CN114426997B - 发酵制备杀虫剂的方法 - Google Patents
发酵制备杀虫剂的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114426997B CN114426997B CN202111478151.4A CN202111478151A CN114426997B CN 114426997 B CN114426997 B CN 114426997B CN 202111478151 A CN202111478151 A CN 202111478151A CN 114426997 B CN114426997 B CN 114426997B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- raw material
- cellulose
- fermentation
- content
- straw
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 title claims description 29
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 89
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims abstract description 79
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims abstract description 63
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 63
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical group [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 27
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 25
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 25
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 25
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 22
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical group [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 18
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 18
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 claims description 18
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 claims description 18
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 claims description 18
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 14
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 14
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 14
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 14
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 241000223208 Curvularia Species 0.000 claims description 11
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 11
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 238000003892 spreading Methods 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 7
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 6
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 claims description 6
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 abstract description 22
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 abstract description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 17
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 6
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 5
- 206010044074 Torticollis Diseases 0.000 description 5
- YDEXUEFDPVHGHE-GGMCWBHBSA-L disodium;(2r)-3-(2-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-[2-methoxy-4-(3-sulfonatopropyl)phenoxy]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].COC1=CC=CC(C[C@H](CS([O-])(=O)=O)OC=2C(=CC(CCCS([O-])(=O)=O)=CC=2)OC)=C1O YDEXUEFDPVHGHE-GGMCWBHBSA-L 0.000 description 5
- 208000018197 inherited torticollis Diseases 0.000 description 5
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 5
- JPMIIZHYYWMHDT-UHFFFAOYSA-N octhilinone Chemical compound CCCCCCCCN1SC=CC1=O JPMIIZHYYWMHDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 241000353522 Earias insulana Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000853 biopesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005089 fruit drop Effects 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 235000021018 plums Nutrition 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明涉及生物杀虫剂技术领域，公开了一种发酵制备杀虫剂的方法，该方法包括：将弯颈霉菌种接种至发酵培养基中进行发酵培养；所述发酵培养基中含有纤维素原料；所述纤维素原料的制备方法包括：将秸秆原料酶解后进行固液分离，收集固体得到所述纤维素原料。该方法能够有效降低杀虫剂的成本，且制备得到的杀虫剂具有较好的杀虫效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物杀虫剂技术领域，具体涉及一种发酵制备杀虫剂的方法。
背景技术
鳞翅目，Lepidoptera，属有翅亚纲下的一目。全世界已知约20万种，中国已知约8000余种。该目为昆虫纲中仅次于鞘翅目的第2个大目。分布范围极广，以热带种类最为丰富。其成虫取食花蜜，对植物的授粉有所助益。但吸果夜蛾科类成虫能刺破果实，吸食果汁，导致落果，成为柑桔、桃、李、梨等果树的重要害虫。幼虫绝大多数植食性，是农林作物、果树、茶叶、蔬菜、花卉等的重要害虫。有的幼虫会钻入植物组织为害，潜食叶肉，钻蛀茎干；有的幼虫会侵蛀芽、花、种子等组织中，有时还能引致虫瘿。生活于土壤中的幼虫咬食植物根部，成为重要的地下害虫。有的幼虫甚至于为害仓储粮食、物品或皮毛的种类，是重要的仓库害虫。
鳞翅目害虫的抗药性比较强，因为特殊的体型构造，使它们对杀虫剂的吸收减弱，一般效果的药根本难以防治。而且喷药过后，若抗性强的害虫活了下来，虫体自身对农药的免疫再次增强，再繁殖所形成的群体就会有更强的抗药性。一般的杀虫剂对鳞翅目害虫的杀虫效果不是很好，且具有较高的成本。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的杀虫剂对鳞翅目的杀虫效果不是很好的问题，提供一种发酵制备杀虫剂的方法，该方法能够有效降低杀虫剂的成本，且制备得到的杀虫剂具有较好的杀虫效果。
为了实现上述目的，本发明提供一种发酵制备杀虫剂的方法，该方法包括：将弯颈霉菌种接种至发酵培养基中进行发酵培养；所述发酵培养基中含有纤维素原料；所述纤维素原料的制备方法包括：将秸秆原料酶解后进行固液分离，收集固体得到所述纤维素原料。
优选地，所述纤维素原料的制备方法还包括：在酶解前，将所述秸秆原料和碱液混合后堆放，然后加水进行蒸煮处理，得到碱化蒸煮秸秆原料，所述碱液中的碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
优选地，所述混合包括：在搅拌条件下，将所述碱液喷洒在所述秸秆原料上。
优选地，所述碱液中碱的浓度为1-2质量％。
优选地，所述堆放时间为12-48h；
优选地，所述蒸煮处理的条件包括：温度为80-95℃，时间为18-48h。
进一步优选地，所述碱化蒸煮秸秆原料中纤维素含量为60-71质量％。
优选地，所述酶解所用酶为纤维素复合酶制剂。
