),6.60(1H,d,J＝12.5Hz,H-7”),5.82(1H,d,J＝12.5Hz,H-8”)；¹³C NMR(125MHz,CD₃OD):δ_c 36.5(C-2),27.6(C-3),45.9(C-4),48.4(C-6),24.7(C-7),27.2(C-8),39.4(C-9),133.4(C-1’),116.8(C-2’),144.7(C-3’),146.2(C-4’),116.4(C-5’),120.7(C-6’),31.9(C-7’),38.4(C-8’),176.6(C-9’),128.6(C-1”),117.4(C-2”),145.9(C-3”),147.4(C-4”),116.0(C-5”),123.4(C-6”),138.1(C-7”),121.7(C-8”),170.8(C-9”)。

实施例5

本发明实施例提供了daturaspermidine F，其分子式如下：

daturaspermidine F的物理性质和核磁数据如下：

黄色无定型粉末；UV(MeOH)λ_max 203,287,347nm；IR(KBr)ν_max3426,1573,1443cm^–1；HR-ESI-MS:m/z 310.2122[M+H]⁺(cal.310.2125)；¹H NMR(500MHz,CD₃OD):δ_H 3.05(2H,m,H-2),2.07(2H,m,H-3),3.10(2H,m,H-4),3.00(2H,t,J＝7.7Hz,H-6),1.55(2H,m,H-7),1.62(2H,m,H-8),3.17(2H,t,J＝6.3Hz,H-9),6.65(1H,d,J＝1.9Hz,H-2’),6.70(1H,d,J＝8.0Hz,H-5’),6.55(1H,dd,J＝8.0,1.9Hz,H-6’),2.44(2H,d,J＝7.3Hz,H-7’),2.79(2H,d,J＝7.3Hz,H-8’)；¹³C NMR(125MHz,CD₃OD):δ_c 37.8(C-2),25.4(C-3),45.7(C-4),48.5(C-6),24.3(C-7),27.5(C-8),39.1(C-9),133.6(C-1’),116.8(C-2’),146,1(C-3’),144.5(C-4’),120.8(C-5’),116.4(C-6’),39.2(C-7’),32.3(C-8’),175.7(C-9’)。

实施例6

本发明实施例提供了daturaspermidine G，其分子式如下：

daturaspermidine G的物理性质和核磁数据如下：

黄色无定型粉末；UV(MeOH)λ_max 204,275nm；IR(KBr)ν_max 3404,1678cm^–1；HR-ESI-MS:m/z 334.2109[M+H]⁺(cal.334.2125)；¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ_H 3.05(1H,m,H-2α),2.93(1H,m,H-2β),1.65(1H,m,H-3α),1.55(1H,m,H-3β),3.30(1H,m,H-4α),3.20(1H,m,H-4β),3.30(2H,m,H-6α),3.20(1H,m,H-6β),1.54(1H,m,H-7α),1.42(1H,m,H-7β),1.54(1H,m,H-8α),1.42(1H,m,H-8β),2.83(1H,brs,H-9α),2.70(1H,brs,H-9β),1.81(3H,s,H-12),7.32(1H,d,J＝8.4Hz,H-2’),6.70(1H,m,H-3’),6.71(1H,d,J＝8.5Hz,H-5’),7.22(1H,d,J＝8.4Hz,H-6’),6.45(1H,d,J＝12.6Hz,H-7’),5.93(1H,d,J＝12.6Hz,H-8’)；¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆):δ_c 36.5/36.0(C-2),28.6/27.2(C-3),45.5/42.1(C-4),47.2/43.5(C-6),24.3/23.9(C-7),25.2/24.6(C-8),38.6/38.5(C-9),126.4(C-1’),130.0/129.9(C-2’),115.2(C-3’),157.7(C-4’),115.2(C-5’),130.0/129.9(C-6’),132.2/132.0(C-7’),120.9/120.7(C-8’),168.2(C-9’),169.1(C-11),22.7/22.6(C-12)。

