CN114404595A - Pd-1信号抑制剂的并用疗法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及PD‑1信号抑制剂的并用疗法。本发明提供抗PD‑1治疗的新颖的治疗战略。药物组合物,其包含选自下述(i)~(iii)的至少1种物质,且在给予PD‑1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期进行给予。(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质;(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质;以及(iii)氨基酸。
Description
本申请是申请日为2016年12月5日的中国专利申请 201680081286.8“PD-1信号抑制剂的并用疗法”的分案申请。
技术领域
本发明涉及PD-1(Programmed Cell Death-1,程序性细胞死亡-1) 信号抑制剂的并用疗法。
背景技术
近年来的临床试验的结果表明,抗PD-1抗体治疗是在各种癌症 中较以往的标准治疗更有效[非专利文献1~3]。在晚期肺癌患者的 PD-1抗体治疗的奏效率与以往的抗癌剂相比显著地提高而达到 20~30%。然而,事实上仍有约半数左右的患者显示出无应答性。目 前几乎尚未知晓为何这些患者对PD-1抗体治疗无应答。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:Bramer J,Reckamp K,et al:Nivolumab versus Docetaxel inAdvanced Nonsquamous Non-Small-Cell Lung Cancer.N Engl J Med, 373:1627-1639,2015.
非专利文献2:Hamanishi J,Mandai M,Ikeda T,et al:Safety and AntitumorActivity of Anti-PD-1 Antibody,Nivoluimab,in Patients With Platinum-ResistantOvarian Cancer.J Clin Oncol,33:4015-4022,2015.
非专利文献3:Motzer RJ,Escudier B,McDermott DF,et al:Nivolumab, 373:1803-1813,2015.。
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于提供抗PD-1抗体治疗的新颖的治疗战略。
用于解决课题的手段
抗PD-1抗体治疗不同于以往的具有直接的癌细胞杀伤作用的抗 癌剂,是通过使抗肿瘤免疫活化而抑制癌增殖。若存在如支持抗肿瘤 免疫的试剂,则通过并用可提高抗肿瘤效果,而期待也可适用于无应 答患者。
本发明人发现,若将PD-1信号抑制抗体与ROS(Reactive Oxygen Species)发生剂或线粒体膜电位控制剂(解偶联剂)并用,则抗肿瘤效果 协同性地提高。若单独使用ROS发生剂、或线粒体膜电位控制剂, 则在活体内未发挥出抗肿瘤效果。根据以上的结果认为,ROS发生 剂、或线粒体膜电位控制剂具有通过与PD-1信号抑制抗体并用,支 持抗肿瘤免疫,而协同性地抑制癌增殖的效果。
本发明的要旨如下所述。
(1)药物组合物,其包含选自下述(i)~(iii)的至少1种物质,且在 给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期进行给予:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
(2)(1)所述的药物组合物,其中,PD-1信号抑制剂为抗体。
(3)(1)或(2)所述的药物组合物,其中,抗体为选自下述的至少1 种抗体:抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗PD-L2抗体。
(4)(1)~(3)中任一项所述的药物组合物,其中,ROS发生剂为选 自下述的至少1种化合物:氢过氧化叔丁基、羰基氰对三氟甲氧基苯 腙、2,4-二硝基苯酚、2,3-二甲氧基-1,4-萘醌和它们的类似物。
(5)(1)~(3)中任一项所述的药物组合物,其中,显示解偶联作用 的物质为选自下述的至少1种化合物:羰基氰对三氟甲氧基苯腙、2,4- 二硝基苯酚、羰基氰间氯苯腙、水杨酸、4,4′-[戊烷-1,5-二基双(氧基)] 二苯甲脒)、2-(2-(2,6-二氯苯基氨基)苯基)乙酸、4-羟基-2-甲基-N-(2- 吡啶基)-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰胺-1,1-二氧化物、2-{1-[(4-氯苯基) 羰基]-5-甲氧基-2-甲基-1H-吲哚-3-基}乙酸、N-(4-硝基-2-苯氧基苯基) 甲磺酰胺、4-羟基-2-甲基-N-(5-甲基-2-噻唑基)-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲 酰胺-1,1-二氧化物、氯硝柳胺乙醇胺盐、4-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯 氧基)喹啉-2-羧酸3-甲基丁-2-烯酯和它们的类似物。
(6)(1)~(3)中任一项所述的药物组合物,其中,控制ROS发生剂 或显示解偶联作用的物质的下游信号的物质为控制 mTOR(mammalian target of rapamycin)、AMPK(Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase)、SIRT(Sirtuin)1、 PGC-1α(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α)/转录因子复合物(包含PGC-1α的转录因子复合物)和 Foxo1中的任一种或其以上的物质。
(7)(6)中所述的药物组合物,其中,控制mTOR的物质为选自下 述的至少1种化合物:4,6-二-4-吗啉基-N-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2- 胺、磷脂酸和它们的类似物。
(8)(6)中所述的药物组合物,其中,控制AMPK的物质为选自下 述的至少1种化合物:6,7-二氢-4-羟基-3-(2′-羟基[1,1′-联苯]-4-基)-6- 氧代-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-甲腈、5-氨基咪唑-4-甲酰胺1-β,-D-呋喃核 糖苷、N,N-二甲双胍、6-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-(4-吡啶基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶和它们的类似物。
(9)(6)中所述的药物组合物,其中,控制SIRT1的物质为选自下 述的至少1种化合物:反式-3,5,4′-三羟基芪、N-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基) 咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)苯基)喹喔啉-2-甲酰胺、N-苄基-3,5-二乙氧羰 基-4-苯基-1,4-二氢吡啶、2-氨基-N-环戊基-1-(3-甲氧基丙基)-1H-吡咯 并[2,3-b]喹喔啉-3-甲酰胺、烟酰胺单核苷酸和它们的类似物。
(10)(6)中所述的药物组合物,其中,控制PGC-1α/转录因子复合 物(包含PGC-1α的转录因子复合物)的物质为选自下述的至少1种化 合物:2-(4-{2-[(4-氯苯甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)-2-甲基丙酸、9-顺 式,12-顺式-十八碳二烯酸)、2-[4-(4-氯苯甲酰基)苯氧基]-2-甲基丙酸 -d6 1-甲基乙酯、(十一烷硫基)-乙酸、4-甲基-5-(2-吡嗪基)-3-二硫杂环 戊烯硫酮、N,N-二甲基甲酰胺、3-[4-(2,4-双(三氟甲基)苄氧基)-3-甲氧 基苯基]-2-氰基-n-(5-三氟甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丙烯酰胺和它们的 类似物。
(11)(6)中所述的药物组合物,其中,控制Foxo1的物质为选自下 述的至少1种化合物:5-氨基-7-(环己基氨基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4- 二氢喹啉-3-羧酸、2-环戊基-N-{2,4-二氯-3-[(异喹啉-5-基氧基)甲基] 苯基}-N-甲基乙酰胺及其类似物。
(12)(1)~(3)中任一项所述的药物组合物,其中,氨基酸为选自下 述的至少1种化合物:色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪氨 酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、 天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸和它们的类似物。
(13)(1)~(12)中任一项所述的药物组合物,其被用作抗癌剂、感 染症治疗剂或它们的组合。
(14)(1)~(13)中任一项所述的药物组合物,其分别给予PD-1信号 抑制剂与选自下述(i)~(iii)的至少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
(15)(1)~(13)中任一项所述的药物组合物,其为包含PD-1信号抑 制剂与选自下述(i)~(iii)的至少1种物质的调配剂:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
(16)PD-1信号抑制活性增强剂,其包含选自下述(i)~(iii)的至少1 种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
(17)癌症、感染症或它们的组合的治疗方法,其包括下述的步 骤:在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期,以药物 上有效的量对受验者或受验动物给予选自下述(i)~(iii)的至少1种物 质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
(18)选自下述(i)~(iii)的至少1种物质的应用,其是用于治疗癌 症、感染症或它们的组合,且在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或 同时的任一时期,给予选自下述(i)~(iii)的至少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
(19)选自下述(i)~(iii)的至少1种物质的应用,其是用于在治疗癌 症、感染症或它们的组合的方法中应用,且给予选自下述(i)~(iii)的至 少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
发明效果
通过将ROS发生剂或控制其下游信号的物质和/或显示解偶联作 用的物质或控制其下游信号的物质与PD-1信号抑制剂并用,协同性 地提高抗肿瘤效果。
本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本专利申请、特愿 2015-238511和特愿2016-119695的说明书和/或附图中所记载的内 容。
附图简述
[图1]由PD-1抑制与化学试剂所引起的线粒体活化的假设图。 a)PD-1抑制将肿瘤反应性T细胞的线粒体活化。b)ROS诱导剂或解 偶联剂使细胞的ROS增加。c)细胞的ROS将AMPK与mTOR活化, 其结果,除了T-bet的表达以外,PGC-1a也被活化。d)与PGC-1a 结合的NRF(Neutrophil Releasing Factor)或PPARs(Peroxisome Proliferator ActivatedReceptors)的活化引起线粒体中的正反馈活化。
[图2]由PD-1抑制所引起的TR(Tumor-Reactive)CTL(Cytotoxic T Lymphocyte)的活体内检测与其线粒体的活性。α~d)是实验步骤的 概要图。将利用Cell Trace标记的CD45.1+CD8+T细胞移植至CD45.2+ CD8-/-小鼠。对小鼠接种MC38,并利用PD-L1抗体进行治疗。对所 属淋巴结的CD8+CD45.1+T细胞设门并进行分析(a)。显示该门内的 细胞的CD62L与Cell Trace的强度(b)(左)。对高分裂细胞的频率进行 组间比较。数据是显示4~5只小鼠的平均值±标准误差。*p<0.05,单 向方差分析(one-way analysis of variance)(右)(b)。在(a)中所示的门内 的细胞中,对Cell Trace和担载有mLama4肽或无关系肽的 MHC(Major Histocompatibility Complex)四聚物的阳性率以进行了 PD-L1抗体治疗的组进行分析(c)。利用与线粒体的活性相关的试剂将 进行了PD-L1抗体治疗的所属淋巴结细胞进行染色。显示(a)的门中 的代表性FACS(Fluorescence-Activated Cell Sorting)数据(上图)(d)。对 各线粒体染色试剂的荧光强度的中央值分析为高分裂(高)与低分裂 (低)并加以比较。数据是显示5只小鼠的平均值±标准误差。*p<0.05, ****p<0.0001,单向方差分析(下图)(d)。数据是显示三个独立的实 验中的代表性者(α~d)。e、f)向MC38带癌野生型小鼠每4天给予3 次PD-L1抗体。利用XFe96分析器对自治疗或未治疗小鼠分离的所 属淋巴结的CD8+T细胞的氧消耗量(OCR)进行计测。在第二次治疗 的2天后混合3只小鼠的细胞并进行分析(e)。对定义为(寡霉素 (oligomycin)给予后的最终计测值)-(寡霉素给予后的最低计测值)的ATP(Adenosine Triphosphate)转化率进行计测(f)。数据是显示3孔的平均值±标准误差。****p<0.0001,2标本的学生t检验分布。数据 是显示两个独立的实验中的代表性数据。
[图3]PD-L1抗体治疗与活性氧发生剂Luperox的协同效果。a) 对小鼠接种MC38 3週,每7天给予氢过氧化叔丁基溶液(Luperox)。 显示肿瘤的体积。数据是显示5只小鼠的平均值±标准误差。b)是并 用治疗的步骤的概要图。c)对小鼠接种MC38 7天后给予PD-L1抗体与Luperox。显示肿瘤的体积与存活曲线。数据是显示5只小鼠的 平均值±标准误差。*p<0.05,**p<0.01,2标本的t检验分布(抗PD-L1 相对于抗PD-L1+Luperox)。数据是显示两个独立的实验中的代表性 者。
