CN114384254A - 一种预测、防治近视眼的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种预测、防治近视眼的试剂盒，所述试剂盒包括检测泪液AREG含量的试剂和/或AREG抗体。本发明提供了近视眼测评标志物，通过临床实验表明：近视患者泪液AREG浓度显著高于非近视组，且泪液中AREG浓度与等效球镜成显著负相关；与眼轴长度成显著正相关；与轴率比成显著正相关。通过FDM模型表明：玻腔注射AREG抗体能抑制近视发展，补充外源性AREG促进近视进展。其优点表现在：本发明首次提出将泪液作为检测标本，通过检测泪液中AREG含量即可预测患者是否近视，相较于现有技术操作简便、可实现无创检测、治疗，且效果更好，有很好的应用前景。

Description

一种预测、防治近视眼的试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种预测、防治近视眼的试剂盒。
背景技术
近视是眼轴的生长发育与眼球屈光力不匹配所引起的外界物体成像于视网膜前的一种屈光不正。眼球的生长发育离不开信号分子的分泌及相关信号通路的活化和调控。目前，对于近视程度的监控主要依靠于眼轴长度、屈光度、眼底情况等生物学参数的物理测量方法，尚未有明确的与近视程度相关的分子标志物应用于临床。泪液样本的留取是一种便捷、无创、快速的方法，可广泛应用于临床，目前泪液中是否存在与近视相关的生物信号分子研究较少，本发明首次发现测量泪液中的AREG的蛋白含量可能作为预测近视控制效果的标志物，且AREG抗体的制备可能为近视临床用药提供新的作用靶点。
中国专利申请：CN201480018884.1公开了一种调节性接触镜，其包括可变焦光学模块，所述光学模块包括光学腔室和利用一个或多个延伸部耦合至所述光学腔室的一个或多个眼睑接合腔室，所述延伸部包括在所述光学腔室与所述一个或多个眼睑接合腔室之间延伸的通道。所述模块可以包括自支撑模块，其能够在放置于接触镜中之前支撑自身以促进在封装于所述接触镜中之前的放置。所述模块可以包括一种或多种透光材料，提供改善的光学矫正，并且可以与诸如水凝胶等软接触镜材料相结合。在许多实施方式中，所述模块包括在上膜与下膜之间延伸的支撑结构以便在畸变量得以减小的情况下准确地提供可变的屈光力，以及提供对眼睑所致压力的改善的响应性。中国专利申请：CN101892306A公开了一种检测病理性近视的试剂盒，包括任选的用于检测BAI3基因rs2073135变异、CCDC149基因rs4697489变异、rs248014变异、rs1105191变异、rs1943049变异或/和TNC基因rs7035322变异用于病理性近视筛查的相关试剂，通过测定受试者rs2073135、rs4697489、rs248014、rs1105191、rs1943049以及rs7035322六个SNP位点是否存在变异，预测受试者对病理性近视的易感性。
但是从以上2个专利文献内容可看出现有技术中要么是使用相关的医学仪器来检测、治疗近视，要么是通过检测多个SNP位点变异来预测近视，存在成本高或检测方法麻烦的缺陷。
考虑到此，本发明首次创新性的提出一种预测近视的标志物，在检测过程中只需要取患者的泪液作为标本，并检测泪液中AREG含量即可预测患者是否近视。本发明的方法操作简便、成本低、效果好，大大提高了患者的接受度。关于本发明一种预测、防治近视眼的试剂盒目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种预测、防治近视眼的试剂盒。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
第一方面，本发明提供了泪液AREG蛋白作为标志物在制备预测近视的检测产品中的应用。
优选地，检测产品检测泪液。
优选地，泪液AREG蛋白作为唯一标志物。
优选地，所述的检测产品为诊断试剂盒。
第二方面，本发明提供了一种预测近视的试剂盒，所述的试剂盒包含特异性检测泪液AREG蛋白的试剂。
第三方面，本发明提供了泪液AREG抑制剂在制备治疗近视的药物中的应用。
优选地，所述的抑制剂选自小分子化合物或生物大分子。
优选地，所述生物大分子是以泪液AREG蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制泪液AREG蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。
优选地，所述的药物有中含有安全有效剂量的AREG抗体和药学上可接受的载体。
第四方面，本发明提供了一种非诊断和治疗目的的近视测评方法，所述的方法是以泪液AREG蛋白含量作为生物标志物。
本发明优点在于：
1、本发明首次通过临床实验以及动物实验发现泪液中AREG蛋白可作为操作性强的近视诊断标志物。本发明辅助临床近视筛查与防控，在近视的临床筛查、诊断及随访中加以应用。当前技术中使用主觉验光、测量眼轴长度等近视诊断方法存在耗时长、验光要求高、机器设备昂贵等缺点，在学校筛查、社区、基层医院难以开展。本发明中，医生只需要取患者泪液作为标本，然后检测泪液中AREG含量即可预测患者是否近视，方法简便高效，可操作性强，且其诊治效果也更好。临床中使用AREG抑制剂可作为治疗近视的药物，减轻了患者的治疗负担，同时也提高了患者的接受度，有很强实用性。
2、现有技术中鲜有研究泪液中相关蛋白质去实现预测、诊治近视，从已有文献所报道的内容可看出，大部分是从房水、玻璃体、眼角膜等角度去实现研究、诊治近视的效果，但这都属于有创方法，在动物实验中有一定研究意义，但在临床样本研究中存在巨大的局限性，操作难，可行性差，亦无法应用于临床大样本、前后对照、长期随访等临床实验中。而本发明首次提出从泪液角度去研究近视，并通过相关实验验证了其技术效果，这对于该领域来讲，无疑是有了创新性的进步。
附图说明
附图1是临床实验中近视组和正视组AREG的泪液浓度以及AREG与生物特征参数之间的相关性。
附图2是动物实验中各组屈光度和轴向长度(AL)的变化。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1临床实验
1方法
招募入组的临床受试者，综合验光仪进行主觉验光、IOL-master进行眼轴长度测量后，用schirmer试纸采集双眼泪液(采集时间为5min)后迅速浸入含500μL蛋白裂解液(BC3710；北京索莱宝科技有限公司，中国)的EP管中，并置于-20℃保存，后续用ELISA方法检测各样品中AREG蛋白浓度。
入组条件：年龄18-40岁，矫正视力1.0，屈光参差≤1.50D
排除标准：全身系统性疾病，长期服药史，眼部手术史，眼表疾病，眼部炎症，激光手术等
分组：近视组(等效球镜-0.5到-6.0D)
正视组(等效球镜+0.5到-0.5D)
检查方法：通过自动验光仪(RK-F1，佳能，日本)测量受试者在非散瞳状态下的屈光度，等效球镜记为球镜度数±1/2柱镜度数。使用IOL master 500(蔡司，德国)测量受试者眼轴长度(axial length,AL)和角膜曲率(corneal radii,CR)，并以眼轴长度/角膜曲率记为轴率比(AL/CR)。
ELISA：使用人源性AREG-ELISA试剂盒((ml025977-C,上海酶联生物科技有限公司，中国)进行AREG浓度检测。步骤如下：
1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃；
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加；
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min；
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)；
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
2结果
见图1，近视患者泪液AREG浓度显著高于非近视组，且泪液中AREG浓度与等效球镜成显著负相关；与眼轴长度成显著正相关；与轴率比成显著正相关。
实施例2动物实验
1方法
2周龄雄性三色豚鼠，分为正常组和近视组，其中，近视组豚鼠遮盖右眼诱导形觉剥夺性近视(FDM)模型，遮盖第3周开始，分别玻腔注射AREG抗体(FDM+anti-AR)、AREG外源性蛋白(FDM+AR)、PBS(FDM+vehicle)，每周1次，连续注射2周，实验前后测量各组屈光度及眼轴长度。
FDM模型诱导方法：2周龄雄性三色豚鼠饲养于自然光照环境中，将豚鼠佩戴半透明气球制成的头套以遮盖右眼，左眼不遮盖，正常暴露，确保豚鼠四肢活动、进食、头部转动等动作不受影响。
生物学参数测量：托吡卡胺滴眼液间隔5分钟滴眼共4次后，使用带状光检影镜(YZ24；苏州六六视觉科技股份有限公司，中国)对豚鼠进行带状光检影，最终结果取3次读书的平均值。角膜表麻后使用眼科A超(OD1-AP，凯信超声，中国)测量豚鼠眼轴长度，最终结果取10次测量值的平均值。
2结果
见图2，在FDM模型中，玻腔注射AREG抗体抑制近视发展，补充外源性AREG促进近视进展。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.泪液AREG蛋白作为标志物在制备预测近视的检测产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，检测产品检测泪液。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，泪液AREG蛋白作为唯一标志物。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的检测产品为诊断试剂盒。
5.一种预测近视的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含特异性检测泪液AREG蛋白的试剂。
6.泪液AREG抑制剂在制备治疗近视的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抑制剂选自小分子化合物或生物大分子。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述生物大分子是以泪液AREG蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制泪液AREG蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的药物有中含有安全有效剂量的AREG抗体和药学上可接受的载体。
10.一种非诊断和治疗目的的近视测评方法，其特征在于，所述的方法是以泪液AREG蛋白含量作为生物标志物。
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