CN114302956A - 具有扩展的细胞培养嗜性和组织嗜性的减毒的ibv - Google Patents
具有扩展的细胞培养嗜性和组织嗜性的减毒的ibv Download PDFInfo
- Publication number
- CN114302956A CN114302956A CN202080049771.3A CN202080049771A CN114302956A CN 114302956 A CN114302956 A CN 114302956A CN 202080049771 A CN202080049771 A CN 202080049771A CN 114302956 A CN114302956 A CN 114302956A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ibv
- vaccine
- cell
- subject
- kidney
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000005100 tissue tropism Effects 0.000 title claims description 56
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 title claims description 53
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims description 19
- 230000010415 tropism Effects 0.000 title description 10
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 claims abstract description 373
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 125
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 124
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 213
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 143
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 98
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 66
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 53
- 230000005101 cell tropism Effects 0.000 claims description 47
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 42
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 34
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 25
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 claims description 17
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 claims description 14
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 13
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 11
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 claims description 11
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 9
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 9
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 claims description 8
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 claims description 8
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 7
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 7
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 claims description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000002669 organ and tissue protective effect Effects 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 59
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 58
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 41
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 41
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 38
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 34
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 32
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 30
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 22
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 19
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 16
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 16
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 13
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 12
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 11
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 206010037833 rales Diseases 0.000 description 10
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 9
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 8
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 6
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 6
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 5
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 5
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 5
- 244000144992 flock Species 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 4
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 4
- -1 coatings Substances 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 4
- XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecanoic acid Chemical class CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000288140 Gruiformes Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 3
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine;hydron;bromide Chemical compound [Br-].[NH3+]CCBr WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC([O-])=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical group P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-KVTDHHQDSA-N (2r,3r,4r)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ULQISTXYYBZJSJ-UHFFFAOYSA-N 12-hydroxyoctadecanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)CCCCCCCCCCC(O)=O ULQISTXYYBZJSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxyoctadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)=O KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMHYVXGZRGOICM-AUYXYSRISA-N 2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC UMHYVXGZRGOICM-AUYXYSRISA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWVRTSZDKPRPDF-UHFFFAOYSA-N 5-(piperidin-1-ylmethyl)-3-pyridin-3-yl-5,6-dihydro-2h-1,2,4-oxadiazine Chemical compound C1CCCCN1CC(N=1)CONC=1C1=CC=CN=C1 QWVRTSZDKPRPDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- BQENDLAVTKRQMS-SBBGFIFASA-L Carbenoxolone sodium Chemical compound [Na+].[Na+].C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C([O-])=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](OC(=O)CCC([O-])=O)C1(C)C BQENDLAVTKRQMS-SBBGFIFASA-L 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 1
- 108010061994 Coronavirus Spike Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 208000036119 Frailty Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical group CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001450457 Mycobacterium phage Newman Species 0.000 description 1
- 241001477931 Mythimna unipuncta Species 0.000 description 1
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001292005 Nidovirales Species 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 1
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000044437 S1 domains Human genes 0.000 description 1
- 108700036684 S1 domains Proteins 0.000 description 1
- 208000007893 Salpingitis Diseases 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010051867 Tracheal injury Diseases 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- NKVLDFAVEWLOCX-GUSKIFEASA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl] (4ar,5r,6as,6br,9s,10s,12ar)-10-[(2r,3r,4s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)CO[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](C)O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)O)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1OC(=O)[C@]12CCC(C)(C)CC1C1=CCC3[C@@]([C@@]1(C[C@H]2O)C)(C)CCC1[C@]3(C)CC[C@@H]([C@@]1(C)C=O)O[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO2)O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)C(=O)NCCCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@](O)(CO)[C@H]1O NKVLDFAVEWLOCX-GUSKIFEASA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940093740 amino acid and derivative Drugs 0.000 description 1
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 208000026500 emaciation Diseases 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000017555 immunoglobulin mediated immune response Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N n-decene Natural products CCCCCCCCC=C AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000017448 oviposition Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 229940010310 propylene glycol dioleate Drugs 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N ricinelaidic acid Chemical compound CCCCCC[C@@H](O)C\C=C\CCCCCCCC(O)=O WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N 0.000 description 1
- 229960003656 ricinoleic acid Drugs 0.000 description 1
- FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N ricinoleic acid Natural products CCCCCCC(O[Si](C)(C)C)CC=CCCCCCCCC(=O)OC FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 210000005062 tracheal ring Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2770/20062—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2770/20064—Methods of inactivation or attenuation by serial passage
Abstract
本发明涉及在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV以及具有保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。进一步地,本发明涉及包含所述保藏的IBV的免疫原性组合物。
Description
序列表
本申请含有依照37C.F.R.1.821–1.825的序列表。本申请随附的序列表在此整体引入作为参考。
背景技术
禽冠状病毒传染性支气管炎病毒(IBV)是网巢病毒目(Nidovirales),冠状病毒科(Coronaviridae)的原型丙型冠状病毒。传染性支气管炎病毒感染鸡的上呼吸道上皮,引起呼吸系统疾病,通常并发于继发性细菌性病原体(Cook等人2012.Avian Pathol.41:239-250)。一些IBV毒株另外影响肾小管、输卵管和部分胃肠道,导致这些器官系统中的病理损害和临床体征。该病毒具有在商品鸡和散养鸡两者中的世界范围的存在。由于其高基因组变异性,IBV被区分为广泛多样的基因型、血清型和保护型(protectotype)。IBV目前被视为家禽业中经济上最相关的病毒病原体之一。
传染性支气管炎病毒是具有27.6kb的正义单链RNA基因组的有包膜病毒(Cavanagh 2007.Vet.Res.38:281-297)。病毒基因组的前三分之二包含大编码区(也指定为基因1),分成两个开放读码框1a和1b,其编码涉及RNA复制、编辑和转录的至少15种非结构蛋白。病毒基因组的后三分之一编码结构蛋白:刺突蛋白(S,由基因2编码)、包膜蛋白(E,由基因3c编码)、膜蛋白(M,由基因4编码)、以及核衣壳蛋白(N,由基因6编码)。蛋白S、E和M是病毒包膜的部分,而蛋白N连同病毒RNA一起形成核糖核蛋白核心。冠状病毒刺突蛋白决定宿主物种的嗜性(Kuo等人2000.J.Virol.74:1393-1406)。它是一种二聚体或三聚体跨膜蛋白,其被蛋白酶解切割成两个亚基,S1和S2。糖基化的S1结构域形成刺突蛋白的‘头部’,并且含有与宿主细胞表面上的2,3-连接的唾液酸相互作用的受体结合结构域(Promkuntod等人2014.Virology.448:26-32)。S2结构域是胞外结构域的剩余部分(‘茎部’)、跨膜结构域和定位于细胞质中的胞内结构域。
迄今为止广泛使用的减毒活IBV疫苗株H52和H120是通过Massachusetts血清型IBV毒株在含胚鸡蛋中的连续传代,于二十世纪六十年代在荷兰开发的(Bijlenga等人2004;Avian Pathol.33:550-557)。所述疫苗株也必须在含胚鸡蛋中繁殖用于疫苗生产。当今,IBV疫苗(灭活疫苗和活疫苗两者)仍然在含胚鸡蛋中繁殖,这是麻烦且昂贵的。
迄今为止描述的唯一适应细胞系的IBV是IBV毒株Beaudette,其在Vero和BHK细胞中有效地复制。Casais等人2003(J.Virol.77;9084-9089)通过使用Beaudette刺突的胞外结构域序列生成重组IBV,显示了Beaudette的S蛋白是细胞系嗜性的决定因素,其能够将这种扩展的细胞系嗜性转移到另一种IBV(M41)。Fang等人2005(Biochemical andBiophysical Research Communication 336;第417至423页)公开了Beaudette对于在Vero细胞中繁殖的适应性导致49个氨基酸修饰,其中26个定位于刺突蛋白内。然而,具有Beaudette刺突的重组IBV不适合作为疫苗。Ellis等人2018(J.Virol.92(23))描述了具有嵌合刺突的重组Beaudette构建体并不赋予针对S1同源攻击的足够保护,所述嵌合刺突具有与Beaudette刺突S2亚基组合的来自M41或QX的异源S1亚基。另外,Beaudette野生型不像属于Massachusetts血清型的其它获得许可的疫苗那样提供针对同源攻击的保护(Hodgson等人2004:J Virol 78:13804–13811或Geilhausen等人1973:Archiv für die gesamteVirusforschung 40:285-290)。
总之,通过将刺突蛋白交换为异源Beaudette刺突蛋白(重组IBV),提供具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV疫苗并不导致提供足够功效的IBV疫苗,并且使用Beaudette刺突序列将局限于针对Massachusetts血清型毒株攻击的保护且缺少针对进一步基因型的交叉保护。进一步地,与现有技术中公开的重组IBV相比,本发明的IBV不是GMO(遗传修饰的生物)。
因而,需要具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的有效IBV疫苗用于有效生产。优选地,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的此类新IBV疫苗是非重组疫苗。
具体实施方式
在描述本发明的方面之前,必须注意,如本文和所附权利要求中使用的,单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数所指物,除非上下文另有明确说明。因此,例如,提及“一种抗原”包括多种抗原,提及“病毒”是提及一种或多种病毒及其本领域技术人员已知的等价物,等等。除非另有定义,否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管现在描述了优选的方法、装置和材料,但在本发明的实践或测试中可以使用与本文描述的相似或等价的任何方法和材料。本文提到的所有出版物都引入本文作为参考,目的是描述且公开如出版物中报道的可以与本发明结合使用的细胞系、载体和方法。本文的任何内容均不应被解释为承认本发明无权因在先发明而先于此类公开内容。
物质的组成
本发明解决了现有技术中固有的问题,并且提供了目前技术水平中的明显进步。
一般地,本发明提供了在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV或具有在DPS RE RSCIC 16下保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。
进一步地,本发明提供了在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
有利地,实验数据显示了保藏的毒株及其后代具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,它们能够在不同的细胞系和组织细胞中感染和/或复制。令人惊讶的是,保藏的毒株及其后代在至少数次传代之前仍维持疫苗功效,但具有改善的安全性。
保藏的IBV(IB66HP)毒株根据布达佩斯条约在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR(Biobank of Veterinary Resources of the Istituto ZooprofilatticoSperimentale della Lombardia e dell’Emilia Romagna“Bruno Ubertini”Biobank ofVeterinary Resource)。保藏或移交日期为2019年3月28日。保藏的微生物测试为活的。
术语“IBV”指本领域技术人员众所周知的传染性支气管炎病毒。术语“IBV”包括传染性支气管炎病毒的所有毒株、基因型、保护型和血清型。
术语“针对强毒M41攻击是保护性的”意指所述IBV对于用所述IBV接种疫苗的对象提供针对强毒M41攻击或感染的保护。
在根据本发明的IBV的一个特定方面,IBV是减毒的。
术语“减毒的”指与野生型分离株相比,具有减少的毒力的病原体。在本发明中,减毒的IBV是这样的IBV,其中毒力已这样减少,使得它并不引起IBV感染的临床体征,但能够在靶动物中诱导免疫应答,但也可以意指与由非减毒IBV感染且未接受减毒病毒的动物“对照组”相比,临床体征在由减毒IBV感染的动物中的发病率或严重性方面是减少的。在此上下文中,术语“减少/减少的”意指与如上文定义的由非减毒IBV感染的对照组相比,至少10%,优选25%,甚至更优选50%,还更优选60%,甚至更优选70%,还更优选80%,还更优选90%,甚至更优选95%,且最优选100%的减少。因此,减毒的IBV毒株是适合于掺入包含改良式活IBV的免疫原性组合物内的毒株。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV在一日龄的鸡中是减毒的。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是灭活的。
任何常规的灭活方法均可以用于本发明的目的。因此,可以通过本领域技术人员已知的化学处理和/或物理处理进行灭活。优选的灭活方法包括添加环化的二元乙撑亚胺(BEI),包括添加2-溴乙胺氢溴酸盐(BEA)的溶液,所述2-溴乙胺氢溴酸盐已环化为二元乙撑亚胺(BEI)。优选的进一步的化学灭活剂包括但不限于Triton X-100、脱氧胆酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、β-丙内酯、硫柳汞、苯酚和甲醛(福尔马林)。然而,灭活还可以包括中和步骤。优选的中和剂包括但不限于硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠等等。
优选的福尔马林灭活条件包括约0.02%(v/v)-2.0%(v/v),更优选约0.1%(v/v)-1.0%(v/v),还更优选约0.15%(v/v)-0.8%(v/v),甚至更优选约0.16%(v/v)-0.6%(v/v),且最优选约0.2%(v/v)-0.4%(v/v)的福尔马林浓度。温育时间取决于IBV的抗性。一般而言,进行灭活过程直到在合适的培养系统中无法检测到IBV的生长。
优选地,本发明的灭活IBV是福尔马林灭活的,优选使用如上文所述的浓度。
可以使用已知技术将本发明的灭活IBV掺入脂质体内,所述技术例如在Nature,1974,252,252-254或Journal of Immunology,1978,120,1109-13中描述的技术。在本发明的另一个实施方案中,本发明的灭活IBV可以缀合至合适的生物化合物例如多糖、肽、蛋白质等等或其组合。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是非重组的。
如本文使用的,术语“非重组的”指没有通过人为干预而重组引入的修饰(例如插入、缺失、倒位、重定位或点突变)的RNA基因组(或RNA序列、cDNA序列或蛋白质)。如就病毒而言使用的术语“非重组的”意指并非通过病毒基因组的重组人工操纵而产生的病毒。术语“非重组病毒”排除重组遗传修饰的病毒。术语“遗传改造的”指已通过使用“反向遗传学”方法进行突变的IBV,在所述“反向遗传学”方法中,涉及病毒cDNA或化学合成的RNA。
术语“蛋白质”、“氨基酸”和“多肽”可互换使用。术语“蛋白质”指由天然存在的氨基酸以及其衍生物组成的氨基酸序列。天然存在的氨基酸是本领域众所周知的,并且在生物化学的标准教科书中进行描述。在氨基酸序列内,氨基酸通过肽键进行连接。进一步地,氨基酸序列的两端被称为羧基末端(C末端)和氨基末端(N末端)。术语“蛋白质”包括基本上纯化的蛋白质或另外包含其它蛋白质的蛋白质制剂。进一步地,该术语还涉及蛋白质片段。此外,它包括化学修饰的蛋白质。此类修饰可以是人工修饰或天然存在的修饰,例如磷酸化、糖基化、十四烷基化等等。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是Massachusetts基因型或血清型。
