CN105567556B - 一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管及其应用 - Google Patents

一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，包括离心管本体，离心管本体上端设有离心管盖,离心管本体内设有隔膜层,离心管本体内壁上设有内螺纹，隔膜层外壁上设有外螺纹，离心管本体的内螺纹与隔膜层的外螺纹相配合，隔膜层上设有多个小孔。该离心管通过隔膜层将离心管分成装分离液的部分和加待检样本部分，有效避免了样本与分离液预混，减少了离心和取样时造成的样品污染，大大提高了离心分离的质量；同时，隔膜层可以根据要处理的样品类型及体积的不同，作隔膜层旋扭上下调整，使得隔膜层下端有个最佳分离液容积，扩大了应用范围。

Description

一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管及其应用
技术领域
本发明具体涉及一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管及其应用，主要适用于分离人或动物体液中的白细胞、红细胞、淋巴细胞、干细胞以及医疗诊断领域的循环肿瘤细胞。
背景技术
随着生物技术的快速发展，密度梯度离心技术成为了细胞分离与富集的常用生物技术方法，广泛应用于细胞生物学研究、细胞的再培养，尤其最近细胞治疗技术和循环肿瘤细胞在临床诊断和治疗领域应用的崛起，使得密度梯度离心技术走出了实验室。
密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或体液置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使混合样品穿过密度梯度层的沉降或上浮来达到细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种，利用这种现象可以分离体液中需要获取的具有特定密度的细胞。
而传统的密度梯度离心存在如下缺陷：1、进行将样本放置在分离液液面上操作时，很容易出现样本预混到分离液中的现象，而发生预混会使分离效果大打折扣；2、密度梯度离心时由于离心机晃动的造成不同细胞层间的相互污染，降低细胞纯度和回收率；3、离心完成后取样时由于各层细胞间没有物理隔断，容易误吸其它层的细胞，而操作造成的扰动也会干扰试验结果；4、黏附在试管壁上的目的细胞无法通过清洗的方式回收。
为了克服传统方式的缺陷，现在有设计带多孔隔膜的离心管来进行密度梯度离心分离，然而现有市场上的这种产品，它们的多孔隔膜层是固定的，使得分离液的容积不能根据不同实验要求做出调整，影响了实验的最佳结果，且适用范围比较窄。
发明内容
本发明的目的是克服现有每个离心管所能装的分离液体积固定，不可调整，适用范围窄的问题。
为此，本发明提供了一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，包括离心管本体，所述离心管本体上端设有离心管盖,所述离心管本体内设有隔膜层,离心管本体内壁上设有内螺纹，隔膜层外壁上设有外螺纹，离心管本体的内螺纹与隔膜层的外螺纹相配合，所述隔膜层上设有多个小孔。
进一步地，上述离心管本体上端外壁设有外螺纹，离心管盖内壁设有内螺纹，离心管本体的外螺纹与离心管盖的内螺纹相配合。
进一步地，上述内螺纹的凸面为弧形结构。
进一步地，上述隔膜层调节离心管本体下腔体积为10～20ml。
进一步地，上述小孔的孔径为0.5～0.8mm。
进一步地，上述隔膜层采用树脂颗粒热压制而成。
进一步地，上述隔膜层厚度为3mm。
进一步地，上述隔膜层设有配套的辅助塑料棒，辅助塑料棒包括下部的插板、上部的手柄以及中间的连接杆，隔膜层上设有插缝，辅助塑料棒下部的插板与插缝相配合，辅助塑料棒上部的手柄伸出离心管本体。
另外，本发明还提供了上述带多孔隔膜位置可调的密度梯度离心管的应用，具体包括如下步骤：
1)取无菌的该离心管本体，向其中加入设计量的分离液。
2)向离心管本体中放入隔膜层，通过隔膜层外螺纹与离心管本体的内螺纹相配合，旋扭调整隔膜层位置至隔膜层下部与分离液水平。
3)将待分离的样品加入到隔膜层上层，离心管本体盖紧离心管盖。
4)将步骤3)中装有待分离样品的离心管本体进行离心。
5)离心完成后，倒出隔膜层上层的样品至另一新离心管中。
6)用洗液清洗离心管本体的隔膜层上层，取出洗液至步骤5)中的新离心管中。
7)将新离心管中的样品进行离心，去上清液，得到目的组份。
具体地，上述步骤2)中隔膜层的位置调整通过辅助塑料棒完成，隔膜层上表面中心开设插缝，辅助塑料棒下端插入插缝中，旋转辅助塑料棒调节隔膜层的位置。
本发明的有益效果：
(1)本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管设置隔膜层，有效避免离心前待分离样本与离心管中分离液的预混合，以及离心后分离到隔膜层下端的组分回流到隔膜层上层造成上层组分的污染，提高试验成功率和分离效果。
(2)本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管设置的隔膜层位置可通过旋钮移动来调节隔膜层下端的不同容积，以使该离心管适应不同样本要求的分离，提高了离心管的使用灵活性，可以分离较小量的样品。
(3)本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管操作简单，结构简洁无死角，细胞回收率高。
以下将结合附图对本发明做进一步详细说明。
附图说明
图1是本发明中离心管本体的结构示意图。
图2是本发明中离心管盖的结构示意图。
图3是本发明中隔膜层的结构示意图。
图4是本发明中辅助塑料棒的结构示意图。
附图标记说明：1、离心管盖；2、离心管本体；3、隔膜层；4、小孔；5、内螺纹；6、插缝；7、辅助塑料棒。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例提供了一种如图1、图2和图3所示的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，包括离心管本体2，所述离心管本体2上端设有离心管盖1,所述离心管本体2内设有隔膜层3,离心管本体2通过隔膜层3将离心管分为盛装样本的上层空间和预装分离液的下层空间，离心管本体2内壁上设有内螺纹5，隔膜层3外壁上设有外螺纹，离心管本体2的内螺纹5与隔膜层3的外螺纹相配合，通过螺纹结构旋转隔膜层3使其上下移动，调整隔膜层3下端的空间容积，所述隔膜层3上设有多个小孔4。
其中一种实施方式，所述离心管本体2上端外壁设有外螺纹，离心管盖1内壁设有内螺纹，离心管盖1通过盖子内部内螺纹结构和离心管本体2上的外螺纹部分结合，保持离心管整体封闭性。
优选的，离心管本体2内壁的内螺纹5可使隔膜层3旋钮移动，内螺纹5的凸面为弧形结构，以防止不必要的细胞拦截。内螺纹5的高度范围保证隔膜层3调节离心管本体2下腔体积为10～20ml。隔膜层3设有使其旋钮配套的辅助塑料棒7，辅助塑料棒7包括下部的插板、上部的手柄以及中间的连接杆，隔膜层3上设有插缝6，辅助塑料棒7下部的插板与插缝6相配合，辅助塑料棒7上部的手柄伸出离心管本体2。而辅助塑料棒7中间的连接杆可以是可伸缩结构。
优选的，隔膜层3采用树脂颗粒热压制而成，性质稳定，加工工艺可靠，隔膜层厚度为3mm，隔膜层3上的小孔4的孔径控制为0.5～0.8mm。
综上所述，本发明提供的这种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管通过隔膜层将离心管分成装分离液的部分和加待检样本部分，有效避免了样本与分离液预混，减少了离心和取样时造成的样品污染，大大提高了离心分离的质量；同时，隔膜层可以根据要处理的样品类型及体积的不同，作隔膜层旋扭上下调整，使得隔膜层下端有个最佳分离液容积，扩大了应用范围。
实施例2：
本实施例以分离人外周血淋巴细胞为例，采用本发明的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管进行分离，具体包括如下步骤：
1)取无菌的该离心管本体2，向其中加入人外周血淋巴细胞分离液15ml。
2)向离心管本体2中放入隔膜层3，通过隔膜层3外螺纹与离心管本体2的内螺纹5相配合，旋扭调整隔膜层3位置至隔膜层3下部与分离液水平。
其中，隔膜层3的位置调整可以通过辅助塑料棒7完成，隔膜层3上表面中心开设插缝6，辅助塑料棒7下端插入插缝6中，旋转辅助塑料棒7调节隔膜层3的位置。辅助塑料棒7的长度大于离心管本体2的内螺纹5最底端到离心管本体2的长度，保证辅助塑料棒7上端在旋转过程中漏出离心管本体2顶部，便于对辅助塑料棒7进行操作。
3)将待分离的样品20ml加入到隔膜层3上层，离心管本体2盖紧离心管盖1。
4)将步骤3)中装有待分离样品的离心管本体2进行离心，设置离心力为1500g，时间为20min分钟。
5)离心完成后，倒出隔膜层3)上层的样品至另一新离心管中。
6)用与分离液等体积的PBS洗液清洗离心管本体2的隔膜层3上层，取出洗液至步骤5)中的新离心管中与含有目的细胞的溶液混合。
7)将新离心管中含有目的细胞的溶液于300g的离心力下离心10分钟，去除上清液，得到富集的目的细胞沉淀。
经检测，经过本实施例分离的淋巴细胞回收率可达到97%，纯度可达到82%以上，红细胞去除率大于99.9%。
以上例举仅仅是对本发明的举例说明，并不构成对本发明的保护范围的限制，凡是与本发明相同或相似的设计均属于本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，包括离心管本体(2)，其特征在于：所述离心管本体(2)上端设有离心管盖(1),所述离心管本体(2)内设有隔膜层(3),离心管本体(2)内壁上设有内螺纹(5)，隔膜层(3)外壁上设有外螺纹，离心管本体(2)的内螺纹(5)与隔膜层(3)的外螺纹相配合，所述隔膜层(3)上设有多个小孔(4)，所述隔膜层(3)设有配套的辅助塑料棒(7)，辅助塑料棒(7)包括下部的插板、上部的手柄以及中间的连接杆，隔膜层(3)上设有插缝(6)，辅助塑料棒(7)下部的插板与插缝(6)相配合，辅助塑料棒(7)上部的手柄伸出离心管本体(2)。
2.如权利要求1所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，其特征在于：所述离心管本体(2)上端外壁设有外螺纹，离心管盖(1)内壁设有内螺纹，离心管本体(2)的外螺纹与离心管盖(1)的内螺纹相配合。
3.如权利要求1所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，其特征在于：所述内螺纹(5)的凸面为弧形结构。
4.如权利要求1所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，其特征在于：所述隔膜层(3)调节离心管本体(2)下腔体积为10～20ml。
5.如权利要求1所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，其特征在于：所述小孔(4)的孔径为0.5～0.8mm。
6.如权利要求1所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，其特征在于：所述隔膜层(3)采用树脂颗粒热压制而成。
7.如权利要求6所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管，其特征在于：所述隔膜层(3)厚度为3mm。
8.如权利要求1～7任一项所述带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管的应用，其特征在于：包括如下步骤：
1)取无菌的该离心管本体(2)，向其中加入设计量的分离液；
2)向离心管本体(2)中放入隔膜层(3)，通过隔膜层(3)外螺纹与离心管本体(2)的内螺纹(5)相配合，旋扭调整隔膜层(3)位置至隔膜层(3)下部与分离液水平；
3)将待分离的样品加入到隔膜层(3)上层，离心管本体(2)盖紧离心管盖(1)；
4)将步骤3)中装有待分离样品的离心管本体(2)进行离心；
5)离心完成后，倒出隔膜层(3)上层的样品至另一新离心管中；
6)用洗液清洗离心管本体(2)的隔膜层(3)上层，取出洗液至步骤5)中的新离心管中；
7)将新离心管中的样品进行离心，去上清液，得到目的组份。
9.如权利要求8所述的带位置可调的多孔隔膜的密度梯度离心管的应用，其特征在于：所述步骤2)中隔膜层(3)的位置调整通过辅助塑料棒(7)完成，隔膜层(3)上表面中心开设插缝(6)，辅助塑料棒(7)下端插入插缝(6)中，旋转辅助塑料棒(7)调节隔膜层(3)的位置。
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