CN114410667B - 一种鞍带石斑鱼znrf3基因及其编码的蛋白和应用 - Google Patents

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CN114410667B CN202111682943.3A CN202111682943A CN114410667B CN 114410667 B CN114410667 B CN 114410667B CN 202111682943 A CN202111682943 A CN 202111682943A CN 114410667 B CN114410667 B CN 114410667B
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Abstract

本发明公开了一种鞍带石斑鱼znrf3基因，它的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。还公开了鞍带石斑鱼znrf3基因编码的蛋白，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。还公开了上述鞍带石斑鱼znrf3基因、所述基因编码的蛋白或含有所述鞍带石斑鱼znrf3基因的过表达质粒在制备鞍带石斑鱼性反转诱导剂方面的应用。

Description

一种鞍带石斑鱼znrf3基因及其编码的蛋白和应用
技术领域
本发明属于鞍带石斑鱼技术领域，具体涉及一种鞍带石斑鱼(Epinepheluslanceolatus)znrf3基因及其编码的蛋白和应用。
背景技术
znrf3(zinc and ring finger 3)是泛素化连接酶的一种，它特异性地泛素化Wnt信号通路中的关键因子Frizzled受体，加速其降解，从而发挥抑制Wnt信号通路的作用。Wnt信号通路对雌性性别决定和卵巢的发育至关重要，wnt基因的缺失在人类中会导致女性男性化，在雌性小鼠中则会导致性反转。由于znrf3基因对Wnt信号通路的抑制作用，因此该基因对精巢的发育至关重要。在雄性小鼠中，znrf3基因的缺失会导致个体精巢发育异常。
石斑鱼类是我国南方重要的经济养殖鱼类，2020年产量超19万吨，经济价值巨大。鞍带石斑鱼为大型石斑鱼类，其具备生长速度快，肉质鲜美等特点，一直是深受喜爱的石斑鱼养殖品种。它是典型的雌雄同体雌性先熟鱼类，群体中的极少部分雌性个体会经历性逆转转变为雄性，由于性逆转发生在雌性性成熟之后，因此获得雄性个体通常需要6年以上。雄性个体的获得已成为鞍带石斑鱼实际生产过程中的一大难点，给鞍带石斑鱼的人工繁育和遗传改良带来了很大的困难。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鞍带石斑鱼znrf3基因及其编码的蛋白。
本发明的目的还在于提供含有上述鞍带石斑鱼znrf3基因的过表达质粒。
本发明的最后一个目的在于提供上述鞍带石斑鱼znrf3基因、所述基因编码的蛋白或含有所述鞍带石斑鱼znrf3基因的过表达质粒在制备鞍带石斑鱼性反转诱导剂方面的应用。
本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种鞍带石斑鱼znrf3基因，它的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
该鞍带石斑鱼znrf3基因，其通过引物扩增基因片段和RACE全长扩增的方法得到鞍带石斑鱼znrf3基因开放读码框。
所述鞍带石斑鱼znrf3基因编码的蛋白，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。其编码898个氨基酸，分子量约为97.2kDa。
本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：一种过表达质粒，含有所述的鞍带石斑鱼znrf3基因。
优选的，所述过表达质粒为pcDNA4-znrf3。
优选的，所述过表达质粒pcDNA4-znrf3是以SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的序列为上、下游引物，通过PCR扩增出znrf3序列，并与pcDNA4载体连接获得。
本发明的上述最后一个目的可以通过以下技术方案来实现：上述鞍带石斑鱼znrf3基因、所述鞍带石斑鱼znrf3基因编码的蛋白以及上述的过表达质粒在制备鞍带石斑鱼性反转诱导剂方面的应用。
本发明具有以下有益效果：本发明获得的鞍带石斑鱼znrf3基因能促进精母细胞的生成，从而诱导雌性性逆转为雄性，可应用于功能性雄性亲鱼的制备，为鞍带石斑鱼的人工繁殖和良种培育工作提供保障。
附图说明
图1是znrf3基因在鞍带石斑鱼精巢组织中的原位杂交图，左下角为正义链探针；
图2是znrf3基因载体过表达实验0周、2周、4周和8周后性腺组织学切片图，PVO：早期卵母细胞；SC：精母细胞；APVO：闭锁早期卵母细胞；SZ：精子。
具体实施方式
下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案，以便本领域技术人员更好理解和实施本发明的技术方案。实施例中所用试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：鞍带石斑鱼znrf3基因cDNA全序列的克隆
根据鞍带石斑鱼转录组数据库中的信息，在开放读码框拼接序列两端设计特异性引物：上游引物(具体为5’-ATGTCCTTTACGTTCATCGT-3’)和下游引物(具体为5’-TTACTCTGTGCCGGGCTGCT-3’)。提取鞍带石斑鱼精巢组织总RNA，经反转录合成cDNA，以该cDNA为模板，进行PCR扩增，扩增片段大小为2697bp，经电泳分离DNA片段后，回收纯化目的片段，随后连接至pGEM-T载体，转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆测序验证，再经BLAST同源性分析确定目的产物为znrf3基因的cDNA序列片段。
获得的鞍带石斑鱼的znrf3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
具体为：
Figure BDA0003452137460000031
Figure BDA0003452137460000041
对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：
Figure BDA0003452137460000042
Figure BDA0003452137460000051
实施例2鞍带石斑鱼znrf3基因精巢组织原位杂交
(一)探针质粒构建和提取
选取鞍带石斑鱼znrf3基因中的一段作为原位杂交探针目的片段，设计上游引物(具体为5’-GATACAACACAGACCACCGAGG-3’)和下游引物(具体为5’-CAGTACAGTCTAACATGGAGTCGC-3’)，以实施例1中含有鞍带石斑鱼znrf3基因的pGEM-T质粒为模板，经PCR扩增、电泳分离、回收纯化目的片段后连接pGEM-T质粒，转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆测序验证，再经BLAST同源性分析确定目的产物为znrf3基因原位杂交探针目的片段。将含该正确质粒的大肠杆菌扩培后提取质粒。
(二)探针质粒线性化
将质粒线性化，在T7启动子和SP6启动子端各选取一个酶切位点，将质粒线性化并纯化。
Figure BDA0003452137460000052
(三)体外转录及RNA探针纯化
参考DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)(Roche，美国)说明书。
1)在冰上配置以下体系，在PCR仪上37℃反应2h。
Figure BDA0003452137460000053
Figure BDA0003452137460000061
2)加入2μL DNase I，在PCR仪上37℃反应15min后加入2μL EDTA终止反应。
3)向上述体系中加入75μL预冷的无水乙醇和2.5μL 4M氯化锂溶液，-80℃静置30min。
4)将溶液转移到1.5mL离心管中，4℃，12000g，离心15min，弃上清。
5)加入1mL 70％乙醇(DEPC处理水配制)，4℃，12000g，离心5min。
6)弃上清，开盖静置2min挥发乙醇，加入50μL DEPC处理水和1μL RNaseinhibitor。
7)浓度和电泳检测，分装保存于-80℃备用。
(四)原位杂交
第一天：杂交(所有试剂均使用DEPC处理水配制，染缸180℃处理4小时以去除RNA酶)。
1)室温，1×PBS浸泡，10min两次。
2)室温，0.2M HCl浸泡，10min。
0.2M HCl：40mL 1×PBS+200μL浓盐酸。
3)更换染缸，室温，1×PBS浸泡，5min两次。
4)37℃，1μg/mL蛋白酶K处理15min。
1μg/mL蛋白酶K：50mL 1×PBS+2.5μL蛋白酶K(20μg/mL)。
5)更换染缸，室温，1×PBS浸泡，5min两次。
6)室温，0.1％DEPC浸泡，15min两次。
40μL DEPC母液+40mL 1×PBS。
7)更换染缸，室温，1×PBS浸泡，5min两次。
8)室温，2×SSC缓冲液浸泡，5min两次，同时配制探针杂交液。
探针杂交液如下：
Figure BDA0003452137460000062
Figure BDA0003452137460000071
9)将切片放入湿盒，滴加探针杂交液(探针浓度500ng/mL)，55℃孵育过夜。
第二天：洗片、显色
1)室温，2×SSC缓冲液浸泡，30min。
2)60℃，2×SSC缓冲液浸泡，30min两次。
3)60℃，0.1×SSC缓冲液浸泡，30min两次。
4)室温，Buffer 1浸泡5min。
Buffer 1：
Figure BDA0003452137460000072
5)于湿盒中，室温，封闭液孵育30min。
封闭液：
Figure BDA0003452137460000073
6)室温，Anti-DIG抗体孵育2h(也可4℃过夜)。
Anti-DIG：Anti-DIG-AP 2μL+1mL封闭液。
7)更换染缸，室温，Buffer 1浸泡清洗10min两次。
8)室温，Buffer 2浸泡清洗5min。
Buffer 2：
Figure BDA0003452137460000081
9)滴加适量显色液显色，在显微镜下观察确定显色时间盒效果。
显色液：BCIP/NBT Mix 20uL+1mL Buffer 2。
10)显色完成后，于无水乙醇中分色。
11)封片保存。
结果：
通过原位杂交定位鞍带石斑鱼znrf3基因在精巢中的表达，结果如图1，znrf3反义链探针信号集中出现在精小囊外侧的Leydig cell区域，而内侧生殖细胞区域没有明显信号。
实施例3 znrf3过表达质粒在体注射鞍带石斑鱼
(一)过表达质粒构建
以实施例1中含有鞍带石斑鱼znrf3基因的pGEM-T质粒为模板，用上游引物(具体为5’-GCCGCTCGAGTCTAGATGATGATTTTACCACGGAG-3’，如SEQ ID NO.3所示)和下游引物(具体为5’-CGAAGGGCCCTCTAGATATACCCAGACCACCCTCA-3’，如SEQ ID NO.4所示)扩增出znrf3序列。将pcDNA4载体用Xba I线性化后，用in-Fusion克隆法将线性化pcDNA4载体和扩增出的znrf3序列连接，获得pcDNA4-znrf3过表达质粒。
用脂质体包被pcDNA4-znrf3过表达质粒，脂质体使用DOTAP(Sigma，美国)和胆固醇(Sigma)通过薄膜水化法形成。简言之，将DOTAP和胆固醇加热至70℃，随后在65℃下水浴2小时，并在25℃下超声波处理10分钟。将混合物用100nm孔径膜过滤器过滤，然后分别将pcDNA4空载质粒和pcDNA4-znrf3质粒在25℃下超声波处理30分钟封装包被，构建浓度为20μg/μL。
(二)过表达质粒在体注射
将鞍带石斑鱼分为两组。实验组(n＝50)注射包被的过表达质粒(pcDNA4-znrf3)；对照组(n＝50)注射包被的空质粒(pcDNA4空载)。两组均按(1mL质粒/kg体重)的比例，每周注射一次，每两周收集性腺组织样品，跟踪性腺变化。取性腺组织碎片于波恩氏液中固定过夜，随后转移至70％乙醇保存。
(三)性腺组织学分析
1)石蜡包埋：将波恩氏液固定后保存于70％酒精的样品经脱水、透明和浸蜡处理，转移至装有已融化石蜡的小盒内，室温静置，凝固后保存用于切片。
2)切片：包埋好的组织石蜡块在切片机上以5μm的厚度切片，用30％酒精展片后，于42℃水浴中完全展片，42℃过夜烘干。
3)H&E染色：切片经苏木精和伊红染色后，以中性树胶封片，风干后观察。
结果：
如图2所示，实验组个体在接受znrf3过表达质粒注射后2周性腺中观察到精母细胞，表明正在发生性逆转。在持续注射8周后实验组个体转变为完全的雄性。对照组个体在整个实验过程中维持雌性不变。
以上实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以上实施例。所属技术领域的普通技术人员依据以上本发明公开的内容均可实现本发明的目的，任何基于本发明构思基础上做出的改进和变形，均落入本发明的保护范围之内，具体保护范围以权利要求书记载的为准。
序列表
<110> 广东省科学院动物研究所
<120> 一种鞍带石斑鱼znrf3基因及其编码的蛋白和应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2697
<212> DNA
<213> 鞍带石斑鱼znrf3基因(zinc and ring finger 3)
<400> 1
atgatgattt taccacggag aggctcagat cgtgtacccg actcggtggt cctggtgatc 60
ttcgtggttg ccgcttctct tggtaccgtt ttcgccaagg atactgcctt tgtggaagtg 120
gttctgttcg agtccagtcc caatggagat tatactactt acacgactgg cttgcaggga 180
cggttctcca aagcaggagc cactatcagc gcggaggggg agatcgttca aatgcatcct 240
ttgggactat gtaataataa cgatgaggag gacctgtatg agtacggctg ggtcggagtg 300
gtgaagctgg agcaaccaga gctggacccc agttgtctca ccgtgctggg aaaggcgaag 360
agagcagtgc agcggggagc cacagccgtc atctttgatg tgtcggagaa tccggatgcc 420
atcgaccagc tcaaccaggt cgcagaggat ccactgaagc ggccggtggt ttacgtgaag 480
ggcaatgacg ccgttaagtt gatgaacatc gtcaacaagc agaaagtggc tcgtgctcgg 540
atacaacaca gaccaccgag gcagcccaca gaatattttg acatgggcat cttcctggct 600
ttcttcgtgg tggtgtcgct ggtgtgcctc attctgctta tcaagatcaa actcaagcaa 660
aggagaagcc agagctcgat gaacagaatg gccatccaag ccttggagaa gatggagacg 720
agaaagttca aggccaaagg aaagggccag cgcgagagca gctgtggagc ctcggattcg 780
ctgagcagca gctccacctc tgactgcgcc atctgtctgg aaaagtacat tgatggggag 840
gagctgcgag tcataccctg tgctcacaga tttcataaga aatgtgtcga cccctggcta 900
ctccagcatc acacctgtcc ccactgtaga cacaacatca ttgagcaaaa gaagggaaat 960
ccaggaccag catgcatgga ccctggtaac ccagtccatg gccggcagcg tgtggtgctg 1020
ccagtccatt atcctggcag ggtgcaccgt gctggccagg tgacagccta cccaaccaga 1080
accagcatgg acccccatgg caaccccatc actgtactca ctgtggacca gcacccagat 1140
cctcaaggtc tttaccctcc ccaatcaacg tctgcctttc tccggagcta ccacccaacc 1200
cttcatctgg accactcact caacccccac cactgtggat tagagcaccg cggaccaccc 1260
gcctacccag cacagccgca tcacactgct tttaaacgac ccaagttcca tggtcgcaac 1320
ttttcccgag cagcctgctt ctcgcagtac gagactatgt accagcacta ctattttcag 1380
gggttgactt tccctcaaca gcctgaggga ggtcaagggc ctactatggc agggcagctt 1440
ggtggaggag gaggggccca caagggccat cacagcaggg cctttcagca ggggctgtta 1500
taccccacag tggtacacat ggcacctgcc tcttcttcga ggataggtga tactggcagc 1560
acttctggcc tgagctgtta ccatggccac cgctcagtgt gcagcggtta ccttgctgac 1620
tgccctggta gtgacagcag cagcagcagc tcaggccagt gccactgttc ctccagcgac 1680
tccatgttag actgtactga ggtcagcaac cagggcgtgt acggtagctg ctctaccttc 1740
cgcagctcgc tgagcagtga ctacgatcct tacgtctaca ggagtaagag tccatgtagg 1800
ggctccgtgg gggaagcagg ggctgcggcc tgcgcctcag ttcctgcaga agactcatca 1860
tcccctgttc ccttgggaca tgactgcctc cagctccctc ctggagcttc gggatataac 1920
tcgggggacc acctctccaa ctgcagtttg gagcccaact acagcagtcg ctcatcactg 1980
gaacccaggg agaacagcaa cactagcact acctcagccg gggctccaga ggctactgga 2040
gcagacaggg ggaagggggc gcaggaggag tcgggagagc ttggggctgc agcctgtagc 2100
tgctgctttg aggtgctgcc tcccaatgtg gagtgcaaag ggcaggactc ggaccaagct 2160
gggcctttgg ccacgggacg ctttcacagg ggggtggact ttcagagctc agcctccaag 2220
aactattttg ctcctgagca catgtgctct tcctcagagc aggtgagcta cgaagggctg 2280
ccttgctgct tctacaaaga aatgaaggtg cacagggcct caacggggcg ctacaccgag 2340
gactatgctg ttaatgtgca gtatgcgcat gcagactcag aggcctgctc tggacagggc 2400
tgctgcgaac tcaaccagag aatacccata attcctgagg acacagattg tgaattgggc 2460
acaggggcag agacccagag cagtttattg cccatcagcg tcacagtgga ggcagaggtg 2520
cggacagggg agcgacacga gcccagggag gggtatttca cctcaggaca gtttagaggt 2580
cagccatacc ctcaggagga ggagaccagg gctttgttcc accctcagct ctctgcaagc 2640
cccactgcat tgggaagcag cagtacttcg acaaatgagg gtggtctggg tatatga 2697
<210> 2
<211> 898
<212> PRT
<213> 鞍带石斑鱼znrf3基因(zinc and ring finger 3)
<400> 2
Met Met Ile Leu Pro Arg Arg Gly Ser Asp Arg Val Pro Asp Ser Val
1 5 10 15
Val Leu Val Ile Phe Val Val Ala Ala Ser Leu Gly Thr Val Phe Ala
20 25 30
Lys Asp Thr Ala Phe Val Glu Val Val Leu Phe Glu Ser Ser Pro Asn
35 40 45
Gly Asp Tyr Thr Thr Tyr Thr Thr Gly Leu Gln Gly Arg Phe Ser Lys
50 55 60
Ala Gly Ala Thr Ile Ser Ala Glu Gly Glu Ile Val Gln Met His Pro
65 70 75 80
Leu Gly Leu Cys Asn Asn Asn Asp Glu Glu Asp Leu Tyr Glu Tyr Gly
85 90 95
Trp Val Gly Val Val Lys Leu Glu Gln Pro Glu Leu Asp Pro Ser Cys
100 105 110
Leu Thr Val Leu Gly Lys Ala Lys Arg Ala Val Gln Arg Gly Ala Thr
115 120 125
Ala Val Ile Phe Asp Val Ser Glu Asn Pro Asp Ala Ile Asp Gln Leu
130 135 140
Asn Gln Val Ala Glu Asp Pro Leu Lys Arg Pro Val Val Tyr Val Lys
145 150 155 160
Gly Asn Asp Ala Val Lys Leu Met Asn Ile Val Asn Lys Gln Lys Val
165 170 175
Ala Arg Ala Arg Ile Gln His Arg Pro Pro Arg Gln Pro Thr Glu Tyr
180 185 190
Phe Asp Met Gly Ile Phe Leu Ala Phe Phe Val Val Val Ser Leu Val
195 200 205
Cys Leu Ile Leu Leu Ile Lys Ile Lys Leu Lys Gln Arg Arg Ser Gln
210 215 220
Ser Ser Met Asn Arg Met Ala Ile Gln Ala Leu Glu Lys Met Glu Thr
225 230 235 240
Arg Lys Phe Lys Ala Lys Gly Lys Gly Gln Arg Glu Ser Ser Cys Gly
245 250 255
Ala Ser Asp Ser Leu Ser Ser Ser Ser Thr Ser Asp Cys Ala Ile Cys
260 265 270
Leu Glu Lys Tyr Ile Asp Gly Glu Glu Leu Arg Val Ile Pro Cys Ala
275 280 285
His Arg Phe His Lys Lys Cys Val Asp Pro Trp Leu Leu Gln His His
290 295 300
Thr Cys Pro His Cys Arg His Asn Ile Ile Glu Gln Lys Lys Gly Asn
305 310 315 320
Pro Gly Pro Ala Cys Met Asp Pro Gly Asn Pro Val His Gly Arg Gln
325 330 335
Arg Val Val Leu Pro Val His Tyr Pro Gly Arg Val His Arg Ala Gly
340 345 350
Gln Val Thr Ala Tyr Pro Thr Arg Thr Ser Met Asp Pro His Gly Asn
355 360 365
Pro Ile Thr Val Leu Thr Val Asp Gln His Pro Asp Pro Gln Gly Leu
370 375 380
Tyr Pro Pro Gln Ser Thr Ser Ala Phe Leu Arg Ser Tyr His Pro Thr
385 390 395 400
Leu His Leu Asp His Ser Leu Asn Pro His His Cys Gly Leu Glu His
405 410 415
Arg Gly Pro Pro Ala Tyr Pro Ala Gln Pro His His Thr Ala Phe Lys
420 425 430
Arg Pro Lys Phe His Gly Arg Asn Phe Ser Arg Ala Ala Cys Phe Ser
435 440 445
Gln Tyr Glu Thr Met Tyr Gln His Tyr Tyr Phe Gln Gly Leu Thr Phe
450 455 460
Pro Gln Gln Pro Glu Gly Gly Gln Gly Pro Thr Met Ala Gly Gln Leu
465 470 475 480
Gly Gly Gly Gly Gly Ala His Lys Gly His His Ser Arg Ala Phe Gln
485 490 495
Gln Gly Leu Leu Tyr Pro Thr Val Val His Met Ala Pro Ala Ser Ser
500 505 510
Ser Arg Ile Gly Asp Thr Gly Ser Thr Ser Gly Leu Ser Cys Tyr His
515 520 525
Gly His Arg Ser Val Cys Ser Gly Tyr Leu Ala Asp Cys Pro Gly Ser
530 535 540
Asp Ser Ser Ser Ser Ser Ser Gly Gln Cys His Cys Ser Ser Ser Asp
545 550 555 560
Ser Met Leu Asp Cys Thr Glu Val Ser Asn Gln Gly Val Tyr Gly Ser
565 570 575
Cys Ser Thr Phe Arg Ser Ser Leu Ser Ser Asp Tyr Asp Pro Tyr Val
580 585 590
Tyr Arg Ser Lys Ser Pro Cys Arg Gly Ser Val Gly Glu Ala Gly Ala
595 600 605
Ala Ala Cys Ala Ser Val Pro Ala Glu Asp Ser Ser Ser Pro Val Pro
610 615 620
Leu Gly His Asp Cys Leu Gln Leu Pro Pro Gly Ala Ser Gly Tyr Asn
625 630 635 640
Ser Gly Asp His Leu Ser Asn Cys Ser Leu Glu Pro Asn Tyr Ser Ser
645 650 655
Arg Ser Ser Leu Glu Pro Arg Glu Asn Ser Asn Thr Ser Thr Thr Ser
660 665 670
Ala Gly Ala Pro Glu Ala Thr Gly Ala Asp Arg Gly Lys Gly Ala Gln
675 680 685
Glu Glu Ser Gly Glu Leu Gly Ala Ala Ala Cys Ser Cys Cys Phe Glu
690 695 700
Val Leu Pro Pro Asn Val Glu Cys Lys Gly Gln Asp Ser Asp Gln Ala
705 710 715 720
Gly Pro Leu Ala Thr Gly Arg Phe His Arg Gly Val Asp Phe Gln Ser
725 730 735
Ser Ala Ser Lys Asn Tyr Phe Ala Pro Glu His Met Cys Ser Ser Ser
740 745 750
Glu Gln Val Ser Tyr Glu Gly Leu Pro Cys Cys Phe Tyr Lys Glu Met
755 760 765
Lys Val His Arg Ala Ser Thr Gly Arg Tyr Thr Glu Asp Tyr Ala Val
770 775 780
Asn Val Gln Tyr Ala His Ala Asp Ser Glu Ala Cys Ser Gly Gln Gly
785 790 795 800
Cys Cys Glu Leu Asn Gln Arg Ile Pro Ile Ile Pro Glu Asp Thr Asp
805 810 815
Cys Glu Leu Gly Thr Gly Ala Glu Thr Gln Ser Ser Leu Leu Pro Ile
820 825 830
Ser Val Thr Val Glu Ala Glu Val Arg Thr Gly Glu Arg His Glu Pro
835 840 845
Arg Glu Gly Tyr Phe Thr Ser Gly Gln Phe Arg Gly Gln Pro Tyr Pro
850 855 860
Gln Glu Glu Glu Thr Arg Ala Leu Phe His Pro Gln Leu Ser Ala Ser
865 870 875 880
Pro Thr Ala Leu Gly Ser Ser Ser Thr Ser Thr Asn Glu Gly Gly Leu
885 890 895
Gly Ile
<210> 3
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gccgctcgag tctagatgat gattttacca cggag 35
<210> 4
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
cgaagggccc tctagatata cccagaccac cctca 35

Claims (1)

1.鞍带石斑鱼znrf3基因、鞍带石斑鱼znrf3基因编码的蛋白或含有鞍带石斑鱼znrf3基因的过表达质粒在制备鞍带石斑鱼性反转诱导剂中的应用，其中所述鞍带石斑鱼znrf3基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述鞍带石斑鱼znrf3基因编码的蛋白，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述应用为将鞍带石斑鱼znrf3基因或其编码的蛋白过表达。
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