IBV毒株可以按血清型和基因型进行分类。血清型分类涉及用中性抗体处理病毒,而基因型分类一般涉及检查S1(刺突)蛋白的序列。然而,不同的IBV毒株是本领域技术人员众所周知的。传染性支气管炎病毒于二十世纪三十年代首次在美国被发现。
鉴定的第一种IBV血清型是Massachusetts,并且一直是唯一的血清型,直到1956年不同IBV血清型的发现。当今,IBV Mass(Massachusetts)病毒可以在全世界的许多国家中得到鉴定。
IBV毒株Beaudette是Massachusetts类型,并且在鸡胚中至少150次传代之后衍生。IBV毒株Beaudette最初由Beaudette和Hudson(J.Am.Vet.Med.A.90,51-60,1937)分离,并且在鸡胚中进行传代。除了Beaudette之外的其它Massachusetts类型的IBV毒株是H120、H52和M41。H120毒株在含胚鸡蛋中传代120次。
从何处获得任何IBV毒株在本领域技术人员的一般知识内。IBV毒株可以是商业购买的,从科学研究所获得的,或者基因组可以是作为互补DNA合成的,因为IBV毒株已进行测序,并且序列已得到公开并因此是可用的。此外,IBV毒株可以从得自受感染的鸡的样品中进行分离。分离IBV毒株且表征IBV毒株的方法是本领域技术人员众所周知的。ValterLeonardo de Quadros 2011(Dissertation,DasBronchitis Virus(IBV):Molekularbiologische Untersuchungen zur Diagnostik und zum Vorkommen sowiezurdes Genotyps IBV QX in spezifisch pathogenfreien(SPF)Broilern,FreieBerlin)和Farsang等人2002(Avian Pathology 31:229-236)描述了如何分离且区分不同的IBV毒株。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是M41、H52或H120毒株。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是M41毒株。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是H52或H120毒株。
从何处获得IBV M41、H52或H120在本领域技术人员的一般知识内。示例性地,IBVH52毒株可以是商业购买的,例如示例性的Nobilis IB H52(MSD Animal Health)、AviProIB H52(Lohmann Animal Health GmbH&Co.KG)、Bronchovac(Ceva)等等。IBV H120毒株可以是商业购买的,例如示例性的BIORAL H120(Boehringer Ingelheim)、HatchPak IB H120(Boehringer Ingelheim)、AviPro IB H120(Lohmann Animal Health GmbH&Co.KG)、Poulvac IB H120(Zoetis)等等。IBV M41毒株可以是商业购买的,例如示例性的Volvac IBFit(Boehringer Ingelheim)。进一步地,McDonald等人1980(Avain Pathology 9:245-259)公开了IBV H52可以通过Central Veterinary Laboratory Rotterdam获得,Kusters(J.gen Virol 68:343-352)公开了IBV H52可以通过荷兰的Poultry Health InstituteDorn(GD Animal Health)获得,并且Chen等人2007(Avian Pathology 36(4):269-274)公开了IBV H52可以通过中国兽医药品监察所(China Institute of Veterinary DrugControl)获得。此外,IBV M41、H52或H120几十年来一直用作疫苗株,并且因此可以从野外发现且分离。分离IBV M41、H52或H120毒株并表征IBV H52毒株的方法是本领域技术人员众所周知的。示例性地,IBV H52毒株可以如Zwaagstra等人1992(J.Clin.Microbiol.30(1):79-84),Handberg等人1999(Avian Pathology 28:327-335)或Callison等人2006(Journalof Virological Methods 138:60-65)中所述的进行表征。例如,Zwaagstra等人1992和Handberg等人1999公开了Massachusetts特异性引物(分别用于S和N蛋白),用于RT-PCR和测序以及用于比较的参考序列。进一步地,H52 IBV已进行测序,并且基因组序列是可用的,例如EU817497。因此,病毒基因组可以通过合成其序列而生成,并且在应用反向遗传学系统后生成。
扩展的细胞嗜性或组织嗜性
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性。
术语“细胞或组织”由本领域技术人员已知。术语细胞包括细胞系,例如本文其它地方列出的细胞系以及原代细胞。术语组织包括来自组织例如本文其它地方列出的那些组织的细胞,示例性地例如来自肺或肝脏的原代鸡胚细胞或者原代鸡成纤维细胞。包括的是细胞或组织(细胞)在生物外部的培养中的繁殖。术语“培养”涉及在由本领域技术人员已知的限定的培养条件下,在生物外部的细胞(例如细胞系细胞或原代细胞或组织细胞)繁殖。
术语“扩展的嗜性”意指本发明的IBV可以在细胞(例如细胞系)或组织细胞(除来自肾脏的原代鸡胚细胞之外)中进行繁殖。相比之下,现有技术中描述的IBV疫苗或非细胞适应的野生型IBV(描述了细胞适应的IBV Beaudette毒株),只能在含胚鸡蛋或来自肾脏的原代鸡胚细胞(在适应后)中进行繁殖。相应地,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的本发明的IBV,具有在一种或多种细胞系或者除来自肾脏的原代鸡胚细胞外的组织细胞中感染和/或复制的能力。优选地,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的本发明的IBV,具有在如本文列出的一种或多种细胞系中感染和/或复制的能力。相应地,例如,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV可具有在PBS-12SF或HEK 293T细胞中感染和/或复制的能力。
有利地,实验数据显示了保藏的毒株及其后代具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,它们能够在不同的细胞系和组织细胞中感染且复制。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV在选自以下列表的至少一种细胞系或细胞中感染和/或复制:来自肺或肝脏的原代鸡胚细胞或者原代鸡成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS-12、PBS-12SF(无血清PBS-12)、BHK21(幼仓鼠肾)、HEK 293T(人胚肾)、Vero(Verda Reno)、MA104、RK13(兔肾)、LMH(leghorn雄性肝癌)、MDCK(马丁达比(Madin-Darby)犬肾)、MDBK(马丁达比牛肾)、PK15(猪肾)、PK2A(猪肾)、SF9、SF21和SF+(草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda))。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104、MDCK、SF9和RK13。
所有提到的细胞系都是本领域技术人员众所周知的,并且是商购可得和/或可公开获得的。MDCK细胞示例性地在登录号ATCC CCL-34或ATCC CRL-2285下,保藏于美国组织培养物保藏中心(American Tissue Culture Collection)。DF-1细胞示例性地在登录号ATCC CRL-12203)下,保藏于美国组织培养物保藏中心。PBS-12SF细胞示例性地在登录号ATCC PTA-8565下,保藏于美国组织培养物保藏中心,或在CVCL_1K17下保藏于RRID。BHK-21细胞示例性地在登录号ATCC CCL-10下,保藏于美国组织培养物保藏中心。HEK 293T细胞示例性地在登录号ATCC CRL-3216下,保藏于美国组织培养物保藏中心。Vero细胞示例性地在登录号ATCC CCL-81下,保藏于美国组织培养物保藏中心。MA104细胞示例性地在登录号ATCC CRL-2378下,保藏于美国组织培养物保藏中心。RK13细胞示例性地在登录号ATCCCCL-37下,保藏于美国组织培养物保藏中心。SF9细胞示例性地在登录号ATCC CRL-3357或ATCC PTA-3099下,保藏于美国组织培养物保藏中心。
优选地,IBV在EB66、BHK、Vero、MA104、MDCK、SF9和RK13细胞系中感染和/或复制。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,原代鸡胚细胞是成纤维细胞或者源自肝脏或肺组织的细胞。
功能定义-保护
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
术语“保护性”或“保护性免疫应答”或“保护性免疫”在本文其它地方进行定义。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,针对强毒M41攻击或感染的保护通过纤毛停滞评分、呼吸系统临床体征减少、肾脏组织中的病毒RNA载量减少或病毒脱落减少进行确定。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV相比,IBV的减毒是增加的。
术语“增加的减毒”意指与用没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV免疫的同一物种的对象相比,功效参数(特别是纤毛停滞,以及罗音、产蛋下降、肾脏损害、水样腹泻、体重减轻、病毒载量或病毒脱落)减少了至少10%,优选至少20%,更优选至少30%,甚至更优选至少40%,甚至更优选至少50%,甚至更优选至少60%,甚至更优选至少70%,甚至更优选至少80%,甚至更优选至少90%,甚至更优选至少95%,且最优选100%。如何测量功效参数的改善在本领域技术人员的一般知识内。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBVM41相比,IBV的减毒是增加的。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV相比,在1日龄的鸡中应用后,IBV的减毒是增加的。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBVM41相比,在1日龄的鸡中应用后,IBV的减毒是增加的。
所有鉴定特性
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,保藏的IBV的所有鉴定特性意指所述IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,保藏的IBV的所有鉴定特性意指IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,以及与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,保藏的IBV的所有鉴定特性意指IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且具有与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,保藏的IBV的所有鉴定特性意指IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
后代
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,后代包含在登录号为DPS RE RSCIC 16下,保藏于IZSLER的BVR的IBV的细胞培养中的至多15次传代。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,后代包含在登录号为DPS RE RSCIC 16下,保藏于IZSLER的BVR的IBV的细胞培养中的至多10次传代。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,后代包含在登录号为DPS RE RSCIC 16下,保藏于IZSLER的BVR的IBV的细胞培养中的至多5次传代。
有利地,实验数据显示了保藏的毒株以及其后代具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,它们能够在不同的细胞系和组织细胞中感染和/或复制。令人惊讶的是,保藏的毒株及其后代在至少数次传代之前仍维持疫苗功效,并且具有改善的安全性。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,所述后代IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,所述后代IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,以及与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,所述后代IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且具有与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,所述后代IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
核苷酸序列和质粒
进一步地,本发明提供了编码如本文所述的IBV的核苷酸序列。因此,本发明提供了编码以下的核苷酸序列:在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
进一步地,本发明提供了包含编码如本文所述的IBV的核苷酸序列的质粒。因此,本发明提供了包含编码以下的核苷酸序列的质粒:在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
术语“核酸”或“核酸序列”或“核苷酸序列”指多核苷酸,包括DNA分子、RNA分子、cDNA分子或衍生物。该术语包括单链多核苷酸以及双链多核苷酸。本发明的核酸包括分离的多核苷酸(即从其天然环境中分离的)和遗传修饰的形式。此外,还包括的是化学修饰的多核苷酸,包括天然存在的修饰的多核苷酸例如糖基化或甲基化的多核苷酸、或者人工修饰的多核苷酸例如生物素化的多核苷酸。进一步地,术语“核酸”和“多核苷酸”是可互换的,并且指任何核酸。术语“核酸”和“多核苷酸”具体地还包括由核苷酸组成的核酸,所述核苷酸具有除五种生物学上存在的碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶)外的核碱基。
术语“质粒”指在细菌宿主细胞内,不依赖于细菌染色体而复制的细胞质DNA。
细胞
进一步地,本发明提供了包含如本文所述的IBV或质粒的细胞。细胞可以是真核细胞或原核细胞。
在根据本发明的细胞的另一个特定方面,细胞是选自以下列表的细胞系或细胞:原代鸡胚细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。
在根据本发明的细胞的另一个特定方面,细胞是选自以下列表的细胞系:DF-1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS-12、PBS-12SF(无血清PBS-12)、BHK21(幼仓鼠肾)、HEK 293T(人胚肾)、Vero(Verda Reno)、MA104、RK13(兔肾)、LMH(leghorn雄性肝癌)、MDCK(马丁达比犬肾)、MDBK(马丁达比牛肾)、PK15(猪肾)、PK2A、SF9、SF21和SF+(草地贪夜蛾)。
在根据本发明的细胞的另一个特定方面,细胞是选自以下列表的细胞系:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13。
在根据本发明的细胞的另一个特定方面,原代鸡胚细胞是成纤维细胞或者源自肝脏或肺组织的细胞。
病毒颗粒、免疫原性组合物和疫苗
进一步地,本发明提供了包含如本文所述的IBV的病毒颗粒。
进一步地,本发明提供了包含如本文所述的IBV的免疫原性组合物。
进一步地,本发明提供了包含如本文所述的IBV的疫苗。
进一步地,本发明提供了包含如本文所述的IBV、具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的改良式活疫苗。
术语“免疫原性组合物”指包含至少一种抗原的组合物,所述至少一种抗原在免疫原性组合物施用于其的宿主中引发免疫应答。此类免疫应答可以是对本发明的免疫原性组合物的细胞和/或抗体介导的免疫应答。优选地,免疫原性组合物诱导免疫应答,且更优选地,赋予针对IBV感染的一种或多种临床体征的保护性免疫。宿主也描述为“对象”。优选地,本文描述或提到的任何宿主或对象是禽类或家禽。
通常,“免疫应答”包括但不限于下述效应中的一种或多种:特异性针对本发明的免疫原性组合物中包括的一种或多种抗原的抗体、B细胞、辅助性T细胞、抑制性T细胞和/或细胞毒性T细胞和/或γ-δT细胞的产生或活化。优选地,宿主将展示保护性免疫应答或治疗应答。
“保护性免疫应答”或“保护性免疫”将通过以下进行证实:由受感染宿主通常展示的临床体征的减少或缺乏、更快的恢复时间和/或受感染宿主的组织或体液或排泄物中的感染性的持续时间降低或病原体滴度降低。
在其中宿主展示保护性免疫应答,使得针对新感染的抗性将是增强的和/或疾病的临床严重性减轻的情况下,免疫原性组合物被描述为“疫苗”。
术语“改良式活的”和“减毒的”在本文中可互换使用。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含药学上可接受的载体。
术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂、吸附延迟剂、佐剂、免疫刺激剂及其组合。
“稀释剂”可以包括水、盐水、右旋糖、乙醇、甘油等等。等渗剂可以尤其包括氯化钠、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇和乳糖。稳定剂尤其包括白蛋白和乙二胺四乙酸的碱金属盐。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,药学上可接受的载体是磷酸盐缓冲盐水。
优选地,免疫原性组合物进一步包含蔗糖明胶稳定剂。
优选地,药学上可接受的载体是壳聚糖。
壳聚糖是甲壳类动物(例如虾、蟹)、昆虫和其它无脊椎动物中,来自甲壳质的天然脱乙酰多糖。最近,Rauw等人2009(Vet Immunol Immunop 134:249–258)证实了壳聚糖增强了新城疫活疫苗的细胞免疫应答,并且促进其保护效应。进一步地,Wang等人,2012(ArchVirol(2012)157:1451–1461)已显示了,揭示壳聚糖作为用于减毒活流感疫苗中的佐剂的潜力的结果。
优选地,免疫原性组合物可以进一步包括一种或多种其它免疫调节剂,例如白细胞介素、干扰素或其它细胞因子。通过技术人员可以容易地确定可用于本发明的上下文中的佐剂和添加剂的量和浓度。
在一些方面,本发明的免疫原性组合物含有佐剂。如本文使用的,“佐剂”可以包括氢氧化铝和磷酸铝、皂苷例如QuilA、QS-21(Cambridge Biotech Inc.,Cambridge MA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals,Inc.,Birmingham,AL)、油包水型乳状液、水包油型乳状液、水包油包水型乳状液。乳状液可以特别基于轻质液体石蜡油(欧洲药典型);类异戊二烯油,如角鲨烷或角鲨烯;起因于烯烃,特别是异丁烯或癸烯的低聚反应的油;含有线性烷基的酸或醇的酯,更特别是植物油、油酸乙酯、丙二醇二(辛酸酯/癸酸酯)、甘油三(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯;分支脂肪酸或醇的酯,特别是异硬脂酸酯。油与乳化剂组合使用,以形成乳状液。乳化剂优选是非离子型表面活性剂,特别是脱水山梨糖醇、二缩甘露醇(例如脱水甘露糖醇油酸酯)、乙二醇、聚甘油、丙二醇和油酸、异硬脂酸、蓖麻油酸或羟基硬脂酸的酯,其是任选地乙氧基化的,以及聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物嵌段,特别是Pluronic产品,尤其是L121。参见Hunter等人,The Theory and Practical Applicationof Adjuvants(编辑Stewart-Tull,D.E.S.),JohnWiley and Sons,NY,第51-94页(1995),以及Todd等人,Vaccine 15:564-570(1997)。示例性佐剂是通过M.Powell和M.Newman编辑的“Vaccine Design,The Subunit and Adjuvant Approach”,Plenum Press,1995的第147页中描述的SPT乳状液,以及同一本书的第183页上描述的乳状液MF59。
佐剂的一个进一步实例是选自丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物以及马来酸酐和烯基衍生物的共聚物的化合物。有利的佐剂化合物是丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物,其尤其是与糖或多元醇的聚烯基醚交联的。这些化合物通过术语卡波姆(Phameuropa第8卷,第2期,1996年6月)已知。本领域技术人员还可以参考美国专利号2,909,462,其描述了与具有至少3个羟基,优选不多于8个羟基的聚羟基化化合物交联的此类丙烯酸聚合物,所述至少三个羟基的氢原子替换为具有至少2个碳原子的不饱和脂肪族原子团。优选的原子团是含有2至4个碳原子的那些原子团,例如乙烯基、烯丙基和其它烯键式不饱和基团。不饱和原子团本身可以包含其它取代基,例如甲基。以名称卡波姆;(BF Goodrich,Ohio,USA)销售的产品是特别适当的。它们与烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交联。其中,可以提到卡波姆974P、934P和971P。最优选的是卡波姆971P的使用。在马来酸酐和烯基衍生物的共聚物中有共聚物EMA(Monsanto),其是马来酸酐和乙烯的共聚物。这些聚合物在水中的溶解导致将优选中和至生理pH的酸溶液,以便给出免疫原性组合物、免疫学组合物或疫苗组合物本身将掺入其内的佐剂溶液。
进一步合适的佐剂包括但不限于RIBI佐剂系统(Ribi Inc.)、嵌段共聚物(CytRx,Atlanta GA)、SAF-M(Chiron,Emeryville CA)、单磷酰脂质A、阿夫立定脂质-胺佐剂、来自大肠杆菌的不耐热肠毒素(重组的或其它方式)、霍乱毒素、IMS 1314或胞壁酰二肽、或者天然存在或重组的细胞因子或其类似物、或内源性细胞因子释放的刺激剂,等等。
预计佐剂可以以约100μg至约10mg/剂量的量加入,优选以约100μg至约10mg/剂量的量,更优选以约500μg至约5mg/剂量的量,甚至更优选以约750μg至约2.5mg/剂量的量,且最优选以约1mg/剂量的量。可替代地,佐剂可以为按最终产物的体积计约0.01%至50%的浓度,优选为约2%至30%的浓度,更优选为约5%至25%的浓度,还更优选为约7%至22%的浓度,且最优选为10%至20%的浓度。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗有效治疗和/或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征。术语“治疗和/或预防”、“临床体征”和“有需要”已在其它地方进行定义。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,所述免疫原性组合物或疫苗配制用于单剂量施用。
关于单剂量的体积已在本文其它地方进行定义。
此外,已显示了,在此类免疫原性组合物或疫苗的此类单剂量施用后,本发明的免疫原性组合物的一个剂量是有效的。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗是皮下、肌内、经口、卵内、经由喷雾、经由饮用水或通过滴眼剂施用的。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含1至10log10 EID50/IBV的剂量。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含2至5log10 EID50/IBV的剂量。
在根据本发明的免疫原性组合物或疫苗的另一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含2至4log10 EID50/IBV的剂量。
培养方法
进一步地,本发明提供了在细胞系或组织细胞中培养IBV的方法,其包括使用如本文所述的IBV。因此,本发明提供了在细胞系或组织细胞中培养IBV的方法,其包括使用以下:在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV、其具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
在根据本发明的用于在细胞系或组织细胞中培养IBV的方法的另一个特定方面,IBV在如本文所述的细胞系或组织细胞中感染和/或复制。
在根据本发明的用于在细胞系或组织细胞中培养IBV的方法的另一个特定方面,细胞系或组织细胞选自以下列表:原代鸡胚细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。
在根据本发明的用于在细胞系或组织细胞中培养IBV的方法的另一个特定方面,细胞系选自以下列表:DF-1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS-12、PBS-12SF(无血清PBS-12)、BHK21(幼仓鼠肾)、HEK 293T(人胚肾)、Vero(Verda Reno)、MA104、RK13(兔肾)、LMH(leghorn雄性肝癌)、MDCK(马丁达比犬肾)、MDBK(马丁达比牛肾)、PK15(猪肾)、PK2A、SF9、SF21和SF+(草地贪夜蛾)。
在根据本发明的用于在细胞系或组织细胞中培养IBV的方法的另一个特定方面,细胞系选自以下列表:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13。
试剂盒
需要时,组合物可以存在于包装或分配器装置中,其可以含有一种或多种单位剂型,所述单位剂型含有活性成分。包装可以例如包含金属或塑料箔,例如泡罩包装。包装或分配器装置可以附有优选用于施用于对象,尤其是家禽的施用说明书。与此类容器相关联的可以是以由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定形式的通知,所述通知反映了通过制造、使用或销售机构批准用于施用。
本发明提供了试剂盒,其包含如本文所述的IBV或免疫原性组合物或疫苗。
在根据本发明的试剂盒的一个特定方面,试剂盒进一步包含用于治疗和/或预防禽类疾病的说明书。
在根据本发明的试剂盒的一个特定方面,试剂盒进一步包含用于治疗和/或预防家禽疾病的说明书。
在根据本发明的试剂盒的一个特定方面,试剂盒进一步包含用于治疗和/或预防IB的说明书。
在根据本发明的试剂盒的一个特定方面,试剂盒进一步包括能够向所述动物施用疫苗的分配器。
治疗方法
进一步地,本发明提供了用于使对象免疫的方法,其包括向此类对象施用如本文所述的免疫原性组合物。
术语“免疫”涉及通过将免疫原性组合物施用于待免疫的对象,从而引起针对此类免疫原性组合物中包括的抗原的免疫应答的主动免疫。
优选地,免疫导致鸟群中的特定IBV感染的发病率降低、或者由特定IBV感染引起或与特定IBV感染相关的临床体征的严重性减轻。
进一步地,用如随同提供的免疫原性组合物对有需要的对象进行免疫,导致预防对象受到IBV感染的感染。甚至更优选地,免疫导致针对IBV感染的有效、持久的免疫应答。应理解,所述时间段将持续超过1个月,优选超过2个月,优选超过3个月,更优选超过4个月,更优选超过5个月,更优选超过6个月。应理解,免疫可能并非在免疫的所有对象中都是有效的。然而,该术语要求鸟群中的显著比例的对象得到有效免疫。
优选地,在此上下文中设想了一群对象,其通常(即,如果没有免疫)将发展通常由IBV感染引起或者与禽冠状病毒或IBV感染相关的临床体征。通过本领域技术人员可以毫不费力地确定所述群的对象是否得到有效免疫。优选地,如果与未免疫或用在本发明之前可用的免疫原性组合物免疫,但随后被特定IBV感染的对象相比,在给定群的至少33%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、还更优选至少95%且最优选100%的对象中的临床体征,在发病率或严重性方面降低了至少10%,更优选至少20%,还更优选至少30%,甚至更优选至少40%,还更优选至少50%,甚至更优选至少60%,还更优选至少70%,甚至更优选至少80%,还更优选至少90%,还更优选至少95%,且最优选100%,则免疫应该是有效的。
