CN114350690A - 白蛾周氏啮小蜂细胞色素p450CYP4C3基因在抗杀虫剂胁迫中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4C3基因的cDNA全长序列及其在抗杀虫剂胁迫中的应用，该基因序列全长1521 bp，含完整的开放阅读框，编码506个氨基酸。实时荧光定量PCR实验发现，用于美国白蛾化学防治的杀虫剂如灭幼脲、高效氯氰菊酯及烟碱·苦参碱胁迫处理，均可引起白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因表达量提高，尤其在引发30%小蜂死亡的杀虫剂浓度（LC30）胁迫可引起CYP4C3基因表达明显提高。本发明可为协调化学防治与生物防治美国白蛾提供分子基础。
Description
本发明得到国家自然科学基金（31702058）和天津市高等学校科技发展计划项目（2019KJ089）资助化。
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，研究白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4C3的cDNA全长序列和不同亚致死浓度杀虫剂胁迫下CYP4C3基因表达的变化。
背景技术
美国白蛾（HyphantriacuneaDrury）是严重威胁我国农林生产的重要病虫害之一，目前，针对美国白蛾的防治多采用化学药剂，但化学杀虫剂的不当使用，不仅会污染环境，还可能导致病虫的抗药性不断增强，同时也杀伤天敌，降低其对害虫长期的自然控制能力。
白蛾周氏啮小蜂（ChouioiacuneaYang）膜翅目，姬小蜂科，是美国白蛾，苹果蠹蛾、大袋蛾, 柳毒蛾，国槐尺蛾，杨扇舟蛾等多种鳞翅目昆虫的蛹期内寄生天敌。在抑制美国白蛾的发生中作为主要天敌因子，对控制美国白蛾的危害起到重要作用。通常，释放白蛾周氏啮小蜂可有效防治美国白蛾，但野外环境下，小蜂的活力会收到多重因素影响，其中，杀虫剂残留是影响小蜂自然控害效果的重要环境因子。
细胞色素p450介导的多功能氧化酶是昆虫参与各类杀虫剂及其他毒性物质代谢的主要解毒酶。多种昆虫抗药性的产生均与p450酶系有关，如棉铃虫（Helicoverpaarmigera）对拟除虫菊酯类杀虫剂及辛硫磷的抗性，烟芽夜蛾（Heliothisvirescens）对吡虫啉的抗性，桃蚜（MyzuspersicaeSulzer）对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性等。细胞色素p450的标准命名为：CYP代表细胞色素p450，其后紧跟的数字（例如1、2、3）代表某个基因家族，大写英文字母（例如A、B、C）代表某个亚族，最后一个数字代表单个基因。据报道，昆虫p450酶系CYP4和CYP6家族成员在杀虫剂抗性中起重要作用。
本发明通过转录组测序，报道了一个白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4家族成员CYP4C3的cDNA全长序列，该序列可为研究小蜂的杀虫剂耐受性机制奠定基础。通过实时荧光定量PCR法，研究不同亚致死浓度杀虫剂胁迫下，白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因表达的变化，结果可为科学协调化学防治与生物防治，避免或减轻药剂对天敌的杀伤，充分发挥天敌的自然控害作用，防治美国白蛾提供理论基础。
发明内容
本发明的目的是报道一个白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4家族基因CYP4C3的cDNA全序列及其在抗杀虫剂胁迫中的应用。
本发明采用的技术方案是通过全长转录组测序获得小蜂p450酶系基因CYP4C3的全序列，在通过RT-qPCR 的方法研究不同亚致死浓度杀虫剂协迫下CYP4C3基因表达的变化。
为此本发明公开了如下的技术内容：
白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4C3基因的核苷酸序列，该序列全长1521 bp，含完整的开放阅读框，具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；该序列编码506个氨基酸，分子量为58.23kDa，等电点为8.58。
本发明进一步公开了白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4家族CYP4C3基因核苷酸序列在用于天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂抗杀虫剂胁迫中的应用。其中所述天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂抗杀虫剂胁迫中的应用指的是：CYP4C3基因表达受杀虫剂胁迫调控，实验结果显示：通过检测CYP4C3基因表达表达情况，可获知白蛾周氏啮小蜂对该杀虫剂的耐受情况，应用低于白蛾周氏啮小蜂耐受浓度的杀虫剂灭杀美国白蛾，可以起到即不损伤天敌又能有效防治美国白蛾的目的。
白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4C3基因，其cDNA序列和编码氨基酸的序列如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示。
SEQ ID NO.1
ATGACGAACAAGGAAGAATCATTAGCAGCGAATACATCATGGATGACTATTGTTTTGTCGTCGAGTCTATTCGTCGTCGTCTGCATCTCATTGGTGAAAAGAGTCAAATTTTTAAATGCACTCAAGAATATTCCTTCGCCAAGGGGAGCATTGCCATTCCTTGGTAACGCTGTGCAATTGAACTGTAGCCTTGAAGATTTCTTCAAGAAACTAGTATTATGGAGCAAAGAATTTGGCGACATTTACCTCGTGTGGGTAGGCACACGTCCATTTATCTTCCTTTACCGTGTGGAATCAGTACAACCATTATTAAGTAGTAGTCAACATATCGACAAAAGTCTCGAGTATCAATATTTAAAACCATGGTTACGCGATGGATTAATCACGAGTACTGGTTCAAAGTGGCATTCACGTCGTAAATTGATGACACCAATATTCCACAGCGAAATGTTGAAAGATTACTTTCGTGTGGCAGCTCGCGAAGCTCAAATATTCGTCAAATGTCTTAAAGCTGAACTTGGTAAACCTGAATTCGACGTTATACCTTATGCCAAGAGAGCTGCACTCGATGTTATTTGCGAGTGTGCCATGGGATACAACATTCATACTCAGACGAATTACAAGAACGAGTATCATTCGGCTGTACAGAGGATCACTACGATATCTCAAATAAGATTCACAAACATCTGGATCTCGAACGATACGATTTTCAAACAAACAGCCCTGGGTAAGGAACACGACAAAGCTCTCGAAGTCATTCACAAATTCGTCAACAAGGTAATCGCCGAAAGGAAATTAGCACGACGAGTAAAACGTGACGCAAATTCCAACGATCAAACAAAACGTGCGGAAACTTTATTGGACATGTTGTTGGAACGAGCGGAAAATGGAGAACAATTGACCGATGAAGATATCCTTGAAGAAGTAAATACGATAATGTTTGCTGGTCATGATACGGTTGGTACAAGTGTATCTTGGTCGCTTTACGCGCTCGGTCGACATCCCGAATATCAAGAAAAAATCATTCAAGAATACAATGATCTATTCGGTTCGGATCGTCAAGATATCGTCTACGATGAATTGCATAAACTTGTTTGGTTGGATGCATGTATCAAAGAAGCTTGGCGTGTCTATCCTACTGCTCCACTGATCGCTCGACAGATTTACAACCCGATTACTTTACAAGGAACAGAAATTCCAGTAGGTTCAACAGTTCTCATCAATTCGTATTTGTTACATCGTGATCCACGTTACTTTCCCGATCCAGAAGTTTATCGACCAGAACGCTTTTTACCAGATCAACCAAAAGCACCAACGTTTGCTTATATACCGTTTAGTGCTGGTTCGCGTAATTGTATTGGCTCAAAATTTGCCACAACCGAAACAAAACTAACTCTTTTAGCTTTAGTACGCGCTTATCAATTTCACTCGATCGATCGCGAAGATCAACTGCGTTTTGTTTCGCAGGTGGTACTTGACAACGTTGGCGGTATCCGCCTCAGTATTACCCCTCGGCACTAA
SEQ ID NO.2
MTNKEESLAANTSWMTIVLSSSLFVVVCISLVKRVKFLNALKNIPSPRGALPFLGNAVQLNCSLEDFFKKLVLWSKEFGDIYLVWVGTRPFIFLYRVESVQPLLSSSQHIDKSLEYQYLKPWLRDGLITSTGSKWHSRRKLMTPIFHSEMLKDYFRVAAREAQIFVKCLKAELGKPEFDVIPYAKRAALDVICECAMGYNIHTQTNYKNEYHSAVQRITTISQIRFTNIWISNDTIFKQTALGKEHDKALEVIHKFVNKVIAERKLARRVKRDANSNDQTKRAETLLDMLLERAENGEQLTDEDILEEVNTIMFAGHDTVGTSVSWSLYALGRHPEYQEKIIQEYNDLFGSDRQDIVYDELHKLVWLDACIKEAWRVYPTAPLIARQIYNPITLQGTEIPVGSTVLINSYLLHRDPRYFPDPEVYRPERFLPDQPKAPTFAYIPFSAGSRNCIGSKFATTETKLTLLALVRAYQFHSIDREDQLRFVSQVVLDNVGGIRLSITPRH
本发明公开的白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因的cDNA全长序列的优点在于：
（1）本发明是在国内外首次公开白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4C3基因的cDNA全序列，该序列可为深入研究白蛾周氏啮小蜂的杀虫剂耐受性机制奠定基础。
（2）在通过RT-qPCR 的方法研究不同亚致死浓度杀虫剂胁迫下CYP4C3基因表达的变化，结果显示在不同亚致死浓度杀虫剂胁迫下小蜂体内的CYP4C3基因的表达处于动态变化中，随杀虫剂使用浓度提高，CYP4C3基因表达提高。因此，本发明提出了研究白蛾周氏啮小蜂适应环境变化，避免杀虫剂胁迫对自身伤害的保护机制，对于协调化学防治与生物防治，绿色防治林业美国白蛾提供了一个新的思路与方法。
附图说明
图1为不同浓度灭幼脲胁迫6小时后白蛾周氏啮小蜂的死亡率变化；
图2为不同浓度高效氯氰菊酯胁迫6小时后白蛾周氏啮小蜂的死亡率变化；
图3为不同浓度苦参碱·烟碱胁迫6小时后白蛾周氏啮小蜂的死亡率变化；
图4为白蛾周氏啮小蜂CYP4C3在不同亚致死浓度灭幼脲胁迫6小时后表达变化；
图5为白蛾周氏啮小蜂CYP4C3在不同亚致死浓度高效氯氰菊酯胁迫6小时后表达变化；
图6为白蛾周氏啮小蜂CYP4C3在不同亚致死浓度苦参碱·烟碱胁迫6小时后表达变化。
具体实施方式
下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案，不限制本发明，本领域的专业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化，所述的这些改进和变化都应视为在本发明的范围内，本发明的范围和实质由权利要求来限定；其中所用试剂均有市售。本发明中所述的提取白蛾周氏啮小蜂总RNA的提取，cDNA的合成，实时荧光定量RT-qPCR等方法都是本领域成熟的技术，试剂盒RNA isolater Total RNA Extraction Reagent、HiScript II1st Strand cDNA Synthesis Kit、ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix等都可以从生产商家购买。
实施例1
杀虫剂对白蛾周氏啮小蜂的毒力评估
杀虫剂对白蛾周氏啮小蜂的毒力评估采用药膜法，分别将不同杀虫剂稀释至有效浓度为0、100、200、300、400、500 mg/L（灭幼脲），0、3、6、9、12、15 mg/L（高效氯氰菊酯），0、10、20、30、40、50 mg/L（苦参碱·烟碱）。在清洁50 mL广口锥形瓶中倒满药液，静置5 min，倒出管内药液，自然晾干，使药液在管壁上均匀形成药膜，接入羽化后12 h内成蜂50头，瓶口用120目网布封紧， 6 h后检查统计瓶中小蜂死亡数量。
实施例2
获得白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因序列
实验材料取自室内传代培养的白蛾周氏啮小蜂（培养条件：于人工气候箱（PQX-350H）中，温度25℃，相对湿度60%~80%，无光黑暗）。并收集至RNase-free离心管（1.5ml）中，作为对照组；分别用亚致死浓度（LC10、LC30浓度）灭幼脲、高效氯氰菊酯、苦参碱·烟碱胁迫处理白蛾周氏啮小蜂6h后，挑选200只存活个体，将其完全浸没于RNA later中，并收集至无RNase-free离心管（1.5ml）中，作为实验组。每组样品设置3个重复，于4℃冰箱中过夜保存，次日转移至超低温冰箱中。样品制备完成后送百迈克生物科技公司进行转录组测序。
应用Illumina Nova Seq高通量测序平台对白蛾周氏啮小蜂样本进行转录组测序，采用Trinity 软件对每个读取序列片段进行聚类后拼接成Unigene，再结合生物信息学软件进行靶标序列cDNA全长的判定，进行Blast同源序列检索予以确认，得到CYP4C3基因cDNA序列和编码氨基酸的序列。
实施例3
总RNA的提取
以蒸馏水作为对照，采用药膜法分别用亚致死浓度（LC10、LC30浓度）灭幼脲、高效氯氰菊酯、苦参碱·烟碱胁迫处理1日龄白蛾周氏啮小蜂成蜂，6小时后收集存活个体，产物立即使用或保存于-20℃冷冻。
（1）取30头左右白蛾周氏啮小蜂置于1.5mL的无菌离心管内，倒入液氮并迅速用研磨棒进行充分研磨。将研磨成粉的样品转移至离心管中，加入1mLRNA isolater，静置；待样品完全融化后，再继续吹打至裂解液透明。
（2）将裂解液转移至离心管中，12,000 g 4℃离心5 min，吸取上清。
（3）向上述裂解液中加入1/5体积的氯仿（200 μL）。剧烈震荡15 sec，成乳浊液，4℃静置5 min。
（4）12,000g 4℃离心15 min。
（5）小心取出离心管，吸取上层水相至一个新的离心管中。
（6）加入等体积预冷的异丙醇，上下颠倒混匀，4℃静置10 min。
（7）12,000g 4℃离心10 min。
（8）小心弃去上清，加入1 ml 75%乙醇(RNase-free ddH2O配制)。轻弹管底，让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次，室温静置3 - 5 min。
（9）12,000 g 4℃离心5 min，弃去上清。
（10）在洁净的环境中室温敞口干燥沉淀2 - 5 min，加入适量的RNase-freeddH2O溶解沉淀，必要时可用移液器轻轻吹打几下，待完全溶解后，取少量检测，其余产物立即使用或冷冻保存于在-80℃保存。
实施例4
cDNA的合成
以实施例2所述白蛾周氏啮小蜂总RNA 作为模板。取一高压灭菌的RNasefree的0.2mL离心管，加入以下Total RNA 1 μg及Oligo (dT)23VN (50 μM)1μL，加入RNase-freeddH2O补足至8 μL，65℃加热5 min，迅速置于冰上骤冷，并在冰上静置2 min。再加入2 ×RT Mix 10 μL，HiScript II Enzyme Mix 2 μL，用移液器轻轻吹打混匀。反应条件为25℃保温5分钟，50℃保温45分钟，85℃高温加热2分钟。产物立即使用或保存于-20℃冷冻。
实施例5
荧光定量PCR反应体系和条件
（1）引物设计：根据所得Hsp90基因的全长序列，使用Primer 5软件设计适用于实时荧光PCR检测的特异性引物，引物序列如下：
（2）实时荧光PCR，应用SYBR Green法使用罗氏480实时荧光定量PCR仪（RocheLightCycler480）进行RT-qPCR分析。qPCR反应体系(20μL):2×ChamQ UniversalSYBR qPCR Master Mix10μL、上游引物CYP4C3-Sense 2μL、下游引物CYP4C3-Antisense 2μL、cDNA模板0.8μL、ddH2O 5.2μL。qPCR反应条件：95℃，30sec；95℃，10sec；60℃，15sec；95℃，15sec，60℃，60sec；95℃，15sec。结果采用2－ΔΔCt法计算各基因的相对表达量，SPSS26. 0 软件进行单因素方差分析，Duncan氏新复极差法检验不同处理间差异显著性。
结果与分析
图1为不同浓度灭幼脲胁迫6小时后白蛾周氏啮小蜂的死亡率变化。如图所示，伴随灭幼脲浓度升高，其对小蜂的毒力作用增强，其LC50值（造成50%小蜂死亡的灭幼脲浓度）为398mg/L，依据杀虫剂使用说明书，该灭幼脲的田间使用浓度为125-167mg/L，应用SPSS软件计算发现，灭幼脲的田间使用浓度可造成约30~35%小蜂死亡，说明灭幼脲对天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂毒性作用相对较低。
图2为不同浓度高效氯氰菊酯胁迫6小时后白蛾周氏啮小蜂的死亡率变化。如图所示，伴随高效氯氰菊酯浓度升高，其对小蜂的毒力作用增强，其LC50值为3.6mg/L，依据杀虫剂使用说明书，该高效氯氰菊酯的田间使用浓度为30-45 mg/L，应用SPSS软件计算发现，高效氯氰菊酯的田间使用浓度可造成约80~95%小蜂死亡，说明高效氯氰菊酯是对天敌高毒性的杀虫剂，在白蛾周氏啮小蜂生防区需慎用。
图3为不同浓度苦参碱·烟碱胁迫6小时后白蛾周氏啮小蜂的死亡率变化。如图所示，伴随苦参碱·烟碱浓度升高，其对小蜂的毒力作用增强，其LC50值为22.9mg/L，依据杀虫剂使用说明书，该苦参碱·烟碱的田间使用浓度为5-8mg/L，应用SPSS软件计算发现，苦参碱·烟碱的田间使用浓度可造成约2~5%小蜂死亡，说明苦参碱·烟碱是对天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂相对安全的低毒杀虫剂，可用于美国白蛾综合治理。
图4为不同亚致死浓度灭幼脲胁迫下白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因相对表达量。如图所示，LC10浓度（造成10%小蜂死亡的灭幼脲浓度，实验室数值为132mg/L）可引起CYP4C3基因表达略上调，LC30浓度（造成30%小蜂死亡的灭幼脲浓度，实验室数值为423mg/L）胁迫可引起CYP4C3基因明显上调。
图5为不同亚致死浓度高效氯氰菊酯胁迫下白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因相对表达量。如图所示，LC10浓度（造成10%小蜂死亡的高效氯氰菊酯浓度，实验室数值为2mg/L）可引起CYP4C3基因表达上调（2倍），LC30浓度（造成30%小蜂死亡的高效氯氰菊酯浓度，实验室数值为7mg/L）胁迫可引起CYP4C3基因明显上调。
图6为不同亚致死浓度苦参碱·烟碱胁迫下白蛾周氏啮小蜂CYP4C3基因相对表达量。如图所示，LC10浓度（造成10%小蜂死亡的苦参碱·烟碱浓度，实验室数值为14mg/L）可引起CYP4C3基因表达上调（2倍），LC30浓度（造成30%小蜂死亡的苦参碱·烟碱浓度，实验室数值为21mg/L）胁迫可引起CYP4C3基因明显上调。
SEQUENCE LISTING
<110> 天津师范大学
<120> 白蛾周氏啮小蜂细胞色素p450CYP4C3基因在抗杀虫剂胁迫中的应用
<130> 1
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1521
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atgacgaaca aggaagaatc attagcagcg aatacatcat ggatgactat tgttttgtcg 60
tcgagtctat tcgtcgtcgt ctgcatctca ttggtgaaaa gagtcaaatt tttaaatgca 120
ctcaagaata ttccttcgcc aaggggagca ttgccattcc ttggtaacgc tgtgcaattg 180
aactgtagcc ttgaagattt cttcaagaaa ctagtattat ggagcaaaga atttggcgac 240
atttacctcg tgtgggtagg cacacgtcca tttatcttcc tttaccgtgt ggaatcagta 300
caaccattat taagtagtag tcaacatatc gacaaaagtc tcgagtatca atatttaaaa 360
ccatggttac gcgatggatt aatcacgagt actggttcaa agtggcattc acgtcgtaaa 420
ttgatgacac caatattcca cagcgaaatg ttgaaagatt actttcgtgt ggcagctcgc 480
gaagctcaaa tattcgtcaa atgtcttaaa gctgaacttg gtaaacctga attcgacgtt 540
ataccttatg ccaagagagc tgcactcgat gttatttgcg agtgtgccat gggatacaac 600
attcatactc agacgaatta caagaacgag tatcattcgg ctgtacagag gatcactacg 660
atatctcaaa taagattcac aaacatctgg atctcgaacg atacgatttt caaacaaaca 720
gccctgggta aggaacacga caaagctctc gaagtcattc acaaattcgt caacaaggta 780
atcgccgaaa ggaaattagc acgacgagta aaacgtgacg caaattccaa cgatcaaaca 840
aaacgtgcgg aaactttatt ggacatgttg ttggaacgag cggaaaatgg agaacaattg 900
accgatgaag atatccttga agaagtaaat acgataatgt ttgctggtca tgatacggtt 960
ggtacaagtg tatcttggtc gctttacgcg ctcggtcgac atcccgaata tcaagaaaaa 1020
atcattcaag aatacaatga tctattcggt tcggatcgtc aagatatcgt ctacgatgaa 1080
ttgcataaac ttgtttggtt ggatgcatgt atcaaagaag cttggcgtgt ctatcctact 1140
gctccactga tcgctcgaca gatttacaac ccgattactt tacaaggaac agaaattcca 1200
gtaggttcaa cagttctcat caattcgtat ttgttacatc gtgatccacg ttactttccc 1260
gatccagaag tttatcgacc agaacgcttt ttaccagatc aaccaaaagc accaacgttt 1320
gcttatatac cgtttagtgc tggttcgcgt aattgtattg gctcaaaatt tgccacaacc 1380
gaaacaaaac taactctttt agctttagta cgcgcttatc aatttcactc gatcgatcgc 1440
gaagatcaac tgcgttttgt ttcgcaggtg gtacttgaca acgttggcgg tatccgcctc 1500
agtattaccc ctcggcacta a 1521
<210> 2
<211> 506
<212> PRT
<213> 蛋白序列
<400> 2
Met Thr Asn Lys Glu Glu Ser Leu Ala Ala Asn Thr Ser Trp Met Thr
1 5 10 15
Ile Val Leu Ser Ser Ser Leu Phe Val Val Val Cys Ile Ser Leu Val
20 25 30
Lys Arg Val Lys Phe Leu Asn Ala Leu Lys Asn Ile Pro Ser Pro Arg
35 40 45
Gly Ala Leu Pro Phe Leu Gly Asn Ala Val Gln Leu Asn Cys Ser Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Phe Lys Lys Leu Val Leu Trp Ser Lys Glu Phe Gly Asp
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Val Trp Val Gly Thr Arg Pro Phe Ile Phe Leu Tyr Arg
85 90 95
Val Glu Ser Val Gln Pro Leu Leu Ser Ser Ser Gln His Ile Asp Lys
100 105 110
Ser Leu Glu Tyr Gln Tyr Leu Lys Pro Trp Leu Arg Asp Gly Leu Ile
115 120 125
Thr Ser Thr Gly Ser Lys Trp His Ser Arg Arg Lys Leu Met Thr Pro
130 135 140
Ile Phe His Ser Glu Met Leu Lys Asp Tyr Phe Arg Val Ala Ala Arg
145 150 155 160
Glu Ala Gln Ile Phe Val Lys Cys Leu Lys Ala Glu Leu Gly Lys Pro
165 170 175
Glu Phe Asp Val Ile Pro Tyr Ala Lys Arg Ala Ala Leu Asp Val Ile
180 185 190
Cys Glu Cys Ala Met Gly Tyr Asn Ile His Thr Gln Thr Asn Tyr Lys
195 200 205
Asn Glu Tyr His Ser Ala Val Gln Arg Ile Thr Thr Ile Ser Gln Ile
210 215 220
Arg Phe Thr Asn Ile Trp Ile Ser Asn Asp Thr Ile Phe Lys Gln Thr
225 230 235 240
Ala Leu Gly Lys Glu His Asp Lys Ala Leu Glu Val Ile His Lys Phe
245 250 255
Val Asn Lys Val Ile Ala Glu Arg Lys Leu Ala Arg Arg Val Lys Arg
260 265 270
Asp Ala Asn Ser Asn Asp Gln Thr Lys Arg Ala Glu Thr Leu Leu Asp
275 280 285
Met Leu Leu Glu Arg Ala Glu Asn Gly Glu Gln Leu Thr Asp Glu Asp
290 295 300
Ile Leu Glu Glu Val Asn Thr Ile Met Phe Ala Gly His Asp Thr Val
305 310 315 320
Gly Thr Ser Val Ser Trp Ser Leu Tyr Ala Leu Gly Arg His Pro Glu
325 330 335
Tyr Gln Glu Lys Ile Ile Gln Glu Tyr Asn Asp Leu Phe Gly Ser Asp
340 345 350
Arg Gln Asp Ile Val Tyr Asp Glu Leu His Lys Leu Val Trp Leu Asp
355 360 365
Ala Cys Ile Lys Glu Ala Trp Arg Val Tyr Pro Thr Ala Pro Leu Ile
370 375 380
Ala Arg Gln Ile Tyr Asn Pro Ile Thr Leu Gln Gly Thr Glu Ile Pro
385 390 395 400
Val Gly Ser Thr Val Leu Ile Asn Ser Tyr Leu Leu His Arg Asp Pro
405 410 415
Arg Tyr Phe Pro Asp Pro Glu Val Tyr Arg Pro Glu Arg Phe Leu Pro
420 425 430
Asp Gln Pro Lys Ala Pro Thr Phe Ala Tyr Ile Pro Phe Ser Ala Gly
435 440 445
Ser Arg Asn Cys Ile Gly Ser Lys Phe Ala Thr Thr Glu Thr Lys Leu
450 455 460
Thr Leu Leu Ala Leu Val Arg Ala Tyr Gln Phe His Ser Ile Asp Arg
465 470 475 480
Glu Asp Gln Leu Arg Phe Val Ser Gln Val Val Leu Asp Asn Val Gly
485 490 495
Gly Ile Arg Leu Ser Ile Thr Pro Arg His
500 505
Claims (4)
1.白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4家族CYP4C3基因的核苷酸序列，其特征在于该序列全长1521 bp，含完整的开放阅读框，具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2. 权利要求1所述白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4家族CYP4C3基因的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；该序列编码506个氨基酸，分子量为58.23kDa，等电点为8.58。
3.权利要求1所述白蛾周氏啮小蜂p450酶系CYP4家族CYP4C3基因核苷酸序列在用于天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂抗杀虫剂胁迫中的应用。
4.权利要求3所述的应用，其中所述天敌昆虫白蛾周氏啮小蜂抗杀虫剂胁迫中的应用指的是：CYP4C3基因表达受杀虫剂胁迫调控，通过检测CYP4C3基因表达表达情况，可获知白蛾周氏啮小蜂对该杀虫剂的耐受情况，应用低于白蛾周氏啮小蜂耐受浓度的杀虫剂灭杀美国白蛾，可以起到即不损伤天敌又能有效防治美国白蛾的目的。
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Citations (8)
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2022
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Patent Citations (8)
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
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| 范伟健等: "农药与紫外胁迫对白蛾周氏啮小蜂小分子热激蛋白sHSP12.2基因表达的影响", 《林业科学》, vol. 55, no. 2 * |
Also Published As
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