CN114380887A - 一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法，包括：合成化合物Z‑β‑Ala‑Pro‑OH；合成化合物Fmoc‑DAB(Z)‑NHBzl，脱除Fmoc保护基，得到化合物NH2‑DAB(Z)‑NHBzl；以化合物Z‑β‑Ala‑Pro‑OH和NH2‑DAB(Z)‑NHBzl为原料，合成化合物Z‑β‑Ala‑Pro‑DAB(Z)‑NHBzl，脱除Z保护基，得到化合物H‑β‑Ala‑Pro‑DAB‑NHBzl·2HBr。本发明提供的类蛇毒三肽的液相片段合成方法采用2+2片段合成策略，工艺路线短，操作简便快捷，并且两片段能够通过析晶分离，提高了合成的效率，利于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于多肽合成技术领域，具体涉及一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法。
背景技术
类蛇毒三肽(H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl)是一种模拟蛇毒毒素Waglerin I活性的三肽，Waglerin I发现于Temple Viper毒蛇的毒液，已被证明可抑制乙酰胆碱与乙酰胆碱受体的结合，从而抑制肌肉运动。类蛇毒肽是DSM荷兰皇家帝斯曼集团全资子公司PENTAPHARM开发，其化学结构与毒蛇血清相似，具有抑制神经肌肉收缩，抚平肌肤皱纹的功能。应用于化妆品中，类蛇毒肽在减少动力性皱纹方面的功效是类肉毒杆菌的5倍，具有优秀的光滑肌肤、迅速祛皱的性能，分子结构如下所示：
目前，合成类蛇毒肽的方法主要有以下几种
(1)液相逐个缩合：如专利CN 107936108 A，该方案以甲酯保护的氨基酸为原料，逐个缩合，最后进行C端修饰苄胺。该方法不断偶联、水解脱保护，步骤繁琐，偶联到后面工艺收率和纯度较低；此外，该方法用到了两次水解反应，Pro-OMe和Dab-OMe的水解，容易发生消旋；另外，所用原料均需要采用甲酯保护的氨基酸，成本较高。
(2)固液相结合方式：该类方法一般先采用2-CTC Resin固相合成全保护肽Boc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH或Fmoc-β-Ala-Pro-DAB(Boc)-OH，再在液相环境下与苄胺缩合(如专利CN 103570804 B)。该工艺粗肽纯度较高，但是使用2-CTC Resin价格较高，而且氨基酸投料倍数基本都是大大过量，成本高，另外，固相合成在规模上也受限。
(3)液相片段合成：如专利CN 107857797 A，该方法是合成片段H-Pro-DAB(Boc)-NH-Bzl，然后再与Boc-β-Ala-OH反应得到全保护肽。该片段合成策略简便易行，但使用的原料H-Dab(Boc)-OH价格较贵；另外，在Fmoc-Pro-Dab(Boc)-OH与苄胺偶联过程中，因Dab(Boc)主链氨基酸并非是氧羰基类保护基，在缩合反应中，容易产生Dab的消旋，对产品质量有较大影响。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法。
本发明提供一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法，包括如下步骤：
合成化合物Z-β-Ala-Pro-OH；
合成化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl；
脱除化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的Fmoc保护基，得到化合物NH2-DAB(Z)-NHBzl；
以化合物Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl原料，合成化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl；
脱除化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的Z保护基，得到化合物H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr；
对H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr进行纯化转盐，得到H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl。
进一步地，所述化合物Z-β-Ala-Pro-OH的合成方法为：以化合物Z-β-Ala-OH和HONb或Z-β-Ala-OH和HOSu为原料，在非质子性溶剂中，在缩合剂作用下进行活化反应，得到中间体Z-β-Ala-ONb或Z-β-Ala-OSu；在碱的作用下，中间体与H-Pro-OH进行偶联反应，得到化合物Z-β-Ala-Pro-OH。
优选地，所述化合物Z-β-Ala-Pro-OH的合成方法中：
所述Z-β-Ala-OH和HONb的摩尔比均为1:1.0～1.2；
所述Z-β-Ala-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷、二甲基亚砜、乙腈、四氯化碳、甲苯、氯仿或二氯甲烷；
优选地，所述非质子性溶剂为自N，N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述缩合剂为EDC·HCl、DCC或DIC；
优选地，所述缩合剂为EDC·HCl；
优选地，所述活化反应的反应温度为室温，反应时间为2～4h；
优选地，所述Z-β-Ala-ONb或Z-β-Ala-OSu和H-Pro-OH的摩尔比为1:1.0～1.2；
优选地，所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、三乙胺、N-甲基吗啡、DIPEA或2,4,6-三甲基吡啶；
优选地，所述碱为碳酸氢钠；
优选地，所述偶联反应的反应温度为室温，反应时间为2～4h。
进一步地，所述化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的合成方法为：以化合物Fmoc-DAB(Z)-OH和苄胺为原料，在非质子性溶剂中，在偶联剂的作用下进行偶联反应，得到Fmoc-DAB(Z)-NHBzl。
优选地，所述化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的合成方法中：
所述Fmoc-DAB(Z)-OH和苄胺的摩尔比为1:1.0～1.5；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷、二甲基亚砜、乙腈、四氯化碳、甲苯、氯仿或二氯甲烷；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述偶联剂为化合物A、化合物A和DIPEA的组合物、化合物A和化合物B的组合物或化合物A和化合物B和DIPEA的组合物，所述化合物A为EDC·HCl、DCC、DIC、HATU、HBTU、TATU、TBTU、PyAOP或PyBOP，所述化合物B为HOAt或HOBt；
优选地，所述偶联剂为化合物A和DIPEA的组合物；
优选地，所述化合物A和DIPEA的摩尔比为1:1.0～2.0；
优选地，所述偶联剂为HBTU和和DIPEA的组合物；
优选地，所述HBTU和DIPEA的摩尔比为1:1.0～2.0；
优选地，所述偶联反应的反应温度为室温，反应时间为2～4h。
进一步地，所述化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的Fmoc保护基在哌啶/二氯甲烷溶液或二乙胺/二氯甲烷溶液中脱除；
优选地，所述哌啶/二氯甲烷溶液的体积分数为8％-20％；
优选地，所述二乙胺/二氯甲烷溶液的体积分数为8％-20％；
优选地，脱除Fmoc保护基时，反应温度为室温，反应时间为1～2h。
进一步地，所述化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的合成方法为：以化合物Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl为原料，在非质子性溶剂中，在偶联剂的作用下进行偶联反应，得到Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl。
优选地，所述化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的合成方法中：
所述Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl摩尔比为1:0.9～1.1；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷、二甲基亚砜、乙腈、四氯化碳、甲苯、氯仿或二氯甲烷；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述偶联剂为化合物A和化合物B的组合物或化合物A和化合物B和DIPEA的组合物，其中，所述化合物A为EDC·HCl、DCC、DIC、HATU、HBTU、TATU、TBTU、PyAOP或PyBOP，所述化合物B为HOAt或HOBt；
优选地，所述偶联剂为化合物A和化合物B和DIPEA的组合物；
优选地，所述偶联剂为化合物A和化合物B和DIPEA的组合物；
优选地，所述化合物A和化合物B和DIPEA的摩尔比为1:1:1.0～2.0
优选地，所述偶联剂为EDC·HCl、HOAt和DIPEA的组合物；
优选地，所述EDC·HCl、HOAt和DIPEA的摩尔比为＝1:1:1.0～2.0；
优选地，所述偶联反应的反应温度为室温，反应时间为3～5h。
进一步地，所述化合物H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr的Z保护基在溴化氢/醋酸溶液中脱除；
优选地，所述溴化氢/醋酸溶液的体积分数为33％；
优选地，脱除Z保护基时，反应温度为室温，反应时间为3～5h。
进一步地，所述H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr进行纯化转盐的具体步骤如下：
将得到的H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr粗品用水溶解并过滤，采用C18反相柱，以0.3％TFA为A相，纯乙腈为B相进行梯度洗脱，得到流动相，再以0.5％醋酸为A相，纯乙腈为B相进行转盐，收集洗脱液并冻干，即得H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl。
本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的类蛇毒三肽的液相片段合成方法采用2+2片段合成策略，先合成化合物Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl，然后以化合物Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl原料进行H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl的合成，该工艺路线短，操作简便快捷，并且两片段能够通过析晶分离，提高了合成的效率，利于工业化生产。
(2)本发明以Z-β-Ala-OH，Fmoc-Dab(Z)-OH为原料，避免使用强碱如氢氧化钠或氢氧化锂来处理氨基酸酯的反应，减少反应步骤，降低消旋杂质产生，提高了中间体纯度。
(3)该合成方法所用原料价格便宜，合成成本较低，比如使用的Fmoc-DAB(Z)-OH，其价格比常用来合成类蛇毒肽的H-DAB(Boc)-OH、H-DAB(Boc)-OMe和Fmoc-DAB(Boc)-OH等便宜。
附图说明
图1为一个具体实施方案的类蛇毒三肽的液相片段的合成流程；
图2为实施例1中Z-β-Ala-Pro-OH的质谱；
图3为实施例2中Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的质谱；
图4为实施例2中NH2-DAB(Z)-NHBzl的质谱；
图5为实施例3中Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的质谱；
图6为实施例3中H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr的质谱；
图7为实施例3中H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl的检测谱。
具体实施方式
为了更清楚地理解本发明，现参照下列实施例及附图进一步描述本发明。实施例仅用于解释而不以任何方式限制本发明。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。
本发明缩写及英文含义如下表。
| 缩写及英文 | 含义 |
| Z | 苄氧羰基 |
| Fmoc | 9-芴基甲氧基羰基 |
| Boc | 叔丁氧羰基 |
| HONb | N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺 |
| EDC·HCl | 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐 |
| TBTU | 2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯 |
| DIPEA | N,N-二异丙基乙胺 |
| HOAt | N-羟基-7-氮杂苯并三氮 |
| HBTU | O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 |
| HOSu | N-羟基丁二酰亚胺 |
| DCC | 二环己基碳二亚胺 |
| DIC | N,N'-二异丙基碳二亚胺 |
| HATU | O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐 |
| TATU | 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐 |
| TBTU | 2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯 |
| PyAOP | 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷 |
| PyBOP | 1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐 |
| HOBt | 1-羟基苯并三唑 |
图1显示了一个具体实施方案的类蛇毒三肽的液相片段的合成流程。
实施例1：合成Z-β-Ala-Pro-OH
(1)称取11.16g(50mmol)Z-β-Ala-OH和9.85g(55mmol)HONb于容器中，加入150mLN，N-二甲基甲酰胺搅拌溶解，再加入11.50g(60mmol)EDC·HCl，室温搅拌反应2小时，加入450mL纯化水，析出白色沉淀，静置30分钟，过滤，鼓风干燥得到18.51gZ-β-Ala-ONb，收率为96.4％，纯度为98.2％。
(2)将18.51g(48.16mmol)Z-β-Ala-ONb溶解于260mL四氢呋喃中，将6.10g(52.98mmol)H-Pro-OH溶解于130mL饱和碳酸氢钠水溶液中，然后将Z-β-Ala-ONb的四氢呋喃溶液加入到H-Pro-OH的碳酸氢钠水溶液中，室温搅拌反应3小时，旋转蒸发除去四氢呋喃，用1M稀盐酸溶液调pH至3～5，加入200mL乙酸乙酯，静置分层，有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，旋转蒸发浓缩，在0～5℃下搅拌进行重结晶，过滤，真空干燥，得到13.45gZ-β-Ala-Pro-OH，收率为87.2％，纯度为95.64％，MS[M+1]:321.20(见图2)。
实施例2：合成Fmoc-DAB(Z)-NHBzl
(1)合成Fmoc-DAB(Z)-NHBzl
将23.73g(50mmol)Fmoc-DAB(Z)-OH、20.86g(55mmol)HBTU溶解于200mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入17.0mL(100mmol)DIPEA，搅拌反应5分钟，然后加入8.04g(75mmol)苄胺，室温搅拌反应2小时，加入200mLN，N-二甲基甲酰胺稀释，然后加入500mL纯化水，析出白色沉淀，静置30分钟，过滤，鼓风干燥得到粗品，再用二氯甲烷/石油醚进行析晶，过滤，石油醚洗涤2次，真空干燥，得到26.50g Fmoc-DAB(Z)-NHBzl，收率94.0％，纯度98.57％，MS[M+1]:564.32(见图3)。
(2)合成NH2-DAB(Z)-NHBzl
将26.50g(47.0mmol)Fmoc-DAB(Z)-NHBzl加入250mL体积分数为10％的哌啶/二氯甲烷溶液中，室温搅拌1.5小时，加入500mL石油醚，2～8℃下静置30分钟，析出大量白色沉淀，过滤，石油醚洗涤2次，真空干燥，得到13.76gNH2-DAB(Z)-NHBzl，收率为85.7％，纯度为99.96％，MS[M+1]:342.28(见图4)。
实施例3：合成H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl
(1)合成Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl
称取12.90g(40.28mmol)实施例1中得到的Z-β-Ala-Pro-OH、13.76g(40.28mmol)实施例2中的中得到的NH2-DAB(Z)-NHBzl，将Z-β-Ala-Pro-OH、6.03g(44.31mmol)HOAt、8.49g(44.31mmol)EDC·HCl溶解于300mL二氯甲烷中，加入7.5mL(44.31mmol)DIPEA，搅拌反应5分钟，然后加入NH2-DAB(Z)-NHBzl，室温搅拌反应4小时，向反应液中加入200mL纯化水，静置分层，有机相用200mL饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压旋蒸，得到28.19g Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl，收率为108.7％，MS[M+1]:644.43(见图5)。
(2)合成H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr
将150mL 33％溴化氢/醋酸溶液加入步骤(4)得到的28.19g Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl中，室温搅拌反应4小时，在真空中除去挥发性溶剂，得到19.78gH-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr，收率为91.4％，MS[M+1]:376.33(见图6)。
(3)制备H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl
将制得的H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr粗品先预先处理，用10mL水溶解并过滤，采用C18反相柱，以0.3％TFA为A相，纯乙腈为B相进行梯度洗脱，得到流动相，再以0.5％醋酸为A相，纯乙腈为B相进行转盐，收集洗脱液并冻干，得到10.13g白色粉末H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl，总收率为67.0％，纯度为95.48％(见图7)。
实施例4：合成Z-β-Ala-Pro-OH
与实施例1不同之处在于，所述的HONb替换为HOSu，获得14.45g Z-β-Ala-OSu，收率为90.3％，纯度为95.7％，得到12.18g Z-β-Ala-Pro-OH，收率为84.3％，纯度为94.6％。
实施例5：合成并制备H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl
与实施例3不同之处在于，所述Z-β-Ala-Pro-OH的原料取自实施例4，制备后的获得9.77g H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl，总收率为64.6％，纯度为95.1％。
实施例6：合成NH2-DAB(Z)-NHBzl
与实施例2(2)不同之处在于，所述的哌啶/二氯甲烷溶液替换为二乙胺/二氯甲烷溶液，合成并制备得到13.52gNH2-DAB(Z)-NHBzl，收率为87.5％，纯度为91.37％。
实施例7：合成并制备H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl
与实施例3不同之处在于，其NH2-DAB(Z)-NHBzl原料取自实施例6，制备后获得9.07gH-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl，总收率为59.9％，纯度为96.2％。
实施例8：合成Z-β-Ala-Pro-OH
与实施例1不同之处在于，饱和碳酸氢钠水溶液替换为碳酸钠(与H-Pro-OH同当量)水溶液，制备后得到13.98g Z-β-Ala-Pro-OH，收率为90.7％，纯度为91.07％。
实施例9：合成并制备H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl
与实施例3不同之处在于所述Z-β-Ala-Pro-OH原料选自实施例8，制备后获得8.68gH-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl，总收率为57.4％，纯度为95.0％。
实施例10：合成Z-β-Ala-Pro-OH
与实施例1不同之处在于，饱和碳酸氢钠水溶液替换为DIPEA(Z-β-Ala-ONb的2倍当量)水溶液，制备后得到13.12g Z-β-Ala-Pro-OH，收率为85.1％，纯度为92.15％。
实施例11：合成并制备H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl
与实施例3不同之处在于所述Z-β-Ala-Pro-OH原料选自实施例10，制备后获得8.28gH-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl，总收率为54.8％，纯度为95.2％。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种类蛇毒三肽的液相片段合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
合成化合物Z-β-Ala-Pro-OH；
合成化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl；
脱除化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的Fmoc保护基，得到化合物NH2-DAB(Z)-NHBzl；
以化合物Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl原料，合成化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl；
脱除化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的Z保护基，得到化合物H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr；
对H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr进行纯化转盐，得到H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Z-β-Ala-Pro-OH的合成方法为：以化合物Z-β-Ala-OH和HONb或Z-β-Ala-OH和HOSu为原料，在非质子性溶剂中，在缩合剂作用下进行活化反应，得到中间体Z-β-Ala-ONb或Z-β-Ala-OSu；在碱的作用下，中间体与H-Pro-OH进行偶联反应，得到化合物Z-β-Ala-Pro-OH。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Z-β-Ala-Pro-OH的合成方法中：
所述Z-β-Ala-OH和HONb的摩尔比均为1:1.0～1.2；
所述Z-β-Ala-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷、二甲基亚砜、乙腈、四氯化碳、甲苯、氯仿或二氯甲烷；
优选地，所述非质子性溶剂为自N，N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述缩合剂为EDC·HCl、DCC或DIC；
优选地，所述缩合剂为EDC·HCl；
优选地，所述活化反应的反应温度为室温，反应时间为2～4h；
优选地，所述Z-β-Ala-ONb或Z-β-Ala-OSu和H-Pro-OH的摩尔比为1:1.0～1.2；
优选地，所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾、三乙胺、N-甲基吗啡、DIPEA或2,4,6-三甲基吡啶；
优选地，所述碱为碳酸氢钠；
优选地，所述偶联反应的反应温度为室温，反应时间为2～4h。
4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的合成方法为：以化合物Fmoc-DAB(Z)-OH和苄胺为原料，在非质子性溶剂中，在偶联剂的作用下进行偶联反应，得到Fmoc-DAB(Z)-NHBzl。
5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的合成方法中：
所述Fmoc-DAB(Z)-OH和苄胺的摩尔比为1:1.0～1.5；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷、二甲基亚砜、乙腈、四氯化碳、甲苯、氯仿或二氯甲烷；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述偶联剂为化合物A、化合物A和DIPEA的组合物、化合物A和化合物B的组合物或化合物A和化合物B和DIPEA的组合物，所述化合物A为EDC·HCl、DCC、DIC、HATU、HBTU、TATU、TBTU、PyAOP或PyBOP，所述化合物B为HOAt或HOBt；
优选地，所述偶联剂为化合物A和DIPEA的组合物；
优选地，所述化合物A和DIPEA的摩尔比为1:1.0～2.0；
优选地，所述偶联剂为HBTU和和DIPEA的组合物；
优选地，所述HBTU和DIPEA的摩尔比为1:1.0～2.0；
优选地，所述偶联反应的反应温度为室温，反应时间为2～4h。
6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Fmoc-DAB(Z)-NHBzl的Fmoc保护基在哌啶/二氯甲烷溶液或二乙胺/二氯甲烷溶液中脱除；
优选地，所述哌啶/二氯甲烷溶液的体积分数为8％-20％；
优选地，所述二乙胺/二氯甲烷溶液的体积分数为8％-20％；
优选地，脱除Fmoc保护基时，反应温度为室温，反应时间为1～2h。
7.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的合成方法为：以化合物Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl为原料，在非质子性溶剂中，在偶联剂的作用下进行偶联反应，得到Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl。
8.根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于，所述化合物Z-β-Ala-Pro-DAB(Z)-NHBzl的合成方法中：
所述Z-β-Ala-Pro-OH和NH2-DAB(Z)-NHBzl摩尔比为1:0.9～1.1；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷、二甲基亚砜、乙腈、四氯化碳、甲苯、氯仿或二氯甲烷；
优选地，所述非质子性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺；
优选地，所述偶联剂为化合物A和化合物B的组合物或化合物A和化合物B和DIPEA的组合物，其中，所述化合物A为EDC·HCl、DCC、DIC、HATU、HBTU、TATU、TBTU、PyAOP或PyBOP，所述化合物B为HOAt或HOBt；
优选地，所述偶联剂为化合物A和化合物B和DIPEA的组合物；
优选地，所述偶联剂为化合物A和化合物B和DIPEA的组合物；
优选地，所述化合物A和化合物B和DIPEA的摩尔比为1:1:1.0～2.0
优选地，所述偶联剂为EDC·HCl、HOAt和DIPEA的组合物；
优选地，所述EDC·HCl、HOAt和DIPEA的摩尔比为＝1:1:1.0～2.0；
优选地，所述偶联反应的反应温度为室温，反应时间为3～5h。
9.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述化合物H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr的Z保护基在溴化氢/醋酸溶液中脱除；
优选地，所述溴化氢/醋酸溶液的体积分数为33％；
优选地，脱除Z保护基时，反应温度为室温，反应时间为3～5h。
10.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr进行纯化转盐的具体步骤如下：
将得到的H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl·2HBr粗品用水溶解并过滤，采用C18反相柱，以0.3％TFA为A相，纯乙腈为B相进行梯度洗脱，得到流动相，再以0.5％醋酸为A相，纯乙腈为B相进行转盐，收集洗脱液并冻干，即得H-β-Ala-Pro-DAB-NHBzl。
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