应用例1

本发明应用例公开了一种以daturaspermidine C为原料药的片剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

取daturaspermidine C与羟丙基甲基纤维素、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁混匀后，加入无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，压片。

应用例2

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine D为原料药的胶囊剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

取daturaspermidine D与淀粉、微晶纤维素、焦亚硫酸氢钠混匀后，加入无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，装入胶囊。

应用例3

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine E为原料药的颗粒剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

取daturaspermidine E与淀粉、亚硫酸氢钠混匀后，加入无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，装袋。

应用例4

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine F为原料药的口服液，其组份如下：

具体制备过程如下：

上述组分混匀后，采用口服液常规制备方法，分装即可。

应用例5

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine G分别为原料药的注射剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

上述组分混匀后，采用注射剂常规制备方法，即可得100支。

应用例6

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine C和多奈哌齐为原料药的片剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

取daturaspermidine C、多奈哌齐和羟丙基甲基纤维素、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁混合均匀，加无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，压片。

应用例7

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine D和利斯的明为原料药的胶囊剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

取daturaspermidine D、利斯的明和淀粉、微晶纤维素、焦亚硫酸氢钠混匀后，加入无水乙醇制成软材，过24目筛，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，装入胶囊。

应用例8

本发明应用例公开了一种以化合物daturaspermidine E和石杉碱甲为原料药的注射剂，其组份如下：

具体制备过程如下：

上述组分混匀后，采用注射剂常规制备方法，即可得100支。

为了更好地理解本发明的实质，下面结合药理试验及结果来说明上述亚精胺生物碱类化合物在制药领域中的新应用。

试验例

本试验例公开了上述化合物daturaspermidines C、daturaspermidines D、daturaspermidines E、daturaspermidines F和daturaspermidines G的BACE1抑制活性试验。

(1)实验材料和仪器

HK-293细胞株购自中国科学院细胞典藏库(上海)；

DMEM培养基、PBS缓冲液、胎牛血清(FBS)和胰蛋白酶均购自美国Gibco公司；

CCK8细胞活性检测试剂盒；

DMSO(美国Sigma公司)；

96孔板(美国corning公司)；

BACE1抑制剂(美国礼来公司)；

BACE1检测用试剂盒(美国Cayman公司)；

二氧化碳细胞培养箱(美国Thermo Fisher Scientific公司)；

全波长酶标仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；

荧光多波段读板仪(Envison 2102Multilabel Reader)；

BIOFUGE STRATOS离心机(美国Thermo Fisher Scientific公司)；

IX73倒置电子显微镜(日本Olympus公司)；

移液器(德国Eppendorf公司)；

超净工作台、离心管、吸管等相关耗材。

(2)细胞复苏及培养

取出液氮中标记好的HK-293细胞冻存管，立即投入37℃水浴锅中，尽量于1min内完成快速解冻融化；对冻存管进行酒精消毒后，将管中冻存液转入15mL无菌离心管，并加入相应的培养基，使之混匀，再离心去除上清液；重复上述步骤一次进行洗涤，随后加10mL培养液混匀重悬细胞，再将其转移至10mL培养皿内，并放于37℃、5％CO₂的恒温培养箱中培养。

当细胞密度达到70％-80％时，将其传代；先吸去旧的培养基，加入PBS洗涤2次，在培养皿中加入含EDTA的胰蛋白酶并放置37℃培养箱3min，随后加入培养基终止消化，1000rpm离心5min，吸去消化液后，重新加入含血清的培养基并反复吹打细胞，形成细胞悬液，最后根据细胞数量，将其转移到新的培养皿中，完成细胞传代。

(3)CCK-8法评价细胞活性

将HEK-293细胞以1*10⁴细胞/孔铺板于96孔板，每组6个复孔，铺板后培养24小时，将化合物daturaspermidines C-G溶解后分别稀释至100μM处理细胞后再37℃下处理48h，再加入CCK-8试剂盒10μL,2h后利用酶标仪检测450nm处吸光度值，并计算细胞存活率。

