CN114315962B - 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 - Google Patents
一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114315962B CN114315962B CN202111306032.0A CN202111306032A CN114315962B CN 114315962 B CN114315962 B CN 114315962B CN 202111306032 A CN202111306032 A CN 202111306032A CN 114315962 B CN114315962 B CN 114315962B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- organism
- fever virus
- immune response
- application
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 139
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 139
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 137
- 241000701386 African swine fever virus Species 0.000 title claims abstract description 56
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title claims abstract description 39
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 14
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 abstract description 20
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 17
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 description 5
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LOVIQNMIPQVIGT-BVSLBCMMSA-N Arg-Trp-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 LOVIQNMIPQVIGT-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- WPOLSNAQGVHROR-GUBZILKMSA-N Asn-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WPOLSNAQGVHROR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N Asn-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAMFAYSMNZBNCA-UWVGGRQHSA-N His-Gly-Met Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(O)=O QAMFAYSMNZBNCA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- DDEMUMVXNFPDKC-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N DDEMUMVXNFPDKC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IECZNARPMKQGJC-XIRDDKMYSA-N Met-Gln-Trp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N IECZNARPMKQGJC-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- CHQWUYSNAOABIP-ZPFDUUQYSA-N Met-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N CHQWUYSNAOABIP-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- KPVLLNDCBYXKNV-CYDGBPFRSA-N Met-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KPVLLNDCBYXKNV-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- JACMWNXOOUYXCD-JYJNAYRXSA-N Met-Val-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JACMWNXOOUYXCD-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- WURZLPSMYZLEGH-UNQGMJICSA-N Phe-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O WURZLPSMYZLEGH-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- QSHKTZVJGDVFEW-GUBZILKMSA-N Ser-Met-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N QSHKTZVJGDVFEW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BDYBHQWMHYDRKJ-UNQGMJICSA-N Thr-Phe-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O BDYBHQWMHYDRKJ-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006759 inflammatory activation Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229940030980 inova Drugs 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 229940126583 recombinant protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108010029895 rubimetide Proteins 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/12011—Asfarviridae