进一步优选地，所述纤维素复合酶制剂含有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶。
优选地，相对于100g的秸秆原料，所述纤维素复合酶制剂的用量为3-7g。
优选地，所述酶解的条件包括：温度为35-45℃，时间为3-5天，pH为5.5-7。
优选地，所述发酵培养基还含有牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖和氯化钠。
进一步优选地，相对于100mL的水，所述纤维素原料的含量为5-15g，牛肉膏的含量为0.5-3g，蛋白胨的含量为0.5-3g，葡萄糖的含量为0.5-3g，氯化钠的含量为0.1-1g。
优选地，所述发酵培养的条件包括：温度为20-35℃，时间为3-5天，压强为0.02-0.06MPa。
优选地，所述发酵培养在通风的条件下进行，通风量为1-2vvm。
优选地，所述方法还包括：将所述发酵培养得到的产物浓缩至原体积的1/6-1/2。
优选地，所述方法还包括：将所述发酵得到的产物与展着剂、防腐剂混合。
进一步优选地，所述展着剂选自吐温-80、木素磺酸钠和有机硅中的至少一种，优选为吐温-80。
更优选地，相对于100mL的浓缩液，所述展着剂的用量为1-5g。
优选地，所述防腐剂选自山梨酸钾、苯甲酸甲酯、凯松中的至少一种，优选为山梨酸钾。
更优选地，相对于100mL的浓缩液，所述防腐剂的含量为0.02-0.3g。
通过上述技术方案，本发明的有益效果为：
(1)本发明的制备方法中以微生物发酵的方式制备杀虫剂，相比于化学方法制备更为安全温和。
(2)本发明通过将秸秆原料的酶解产物加入到发酵培养基中，并以中国弯颈霉作为发酵菌种，有效提高发酵过程中环状缩羧肽的产量，从而有效提高杀虫剂的杀虫效果，有效杀灭鳞翅目等农作物害虫。通过发酵技术将农业废弃物秸秆制备成附加值较高的生物杀虫剂，是一条减轻农业废弃物对环境污染、变废为宝的有效途径。
(3)将廉价的秸秆用于制备杀虫剂，能够有效降低杀虫剂制备的成本。
(4)本发明中采用的发酵原料为秸秆原料，发酵产物为环状缩羧肽，具有选择性强，对人畜无害，环境友好等优点。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
根据本发明，提供一种发酵制备杀虫剂的方法，该方法包括：将弯颈霉菌种接种至发酵培养基中进行发酵培养；所述发酵培养基中含有纤维素原料；所述纤维素原料的制备方法包括：将秸秆原料酶解后进行固液分离，收集固体得到所述纤维素原料。
根据本发明，所述弯颈霉可以是任意一种能够产生环状缩羧肽的弯颈霉，如中国弯颈霉。所述秸秆原料可以是任意一种禾本科农作物成熟脱粒后剩余的茎叶部分，可以是稻草的秸秆、小麦的秸秆或者玉米的秸秆。在纤维素原料的制备方法中，固液分离可以通过任意一种方式实现，如离心分离、压滤、抽滤等。
发明人在研究过程中发现，在弯颈霉的发酵培养基中加入如上所述方法制备的得到的纤维素原料，能够有效提高发酵过程中环状缩羧肽的产量，从而提高杀虫剂的杀虫效果。而且，发酵制备的方法相比与其它方法更为安全温和。采用秸秆作酶解原料，并将该酶解产物用于弯颈霉的发酵培养，能够降低杀虫剂的成本。
为了能够进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果，优选地，所述纤维素原料的制备方法还包括：在酶解前，将所述秸秆原料和碱液混合后堆放，然后加水进行蒸煮处理，得到碱化蒸煮秸秆原料，所述碱液中的碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
具体地，所述碱液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或氢氧化钠与氢氧化钾的混合溶液。
优选地，所述秸秆原料的长度为2-3cm，能够使得其与碱液的反应更为完全，从而使其酶解更为充分。
为了能够进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果，优选地，所述混合包括：在搅拌条件下，将所述碱液喷洒在所述秸秆原料上。
优选地，所述碱液中碱的浓度为1-2质量％。
优选地，所述堆放时间为12-48h，能够使得碱液和秸秆原料充分接触，进而提高后期的酶解效果。
优选地，所述蒸煮处理的条件包括：温度为80-95℃，时间为18-48h。在该条件下，能够使得秸秆原料和碱液充分反应，进而使得后期酶解更为充分。
根据本发明，优选地，相对于1kg的秸秆原料，碱的使用量为5-10g。蒸煮过程中的加水量没有特别的限定，只要能够使得秸秆原料能够完全浸没在水中。搅拌的条件没有特别的限定，只要能够使秸秆原料和碱液完全混合均匀即可。
优选地，所述纤维素原料的制备方法还包括：对所述碱化蒸煮秸秆原料进行破碎处理。经破碎处理后的碱化蒸煮秸秆酶解更为充分，能够进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果。从进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果来考虑，进一步优选地，经破碎处理后的碱化蒸煮秸秆的粒径小于或者等于250mm。
为了能够进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果，优选地，所述碱化蒸煮秸秆原料中纤维素含量为60-71质量％。该纤维素含量通过酸碱醇醚法测试得到。
具体地，酸碱醇醚法包括：在2-3g待测样品中加入200mL在回流装置煮沸的1.25质量％硫酸溶液，置于电炉上1min内煮沸，保持微沸30min，冷却、沉降、采用玻璃棉抽滤，吸去上层清液，用沸水洗涤沉淀至中性。将玻璃棉并入沉淀，加入200mL在回流装置中煮沸的1.25质量％氢氧化钠溶液，置于电炉上1min内煮沸，保持微沸30min，冷却、沉降、古式坩埚抽滤，用沸水反复抽洗至中性。用50-60℃的乙醇20-25mL，分3-4次洗涤，再用乙醚洗涤抽净，于105℃烘箱中烘至恒重，再在600℃的条件下灼烧30min，取出、冷却、称重，再灼烧至恒重，产物重量与待测样品的原始重量之比就是纤维素含量。
所述酶解所用酶可以是任意一种能够将秸秆酶解成纤维素的酶，如纤维素酶、半纤维素酶等。为了使得酶解产物更适合环状缩羧肽的发酵，优选地，所述酶解所用酶为纤维素复合酶制剂。从进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果来说，优选地，所述纤维素复合酶制剂含有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶。
优选地，相对于100g的秸秆原料，所述纤维素复合酶制剂的用量为3-7g。
优选地，所述酶解的条件包括：温度为35-45℃，时间为3-5天，pH为5.5-7。该条件下具有更好的酶解效果，使得酶解产物能够更有利于环状缩羧肽的发酵。
所述发酵培养基中还含有氮源、碳源和钠盐，所述氮源可以是任意能够给环状缩羧肽的发酵提供氮的物质，如有机氮、硝酸盐、铵盐；所述碳源可以是任意能够给环状缩羧肽的发酵提供碳的物质，如糖类、油脂等。为了能够给进一步提高环状缩羧肽的产量，所述发酵培养基还含有牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖和氯化钠。从进一步提高环状缩羧肽的产量来考虑，相对于100mL的水，所述纤维素原料的含量为5-15g，牛肉膏的含量为0.5-3g，蛋白胨的含量为0.5-3g，葡萄糖的含量为0.5-3g，氯化钠的含量为0.1-1g。
优选地，所述发酵培养基的制备方法包括：将上述原料和水混合，在发酵罐中灭菌30-60min，然后冷却至室温备用。进一步优选地，所述灭菌的条件包括：压力为10-20磅，温度为110-135℃。
优选地，所述发酵培养的条件包括：温度为20-35℃，时间为3-5天，压强为0.02-0.06MPa。该发酵条件能够进一步提高环状缩羧肽的产量。
为了能够进一步提高环状缩羧肽的产量，优选地，所述发酵培养在通风的条件下进行，通风量为1-2vvm。
优选地，所述弯颈霉菌种的接种量为1-5体积％。在以下实施例记载中，接种量为5体积％。
为了能够进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果，优选地，所述方法还包括：将所述发酵培养得到的产物浓缩至原体积的1/6-1/2。
优选地，浓缩的方式为旋转蒸发仪浓缩。
为了能够进一步提高制得的杀虫剂的杀虫效果，优选地，所述方法还包括：将所述发酵得到的产物与展着剂、防腐剂混合。从进一步提高杀虫剂的杀虫效果来考虑，所述展着剂选自吐温-80、木素磺酸钠和有机硅中的至少一种，优选为吐温-80。更优选地，相对于100mL的浓缩液，所述展着剂的用量为1-5g。所述防腐剂选自山梨酸钾、苯甲酸甲酯、凯松中的至少一种，优选为山梨酸钾。更优选地，相对于100mL的浓缩液，所述防腐剂的含量为0.02-0.3g。
以中国弯颈霉为例，弯颈霉菌种的种子培养包括：将中国弯颈霉在PDA固体培养基上生长8-12天后，用水将菌丝体从平板上洗脱下来，得到弯颈霉菌种。
作为本发明的一个具体实施方式，弯颈霉菌种的种子培养包括：将中国弯颈霉在PDA固体培养基上生长10天后，用水将菌丝体从平板上洗脱下来，得到弯颈霉菌种。吸取1mL混合均匀后的菌丝体溶液冷冻干燥后称取干重，菌丝体含量为0.2g/mL。
根据本发明一种特别优选的实施方式，提供一种发酵制备杀虫剂的方法，包括如下步骤：
(1)将秸秆原料切成2-3cm的段状，在搅拌条件下，将1-2质量％碱液喷洒在上述段状秸秆原料表面(所述碱和所述秸秆原料的质量比为5-10:1000)，使得碱液均匀喷洒在段状秸秆原料表面，堆放12-48h后，加水在80-95℃的温度下蒸煮18-48h，得到碱化蒸煮秸秆原料，经酸碱醇醚法检测得到，所述碱化蒸煮秸秆原料中纤维素含量为60-71质量％；
(2)对所述碱化蒸煮秸秆原料进行破碎处理，使得其粒径小于或者等于250mm；
(3)将破碎后的碱化蒸煮秸秆和纤维素复合酶制剂(纤维素复合酶制剂和碱化蒸煮秸秆的质量比为3-7：100)混合，按质量比加入5-7倍的水，在pH为5.5-7、温度为35-45℃的条件下3-5天，固液分离后收集固体得到纤维素原料；
所述纤维素复合酶制剂含有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶；
(4)将纤维素原料、牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和水混合，在发酵罐中灭菌30-60min(灭菌压力为10-20磅，灭菌温度为110-135℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
相对于100mL的水，所述纤维素原料的含量为5-15g，牛肉膏的含量为0.5-3g，蛋白胨的含量为0.5-3g，葡萄糖的含量为0.5-3g，氯化钠的含量为0.1-1g；
(5)在通风量为1-2vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(温度为20-35℃，时间为3-5天，压强为0.02-0.06MPa)；
(6)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6-1/2，并与展着剂、防腐剂混合，得到所述杀虫剂；
其中，所述展着剂选自吐温-80、木素磺酸钠和有机硅中的至少一种，相对于100mL的浓缩液，所述展着剂的用量为1-5g；所述防腐剂选自山梨酸钾、苯甲酸甲酯、凯松中的至少一种，相对于100mL的浓缩液，所述防腐剂的含量为0.02-0.3g。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，中国弯颈霉保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNo.13374，保藏日期为2016年12月21日；纤维素复合酶制剂购于湖北博元生物科技有限公司，含有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶。对比例1中的纤维素原料购于山东五小征生态农业科技有限公司。菌体中环状缩羧肽的含量通过试剂盒测定，该试剂盒购买于南京嘉凯科技有限公司。破碎采用的是山东丰力重工有限公司的超微粉碎机，型号为FC100，该超微粉碎机工作时的功率为145KW。
实施例1
(1)将秸秆原料切成2cm的段状，在搅拌条件下，将250mL的1质量％氢氧化钠溶液喷洒在500g段状秸秆原料表面，使得氢氧化钠溶液均匀喷洒在段状秸秆原料表面，堆放24h后，加水在85℃的温度下蒸煮24h，得到碱化蒸煮秸秆原料，经酸碱醇醚法检测得到，所述碱化蒸煮秸秆原料中纤维素含量为65质量％；
(2)对所述碱化蒸煮稻草秸秆进行破碎处理，使得其粒径小于或者等于100mm；
(3)将破碎后的碱化蒸煮秸秆和纤维素复合酶制剂(纤维素复合酶制剂和碱化蒸煮秸秆的质量比为5:100)混合，按质量比加入6倍的水，在pH为6、温度为40℃的条件下4天，固液分离后收集固体得到纤维素原料；
(4)将10g纤维素原料、1g牛肉膏、1g蛋白胨、1g葡萄糖、0.5g氯化钠和100mL水混合，在发酵罐中灭菌45min(灭菌压力为15磅，灭菌温度为121℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
(5)在通风量为1.5vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(接种量5体积％，温度为30℃，时间为4天，压强为0.04MPa)；
(6)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/4，并与吐温-80、山梨酸钾混合，得到杀虫剂，在杀虫剂中，吐温-80的浓度为30g/L，山梨酸钾的浓度为1.5g/L。
实施例2
(1)将秸秆原料切成2cm的段状，在搅拌条件下，将250mL的1质量％氢氧化钠溶液喷洒在500g段状秸秆原料表面，使得氢氧化钠溶液均匀喷洒在段状秸秆原料表面，堆放12h后，加水在80℃的温度下蒸煮48h，得到碱化蒸煮秸秆原料，经酸碱醇醚法检测得到，所述碱化蒸煮秸秆原料中纤维素含量为60质量％；
(2)对所述碱化蒸煮稻草秸秆进行破碎处理，使得其粒径小于或者等于200mm；
(3)将破碎后的碱化蒸煮秸秆和纤维素复合酶制剂(纤维素复合酶制剂和碱化蒸煮秸秆的质量比为7:100)混合，按质量比加入5倍的水，在pH为5.5、温度为45℃的条件下3天，固液分离后收集固体得到纤维素原料；
(4)将5g纤维素原料、3g牛肉膏、0.5g蛋白胨、0.5g葡萄糖、0.1g氯化钠和100mL水混合，在发酵罐中灭菌30min(灭菌压力为20磅，灭菌温度为135℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
(5)在通风量为2vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(温度为35℃，时间为3天，压强为0.06MPa)；
(6)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6，并与吐温-80、山梨酸钾混合，得到杀虫剂，在杀虫剂中，吐温-80的浓度为50g/L，山梨酸钾的浓度为0.2g/L。
实施例3
(1)将秸秆原料切成2cm的段状，在搅拌条件下，将250mL的2质量％氢氧化钾溶液喷洒在500g段状秸秆原料表面，使得氢氧化钾溶液均匀喷洒在段状秸秆原料表面，堆放48h后，加水在95℃的温度下蒸煮12h，得到碱化蒸煮秸秆原料，经酸碱醇醚法检测得到，所述碱化蒸煮秸秆原料中纤维素含量为71质量％；
(2)对所述碱化蒸煮稻草秸秆进行破碎处理，使得其粒径小于或者等于250mm；
(3)将破碎后的碱化蒸煮秸秆和纤维素复合酶制剂(纤维素复合酶制剂和碱化蒸煮秸秆的质量比为3:100)混合，按质量比加入7倍的水，在pH为7、温度为35℃的条件下5天，固液分离后收集固体得到纤维素原料；
(4)将15g纤维素原料、0.5g牛肉膏、3g蛋白胨、3g葡萄糖、1g氯化钠和100mL水混合，在发酵罐中灭菌60min(灭菌压力为10磅，灭菌温度为110℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
(5)在通风量为1vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(温度为20℃，时间为5天，压强为0.02MPa)；
(6)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/2，并与吐温-80、山梨酸钾混合，得到杀虫剂，在杀虫剂中，吐温-80的浓度为10g/L，山梨酸钾的浓度为3g/L。
实施例4
按照实施例2的方法制备杀虫剂，不同的是，步骤(6)中，将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6，并与木素磺酸钠、苯甲酸甲酯混合，得到杀虫剂，在杀虫剂中，木素磺酸钠的浓度为50g/L，苯甲酸甲酯的浓度为0.2g/L。
实施例5
按照实施例2的方法制备杀虫剂，不同的是，步骤(6)中，将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6，并与有机硅、凯松混合，得到杀虫剂，在杀虫剂中，有机硅的浓度为50g/L，凯松的浓度为0.2g/L。
实施例6
(1)对稻草秸秆进行破碎处理，使得其粒径小于或者等于200mm；
(2)将破碎后的秸秆和纤维素复合酶制剂混合(纤维素复合酶制剂和秸秆的质量比为7:100)，在pH为5.5、温度为45℃的条件下3天，固液分离后收集固体得到纤维素原料；
(3)将5g纤维素原料、3g牛肉膏、0.5g蛋白胨、0.5g葡萄糖、0.1g氯化钠和100mL水混合，在发酵罐中灭菌30min(灭菌压力为20磅，灭菌温度为135℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
(4)在通风量为2vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(温度为35℃，时间为3天，压强为0.06MPa)；
(5)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6，并与吐温-80、山梨酸钾混合，得到杀虫剂，在杀虫剂中，吐温-80的浓度为50g/L，山梨酸钾的浓度为0.2g/L。
实施例7
按照实施例2的方法制备杀虫剂，不同的是，在步骤(3)中采用的纤维素酶，纤维素酶和碱化蒸煮秸秆的质量比为7:100。
对比例1
(1)将5g纤维素原料、3g牛肉膏、0.5g蛋白胨、0.5g葡萄糖、0.1g氯化钠和100mL水混合，在发酵罐中灭菌30min(灭菌压力为20磅，灭菌温度为135℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
(2)在通风量为2vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(温度为35℃，时间为3天，压强为0.06MPa)；
(3)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6，并与吐温-80、山梨酸钾混合，其中，得到杀虫剂，杀虫剂中，吐温-80的浓度为50g/L，山梨酸钾的浓度为0.2g/L。
对比例2
(1)将3g牛肉膏、0.5g蛋白胨、0.5g葡萄糖、0.1g氯化钠和100mL水混合，在发酵罐中灭菌30min(灭菌压力为20磅，灭菌温度为135℃)，然后冷却至室温，得到发酵培养基；
(2)在通风量为2vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至上述发酵培养基中进行发酵培养(温度为35℃，时间为3天，压强为0.06MPa)；
(3)将上述培养得到的产物浓缩至原体积的1/6，并与吐温-80、山梨酸钾混合，其中，得到杀虫剂，杀虫剂中，吐温-80的浓度为50g/L，山梨酸钾的浓度为0.2g/L。
测试例
对上述实施例和对比例得到的菌体或者发酵液进行环状缩羧肽测量，取鳞翅目幼虫(幼虫生长状况良好，无任何处理)，每组50头，正常喂食。每天喷洒生物杀虫剂，15mL/d，喷洒一周，观察幼虫存活个数，得到数据如表1所示。
表1
| 编号 | 菌体中环状缩羧肽的含量(mg/g) | 鳞翅目幼虫一周后存活个数(个) |
| 实施例1 | 300 | 5 |
| 实施例2 | 280 | 7 |
| 实施例3 | 267 | 9 |
| 实施例4 | 259 | 21 |
| 实施例5 | 260 | 16 |
| 实施例6 | 247 | 28 |
| 实施例7 | 230 | 32 |
| 对比例1 | 140 | 46 |
| 对比例2 | 80 | 49 |
通过表1可以看出，与对比例1和对比例2相比，实施例中制得的菌体中环状缩羧肽浓度得到显著提高，且该杀虫剂使用一周后，鳞翅目幼虫的存货数量显著降低，说明实施例所示方法制得的杀虫剂具有较好的杀虫效果。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种发酵制备杀虫剂的方法，其特征在于，该方法包括：在搅拌条件下，将碱的浓度为1-2质量%的碱液喷洒在秸秆原料上后堆放12-48h，然后加水在80-95℃的温度下蒸煮处理18-48h，得到纤维素含量为60-71质量%的碱化蒸煮秸秆原料；将碱化蒸煮秸秆原料和纤维素复合酶制剂混合在温度为35-45℃、pH为5.5-7的条件下酶解3-5天后进行固液分离，收集固体得到纤维素原料；在温度为20-35℃、压强为0.02-0.06MPa、通风量为1-2vvm的条件下，将弯颈霉菌种接种至含有纤维素原料的发酵培养基中发酵培养3-5天，将发酵得到的产物与展着剂、防腐剂混合；