BACE1酶抑制活性评价

按说明书使用BACE1试剂盒进行BACE1酶抑制试验；将不同浓度的化合物/阳性药与BACE1在室温下与反应30min，加入底物后再于室温下反应40min，通过荧光多波段读板仪在335-355nm的激发波长下，测量495-510nm下发射信号的增加完成检测。

结果

通过CCK-8法分别检测化合物daturaspermidines C-G的细胞活性，表明100μM浓度水平下无体外毒性(细胞生存率均大于94％)。

表1.daturaspermidines C-G的BACE1酶抑制活性筛选结果

针对daturaspermidines C-G的体外BACE1酶抑制活性试验结果(表1)表明，化合物daturaspermidines C-G对BACE1具有良好的抑制作用，抑制活性均优于阳性药多奈哌齐，抑制作用的由大到小排列为daturaspermidine C＞daturaspermidine D＞daturaspermidine G＞daturaspermidine E＞daturaspermidine F＞Donepezil，表明本发明所述的亚精胺生物碱类化合物是天然产物中BACE1酶抑制活性较强的分子，因此可以作为防治AD中的药物应用。

综上，本发明所述的亚精胺生物碱类化合物具有优于抗AD一线用药多奈哌齐的抑制活性，可以作为治疗阿尔茨海默症中的药物应用。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。

应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种亚精胺生物碱类化合物，其特征在于，

其是具有如下通式I和II所示的母核结构的化合物及其在药学上可接受的盐或化合物：

其中：

R选自

R₁和R₂分别选自

2.根据权利要求1所述的亚精胺生物碱类化合物，其特征在于，

通式I中，

R为

时，命名为daturaspermidine C，

R为

时，命名为daturaspermidine D，

R为H时，命名为daturaspermidine G；

通式II中，

R₁为

且R₂为

时，命名为daturaspermidine E，

R₁为H且R₂为

时，命名为daturaspermidine F。

3.具有通式I和II的母核结构的亚精胺生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，

包括以下步骤：

其中，步骤S12和步骤S13的顺序可更换。

4.根据权利要求3所述的亚精胺生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，

步骤S10中，

所述提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的至少一种，优选为60-95v％的乙醇水溶液；

和/或，所述提取溶剂的加入质量为洋金花干燥花的质量的10-20倍，优选为15倍；

和/或，所述回流提取的温度、时间和次数分别为65-85℃、1-3h和2-4次。

5.根据权利要求3所述的亚精胺生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，

步骤S11中，

所述有机溶剂的加入量体积为浓缩液的体积的1.5-2倍；

和/或，所述萃取的次数均为2-5次。

6.根据权利要求3所述的亚精胺生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，

步骤S12和步骤S13中，

在硅胶柱层析后，所述梯度洗脱使用的洗脱剂为氯仿-甲醇、石油醚-丙酮、石油醚-乙酸乙酯和环己烷-乙酸乙酯中的一种；

和/或，在反相硅胶柱色谱层析后，所述梯度洗脱使用的洗脱剂为乙醇-水或甲醇-水；

和/或，进行葡聚糖凝胶柱层析时洗脱剂为甲醇或二氯甲烷-甲醇，葡聚糖凝胶为Sephadex LH-20；

和/或，色谱纯化处理中的色谱柱为C4、C8、C6或C18，其中，流动相为甲醇-水或乙腈-水。

7.一种含权利要求1或2所述的亚精胺生物碱类化合物的药物组合物。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，

所述药物组合物包括增效剂和药效学上可接受的载体；

优选地，所述增效剂为以下物质的任一种：

9.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，

所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、冲剂、滴丸或微丸；

和/或，所述药物组合物中亚精胺生物碱类化合物的含量为0.01-95.00wt％；

和/或，所述药物组合物的单元剂型中亚精胺生物碱类化合物的含量为0.01-50.00mg，优选为0.01-10.00mg。

10.权利要求1或2所述的亚精胺生物碱类化合物在制备预防或治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。