进一步地,本发明提供了治疗或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征的方法,该方法包括向对象施用治疗有效量的如本文所述的免疫原性组合物或疫苗。
如实施例中所示,如本文提供的免疫原性组合物或疫苗已证明有效治疗或预防对象中由IBV引起的临床体征。
术语“治疗或预防”指鸟群中的特定IBV感染的发病率降低,或者由特定IBV感染引起或与特定IBV感染相关的临床体征的严重性减轻。因此,术语“治疗或预防”还指与其对象尚未接受此类免疫原性组合物的一组对象相比,在其对象已接受有效量的如本文提供的免疫原性组合物的一组对象中,鸟群中变得由特定IBV感染的对象数目减少(=特定IBV感染的发病率降低)、或者通常与IBV感染相关或由IBV感染引起的临床体征的严重性减轻、或者在由特定IBV感染后的病毒脱落减少、或者预防或降低在由特定IBV感染后的蛋鸡中的产蛋下降。
“治疗或预防”一般涉及将有效量的本发明的免疫原性组合物施用于有需要或可以受益于此类治疗/预防的对象或一群对象。术语“治疗”指一旦对象或群中的至少一些对象已经由此类IBV感染,并且其中此类对象已经显示了由此类IBV感染引起或与此类IBV感染相关的一些临床体征,就施用有效量的免疫原性组合物。术语“预防”指在此类对象由IBV的任何感染之前,或者至少在此类对象或一组对象中的对象无一显示了由此类IBV感染引起或与此类IBV感染相关的任何临床体征的情况下的对象施用。术语“预防(prophylaxis)”和“预防(preventing)”在本申请中可互换使用。
如本文使用的,术语“有效量”意指但不限于在对象中引发或能够引发免疫应答的抗原量。此类有效量能够降低鸟群中的特定IBV感染的发病率,或减轻特定IBV感染的临床体征的严重性。
优选地,与未治疗或用在本发明之前可用的免疫原性组合物治疗,但随后被特定IBV感染的对象相比,临床体征在发病率或严重性方面降低了至少10%,更优选至少20%,还更优选至少30%,甚至更优选至少40%,还更优选至少50%,甚至更优选至少60%,还更优选至少70%,甚至更优选至少80%,还更优选至少90%,还更优选至少95%,且最优选100%。
如本文使用的,术语“临床体征”指来自IBV的对象感染的体征。此类临床体征的例子包括但不限于呼吸窘迫、肾炎、输卵管炎、产蛋异常、羽毛竖起、抑郁、生长速率减慢和食欲减退。呼吸窘迫的体征包括呼吸体征,包括喘气、咳嗽、打喷嚏、气管罗音、鼻和眼分泌物、气管损害和气管中的纤毛停滞。肾炎的体征包括肾脏损害和水样腹泻。异常产蛋的体征包括产蛋下降、较小尺寸的蛋、劣质蛋壳、蛋内部品质降低、具有稀蛋白的蛋和输卵管中的纤毛停滞。然而,临床体征还包括但不限于可直接从活动物中观察到的临床体征。可直接从活动物中观察到的临床体征的例子包括鼻和眼分泌物、咳嗽、喘气、打喷嚏、气管啰音、羽毛竖起、结膜炎、重量减轻、生长速率减慢、食欲减退、脱水、水样腹泻、跛行、嗜睡、消瘦和羸弱等等。
优选地,与未治疗或用在本发明之前可用的免疫原性组合物治疗,但随后被特定IBV感染的对象相比,经治疗的对象中的在发病率或严重性方面降低的临床体征指纤毛停滞的减少、罗音减少、产蛋下降的减少、肾脏损害减轻、水样腹泻减轻、体重减轻的减少、病毒载量更少、病毒脱落减少或其组合。
如本文使用的,术语“需要”或“有需要”意指施用/治疗与健康或临床体征的加强或改善、或者对于对象的健康的任何其它积极的医学作用相关,所述对象接受依照本发明的免疫原性组合物。
进一步地,本发明提供了与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的纤毛停滞的方法,该方法包括向对象施用治疗有效量的如本文所述的免疫原性组合物或疫苗。
如实施例中所示,如本文提供的免疫原性组合物或疫苗已证明有效减少纤毛停滞。
术语“纤毛停滞”是本领域技术人员众所周知的。气管的表面覆盖有特化的上皮细胞,其内衬有称为纤毛的众多、能动的毛发状结构。术语“纤毛停滞”包括纤毛的减少或丧失和/或纤毛活性(运动)的丧失或部分丧失。纤毛停滞可以通过就纤毛的运动检查气管环的内衬进行确定。如何确定气管中的纤毛运动在本领域技术人员的一般知识内。
优选地,与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,从由IBV攻击或感染后的第10天开始,更优选从攻击或感染后的第5天开始,更优选从攻击或感染后的第4天开始,更优选从攻击或感染后的第3天开始,且最优选从攻击或感染后的第1天或第2天开始,纤毛的运动并不减少。
术语“纤毛停滞的减少”意指与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,纤毛停滞减少了至少10%,优选至少20%,更优选至少30%,甚至更优选至少40%,甚至更优选至少50%,甚至更优选至少60%,甚至更优选至少70%,甚至更优选至少80%,甚至更优选至少90%,甚至更优选至少95%,且最优选100%。如何测量纤毛停滞的减少在本领域技术人员的一般知识内。
进一步地,本发明提供了与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的病毒RNA载量的方法,该方法包括向对象施用治疗有效量的如本文所述的免疫原性组合物或疫苗。
术语“病毒载量”或“病毒滴度”是活动性病毒感染的严重性的量度,并且可以通过本领域技术人员已知的方法进行确定。术语“病毒滴度”是感染单位/体积的病毒制剂的量度。病毒滴度是生物学程序中的终点,并且定义为平行进行的一定比例的测试在其下显示效应的稀释度(Reed和Muench,1938)。确定可以基于例如通过与病毒蛋白结合的抗体的病毒蛋白检测,以及通过扩增方法例如RT-PCR的病毒RNA检测的进一步检测或替代检测。通过核酸扩增方法监测血浆中的病毒粒子相关病毒RNA是广泛使用的参数,以评价逆转录病毒疾病的状态和进展,并且评估预防干预和治疗干预的有效性。示例性地,病毒载量或病毒滴度可以通过估计所涉及的体液中的病毒活量,例如每毫升血浆的RNA拷贝数进行计算。
术语“病毒RNA载量的减少”意指与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,病毒RNA载量减少了至少10%,优选至少20%,更优选至少30%,甚至更优选至少40%,甚至更优选至少50%,甚至更优选至少60%,甚至更优选至少70%,甚至更优选至少80%,甚至更优选至少90%,甚至更优选至少95%,且最优选100%。如何测量病毒RNA载量的减少在本领域技术人员的一般知识内。
进一步地,本发明提供了如本文所述的免疫原性组合物或疫苗,其用于使对象免疫的方法中,该方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
进一步地,本发明提供了如本文所述的免疫原性组合物或疫苗,其用于治疗或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征的方法中,该方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
进一步地,本发明提供了如本文所述的免疫原性组合物或疫苗,其用于与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的纤毛停滞的方法中,该方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
进一步地,本发明提供了如本文所述的免疫原性组合物或疫苗,其用于与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的病毒RNA载量的方法中,该方法包括向对象施用治疗有效量的免疫原性组合物或疫苗。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述对象是禽类。
术语“禽类”是本领域技术人员众所周知的。术语“禽类”包括包含家禽的所有鸟类。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述对象是家禽。
术语“家禽”是本领域技术人员众所周知的。术语“家禽”包括鸡、火鸡、鹌鹑、雉鸡、珍珠鸡、鹅和鸭。进一步地,术语“鸡”包括肉鸡、蛋鸡和用于两者的繁殖群体,也被称为种鸡。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述对象选自鸡、火鸡、鹌鹑或雉鸡。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述对象是鸡。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗施用一次。
应理解,单剂量仅施用一次。如实施例中所示,在向有需要的对象施用单剂量后,如本文提供的免疫原性组合物已证明是有效的。
剂量体积/家禽取决于疫苗接种的途径和家禽的年龄。
通常,滴眼剂疫苗在任何年龄以1至100μl/剂量的体积施用。优选地,用于滴眼剂疫苗的单剂量具有约5μl至70μl,并且更优选约20μl至50μl的总体积,其中单个20μl、25μl、30μl、35μl、40μl、45μl或50μl剂量是优选的。最优选地,用于滴眼剂疫苗的单剂量具有约30μl至50μl的总体积,其中单个30μl、35μl、40μl、45μl或50μl剂量是优选的。
对于日龄家禽,喷雾疫苗可以含有以25至1000μl的体积的剂量。优选地,用于喷雾疫苗的单剂量具有约50μl至5000μl,更优选约75μl至2000μl,更优选约100μl至1000μl,甚至更优选约200μl至900μl,甚至更优选约300μl至800μl,且甚至更优选约400μl至700μl的总体积,其中单个400μl、425μl、450μl、475μl、500μl、525μl、550μl、575μl、600μl、625μl、650μl、675μl或700μl剂量是优选的。最优选地,单剂量具有400μl、450μl、500μl、550μl、600μl、650μl或700μl的总体积。
用于卵内疫苗接种的疫苗可以含有以50至100μl,优选50μl的体积的剂量。优选地,用于卵内疫苗的单剂量具有约10μl至250μl,更优选约15μl至200μl,甚至更优选约20μl至150μl,甚至更优选约30μl至100μl,甚至更优选约30μl至75μl的总体积,并且其中单个30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl或75μl剂量是优选的。最优选地,单剂量具有40μl、45μl、50μl、55μl或60μl的总体积。
用于肌内或皮下疫苗接种的疫苗或者饮用水疫苗的一个剂量可以含有以30μl至1000μl的体积的剂量。优选地,单剂量具有约30μl至1000μl,更优选约50μl至500μl,更优选约75μl至250μl,且甚至更优选约100μl至200μl的总体积,其中单个100μl、110μl、120μl、125μl、130μl、135μl、140μl、145μl、150μl、160μl、170μl、175μl、180μl、190μl、155μl或200μl剂量是最优选的。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗以两个或更多个剂量施用。
然而,免疫原性组合物可以以两个或更多个剂量施用,其中第一剂量在第二(加强)剂量施用之前进行施用。
在两次施用方案的一个优选方面,免疫原性组合物的第一剂量和第二剂量以相同的量施用。优选地,每个剂量是上文指定的优选量。除第一剂量和第二剂量方案之外,一个替代实施方案包含进一步的后续剂量。例如,在这些方面可以施用第三剂量、第四剂量或第五剂量。优选地,后续的第三剂量、第四剂量和第五剂量方案以与第一剂量相同的量施用,其中剂量之间的时间段与上文提到的第一剂量和第二剂量之间的时间安排一致。
优选地,疫苗的第一次施用通过如下所述的方法在前三周龄内,更优选在前一周龄内,且最优选在一日龄时进行。第二次施用可以在前20周龄内,优选在16-18周龄内,更优选在6-12周龄之间进行。示例性地,初始(第一次)疫苗接种在1-10日龄时进行,而第二次疫苗接种(加强)在6-12或16-18周龄时用活疫苗或灭活疫苗进行。更优选地,初始(第一次)疫苗接种在一日龄时进行,而第二次疫苗接种(加强)在6-12或16-18周龄时用活疫苗或灭活疫苗进行。
在使用卵内疫苗接种的情况下,优选地,当胚胎为15至19日龄,优选在17、18或19日龄时,最优选在18日龄时,进行第一次施用。第二次施用可以在前三周龄内,优选在前10日龄内进行。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述免疫原性组合物或疫苗是皮下、肌内、经口、卵内、经由喷雾、经由饮用水或通过滴眼剂施用的。
免疫原性组合物优选局部或全身施用。常规使用的合适施用途径是经口或肠胃外施用,例如鼻内、静脉内、真皮内、经皮、肌内、腹膜内、皮下,以及吸入、卵内、经由喷雾、经由饮用水或通过滴眼剂。然而,取决于化合物的性质和作用模式,免疫原性组合物也可以通过其它途径进行施用。例如,此类其它途径包括皮内、静脉内、血管内、动脉内、腹膜内、鞘内、气管内、皮内、心内、肺叶内(intralobally)、叶内、髓内、肺内、直肠内和阴道内。然而,最优选地,免疫原性组合物是皮下、肌内、经口、卵内、经由喷雾、经由饮用水或通过滴眼剂施用的。
IBV活疫苗优选个别地通过滴眼剂、鼻内、肌内或皮下进行施用。
更优选地,使用大量施加方法,包括饮用水和气雾剂喷雾疫苗接种。还优选的是作为胚胎疫苗(所谓的卵内疫苗)的疫苗的使用,如下文进一步描述的。
例如,肉鸡可以在一日龄或1-3周龄时进行疫苗接种,特别是对于具有高水平的MDA的肉鸡。产蛋群体或繁殖群体可以最初在1-10日龄时进行疫苗接种,并且在7-12或16-18周龄时用疫苗进行加强。
如上文概述的,本发明还提供了IBV疫苗,其可以经由卵内途径安全施用,并且同时能够诱导保护性免疫应答。卵内施用是本领域技术人员众所周知的,并且本领域技术人员可以毫不费力地进行卵内施用。疫苗的卵内施用涉及将疫苗施用于包含在蛋中时的禽胚胎(关于卵内疫苗接种的综述,参见:Ricks等人,Advances in Vet.Med.495-515,1999)。如本领域所述的(Sharma;Am.J.Vet.Res.45 1619-1623,1984),疫苗可以施用于任何合适的卵区室(例如尿囊液、卵黄囊、羊膜、气室或胚胎内)。优选地,疫苗在壳(气室)膜和尿囊绒膜下方施用。
优选地,在胚胎发育的后期阶段过程中,一般在孵化期的最后四分之一过程中,优选在孵出前3-4天,将疫苗注射到含胚卵内。优选地,当胚胎为15至19日龄,优选在17、18或19日龄时,最优选在18日龄时,进行施用。随后,将接种疫苗的含胚卵转移到孵化器用于孵出。可以使用如现有技术中描述的机器人注射过程,使卵内施用的过程自动化。
通常,用于家禽孵出后疫苗接种的常规疫苗不能用于卵内疫苗接种,因为晚期胚胎对由检查的大多数疫苗病毒的感染是高度敏感的。然而,国际专利申请WO 01/64244公开了IBV疫苗可以用于卵内施用,条件是它以极低的剂量施用。进一步地,Wakenell等人1986(Am.J.Vet.Res.,47 933-938)公开了在组织培养中传代IB疫苗病毒致使该病毒对于胚胎无致病性。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述免疫原性组合物或疫苗经由滴眼剂进行施用。
通常,用于孵出后施用的活疫苗包含以101至108EID50(50%卵感染剂量)/剂量的浓度的减毒IBV,优选以102至105EID50/剂量的浓度,且更优选以102至104EID50/单位剂量的浓度,且甚至更优选以102至103EID50/剂量的浓度。
用于卵内施用的活疫苗通常包含在50至100μl、优选50μl的体积中的102至107EID50/胚胎,优选102至103EID50/胚胎的减毒IBV的量。
优选地,本发明的免疫原性组合物包含其量为约1至约10log10EID(卵感染剂量)50/ml/剂量的本发明的IBV,优选约2至约8log10EID50/剂量,优选以约2至约7log10EID50/剂量的量,更优选以约2至约6log10EID50/剂量的量,甚至更优选以约2至约5log10EID50/剂量的量,甚至更优选以约2至约4log10EID50/剂量的量,最优选以约2至约3log10EID50/剂量的量。更优选地,本发明的免疫原性组合物包含其量为约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5或log10EID50/剂量的本发明的IBV。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含1至10log10EID50/剂量的IBV。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含2至5log10EID50/剂量的IBV。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,免疫原性组合物或疫苗包含2至4log10EID50/剂量的IBV。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,将免疫原性组合物或疫苗施用于在前一周龄内、在前三日龄内、在前两日龄内或在前一日龄内的对象。
优选地,待免疫的对象是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21日龄。更优选地,所述待免疫的对象是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14日龄。最优选地,所述待免疫的对象是1、2、3、4、5、6或7日龄。
然而,必须理解,在几日龄的对象的接种疫苗后,家禽的免疫系统的确需要几天来建立针对IBV感染的免疫。因此,优选地,对象在年龄的前24小时内进行免疫。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,将免疫原性组合物或疫苗施用于在前一日龄内的对象。如实施例中所示,当施用于1日龄家禽时,如本文提供的免疫原性组合物已证明是安全且有效的。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,所述方法导致选自以下的功效参数的改善:与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,纤毛停滞的预防或减少、罗音的预防或减少、产蛋下降的预防或减少、肾脏损害的预防或减少、水样腹泻的预防或减少、体重减轻的预防或减少、更低的病毒载量、减少的病毒脱落或其组合。
术语“治疗和/或预防”已在其它地方进行定义,其中术语“预防(prophylaxis)”和“预防(preventing)”或“预防(prevention)”在本申请中可互换使用。进一步地,术语“脱落”也已在其它地方进行定义。
术语“减少(reducing)”、“减少(reduced)”、“减少(reduction)”或“降低”意指与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,功效参数(纤毛停滞、罗音、产蛋下降、肾脏损害、水样腹泻、体重减轻、病毒载量、病毒脱落)减少了至少10%,优选至少20%,更优选至少30%,甚至更优选至少40%,甚至更优选至少50%,甚至更优选至少60%,甚至更优选至少70%,甚至更优选至少80%,甚至更优选至少90%,甚至更优选至少95%,且最优选100%。如何测量功效参数的改善在本领域技术人员的一般知识内。
术语“病毒载量”已在本文其它地方进行定义。
术语“纤毛停滞”已在本文其它地方进行定义。
术语“罗音”是本领域技术人员众所周知的。然而,术语“罗音”包括气管罗音,并且指从支气管发出的声音。通过本领域技术人员可以毫不费力地确定罗音。
术语“产蛋下降”是本领域技术人员众所周知的。术语“产蛋下降”包括降低的蛋生产。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,治疗或预防导致纤毛停滞的预防或减少。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,治疗或预防导致肾脏损害的预防或减少。
在根据本发明的方法或用途的一个特定方面,与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,治疗或预防导致产蛋下降的预防或减少。
本发明进一步提供了如本文所述的IBV、病毒颗粒或免疫原性组合物或疫苗,其用于治疗用途。
本发明进一步提供了如本文所述的IBV或病毒颗粒,其用作免疫原或疫苗。
本发明进一步提供了如本文所述的IBV、病毒颗粒或免疫原性组合物或疫苗,其用作药物。
本发明进一步提供了如本文所述的IBV、病毒颗粒或免疫原性组合物或疫苗用于制造药物的用途。
本发明进一步提供了如本文所述的IBV、病毒颗粒或免疫原性组合物或疫苗用于治疗和/或预防对象中的IBV感染的用途。
在根据本发明的IBV的另一个特定方面,IBV是表型上稳定的。有利地,实验数据显示了保藏的毒株及其后代是表型上稳定的,因为扩展的细胞培养嗜性/组织嗜性和减毒在一段时间内(经过传代)保持稳定。
术语“表型上稳定的”意指IBV在一段时间内(经过传代)保持其具有扩展的细胞培养嗜性/组织嗜性和减毒的功能特征。优选地,所述功能特征在IBV在细胞培养或组织培养中的至少3次传代后,更优选在至少6次传代后,甚至更优选在至少9次传代后,甚至更优选在至少12次传代后,最优选在15次传代后仍然存在。
技术方案
本文还描述了下述技术方案:
1.一种在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV或具有在DPS RE RSCIC 16下保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。
2.一种在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
3.技术方案1或2的IBV,其中所述IBV是减毒的。
4.技术方案1至3中任一项的IBV,其中所述IBV在一日龄的鸡中是减毒的。
5.技术方案1至4中任一项的IBV,其中所述IBV是非重组的。
6.技术方案1或5中任一项的IBV,其中所述IBV是Massachusetts基因型或血清型。
7.技术方案1或6中任一项的IBV,其中所述IBV是M41、H52或H120毒株。
扩展的细胞嗜性或组织嗜性
8.技术方案1或7中任一项的IBV,其中所述IBV具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性。
9.技术方案1至8中任一项的IBV,其中所述IBV在选自以下列表的细胞系或细胞中感染和/或复制:来自肺或肝脏的原代鸡胚细胞或者原代鸡成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。
10.技术方案1至9中任一项的IBV,其中所述IBV在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS-12、PBS-12SF(无血清PBS-12)、BHK21(幼仓鼠肾)、HEK 293T(人胚肾)、Vero(Verda Reno)、MA104、RK13(兔肾)、LMH(leghorn雄性肝癌)、MDCK(马丁达比犬肾)、MDBK(马丁达比牛肾)、PK15(猪肾)、PK2A、SF9、SF21和SF+(草地贪夜蛾)。
11.技术方案1至10中任一项的IBV,其中所述IBV在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104、MDCK、SF9和RK13。
12.技术方案9的IBV,其中所述原代鸡胚细胞是成纤维细胞或者源自肝脏或肺组织的细胞。
功能定义-保护
13.技术方案1至12中任一项的IBV,其中所述IBV针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
14.技术方案13的IBV,其中所述针对强毒M41攻击或感染的保护通过纤毛停滞评分、呼吸系统临床体征减少、肾脏组织中的病毒RNA载量减少或病毒脱落减少进行确定。
15.技术方案1至14中任一项的IBV,其中与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV相比,所述IBV的减毒是增加的。
16.技术方案1至15中任一项的IBV,其中与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBVM41相比,所述IBV的减毒是增加的。
17.技术方案1至16中任一项的IBV,其中与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV相比,在1日龄的鸡中应用后,所述IBV的减毒是增加的。
18.技术方案1至17中任一项的IBV,其中与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBVM41相比,在1日龄的鸡中应用后,所述IBV的减毒是增加的。
所有鉴定特性
19.技术方案1至18中任一项的IBV,其中所述保藏的IBV的所有鉴定特性意指所述IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
20.技术方案1至19中任一项的IBV,其中所述保藏的IBV的所有鉴定特性意指IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,以及与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
21.技术方案1至20中任一项的IBV,其中所述保藏的IBV的所有鉴定特性意指IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且具有与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
22.技术方案1至21中任一项的IBV,其中所述保藏的IBV的所有鉴定特性意指IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
后代
23.技术方案1至22中任一项的IBV,其中所述后代IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
24.技术方案1至23中任一项的IBV,其中所述后代IBV是减毒的,具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性,以及与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
25.技术方案1至24中任一项的IBV,其中所述后代IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且具有与保藏的IBV相同或相似的保护概况。
26.技术方案1至25中任一项的IBV,其中所述后代IBV是减毒的,在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1、EB66、PBS-12、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13,并且针对强毒M41攻击或感染是保护性的。
27.一种质粒,其包含编码技术方案1至26中任一项的IBV的核苷酸序列。
28.一种细胞,其包含技术方案1至27中任一项的IBV或质粒。
29.根据技术方案28的细胞,其中所述细胞是选自以下列表的细胞系或细胞:原代鸡胚细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。
30.根据技术方案28或29的细胞,其中所述细胞是选自以下列表的细胞系:DF-1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS-12、PBS-12SF(无血清PBS-12)、BHK21(幼仓鼠肾)、HEK 293T(人胚肾)、Vero(Verda Reno)、MA104、RK13(兔肾)、LMH(leghorn雄性肝癌)、MDCK(马丁达比犬肾)、MDBK(马丁达比牛肾)、PK15(猪肾)、PK2A、SF9、SF21和SF+(草地贪夜蛾)。
31.技术方案28至30中任一项的细胞,其中所述细胞是选自以下列表的细胞系:DF-1、EB66、PBS-12SF、BHK、HEK 293T、Vero、MA104和RK13。
32.技术方案29的细胞,其中所述原代鸡胚细胞是成纤维细胞或者源自肝脏或肺组织的细胞。
33.一种病毒颗粒,其包含技术方案1至26中任一项的IBV。
34.一种免疫原性组合物,其包含技术方案1至26中任一项的IBV。
35.一种疫苗,其包含技术方案1至26中任一项的IBV。
36.一种具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的改良式活疫苗,其包含技术方案1至26中任一项的IBV。
37.技术方案34至36中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含药学上可接受的载体。
38.技术方案37的免疫原性组合物或疫苗,其中所述药学上可接受的载体是磷酸盐缓冲盐水。
39.技术方案34至38中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其中所述免疫原性组合物或疫苗有效治疗和/或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征。
40.技术方案34至39中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含1至10log10EID50的IBV/剂量。
41.技术方案34至40中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含2至5log10EID50的IBV/剂量。
42.技术方案34至41中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含2至4log10EID50的IBV/剂量。
43.一种试剂盒,其包含技术方案1至26中任一项的IBV或者技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
44.根据技术方案43的试剂盒,其中所述试剂盒进一步包含用于治疗和/或预防禽类疾病的说明书。
45.根据技术方案43的试剂盒,其中所述试剂盒进一步包含用于治疗和/或预防家禽疾病的说明书。
46.根据技术方案43的试剂盒,其中所述试剂盒进一步包含用于治疗和/或预防IB的说明书。
47.一种用于使对象免疫的方法,其包括向此类对象施用根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
48.一种治疗或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征的方法,所述方法包括向对象施用治疗有效量的根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
49.一种与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的纤毛停滞的方法,所述方法包括向对象施用治疗有效量的根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
50.一种与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的病毒RNA载量的方法,所述方法包括向对象施用治疗有效量的根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
51.根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其用于使对象免疫的方法中,所述方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
52.根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其用于治疗或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征的方法中,所述方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
53.根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其用于与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的纤毛停滞的方法中,所述方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
54.根据技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其用于与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的病毒RNA载量的方法中,所述方法包括向对象施用治疗有效量的所述免疫原性组合物或疫苗。
55.技术方案47至54中任一项的方法或用途,其中所述对象是禽类。
56.技术方案47至55中任一项的方法或用途,其中所述对象是家禽。
57.技术方案47至56中任一项的方法或用途,其中所述对象选自鸡、火鸡、鹌鹑或雉鸡。
58.技术方案47至57中任一项的方法或用途,其中所述对象是鸡。
59.技术方案47至58中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗施用一次。
60.技术方案47至58中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗以两个或更多个剂量施用。
61.技术方案47至60中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗是皮下、肌内、经口、卵内、经由喷雾、经由饮用水或通过滴眼剂施用的。
62.技术方案47至61中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗经由滴眼剂进行施用。
63.技术方案47至62中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含1至10log10EID50/剂量的IBV。
64.技术方案47至63中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含2至5log10EID50/剂量的IBV。
65.技术方案47至64中任一项的方法或用途,其中所述免疫原性组合物或疫苗包含2至4log10EID50/剂量的IBV。
66.技术方案47至65中任一项的方法或用途,其中将所述免疫原性组合物或疫苗施用于在前一周龄内、在前三日龄内、在前两日龄内或在前一日龄内的对象。
67.技术方案47至66中任一项的方法或用途,其中将所述免疫原性组合物或疫苗施用于在前一日龄内的对象。
68.技术方案47至67中任一项的方法或用途,其中所述方法导致选自以下的功效参数的改善:与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,纤毛停滞的预防或减少、罗音的预防或减少、产蛋下降的预防或减少、肾脏损害的预防或减少、水样腹泻的预防或减少、体重减轻的预防或减少、更低的病毒载量、减少的病毒脱落或其组合。
69.技术方案47至68中任一项的方法或用途,其中与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,所述治疗或预防导致纤毛停滞的预防或减少。
70.技术方案47至69中任一项的方法或用途,其中与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,所述治疗或预防导致肾脏损害的预防或减少。
71.技术方案47至70中任一项的方法或用途,其中与同一物种的未治疗的对照组的对象相比,所述治疗或预防导致产蛋下降的预防或减少。
72.技术方案1至26中任一项的IBV、技术方案33的病毒颗粒、或者技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其用于治疗用途。
73.技术方案1至26中任一项的IBV或技术方案33的病毒颗粒,其用作免疫原或疫苗。
74.技术方案1至26中任一项的IBV、技术方案33的病毒颗粒、或者技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗,其用作药物。
75.技术方案1至26中任一项的IBV、技术方案33的病毒颗粒、或者技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗用于制造药物的用途。
76.技术方案1至26中任一项的IBV、技术方案33的病毒颗粒、或者技术方案34至42中任一项的免疫原性组合物或疫苗用于治疗和/或预防对象中的IBV感染的用途。
77.技术方案1至26中任一项的IBV,其中所述后代包含在登录号为DPS RE RSCIC16下,保藏于IZSLER的BVR的IBV的细胞培养中的至多15次传代。
78.技术方案1至26中任一项的IBV,其中所述后代包含在登录号为DPS RE RSCIC16下,保藏于IZSLER的BVR的IBV的细胞培养中的至多10次传代。
79.技术方案1至26中任一项的IBV,其中所述后代包含在登录号为DPS RE RSCIC16下,保藏于IZSLER的BVR的IBV的细胞培养中的至多5次传代。
80.技术方案1至26或77至79中任一项的IBV,其中所述IBV是表型上稳定的。
附图说明
图2:在感染不同细胞系72小时后,关于IB66HP的免疫荧光染色。包括了阴性对照但未显示。
实施例
下文阐述了下述实施例,以说明本发明的具体实施方案。这些实施例仅是说明性的,并且不应理解为限制本发明的范围或基本原理。
实施例1:IBV对细胞的适应以及体外表征和体内表征
减毒的IBV M41用于在细胞中的10次连续传代。在每次传代后收获的材料通过EID50和TCID50进行表征。事实上,在用减毒的IBV Mass种子原液接种细胞后的第一次传代中,已经检测到感染滴度。关于前10次传代的EID50(关于含胚卵的感染性)和TCID50(关于细胞培养物的感染性)滴度确定的结果概括于表1中,并且关于受IB66HP感染的细胞的免疫荧光信号检测概括于图1中。结果确认了IBV适于细胞中的细胞培养。IBV在细胞中的一次传代后有效地适应,而关于含胚卵的感染性不受影响。IBV(IB66HP)的传代4在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR(Biobanking ofVeterinary Resources of the Istituto Zooprofilattico Sperimentale dellaLombardia e dell’Emilia Romagna“Bruno Ubertini”)。
传代 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
EID<sub>50</sub>/ml | 5.6 | 9 | 7.1 | 5.3 | 7 | 7 | 6.8 | 7.5 | 6.6 | 6.6 |
TCID<sub>50</sub>/ml | 1 | 6.5 | 4.25 | 5.5 | 6.3 | 6.32 | 4.6 | 7 | 6 | 5.4 |
根据表1和下文进一步的其它实验,显而易见的是IB66HP是表型上稳定的,因为扩展的细胞培养嗜性/组织嗜性和减毒在一段时间内(经过传代)保持。
细胞以106个细胞/ml的密度接种到具有50ml总体积的GRO I培养基(SIGMA,目录:141530C)的250ml摇瓶内,所述GRO I培养基补充有谷氨酰胺和1ml CHO饲料(SIGMA,目录:1615)。对于第一次传代,细胞用减毒IBV Mass种子原液的1/10稀释物进行感染,使所述细胞温育96小时。对于接下来的传代2至10,在新鲜接种的细胞内用前一代的1/10稀释物进行用收获的培养物的接种,所述细胞随后在相同的培养条件下温育48至96小时。通过用传代3的1/250稀释物接种4*105个细胞/ml生成用于保藏的传代4(上清液),并且在感染后72小时收获,并且收获材料的滴度通过50%胚胎感染剂量(EID50)和免疫荧光组织培养感染剂量50(TCID50)测定进行确定,其分别为105,75/ml和107.33/ml。
50%胚胎感染剂量(EID50)的确定
对于EID50滴度的确定,10日龄的SPF含胚鸡蛋以6个重复/稀释度用100μl 10倍连续稀释物/蛋接种到尿囊腔内。使受感染的蛋孵化7天,并且每24小时进行对光检查,以便确定死亡率。在孵化24小时之前具有死亡胚胎的蛋不包括在评估中。如通过Reed&Muench描述的计算EID50/mL。
50%组织培养感染剂量(TCID50)的确定
对于TCID50的确定,在用10倍稀释系列的传代的IBV Mass感染前一天,将具有至少90%生存力的2.5至3*105个细胞/孔接种到96孔板内。从细胞中去除培养基,并且它们以5个重复/稀释度用100μl/孔进行感染。在37℃和7.5%CO2下静态温育72小时后,去除培养基,并且将细胞在4℃下用50μl 80%丙酮/孔固定15分钟。进行用1xPBS的洗涤步骤,并且随后在37℃下与50μl/孔的抗IBV Mass抗血清(Charles River Laboratories,目录:10100454)的1:1000稀释物一起温育1小时。将板用1xPBS洗涤两次,然后加入50μl Alexa488缀合的抗鸡抗体(Invitrogen,目录:A11039)的1:2000稀释物,并且在37℃下温育1小时。随后,进行用1x PBS的最后一次洗涤,并且将100μl 1xPBS加入每个孔内,随后为在倒置荧光显微镜下的评估。根据Reed&Muench的公式,确定细胞中IBV的感染滴度。
IB66HP对于不同细胞系的感染性
第二天,将不同的细胞系接种到96孔板内,以达到70-80%的汇合。细胞用设定为105至105.75TCID50/ml滴度的IB66HP P8的10倍稀释系列进行感染,所述滴度源自对细胞的滴定。从细胞中去除培养基,并且它们以4个重复/稀释度用100μl/孔进行感染。在72小时后,确定TCID50滴度。事实上,检测到IB66HP对于不同原代细胞和细胞系的感染性,并且结果在表2和3中列出且在图2中显示。
表2:IB66HP具有扩展的组织嗜性。关于在滴定之前设定为105TCID50滴度的IB66HP在各种细胞系中的TCID50确定。
细胞 | 物种 | 组织 | Log TCID<sub>50</sub>/ml |
EB66 | 鸭 | 胚胎干细胞 | 5 |
BHK | 仓鼠 | 肾脏 | 4 |
MA104 | 非洲绿猴 | 肾脏 | 2 |
Vero EU | 非洲绿猴 | 肾脏 | 2.67 |
RK13 | 兔 | 肾脏 | 3 |
CEK | 鸡胚 | 原代肾脏 | 5.33 |
CEH | 鸡胚 | 原代肝脏 | 3.67 |
CEL | 鸡胚 | 原代肺 | 6 |
表3:IB66HP具有扩展的组织嗜性。关于在滴定之前设定为105.75TCID50滴度的IB66HP在各种细胞系中的TCID50确定。
细胞 | 物种 | 组织 | Log TCID<sub>50</sub>/ml |
SF9 | 秋粘虫 | 蛹卵巢组织 | 5.6 |
CEF | 鸡胚 | 原代成纤维细胞 | 4.5 |
MDCK | 犬 | 肾脏 | 5.38 |
实施例1的结论
减毒的IBV M41适于细胞培养。保藏的毒株以及后代显示了扩展的细胞嗜性或组织嗜性,因为它们能够在原代细胞和广泛范围的不同细胞系中感染。
实施例2:IB66HP在体内的安全性和功效的确定
在细胞中的减毒的IBV Mass尿囊液原液(P0)以及传代5(P5)和10(P10),用于评价其在1日龄的SPF产蛋鸡中针对强毒M41攻击的安全性和功效。在整个研究自始至终,鸡饲养在隔离单元中,并且随意提供水和商业平衡的配合饲料。每天观察鸡的临床体征。三组鸡经由滴眼剂以104TCID50/鸡的剂量各自用P0、P5和P10进行疫苗接种。一组用安慰剂治疗并充当攻击对照组。在疫苗接种后7天,对用P0、P5或P10接种疫苗的七只动物/组实施安乐死,以经由气管纤毛停滞的评分来评价安全性。为此,将气管取出并切成横截面,其中下部3个、中部4个和上部3个用于安全性评价。所有环都通过光学显微镜检查评估纤毛的跳动。每个环如表4中所述个别地进行评分。
表4:用于安全性评价的纤毛停滞评分方案
评分 | 纤毛活性[%] |
0 | 100 |
1 | 75-99 |
2 | 50-74 |
3 | 25-49 |
4 | 0-24 |
在疫苗接种后21天,所有剩余的鸡都经由滴眼剂以102.5EID50/鸡的剂量用强毒IBVM41进行攻击。如表4中所述的,在疫苗接种后7天通过纤毛停滞评分来评价功效。如果多于50%的内环显示剧烈的纤毛运动(评分2及更低),则环被记录为正常的。如果少于50%的纤毛是跳动的(评分3和4),则环被记录为对于纤毛停滞呈阳性。如果10个环中的不少于9个显示正常的纤毛活性,则动物被视为受保护的。在整个研究自始至终,每天观察所有动物的临床体征,例如抑郁,呼吸、消化或神经系统体征,运动损伤,虚脱或羽毛竖起。
该研究的目的是确定当应用于1日龄的鸡时,与亲本IBV M41att尿囊液原液相比,IB66HP的细胞培养适应性和细胞传代是否对安全性和功效具有作用。通过临床体征和气管外植体的纤毛停滞评分的安全性评价揭示了,与IBV M41att相比,细胞中的IB66HP的P5和P10具有改善的安全性。与IBV M41att相比,纤毛停滞评分对于IB66HP P5和P10显著减少(表5)。另外,与用M41att接种疫苗的动物相比,用IB66HP P5和P10接种疫苗的组中的动物中的临床体征是减少的。最后,IB66HP比M41att更减毒,并且对于1日龄的鸡的疫苗接种具有改善的安全性概况。
表5:在疫苗接种后5天,与M41att尿囊液原液相比,关于IB66HP细胞传代5(P5)和10(P10)的安全性评价的结果。通过将每组的各个鸡的总评分相加,并且将组总和除以动物数目,来计算平均纤毛停滞评分/组(最高可能评分40,最低可能评分0)。对于不受影响的动物,10个气管外植体中的至少9个显示了正常的纤毛活性(评分≤2)。
疫苗接种 | 平均纤毛停滞评分 | #动物/不受影响的 |
M41att P0 | 30.6 | 5/1 |
IB66HP P5 | 8.2 | 5/5 |
IB66HP P10 | 6.4 | 5/5 |
- | 0.4 | 5/5 |
在用强毒IBV M41攻击后,未接种疫苗的对照组的所有动物都显示了临床体征和高纤毛停滞评分。相比之下,细胞传代的IB66HP P5和P10能够与M41att一样有效地减少临床体征和气管的损伤(表6)。
表6:在攻击后7天,与M41att尿囊液原液相比,关于IB66HP细胞传代5(P5)和10(P10)的功效评价的结果。通过将每组的各个鸡的总评分相加,并且将组总和除以动物数目,来计算平均纤毛停滞评分/组(最高可能评分40,最低可能评分0)。对于不受影响的动物,10个气管外植体中的至少9个显示了正常的纤毛活性(评分≤2)。
总之,IB66HP是减毒的IBV毒株,其在不同细胞系和组织细胞中有效地感染且复制。令人惊讶的是,与亲代蛋限制性IBV M41att毒株相比,它对于在1日龄的鸡中的应用具有改善的安全性。此外,IB66HP维持疫苗功效。相比之下,唯一其它已知的细胞培养适应和高度减毒的IBV毒株Beaudette在攻击感染后并不赋予足够的保护。因此,IB66HP是第一个描述的IBV,其是减毒的,具有扩展的细胞培养嗜性或组织嗜性,并且在作为疫苗应用后展示针对强毒攻击的功效。进一步地,IB66HP已显示为表型上稳定的。
Claims (20)
1.一种在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV或具有在DPS RE RSCIC 16下保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。
2.一种在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞培养嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
3.权利要求1或2的IBV,其中所述IBV是减毒的。
4.权利要求1至3中任一项的IBV,其中所述IBV是非重组的。
5.权利要求1或4中任一项的IBV,其中所述IBV是Massachusetts基因型或血清型。
6.权利要求1或5中任一项的IBV,其中所述IBV具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性。
7.权利要求1至6中任一项的IBV,其中所述IBV在选自以下列表的细胞系或细胞中感染和/或复制:来自肺或肝脏的原代鸡胚细胞或者原代鸡成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。
8.权利要求1至7中任一项的IBV,其中所述IBV在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制:DF-1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS-12、PBS-12SF(无血清PBS-12)、BHK21(幼仓鼠肾)、HEK 293T(人胚肾)、Vero(Verda Reno)、MA104、RK13(兔肾)、LMH(leghorn雄性肝癌)、MDCK(马丁达比犬肾)、MDBK(马丁达比牛肾)、PK15(猪肾)、PK2A、SF9、SF21和SF+(草地贪夜蛾)。
9.权利要求1至8中任一项的IBV,其中与没有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV相比,所述IBV的减毒是增加的。
10.一种质粒,其包含编码权利要求1至9中任一项的IBV的核苷酸序列。
11.一种细胞,其包含权利要求1至10中任一项的IBV或质粒。
12.一种免疫原性组合物,其包含权利要求1至9中任一项的IBV。
13.一种疫苗,其包含权利要求1至9中任一项的IBV。
14.一种具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的改良式活疫苗,其包含权利要求1至9中任一项的IBV。
15.一种用于使对象免疫的方法,其包括向此类对象施用根据权利要求12至14中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
16.一种治疗或预防有需要的对象中由IBV引起的临床体征的方法,所述方法包括向对象施用治疗有效量的根据权利要求12至14中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
17.一种与同一物种的未免疫的对照组的对象相比,减少有需要的对象中的纤毛停滞的方法,所述方法包括向对象施用治疗有效量的根据权利要求12至14中任一项的免疫原性组合物或疫苗。
18.权利要求15至17中任一项的方法,其中所述对象是鸡。
19.权利要求15至18中任一项的方法,其中所述免疫原性组合物或疫苗施用一次。
20.权利要求15至19中任一项的方法,其中所述免疫原性组合物或疫苗是皮下、肌内、经口、卵内、经由喷雾、经由饮用水或通过滴眼剂施用的。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP19173827.7 | 2019-05-10 | ||
EP19173827 | 2019-05-10 | ||
PCT/EP2020/062563 WO2020229257A1 (en) | 2019-05-10 | 2020-05-06 | Attenuated ibv with extended cell culture and tissue tropism |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114302956A true CN114302956A (zh) | 2022-04-08 |
Family
ID=66483930
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202080049771.3A Pending CN114302956A (zh) | 2019-05-10 | 2020-05-06 | 具有扩展的细胞培养嗜性和组织嗜性的减毒的ibv |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220202931A1 (zh) |
EP (1) | EP3966318A1 (zh) |
CN (1) | CN114302956A (zh) |
MX (1) | MX2021013728A (zh) |
WO (1) | WO2020229257A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113980912B (zh) * | 2021-10-26 | 2024-03-26 | 南京农业大学 | 可复制ibv病毒qx亚型毒株的基因敲除细胞系及其构建方法和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101948812A (zh) * | 2010-08-26 | 2011-01-19 | 国家兽用生物制品工程技术研究中心 | 嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒强毒疫苗株及其应用 |
CN102574897A (zh) * | 2009-07-07 | 2012-07-11 | 动物健康研究院 | 嵌合蛋白 |
CN104353070A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-02-18 | 中山大学 | 一种鸡传染性支气管炎病毒的基因工程亚单位疫苗及其制备方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2909462A (en) | 1955-12-08 | 1959-10-20 | Bristol Myers Co | Acrylic acid polymer laxative compositions |
ES2341841T3 (es) | 2000-02-29 | 2010-06-29 | Wyeth Llc | Proteccion in ovo contra la bronquitis infecciosa. |
GB201413020D0 (en) * | 2014-07-23 | 2014-09-03 | Pribright The Inst | Coronavirus |
CN108300704B (zh) * | 2018-02-08 | 2022-04-05 | 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 | 一种用传代细胞系悬浮培养传染性支气管炎病毒的方法 |
-
2020
- 2020-05-06 MX MX2021013728A patent/MX2021013728A/es unknown
- 2020-05-06 US US17/595,119 patent/US20220202931A1/en active Pending
- 2020-05-06 EP EP20722604.4A patent/EP3966318A1/en active Pending
- 2020-05-06 CN CN202080049771.3A patent/CN114302956A/zh active Pending
- 2020-05-06 WO PCT/EP2020/062563 patent/WO2020229257A1/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102574897A (zh) * | 2009-07-07 | 2012-07-11 | 动物健康研究院 | 嵌合蛋白 |
CN101948812A (zh) * | 2010-08-26 | 2011-01-19 | 国家兽用生物制品工程技术研究中心 | 嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒强毒疫苗株及其应用 |
CN104353070A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-02-18 | 中山大学 | 一种鸡传染性支气管炎病毒的基因工程亚单位疫苗及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
AHMED ALI ET AL: "Safety and efficacy of attenuated classic and variant 2 infectious bronchitis virus candidate vaccines", POULTRY SCIENCE, vol. 97, no. 12, 1 December 2018 (2018-12-01), XP055716822, DOI: 10.3382/ps/pey312 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3966318A1 (en) | 2022-03-16 |
US20220202931A1 (en) | 2022-06-30 |
MX2021013728A (es) | 2021-12-10 |
WO2020229257A1 (en) | 2020-11-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11512115B2 (en) | Modified S1 subunit of the coronavirus spike protein | |
US11065328B2 (en) | Vaccine against infectious bronchitis virus | |
KR20170122786A (ko) | 2가 돼지 인플루엔자 바이러스 백신 | |
JP2017212976A (ja) | Ib−qx様株に由来する伝染性気管支炎ワクチン | |
US10588958B2 (en) | Avian reovirus vaccines | |
JP2023116544A (ja) | 異種スパイクタンパク質を有するh52 ibvワクチン | |
US20220202931A1 (en) | Attenuated ibv with extended cell culture and tissue tropism | |
US11744888B2 (en) | Method of treating or preventing clinical signs caused by infectious bronchitis virus with 4/91 IBV vaccine having heterologous spike protein | |
US20130129780A1 (en) | Modified infectious laryngotracheitis virus (iltv) and uses thereof | |
US20220213148A1 (en) | Modified s2 subunit of the coronavirus spike protein | |
EA045753B1 (ru) | Вакцина виб h52 с гетерологичным шиповидным белком | |
EA045451B1 (ru) | Вакцина виб 4/91 с гетерологичным шиповидным белком |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |