CN114423423B - 一种用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

一种式1化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防乙型病毒性肝炎用药物中的应用。所述式1化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于降低HBsAg和/或HBeAg水平的药物中的用途。用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物，其包含式1的化合物或其药学上可接受的盐、任选的一种或多种另外的治疗剂或预防剂，以及药学上可接受的载体。

Description

一种用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物及其应用

本申请要求享有申请人于2020年12月28日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202011575396.4，发明名称为“一种用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物及其应用”的在先申请的优先权。该在先申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。

技术领域

本发明涉及抗病毒药物的技术领域，具体地，涉及一种用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物及其应用。

背景技术

人乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围内的重要公共健康问题。急性乙肝病毒感染后，仍有8％左右发展为慢性乙型肝炎感染，持续性HBV感染将导致肝硬化，甚至肝癌。我国是乙型肝炎大国，乙肝病毒携带者接近1.3亿人，约占总人口的9％。尽管随着乙肝疫苗的大范围普及，新乙肝感染率得到有效控制，但乙肝病毒携带者人口基数大，防治乙肝成为我国公共健康问题的重中之重。乙肝传播途径主要通过垂直传播与水平传播。垂直传播是指母婴传播；水平传播主要通过血液传播。

乙型肝炎的治疗也是一个长期的过程，治疗目标就是最大限度地抑制或消除HBV，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维素化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、肝细胞性肝癌及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。

目前市场上有很多乙型肝炎治疗药物，主要通过使用干扰素或者核苷类似物进行抗病毒治疗。对于干扰素而言，重组DNA白细胞干扰素(IFN-α)可抑制HBV的复制。但是干扰素在治疗乙肝时，往往伴随着较强的不良反应，包括骨髓抑制，影响甲状腺功能和抑郁等。

核苷类似物主要通过抑制HBV复制过程中的逆转录酶活性从而抑制HBV产生，临床可用药物包括以下类别：拉米夫定、泛昔洛韦、如阿昔洛韦、阿德福韦、恩替卡韦、替诺福韦、膦甲酸钠等，这些药物均有一定抑制HBV效果。

这些逆转录酶抑制剂虽然可以有效降低HBV DNA水平，使患者控制乙肝病毒水平，但是由于其作用靶点为RNA逆转录为DNA的过程，对于HBV cccDNA和HBsAg的清除无直接作用。因此核苷类似物单药治疗发生HBsAg血清学转化的概率极低，并不能真正治愈乙肝，患者需要长期甚至终身服用药物。

现有用于肝炎及其关联病症、病症的临床治疗涉及多种类型的药物，例如具有保肝作用的药物，减缓病情严重的抗炎慢性治疗药物等，而抗HBV、降HBsAg和/或HBeAg的药物是治疗肝炎的特定种类药物，能够直接针对引发肝炎的病毒进行抑制和清除。

在长期服用已有核苷类似物药物以及其他慢性治疗药物的条件下，所产生的耐药性、巨额的医药费用、药物严重的副作用等问题对于乙肝病人来说是沉重的负担。关键是，目前仍然没有一种药物能够完全清除病毒达到功能性治愈乙肝。因此，本领域迫切需要提供一种能够直接降低乙型肝炎病毒(HBV)载量、HBsAg和/或HBeAg水平的抗HBV药物。

发明内容

本发明通过人工智能系统，基于多个靶点和大数据分析，筛选出了具有乙肝治疗效果的式1的化合物，进一步通过生物学实验的验证，获得了具有清除HBsAg和HBeAg效果的式1的化合物，有望功能性治愈乙肝，清除乙肝病毒。

在一个实施方式中，本发明提供了式1的化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防病毒性肝炎的药物中的用途，

式1

优选地，所述药学上可接受的盐选自以下的至少一种：醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、钠盐、钙盐、钾盐、铵盐、四乙铵盐、甲铵盐、二甲铵盐和乙醇胺盐。

在一个优选的实施方式中，所述式1的化合物的衍生物包括其氘代产物、氨基被保护的化合物，以及卤素取代的产物。

在一个优选的实施方式中，其中所述衍生物包括选自化合物1-2至化合物1-4：

其中，在化合物1-3中，“AA”是指氨基酸残基，即20种天然氨基酸去掉羧基后剩余的部分。

在一个优选的实施方式中，其中所述病毒性肝炎为乙型肝炎或丁型肝炎。

在一个优选的实施方式中，其中所述药物能够降低乙型肝炎病毒(HBV)载量、HBsAg和/或HBeAg水平。

在一个优选的实施方式中，其中所述药物能够降低乙型肝炎病毒(HBV)载量；在一个优选的实施方式中，其中所述药物能够降低HBsAg和/或HBeAg水平；在一个优选的实施方式，其中所述药物能够降低HBsAg水平；在一个优选的实施方式中，其中所述药物能够降低HBeAg水平；

在一个优选的实施方式中，其中所述药物还包含一种或多种另外的治疗剂或预防剂，优选地，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素、PEG化的干扰素、硝唑尼特或其类似物、式A所示的化合物或者核苷类似物中的至少一种，

式A

优选所述核苷类似物选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺。在一个优选的实施方式中，其中所述药物经配制通过选自以下的途径施用：口服、直肠、经鼻、经肺、局部、口腔和舌下、阴道、肠胃外、皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外，优选口服施用，

更优选为片剂或胶囊的形式。本发明还提供了用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物，其包含治疗有效量的式1的化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐以及任选的一种或多种另外的治疗剂或预防剂，以及药学上可接受的载体，优选地，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素、PEG化的干扰素、硝唑尼特或其类似物、式A所示的化合物或者核苷类似物中的至少一种，所述衍生物选自化合物1-2至化合物1-4：

其中，在化合物1-3中，“AA”是指氨基酸残基，即20种天然氨基酸去掉羧基后剩余的部分。

本发明的技术方案具有以下有益效果：

1、恩替卡韦为已知核苷类似物抗HBV药物，但其仅仅能降低HBV DNA，而且停药会复发反弹，发明人意外的发现，式1的化合物(塞来昔布)或其药学上可接受的盐能够同时有效降低乙型肝炎病毒(HBV)载量、HBsAg和/或HBeAg水平，有望成为更有效的抗HBV药物，清除乙肝病毒，治愈乙肝，避免终身服药的痛苦。

2.HBeAg阴性慢性乙肝的患者在HBV患者中占据一定数量，持续有效降低HBeAg水平，尤其是在临床应用能够同时实现HBsAg持续降低指标的药物能够更有效的治愈此类患者。

3、作为已上市的药物，式1的化合物塞来昔布或其药学上可接受的盐具有优异的临床安全性和药代动力学性质，具有较好的成药性。

4、式1的化合物或其药学上可接受的盐能够任选地与一种或多种另外的治疗剂或预防剂进行组合，从而为后续的组合给药设计提供了广阔的思路，并具有协同增效的可能性。

附图说明

图1为本发明实施例化合物对HepG2-NTCP细胞的HBV DNA的抑制结果；

图2为本发明实施例化合物对HepG2-NTCP细胞的HBsAg的抑制结果；

图3为本发明实施例化合物对HepG2-NTCP细胞的HBeAg的抑制结果；

图4为AAV-HBV小鼠血浆中HBV DNA含量变化值的示意图；

图5为AAV-HBV小鼠血浆中HBsAg含量变化值的示意图；

图6重复细胞实验验证本发明实施例化合物对HepG2-NTCP细胞的HBV DNA,HBsAg和HBeAg的抑制结果；

图7为本发明实施例化合物对HepG2-NTCP细胞的细胞毒性测试结果。

注：图示中所出现的“HD042”代表塞来昔布(式1化合物)。

具体实施方式

在一个方面中，本发明提供了式1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防病毒性肝炎的药物中的用途，

式1

优选地，所述药学上可接受的盐选自以下的至少一种：醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、钠盐、钙盐、钾盐、铵盐、四乙铵盐、甲铵盐、二甲铵盐和乙醇胺盐。

在一个优选的实施方式中，所述式1的化合物的衍生物包括其氘代产物、氨基被保护的化合物，以及卤素取代的产物。

在一个优选的实施方式中，其中所述衍生物包括选自化合物1-2、化合物1-3和化合物1-4：

其中，在化合物1-3中，“AA”是指氨基酸残基，即20种天然氨基酸去掉羧基后剩余的部分，例如丙氨酸、甘氨酸等。

在一个优选的实施方式中，其中所述病毒性肝炎为乙型肝炎或丁型肝炎。

在一个优选的实施方式中，其中所述药物能够降低乙型肝炎病毒(HBV)载量、HBsAg和/或HBeAg水平。在一个优选的实施方式中，其中所述药物还包含一种或多种另外的治疗剂或预防剂，优选地，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素、PEG化的干扰素、硝唑尼特或其类似物、式A所示的化合物或者核苷类似物中的至少一种，

式A

优选所述核苷类似物选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺。

在一个优选的实施方式中，其中所述药物经配制通过选自以下的途径施用：口服、直肠、经鼻、经肺、局部、口腔和舌下、阴道、肠胃外、皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外，优选口服施用，更优选为片剂或胶囊的形式。

本发明还提供了用于治疗或预防病毒性肝炎的药物组合物，其包含治疗有效量的式1的化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐以及任选的一种或多种另外的治疗剂或预防剂，以及药学上可接受的载体，优选地，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素、PEG化的干扰素、硝唑尼特或其类似物、式A所示的化合物或者核苷类似物中的至少一种，所述衍生物选自化合物1-2、化合物1-3、化合物1-4：

其中，在化合物1-3中，“AA”是指氨基酸残基，即20种天然氨基酸去掉羧基后剩余的部分。

在另一个优选的实施方式中，所述化合物被氘取代或同位素标记。氘取代的化合物能够复制原化合物的活性的同时，提高该化合物的半衰期。

在一个优选实施方式中，所述病毒性肝炎为乙型肝炎。在一个优选实施方式中，所述药物能够降低乙型肝炎病毒(HBV)载量、HBsAg和/或HBeAg水平。式1的化合物为已知药物塞来昔布，塞来昔布为用于缓解骨关节炎的症状和体征、缓解成人类风湿关节炎的症状和体征、治疗成人急性疼痛的药物。目前尚无其用于乙肝治疗的任何报道。

本申请的发明人通过人工智能系统分析和研究了药物结构和靶点的大数据后意外发现这一系列化合物具有治疗乙肝的潜在活性。在经过了一系列生物学实验验证后，获得了该具有治疗乙肝的治疗效果的式1的化合物。

更特别地，塞来昔布及其衍生物被验证了能够降低HBsAg和/或HBeAg水平，这是现有的常用药核苷类似物所不能达到的效果。这就使得塞来昔布与核苷类似物联用来功能性治愈甚至完全清除乙肝病毒成为可能。

取代基的定义

本文中所用的“氘代”是指用氢元素的同位素氘原子代替原有的氢原子的取代方式。由于本文中所用的“卤素”是指氟、氯、溴、碘中的至少一种。本文中所用的“氨基被保护”是指-NH2基团可以被形成酰胺键而保护起来，并在代谢过程中通过体内酶的降解而形成活性氨基发挥作用。例如丙氨酸等氨基酸的羧基与氨基发生脱水反应之后形成的酰胺键。“AA”是指氨基酸残基，即20种天然氨基酸去掉羧基后剩余的部分。即，利用氨基酸对活性-NH2基团形成酰胺键，以保护原有的活性氨基。

病毒性肝炎

病毒性肝炎的病原学分型，目前已被公认的有甲、乙、丙、丁、戊五种肝炎病毒，分别写作HAV、HBV、HCV、HDV、HEV，除乙型肝炎病毒为DNA病毒外，其余均为RNA病毒。

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染病。临床上以食欲减退、恶心、上腹部不适、肝区痛、乏力为主要表现。部分患者可有黄疸发热和肝大伴有肝功能损害。有些患者可慢性化，甚至发展成肝硬化，少数可发展为肝癌。

乙型病毒性肝炎的病原为乙型肝炎病毒，缩写为HBV，乙型肝炎病毒为DNA病毒。基因组是双链、环形、不完全闭合DNA。病毒最外层是病毒的外膜或称衣膜，其内层为核心部分，核蛋白即是核心抗原(HBcAg)，不能在血清中检出。HBsAg阳性者的血清在电子显微镜下可见3种颗粒，直径为22nm的圆形和丝状颗粒，还有较少的直径为42埃的球形颗粒，又称为Dane氏颗粒，是完整的HBV颗粒。

乙型肝炎的标志检测如下：①HBsAg与抗-HBs：HBsAg阳性表示HBV目前处于感染阶段，抗-HBs为免疫保护性抗体阳性示已产生对HBV的免疫力。慢性HBsAg携带者的诊断依据为无任何临床症状和体征、肝功能正常，HBsAg持续阳性6个月以上者。②HBeAg与抗-HBe：HBeAg阳性为HBV活跃复制及传染性强的指标，被检血清从HBeAg阳性转变为抗-HBe阳性表示疾病有缓解，感染性减弱。③HBcAg与抗-HBc：HBcAg阳性提示存在完整的HBV颗粒直接反应，HBV活跃复制由于检测方法复杂临床少用。抗-HBc为HBV感染的标志，抗-HBc IgM阳性提示处于感染早期，体内有病毒复制。在慢性轻度乙型肝炎和HBsAg携带者中HBsAg、HBeAg和抗-HBc三项均阳性具有高度传染性指标难以转阴。

在一个优选实施方式中，所述药物还包含一种或多种另外的治疗剂或预防剂。在一个优选实施方式中，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素或者核苷类似物。在一个优选实施方式中，所述核苷类似物选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺。

另外的治疗剂或预防剂

在一些实施方式中，所述另外的治疗剂或预防剂选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺中的一种或多种，例如选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺中的一种或选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺中的至少两种。

恩替卡韦(Entecavir)的化学名为2-氨基-1,9-二氢-9-[(1S,3R,4S)-4-羟基-3-(羟甲基)-2-亚甲基环戊烷]-6H-嘌呤-6-酮，其结构式如下：

美国专利US5206244公开了恩替卡韦及其治疗乙肝病毒的用途；WO9809964中公开了新的恩替卡韦合成方法；WO0164421公开了低剂量的恩替卡韦固体制剂。

恩替卡韦是一种高效的抗病毒剂，由美国施贵宝公司在20世纪90年代研发，具有较强的抗HBV作用。它能够通过磷酸化成为具有活性的三磷酸盐，三磷酸盐在细胞内的半衰期为15h。通过与HBV多聚酶的天然底物三磷酸脱氧鸟嘌呤核苷竞争，恩替卡韦三磷酸盐能抑制病毒多聚酶(逆转录酶)的所有三种活性：(1)HBV多聚酶的启动；(2)前基因组mRNA逆转录负链的形成；(3)HBV DNA正链的合成。

富马酸替诺福韦二吡呋酯(英文名：Tenofovir disoproxil fumarate，TDF；化学名为(R)-[[2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基]甲基]膦酸二异丙氧羰基甲酯富马酸盐)是替诺福韦的酯类前体，属于新型核苷酸类逆转录酶抑制剂，具有抑制HBV病毒活性。

TDF是美国吉利德公司继阿德福韦酯后成功开发的另一个新型开环膦酸核苷类化合物于2001年10月首次在美国上市，目前已经在欧洲、澳大利亚和加拿大等国家上市。

TDF在体内可通过竞争性地结合于天然脱氧核糖底物来抑制病毒聚合酶，并通过插入DNA中终止DNA链的合成。其主要作用机制为口服后水解为替诺福韦，替诺福韦被细胞激酶磷酸化，生成具有药理活性的代谢产物替诺福韦二磷酸，后者与5’-三磷酸脱氧腺苷酸竞争，参与病毒DNA的合成，进入病毒DNA后，由于缺乏3’-OH基团，导致DNA延长受阻，进而阻断病毒的复制。临床应用表明，TDF具有显著的抗HBV病毒疗效，并且毒副作用较小，因而具有较大的临床应用前景。

替诺福韦艾拉酚胺(Tenofovir Alafenamide)，是由美国吉利德科学公司开发的一种新核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)替诺福韦(Tenofovir)的前体药物。与上一代的抗乙肝类似药物替诺福韦二吡呋酯TDF相比，替诺福韦艾拉酚胺的抗病毒活性为其10倍，在血浆中的稳定性为其200倍，半衰期较其提高了225倍。与TDF相比，替诺福韦艾拉酚胺只需要十分之一的TDF给药剂量，即可实现与TDF相同的抗病毒疗效。因此替诺福韦艾拉酚胺用于乙型肝炎病毒(HBV)感染的预防或/和治疗，具有更好的疗效、更高的安全性和更低的耐药性。

除了上述活性药物外，本文所述的药物或药物组合物还可任选地包含一种或多种另外的用于治疗HBV的其他药物，其例如但不限于3-双加氧酶(IDO)抑制剂，靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸，载脂蛋白A1调节剂，精氨酸酶抑制剂，B-和T-淋巴细胞减毒剂抑制剂，Bruton酪氨酸激酶(BTK)抑制剂，CCR2趋化因子拮抗剂，CD137抑制剂，CD160抑制剂，CD305抑制剂，CD4激动剂和调节剂，靶向HBcAg的化合物，靶向乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的化合物，共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂，亲环蛋白抑制剂，细胞因子，细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(ipi4)抑制剂，DNA聚合酶抑制剂，核酸内切酶调节剂，表观遗传修饰剂，法尼醇X受体激动剂，基因修饰剂或编辑物，HBsAg抑制剂，HBsAg分泌或组装抑制剂，HBV抗体，HBV DNA聚合酶抑制剂，HBV复制抑制剂，HBV RNA酶抑制剂，HBV疫苗，HBV病毒进入抑制剂，HBx抑制剂，乙型肝炎大包膜蛋白调节剂，乙型肝炎大包膜蛋白刺激剂，乙型肝炎结构蛋白调节剂，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)分泌或组装抑制剂，乙型肝炎病毒E抗原抑制剂，乙型肝炎病毒复制抑制剂，肝炎病毒结构蛋白抑制剂，HIV-1逆转录酶抑制剂，透明质酸酶抑制剂，IAP抑制剂，IL-2激动剂，IL-7激动剂，免疫球蛋白激动剂，免疫球蛋白G调节剂，免疫调节剂，吲哚胺-2，核糖核苷酸还原酶抑制剂，干扰素激动剂，干扰素α1配体，干扰素α2配体，干扰素α5配体调节剂，干扰素α配体，干扰素α配体调节剂，干扰素α受体配体，干扰素β配体，干扰素配体，干扰素受体调节剂，白介素-2配体，ipi4抑制剂，赖氨酸脱甲酶抑制剂，组蛋白脱甲酶抑制剂，KDM5抑制剂，KDM1抑制剂，杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1抑制剂，淋巴细胞活化基因3抑制剂，淋巴毒素β受体激活剂，微RNA(miRNA)基因治疗剂，Axl调节剂，B7-H3调节剂，B7-H4调节剂，CD160调节剂，CD161调节剂，CD27调节剂，CD47调节剂，CD70调节剂，GITR调节剂，HEVEM调节剂，ICOS调节剂，Mer调节剂，NKG2A调节剂，NKG2D调节剂，OX40调节剂，SIRPα调节剂，TIGIT调节剂，Tim-4调节剂，Tyro调节剂，Na+-牛磺酸盐协同转运多肽(NTCP)抑制剂，天然杀伤细胞受体2B4抑制剂，NOD2基因刺激剂，核蛋白抑制剂，核蛋白调节剂，PD-1抑制剂，PD-L1抑制剂，PEG-干扰素λ，肽基脯氨酰异构酶抑制剂，磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂，重组清道夫受体A(SRA)蛋白，重组胸腺素α-1，维甲酸诱导基因1刺激物，逆转录酶抑制剂，核糖核酸酶抑制剂，RNADNA聚合酶抑制剂，短干扰RNA(siRNA)，短合成发夹RNA(sshRNA))，SLC10A1基因抑制剂，SMAC模拟物，Src酪氨酸激酶抑制剂，干扰素基因刺激物(STING)激动剂，NOD1刺激物，T细胞表面糖蛋白CD28抑制剂，T细胞表面糖蛋白CD8调节剂，胸腺素激动剂，胸腺素α1配体，Tim-3抑制剂，TLR-3激动剂，TLR-7激动剂，TLR-9激动剂，TLR9基因刺激剂，toll样受体(TLR)调节剂，病毒核糖核苷酸还原酶抑制剂，锌指核酸酶或合成核酸酶(TALEN)及其组合。

如本文中所使用，“治疗有效量”或“有效量”是指在剂量下有效并且持续所需时间周期以实现期望的治疗结果的量。乙肝治疗剂的治疗有效量将取决于障碍或症状的性质并取决于特定的试剂，且可以通过本领域技术人员已知的标准临床技术确定。

治疗结果可以是，如，减轻症状、延长存活、改善生活质量等。治疗结果不需要是“治愈”。治疗结果也可以是预防性的。最优选的治疗效果是功能性治愈和乙肝病毒的清除。

在一个优选实施方式中，所述药物经配制通过选自以下的途径施用：口服、直肠、经鼻、经肺、局部、口腔和舌下、阴道、肠胃外、皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外。

在一个优选实施方式中，所述药物经配制通过口服施用，优选为片剂或胶囊的形式。

给药途径

本公开的药物或药物组合物通过适合于待治疗病症的任何途径施用。合适的途径包括口服、直肠、鼻、肺、局部(包括口腔和舌下)、阴道和肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外)等。

在某些实施方式中，本文公开的药物或药物组合物通过静脉内注射施用。将会理解，优选途径可根据例如接受者的状况而变化。本公开药物或药物组合物的一个优点在于，它们是口服生物可利用的并且可以口服施用。

药物组合物

在某些实施方式中，在药物组合物中施用式1的化合物或化合物1-2至1-4或其药学上可接受的盐。本公开的药物组合物可以用常规载体和赋形剂(其将根据通常的实践选择)配制。片剂将含有赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂等。水性制剂以无菌形式制备，并且当用于通过非口服施用递送时，通常是等渗的。所有制剂将任选地含有赋形剂，例如“Handbook of Pharmaceutical Excipients”(1986)中所述的赋形剂。赋形剂包括抗坏血酸和其它抗氧化剂，螯合剂如EDTA，碳水化合物如葡聚糖，羟基烷基纤维素，羟基烷基甲基纤维素，硬脂酸等。制剂的pH范围为约3至约11，但通常为约7至10。在一些实施方式中，制剂的pH范围为约2至约5，但通常为约3至4。

制剂包括适用于前述施用途径的制剂。制剂可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。技术和制剂通常在Remington’s PharmaceuticalSciences(Mack Publishing Co.，Easton，PA)中找到。这样的方法包括使活性成分与由一种或多种辅助成分构成的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者均匀地和紧密地结合在一起，然后根据需要使产品成形，来制备制剂。

适用于口服施用的本发明的制剂可以作为以下形式存在：各自含有预定量活性成分的离散单元，如胶囊剂或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或者水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。

片剂通过任选地与一种或多种辅助成分一起压制或模制而制成。压制片剂可以通过以下来制备：在合适的机器中压制自由流动形式如粉末或颗粒的活性成分，其任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物来制备。片剂可任选地包衣或刻痕，并任选地配制，以便自其提供活性成分的缓释或控释。

用于口服使用的制剂也可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如磷酸钙或高岭土混合，或呈现为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

本公开的药物组合物也可以是无菌可注射制剂的形式，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。该悬浮液可以根据已知技术使用上面提到的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液，或制备成冻干粉末。可以使用的可接受的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油通常可用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同样可用于制备注射剂。可以使用的可接受的载体和溶剂包括水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和高渗氯化钠溶液。

在查阅了下面的实施例之后，本发明的另外的目的、优势和新特征对本领域普通技术人员将变得显而易见。

实施例

实施例1-应用HepG2-NTCP细胞评价式1化合物的体外抗HBV活性

化合物配制方法如下：

以配制20mM浓度的储液为例，溶剂DMSO的体积(μl)＝样品质量(mg)×纯度÷分子量÷20×10⁶

对照化合物包括ETV(批号：P1214012；99.0％纯度)，购自上海泰坦科技股份有限公司。阳性对照化合物RG7834(批号：ET25747-14-P1；99.5％纯度)，购自上海药明康德新药开发有限公司。

以上对照化合物的母液浓度均为20mM，并在-20℃下保存。

表1.主要试剂和细胞病毒

实验方案

铺细胞和化合物处理

第0天，将HepG2-NTCP铺种到48孔板中(7.5×10⁴个细胞/孔)。第1天，更换为含2％DMSO的培养基。

第2天，先加入化合物预处理细胞1小时，然后加入D型HBV感染HepG2-NTCP细胞(感染同时加入化合物)。受试化合物稀释3个单药浓度，1个联合用药浓度，2复孔测试。对照化合物为ETV。化合物浓度设定参见表2。

第3、5和7天更换一次含化合物的新鲜培养基。

第9天，收集上清，将收集的细胞上清用ELISA法检测HBeAg和HbsAg，qPCR法检测HBV DNA水平。同时，CellTiter-Glo检测细胞活力，收集细胞冷冻保存(备用)。实验流程参见表3。

表2：化合物浓度

表3：实验流程

样品检测

1)qPCR法检测细胞培养上清中HBV DNA的含量

参照QIAamp 96 DNA Blood Kit说明书，提取细胞培养上清中的DNA。HBV特异性引物qPCR检测HBV DNA的含量。PCR反应：95℃，10min；95℃，15sec，60℃，1min，40个循环。

2)ELISA法检测细胞培养上清中HBeAg和HBsAg的含量方法参照试剂盒说明书，方法简述如下：分别取50μl的标准品，

样品和对照品加入到检测板中，然后每孔加入50μl酶结合物，37℃孵育60分钟，用洗液洗板后吸干，然后加入50μl预混发光底物，室温避光孵育10分钟，最后酶标仪测定发光值。

3)CellTiter-Glo细胞活力检测

参照CellTiter-Glo试剂盒说明书测定细胞活力，方法简述如下：收集细胞培养上清之后，每孔加入CellTiter-Glo(培养基1:1稀释)，室温孵育10分钟，酶标仪测定发光值。

数据分析

HBV DNA抑制率(％)＝(1-化合物组样品的HBV拷贝数/DMSO组的HBV拷贝数)×100％

Hbe/sAg抑制率(％)＝(1-样品的HBe/sAg值/DMSO对照组HBe/sAg值)×100％

结果分析

检测结果参见表4-6和图1-7。

表4测试化合物的HBV DNA抑制率

表5测试化合物的HBsAg抑制率

表6.测试化合物的HBeAg抑制率

以上试验结果显示，与空白对照组相比，式1的化合物能有效降低HBV病毒载量，在降低HBV DNA达73.01％的情况下，还能够同时降低HBsAg和HBeAg达到46.12％和78.13％；平行重复上述细胞试验显示(参见图6)，式1化合物表现出对于HBV DNA，HBsAg和HBeAg的抑制作用，而且呈现出明显的剂量依赖性。

恩替卡韦正如文献中报道的一样，仅仅能够降低HBV DNA，对于降低HBeAg和HBsAg基本没有效果。而式1的化合物与恩替卡韦相比，能够有效降低HBeAg和HBsAg，从而有望清除乙肝病毒，达到功能性治愈；

式1的化合物塞来昔布与恩替卡韦联用时，在降低HBV DNA和HBeAg方面可以进一步产生协同作用效果，抑制率能分别增加至80.69％(HBV DNA)和80.46％(HBeAg)，因此，式1化合物具有与已知药物联用，从而增强组合物降低HBV载量、降低HBsAg和/或HBeAg水平的药物效果的广泛应用前景。

不同浓度的塞来昔布对HepG2-NTCP细胞的细胞毒性测试结果(参见图7)进一步显示，塞来昔布具有对于病毒的作用而不是细胞毒性。

实施例2-小鼠体内试验

实验方法：在AAV-HBV小鼠模型上，通过灌胃给药，每日一次，其中，给药组(G10HD042，即塞来昔布)：给予塞来昔布的剂量为60mpk，空白组(G1溶剂对照组)：给予10％DMSO+40％PEG400+5％Tween 80+45％Saline(V/V)溶液；

分别在给药的90天期间内，第6、13、20、27、34、41、48、55、62、69、77、83、90天取血，检测小鼠血浆中HBV DNA、HBsAg、HBeAg、anti-HBs的含量，结果如图4-5所示，表明给予塞来昔布后，小鼠血浆中HBV DNA、HBsAg、HBeAg明显降低，分别降低了0.72Log10 copy/mL、0.76Log10IU/mL、0.34Log10 PEIU/mL。

虽然已参照特定实施方式对本发明进行了说明，但本领域技术人员应认识到的是，在不偏离本发明主旨和范围的情况下，可对所述实施方案进行改变或改进，本发明范围通过所附权利要求书限定。

Claims (9)

1.式1的化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于降低HBsAg和/或HBeAg水平的治疗或预防HBsAg阳性和/或HBeAg阳性乙型病毒性肝炎的药物中的用途，

式1

其中，所述衍生物为式1的化合物的氘代产物。

2.式1的化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于降低HBsAg水平的治疗或预防HBsAg阳性乙型病毒性肝炎的药物中的用途，

式1

其中，所述衍生物为式1的化合物的氘代产物。

3.如权利要求1或2所述的用途，其中，所述药学上可接受的盐选自以下的至少一种：醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、钠盐、钙盐、钾盐、铵盐、四乙铵盐、甲铵盐、二甲铵盐和乙醇胺盐。

4.如权利要求1或2所述的用途，其中所述衍生物包括选自化合物1-2或化合物1-4：

5.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物能够降低乙型肝炎病毒(HBV)载量。

6.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物还包含一种或多种另外的治疗剂或预防剂，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素、PEG化的干扰素、硝唑尼特、式A所示的化合物中的至少一种，

式A

7.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物还包含一种或多种另外的治疗剂或预防剂，所述另外的治疗剂或预防剂选自恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺、拉米夫定、泛昔洛韦、阿德福韦、替诺福韦、膦甲酸钠、阿昔洛韦。

8.如权利要求1或2所述的用途，其中所述药物经配制通过选自以下的途径施用：口服、直肠、经鼻、经肺、局部、口腔和舌下、阴道、肠胃外、皮下、肌肉内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外。

9.药物组合物在制备用于降低HBsAg和/或HBeAg水平的治疗或预防HBsAg阳性和/或HBeAg阳性的乙型病毒性肝炎患者的乙型病毒性肝炎的药物中的用途，其中，所述药物组合物包含治疗有效量的式1的化合物、其衍生物或其药学上可接受的盐以及任选的一种或多种另外的治疗剂或预防剂，以及药学上可接受的载体，所述另外的治疗剂或预防剂选自干扰素、PEG化的干扰素、硝唑尼特、式A所示的化合物、恩替卡韦、富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺、拉米夫定、泛昔洛韦、阿德福韦、替诺福韦、膦甲酸钠、阿昔洛韦中的至少一种，所述衍生物选自化合物1-2或化合物1-4：

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