- C12N2710/12022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/12011—Asfarviridae
- C12N2710/12034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用，属于生物医药技术领域；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示。本发明的多肽能够显著促进ASFV致敏免疫细胞增殖，并且能够通过促进猪CD8+T细胞分泌IFN‑γ促进猪机体产生ASFV抗原特异性免疫应答。免疫动物后，能显著促进猪机体免疫应答。本发明所述多肽或者由多肽聚合得到的多肽聚合物能够用于制备非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗。
Description
本申请是申请日为2020年08月26日、申请号为CN202010871925.9、发明名称为《一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用》的分案申请。
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用。
背景技术
非洲猪瘟(African Swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fevervirus，ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)而引起的一种急性、出血性、烈性传染病。非洲猪瘟病毒主要感染巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞，感染后ASFV通过不同机制逃逸宿主先天和固有的免疫防御系统，如Ⅰ型干扰素(IFN)应答、细胞凋亡、炎症反应及特异靶基因的活化。
疫苗是预防非洲猪瘟最有效的方法之一。传统的减毒活疫苗和灭活疫苗是目前最为常用的疫苗。但是ASFV的天然致弱毒株或基因缺失致弱毒株因存在生物安全隐患、免疫副反应、散毒危险及遗传背景不清等诸多缺陷限制了其在疫苗生产中的应用。ASFV编码多达167种蛋白，这对筛选能诱导机体免疫保护的候选抗原造成极大难度。然而，已报道数种蛋白可作为病毒中和的靶子，并对其进行了重组蛋白疫苗研究。P30和p54两种蛋白位于病毒外部，分别涉及病毒吸附和内化作用。用p30和p54蛋白免疫家猪可诱导产生中和抗体，但不能抵御致死性攻毒，病程亦未改变，而用p30和p54联合疫苗免疫既可产生中和抗体，也可改善病程。Inovoa等评估了模拟病毒蛋白的46种肽以确定其建立保护免疫应答的能力。接种某些联合肽可延迟家猪死亡。但是目前为止，尚未见报道完全有效的ASFV亚单位疫苗。
发明内容
本发明的目的在于提供一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用，本发明的多肽能够用于制备ASFV亚单位疫苗，制备得到的亚单位疫苗能够有效增强机体ASFV特异性免疫应答，预防非洲猪瘟病毒感染。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；
所述第一多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述第二多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述第三多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
所述第四多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述第五多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；
所述多肽通过促进猪机体中的CD8+T细胞分泌IFN-γ来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答；和/或，
所述多肽通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性单核巨噬细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答。
优选的，所述ASFV抗原特异性单核巨噬细胞包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和B细胞的增殖。
本发明提供了一类由上述方案所述多肽聚合得到的多肽聚合物。
本发明提供了上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物在制备促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的制剂中的应用。
本发明提供了一种非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗，所述亚单位疫苗的活性成分包括上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物。
优选的，所述亚单位疫苗的剂型包括注射剂。
优选的，所述亚单位疫苗中所述多肽或者所述多肽聚合物的含量为100μg/组分/头份。
本发明的有益效果：本发明提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5所示。本发明的多肽能够显著促进ASFV致敏免疫细胞增殖，并且能够通过促进猪CD8+T细胞分泌IFN-γ促进猪机体产生ASFV抗原特异性免疫应答。免疫动物后，能够显著促进猪机体免疫应答。本发明所述多肽或者由所述多肽聚合得到的多肽聚合物能够用于制备非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗。本发明的多肽没有毒副作用以及生物安全隐患，作为ASFV疫苗组分具有产业化优势。
附图说明
图1为AP1的鉴定色谱图；
图2为AP1的质谱图；
图3为AP2的鉴定色谱图；
图4为AP2的质谱图；
图5为AP3的鉴定色谱图；
图6为AP3的质谱图；
图7为AP4的鉴定色谱图；
图8为AP4的质谱图；
图9为AP5的鉴定色谱图；
图10为AP5的质谱图；
图11为AP1～AP5促ASFV致敏淋巴细胞及单核巨噬细胞增殖的流式数据统计图；
图12为AP1～AP5促健康猪淋巴细胞及单核巨噬细胞增殖的流式数据统计图；
图13为AP1促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；
图14为AP2促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；
图15为AP3促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；
图16为AP4促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；
图17为AP5促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；
图18为二免14d，B淋巴细胞亚群比例水平；
图19为CD8+T淋巴细胞亚群比例水平。
具体实施方式
本发明提供了一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽；所述多肽包括第一多肽、第二多肽、第三多肽、第四多肽和第五多肽中的一种或几种；所述多肽通过促进猪机体中的CD8+T细胞分泌IFN-γ来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答；和/或，所述多肽通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性单核巨噬细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答。
在本发明中，所述非洲猪瘟病毒抗原特异性淋巴细胞包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和B细胞。
在本发明中，所述第一多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体为：SMMMVFNQL(Ser-Met-Met-Met-Val-Phe-Asn-Gln-Leu)，平均分子量为1100.37g/mol，化学式为：C47H77N11O13S3。该多肽的理论等电点为pH 7，该多肽的GRAVY值为0.97，具有疏水性。该特性利于其与宿主蛋白或细胞表面进行结合，能够更为有效的启动免疫应答。
在本发明中，所述第二多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，具体为：RGLMEITFML(Arg-Gly-Leu-Met-Glu-Ile-Thr-Phe-Met-Leu)。平均分子量为1210.5g/mol，化学式为：C54H91N13O14S2。该多肽的理论等电点为pH 7，该多肽的GRAVY值为0.96，具有疏水性。该特性利于其与宿主蛋白或细胞表面进行结合，能够更为有效的启动免疫应答。
在本发明中，所述第三多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，具体为：MQWFMTMVI(Met-Gln-Trp-Phe-Met-Thr-Met-Val-Ile)。平均分子量为1186.5g/mol，化学式为：C55H83N11O12S3。该多肽的理论等电点为pH 7，该多肽的GRAVY值为1.34，具有疏水性。该特性利于其与宿主蛋白或细胞表面进行结合，能够更为有效的启动免疫应答。
在本发明中，所述第四多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，具体为：YKLHGMRWF(Tyr-Lys-Leu-His-Gly-Met-Arg-Trp-Phe)。平均分子量为1237.47g/mol，化学式为：C60H84N16O11S。该多肽的理论等电点为pH 10.39，该多肽的GRAVY值为-0.63，具有亲水性。
在本发明中，所述第五多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，具体为：HLLNFTLHCHA(His-Leu-Leu-Asn-Phe-Thr-Leu-His-Cys-His-Ala)。平均分子量为1305.5g/mol，化学式为：C59H88N18O14S。该多肽的理论等电点为pH 7.41，该多肽的GRAVY值为0.43，具有疏水性，该特性利于其与宿主蛋白或细胞表面进行结合，能够更为有效的启动免疫应答。
在本发明中，上述技术方案所述的多肽是通过对ASFV流行毒株序列进行测定，并通过计算机辅助生物信息学预测获得，具有特异性。
本发明提供了一类由上述方案所述多肽聚合得到的多肽聚合物。
本发明提供了上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物在制备促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的制剂中的应用。
本发明提供了一种非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗，所述亚单位疫苗的活性成分包括上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物。
优选的，所述亚单位疫苗的剂型包括注射剂。
优选的，所述亚单位疫苗中所述多肽或多肽聚合物的含量为100μg/组分/头份。
在本发明中，所述多肽优选的由上海生工生物工程有限公司合成。
本发明提供了一种包括上述方案所述多肽的多肽聚合物。
本发明提供了上述方案所述多肽或者所述多肽聚合物在制备促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的制剂中的应用。
在本发明中，所述多肽或者所述多肽聚合物通过促进猪CD8+T细胞分泌IFN-γ来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答；或者，所述多肽或者所述多肽聚合物通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性单核巨噬细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答；所述ASFV抗原特异性单核巨噬细胞包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和B细胞的增殖。
本发明提供了一种非洲猪瘟病毒的亚单位疫苗，所述亚单位疫苗的活性成分包括上述方案所述多肽或者上述方案所述多肽聚合物。本发明的亚单位疫苗能够增强猪机体的免疫能力。
本发明上述方案所述制剂或者上述方案所述亚单位疫苗的剂型分别包括注射剂；所述制剂或者所述亚单位疫苗中所述多肽或者多肽聚合物的含量为100μg/组分/头份，即每种多肽或每种多肽聚合物的含量均为100μg/头份；所述制剂或者所述亚单位疫苗优选的还包括佐剂50V2；所述制剂或者所述亚单位疫苗的状态优选为油包水乳化态。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1多肽的固相合成及纯度检测
本发明的多肽如下：
SEQ ID NO.1：SMMMVFNQL，AP1；
SEQ ID NO.2：RGLMEITFML，AP2；
SEQ ID NO.3：MQWFMTMVI，AP3；
SEQ ID NO.4：YKLHGMRWF，AP4；
SEQ ID NO.5：HLLNFTLHCHA，AP5；
上述多肽由上海生工生物工程有限公司合成。检测波长为214nm。得到最终的多肽提纯产物纯度>98％，并经ESI-MS鉴定结构，鉴定结果参见图1～图10，其中图1为AP1的鉴定色谱图，出峰时间为8.607min；图2为AP1的质谱图，鉴定分子量为1100.45g/mol，与理论值相符；图3为AP2的鉴定色谱图，出峰时间为15.534min；图4为AP2的质谱图，鉴定分子量为1210.65g/mol，与理论值相符；图5为AP3的鉴定色谱图；图6为AP3的质谱图，鉴定分子量为1186.55g/mol，与理论值相符；图7为AP4的鉴定色谱图，出峰时间为11.688min，图8为AP4的质谱图，鉴定分子量为1237.85g/mol，与理论值相符；图9为AP5的鉴定色谱图，出峰时间为10.485min；图10为AP5的质谱图，鉴定分子量为1306.75g/mol，与理论值相符。由图1～图10可知，成成功合成了上述5条多肽。
实施例2猪淋巴细胞增殖实验
1、ASFV灭活病毒免疫猪。
用ASFV流行毒株灭活病毒(来源于中国农业科学院兰州兽医研究所非洲猪瘟区域实验室)(10HID50)免疫5只90日龄雄性长白猪，一个月后加强免疫一次，7天后对猪执行安乐死，解剖后取出脾脏。用未免疫的健康猪作为阴性对照组。
2、脾细胞的制备、培养及增殖情况检测。
1)用75％酒精对采取的猪脾脏进行无菌处理，PBS清洗三次后，将脾脏剪成小块，置于折叠的无菌纱布(2层)中，并在含5mL含血清1640培养基的平皿中研磨脾脏。
2)之后吸取液体于15ml离心管中，1000rpm，离心5min。
3)弃去上清，敲击沉淀物(细胞)使其均匀悬浮。
4)加入10ml红细胞裂解液，裂解10min，之后加入6ml含血清1640培养基终止裂解，混匀后1000rpm，离心5min。
5)弃去上清，再次敲击沉淀物使其均匀悬浮，之后取10μL悬浮液稀释40倍，进行细胞计数，调整细胞浓度为1×106个细胞/mL。
6)CFSE染色后，将制备好的脾细胞接种到24孔板中(1×106个细胞/孔)。
7)分别加入0.2μg本发明提供的多肽(AP1～AP5)，置于CO2培养箱中培养60h，流式细胞术检测ASFV抗原特异性脾细胞增殖情况。
检测结果参见图11。图11为AP1～AP5促ASFV致敏淋巴细胞及单核巨噬细胞增殖的流式数据统计图。由图11可知，本发明的5条多肽均能显著促进ASFV特异性脾免疫细胞增殖，免疫细胞的主要类型为淋巴单核巨噬细胞。
同样的方式处理健康猪脾淋巴细胞，检测该多肽对猪机体内非抗原特异性脾细胞增殖的影响。
检测结果参见图12。图12为AP1～AP5促健康猪淋巴细胞及单核巨噬细胞增殖的流式数据统计图。由图12可知，本发明的5条多肽不能显著促进健康猪脾免疫细胞增殖。
实施例3不同亚型脾淋巴细胞分泌IFN-γ的情况检测
猪免疫程序及脾细胞分离培养同实施例2。获得分散的脾细胞后，以RPMI1640完全培养基制备成单细胞悬液，浓度为1×106/ml。接种到24孔板中，每孔分别加入0.2μg本发明提供的多肽(AP1～AP5)，置于CO2培养箱中培养60h。收集每孔细胞，分别用猪CD3、CD4、CD8及IFN-γ特异性抗体标记细胞，之后用含2％血清的PBS缓冲液洗涤2次，最后用该洗涤液分散成细胞悬液，利用流式细胞仪检测、分别确定B淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+CD8+T淋巴细胞及单核巨噬细胞分泌IFN-γ的水平。
检测结果参见图13～图17。其中图13为AP1促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；图14为AP2促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；图15为AP3促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；图16为AP4促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；图17为AP5促进不同亚型免疫细胞分泌IFN-γ的水平；由图13～图17可知，本发明中的五条多肽均能显著增强单核巨噬细胞及CD8+T淋巴细胞细胞分泌IFN-γ的能力。
实施例4多肽作为ASFV疫苗有效成分免疫动物免疫细胞分型实验
用本发明中的5条多肽混合(每种多肽100μg/头份)免疫3只90日龄雄性长白猪，一个月后加强免疫一次，二免后14d流式细胞仪检测外周血中免疫细胞的比例。同样体积PBS免疫组作为对照。
检测结果参见图18～图19。其中图18为二免14d，B淋巴细胞亚群比例水平；图19为CD8+T淋巴细胞亚群比例水平。由图18～图19可知本发明中的5条多肽混合免疫能够促进猪机体产生淋巴细胞免疫应答，增强猪的免疫力。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国农业科学院兰州兽医研究所
<120> 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ser Met Met Met Val Phe Asn Gln Leu
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Arg Gly Leu Met Glu Ile Thr Phe Met Leu
1 5 10
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Met Gln Trp Phe Met Thr Met Val Ile
1 5
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Tyr Lys Leu His Gly Met Arg Trp Phe
1 5
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
His Leu Leu Asn Phe Thr Leu His Cys His Ala
1 5 10
Claims (3)
1.一种促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽，所述多肽为第四多肽；所述第四多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述多肽通过促进猪机体中的CD8+T细胞分泌IFN-γ来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答，和/或，
所述多肽通过促进非洲猪瘟病毒抗原特异性单核巨噬细胞增殖来促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答。
2.根据权利要求1所述多肽，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒抗原特异性单核巨噬细胞包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和B细胞。
3.权利要求1或2所述多肽在制备促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的制剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111306032.0A CN114315962B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010871925.9A CN111944022B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
| CN202111306032.0A CN114315962B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010871925.9A Division CN111944022B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114315962A CN114315962A (zh) | 2022-04-12 |
| CN114315962B true CN114315962B (zh) | 2023-11-28 |
Family
ID=73366526
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010871925.9A Active CN111944022B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
| CN202111307732.1A Active CN114315981B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
| CN202111306032.0A Active CN114315962B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010871925.9A Active CN111944022B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
| CN202111307732.1A Active CN114315981B (zh) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (3) | CN111944022B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110618279A (zh) * | 2019-09-29 | 2019-12-27 | 中牧实业股份有限公司 | 非洲猪瘟病毒表位抗原多肽及其应用 |
| CN111018996A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-04-17 | 河南省生物工程技术研究中心 | 一种非洲猪瘟中和表位亚单位疫苗 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2337113B1 (es) * | 2007-04-17 | 2011-01-24 | Centre De Recerca En Sanitat Animal (Cresa) | Empleo de la hemaglutinina del virus de la peste porcina africana como adyuvante. |
| CN111471089B (zh) * | 2019-01-24 | 2023-11-24 | 浙江海隆生物科技有限公司 | 一种重组的非洲猪瘟病毒cd2v亚单位蛋白及其制备方法和应用 |
| CN110078819A (zh) * | 2019-05-05 | 2019-08-02 | 刘会芳 | 一种抗非洲猪瘟的抗体及其制备方法 |
| CN110862435B (zh) * | 2019-12-05 | 2021-09-24 | 中国农业大学 | 非洲猪瘟ctl表位多肽及其应用 |
| CN111004330A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-04-14 | 天津大学 | 一种制备非洲猪瘟病毒p30、p54酵母疫苗的方法 |
-
2020
- 2020-08-26 CN CN202010871925.9A patent/CN111944022B/zh active Active
- 2020-08-26 CN CN202111307732.1A patent/CN114315981B/zh active Active
- 2020-08-26 CN CN202111306032.0A patent/CN114315962B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110618279A (zh) * | 2019-09-29 | 2019-12-27 | 中牧实业股份有限公司 | 非洲猪瘟病毒表位抗原多肽及其应用 |
| CN111018996A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-04-17 | 河南省生物工程技术研究中心 | 一种非洲猪瘟中和表位亚单位疫苗 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114315981B (zh) | 2023-10-27 |
| CN111944022A (zh) | 2020-11-17 |
| CN111944022B (zh) | 2021-11-26 |
| CN114315981A (zh) | 2022-04-12 |
| CN114315962A (zh) | 2022-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20200164060A1 (en) | Herpes simplex virus vaccine epitopes specifically recognized by tissue resident memory t cells | |
| EP3971215A2 (en) | Artificial multi-antigen fusion protein and preparation and use thereof | |
| CN113929746B (zh) | 一类促进猪机体产生广谱性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN114621321B (zh) | 一类促进猪机体产生广谱性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN114315962B (zh) | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN113896771B (zh) | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN114075264B (zh) | 一类促进猪机体产生非洲猪瘟病毒抗原特异性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN113845572B (zh) | 一类促进猪机体产生广谱获得性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN113956330B (zh) | 一类促进猪机体产生广谱性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN114057834B (zh) | 一类促进猪机体产生广谱性免疫应答的多肽及其应用 | |
| CN116808193B (zh) | 一种用于预防猫传染性腹膜炎的重组蛋白疫苗及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Zheng Haixue Inventor after: Liu Xiangtao Inventor after: Liu Huanan Inventor after: Mao Naqing Inventor after: Zhu Zixiang Inventor after: Yang Fan Inventor after: Sun Dehui Inventor after: Zhou Xiaoli Inventor after: Zhu Yuqian Inventor after: Zhang Keshan Inventor before: Zheng Haixue Inventor before: Liu Huanan Inventor before: Mao Naqing Inventor before: Yang Fan Inventor before: Sun Dehui Inventor before: Zhou Xiaoli Inventor before: Zhu Yuqian Inventor before: Zhang Keshan Inventor before: Liu Xiangtao |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |