CN114410424A - 脐带血有核细胞分离装置及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脐带血有核细胞分离装置及方法,其中装置包括第一透明板、第二透明板以及螺栓调节组件,所述第一透明板的周围开设至少两个第一螺孔,对应所述第一螺孔在所述第二透明板的周围开设数量相同的第二螺孔,通过所述螺栓调节组件与所述第一螺孔、所述第二螺孔配合调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。本发明通过第一透明板、第二透明板配合螺栓调节组件固定血袋,将整体装置进行离心,离心完成后带装置整体取出放入分浆夹中进行分离,整个过程中血袋不发生形变。
Description
技术领域
本发明涉及生化技术领域,特别是涉及一种脐带血有核细胞分离装置及方法。
背景技术
脐带血作为一种造血干细胞来源,用于血液系统疾病的移植治疗修复性治疗。1992年第一家脐带血诞生以来,脐带血库发展迅速。为了减少不相容的血浆量,减少冻存中残留的红细胞对于干细胞活性的影响,以及节约储存空间,往往在细胞冻存前采用减容的处理,去除多余的红细胞及血浆。目前,传统的手工分离方法基本上都是采用1995年纽约脐带血库的分离原理进行脐带血制备(富浆法Proc.Nati.Acad.Sci.USA 1995:92:10119-10122)。其主要分离过程为:加入0.9%的羟乙基淀粉(HES)沉降红细胞后,低速离心加强沉降,利用分浆夹将红细胞去除。然后,通过二次重离心后,用夹板去除多余的血浆。
传统离心支撑物为海绵或者气包,使血袋离心时保持竖直不褶皱。但离心完成后需要取出血袋,重新放入分浆夹中施加压力,此过程中由于血袋的两次形变,分离好的薄膜层会相应发生两次扰动,进而影响分离效果。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点,本发明的目的在于提供一种脐带血有核细胞分离装置及方法,以较好解决液面扰动问题。
为了解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:
根据本发明的第一技术方案,提供了一种脐带血有核细胞分离装置,包括第一透明板、第二透明板以及螺栓调节组件,所述第一透明板的周围开设至少两个第一螺孔,对应所述第一螺孔在所述第二透明板的周围开设数量相同的第二螺孔,通过所述螺栓调节组件与所述第一螺孔、所述第二螺孔配合调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。
作为优选的技术方案,所述螺栓调节组件包括螺丝以及螺帽,通过所述螺丝配合所述第一螺孔、所述第二螺孔连接所述第一透明板和所述第二透明板,所述螺丝在穿过所述第一螺孔以及所述第二螺孔后连接所述螺帽,在分离过程中,通过所述螺帽调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。
根据本发明的第二技术方案,提供了一种脐带血有核细胞分离方法,使用如上所述的脐带血有核细胞分离装置,包括以下步骤:
在不同体积的多份脐带血中,加入脐带血体积15%-30%的0.9%HES,获得待分离液;
对通过所述脐带血有核细胞分离装置固定的待分离液进行离心获得离心液;
将固定有离心液的脐带血有核细胞分离装置放入分浆夹中进行分离。
作为优选的技术方案,在不同体积的多份脐带血中,加入脐带血体积 15%-30%的0.9%HES,获得待分离液后,转移入顶底三联袋中。
作为优选的技术方案,所述不同体积的多份脐带血包括一份0-60ml的脐带血、一份60-90ml的脐带血以及一份大于90ml的脐带血。
作为优选的技术方案,在恒定离心加速度的作用下,对通过所述脐带血有核细胞分离装置固定的待分离液进行离心获得离心液。
作为优选的技术方案,所述恒定离心加速度为400g-1400g,其中g为重力加速度。
作为优选的技术方案,对通过所述脐带血有核细胞分离装置固定的待分离液进行离心获得离心液,包括以下步骤:
将所述分离液转移入顶底三联袋中;
将所述顶底三联袋设置在所述第一透明板和所述第二透明板之间;
在离心过程中,通过所述螺栓调节组件调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。
作为优选的技术方案,将固定有离心液的脐带血有核细胞分离装置放入分浆夹中进行分离,包括:
分离过程中,在所述第一透明板和所述第二透明板增加阻挡块,当所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距小于等于所述阻挡块的厚度时,停止分离。
作为优选的技术方案,所述阻挡块的厚度根据有核细胞悬液的厚度和体积来确定。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
本发明通过第一透明板、第二透明板配合螺栓调节组件固定血袋,将整体装置进行离心,离心完成后带装置整体取出放入分浆夹中进行分离,整个过程中血袋不发生形变。
附图说明
图1示出了根据本发明实施例的一种脐带血有核细胞分离装置的剖视图。
图2示出了根据夹板法和气包法进行分离实验的TNC回收率树状图。
具体实施方式
以下列举的部分实施例仅仅是为了更好地对本发明进行说明,但本发明的内容并不局限在应用于所举的实施例中。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整而应用于其他实施例中,仍在本发明的保护范围之内。
实施例1:
图1示出了根据本发明实施例的一种脐带血有核细胞分离装置的剖视图。如图1所示,本发明实施例提供一种脐带血有核细胞分离装置。该装置包括第一透明板100、第二透明板200以及螺栓调节组件300,所述第一透明板100 的周围开设至少两个第一螺孔400,对应所述第一螺孔400在所述第二透明板 200的周围开设数量相同的第二螺孔500,通过所述螺栓调节组件300与所述第一螺孔400、所述第二螺孔500配合调节所述第一透明板100和所述第二透明板200之间的间距。
本发明实施例在具体实施时,待分离的脐带血液体通常由血袋或者其他容器储存。以血袋为例,将存有待分离的脐带血液体的血袋放置在所述第一透明板100和所述第二透明板200之间,利用螺栓调节组件300与所述第一螺孔400、所述第二螺孔500配合调节所述第一透明板100和所述第二透明板200之间的间距,挤压血袋内的脐带血液体,以实现脐带血有核细胞分离。
本发明实施例提供一种具体的螺栓调节组件300的结构。如图1所示,所述螺栓调节组件300包括螺丝310以及螺帽320,通过所述螺丝310配合所述第一螺孔400、所述第二螺孔500连接所述第一透明板100和所述第二透明板 200,所述螺丝310在穿过所述第一螺孔400以及所述第二螺孔500后连接所述螺帽320,在分离过程中,通过所述螺帽320调节所述第一透明板100和所述第二透明板200之间的间距。在使用过程中,螺帽320可以设置在整体装置的上方或者下方来进行调节,例如,螺帽320设置在第一透明板100的上端或者设置在所述第二透明板200的下端,具体以实际应用场景的需要来进行确定,本发明实施例所提供的图1仅仅只是示例,并不具体限定螺帽320的设置位置。
实施例2:
本发明实施例2,基于本发明实施例1所述的脐带血有核细胞分离装置,提供一种脐带血有核细胞分离方法。该方法在具体实施时,分别取体积50ml、 75ml和100ml的三份脐带血,加入脐带血体积20%的0.9%HES,转移入顶底三联袋,使用1400g,离心8分钟后,测试不同状态下白膜层的高度。夹板法(本发明实施例所提供的方法)离心后,直接放入分浆夹开始进行有核细胞的分离。传统的气包法,在气包包裹下离心,结束后连同气包取出,测量初始的白膜高度(位置一);气包放气后,记录白膜层的高度为位置二;将顶底三联袋放入分浆夹,在压力作用下,白膜上移,记录白膜高度为位置三。
表1.夹板法和气包法实验效果对比
表1示出了根据本发明实施例的脐带血有核细胞分离方法(夹板法)以及现有技术中的气包法的实验效果对比表。如表1所示,使用本发明实施例所提供的脐带血有核细胞分离方法(夹板法)可以有效避免离心后,分离前的白膜层位移,较好的解决了液面扰动问题。
在本发明实施例中,利用如实施例1所述的脐带血有核细胞分离装置,离心过程中螺帽控制夹板厚度,使血袋始终竖直不褶皱。分离过程中,两块透明板在分浆夹的推挤过程中不断靠拢,在两块夹板之间增加一定厚度的阻挡物,使的夹板在分离过程中不断靠拢,到达一定距离时停止分离,从而控制有核细胞悬液的厚度和体积。
本发明实施例还对离心加速度进行了优化,发明人通过实验发现,在使用 450g离心加速度的时候,具有最优的离心效果。
具体来说,加入脐带血体积20%的0.9%HES,使用顶底三联袋,通过如实施例1所述的装置固定顶底三联袋,使用不同的离心加速度离心8分钟后,将固定有离心液的脐带血有核细胞分离装置放入分浆夹中进行分离。结果如下表 2所示。
表2.不同离心加速度作用下的有核细胞回收率
离心加速度 | 1400g | 700g | 450g | 200g |
有核细胞回收率 | 82.63% | 86.09% | 89.39% | 76.70% |
显然,根据表2可以得出,离心加速度在450g时,有核细胞回收率最高,高达89.39%。
对于同一份脐血,加入脐带血体积20%的0.9%HES,使用顶底三联袋,450g 离心8分钟,分别使用夹板(夹板法)和使用气包(气包法)的比较。结果如图2所示。
下面本发明实施例将通过新方法(夹板法)与传统方法(富浆法)的对比,来进一步验证本发明实施例所提出的新方法的有益效果。
取五份脐血,每份分别使用新方法(夹板法)与传统方法(富浆法),分离后对比二者的有核细胞回收率,红细胞去除率,分离操作时间等等方面。富浆法:脐带血转入普通三联袋,加入脐带血1/5体积的0.9%HES,混匀,离心加速度90g,离心时间6min(刹车关闭),使用分浆夹去将血浆与有核细胞挤入三联袋中另一血浆袋,废弃红细胞层;再次离心,离心加速度400g,离心时间11min,使用分浆夹去除血浆层,即得有核细胞悬液。夹板法:脐带血转入顶底三联袋,加入脐带血1/5体积的0.9%HES,混匀,装入本发明夹板中,离心加速度450g,离心时间8min。连同夹板取出顶底三联袋,放入分浆夹中,同时去除血浆和红细胞,在分离过程中控制白膜层在三联袋的中部,直至分离结束。两种方法的分离效果对比见下表3。
表3.两种方法的分离效果对比
以上描述旨在是说明性的而不是限制性的。例如,上述示例(或其一个或更多方案)可以彼此组合使用。例如本领域普通技术人员在阅读上述描述时可以使用其它实施例。另外,在上述具体实施方式中,各种特征可以被分组在一起以简单化本公开。这不应解释为一种不要求保护的公开的特征对于任一权利要求是必要的意图。相反,本发明的主题可以少于特定的公开的实施例的全部特征。从而,以下权利要求书作为示例或实施例在此并入具体实施方式中,其中每个权利要求独立地作为单独的实施例,并且考虑这些实施例可以以各种组合或排列彼此组合。本发明的范围应参照所附权利要求以及这些权利要求赋权的等同形式的全部范围来确定。
Claims (10)
1.一种脐带血有核细胞分离装置,其特征在于,包括第一透明板、第二透明板以及螺栓调节组件,所述第一透明板的周围开设至少两个第一螺孔,对应所述第一螺孔在所述第二透明板的周围开设数量相同的第二螺孔,通过所述螺栓调节组件与所述第一螺孔、所述第二螺孔配合调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。
2.根据权利要求1所述的脐带血有核细胞分离装置,其特征在于,所述螺栓调节组件包括螺丝以及螺帽,通过所述螺丝配合所述第一螺孔、所述第二螺孔连接所述第一透明板和所述第二透明板,所述螺丝在穿过所述第一螺孔以及所述第二螺孔后连接所述螺帽,在分离过程中,通过所述螺帽调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。
3.一种脐带血有核细胞分离方法,其特征在于,使用如权利要求1或2所述的脐带血有核细胞分离装置,包括以下步骤:
在不同体积的多份脐带血中,加入脐带血体积15%-30%的0.9%HES,获得待分离液;
对通过所述脐带血有核细胞分离装置固定的待分离液进行离心获得离心液;
将固定有离心液的脐带血有核细胞分离装置放入分浆夹中进行分离。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,在不同体积的多份脐带血中,加入脐带血体积15%-30%的0.9%HES,获得待分离液后,转移入顶底三联袋中。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述不同体积的多份脐带血包括一份0-60ml的脐带血、一份60-90ml的脐带血以及一份大于90ml的脐带血。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,在恒定离心加速度的作用下,对通过所述脐带血有核细胞分离装置固定的待分离液进行离心获得离心液。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述恒定离心加速度为400g-1400g,其中g为重力加速度。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,对通过所述脐带血有核细胞分离装置固定的待分离液进行离心获得离心液,包括以下步骤:
将所述分离液转移入顶底三联袋中;
将所述顶底三联袋设置在所述第一透明板和所述第二透明板之间;
在离心过程中,通过所述螺栓调节组件调节所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,将固定有离心液的脐带血有核细胞分离装置放入分浆夹中进行分离,包括:
分离过程中,在所述第一透明板和所述第二透明板增加阻挡块,当所述第一透明板和所述第二透明板之间的间距小于等于所述阻挡块的厚度时,停止分离。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述阻挡块的厚度根据有核细胞悬液的厚度和体积来确定。
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