碱液中的碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾；纤维素复合酶制剂含有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶；相对于100g的秸秆原料，纤维素复合酶制剂的用量为3-7g；发酵培养基还含有牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖和氯化钠；相对于100mL的水，纤维素原料的含量为5-15g，牛肉膏的含量为0.5-3g，蛋白胨的含量为0.5-3g，葡萄糖的含量为0.5-3g，氯化钠的含量为0.1-1g；展着剂为吐温-80，防腐剂为山梨酸钾。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：将所述发酵培养得到的产物浓缩至原体积的1/6-1/2。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，相对于100mL的浓缩液，所述展着剂的用量为1-5g；和/或
相对于100mL的浓缩液，所述防腐剂的含量为0.02-0.3g。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111478151.4A CN114426997B (zh) | 2021-12-06 | 2021-12-06 | 发酵制备杀虫剂的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111478151.4A CN114426997B (zh) | 2021-12-06 | 2021-12-06 | 发酵制备杀虫剂的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114426997A CN114426997A (zh) | 2022-05-03 |
| CN114426997B true CN114426997B (zh) | 2024-04-12 |
Family
ID=81310720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111478151.4A Active CN114426997B (zh) | 2021-12-06 | 2021-12-06 | 发酵制备杀虫剂的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114426997B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1106303A (en) * | 1975-11-04 | 1981-08-04 | Maz Kuhn | Cyclosporin c from tolypocladium or cylindrocarbon |
| BR9601017A (pt) * | 1996-03-14 | 1997-12-30 | Nat Res Dev | Processo para a preparação de ciclosporina A e respectiva ciclosporina A |
| CN1594587A (zh) * | 2004-07-05 | 2005-03-16 | 南京大学 | 一种真菌胞外多糖复合物的制备及其应用 |
| CN103459605A (zh) * | 2011-01-31 | 2013-12-18 | 诺维信北美公司 | 用于酶法精制经预处理的纤维素材料以供糖化的工艺 |
| CN109207489A (zh) * | 2018-10-29 | 2019-01-15 | 重庆太极医药研究院有限公司 | 一种膨大弯颈孢菌株及其应用 |
| WO2020126948A1 (en) * | 2018-12-16 | 2020-06-25 | Sandoz Gmbh | Adjuvant composition and uses thereof |
| CN116064688A (zh) * | 2022-09-20 | 2023-05-05 | 浙江工业大学 | 膨大弯颈霉zjph2105在生物催化制备手性芳香醇中的应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112015013659A2 (pt) * | 2012-12-14 | 2017-07-11 | Bp Corp North America Inc | processo para a conversão de materiais de estoque de alimentação de celulose |
| CA3032878A1 (en) * | 2016-08-05 | 2018-02-08 | Kuehnle Agrosystems, Inc. | Producing and altering microbial fermentation products using non-commonly used lignocellulosic hydrolysates |
| US10945443B2 (en) * | 2017-09-29 | 2021-03-16 | Valent Biosciences Llc | Tolypocladium album strain |
-
2021
- 2021-12-06 CN CN202111478151.4A patent/CN114426997B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1106303A (en) * | 1975-11-04 | 1981-08-04 | Maz Kuhn | Cyclosporin c from tolypocladium or cylindrocarbon |
| BR9601017A (pt) * | 1996-03-14 | 1997-12-30 | Nat Res Dev | Processo para a preparação de ciclosporina A e respectiva ciclosporina A |
| CN1594587A (zh) * | 2004-07-05 | 2005-03-16 | 南京大学 | 一种真菌胞外多糖复合物的制备及其应用 |
| CN103459605A (zh) * | 2011-01-31 | 2013-12-18 | 诺维信北美公司 | 用于酶法精制经预处理的纤维素材料以供糖化的工艺 |
| CN109207489A (zh) * | 2018-10-29 | 2019-01-15 | 重庆太极医药研究院有限公司 | 一种膨大弯颈孢菌株及其应用 |
| WO2020126948A1 (en) * | 2018-12-16 | 2020-06-25 | Sandoz Gmbh | Adjuvant composition and uses thereof |
| CN116064688A (zh) * | 2022-09-20 | 2023-05-05 | 浙江工业大学 | 膨大弯颈霉zjph2105在生物催化制备手性芳香醇中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 线虫草科弯颈霉属研究进展;汪家春;张阵阵;李兆兰;王玥;;菌物研究;20200315(第01期);58-66 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114426997A (zh) | 2022-05-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101010762B1 (ko) | 연작 오이와 수박의 시들음병에 대한 생물학적 방제 균주 및 그것의 미생물 유기질 비료 | |
| CN101874445B (zh) | 有机韭菜的栽培方法 | |
| CN103396954B (zh) | 一种防控水稻纹枯病的生物防治菌株、生物有机肥及其制备方法 | |
| KR101431787B1 (ko) | 유기농 인삼 및 그의 재배방법 | |
| CN106282067B (zh) | 多功能农用复合微生物菌剂及微生态制剂与应用 | |
| CN102021122B (zh) | 一种高效杀虫真菌及其用途 | |
| CN105948831B (zh) | 一种利用啤酒糟生产生防肥料的方法 | |
| KR20190065916A (ko) | 동충하초 재배용 배지조성물 및 동충하초의 재배방법 | |
| CN104130068A (zh) | 一种复合型多功能生物叶面肥 | |
| CN114085793B (zh) | 一种防治植物真菌病害的皮氏类芽孢杆菌菌剂的生产方法及其应用 | |
| CN110042064B (zh) | 一种香菇菌株及其应用和源于该菌株的杀虫剂及其制备方法 | |
| CN111320507A (zh) | 一种功能性液体肥料及其制备方法、棉花施肥方法 | |
| CN109956769A (zh) | 一种秸秆袋式就地堆肥腐熟方法及装置 | |
| CN103588592B (zh) | 一种由印楝叶制备氨基酸水溶肥料的方法 | |
| CN105474930A (zh) | 一种有机大葱的栽培方法 | |
| CN114426997B (zh) | 发酵制备杀虫剂的方法 | |
| CN104177168B (zh) | 一种利用抗病毒颗粒药渣制备的有机肥及其制备方法 | |
| CN114258750B (zh) | 一种草莓连作障碍土壤的改良方法 | |
| CN108690818A (zh) | 一种微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN111592405B (zh) | 一种抗小麦干热风和白粉病的有机水溶肥及其制备与应用 | |
| CN108184906A (zh) | 一种果蝇诱杀剂的制备方法 | |
| CN113831187A (zh) | 一种海洋生物有机肥及其制备方法 | |
| CN107182693A (zh) | 一种葡萄园中套种红豆杉的方法 | |
| CN115161214A (zh) | 一种防控地下害虫的生物有机肥、制备方法和应用 | |
| CN107176865A (zh) | 海藻‑蚯蚓水解液高效生物活性增甜液肥制备及使用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |