CN114324621A - 一种改进的药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药检测领域，具体涉及一种检测药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的方法，本发明所述方法包括采用高效液相色谱法进行检测，其中硅胶作为填充剂，流动相A为甲醇‑水‑冰醋酸‑三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇‑正己烷的溶液。本发明方法简单高效地测定药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的含量，结果准确可靠，大幅节约了检测时间。
Description
技术领域
本发明属于医药检验领域，具体涉及一种检测药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的方法。
背景技术
卵磷脂是一种重要的药用辅料,广泛应用于脂质体、纳米乳、固体脂质纳米粒、涂剂等现代药物制剂中，其主要包括磷脂酰胆碱(Pho sphatidy lcholine,PC)、磷脂酰乙醇胺(Pho sphatidylethano lamine,PE)、神经鞘磷脂(Sphin_g omyelin,SM)等前二者在卵磷脂纯化、贮藏过程中易发生水解,失去一分子脂肪酸后生成溶血磷脂酰胆碱(Lyso-phosphatidy lcholine,LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(Lyso-pho sphatidy let hanolamine,LPE)。其中，溶血磷脂酰乙醇胺可引起红细胞及其他细胞膜破裂引起溶血或细胞坏死的不良后果。
氟比洛芬酯是氟比洛芬的前体，是一种在临床上应用十分广泛的非甾体抗炎药物，具有解热、抗炎以及止痛的作用。氟比洛芬酯具有一定脂溶性，溶于大豆油，并能够结合血浆蛋白。氟比洛芬酯注射液在是由氟比洛芬酯与大豆油、卵磷脂、甘油等辅料经过特定的工艺制备而成。由于在制剂放置过程中作为乳化剂的卵磷脂可能会发生部分水解，生成溶血磷脂酰乙醇胺，该化合物具有溶血或改变细胞渗透性等作用，故需对其进行严格的质量控制，并对溶血磷脂酰乙醇胺进行检测。同样其他类似的药物注射液也都采用卵磷酯作为辅料。根据药品QBD质量源于设计的理念，需要对溶血磷脂酰乙醇胺的含量进行严格控制。
专利CN106093227A公开了一种高通量检测生物体血液样本中113种脂质的液质联用方法，该方法采用将待检测样本预处理并加入反应溶剂及萃取剂萃取后，进行液相-质谱检测。该方法能快速检测血液中113种脂质，其中磷脂酰胆碱48个，溶血磷脂酰胆碱21个，磷脂酰乙醇胺17个，溶血磷脂酰乙醇胺4个，但是该方法使用了HPLC-MS平台，液质联用仪器成本过高，适合测量较低浓度的血药浓度，不适用于对药物成品进行检测。
陈华等(HPLC-ELSD法同时测定丙泊酚注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量，药物分析杂志，2014年第34卷第3期，442-446页)利用HPLC－ELSD法同时测定丙泊酚注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量，然而该方法虽然可以进行溶血磷脂酰乙醇胺的检测，但是实验中发现，在磷脂酰乙醇胺和溶血磷脂酰乙醇胺中间存在杂质峰，且无法与溶血磷脂酰乙醇胺完全分离，该杂质峰在稳定性试验或加速试验过程中逐渐增加，会影响到溶血磷脂酰乙醇胺检测结果的准确性。
范凯燕等(HPLC法同时测定尼莫地平脂肪乳中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量，中国药房，2016年第27卷第24期，3413-3416页)使用HPLC法同时测定尼莫地平脂肪乳中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量，色谱柱为Lichrosher Diol，检测器为蒸发光散射检测器，流动相A为正庚烷-异丙醇溶液(43:57)，流动相B为正庚烷-异丙醇-水(29.5:59:11.5)，该方法所用流动相-色谱柱体系损耗较大，运行25小时左右就会出现明显的色谱柱性能下降，保留时间向前漂移，运行100小时以上就可能产生色谱柱填料损坏，不适用于对药物成品长期大批量进行检验。
因此，在本领域中开发一种更高效检测药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的方法是非常必要的。
发明内容
针对现有技术现状，本发明的目的在于提供一种检测药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的方法。
本发明所述药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的检测方法，其包括采用高效液相色谱仪法进行检测，其中硅胶作为填充剂，流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷溶液。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法中进一步包括填充剂硅胶的规格为：100mm-300mm×3.0-4.6mm，3-5μm；优选为：150mm-250mm×4.6mm，5μm；最佳为：250mm×4.6mm，5μm。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括流动相A中甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为830:170:6:0.6-870:130:4:0.4，优选840:160:6:0.6-860:140:4:0.4，最佳为850:150:5:0.5；所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为920:130-880:170，优选为：910:140-890:160，最佳为900:150。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括梯度洗脱，所述梯度洗脱程序具体见下表：
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括采用高效液相色谱仪法测定时柱温35-45℃，优选为38-42℃，最佳为40℃；流速为0.6-0.8ml/min,优选为0.69-0.77ml/min，最佳为0.7ml/min。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述药物制剂为含有磷脂的注射液，所述注射液包括但不于：氟比洛芬酯注射液、丙泊酚注射液、丁酸氯维地平注射液、前列地尔注射液、中长链脂肪乳注射液，优选为氟比洛芬酯注射液。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括：检测氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的高效液相条件为：硅胶作为填充剂，流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷溶液；
填充剂硅胶的规格为250mm×4.6mm，5μm；
流动相A中甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为850:150:5:0.5，所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为900:150；
检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括检测氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的梯度洗脱如下：
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括所述溶血磷脂酰乙醇胺的检测包括以下步骤：
1)待测样品和对照品的制备：
精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；
精密量取溶血磷脂酰乙醇胺对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有20μg、30μg、40μg、50μg、60μg的溶液，作为对照品溶液；
2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰乙醇胺的峰面积，对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量。
本发明方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括待测样品的检测结果每1ml中含有溶血磷脂酰乙醇胺不得超过0.5mg。
相对于现有检测方法，本发明检测方法将检测时间缩短到40min以内，大幅节约了检测时间成本，提高了检测效率；本检测方法有效改善了峰型，进一步提高了峰间分离度，提高了检测的准确度，同时提高了色谱柱的耐用性。
附图说明
图1为实施例1对照品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图2为实施例1供试品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图3为实施例2对照品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图4为实施例2供试品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图5为实施例3对照品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图6为实施例3供试品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图7为实施例4对照品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱；
图8为实施例4供试品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱。
具体实施方式
以下实施例和试验例用于进一步阐述本发明，但不以任何的方式限制本发明的有效范围。
实施例1
1)待测样品和对照品的制备：
精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；
精密量取溶血磷脂酰乙醇胺对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有20μg、30μg、40μg、50μg、60μg的溶液，作为对照品溶液；
2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰乙醇胺的峰面积，对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量。
硅胶作为填充剂，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm；
流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷的溶液。甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为850:150:5:0.5，所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为900:150，梯度洗脱程序见下表1，柱温40℃，流速为0.7ml/min。检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min；
表1
样品检验图谱见附图1、2，供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量为0.327mg/ml。
本次检测时间为35min。
实施例2
操作步骤同实施例1
硅胶作为填充剂，色谱柱的规格为150mm×4.6mm，5μm；流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷的溶液。甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为840:160:6:0.6，所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为890:160，梯度洗脱程序见表1，柱温40℃，流速为0.7ml/min。检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min；
样品检验图谱见附图3、4，供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量为0.329mg/ml。
本次检测时间为35min。
实施例3
操作步骤同实施例1
硅胶作为填充剂，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷的溶液。甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为850:150:5:0.5，所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为900:150，梯度洗脱程序见表1，柱温38℃，流速为0.77ml/min。检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min；
样品检验图谱见附图5、6，供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量为0.346mg/ml。
本次检测时间为35min。
实施例4
操作步骤同实施例1
硅胶作为填充剂，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷的溶液。甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为850:150:5:0.5，所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为900:150，梯度洗脱程序见表1，柱温40℃，流速为0.7ml/min。检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为77℃，载气流量为1.6L/min；样品检验图谱见附图7、8，供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量为0.321mg/ml。
本次检测时间为35min。
Claims (10)
1.一种药物制剂中溶血磷脂酰乙醇胺的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱仪法进行检测，其中硅胶作为填充剂，流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷的溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述填充剂硅胶的规格为：100mm-300mm×3.0-4.6mm，3-5μm；优选为：150mm-250mm×4.6mm，5μm；最佳为：250mm×4.6mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括流动相A中甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积比为830:170:6:0.6-870:130:4:0.4，优选840:160:6:0.6-860:140:4:0.4，最佳为850:150:5:0.5；所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为920:130-880:170，优选为：910:140-890:160，最佳为900:150。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括梯度洗脱，所述梯度洗脱程序具体见下表：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括采用高效液相色谱仪法测定的柱温为35-45℃，优选为38-42℃，最佳为40℃；流速为0.6-0.8ml/min,优选为0.69-0.77ml/min，最佳为0.70ml/min。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述药物制剂为含有磷脂的注射液，所述注射液包括氟比洛芬酯注射液、丙泊酚注射液、丁酸氯维地平注射液、前列地尔注射液、中长链脂肪乳注射液，优选为氟比洛芬酯注射液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：检测氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的高效液相条件为：硅胶作为填充剂，流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的溶液，流动相B为异丙醇-正己烷溶液；
填充剂硅胶的规格为250mm×4.6mm，5μm；
流动相A中甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积为850:150:5:0.5；所述流动相B中异丙醇-正己烷的体积比为900:150；
检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括梯度洗脱，所述梯度洗脱程序具体见下表：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括所述氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的检测包括以下步骤：
1)待测样品和对照品的制备：
精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；
精密量取溶血磷脂酰乙醇胺对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有20μg、30μg、40μg、50μg、60μg的溶液，作为对照品溶液；
2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰乙醇胺的峰面积，对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰胆碱的含量。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括待测样品的检测结果应符合每1ml待测样品中含有溶血磷脂酰乙醇胺不得超过0.5mg。
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- 2020-10-11 CN CN202011080740.2A patent/CN114324621A/zh active Pending
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