[图4]解偶联剂的协同效果与ROS相关。a)如图3b所示,在相 同的步骤中向MC38带癌小鼠给予FCCP或DNP与PD-L1抗体。显 示肿瘤的体积与存活曲线。数据是显示5~6只小鼠的平均值±标准误 差。*p<0.05,**p<0.01,2标本的t检验分布(抗PD-L1相对于抗 PD-L1+FCCP或DNP)。b)在与(a)相同的步骤中向MC38带癌小鼠仅 给予FCCP或DNP。显示肿瘤的体积。数据是显示5只小鼠的平均 值±标准误差。c)向MC38带癌小鼠给予ROS清除剂(MnTBAP)、 PD-L1抗体及FCCP(左)或DNP(右)。数据是显示4~5只小鼠的平均 值±标准误差。*p<0.05,**p<0.01,2标本的t检验分布(并用治疗 相对于并用治疗+MnTBAP)。DNP并用治疗中的对照IgG组的小鼠(右) 是与图4b共用。数据是显示两个独立的实验中的代表性者。
[图5]通过同时并用DNP与Luperox而增进抗肿瘤效果。在与 图3b同样的步骤中,向MC38带癌小鼠给予DNP或Luperox、或其 两者与抗PD-L1抗体。显示肿瘤的体积。数据是显示5~6只小鼠的 平均值±标准误差。数据是显示两个独立的实验中的代表性数据。
[图6]由FCCP给予所引起的效应CD8+T细胞的增加。a)如图3b所示,在相同的步骤中向MC38带癌小鼠给予PD-L1抗体与FCCP。 在第14天利用抗CD8、CD62L、CD44抗体将所属淋巴结的细胞进 行染色,对CD8+T细胞设门。基于CD62L与CD44的强度,对P1~P3 的细胞组进行定义(上图)。计算各组中的P1~P3的细胞的绝对数。数 据是显示5只小鼠的平均值±标准误差。*p<0.05,单向方差分析(下 图)。b)利用各线粒体染料将给予了PD-L1抗体与FCCP的小鼠的所 属淋巴结CD8+T细胞进行染色。P1~P3的代表性FACS分布图(上段 图)。各组中的利用各线粒体染料进行染色的P3细胞组的代表性 FACS分布图(中段图)。将利用各染料进行染色的P1~P3的MFI(Mean Fluorescence Intensity)在给予组间进行比较。颜色是与P1~P3细胞组 对应。数据是显示5只小鼠的平均值±标准误差(下段图)。*p<0.05, **p<0.01,单向方差分析。c)在肿瘤给予后第11天将经酶处理的癌 组织的细胞利用抗CD8、CD45、CD62L、CD44抗体进行染色。对 CD45+CD8+T细胞设门,并对该CD62L与CD44的表型进行分析(左 图)。对CD45+T细胞中的CD8+T细胞的频率与CD45+CD8+T细胞 的绝对数进行组间比较(右图)。数据是显示5只小鼠的平均值±标准 误差。*p<0.05,**p<0.01,单向方差分析。FACS数据是显示各组 的5只小鼠数据中的代表性者。数据是显示两个独立的实验中的代表 性者。
[图7]由解偶联剂与PD-L1抗体的并用所引起的协同效果是与 mTOR和AMPK的途径相关。a)在DNP或FCCP的并用治疗时,混 合5只小鼠的所属淋巴结细胞,将CD8+T细胞分离。通过蛋白质印 迹法对AMPK与ACC(Acetyl-CoA Carboxylase)、mTOR、S6K的磷 酸化和SIRT1与4EBP1(4E-binding protein 1)的表达进行分析。b)在 与图3b同样的步骤中,向MC38带癌小鼠将AMPK活性剂(A76966) 与mTOR活性剂(MHY1485)、或其两者与PD-L1小鼠抗体一并给予。 显示肿瘤的体积与存活曲线。数据是显示5只小鼠的平均值±标准误 差。*p<0.05,**p<0.01,2标本的t检验分布(抗PD-L1抗体相对于 并用治疗)。星号的各颜色是与相同的颜色所示的组一致。c)向MC38 带癌小鼠给予SIRT1活性剂(白藜芦醇)与PD-L1抗体。显示肿瘤的体 积与存活曲线。数据是显示5只小鼠的平均值±标准误差。*p<0.05, **p<0.01,2标本的t检验分布(抗PD-L1抗体相对于并用治疗)。
[图8]mTOR与AMPK的不同活化状态是与CD8+T细胞的分化 阶段相对应。向MC38带癌小鼠给予DNP与抗PD-L1抗体。在第1 次治疗的次日,将所属淋巴结的细胞利用针对CD8、CD62L、CD44、 p-mTOR和p-AMPK的抗体进行染色。如图6a所示,对P1~P3设门, 并对p-AMPK与p-mTOR的荧光强度进行比较。数据是显示两个独 立的实验中的代表性者。
[图9]PD-L1抗体治疗与AMPK抑制剂的协同效果。在与图3b同样的步骤中,向MC38带癌小鼠给予化合物C与抗PD-L1抗体。 显示肿瘤的体积。
[图10]PD-L1抗体治疗与AMPK抑制剂的协同效果。在与图3b同样的步骤中,向RENCA(renal cancer)带癌小鼠给予化合物C与抗 PD-L1抗体。显示肿瘤的体积。
[图11]PD-L1抗体治疗与PGC-1α/转录因子复合物活性剂的协同 效果。在与图3b同样的步骤中,向MC38带癌小鼠给予NRF2活化 剂(Oltipraz,奥替普拉)或PPARs活化剂(Bezafibrate,苯扎贝特)与抗 PD-L1抗体。显示肿瘤的体积。数据是显示5只小鼠的平均值±标准 误差。*p<0.05,双尾学生T检验(PD-L1抗体相对于各并用疗法)。 图11a:使用FCCP、mTOR激活剂或AMPK激活剂与PD-L1抗体的 联合治疗增加了PGC-1α蛋白和mRNA的表达水平。图11b:奥替 普拉和苯扎贝特均增强了PD-L1抗体的肿瘤生长抑制作用,并提高 了带癌小鼠的存活率。
[图12]Luperox和FCCP几乎不影响活体内的肿瘤细胞。a)肿瘤 组织是在自第2次的FCCP或Luperox单独给予起1天后进行回收。 在酶消化后,肿瘤细胞是通过可去除肿瘤细胞以外之细胞的细胞分离 试剂盒而加以筛选。所分离的肿瘤细胞进一步通过Aria进行纯化, 并用于以下的实验。b)肿瘤细胞是利用将PD-L1、I型MHC、 CD155(TIGIT的配体)和VISTA作为靶的抗体、或将线粒体质量、膜 电位或超氧化物染色的色素进行染色。c)线粒体能量代谢或凋亡相 关基因的表达水平是使用RT2 profiler PCR试剂盒进行研究。所表示的基因名是在82个基因中与未处理的肿瘤细胞相比显著地增加2倍 以上者。
[图13]线粒体活化相关试剂的抗肿瘤协同效果。a)并用治疗时 间表的模式图。b)对小鼠进行PD-L1抗体与巴拉刈(Paraquat)的并用 治疗。数据是显示5~6只鼠之值的平均值±标准误差。数据是2次独 立的实验的代表。
[图14]线粒体活化相关试剂在不同的肿瘤或小鼠的系统中也发 挥功能。向移植了纤维肉瘤MethA的BALB/c小鼠,依据图3的时 间表给予PD-L1抗体与FCCP、Luperox、Parawuat或奥替普拉。显 示肿瘤的尺寸。数据是显示5只鼠之值的平均值±标准误差。*p<0.05, 双尾学生t检验(PD-L1抗体相对于各自的并用治疗)。
[图15]T-bet与IFN-γ产生是在FCCP或苯扎贝特与PD-L1抗体 的并用治疗组中增加。a)利用流式细胞仪,对源自利用PD-L1抗体 与FCCP进行并用治疗的小鼠的所属淋巴结的CD8阳性细胞中的 T-bet与Eomes表达进行分析。显示代表性FACS数据(上图)。算出源 自利用PD-L1抗体与FCCP或苯扎贝特进行并用治疗的小鼠的所属 淋巴结中的T-bet与Eomes阳性T细胞的频率与数量(下图)。b)将进 行了酶消化的肿瘤组织在37℃下培养6小时,并进行源自利用PD-L1 抗体与FCCP或苯扎贝特进行并用治疗的小鼠的CD8阳性细胞中的 IFN-γ的细胞内染色。显示代表性FACS数据(左图)与CD8阳性细胞 内的IFN-γ的频率(右图)。数据是显示5只鼠之值的平均值±标准误差。 *p<0.05,**p<0.01是利用单向方差分析所获得者。
[图16]PD-L1抗体治疗与Foxo1抑制剂:AS1842856的协同效 果。对BALB/c小鼠接种5×105的MethA,在7天后给予抗PD-L1抗 体(80μg)与Foxo1抑制剂(2mg/kg)。给予时间表依据图3。显示肿瘤 的体积。
[图17]血中代谢物(氨基酸)的变化。通过GC-MS分析,对5只 PD-1-/-小鼠与野生型小鼠的血清中所含的氨基酸的量进行鉴定。图显 示将野生型的值设为1时的PD-1-/-小鼠的值。N=5,*p<0.05,** p<0.01,***p<0.001,****p<0.0001,t-检验(t-test).
[图18]Aminoleban的组成。
[图19]PD-L1抗体治疗与Aminoleban的协同效果。在对BALB/c 小鼠接种5×105的纤维肉瘤MethA 7天后,给予抗PD-L1抗体(60μg) 与Aminoleban(400μl/mouse)。给予时间表依据图3。
具体实施方式
以下,对本发明详细地进行说明。
本发明提供药物组合物,其包含选自下述(i)~(iii)的至少1种物 质,且在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期进行给 予:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
作为ROS发生剂,可例示:氢过氧化叔丁基(Luperox)、羰基氰 对三氟甲氧基苯腙(FCCP)、2,4-二硝基苯酚(DNP)、2,3-二甲氧基-1,4- 萘醌(DMNQ)、2-甲基萘-1,4-二酮(甲萘醌)、1,1′-二甲基-4,4′-联吡啶鎓 二氯化物(巴拉刈)和它们的类似物。
在ROS发生剂的下游存在mTOR、ATM(ataxia telangiectasia mutated protein,血管扩张性失调症变异蛋白质)、AMPK(AMP-activated protein kinase)等信号转导(图1),本发明的药物 组合物可含有控制这些中的任一种的物质。控制是包括激活与失活 (不活化)的概念。
ROS下游信号的mTOR将细胞的糖酵解进行活化,引起细胞分 裂所需的蛋白质、脂质、核酸的扩增(同化作用的促进)。由此,认为 进一步强化通过PD-1信号抑制而增强的T细胞受体信号。若利用解 偶联物质的下游信号使AMPK活化,则引起线粒体的生物合成,能 量的产生所需的氧化磷酸化在线粒体内进行活化。由此,认为进一步 强化通过PD-1信号抑制而增强的T细胞受体信号。
作为控制mTOR的物质,可例示:4,6-二吗啉代-N-(4-硝基苯 基)-1,3,5-三嗪-2-胺、4,6-二-4-吗啉基-N-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2-胺 (MHY1485)、磷脂酸(PA)和它们的类似物,这些物质将mTOR激活。
AMPK也称为能量传感器,因能量消耗而ATP量减少,若AMP 量增加则进行活化。AMPK的作用是抑制能量的消耗,向积蓄能量的 方向控制代谢。因此,若AMPK进行活化,则会抑制生物合成(同化 作用的抑制),自线粒体的ATP产生变得活跃(异化作用的促进)1、2、3。在AMPK信号的下游存在PGC-1a与转录因子的复合物,由此,活化 线粒体的生物合成或氧化磷酸化代谢4。若将AMPK活化,则可见糖 尿病的改善,因此一部分的AMPK活化剂被用作糖尿病治疗药。作 为控制AMPK的物质,可例示:6,7-二氢-4-羟基-3-(2′-羟基[1,1′-联 苯]-4-基)-6-氧代-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-甲腈(A769662)、5-氨基咪唑-4- 甲酰胺1-β,-D-呋喃核糖苷(AICAR)、N,N-二甲双胍(Metformin)和它们 的类似物,这些物质将AMPK激活。作为将AMPK失活的物质(AMPK 的抑制剂),可例示:6-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-(4-吡啶基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶(化合物C)和它们的类似物。
SIRT1为脱乙酰化酶,将PGC-1α或Foxo1等转录相关因子进行 活化。若SIRT1进行活化,则形成对于ROS或应激的耐性。SIRT-1 也经AMPK活化,通过PGC-1a的活化而促进线粒体的生物合成或氧 化磷酸化。通过SIRT1的活化而对外部、内部应激形成耐性,所以也 认为与长寿相关5、6。作为控制SIRT1的物质,可例示:反式-3,5,4′- 三羟基芪(resveratrol,白藜芦醇)、N-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)咪唑并[2,1-b] 噻唑-6-基)苯基)喹喔啉-2-甲酰胺、N-苄基-3,5-二乙氧羰基-4-苯基-1,4- 二氢吡啶、2-氨基-N-环戊基-1-(3-甲氧基丙基)-1H-吡咯并[2,3-b]喹喔 啉-3-甲酰胺、烟酰胺单核苷酸和它们的类似物,这些物质将SIRT1 活化。
PGC-1α称为转录因子共活化剂,与和各种线粒体活性相关的转 录因子形成复合物(包含PGC-1α的转录因子复合物)。例如PGC-1α 与转录因子TRβ1、NRFs、ERRs(Estrogenreceptor-related receptors)、 PPARα/β/TM等形成复合物,促进线粒体的活化、脂质代谢的促进、活 性氧无毒化。将与PGC-1α结合的转录因子作为靶的药剂被用作糖尿 病治疗药、中性脂肪降低药4、7、8。作为控制PGC-1α/转录因子复合物 (包含PGC-1α的转录因子复合物)的物质,可例示:2-(4-{2-[(4-氯苯 甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)-2-甲基丙酸(苯扎贝特)、9-顺式,12-顺式- 十八碳二烯酸)、2-[4-(4-氯苯甲酰基)苯氧基]-2-甲基丙酸-d6 1-甲基乙 酯、(十一烷硫基)-乙酸、4-甲基-5-(2-吡嗪基)-3-二硫杂环戊烯硫酮(奥 替普拉)、N,N-二甲基甲酰胺、3-[4-(2,4-双(三氟甲基)苄氧基)-3-甲氧 基苯基]-2-氰基-n-(5-三氟甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丙烯酰胺和它们的 类似物,这些物质控制PGC-1α/转录因子复合物(包含PGC-1α的转录 因子复合物)。
作为显示解偶联作用的物质,可例示:羰基氰对三氟甲氧基苯腙 (FCCP)、2,4-二硝基苯酚(DNP)、羰基氰间氯苯腙(CCCP)、水杨酸、 4,4′-[戊烷-1,5-二基双(氧基)]二苯甲脒)(戊烷脒)、2-(2-(2,6-二氯苯基氨 基)苯基)乙酸(双氯芬酸)、4-羟基-2-甲基-N-(2-吡啶基)-2H-1,2-苯并噻 嗪-3-甲酰胺-1,1-二氧化物(吡罗昔康)、2-{1-[(4-氯苯基)羰基]-5-甲氧 基-2-甲基-1H-吲哚-3-基}乙酸(吲哚美辛)、(N-(4-硝基-2-苯氧基苯基) 甲磺酰胺(尼美舒利)、4-羟基-2-甲基-N-(5-甲基-2-噻唑基)-2H-1,2-苯 并噻嗪-3-甲酰胺-1,1-二氧化物(美洛昔康)、氯硝柳胺乙醇胺盐(NEN)、 4-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯氧基)喹啉-2-羧酸3-甲基丁-2-烯酯和它们 的类似物。
解偶联剂的下游存在mTOR、AMPK(AMP-activated protein kinase)、SIRT1、PGC-1α/转录因子复合物(包含PGC-1α的转录因子 复合物)等信号转导(图1),本发明的药物组合物也可包含控制这些的 任一种的物质。控制是包含激活与失活的概念。
以上,对控制mTOR、AMPK、SIRT1和PGC-1α/转录因子复合 物(包含PGC-1α的转录因子复合物)的物质进行了说明。
Foxo1是位于mTOR下游的转录因子。若因mTOR的活化进行 磷酸化,则其会自核内移动至细胞质,而不引起转录开始。由此,抑 制EOMES,增强CTL的活化所需的T-bet的表达。(Staron MM et a1. Immunity.41:802-14,2014.Rao RR et al.36:374-87,2012.)
