CN114317651A - 一种黄精多肽、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及了一种黄精多肽、制备方法及其应用，所述的黄精多肽是提取自黄精的蛋白质酶解物；所述的黄精多肽的分子量为1.7～4.6kDa。本发明所制得的黄精多肽精华液以天然黄精多肽为核心成分，具有保湿、抗氧化、抗衰老等美容养颜功效，所含透明质酸为天然高保湿因子，再辅以海藻糖、乳木果油、肉豆蔻酸异丙酯等成分，使黄精多肽精华液具有高保湿、美白、柔润肌肤的作用，也可使皮肤在高温、高寒、强紫外线辐射等恶劣环境中保持细胞活性，提高抗逆能力。

Description

一种黄精多肽、制备方法及其应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种黄精多肽、制备方法及其应用。

背景技术

黄精(Polygonatum sibiricum)作为我国传统中药之一，具有2000多年的药物使用历史。黄精的药用成分丰富，主要包含黄精多糖、甾体皂苷类、蛋白质、无机元素及氨基酸等。现代药理学认为，黄精可以增强人体细胞SOD活性和机体免疫力，具有降低血糖、血脂、增强免疫力、提高记忆力、消炎、抗癌等作用。

从医学角度来看，健康的皮肤应该具有以下特征：光滑柔嫩、细腻透明、润泽无瑕、富有弹性。生活环境中的不少因素，如社会压力的增加、饮食的不规律、生活环境的污染等会导致皮肤组织机能低下，细胞新陈代谢、微循环出现障碍，进而呈现出皮肤粗糙、干燥、黯淡、缺少光泽、皱纹、色素沉积等现象。

普通的化妆水有爽肤水、柔肤水、收敛水等，精华液的营养作用高于普通化妆水，它能舒缓紧绷、干燥的肌肤。精华液通常不含酒精，对肌肤无刺激，更好吸收营养。精华液的有效成分不仅仅只是停留在肌肤表面，还可以到达皮肤的深层，直接参与细胞的新陈代谢，能让肌肤在瞬间回复水润状态。

发明内容

针对现有技术中的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种黄精多肽、制备方法及其应用，本发明得到的黄精多肽抗氧化性能好，可用于制备化妆品，特别是精华液，可以长久保湿、保持肌肤细胞活性、并有美白、细致皮肤的功效。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案为:

一种黄精多肽，所述的黄精多肽是提取自黄精的蛋白质酶解物；所述的黄精多肽的分子量为1.7～4.6kDa。

可选的，所述的黄精多肽的分子量小于3kDa。

可选的，制备方法具体包括：

利用盐沉淀法、水提法或萃取法对黄精进行粗提得到黄精蛋白粗提物，再通过酶解法对黄精蛋白粗提物进行酶解得到黄精多肽。

可选的，所述的盐沉淀法具体包括：

黄精粉末与0.1mol/L的NaCl溶液按照料液比1:15的质量与体积比进行混合，浸泡2h，8℃条件下以5000r/min离心20min；收集上清液，添加4.0mol/L的硫酸铵溶液，搅动直到不再析出蛋白质。

可选的，所述的黄精粉末为鲜黄精烘干后，过100目筛。

一种黄精多肽的制备方法，所述的黄精多肽为本发明所述的黄精多肽；

对黄精进行粗提得到黄精蛋白粗提物，再通过酶解法对黄精蛋白粗提物进行酶解得到黄精多肽；黄精蛋白粗提物的提取方法包括：盐沉淀法、水提法或萃取法；提取对象为黄精粉末，所述的黄精粉末为鲜黄精烘干后，过100目筛。

可选的，所述的盐沉淀法具体包括：

黄精粉末与0.1mol/L的NaCl溶液按照料液比1:15的质量与体积比进行混合，浸泡2h，8℃条件下以5000r/min离心20min；收集上清液，添加4.0mol/L的硫酸铵溶液，搅动直到不再析出蛋白质。

一种黄精多肽精华液，按质量百分比计，包括：

黄精多肽1％～5％，辛癸酸甘油酯2％～10％、卡波姆0.01％～0.05％、氢化蓖麻油1％～5％、肉豆蔻酸异丙酯2％～8％、聚乙二醇2％～8％、聚二甲基硅氧烷1％～2％、透明质酸0.01％～0.05％、木糖醇2％～6％、甘油4％～10％、羟苯甲酯0.02％～0.1％，水补足100％。

一种黄精多肽精华液，按质量百分比计，包括：

黄精多肽5％，辛癸酸甘油酯8％，卡波姆0.05％，氢化蓖麻油5％，肉豆蔻酸异丙酯6％，聚乙二醇8％，聚二甲基硅氧烷2％，透明质酸0.05％，木糖醇5％，甘油8％，羟苯甲酯0.05％，水补足100％。

黄精多肽精华的制备方法，具体包括：

黄精多肽配方量，水溶解后为A相；

配方量的卡波姆、氢化蓖麻油、辛癸酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯和羟苯甲酯，水溶解后为B相；

合并A、B相，加入配方量的透明质酸钠、聚乙二醇和聚二甲基硅氧烷搅拌均匀，静置24h，使其充分自然溶解，为C相；

配方量的木糖醇和甘油加入到C相中，补加水到100％，搅拌均匀，即得黄精精华液。

本发明的优点为：

本发明黄精多肽可以延缓皮肤衰老，改善皮肤弹性，有一定的抗辐射，保湿作用；黄精多肽进行抗氧化分析，通过测定其DPPH·抗氧化活性、·OH抗氧化实验和超氧阴离子自由基清除实验对某分子量范围黄精多肽的抗氧化活性进行了评价，并与常用抗氧化剂抗坏血酸(Vc)进行了比较；结果表明该多肽在5mg/mL浓度条件下，对羟自由基和超氧自由基的清除率强于常用抗氧化剂Vc；并通过SDS-PAGE凝胶电泳对黄精多肽进行定性分析，确定其分子量在1.7～4.6kda之间；

本发明选取沉淀法、酶解法进行黄精多肽分离制备，对黄精粗蛋白提取率达到76mg/g，蛋白水解度达到31.25％；该方法对黄精多肽的分离效率高，且操作简便，与常规的多肽制备相比，极大的降低了萃取成本，克服聚合物中目标成分难回收及离子液体毒性较大的缺点；整个过程工艺简单，分离效率高，成本低廉，安全无毒，可用于大规模工业化生产；

以黄精多肽为原料开发护肤精华液，天然环保、安全无毒，无刺激性。

附图说明

附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：

图1是黄精多肽各组分的自由基清除率；

图2是黄精多肽组分Ⅲ与VC对不同类型自由基的清除率比较；

图3是不同分子量黄精多肽实物照片图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明作进一步地详细描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明中所用黄精多肽为黄精粉末经沉淀法和酶解法提取分离后经过超滤所得。超滤是一种新型膜分离技术。以压力为推动力使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而实现不同分子量物质的分离。该方法操作简便，成本低廉，无任何化学试剂引入、分离条件温和且工艺容易放大，具备工业化分离天然产物的前景，可为下一步工业化生产奠定基础。

具体的包括：

盐沉淀法是指黄精粉末与0.1mol/L的NaCl溶液按照料液比1:15进行混合，浸泡2h，8℃条件下以5000r/min离心20min；离心后收集上清液，添加4.0mol/L的硫酸铵溶液，并且不断搅动，直到不再析出蛋白质。然后8℃条件下5000rpm离心20min，收集沉淀，用少量蒸馏水溶解成蛋白质溶液；用15～20cm的透析袋装起蛋白质溶液，蒸馏水作为透析液，放在磁力搅拌器上透析24h，盐离子会逐渐转移到透析液中，蛋白质留在袋内，6h更换一次透析液，提取得到黄精粗蛋白。

用碱性蛋白酶Alcalase对黄精粗蛋白进行酶解，酶解工艺条件为：将通过透析收集的蛋白质溶液置于85℃的恒温水浴中10min，将pH值调节至9，然后冷却至55℃，添加5％的碱性蛋白酶，恒温水浴5h(pH为9，温度55℃)。酶解完成后，沸水浴10min，冷却到室温后5000rpm离心20min，收集上清液，即为酶促水解后的黄精多肽产物。

使用配备有截留分子量为10kDa和3kDa超滤膜的Amicon Ultra-15离心超滤管分离黄精蛋白酶解液，8000rpm离心25min。收集三个组分：组分Ⅰ(＞10kDa)、组分Ⅱ(3～10kDa)以及组分Ⅲ(＜3kDa)，然后将获得的组分进行冷冻干燥，即得不同分子量的黄精多肽组分Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。

黄精蛋白提取方法选择盐析法，多肽制备采用酶解法，最后用超滤法分离得到不同分子量的多肽。使用硫酸铵进行盐析法具有盐析能力强，价格低廉，高浓度也不会引起蛋白质活性丧失等优点。酶解法和超滤法分别是生物方法和物理方法，具有高效、温和，对多肽活性影响小，操作简单等优点。是一种省时、省力、易于控制的黄精多肽制备方法。

本发明的配方由黄精多肽，甘油，透明质酸钠，海藻糖，卡波姆940、氢化蓖麻油、稳定剂，防腐剂组成。研究表明，黄精多肽可以延缓皮肤衰老，改善皮肤弹性，有一定的抗氧化、保湿、抗辐射、提高免疫力作用。

甘油为传统的优良保湿剂，物美价廉，但使用时有粘腻感，高浓度对皮肤有一定刺激性；聚二醇具有与甘油类似的保湿强度，但较甘油更温和，与甘油合用二者保湿效果均增加，能缓解甘油的刺激性，消除甘油使用的粘腻感；透明质酸钠是公认的高效保湿剂，在干燥环境(空气湿度在30％左右)中依然发挥优良保湿作用，对人体无任何伤害；肉豆蔻酸异丙酯为深入渗透的保湿剂，分子小易吸收滋润皮肤，还有显著的软化去除角质作用；木糖醇是人体自有物质，具有“纯天然、无刺激”特点，极易溶于水，无挥发性，保湿效果持久恒定，可作抗氧化增效剂，上述五种保湿剂合用辅助黄精多肽发挥更全面更深入更舒适的保湿效果。

聚二甲基硅氧烷能够在细胞表层形成一层特殊的保护膜，不仅滋润着皮肤细胞，还可抵御外来的紫外线辐射，从而保护皮肤不致受损，抗静电、有明显的防尘效果透气性好,即使在皮肤上形成硅氧烷膜也不影响汗液排出。它对香精香料具有缓释定香作用,因而保香期较长稳定性高。

辛癸酸甘油酯和氢化蓖麻油作为柔润剂、防冻剂共同作用，使黄精精华液具有改善肤质、美白、抗衰老功效。

另外，为增加精华液的稳定性、保证一定的稠度，添加了安全无毒的稳定剂，及安全高效广谱的防腐剂。各组分相辅相成、缺一不可，共同发挥保湿、美白、防晒、抗衰老、改善肤质的作用，本品使用稳定剂为卡波姆940，防腐剂为羟苯甲酯。

为了更好的理解本发明，下面结合具体的实施例来进一步说明。

实施例1：

将鲜黄精置于干净不锈钢托盘中，于鼓风干燥箱中烘干至恒重，温度为60℃，时间为48h，万能粉碎机粉碎，过100目筛，得黄精粉；

黄精粗蛋白的提取过程包括：取黄精粉100份，加入0.1mol/L的NaCl溶液按照料液1500份，浸泡2h，8℃条件下以5000r/min离心20min；离心后收集上清液，添加4.0mol/L的硫酸铵溶液，并且要不断搅动，直到不再析出蛋白质；然后8℃条件下5000rpm离心20min，收集沉淀，得到粗蛋白，用少量蒸馏水溶解成蛋白质溶液。

酶解法过程包括：按上述沉淀法得到黄精粗蛋白，取10份黄精粗蛋白，用100份去离子水溶解，溶液置于85℃的恒温水浴中10min，将pH值调节至9，然后冷却至55℃，添加5％的碱性蛋白酶，恒温水浴5h(pH为9，温度55℃)。酶解完成后，沸水浴10min，冷却到室温后5000rpm离心20min，收集上清液，即为酶促水解产物。

沉淀法所得黄精粗蛋白提取率达到76mg/g。蛋白水解度达到31.25％。并通过SDS-PAGE凝胶电泳对黄精多肽进行定性分析，确定其分子量在1.7～4.6kDa之间。

使用配备有截留分子量为10kDa和3kDa超滤膜的Amicon Ultra-15离心超滤管分离黄精蛋白酶解液，8000rpm离心25min。收集三个组分：组分Ⅰ(＞10kDa)、组分Ⅱ(3～10kDa)以及组分Ⅲ(＜3kDa)。将所得黄精多肽超滤液进行透析处理，以去除无机盐，将透析液-245℃真空冷冻干燥得黄精多肽。

对提取所得黄精多肽抗氧化作用以羟自由基清除率为指标进行检测，结果如图1和2所示，表明酶解法所制得的黄精多肽组分Ⅲ(＜3kDa)的超氧自由基清除率、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率显著高于Vc。同时，相对于组分Ⅰ(＞10kDa)和组分Ⅱ(3kDa～10kDa)，黄精多肽组分Ⅲ(＜3kDa)的抗氧化作用较好，三种多肽的外观照片见图3。

实施例2：

本实施例中使用的黄精多肽为实施例1中的组分Ⅲ(＜3kDa)。

精华配方：黄精多肽5％，辛癸酸甘油酯8％，卡波姆0.05％，氢化蓖麻油5％，肉豆蔻酸异丙酯6％，聚乙二醇8％，聚二甲基硅氧烷2％，透明质酸0.05％，木糖醇5％，甘油8％，羟苯甲酯0.05％，去离子补足100％。搅拌均匀，即得黄精精华液。

黄精精华液配制工艺为：

黄精多肽5份，去离子水10份溶解，为A相；

称取卡波姆940 0.05份，辛癸酸甘油酯8份，氢化蓖麻油5份，肉豆蔻酸异丙酯6份，羟苯甲酯0.05份，用10份去离子水溶解，为B相；

合并A、B相，加入透明质酸钠0.05份，聚乙二醇-4000 8份，聚二甲基硅氧烷2份，搅拌均匀，静置24h，使其充分自然溶解，为C相；

称取木糖醇5份和甘油8份加入到C相中，补加去离子水到100份，搅拌均匀，即得黄精精华液。

黄精精华液感官评价标准如表1所示：

表1感官评价指标标准

指标	描述
		外观状态	乳白色，均匀无杂质，无剧烈干缩现象
细腻感	柔滑细腻，无颗粒感或粗糙
		粘稠度	稠度适当，无结块、发稀
清爽度	使用后皮肤清爽，无黏腻感
		延展性	容易涂敷，涂布层均匀
吸收效果	使用后皮肤表面的残留量，包括触感和肉眼可见；皮肤表面的感受；

表2分值与对应感受

分值	感受	分值	感受
				1	非常不喜欢(非常不好)	6	有点喜欢(有点好)
2	很不喜欢(很不好)	7	一般喜欢(一般好)
				3	一般不喜欢(一般不好)	8	很喜欢(很好)
4	有点不喜欢(有点不好)	9	非常喜欢(非常好)
				5	无所谓(既无喜欢也无不喜欢)	10	极其喜欢(极好)

感官评价总分为30个参评个体的平均分。黄精精华液感官评价结果如表3所示，显示实施例2的精华液感官评价值中清爽度、延展性、吸收效果得分高，具有清爽、易延展、吸收好的效果。

表3黄精多肽精华液感官评价结果

黄精精华液稳定性及安全性检验结果如表4所示：实施例2中的黄精精华液耐热、耐寒性均良好，且安全性高，使用后无过敏反应。

表4黄精精华液稳定性及安全性检验结果

对黄精多肽精华液进行离心稳定性、耐热测试、耐寒测试和静置测试的四项稳定性实验。经观察，均没有出现沉淀、分层和返粗等现象，说明该配方稳定性好。

以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (10)

1.一种黄精多肽，其特征在于，所述的黄精多肽是提取自黄精的蛋白质酶解物；

所述的黄精多肽的分子量为1.7～4.6kDa。

2.根据权利要求1所述的黄精多肽，其特征在于，所述的黄精多肽的分子量小于3kDa。

3.根据权利要求1所述的黄精多肽，其特征在于，制备方法具体包括：

利用盐沉淀法、水提法或萃取法对黄精进行粗提得到黄精蛋白粗提物，再通过酶解法对黄精蛋白粗提物进行酶解得到黄精多肽。

4.根据权利要求1所述的黄精多肽，其特征在于，所述的盐沉淀法具体包括：

黄精粉末与0.1mol/L的NaCl溶液按照料液比1:15的质量与体积比进行混合，浸泡2h，8℃条件下以5000r/min离心20min；收集上清液，添加4.0mol/L的硫酸铵溶液，搅动直到不再析出蛋白质。

5.根据权利要求4所述的黄精多肽，其特征在于，所述的黄精粉末为鲜黄精烘干后，过100目筛。

6.一种黄精多肽的制备方法，其特征在于，所述的黄精多肽为权利要求1-5任一权利要求所述的黄精多肽；

对黄精进行粗提得到黄精蛋白粗提物，再通过酶解法对黄精蛋白粗提物进行酶解得到黄精多肽；黄精蛋白粗提物的提取方法包括：盐沉淀法、水提法或萃取法；提取对象为黄精粉末，所述的黄精粉末为鲜黄精烘干后，过100目筛。

7.根据权利要求6所述的黄精多肽的制备方法，其特征在于，所述的盐沉淀法具体包括：

黄精粉末与0.1mol/L的NaCl溶液按照料液比1:15的质量与体积比进行混合，浸泡2h，8℃条件下以5000r/min离心20min；收集上清液，添加4.0mol/L的硫酸铵溶液，搅动直到不再析出蛋白质。

8.一种黄精多肽精华液，其特征在于，按质量百分比计，包括：

黄精多肽1％～5％，辛癸酸甘油酯2％～10％、卡波姆0.01％～0.05％、氢化蓖麻油1％～5％、肉豆蔻酸异丙酯2％～8％、聚乙二醇2％～8％、聚二甲基硅氧烷1％～2％、透明质酸0.01％～0.05％、木糖醇2％～6％、甘油4％～10％、羟苯甲酯0.02％～0.1％，水补足100％。

9.一种黄精多肽精华液，其特征在于，按质量百分比计，包括：

黄精多肽5％，辛癸酸甘油酯8％，卡波姆0.05％，氢化蓖麻油5％，肉豆蔻酸异丙酯6％，聚乙二醇8％，聚二甲基硅氧烷2％，透明质酸0.05％，木糖醇5％，甘油8％，羟苯甲酯0.05％，水补足100％。

10.权利要求8或9的黄精多肽精华的制备方法，其特征在于，具体包括：

黄精多肽配方量，水溶解后为A相；

配方量的卡波姆、氢化蓖麻油、辛癸酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯和羟苯甲酯，水溶解后为B相；

合并A、B相，加入配方量的透明质酸钠、聚乙二醇和聚二甲基硅氧烷搅拌均匀，静置24h，使其充分自然溶解，为C相；

配方量的木糖醇和甘油加入到C相中，补加水到100％，搅拌均匀，即得黄精精华液。

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