另外,Foxo1进行PGC-1a结合,使促进糖异生的基因表达活化。 糖异生由于是基于三羧酸循环(TCA cycle)的代谢产物而合成糖,所以 氧化磷酸化向受到抑制的方向发挥作用。另外,根据报道,在2型糖 尿病的模型中,若抑制Foxo1则线粒体功能不全康复。由此也认为, 若抑制Foxo1,则线粒体活化。(Coppari R et al.Nat Clin Pract EndocrinolMetab.3:160-6,2009.Puigserver P et al.Nature.423:550-5, 2003.
作为控制Foxo1的物质,可例示:5-氨基-7-(环己基氨基)-1-乙基 -6-氟-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸、2-环戊基-N-{2,4-二氯-3-[(异喹啉 -5-基氧基)甲基]苯基}-N-甲基乙酰胺和它们的类似物。
作为氨基酸,可例示:色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、 酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精 氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、 脯氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸和它们的类似物。氨基酸可为1种 也可为2种以上的组合。氨基酸可为L-氨基酸、D-氨基酸或DL-氨 基酸的任一者。若抑制PD-1,则氨基酸等代谢物的同化作用(细胞增 殖)变得剧烈而被消耗。若向其中导入成为细胞等之骨架的氨基酸, 则认为细胞增殖进一步发展。若补充氯基酸而细胞增殖变快,则 mTOR向活化的方向进行。例如有作为氨基酸制剂的Aminoleban将mTOR活化的报道(Tamanna N,MahmoodN.Int Sch Res Notices. 2014:235619,2014)。在后述实施例中,由于Aminoleban可见与PD-L1 抗体治疗的协同效果,所以认为优选Aminoleban中所含的氨基酸中 的1种或2种以上的组合。
上述(i)~(iii)的物质也可为盐的形态。盐只要是药物上可接受的盐 即可,作为此种盐,可列举:钠盐、钾盐、锂盐之类的碱金属盐、钙 盐、镁盐之类的碱土金属盐、铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐 等金属盐;铵盐之类的无机盐、叔辛基胺盐、二苄基胺盐、吗啉盐、 葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、 二乙基胺盐、三乙基胺盐、二环己基胺盐、N,N′-二苄基乙二胺盐、 氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基-苯乙基胺盐、哌 嗪盐、四甲基铵盐、三(羟基甲基)氨基甲烷盐之类的有机盐等胺盐; 氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐之类的氢卤酸盐、硝酸盐、 过氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等无机酸盐;甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、 乙磺酸盐之类的低级烷烃磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐之类的芳 基磺酸盐、乙酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒 石酸盐、草酸盐、马来酸盐等有机酸盐;甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨 酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐之类的氨基酸盐等。这些盐 可通过公知的方法进行制造。
另外,上述(i)~(iii)的物质及其盐也可与水、甲醇、乙醇、乙腈等 溶剂而生成溶剂合物。另外,溶剂合物可为单独者也可为多种的混合 物。
在本说明书中,“类似物”是指无需较大的结构变化,显示略微追 加变更侧链等所得的同等效果的物质,是包含药品中的先导化合物的 衍生物、针对活性代谢物的前体药物、针对前体药物的活性代谢物等 的概念。作为前体药物,可例示:活性化合物的氨基经酰化、烷基化、 磷酸化的化合物(例如,活性化合物的氨基经二十烷酰化、丙氨酰化、 戊基氨基羰基化、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基羰基 化、四氢呋喃化、吡咯烷基甲基化、特戊酰氧基甲基化、叔丁基化的 化合物等)、活性化合物的羟基经酰化、烷基化、磷酸化、硼酸化的 化合物(例如,活性化合物的羟基经乙酰化、棕榈酰化、丙酰化、特 戊酰化、琥珀酰化、富马酰化、丙氨酰化、二甲基氨基甲基羰基化的 化合物等)、活性化合物的羧基经酯化、酰胺化的化合物(例如,活性 化合物的羧基经乙酯化、苯酯化、羧基甲酯化、二甲基氨基甲酯化、 特戊酰氧基甲酯化、乙氧基羰氧基乙酯化、酞酯化、(5-甲基-2-氧代 -1,3-二氧杂环戊烷-4-基)甲酯化、环己氧基羰基乙酯化、甲基酰胺化 的化合物等)等。
在本说明书中,“PD-1信号”是指PD-1所承担的信息转导机制, 作为其一,可例示PD-1与作为其配体的PD-L1、PD-L2共同抑制T 细胞的活化的信息转导机制。PD-1(Programmed cell death-1)是在活化 的T细胞或B细胞中表达的膜蛋白质,作为其配体的PD-L1与PD-L2 是在单核细胞或树突细胞等抗原呈递细胞、癌等各种细胞中表达。 PD-1、PD-L1和PD-L2是作为抑制T细胞的活化的抑制因子而发挥 作用。某种癌细胞或病毒感染细胞通过表达PD-1的配体,而抑制T 细胞的活化,逃避宿主的免疫监视。
作为PD-1信号抑制剂,可列举与PD-1、PD-L1或PD-L2特异 性地结合的物质,作为此种物质,可为蛋白质、多肽、寡肽、核酸(包 含天然型核酸、人工核酸)、低分子有机化合物、无机化合物、细胞 提取物、源自动植物或土壤等的提取物等。物质可为天然物也可为合成物。优选的PD-1信号抑制剂为抗体,更优选为抗PD-1抗体、抗 PD-L1抗体、抗PD-L2抗体等的抗体。抗体只要是可抑制PD-1信号 者即可,可为多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、人源 化抗体、人型抗体的任一种。这些抗体的制造方法为公知方法。抗体 可为源自人、小鼠、大鼠、兔、山羊、豚鼠等任一种生物的抗体。另 外,在本说明书中,抗体是指也包含Fab、F(ab)′2、ScFv、双抗体、 VH、VL、Sc(Fv)2、双特异性sc(Fv)2、微型抗体、scFv-Fc单体、scFv-Fc 二聚物等的低分子化所得物的概念。
本发明的药物组合物可用作抗癌剂、感染症治疗剂或它们的组 合。
在将本发明的药物组合物作为抗癌剂给予的情形下,作为成为对 象的癌或肿瘤,可例示:白血病、淋巴瘤(霍奇金病、非霍奇金淋巴 瘤等)、多发性骨髓瘤、脑肿瘤、乳癌、子宫体癌、子宫颈癌、卵巢 癌、食道癌、胃癌、阑尾癌、大肠癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺 癌、肾上腺癌、消化道间质肿瘤、间皮瘤、头颈部癌(咽喉癌等)、口 腔癌(口底癌等)、牙龈癌、舌癌、颊粘膜癌、唾液腺癌、鼻窦癌(上颌 窦癌、前额窦癌、筛窦癌、蝶窦癌等)、甲状腺癌、肾癌、肺癌、骨 肉瘤、前列腺癌、睾丸肿瘤(睾丸癌)、肾细胞癌、膀胱癌、横纹肌肉 瘤、皮肤癌(基底细胞癌、鳞状细胞癌(Squamous Cell carcinoma)、恶 性黑色素瘤(melanoma,黑色素瘤)、日光性角化症、鲍文氏病(Bowen′s disease)、佩吉特氏病(Paget′s disease)等)、肛门癌等,但并不限定于这 些。
在将本发明的药物组合物作为感染症治疗剂给予的情形下,作为 成为对象的感染症,可例示:细菌感染症(由链球菌(A组β链球菌、 肺炎球菌等)、金黄色葡萄球菌(MSSA(Methicillin Susceptible Staphylococcus Aureus)、MRSA(Methicillin ResistantStaphylococcus Aureus))、表皮葡萄球菌、肠球菌、李氏菌、脑脊髓膜炎球菌、淋菌、 病原性大肠杆菌(0157:H7等)、克雷伯氏菌(肺炎杆菌)、变形杆菌、 百日咳菌、绿脓杆菌、沙雷氏菌、柠檬酸杆菌属(citrobacter)、不动杆 菌属、肠杆菌属、支原体、梭菌属等所引起的各种感染症、结核、霍 乱、鼠疫、白喉、痢疾、猩红热、碳疽、梅毒、破伤风、麻风病、军 团菌肺炎(legionellosis,退伍军人病)、钩端螺旋体症、莱姆病、兔热 病、Q热等)、立克次体感染症(流行性斑疹伤寒(epidemic typhus)、恙 虫病(Scrub typhus)、日本红斑热等)、衣原体感染症(沙眼、生殖器衣 原体感染症、鹦鹉病等)、真菌感染症(曲霉病、念珠菌病、隐球菌病、发癣菌病、组织浆菌病、肺炎肺囊虫等)、寄生性原虫感染症(阿米巴 痢疾、疟疾、弓形虫病、利什曼体病、隐孢子虫属等)、寄生性蠕虫 感染症(棘球蚴病、日本血吸虫病、丝虫病、蛔虫病、阔节裂头绦虫 病等)、病毒感染症(流行性感冒、病毒性肝炎、病毒性髓膜炎、获得 性免疫缺乏综合征(AIDS,Acquired Immune Deficiency Syndrome)、 成人T细胞性白血病、埃博拉出血热、黄热病、感冒综合征、狂犬病、 巨细胞病毒感染症、严重急性呼吸系统综合征(SARS,Severe Acute Respiratory Syndrome)、进行性多灶性白质脑病、水痘、带状疱疹、手足口病、登革热、传染性红斑、传染性单核细胞症、天花、风疹、 急性脊髓灰质炎(polio)、麻疹、咽结膜热(pool热)、马尔堡出血热、 汉坦病毒肾出血热、拉沙热、流行性腮腺炎、西尼罗热、疱疹性咽峡 炎、奇昆古尼亚热等)等,但并不限定于这些。
本发明的药物组合物包含选自下述(i)~(iii)的至少1种物质,且 在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期进行给予:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
在本发明的药物组合物中,可将PD-1信号抑制剂与选自上述 (i)~(iii)的至少1种物质进行并用或合剂化。
在将PD-1信号抑制剂与选自上述(i)~(iii)的至少1种物质并用的 情形下,可分别给予PD-1信号抑制剂与选自上述(i)~(iii)的至少1种 物质。
在将PD-1信号抑制剂与选自上述(i)~(iii)的至少1种物质进行合 剂化的情形下,可制成包含PD-1信号抑制剂与选自上述(i)~(iii)的至 少1种物质的调配剂。
本发明的药物组合物是全身或局部地通过口服或胃肠外对受验 者或受验动物进行给予。
PD-1信号抑制剂(例如,抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2 抗体)是溶解于PBS(Phosphate Buffer Solution)等缓冲液、生理盐水、 灭菌水等中,可根据需要利用过滤器等进行过滤灭菌,然后通过注射 或点滴对受验者或受验动物进行给予。另外,也可向该溶液中添加添 加剂(例如,着色剂、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、溶解助剂、稳 定剂、保存剂、抗氧化剂、缓冲剂、等渗剂等)等。作为给予途径, 可进行静脉、肌肉、腹腔、皮下、皮内给予等。
PD-1信号抑制剂(例如,抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2 抗体)在制剂中的含量根据制剂的种类而有所不同,通常为1~100重 量%,优选为50~100重量%。制剂可制剂化为单位给予制剂。
PD-1信号抑制剂(例如,抗PD-l抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2 抗体)的给予量、给予次数和频率根据受验者或受验动物的症状、年 龄、体重、给予方法、给予形态等而有所不同,例如通常可向成人每 人以至少1次、可确认到所需效果的频率给予换算成有效成分的量为 0.1~100mg/kg体重、优选为1~10mg/kg体重。
选自上述(i)~(iii)的至少1种物质可含有在包含PD-1信号抑制剂 的制剂中,也可单独或与赋形剂或载体混合,并制剂化为片剂、胶囊 剂、散剂、颗粒剂、液剂、糖浆、气溶胶、栓剂、注射剂等。赋形剂 或载体只要为本领域中常规地使用且药物上可接受者即可,其种类和 组成可适宜变更。例如,作为液状载体,可使用水、植物油等。作为 固体载体,使用乳糖、白糖、葡萄糖等糖类,马铃薯淀粉、玉米淀粉 等淀粉,结晶纤维素等纤维素衍生物等。也可添加硬脂酸镁等润滑剂、 明胶、羟丙基纤维素等粘合剂、羧甲基纤维素等崩解剂等。除此以外, 也可添加抗氧化剂、着色剂、矫味剂、保存剂等。
选自上述(i)~(iii)的至少1种物质可通过口服、经鼻、直肠、经皮、 皮下、静脉内、肌内等各种途径进行给予。
选自上述(i)~(iii)的至少1种物质在制剂中的含量根据制剂的种 类而有所不同,通常为1~100重量%,优选为50~100重量%。例如, 在液剂的情形下,选自上述(i)~(iii)的至少1种物质在制剂中的含量优 选为1~100重量%。在胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂的情形下,选自 上述(i)~(iii)的至少1种物质在制剂中的含量通常为约10~100重量%,优选为50~100重量%,其余部分为载体。制剂可制剂化为单位给予 制剂。
选自上述(i)~(iii)的至少1种物质的给予量、给予次数和频率根据 受验者或受验动物的症状、年龄、体重、给予方法、给予形态等而有 所不同,例如,通常可向成人每人以至少1次、可确认到所需效果的 频率给予换算成有效成分的量的0.005μg(或ml)~25000mg(或ml)/kg 体重左右。关于各药剂(物质)的给予量,将适当的范围、优选的范围 和更优选的范围示于下述的表中,但并不限定于这些值。
(表)
PD-1信号抑制剂(例如,抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2 抗体)与ROS发生剂或控制其下游信号的物质之比率(质量)适当为1∶ 0.1~1∶100,优选为1∶1~1∶50。
PD-1信号抑制剂(例如,抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2 抗体)与显示解偶联作用的物质或控制其下游信号的物质之比率(质 量)适当为1∶0.01~1∶10,优选为1∶0.1~1∶1。
PD-1信号抑制剂(例如,抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗PD-L2 抗体)与氨基酸之比率(质量)适当为1∶0.001~1∶100,优选为1∶0.01~1∶ 10。
另外,本发明还提供一种癌症、感染症或它们的组合的治疗方法, 其包括下述的步骤:在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任 一时期,以药物上有效的量对受验者或受验动物给予选自上述(i)~(iii) 的至少1种物质。进一步,本发明提供选自上述(i)~(iii)的至少1种物 质的应用,其是用于治疗癌症、感染症或它们的组合,且在给予PD-1 信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期,给予选自上述(i)~(iii)的至 少1种物质。进一步,本发明也提供选自上述(i)~(iii)的至少1种物质 的应用,其是用于在治疗癌症、感染症或它们的组合的方法中应用, 且在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期,给予选自 上述(i)~(iii)的至少1种物质。
另外,本发明提供增强PD-1信号抑制活性的药剂,其包含选自 上述(i)~(iii)的至少1种物质。
本发明的药剂可用作与PD-1信号抑制剂的并用药或调配剂。关 于PD-1信号抑制剂与选自上述(i)~(iii)的至少1种物质的并用和合剂 化,已在上文中进行了说明。本发明的药剂除了作为药物的应用以外, 也可用作实验试剂。
在研究某种物质是否为ROS发生剂时,可在试管内对细胞(例如, 小鼠脾脏细胞)添加该物质,并对细胞内的ROS的浓度进行测定。在 研究某种物质是否具有解偶联作用或控制其下游信号的作用时,可在 试管内对细胞(例如,小鼠脾脏细胞)添加该物质,在细胞内染色后利 用流式细胞仪(Flow Cytometer)测定细胞内的线粒体的质子梯度,或 使用Seahorse直接进行测定。
实施例
以下,通过实施例更详细地说明本发明。
[实施例1]
[要旨]
通过利用PD-1抑制的癌免疫治疗,癌症患者的存活率显著地提 高。但是,对于某些的患者无应答。认为PD-1抑制与其他并用剂的 并用疗法会改善免疫治疗效果。本发明人使用小鼠癌症治疗模型,发 现所属淋巴结中所出现的癌反应性细胞毒性T细胞(tumor-reactive cytotoxic T lymphocytes:TR CTLs)具有较大的线粒体体积与较高的膜 电位,并且具有较高的活性氧(ROS)产生。另外,证明通过ROS发生 剂或利用解偶联剂的源自线粒体的ROS,CD8+CD44+CD62L-T细胞 在所属淋巴结与肿瘤内增加,由PD-1抑制所引起的抗肿瘤效果增强。 进一步明确,包含白藜芦醇、直接使mTOR、AMPK、SIRT等新陈 代谢传感器活化的试剂会增强PD-1抑制治疗效果,而长期抑制肿瘤。 重要的是这些并用治疗药单独使用时未显示出抗肿瘤效果。
[序言]
通过PD-1抑制的免疫疗法给癌症治疗带来了革命性冲击。作为 其特征,可列举对各种癌肿瘤具有较高的效果、长期持续抗肿瘤效果、 并且副作用较少9、10、11。作为活化T细胞的表面受体而表达的PD-1 在免疫应答中是作为抑制因子而发挥作用。PD-1与2个作为配体的 PD-L1或PD-L2结合,将ITSM(Immunoreceptor Tyrosine-Based Switchi Motif)中的酪氨酸残基磷酸化,而补充作为酪氨酸磷酸酶的SHP-2。 利用SHP-2,使通过T细胞受体的活化而磷酸化的Zap70等活化信号 转导分子脱磷酸化,从而抑制T细胞的活化12、13。在动物实验中PD-1 缺损小鼠患上自身免疫疾病,由此确认到通过PD-1的免疫抑制功能 14、15、16。如此得知,PD-1是作为免疫检测点而发挥作用,发生自身 免疫耐受。
本发明人查明PD-1的基本作用,明确利用PD-1的特性可辅助 针对癌症或感染症的免疫应答17、18。实际上,在2010年发表针对恶 性黑色素瘤的临床试验的结果后19,迄今为止已进行了针对各种癌肿 瘤的通过PD-1抑制疗法的临床试验,其大部分显示出令人惊讶的效 果20。目前,对于PD-1抑制疗法,日本正下达应用于恶性黑色素瘤 或非小细胞肺癌、肾细胞癌的医疗保险的许可。PD-1抑制疗法不仅 与迄今为止的免疫疗法相比显著地提高癌症患者的存活率,而且与实 际上所使用的标准的化学疗法相比也显著地提高癌症患者的存活率。 然而,令人遗憾的是,30~50%左右的患者仍对PD-1抑制疗法无应答。 为了克服该无应答例,业界将PD-1抑制疗法与作为其他免疫检测点 因子的Lag3或Tim3、癌症疫苗、放射线治疗、低用量的化学疗法等 加以并用21。但是,迄今为止尚无通过并用疗法确认到显著的协同效 果的报道。
本发明人已在2002年在动物模型中确立了PD-1抑制疗法的癌症 治疗效果17,但尚未查明通过PD-1抑制疗法的杀肿瘤效果或免疫耐 受状态的解除是因何种机理而发生的。例如,在利用检测点抑制剂所 进行的免疫疗法中,主要是癌特异性突变抗原成为靶22、23,但尚不明 确效应T细胞被活化的部位是肿瘤部位还是所属淋巴结。另外,在通 过PD-1抗体治疗而根除肿瘤时,也不明确何种信号使效应T细胞向 肿瘤部位移行。另外,也几乎未知识别肿瘤反应性细胞毒杀性T细胞 与肿瘤非反应性T细胞的方法、或PD-1信号的阻断如何影响肿瘤反 应性细胞毒杀性T细胞的活化、分化状态。进一步,对于通过PD-1 抑制疗法进行治疗的癌症患者而言,通过PD-1信号的阻断而活化的 免疫监视机制为何持续数年仍为谜团24、25。
为了确立使PD-1抑制疗法更有效的新颖的治疗战略,必须解答 出上述若干问题。因此,业界专注于效应功能所需的代谢重编程,并 对肿瘤反应性细胞毒杀性T细胞进行分析1、2、3、26、27。颇有意味的是, 在PD-1抑制疗法下自所属淋巴结提取的肿瘤特异性细胞毒杀性效应 T细胞显示出更大的线粒体的质量、更高的膜电位、和较高的线粒体 的活性氧种(ROS)。这些结果显示通过阻断PD-1信号而增加线粒体 的活性,与迄今为止所报道的活体中的报道一致28、29。
基于这些结果,本发明人建立了效应T细胞中的线粒体的功能刺 激使PD-1阻断疗法中的抗肿瘤效果的增强的假说。实际上将作为能 量代谢传感器的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK,AMP-activated Protein Kinase)或SIRT1、雷帕霉素机制性靶蛋白(mTOR,Mechanistic Target of Rapamycin)活化的药剂显示出与PD-1阻断疗法的协同性抗肿瘤效果。 这些见解或许会开辟用于开发针对对于PD-1抑制疗法的效果较弱的 患者的并用疗法的道路。
[结果]
由PD-1阻断所引起的DLN(Draining Lymph Node)中的肿瘤反应性CD8阳性T细胞
的线粒体活性的增大。
随着T细胞的活化,必须迅速地供给急剧的细胞增殖所需的因 子。因此,本发明人决定在所属淋巴结中研究通过PD-1抑制诱导的 肿瘤反应性CD8阳性T细胞的代谢变化。作为PD-1抑制疗法的机制 查明中的1个问题,可列举如下方面:由于通过PD-1阻断发生具有与各种肿瘤抗原反应的多样化的T细胞受体库的CTL,所以难以进 行肿瘤反应性细胞毒杀性T细胞(TR CTLs)的全面鉴定30、31。为了解 决该问题,将利用Cell Trace标记的CD45.1阳性CD8阳性T细胞移 植至CD45.2阳性CD8 KO小鼠。推测其后肿瘤反应性CD8阳性T 细胞会选择性地活跃地增殖,并对所属淋巴结中的经标记的T细胞的 增殖进行研究(图2a)。在MC38带癌小鼠中,所移植的CD45.1阳性 CD8阳性T细胞分成活跃地分裂的细胞组(高分裂组)与分裂较少的细 胞组(低分裂组)(图2b)。带癌小鼠中的CD45.1阳性CD8阳性T细胞 的高分裂组的绝对数或比率与给予对照抗体IgG的组相比,在利用 PD-L1抗体进行治疗的组中增加(图2b)。值得指出的是,PD-L1抗体 在非带癌小鼠中在上述增殖方面未见差异。由此表明,剧烈地发生分 裂的CD8阳性T细胞实际上因肿瘤抗原而活化可能性较高(图2b)。 进一步,在所属淋巴结中的CD45.1阳性CD8阳性T细胞中,在因 PD-L1抑制而造成的高分裂组的组分中,检测到作为MC38的变异抗 原决定基的mLama4肽/MHC四聚物阳性细胞组(图2c)22。因此,认 为在活跃地增殖的细胞组中包含大量TR CTLs。
其次,本发明人对于所属淋巴结中较强地增殖的TR CTL的代谢 功能进行了研究。认为线粒体的代谢不仅对T细胞的活化较重要,而 且对持续的T细胞的增殖或记忆T细胞的形成也重要,因此本发明 人专注于TRCTLs中的线粒体的功能26、32。CD8阳性T细胞中的高 分裂组与低分裂组相比,线粒体的质量较大,膜电位较高,线粒体的 活性氧种(ROS)的产生较多33,由此表明通过PD-1阻断在TR CTLs 中线粒体不断活化(图2d)。与上述结果一致,作为线粒体的呼吸的指 标的OCR(Oxygen Consumption Rate,氧消耗速度)与ATP的基本使用量在利用PD-L1抗体进行治疗的小鼠的所属淋巴结中的CD8阳性T 细胞中显著地增高(图2e-f)34。由这些结果证明,在PD-1阻断治疗中 伴随TR CTLs的增殖,线粒体的代谢速度上升。
ROS是为了增强由PD-1阻断所引起的抗肿瘤活性而必需。
如上述所示,ROS因PD-L1抗体治疗而显著地增加。ROS是在 线粒体的电气转导系统(ETC)的复合物I、复合物II、复合物III中发 生35。并且,线粒体的ROS也作为用于T细胞的抗原性的扩张的信 号转导因子而发挥功能26、32。另一方面,已知外因性的ROS或其发 生源会直接损伤肿瘤细胞,考虑作为癌症治疗药候补36。考虑这些的 两者,本发明人决定首先试验ROS发生剂单独是否具有杀肿瘤效果。 虽然向MC38带癌小鼠给予作为ROS的前体物质的氢过氧化叔丁基 溶液(Luperox),但未确认到抗肿瘤效果(图3a)。进一步,确认到没有 通过Luperox单独进行活体内处理的肿瘤细胞的免疫控制表面标记物 和转录分布图的显著变化(图12)。然而,若与PD-L1抗体并用,则显 著地强化抗肿瘤效果,带癌小鼠的存活率延长(图3b、c)。根据这些 数据暗示到,Luperox是并非通过对肿瘤细胞的直接作用而是经由T细胞的活化来提高PD-L1抗体的抗肿瘤效果。作为直接的线粒体ROS 发生剂的巴拉刈也增强PD-1抑制的效果(图13a、b)。作为对照,给 予作为使线粒体不稳定、抑制ATP合成的药剂的寡霉素与羰基氰对 三氟甲氧基苯腙(FCCP)、2,4-二硝基苯酚(DNP)37。于是出乎意料的是, 作为线粒体的解偶联剂的FCCP与DNP增强PD-L1抗体治疗的效果, 与PD-L1单独给予组相比显著地提高小鼠模型的存活率(图4a)。重要 的是得知,与Leuperox同样,FCCP与DNP也是若单剂给予则未显 示出抗肿瘤效果,且不具有对肿瘤细胞的直接作用而提高PD-L1抗体的抗肿瘤效果(图4b)。进一步,在自单独给予FCCP的小鼠采集的 肿瘤细胞的表型分析、转录分布图分析中未显示出显著差异,该情况 显示,解偶联剂增强杀伤肿瘤的杀伤性T细胞的功能而非直接杀伤肿 瘤(图12)。由于认为线粒体的解偶联(Uncoupling)有通过在降低线粒 体膜电位时减少ROS,而进行保护免受氧化性损伤的作用,所以FCCP 与DNP的抗肿瘤效果中的协同效果出乎意料37。起初有解偶联剂会 减少或增加线粒体的ROS发生是相反的报道38、39。本发明人确认到 PD-L1抗体与解偶联剂的并用疗法的效果因MnTBAP(具有ROS消除 效果的合成金属卟啉)的给予而受到抑制(图4c)。由此表明,解偶联 剂的协同效果是经由ROS信号的效果。不可思议的是,通过PD-L1 抗体与DNP、Luperox的3剂并用确认到较强的抗肿瘤效果(图5)。 这暗示解偶联剂在ROS以外的任一途径中也提高PD-1抑制的效果的可能性。
解偶联剂促进DI,N中的CD62L阴性CD44阳性效应T细胞的生成,增强在肿瘤部位的
它们的聚集。
那么,解偶联剂如何经由ROS而提高PD-L1抗体的抗肿瘤免疫?为了解答该疑问,本发明人首先对所属淋巴结与肿瘤部位的两者 中的CD8阳性T细胞的组分进行研究。如图6a所示,在所属淋巴结 中,关于效应CD8阳性T细胞(CD62L阴性CD44阳性:P3门)的绝 对数或比率,PD-L1抗体与FCCP的并用疗法组与PD-L1抗体单独组 相比显著地增加。作为对照,幼稚T细胞(CD62L阳性CD44阴性: P1门)与中心记忆T细胞(CD62L阳性CD44阳性:P2门)虽然在单独 使用PD-L1抗体时增加,但即便添加FCCP也无更多的增加(图6a)。 重要的要点为任何治疗组中的P3细胞组与P1或P2细胞组相比,每 个细胞的线粒体的质量、膜电位均较高,ROS均较多;及关于膜电 位与ROS产生,在与FCCP的并用疗法中显著地增加(图6b)。由这 些现象暗示到:a)关于所使用的FCCP的用量,并无线粒体的质量 的降低或膜电位的下落,无毒性(若为更高的用量则预测到毒性);b) 由于增加的P3细胞组中确认到较高的线粒体ROS产生,所以利用解 偶联剂的协同效果是经由ROS的效果;c)适度的线粒体损伤的反馈 反而有可能增强线粒体活性(图6b)。
值得指出的是,随着所属淋巴结中的此种变化,即使对于浸润于 肿瘤内的CD8阳性T细胞而言,P3细胞组也显著地增加(图6c)。由 这些结果表明下述的效果:PD-L1抗体与解偶联剂的并用疗法,在所 属淋巴结与作为其靶的肿瘤部位的两者中,增强效应CD8阳性T细 胞的尺寸或功能性。
能量代谢传感器的AMPK及mTOR与解偶联剂的免疫增强效果相关。
AMPK与mTOR虽然为相反的能量代谢传感器,但认为磷酸化 AMPK与mTOR的均衡性控制CD8阳性T细胞的分化1、40、41、42、43、44。由于可知由解偶联剂所引起的AMP(AdenosineMonophosphate)/ATP比的增加将AMPK活化45,所以本发明人对通 过PD-L1抗体与解偶联剂的并用疗法进行治疗的带癌小鼠的所属淋 巴结中的CD8阳性T细胞的AMPK与mTOR的磷酸化状态进行研究。 在自通过PD-L1抗体与DNP或FCCP的并用疗法进行治疗的小鼠采 集的CD8阳性T细胞中,AMPK与作为与其相关的蛋白的ACC与 SIRT1在并用疗法后的多个时刻进行活化(图7a)。但是,意料以外的 是,mTOR与作为其相关蛋白的S6K与4EBP1也在并用疗法后进行 活化(图7a)。
然而,该无法理解的结果是通过所属淋巴结中的CD8阳性T细 胞之中不均匀地混合存在有AMPK/mTOR均衡性不同的细胞而说 明。实际上在P2细胞组中p-AMPK虽然较p-mTOR上升,但在P3 细胞组中p-mTOR高于p-AMPK(图8)。基于这些结果,其次研究若 直接使mTOR与AMPK的任一者活化,是否可增强PD-1抑制疗法 的效果。如图7b所示,mTOR活性剂与AMPK活性剂均在早期(20 天以前)略微增强PD-1抑制疗法的效果,相对于此,若为mTOR活 性剂与AMPK活性剂的3剂并用,则会增强PD-L1抗体的效果,改 善存活率。这些结果显示,mTOR与AMPK的两者的活化是与PD-L1 抗体和解偶联剂的协同性杀肿瘤活性相关。
根据PD-L1抗体和解偶联剂的并用疗法使SIRT1增加的情况(图 7a),研究作为NAD(Nicotinamide Adenine Dinucleotide)依赖性蛋白脱 乙酰化酶的SIRT1的活化是否对PD-L1抗体治疗的效果有影响。报 道了利用被报道有可能具有肿瘤抑制效果的多酚的1种、白藜芦醇, 使SIRT1进行活化6、46。进一步报道了低用量的白藜芦醇SIRT1依赖 性地引起AMPK活化与线粒体的生物合成6,进一步报道了在特定的 条件下还辅助mTOR途径47、48、49。实际上,在PD-L1抗体与白藜芦 醇的并用疗法中,与PD-L1单独治疗相比,显著地确认到肿瘤尺寸 的减少与存活率的延长(图7c)。由该结果表明:PD-L1抗体与作为能 量代谢传感器的AMPK或mTOR、SIRT1的活化的并用会增强活体 内的TR CTL的增殖或功能性。
PGC-1α活性剂增强PD-1抗体的治疗效果
PGC-1α是通过AMPK或mTOR进行调节的转录辅因子,是使 线粒体的生物合成或氧化磷酸化增强的因子45、46。在FCCP、或mTOR 活性剂、AMPK活性剂与PD-L1抗体的并用治疗中,蛋白质与mRNA 中的PGC-1α的表达不断增加,是与迄今为止的报道并不矛盾的结果 (图11a)37、45、46。在仅给予PD-L1抗体的情形下,蛋白质中的PGC-1α 的表达虽然增加,但mRNA中的PGC-1α的表达减少。认为其原因 在于:PGC-1α的调节是与转录、翻译和蛋白质稳定性等较多阶段相 关46、47。PGC-1α是通过与NRFs或PPARs等转录因子相关而发挥功 能46。本发明人对作为PGC-1α/NRF2的活性剂的奥替普拉与作为 PGC-1α/PPARs活性剂的苯扎贝特是否会增强PD-L1抗体的抗肿瘤效 果进行实验48、29。结果奥替普拉与苯扎贝特均增强PD-L1抗体的肿 瘤成长抑制效果,改善带癌小鼠的存活率(图11b)。
为了研究MC38以外的肿瘤中的PD-1抗体的并用治疗效果,将 作为小鼠的皮肤肉瘤细胞株的MethA移植至BALB/c小鼠的皮内, 对使用FCCP或巴拉刈、奥替普拉的并用疗法进行试验。结果所有药 剂均显示出PD-L1抗体的抗肿瘤效果的增强(图14)。这显示线粒体活 性剂与PD-1抑制抗体的并用治疗对具有不同的基因背景的各种肿瘤 存在效果。
与FCCP或苯扎贝特的并用治疗增强CTL的T-bet表达。
已知对于由PD-1抑制所引起的细胞因子分泌或肿瘤反应性CTL 的活化重要的转录因子T-bet是利用mTOR并经由FOXO1抑制而进 行活化。因此,本发明人对PD-L1抗体与FCCP的并用治疗是否会 影响T-bet与Eomes的表达进行了研究。与PD-L1抗体及FCCP的并用疗法使mTOR活化的上述发现一致,FCCP在CD8阳性细胞中虽 然会使T-bet的表达增加,但不会使Eomes的表达增加(图15a)。非常 有趣的是,与FOXO1逆向地控制T-bet及Eomes的报道一致,使mTOR 的下游的转录因子活化的苯扎贝特也会使T-bet增加,反而使Eomes 减少(图15a)。进一步在并用治疗中作为杀伤性T细胞功能之一的干 扰素(IFN)-γ产生在肿瘤内增强(图15b)。这与对于Th1型免疫重要的 T-bet的表达增强一致。这些结果暗示苯扎贝特或许将线粒体活化, 进一步发生正反馈,而使mTOR活化。对以上的结果进行总结,解 偶联剂与PD-1抑制的协同效果的分子机制是经由AMPK或mTOR 与其下游的包含NRF2或PPARs的转录因子或PGC-1a等偶联因子的 活化(图1)。
[考察]
本发明人显示利用PD-L1抗体进行活化的TR CTL等使线粒体活 化,增强ROS的产生,进一步发生ROS的药剂增强PD-1抑制的抗 肿瘤效果。意料以外的是判明,2个有名的作为线粒体的解偶联剂的 FCCP与DNP也增强PD-L1抗体的抗肿瘤效果。根据ROS清除剂会 抵消其协同效果的情况表明,解偶联剂的协同效果取决于ROS的发 生。由于线粒体的解偶联剂存在抑制ROS产生的作用,因此认为对 缺血性损伤或心力衰竭、胰岛素抗性、肥胖、老化等与氧化应激相关 的疾病的治疗有用,所以此次的结果是意料以外的50。根据解偶联剂 的单独给予不会对T细胞的增殖及肿瘤增生造成影响的情况得知,本 研究中使用的最低剂量下的解偶联剂反而具有弥补因PD-1阻断而诱 发的免疫学现象或免疫反应的作用。
虽然作为天然多酚的白藜芦醇以心血管改善作用或抗衰老效果、 抗肿瘤效果而已知,但其显示出白藜芦醇诱导线粒体生物合成,而诱 导保护不生病的代谢功能的可能性。本发明人查明了低用量的白藜芦 醇会增强PD-1抑制治疗的效果。与解偶联剂同样地,白藜芦醇本身 与肿瘤增殖无关,或反而会使肿瘤增大。然而,通过与PD-L1抗体 并用,显著地显示出肿瘤的抑制效果,使动物模型中的存活率提高。
可是,这些药剂如何同样地发生与PD-1抑制疗法的协同效果? 线粒体的能量代谢与经由mTOR或AMPK的细胞内代谢密切相关5、6、49、51。本发明人确认到AMPK及其相关蛋白通过PD-L1抗体与解 偶联剂的并用疗法而进行活化。重要的是,AMPK或SIRT1的直接 活性剂均增强PD-L1抗体的抗肿瘤效果。
本发明人证明了偶联剂与PD-1抑制的并用疗法不仅将AMPK途 径活化,也将mTOR途径活化,mTOR的直接活性剂也增强PD-L1 抗体的效果。由于迄今为止认为mTOR途径的活化与AMPK的磷酸 化进行竞争,所以这些结果是意料以外的1、41、42、43、52。但是,在认为 所分离的CD8阳性T细胞由不仅根据不同的活化功能状态、也根据 生物化学反应或动态的变动而有所不同的不均匀细胞所构成的情形 下,可以说明本发明人的结果与迄今为止的报道并不矛盾。本发明人 认为mTOR途径的活化发生由PD-L1抑制以及FCCP或苯扎贝特刺 激所得的DLN CTL中的T-bet的表达。T-bet在对于肿瘤消退所需的 成为终末分化效应CTL的供给源的记忆前体物质的分化中是重要的, 关于CTL的抗肿瘤效果也认为是重要的55、56。另一方面,认为高效 表达EOMES的终末分化CTL因慢性的抗原识别而为免疫耐受的状 态56、57。在本发明人的实验结果中,通过FCCP或苯扎贝特与PD-1 抗体治疗的并用,T-bet与IFN-γ的表达上升,EOMES的表达反而降 低。该结果与通过并用疗法伴有线粒体的活化的效应记忆细胞组(P3 细胞组)增加的本发明人的结论并不矛盾。
PGC-1α是调节与线粒体的生物合成或线粒体的氧化磷酸化相关 的一系列转录因子的分子。AMPK或mTOR的活化是使PGC-1α的 表达增加,并经由磷酸化进行活化。本发明人显示通过解偶联剂与 PD-1抗体的并用疗法PGC-1α的表达增加,或在肿瘤的治疗模型中PGC-1α活性剂(苯扎贝特、奥替普拉)也与PD-L1抗体具有协同性增 强效果。由该结果表明,PGC-1α是引起线粒体的活化或扩大的重要 分子,且是诱导AMPK或mTOR活化的正反馈信号转导的重要分子。 进一步,解偶联剂或苯扎贝特通过与PD-L1抗体并用,而将位于mTOR下游的作为重要的细胞因子调节因子的T-bet加以活化。
将迄今为止的与机理相关的假说的整体情况汇总于图1。
a)通过PD-1阻断,引起活化CD8阳性T细胞中的线粒体的扩 大或增殖。
b)解偶联剂或ROS发生剂使线粒体的体积增加,导致ROS的 增加。认为或许ROS通过某种途径将AMPK与mTOR进行活化36。
c)AMPK与mTOR的活化是使PGC-1α的表达增加并使之活化。
d)最终,PGC-1α与作为其结合转录因子的NRFs与PPARs增加 使脂肪酸的氧化与氧化磷酸化活化的一系列转录因子的表达,另外, 引起导致CTL的活化或分化的线粒体的扩大。
最近,虽然有报道称PD-1途径会抑制线粒体的活化与PGC-1α 的表达,但这些报道与本发明人的假说也不矛盾63、64。ROS或解偶 联剂、AMPK活性剂、mTOR活性剂、PGC-1α活性剂等本发明人在 本研究中所使用的所有药剂在与PD-1抗体并用的情形下,虽然经由 线粒体的活化或扩大而导致CD8+T细胞的活化或分化,但在以单剂 给予的情形下并无同样效果。
本发明人通过至今为止的结果而显示了可应用于对PD-1抗体治 疗无应答性的癌症患者的革新性并用疗法的有效性。自移植了对 PD-1治疗无应答性的肿瘤的小鼠所提取的CTL未引起线粒体的活 化,由此认为本发明人的研究也有助于与判定PD-1抗体治疗的有效 性的生物标记物的研究。今后,重要的是研究根据线粒体的代谢变化 而发生变化的血清中代谢物量、或在PD-1抗体治疗前后收集的样品 中的CD8+T细胞的OCR活性、与线粒体的活化信号相关的RNA的 表达是否可以成为与PD-1抗体治疗的应答性相关的生物标记物。另外,由并用药所引起的PD-1抗体治疗的协同性增强效果有助于减少 被争论会危及社会保障制度的昂贵的PD-1抗体的给予量。
目前,通过PD-1/PD-L1阻断的癌症治疗大致有2个问题。第1 个问题如上所述是PD-1抑制治疗不会对所有患者有效果。因此,进 行增强PD-1抑制疗法的抗肿瘤效果的可能性较高且可临床应用的药 物的开发。本发明人的结果针对对PD-1抑制疗法无效果的患者,提 供新颖的并用疗法的选项。另一个问题是与由PD-1抑制疗法单独或 并用疗法所发生的副作用相关,尤其可列举由药剂所特有的毒性或过 度的免疫应答所诱发的自身免疫性疾病57。伴随此种增强免疫治疗的 治疗介入,副作用也被增强的可能性很大。在PD-L1抗体与此次的 研究中所使用的药剂的并用治疗中,虽然未见特别明显的自身免疫反 应,但若考虑临床应用,则需要使用本发明人在以前所确立的自身免 疫疾病模型小鼠而评价该风险14、15、16。DNP在1930年代是用作膳食 增补剂(diet supplement)或提高代谢速度的药剂58。但是,由于因质子 驱动力的崩解所发生的效果,所以DNP会引发严重的健康伤害,而被禁止使用59。FCCP被广泛用于线粒体的活体能量学的研究,但 FCCP也存在细胞毒性及一定程度的质膜去极化作用,所以未进行临 床应用50。在本研究中,5种药剂虽然显示出增强由PD-1抑制所引 起的抗肿瘤效果,但若考虑在代谢性疾病的治疗中较多地尝试或作为 日常的增补剂(supplement)服用,则作为SIRT1活性剂的天然多酚的 白藜芦醇较为理想5、51。虽然报道了白藜芦醇单独的抗肿瘤效果,但 也存在其剂量依赖性,在抗肿瘤效果方面存在异议60。本试验中所使 用的剂量为最低剂量,至少在本发明人所进行的试验中,并无肿瘤增生抑制效果(反而呈现其相反)。本发明人所鉴定的其他并用疗法为解 偶联剂或ROS下游的信号的活性剂。若考虑脱靶的减少,则以mTOR 与AMPK、SIRT1的下游作为靶的治疗法有增强抗肿瘤效果并且弱化 不期望的副作用的可能性。
总之,本发明人对控制线粒体的能量代谢检测点,并增强PD-1 抑制治疗的效果的药剂进行了鉴定。对于经由PD-1的T细胞的控制、 或针对PD-1抑制疗法抗性的癌症患者、或感染疾病的并用疗法,本 研究的结果可谓开辟出了新的途径。值得关注的是,由于奥替普拉和 苯扎贝特已用作临床药物,所以可应用于与PD-1抗体的并用疗法的 临床研究。
[步骤与材料]
小鼠与细胞
所有小鼠均在京都大学研究生院医学部动物实验设施中,在无病 原体的特别的SPF(specific-pathogen free)环境下饲养,并在适当的实 验计划下使用。C57BL/6和BALB/c(5-6周龄)是自日本查尔斯河实验 室(Charles River Laboratories Japan)(横滨)获取。小鼠结肠腺癌MC38 细胞是由Dr.Jim Allison(Memorial Sloan-KetteringCancer Center,New York,NY)提供。纤维肉瘤MethA是自生物医学研究细胞资源中心(Cell Resource Center for Biomedical Research)(仙台、日本)获得。这些 细胞是在包含10%热灭活FBS(Fetal Bovine Serum)和1%抗真菌性抗 生素(Invitrogen)的DMEM(Dulbecco Modified Eagle Medium)(Invitrogen)中进行培养。该细胞系统在分枝杆菌属中不会被 感染。
小鼠治疗模型
MC38(5×105)和MethA(5×105)是注入至右侧面皮内。MC38是对 C57BL/6小鼠接种,MethA是对BALB/c小鼠接种。为了单独治疗, 在肿瘤接种5天后,将PD-L1小鼠抗体(1-111A)(本研究室制作)150μg 接种至小鼠腹腔内。PD-L1抗体单独治疗是每隔4天重复3次。PD-L1 抗体与化学药品的并用治疗是在肿瘤接种7天后开始。化学药品是每 隔2天给予,PD-L1抗体是每隔5天给予(图3b)。肿瘤是每隔1天进 行测定,肿瘤的体积是依据椭圆体的公式π×(长×宽×高度/6)而进行计 算。
CD8缺损小鼠模型
在CD8缺损小鼠模型中,使用autoMACS Pro Separator(Miltenyi Biotec)自CD45.1+小鼠分离CD8+T细胞。所分离的CD45.1+CD8+细 胞是在利用PBS稀释的Cell TraceViolet(Thermo Fisher Scientific)中培 养20分钟并进行染色。洗净后,向CD45.2+CD8-/-小鼠尾静脉给予细 胞。5天后,向皮内接种MC38(5×105),在肿瘤接种8天后腹腔内接 种PD-L1抗体。
化学试剂
以下述的浓度并用以下的试剂,并用于治疗。AMPK活性剂:A769662、6mg/kg(Abcam);mTOR活性剂:MHY1485、 3μg/kg(SIGMA-ALDRICH);解偶联剂(Uncoupler):羰基氰对三氟甲 氧基苯腙(FCCP)、1.2mg/kg(Abcam);解偶联剂:2,4-二硝基苯酚: DNP、1.7mg/kg(ALDRICH);SIRT1活性剂:白藜芦醇、 0.5mg/kg(Abcam);ROS补充剂:锰(III)四(4-苯甲酸)卟啉(MnTBAP)、 1.25mg/kg(Calbiochem);ROS发生剂:氢过氧化叔丁基溶液(LuperoxTBH70X)、200μl/kg(SIGMA-ALDRICH)。ATP合成抑制剂:寡霉素、 250μg/kg(SIGMA-ALDRICH);巴拉刈、2mg/kg(Nakalai Tesque);奥 替普拉、1.9mg/kg(Sigma);苯扎贝特、1mg/kg(ChemCruz)。
所有试剂是在使用前新调制。各试剂是溶解于说明书中所示的溶 剂中。AMPK活化剂、mTOR活化剂、解偶联剂、SIRT1活化剂是每 次在一系列的实验中,利用新的未使用小玻璃瓶而调制。所溶解的试 剂是利用PBS进行稀释,每只小鼠各接种200μl。
细胞因子珠粒(Bead)阵列分析(CBA)
自治疗小鼠采集的血清中的各种细胞因子浓度是通过利用针对 各种小鼠细胞因子(IL-17A、IL-21、MIG、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、 IL-4、IL-6、IL-10和IL-12)的抗体进行涂布的珠粒而定量地测定。依 据说明书,利用流式细胞仪FACS Canto II(BDBiosciences)对染色的 样品进行测定。所获得的数据是使用FCAS阵列软件v3.0(BDBiosciences)进行分析。
酶联免疫吸附法(ELISA)
如PD-L1抗体单独治疗中所述,对小鼠接种MC38,并利用PD-L1 抗体进行治疗。血清中的MIG(Monokine Induced by Interferon-gamma,干扰素-γ诱导的单核因子)是使用MIG ELISA试剂 盒(abcam),并依据说明书而定量地测定。
细胞调制
为了分析所属淋巴结,自接种有肿瘤的小鼠的右腋下、上臂和腹 股沟部的淋巴结采集细胞并加以混合。使用每一个淋巴结的平均细胞 数作为绝对细胞数。在肿瘤分析中,利用剪刀将肿瘤组织剪碎成 2~3mm片,使用gentleMACS Dissociator(MiltenyiBiotec),利用胶原 酶IV型(Thermo Fisher Scientific)进行酶处理。使用每毫克的肿瘤细 胞数作为绝对数。使用小鼠癌细胞分离试剂盒(Tumor Cell Isolation kit, mouse)(MiltenyiBiotec)自消化的肿瘤组织将肿瘤细胞分离。该试剂盒 通过排除淋巴细胞、红细胞、成纤维细胞、内皮细胞和肿瘤相关的基 质细胞,将肿瘤细胞纯化。通过FACSAria(BDBioScience),进一步 将肿瘤细胞集团分离、纯化而使用。
流式细胞仪分析
使用识别所示抗原的以下的抗体:来自BioLegend的 CD44(1M7)、CD45.2(104)、CD45.1(A20)、CD8(53-6.7)、 CD62L(MEL-14)、T-bet(4B/O)和IFN-γ(XMG1.2)、I型 MHC(AF6-88.5)、CD155(Tx56)和VISTA(MIH63);来自Ancam的 p-AMPK(EPR5683);来自eBioscience的p-mTOR(MRRBY)、 Eomes(Danllmag)和PD-L1(M1H5)。所有流式细胞仪是利用FACS canto II(BD Biosciences)进行,并利用FlowJo软件(FLOWJO、LLC) 进行分析。在细胞内磷酸化蛋白的评价中,利用0.5%TritonX对细 胞进行透过处理,在染色前利用1.5%PFA(Paraformaldehyde)进行固 定。线粒体的质量、膜电位、线粒体的超氧化物和细胞的ROS的测 定分别使用MitoTracker Green、MitoTracker Deep Red、MitoSOX Red 和CellROX Green reagents进行(均为Life technologies)。这些色素的 各自的最终浓度是设为0.125μM、0.125μM、5.0μM和0.625μM,并 在37℃5%CO2加湿培养箱中培养30分钟。
氧消耗率的测定
氧消耗率是利用XF96细胞外流量分析仪(Seahorse Biosciences) 进行测定。将4×105的CD8+T细胞撒在规定的XF96板上。向模组中 依序添加XF Cell Mito Stress测试试剂盒(Seahorse Bioscience)附有的 线粒体的氧化磷酸化的4种药剂。具体而言,基本性的OCR测定是 在依序添加寡霉素、FCCP、鱼藤酮/抗霉素A后进行。ATP转化率是 定义为(寡霉素添加前的最终值-寡霉素添加后的最小值)34。
实时PCR(Real-Time RT-PCR)
使用RNeasy迷你试剂盒(QIAGEN)自CD8阳性T细胞或肿瘤细 胞将RNA分离,并通过逆转录合成cDNA。PGC-1a的实时PCR是 使用以下的引物而进行:正向ACTCGGATTGCTCCGGCCCT(序列编 号1)与反向ACTGACGGCCTAACTCCACCCA(序列编号2)。为了对 凋亡与线粒体的能量代谢相关基因的表达量进行分析,使用RT2 Profiler PCR阵列基因表达试剂盒PAMM-012Z或 PAMM-008Z(QIAGEN)。本分析中所含的基因列表可在下述的网址查 看http://www.sabiosciences.com/Apoptosis.php。
蛋白质印迹(Western Blotting)
利用小鼠CD8微珠(Milteni Biotec)对CD8+T细胞进行分离。在 进行PBS 2次洗净后,利用包含30mM Tris-HCl(pH7.4)、150mM NaCl、 10%甘油、0.1%SDS(Sodium DodeeylSulfonate)、1%Triton-X-100、 0.05%Na-Doc、5mM EDTA(Ethylenediamine TetraaceticAcid)(pH8.0)、 蛋白酶抑制剂混合物(protease inhibitor mixture)(Roche MolecularBiochemicals)、以及磷酸酶抑制剂(phosphatase inhibitors)(Nacalai tesque)的溶解缓冲液使2×106的细胞可溶化。在利用DC蛋白分析 (Bio-Rad)进行的蛋白质浓度测定后,将蛋白质4μg置在4-20%梯度 Mini-PROTEAN TGX Gels(Bio-Rad),电印迹到硝酸纤维素膜上,之 后在于TBS(Tris buffered saline)中包含1%BSA的封闭缓冲液中进行 培养。一次抗体培养是在封闭缓冲液中在4℃下进行一晚。洗净后, 二次抗体培养是在封闭缓冲液中在室温下进行40分钟。印迹是利用 增强化学发光(enhanced chemiluminescence)(Amersham Pharmacia)进 行展开。使用识别以下蛋白质的一次抗体: Phospho-mTOR(p-mTOR)(Cat#5536)、 Phospho-AMPKα(p-AMPK)(#2535)、Phospho-p70 S6激酶 (P-S6K)(#9205)、4E-BP1(#9644)、Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase(磷酸乙 酰辅酶A羧化酶)(P-ACC)(#3661)、SIRT1(#9475)。所有一次抗体是自 Cell Signaling Technology获取。识别PGC-1α(SC-13067)的抗体是自 Sant Cruz获得。
统计分析
统计分析是利用Prism 6来进行。为了对3个以上的变量进行分 析,在单向ANOVA分析(单向方差分析)后进行Sidak的多重比较检 验(Sidak’s multiple comparisontest)。为了对两个组进行比较而进行学 生T检验(Student t test)。所有统计分析是假设为参数数据,进行2标 本的检验。将p值小于0.05者设为显著。数据的偏差是作为平均值±标准误差(SEM)进行评价。为了推定本研究中的试样尺寸,认为5个 以上的试样较为合适。试样与动物是自集团中随机选择并进行处理。 试样或动物的处理并非盲检。
文献
1.Chi H.Regulation and function of mTOR signalling in T cell fatedecisions.Nat Rev Immnunol 2012,12(5):325-338.
2.Cunningham JT,Rodgers JT,Arlow DH,Vazquez F,Mooma VK, PuigserverP.mTOR controls mitochondrial oxidative function through a YY1-PGC-lalphatranscriptional complex.Nature 2007,450(7170): 736-740.
3.Toyama EQ,Herzig S,Courchet J,Lewis TL,Jr.,Loson OC,Hellberg K,etal.Metabolism.AMP-activated protein kinase mediates mitochondrial fission inresponse to energy stress.Science 2016, 351(6270):275-281.
4.Venturα-Clapier R,Garnier A,Veksler V.Transcriptional control ofmitochondrial biogenesis:the central role of PGC-1 alpha.Cardiovasc Res 2008,79(2):208-217.
5.Canto C,Auwerx J.Targeting sirtuin 1 to improve metabolism:all youneed is NAD(+)?Pharmacol Rev 2012,64(1):166-187.
6.Price NL,Gomes AP,Ling AJ,Duarte FV,Martin-Montalvo A,North BJ,etal.SIRT 1 is required for AMPK activation and the beneficial effects ofresveratrol on mitochondrial function.Cell metabolism 2012, 15(5):675-690.
7.Scarpulla RC.Metabolic control of mitochondrial biogenesis throughthe PGC-1 family regulatory network.Biochim Biophys Acta 2011, 1813(7):1269-1278.
8.Blaschke F,Takata Y,Caglayan E,Law RE,Hsueh WA.Obesity, peroxisomeproliferator-activated receptor,and atherosclerosis in type 2diabetes.Arterioscler Thromb Vasc Biol 2006,26(1):28-40.
9.Couzin-Frankel J.Breakthrough of the year 2013.Cancerimmunotherapy.Science 2013,342(6165):1432-1433.
10.Topalian SL,Drake CG,Pardoll DM.Immune checkpoint blockade:acommon denominator approach to cancer therapy.Cancer Cell 2015, 27(4):450-461.
11.Okazaki T,Chikμma S,Iwai Y,Fagarasan S,Honjo T.A rheostat forimmune responses:the unique properties of PD-1 and their advantages forclinical application.Nat Immunol 2013,14(12):1212-1218.
12.Okazaki T,Maeda A,Nishimura H,Kurosaki T,Honjo T.PD-1immunoreceptor inhibits B cell receptor-mediated signaling by recruiting srchomology 2-domain-containing tyrosine phosphatase 2 to phosphotyrosine.ProcNatl Acad Sci U S A 2001,98(24):13866-13871.
13.Chemnitz JM,Parry RV,Nichols KE,June CH,Riley JL.SHP-1 and SHP-2associate with immunoreceptor tyrosine-based switch motif of programmed death1 upon primary hμman T cell stimulation,but only receptor ligation prevents Tcell activation.J Immunol 2004,173(2): 945-954.
14.Nishimura H,Nose M,Hiai H,Minato N,Honjo T.Development of lupus-like autoimmune diseases by disruruption of the PD-1 gene encoding an ITIMmotif-carrying immunoreceptor.Immunity 1999,11(2): 141-151.
15.Nishimura H,Okazaki T,Tanaka Y,Nakatani K,Hara M,Matsμmori A,etal.Autoimmune dilated cardiomyopathy in PD-1 receptor-deficient mice.Science2001,291(5502):319-322.
16.Okazaki T,Tanaka Y,Nishio R,Mitsuiye T,Mizoguchi A,Wang J,etal.Autoantibodies against cardiac troponin I are responsible for dilatedcardiomyopathy in PD-1-deficient mice.Nat Med 2003,9(12): 1477-1483.
17.Iwai Y,Ishida M,Tanaka Y,Okazaki T,Honjo T,Minato N. Involvementof PD-Ll on tμmor cells in the escape from host immune system and tμmorimmunotherapy by PD-L1 blockade.Proc Natl Acad Sci U S A 2002,99(19):12293-12297.
18.Iwai Y,Terawaki S,Ikegawa M,Okazaki T,Honjo T.PD-1 inhibitsantiviral immunity at the effector phase in the liver.J Exp Med 2003, 198(1):39-50.
19.Brahmer JR,Drake CG,Wollner I,Powderly JD,Picus J,Sharfman WH,etal.Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106)inrefractory solid tμmors:safety,clinical activity, pharmacodynamics,andimmunologic correlates.J Clin Oncol 2010, 28(19):3167-3175.
20.Zou W,Wolchok JD,Chen L.PD-L1(B7-H1)and PD-1 pathway blockade forcancer therapy:Mechanisms,response biomarkers,and combinations.Sci Transl Med2016,8(328):328rv324.
21.Mahoney KM,Rennert PD,Freeman GJ.Combination cancer immunotherapyand new immunomodulatory targets.Nat Rev Drug Discov 2015,14(8):561-584.
22.Gubin MM,Zhang X,Schuster H,Caron E,Ward JP,Noguchi T,et al.Checkpoint blockade cancer immunotherapy targets tμmour-specific mutantantigens.Nature 2014,515(7528):577-581.
23.McGranahan N,Furness AJ,Rosenthal R,Ramskov S,Lyngaa R, Saini SK,et al.Cloual neoantigens elicit T cell immunoreactivity and sensitivity toimmune checkpoint blockade.Science 2016,351(6280): 1463-1469.
24.Topalian SL,Hodi FS,Brahmer JR,Gettinger SN,Smith DC, McDermottDF,et al.Safety,activity,and immune correlates of anti-PD-1 antibody incancer.N Engl J Med 2012,366(26):2443-2454.
25.Brahmer JR,Tykodi SS,Chow LQ,Hwu WJ,Topalian SL,Hwu P,et al.Safetyand activity of anti-PD-L1 antibody in patients with advanced cancer.N Engl JMed 2012,366(26):2455-2465.
26.Sena LA,Li S,Jairaman A,Prakriya M,Ezponda T,Hildeman DA,etal.Mitochondria are required for antigen-specific T cell activation throughreactive oxygen species signaling.Immunity 2013,38(2): 225-236.
27.O′Sullivan D,Pearce EL.Targeting T cell metabolism for therapy.Trends Immunol 2015,36(2):71-80.
28.Chang CH,Qiu J,O′Sullivan D,Buck MD,Noguchi T,Curtis JD,etal.Metabolic Competition in the Tμmor Microenvironment Is a Driver of CancerProgression.Cell 2015,162(6):1229-1241.
29.Patsoukis N,Bardhan K,Chatterjee P,Sari D,Liu B,Bell LN,et al. PD-1 alters T-cell metabolic reprogramming by inhibiting glycolysis andpromoting lipolysis and fatty acid oxidation.Nat Commun 2015,6: 6692.
30.Tμmeh PC,Harview CL,Yearley JH,Shintaku IP,Taylor EJ,Robert L,etal.PD-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immuneresistance.Nature 2014,515(7528):568-571.
31.Kvistborg P,Philips D,Kelderman S,Hageman L,Ottensmeier C, Joseph-Pietras D,et al.Anti-CTLA-4 therapy broadens the melanomα-reactive CD8+T cellresponse.Sci Transl Med 2014,6(254): 254ra128.
32.Weinberg SE,Sena LA,Chandel NS.Mitochondria in the regulation ofinnate and adaptive immunity.Immunity 2015,42(3):406-417.
33.Jang KJ,Mano H,Aoki K,Hayashi T,Muto A,Nambu Y,et al.Mitochondrial function provides instructive signals for activation-induced B-cell fates.Nat Commun 2015,6:6750.
34.van der Windt GJ,Chang CH,Pearce EL.Measuring Bioenergetics in TCells Using a Seahorse Extracellular Flux Analyzer.Curr Protoc Immunol 2016,113:3 16B 11-13 16B 14.
35.Turrens JF.Mitochondrial formation of reactive oxygen species.JPhysiol 2003,552(Pt 2):335-344.
36.Trachootham D,Alexandre J,Huang P.Targeting cancer cells by ROS-mediated mechanisms:a radical therapeutic approach?Nat Rev Drug Discov 2009,8(7):579-591.
37.Krauss S,Zhang CY,Lowell BB.The mitochondrial uncoupling-proteinhomologues.Nat Rev Mol Cell Biol 2005,6(3): 248-261.
38.Olsson M,WiIson M,Uller T,Isaksson C.Free radicals run in lizardfamilies without(and perhaps with)mitochondrial uncoupling.Biol Lett 2009,5(3):345-346.
39.Han YH,Kim SH,Kim SZ,Park WH.Carbonyl cyanide p-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone(FCCP)as an O2(*-)generator induces apoptosis via thedepletion of intracellular GSH contents in Calu-6 cells.Lung Cancer 2009,63(2):201-209.
40.Araki K,Ahmed R.AMPK:a metabolic switch for CD8+T- cell memory.EurJ Immunol 2013,43(4):878-881.
41.Buck MD,O′Sullivan D,Pearce EL.T cell metabolism drives immunity.JExp Med 2015,212(9):1345-1360.
42.Siska PJ,Rathmell JC.T cell metabolic fitness in antitμmorimmunity. Trends Immunol 2015,36(4):257-264.
43.Finlay D,Cantrell DA.Metabolism,migration and memory in cytotoxicT cells.Nat Rev Immunol 2011,11(2):109-117.
44.Blagih J,Coulombe F,Vincent EE,Dupuy F,Galiciα-Vazquez G,Yurchenko E,et al.The energy sensor AMPK regulates T cell metabolicadaptation and effector responses in viv0.Immunity 2015,42(1):41-54.
45.Rohas LM,St-Pierre J,Uldry M,Jager S,Handschin C,Spiegelman BM.Afundamental system of cellular energy homeostasis regulated by PGC-lalpha.Proe Natl Acad Sci U S A 2007,104(19):7933-7938.
46.Jang M,Cai L,Udeani GO,Slowing KV,Thomas CF,Beecher CW,etal.Cancer chemopreventive activity of resveratrol,a natural product derivedfrom grapes.Science 1997,275(5297):218-220.
47.Zong Y,Sun L,Liu B,Deng YS,Zhan D,Chen YL,et al.Resveratrolinhibits LPS-induced MAPKs activation via activation of thephosphatidylinositol 3-kinase pathway in murine RAW 264.7 macrophagecells.PLoS One 2012,7(8):e44107.
48.Leontieva OV,Paszkiewicz G,Demidenko ZN,Blagosklonny MV.Resveratrol potentiates rapamycin to prevent hyperinsulinemia and obesity inmale mice on high fat diet.Cell Death Dis 2013,4:e472.
49.Hong S,Zhao B,Lombard DB,Fingar DC,Inoki K.Cross-talk betweensirtuin and mammalian target of rapamycin complex 1(mTORC1) signaling in theregulation of S6 kinase 1(S6K1)phosphorylation.J Biol Chem 2014,289(19):13132-13141.
50.Kenwood BM,Weaver JL,Bajwa A,Poon IK,Byme FL,Murrow BA, etal.Identification of a novel mitochondrial uncoupler that does not depolarizethe plasma membrane.Mol Metab 2014,3(2):114-123.
51.de Oliveira MR,Nabavi SF,Manayi A,Daglia M,Hajheydari Z, NabaviSM.Resveratrol and the mitochondria:From triggering the intrinsic apoptoticpathway to inducing mitochondrial biogenesis,a mechanistic view.BiochimBiophys Acta 2016,1860(4):727-745.
52.Inoki K,Kim J,Guan KL.AMPK and mTOR in cellular energy homeostasisand drug targets.Annu Rev Pharmacol Toxicol 2012,52: 381-400.
53.Araki K,Turner AP,Shaffer VO,Gangappa S,Keller SA,Bachmann MF,etal.mTOR regulates memory CD8 T-cell differentiation.Nature 2009,460(7251):108-112.
54.Pearce EL,Walsh MC,Cejas PJ,Harms GM,Shen H,Wang LS,et al.Enhancing CD8 T-cell memory by modulating fatty acid metabolism. Nature 2009,460(7251):103-107.
55.Rolf J,Zarrouk M,Finlay DK,Foretz M,Viollet B,Cantrell DA.AMPKalpha1:a glucose sensor that controls CD8 T-cell memory.Eur J Immunol2013,43(4):889-896.
56.Eikawa S,Nishida M,Mizukami S,Yamazaki C,Nakayama E,UdonoH.Immune-mediated antitμmor effect by type 2 diabetes drug,metformin. ProcNatl Acad Sci U S A 2015,112(6):1809-1814.
57.Eigentler TK,Hassel JC,Berking C,Aberle J,Bachmann O, Grunwald V,et al.Diagnosis,monitoring and management of immune-related adverse drugreactions of anti-PD-1 antibody therapy. Cancer Treat Rev 2016,45:7-18.
58.Koch RA,Lee RC,Tainter ML.Dinitrophenol on Liver Function.Cal WestMed 1935,43(5):337-339.
59.Grundlingh J,Dargan PI,E1-Zanfaly M,Wood DM.2,4-dinitrophenol(DNP):a weight loss agent with significant acute toxicity and risk of death.JMed Toxicol 2011,7(3):205-212.
60.Carter LG,D′Orazio JA,Pearson KJ.Resveratrol and cancer:focus onin vivo evidence.Endocr Relat Cancer 2014,21(3):R209-225.
61.Friederich-Persson,M.,et al.Kidney hypoxia,attributable toincreased oxygen consumption,induces nephropathy independently ofhyperglycemia and oxidative stress.Hypertension 62,914-919(2013).
62.Kenwood,B.M.,et al.Identification of a novel mitochondrialuncoupler that does not depolarize the plasma membrane.Mol Metab 3, 114-123(2014).
63.Berrien-Elliott,M.M.,et al.Checkpoint blockade immunotherapyrelies on T-bet but not Eomes to induce effector function in tumor-infiltrating CD8+ T cells.Cancer immunology research 3,116-124 (2015).
[实施例2]
对C57BL/6小鼠接种5×105的小鼠大肠癌MC38。7天后腹腔内 给予抗PD-L1抗体(1-111A、150μg)与AMPK抑制剂(化合物C:200μg 的BBS液,200μl)。抗PD-L1抗体是每隔6天给予3次,化合物C(C.C) 是每隔2天给予7次。显示自接种MC38至第25天的肿瘤的体积(mm3)。
将结果示于图9。AMPK抑制剂会增强抗PD-L1抗体治疗的效 果。
[实施例3]
对BALB/c小鼠接种2×106的小鼠肾癌RENCA。7天后腹腔内给 予抗PD-L1抗体(1-111A、150μg)与AMPK抑制剂(化合物C:200μg 的PBS液、200μl)。抗PD-L1抗体是每隔6天给予3次,化合物C(C.C) 是每隔2天给予7次。显示自RENCA接种至第25天的肿瘤的体积 (mm3)。
将结果示于图10。AMPK抑制剂会增强抗PD-L1抗体治疗的效 果。
[实施例4]
对C57BL/6小鼠接种5×105的MC38。7天后腹腔内给予抗PD-L1 抗体(1-111A、150μg)与PGC-1α/转录因子复合物活化剂(2-(4-{2-[(4- 氯苯甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)-2-甲基丙酸(苯扎贝特):10μg的PBS 液、200μl)。抗PD-L1抗体是每隔6天给予3次,苯扎贝特是每隔2 天给予7次。显示自接种MC38至第25天的肿瘤的体积(mm3)。
将结果示于图11。PGC-1α/转录因子复合物活化剂会增强抗 PD-L1抗体治疗的效果。
[实施例5]
对BALB/c小鼠接种5×105的MethA,7天后腹腔内给予抗PD-L1 抗体(1-111A、80μg)与Foxo1抑制剂(5-氨基-7-(环己基氨基)-1-乙基-6- 氟-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸、Calbiochem)(2mg/kg)。给予时间表是 依据图3。将自MethA接种至第28天的肿瘤的体积(mm3)示于图16。 Foxo1抑制剂会增强抗PD-L1抗体治疗的效果。
[实施例6]
通过GC-MS分析对5只PD-1-/-小鼠(Immunity 11,141-151 (1999).;Science 291,319-322(2001).;Nat.Med.9,1477-1483(2003).) 与野生型C57BL/6N小鼠(与PD-1-/-小鼠同胎出生的小鼠)的血清中所 含的氨基酸量进行鉴定。将结果示于图17。图17是表示将野生型的 值设为1时的PD-1-/-小鼠的值。在缺损PD1的小鼠体内进行T细胞 的分裂,血中氨基酸进行代谢,其值减少。
对BALB/c小鼠接种5×105的纤维肉瘤MethA(Cell Resource Center forBiomedical Research),7天后给予抗PD-L1抗体(1-111A、 60μg)与Aminoleban(大冢(塚)制药、400μl/mouse)。给予时间表是依据 图3。将Aminoleban的组成示于图18。
将结果示于图19。氨基酸会增强抗PD-L1抗体治疗的效果。
将本说明书中所引用的所有刊物、专利和专利申请直接作为参考 而编入至本说明书中。
产业上的可利用性
本发明的药物组合物可以用作抗癌剂、感染症治疗剂或它们的组 合。
序列表自由文本
<序列编号1>
显示正向引物的碱基序列。
<序列编号2>
显示反向引物的碱基序列。
本发明还涉及以下实施方案:
1.药物组合物,其包含选自下述(i)~(iii)的至少1种物质,且在给予 PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期进行给予:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质;
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质;以及
(iii)氨基酸。
2.实施方案1所述的药物组合物,其中,PD-1信号抑制剂为抗体。
3.实施方案1或2所述的药物组合物,其中,抗体为选自下述的至 少1种抗体:抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗PD-L2抗体。
4.实施方案1~3中任一项所述的药物组合物,其中,ROS发生剂为 选自下述的至少1种化合物:氢过氧化叔丁基、羰基氰对三氟甲氧基 苯腙、2,4-二硝基苯酚、2,3-二甲氧基-1,4-萘醌和它们的类似物。
5.实施方案1~3中任一项所述的药物组合物,其中,显示解偶联作 用的物质为选自下述的至少1种化合物:羰基氰对三氟甲氧基苯腙、 2,4-二硝基苯酚、羰基氰间氯苯腙、水杨酸、4,4′-[戊烷-1,5-二基双(氧 基)]二苯甲脒)、2-(2-(2,6-二氯苯基氨基)苯基)乙酸、4-羟基-2-甲基 -N-(2-吡啶基)-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰胺-1,1-二氧化物、2-{1-[(4-氯苯 基)羰基]-5-甲氧基-2-甲基-1H-吲哚-3-基}乙酸、N-(4-硝基-2-苯氧基苯 基)甲磺酰胺、4-羟基-2-甲基-N-(5-甲基-2-噻唑基)-2H-1,2-苯并噻嗪-3- 甲酰胺-1,1-二氧化物、氯硝柳胺乙醇胺盐、4-甲氧基-8-(3-甲基丁-2- 烯氧基)喹啉-2-羧酸3-甲基丁-2-烯酯和它们的类似物。
6.实施方案1~3中任一项所述的药物组合物,其中,控制ROS发生 剂或显示解偶联作用的物质的下游信号的物质为控制mTOR、AMPK、 SIRT1、PGC-1α/转录因子复合物(包含PGC-1α的转录因子复合物)和 Foxo1中的任一种或其以上的物质。
7.实施方案6所述的药物组合物,其中,控制mTOR的物质为选自 下述的至少1种化合物:4,6-二-4-吗啉基-N-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪 -2-胺、磷脂酸和它们的类似物。
8.实施方案6所述的药物组合物,其中,控制AMPK的物质为选自 下述的至少1种化合物:6,7-二氢-4-羟基-3-(2′-羟基[1,1′-联苯]-4-基)-6- 氧代-噻吩并[2,3-b]吡啶-5-甲腈、5-氨基咪唑-4-甲酰胺1-β,-D-呋喃核 糖苷、N,N-二甲双胍、6-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-(4-吡啶基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶和它们的类似物。
9.实施方案6所述的药物组合物,其中,控制SIRT1的物质为选自 下述的至少1种化合物:反式-3,5,4′-三羟基芪、N-(2-(3-(哌嗪-1-基甲 基)咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)苯基)喹喔啉-2-甲酰胺、N-苄基-3,5-二乙氧 羰基-4-苯基-1,4-二氢吡啶、2-氨基-N-环戊基-1-(3-甲氧基丙基)-1H- 吡咯并[2,3-b]喹喔啉-3-甲酰胺、烟酰胺单核苷酸和它们的类似物。
10.实施方案6所述的药物组合物,其中,控制PGC-1α/转录因子复 合物(包含PGC-1α的转录因子复合物)的物质为选自下述的至少1种 化合物:2-(4-{2-[(4-氯苯甲酰基)氨基]乙基}苯氧基)-2-甲基丙酸、9- 顺式,12-顺式-十八碳二烯酸)、2-[4-(4-氯苯甲酰基)苯氧基]-2-甲基丙 酸-d6 1-甲基乙酯、(十一烷硫基)-乙酸、4-甲基-5-(2-吡嗪基)-3-二硫杂 环戊烯硫酮、N,N-二甲基甲酰胺、3-[4-(2,4-双(三氟甲基)苄氧基)-3- 甲氧基苯基]-2-氰基-n-(5-三氟甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丙烯酰胺和它 们的类似物。
11.实施方案6所述的药物组合物,其中,控制Foxo1的物质为选自 下述的至少1种化合物:5-氨基-7-(环己基氨基)-1-乙基-6-氟-4-氧代 -1,4-二氢喹啉-3-羧酸、2-环戊基-N-{2,4-二氯-3-[(异喹啉-5-基氧基)甲 基]苯基}-N-甲基乙酰胺及其类似物。
12.实施方案1~3中任一项所述的药物组合物,其中,氨基酸为选自 下述的至少1种化合物:色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪 氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨 酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸和它们的类似物。
13.实施方案1~12中任一项所述的药物组合物,其被用作抗癌剂、 感染症治疗剂或它们的组合。
14.实施方案1~13中任一项所述的药物组合物,其分别给予PD-1信 号抑制剂与选自下述(i)~(iii)的至少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
15.实施方案1~13中任一项所述的药物组合物,其为包含PD-1信号 抑制剂与选自下述(i)~(iii)的至少1种物质的调配剂:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及(iii)氨基酸。
16.PD-1信号抑制活性增强剂,其包含选自下述(i)~(iii)的至少1种物 质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
17.癌症、感染症或它们的组合的治疗方法,其包括下述的步骤:在 给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的任一时期,以药物上有效 的量对受验者或受验动物给予选自下述(i)~(iii)的至少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
18.选自下述(i)~(iii)的至少1种物质的应用,其是用于治疗癌症、感 染症或它们的组合,且在给予PD-1信号抑制剂之前、之后或同时的 任一时期,给予选自下述(i)~(iii)的至少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
19.选自下述(i)~(iii)的至少1种物质的应用,其是用于在治疗癌症、 感染症或它们的组合的方法中应用,且在给予PD-1信号抑制剂之前、 之后或同时的任一时期,给予选自下述(i)~(iii)的至少1种物质:
(i)ROS发生剂和控制其下游信号的物质、
(ii)显示解偶联作用的物质和控制其下游信号的物质、以及
(iii)氨基酸。
序 列 表
<110> 国立大学法人京都大学
<120> PD-1信号抑制剂的并用疗法
<130> FP-213PCT
<150> JP 2015-238511
<151> 2015-12-07
<150> JP 2016-119695
<151> 2016-06-16
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 1
actcggattg ctccggccct 20
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 2
actgacggcc taactccacc ca 22
Claims (16)
1.选自下述(i)~(iii)的至少一种物质与PD-1信号抑制剂的组合在制备用于治疗人受试者的癌症、感染症或它们的组合的药物中的用途:
(i) ROS发生剂或控制其下游信号传导途径的物质,
(ii) 显示解偶联作用的物质或控制其下游信号传导途径的物质;以及
(iii) 氨基酸。
2.权利要求1所述的用途,其中所述PD-1信号抑制剂为抗体。
3.权利要求2所述的用途,其中所述抗体为选自下述的至少一种抗体:抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗PD-L2抗体。
4.权利要求1-3中任一项所述的用途,其中所述ROS发生剂为选自下述的至少一种化合物:叔丁基过氧化氢、羰基氰对三氟甲氧基苯腙、2,4-二硝基苯酚、2,3-二甲氧基-1,4-萘醌和它们的类似物。
5.权利要求1-3中任一项所述的用途,其中所述显示解偶联作用的物质为选自下述的至少一种化合物:羰基氰对三氟甲氧基苯腙、2,4-二硝基苯酚、羰基氰间氯苯腙、水杨酸、4,4'-[戊烷-1,5-二基双(氧基)]二苯甲脒、2-(2-(2,6-二氯苯基氨基)苯基)乙酸、4-羟基-2-甲基-N-(2-吡啶基)-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰胺1,1-二氧化物、2-{1-[(4-氯苯基)羰基]-5-甲氧基-2-甲基-1H-吲哚-3-基}乙酸、N-(4-硝基-2-苯氧基苯基)甲磺酰胺、4-羟基-2-甲基-N-(5-甲基-2-噻唑基)-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰胺-1,1-二氧化物、氯硝柳胺乙醇胺盐、4-甲氧基-8-(3-甲基丁-2-烯氧基)喹啉-2-羧酸3-甲基丁-2-烯酯和它们的类似物。
6.权利要求1-3中任一项所述的用途,其中所述控制ROS发生剂或显示解偶联作用的物质的下游信号传导途径的物质为控制mTOR、AMPK、SIRT1、PGC-1α/转录因子复合物(包含PGC-1α的转录因子复合物)和Foxo1中的一种或多种的物质。
7.权利要求6所述的用途,其中所述控制SIRT1的物质为选自下述的至少一种化合物:反式-3,5,4'-三羟基芪、N-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)苯基)喹喔啉-2-甲酰胺、N-苄基-3,5-二乙氧羰基-4-苯基-1,4-二氢吡啶、2-氨基-N-环戊基-1-(3-甲氧基丙基)-1H-吡咯并[2,3-b]喹喔啉-3-甲酰胺、烟酰胺单核苷酸和它们的类似物。
8.权利要求7所述的用途,其中所述控制SIRT1的物质为反式-3,5,4'-三羟基芪。
9.权利要求1-3中任一项所述的用途,其中所述氨基酸为选自下述的至少一种化合物:色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸和它们的类似物。
10.权利要求1-9中任一项所述的用途,其中所述PD-1信号抑制剂与所述至少一种物质分开施用。
11.权利要求1-9中任一项所述的用途,其中所述PD-1信号抑制剂和所述至少一种物质配制为单一剂量。
12.药物组合物,其包含:
(a) 选自下述的至少一种物质:
(i) ROS发生剂或控制其下游信号传导途径的物质,
(ii) 显示解偶联作用的物质或控制其下游信号传导途径的物质;以及
(iii) 氨基酸;和
(b) PD-1信号抑制剂。
13.权利要求12所述的药物组合物,其中所述PD-1信号抑制剂为抗体。
14.权利要求13所述的药物组合物,其中所述抗体为选自下述的至少一种抗体:抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗PD-L2抗体。
15.权利要求12-14中任一项所述的药物组合物,其中所述至少一种物质是控制SIRT1的物质。
16.权利要求15所述的药物组合物,其中所述控制SIRT1的物质为反式-3,5,4'-三羟基芪。
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---|---|---|---|---|
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