CN114286665A - 用于治疗中度至极重度的眉间纹和外眦纹的液体肉毒杆菌毒素组合物 - Google Patents

用于治疗中度至极重度的眉间纹和外眦纹的液体肉毒杆菌毒素组合物 Download PDF

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Abstract

本文公开了使用液体肉毒杆菌神经毒素组合物治疗中度至重度和极重度眉间纹和外眦纹的方法。还公开了肉毒杆菌神经毒素的液体组合物。

Description

用于治疗中度至极重度的眉间纹和外眦纹的液体肉毒杆菌毒 素组合物
领域
本文描述了使用肉毒杆菌神经毒素制剂治疗中度至重度和极重度眉间纹(glabellar line，GL)和外眦纹(lateral canthal line，LCL)的方法。还提供了液体肉毒杆菌神经毒素制剂。
背景
以下对本技术背景的描述仅为了帮助理解本技术而提供，并非表示承认或构成本技术的现有技术。
已经表征了七种通常免疫学上不同的肉毒杆菌神经毒素——肉毒杆菌神经毒素血清型A、B、C、D、E、F和G——每种都可以通过用类型特异性抗体中和来区分。作为一个实例，
Figure BDA0003496575660000011
是A型肉毒杆菌毒素(BoNT-A)纯化的神经毒素复合物的商标，可从Allergan，Inc.(欧文，加利福尼亚州)商购获得。
Figure BDA0003496575660000012
是一种流行的基于注射的美容疗法，可暂时减少细纹和皱纹的出现。
目前在美国有四种BoNT-A产品获批用于治疗成人(BOTOX
Figure BDA0003496575660000013
和
Figure BDA0003496575660000014
)或65岁以下成人
Figure BDA0003496575660000015
的GL(BOTOX
Figure BDA0003496575660000016
和
Figure BDA0003496575660000017
)。出于稳定性原因，所有这些产品都以冻干或冷冻干燥的形式储存。在向患者施用之前，此类制剂需要由医师在无菌盐水溶液中重构。该重构步骤与医师的时间损失、稀释错误风险和污染风险相关。肉毒杆菌毒素提供者还必须对医生进行培训，以确保重构步骤得到恰当执行。
因此，目前需要一种肉毒杆菌神经毒素制剂，优选为适合储存和用于治疗的液体形式。
发明内容
本公开总体上涉及满足对肉毒杆菌毒素液体制剂的需求的组合物和方法，所述液体制剂既稳定又易于施用且无需医师重构或混合。
一方面，本公开提供了液体组合物，其包含肉毒杆菌神经毒素和1-5种缓冲剂、至少一种稳定剂和至少一种表面活性剂。
另一方面，本公开提供了治疗人类受试者的中度至重度眉间纹和/或外眦纹的方法，包括向受试者施用治疗有效量的包含肉毒杆菌神经毒素的液体组合物，从而减少中度至重度眉间纹和/或外眦纹的出现，其中所述液体组合物还包含1至5种缓冲剂、至少一种稳定剂和至少一种表面活性剂。
在一些实施方案中，液体组合物包含至少2种缓冲剂、至少3种缓冲剂或至少4种缓冲剂。
在一些实施方案中，液体组合物包含第一缓冲剂，并且在一些实施方案中，第一缓冲剂以约100至约300mM的浓度或以约0.1-10mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，液体组合物包含第二缓冲剂，并且在一些实施方案中，第二缓冲剂以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，液体组合物包含第三缓冲剂，并且在一些实施方案中，第三缓冲剂以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，液体组合物包含第四缓冲剂，并且在一些实施方案中，第四缓冲剂以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，液体组合物包含第五缓冲剂，并且在一些实施方案中，第五缓冲剂以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，缓冲剂选自氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物和磷酸二氢钠脱水物。
在一些实施方案中，至少一种稳定剂是氨基酸。例如，氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。此外，氨基酸可以是D亚型或L亚型。在一些实施方案中，氨基酸以约0.1至约3.0mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，至少一种表面活性剂是非离子表面活性剂(例如，聚山梨酯20或聚山梨酯80)，并且在一些实施方案中，非离子表面活性剂以约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)的浓度或以约0.1至约3.0mg/mL的浓度存在。
在一些实施方案中，肉毒杆菌神经毒素选自A型、B型、C型、D型、E型、F型和G型肉毒杆菌神经毒素，例如，肉毒杆菌神经毒素可以是A型肉毒杆菌神经毒素(即，BoNT-A)。在一些实施方案中，肉毒杆菌神经毒素具有约150kDa的分子量。
在一些实施方案中，液体组合物的pH值介于6.6至6.9之间。在一些实施方案中，液体组合物的摩尔渗透压浓度(osmolality)为270mosm/kg至310mosm/kg之间。
在一些实施方案中，液体组合物包含10至200单位肉毒杆菌神经毒素/mL，例如，在一些实施方案中，液体组合物可以包含100单位肉毒杆菌神经毒素/mL。
在所公开方法的一些实施方案中，向受试者施用1至100单位之间的肉毒杆菌毒素。在所公开方法的一些实施方案中，向受试者施用10至75单位之间的肉毒杆菌毒素。在所公开方法的一些实施方案中，向受试者施用25至75单位之间的肉毒杆菌毒素。在所公开方法的一些实施方案中，向受试者施用10、25、30、45、50、60、75或90单位的肉毒杆菌毒素。
在所公开方法的一些实施方案中，通过注射，例如通过皮下、透皮、皮内或肌内注射来施用液体组合物。在所公开方法的一些实施方案中，在受试者的眉间区域进行多次注射。在所公开的方法的一些实施方案中，眉间区域中的相邻注射相隔约0.5至约10cm，而在一些实施方案中，相邻注射相隔约1.5至约3cm。在所公开方法的一些实施方案中，在面部各侧上的降眉间肌(procerus muscle)和皱眉肌(corrugator supercillii muscle)中进行注射，在一些实施方案中，在面部各侧上，首先在降眉间肌中，然后在皱眉肌中，从中间向外移动，进行注射。在所公开方法的一些实施方案中，所有注射都在上眶缘上方约1cm处并且在瞳孔中线(mid-pupillary lines)内部。在所公开方法的一些实施方案中，所有注射都在眉毛中央或眉弓骨(the bony supraorbital ridge)上方至少1cm处。在一些实施方案中，在受试者的外眦下方、眼轮匝肌(orbicularis oculi)的外部和/或距眶缘(orbital rim)1-2cm处进行多次注射。在一些实施方案中，在受试者的眉间区域和外眦下方、眼轮匝肌的外部和/或距眶缘1-2cm处进行多次注射。
在所公开的方法的一些实施方案中，还包括在注射时对上眶缘施加压力以最小化肉毒杆菌神经毒素的区域效应的风险。
在所公开方法的一些实施方案中，所述方法以约1个月至约6个月的间隔重复以抑制所述复发，例如，所述方法可以以约3个月至约6个月的间隔重复以抑制所述复发，或所述方法可以以约4个月的间隔重复以抑制所述复发。
本公开还提供了根据前述实施方案中任一项的肉毒杆菌神经毒素液体制剂，用于治疗眉间纹和/或外眦纹。
本公开还提供肉毒杆菌神经毒素液体制剂的任何前述实施方案用于治疗受试者的眉间纹和/或外眦纹的用途，包括向受试者施用所公开的制剂。
下面的详述描述是示例性和解释性的，但并不旨在进行限制。
附图简要说明
图1展示了静息Merz美观严重程度(MAS)眉间纹(GL)量表和动态MAS GL量表。
图2展示了在30、45和60单位剂量水平的BoNT(QM1114-DP制剂)治疗的响应率显著高于安慰剂组。
图3展示了使用BoNT的QM1114-DP制剂在六个月的整个研究过程中的响应率。
图4展示了使用BoNT的QM1114-DP制剂，根据研究者和受试者二者的响应率、2分改善和0或1的得分。
图5比较了肉毒杆菌神经毒素(QM1114-DP制剂)与目前在美国销售的肉毒杆菌毒素的治疗。
图6展示了肉毒杆菌神经毒素(QM1114-DP制剂)治疗的响应持续时间。对于研究者和受试者使用MAS动态评估GL严重程度，响应持续时间分别测量为首次出现至少2分降低和回到基线得分之间的时间。
图7显示了肉毒杆菌神经毒素(QM1114-DP制剂)治疗的患者满意度。
图8A-8B显示了肉毒杆菌神经毒素治疗的不良事件和部位效应。图8A显示了注射部位疼痛，图8B显示了报告上睑下垂(ptosis)的受试者的数量。
图9A-9B显示了不同条件下眉间纹的不同得分。图9A显示了由最大随意肌肉活动(即最大皱眉纹)产生的眉间纹量表。图9B显示了静息时的眉间纹。
图10显示了临床研究流程图。
图11显示了用于治疗眉间纹的注射部位。
图12显示了用于治疗外眦纹(LCL)的注射部位。注射部位可根据受试者表现出的LCL，如(A)或(B)中所示进行设置。
图13显示了随着时间的推移治疗组的平均皱纹得分(研究者)：最大微笑时(A)和静息时(B)。
图14显示了随着时间的推移治疗组的平均皱纹得分(受试者)：最大微笑时(A)和静息时(B)。
图15显示了随着时间的推移治疗组的平均皱纹得分(研究者)：最大皱眉/微笑时(A)和静息时(B)。
图16显示了随着时间的推移治疗组的平均皱纹得分(受试者)：最大皱眉/微笑时(A)和静息时(B)。
发明详述
下文将更全面地描述根据本公开的实施方案。然而，本公开的方面可以以不同的形式体现并且不应被解释为限于本文阐述的实施方案。相反，提供这些实施方案是为了使本公开彻底和完整，并将向本领域技术人员充分传达本发明的范围。在本文的描述中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的并且不旨在进行限制。
除非另有定义，本文使用的所有术语(包括技术和科学术语)的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。将进一步理解，术语，例如在常用词典中定义的那些，应被解释为具有与其在本申请的上下文和相关领域中的含义一致的含义，并且不应以理想化或过于正式的含义来解释，除非在本文中明确如此定义。虽然在下文没有明确定义，但这样的术语应该根据它们的常用含义来解释。
在本文的描述中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制本发明。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均通过引用整体并入。
除非上下文另有说明，否则本文描述的发明的各种特征明确旨在可以以任何组合使用。而且，本公开还预期在一些实施方案中，可以排除或省略本文中阐述的任何特征或特征的组合。举例说明，如果说明书陈述复合物包含组分A、B和C，则明确旨在A、B或C中的任何一个，或它们的组合，可以单独地或以任何组合被省略和放弃。
除非另外明确指出，所有详细说明的实施方案、特征和术语旨在包括所列举的实施方案、特征或术语及其生物学等同物。
I.定义
如本文所用，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”表示单数和复数，除非明确说明仅表示单数。
应当理解，虽然并不总是明确说明，但所有数字名称前都有术语“约”。术语“约”是指所理解的数字不限于本文中阐述的确切数字，并且旨在指基本上围绕所述数字而不脱离本发明范围的数字。如本文所用，“约”将被本领域普通技术人员理解并且将在其使用的上下文中在一定程度上变化。如果给定了其使用的上下文，但本领域普通技术人员不清楚该术语的使用时，“约”表示特定术语的最多正负15％、10％、5％、1％或0.1％。
同样如本文所用，“和/或”是指并涵盖一个或多个相关所列项目的任何和所有可能的组合，以及当以替代方式(“或”)解释时不存在组合。
本文使用的术语“施用”是指(1)例如由医疗专业人员或其授权的代理人或在他的指导下，提供、给予、给药和/或开处方，(2)例如由医疗专业人士或受试者放入、服用或消耗。施用应包括但不限于，通过口服、肠胃外(例如，肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注；皮下注射；或植入)、通过吸入喷雾剂鼻腔、阴道、直肠、舌下、尿道(例如，尿道栓剂)或局部施用途径(例如凝胶、软膏、乳膏、气雾剂等)，并且可以单独或一起配制在合适的剂量单位制剂中，该制剂包含常规的无毒药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂和针对每种施用途径适当的媒介物。本发明不受施用途径、制剂或给药方案的限制。本文公开的药物组合物是“局部施用的”(局部施用)，即在需要治疗结果或效果的部位处或其附近施用。
如本文所用，术语“治疗”包括减少或改善眉间纹(GL)和/或外眦纹(LCL)的出现，或其一种或多种症状，无论GL或LCL是否被视为“治愈”或“消除”，并且无论是否所有症状都已被解决。该术语还包括减少或预防GL、LCL和/或其一种或多种症状的进展，并实现任何治疗和/或预防益处。
术语“肉毒杆菌毒素(Botulinum toxin)”表示作为纯毒素(即约150千道尔顿分子量的神经毒性成分)或作为肉毒杆菌毒素复合物(约300至约900千道尔顿分子量)的A、B、C、D、E、F或G型肉毒杆菌神经毒素，包括重组、嵌合、杂交、重新靶向和氨基酸序列修饰的肉毒杆菌神经毒素，但不包括非神经毒素的肉毒杆菌毒素，例如细胞毒性肉毒杆菌毒素C2和C3。
“局部施用”表示通过非全身性途径(即通过皮下(subcutaneous)、肌内、真皮下(subdermal)、皮内、皮下、器官内，例如注射到膀胱壁或前列腺体内]或经皮途径)向目标组织、肌肉或皮下位置或其附近施用药剂。因此，局部施用不包括全身性(即施用于血液循环系统)施用途径，例如静脉内或口服施用。外周施用表示施用于外周(即患者的面部、四肢、躯干或头部上或内的位置)，而不是施用于内脏或肠道(即施用于内脏)施用。
“药物组合物”表示其中活性成分(活性剂)可以是肉毒杆菌神经毒素的制剂。术语“制剂”是指药物组合物中除活性剂之外至少还有一种额外的成分。因此，药物组合物是一种制剂，其适合用于对受试者例如人类患者进行诊断或治疗施用(即通过皮下或肌内注射)。
“有效量”是足以实现有益的或期望的结果例如减少、平滑或拉直眉间纹和/或外眦纹的量。如本文所用的有效量还包括足以防止眉间纹或外眦纹形成恶化或逆转现有眉间纹形成的量。因此，不可能指定确切的“有效量”。有效量可以一次或多次施用、应用或剂量进行施用。这种递送取决于许多变量，包括使用单个剂量单位的时间周期、药剂的施用位置、眉间纹的严重程度、施用途径等。然而，应当理解，本公开的治疗剂对于任何特定受试者的具体剂量水平取决于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间；排泄速率；药物组合；以及被治疗的特定疾病的严重程度和施用形式。通常可以滴定治疗剂量以优化安全性和功效。剂量可由医生确定，并在需要时进行调整，以适应观察到的治疗效果。
II.液体组合物
本文提供了包含肉毒杆菌神经毒素和缓冲剂的液体组合物，其适合作为液体储存并用于治疗眉间纹而无需进一步重构或混合。
肉毒杆菌神经毒素(BoNT)是一种150千道尔顿(kDa)的蛋白质二聚体，由100kDa的重链和50kDa的轻链组成。两条链通过两个半胱氨酸残基的二硫键连接。轻链是一种酶，切割25kDa的突触体相关蛋白(SNAP-25)。重链介导毒素蛋白的结合和内化。与其他可商购获得的BoNT不同，本液体组合物中的肉毒杆菌神经毒素(在此称为QM1114)在液体形式下是稳定的，并且在使用前不需要重构或混合。在一些实施方案中，配制在液体组合物中的BoNT是A型肉毒杆菌神经毒素(BoNT-A1)。
根据本发明的液体组合物包含缓冲剂，该缓冲剂包含钠离子、氯离子和/或磷酸根离子。通常通过添加缓冲盐来添加此类离子。
例如，液体组合物可以包含至少一种氯离子源，例如氯化钠、氯化钾，或另一种氯离子源，浓度为约100至约300mM，例如100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300mM，或浓度为约1至约25mM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mM。在一些实施方案中，液体组合物可以包含浓度相同或不同的多于一种氯离子源，例如浓度为约100至约300mM例如100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300mM的氯化钠或另一种钠或氯离子源，以及浓度为约1至约25mM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mM的氯化钾或另一种氯离子源。在一些实施方案中，一种或多种钠/氯离子源可以以相同或不同的浓度存在，所述浓度在约0.1-10mg/mL的范围内，例如为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10mg/mL或介于之间的任何值。
类似地，液体组合物可以包含至少一种磷酸根离子源，例如磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物、磷酸二氢钠脱水物，或另一种磷酸根离子源，浓度为约1至约50mM或约5至约15mM，例如1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50mM。在一些实施方案中，液体组合物可以包含多于一种的浓度相同或不同的磷酸根离子源，例如，浓度为约1至约50mM或约5至约15mM，例如1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50mM的磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物、磷酸二氢钠脱水物或另一种磷酸根离子源，以及浓度为约1至约50mM或约5至约15mM，例如1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50mM的不同磷酸根离子源，其选自磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物、磷酸二氢钠脱水物或另一种磷酸根离子源。在一些实施方案中，一种或多种磷酸根离子源可以以相同或不同的浓度存在，所述浓度在约0.1-1.0mg/mL的范围内，例如为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0mg/mL或介于之间的任何值。
在一些实施方案中，液体组合物可以包含1-5种或更多种缓冲剂。因此，液体组合物可以包含1、2、3、4或5种或更多种缓冲剂，包括但不限于氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物。所述1、2、3、4或5种或更多种缓冲剂可以以相同或不同的浓度存在。例如，在一些实施方案中，第一缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)的存在浓度可以为约100至约300mM，例如100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300mM；或为约0.1-10mg/mL，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10mg/mL，或介于之间的任何值。在一些实施方案中，第二缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)的存在浓度可以为约1至约25mM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mM，或为约0.1-1.0mg/mL，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0mg/mL，或介于之间的任何值。在一些实施方案中，第三缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)的存在浓度可以为约1至约25mM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mM，或为约0.1-1.0mg/mL，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0mg/mL或介于之间的任何值。在一些实施方案中，第四缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)的存在浓度可以为约1至约25mM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mM，或为约0.1-1.0mg/mL、such as 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0mg/mL，或介于之间的任何值。在一些实施方案中，第五缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)的存在浓度可以为约1至约25mM，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mM，或为约0.1-1.0mg/mL，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0mg/mL，或介于之间的任何值。
液体组合物中也可以包含其他组分以改善组合物的稳定性或其他性质。例如，适用的稳定剂可以包括但不限于氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、组氨酸、色氨酸、天冬氨酸或谷氨酸)、亚硫酸氢钠、柠檬酸钠或其他柠檬酸盐等等。在一些实施方案中，氨基酸可以是具有疏水侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)。在一些实施方案中，氨基酸可以为D亚型，而在一些实施方案中，氨基酸可以为L亚型。因此，在一些实施方案中，液体组合物可以包含至少一种D-或L-氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸组氨酸、色氨酸、天冬氨酸或谷氨酸)，其浓度为约0.1至约3.0mg/mL，约0.5至约2.5mg/mL，或约0.75至约2.25mg/mL。在一些实施方案中，液体组合物可以包含至少一种D-或L-氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸组氨酸、色氨酸、天冬氨酸或谷氨酸)，其浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mg/mL或介于之间的任何值。在一些实施方案中，液体组合物可以包含至少一种D-或L-氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸组氨酸、色氨酸、天冬氨酸或谷氨酸)，其浓度为约0.1、约0.2、约0.3、约0.4、约0.5、约0.6、约0.7、约0.8、约0.9、约1.0、约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2.0、约2.1、约2.2、约2.3、约2.4、约2.5、约2.6、约2.7、约2.8、约2.9或约3.0mg/mL或介于之间的任何值。
在一些实施方案中，液体组合物还可以包含一种或多种表面活性剂(例如，非离子表面活性剂，如聚山梨酯(polysorbate)(例如，聚山梨酯80或聚山梨酯20)或壬苯醇醚类(nonoxynols)；阴离子表面活性剂，如多库酯；或阳离子表面活性剂，如季铵盐)。因此，在一些实施方案中，液体组合物可以包含非离子表面活性剂，包括但不限于聚山梨酯(例如，聚山梨酯80或聚山梨酯20)或壬苯醇醚。在一些实施方案中，液体组合物可以包含阴离子表面活性剂，包括但不限于多库酯。在一些实施方案中，液体组合物可以包含阳离子表面活性剂，包括但不限于季铵盐。在一些实施方案中，表面活性剂可以以约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)、约0.05％(v/v)至约2.5％(v/v)或约0.1％(v/v)至约1.5％(v/v)的浓度存在。在一些实施方案中，所述至少一种表面活性剂的浓度可以为：0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0％(v/v)或介于之间的任何值。在一些实施方案中，至少一种表面活性剂的浓度可以为约0.01、约0.02、约0.03、约0.04、约0.05、约0.06、约0.07、约0.08、约0.09、约0.1、约0.2、约0.3、约0.4、约0.5、约0.6、约0.7、约0.8、约0.9、约1.0、约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2.0、约2.1、约2.2、约2.3、约2.4、约2.5、约2.6、约2.7、约2.8、约2.9、约3.0、约3.1、约3.2、约3.3、约3.4、约3.5、约3.6、约3.7、约3.8、约3.9、约4.0、约4.1、约4.2、约4.3、约4.4、约4.5、约4.6、约4.7、约4.8、约4.9或约5.0％(v/v)或介于之间的任何值。在一些实施方案中，液体组合物可包含以下浓度的至少一种表面活性剂：0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mg/mL或介于之间的任何值。在一些实施方案中，液体组合物可包含以下浓度的至少一种表面活性剂：约0.1、约0.2、约0.3、约0.4、约0.5、约0.6、约0.7、约0.8、约0.9、约1.0、约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2.0、约2.1、约2.2、约2.3、约2.4、约2.5、约2.6、约2.7、约2.8、约2.9或约3.0mg/mL或介于之间的任何值。
在一些实施方案中，液体组合物还可以包含一种或多种乳化剂(例如大豆卵磷脂)、润湿剂、赋形剂(乳糖、甘露醇、葡萄糖、微晶纤维素、胶体二氧化硅和淀粉等)、粘合剂(羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和偏硅酸铝镁(magnesium metasilicate aluminate)等)、崩解剂(淀粉、L-羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、纤维素乙醇酸钙等)、润滑剂(硬脂酸镁等)、溶胀剂(羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、卡波姆、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、黄原胶、瓜尔胶粉(Cyamoposis Gum)等)、溶胀助剂(葡萄糖、果糖、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖、海藻糖、磷酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐、甘氨酸、谷氨酸盐和精氨酸等)和/或增溶剂(聚乙二醇、丙二醇等)。
在一些实施方案中，液体组合物可以包含1-5种或更多种缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)；一种或多种稳定剂(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸组氨酸、色氨酸、天冬氨酸或谷氨酸)；和一种或多种表面活性剂(例如，非离子表面活性剂，如聚山梨酯(例如，聚山梨酯80或聚山梨酯20)或壬苯醇醚类；阴离子表面活性剂，如多库酯；或阳离子表面活性剂，如季铵盐)。在一些实施方案中，液体组合物可以包含：(i)第一缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)，其浓度为约100至约300mM或浓度为约0.1-10mg/mL；(ii)第二缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)，其浓度为约1至约25mM，或浓度为约0.1-1.0mg/mL；(iii)第三缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)，其浓度为约1至约25mM，或浓度为约0.1-1.0mg/mL；(iv)第四缓冲剂(例如氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物或磷酸二氢钠脱水物)，其浓度为约1至约25mM，或浓度为约0.1-1.0mg/mL；(v)一种或多种稳定剂(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸组氨酸、色氨酸、天冬氨酸或谷氨酸)，其浓度为约0.1至约3.0mg/mL，和(vi)一种或多种表面活性剂(例如，非离子表面活性剂如聚山梨酯(例如聚山梨酯80或聚山梨酯20)或壬苯醇醚类；阴离子表面活性剂如多库酯；或阳离子表面活性剂如季铵盐)，其浓度为约0.05％0.05％(v/v)至约2.5％(v/v)，或浓度为约0.1至约3.0mg/mL。在一些实施方案中，稳定剂可以是氨基酸，并且在一些实施方案中，表面活性剂可以是非离子表面活性剂，例如聚山梨酯。出于本公开的目的，应当理解，QM1114-DP可以例示任何前述实施方案。
根据本发明的液体组合物的pH在5.5至8之间。根据优选的实施方案，pH在6.0至7.5之间，例如为约6.3、6.35、6.4、6.45、6.5、6.55、6.6、6.65、6.7、6.75、6.8、6.85、6.9、6.95、7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35、7.4、7.45或7.5。优选地，pH在6.6至6.9之间。液体组合物优选包含水性稀释剂，更优选水，例如无菌水、注射用水、纯净水和无菌注射用水。
优选地，液体组合物适合注射给患者，特别是人类患者。肉毒杆菌神经毒素的量通常以小鼠LD50(致死剂量50)单位表示，该单位定义为小鼠腹膜内致死剂量的中位数。肉毒杆菌毒素的小鼠LD50(MLD50)单位不是标准化单位。确实，不同制造商的市售毒素所使用的测定法在稀释缓冲液的选择上尤其不同。例如，
Figure BDA0003496575660000131
听用的测试使用明胶磷酸盐缓冲液，而
Figure BDA0003496575660000141
所用的测试使用盐水作为稀释剂。据信，明胶缓冲液在LD50测定法中使用的高稀释度下保护毒素。相比之下，使用盐水作为稀释剂被认为会导致一些效力损失。这可以解释为什么当使用
Figure BDA0003496575660000142
测定法进行测试时，一个
Figure BDA0003496575660000143
单位相当于大约三个单位的
Figure BDA0003496575660000144
(Straughan，D.W.，2006，AT LA 34(3)，305-313；Hambleton和Pickett，Hambleton，P.，和A.M.Pickett.，1994，Journal of the Royal Society ofMedicine87.11：719)。
优选地，用于测定小鼠LD50的稀释缓冲液是明胶磷酸盐缓冲液。例如，小鼠LD50可以按以下文献中所述进行测定：Hambleton，P.et al.Production，purification andtoxoiding of Clostridium botulinum type A toxin.Eds.G.E.Jr Lewis和P.S.Angel.Academic Press，Inc.，New York，USA，1981，p.248。简单来说，将肉毒杆菌毒素样品在pH 6.5的0.2％(w/v)明胶0.07M Na2HP04缓冲液中连续稀释。用稀释的毒素样品(例如每只动物0.5ml)腹膜内注射重约20g的各组小鼠(例如，每组4至8只小鼠)。选择稀释组，例如5个稀释组，以跨越50％致死剂量。观察小鼠长达96小时，并估计小鼠致死剂量50(MLD50)。
根据本发明的液体组合物优选包含4至10000LD50单位肉毒杆菌神经毒素/mL，更优选包含10至200LD50单位肉毒神经毒素/mL，例如10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200LD50单位肉毒杆菌神经毒素/mL。肉毒杆菌神经毒素的量也可以用ng表示。
根据本发明的液体组合物的摩尔渗透压浓度为200-400mosm/kg，优选270-310mosm/kg，例如270、275、280、285、290、295、300、305或310mosm/kg或介于之间的任何值。
III.治疗
本文还提供了治疗人类受试者的中度至重度眉间纹和/或外眦纹的方法，包括向受试者施用治疗有效量的包含肉毒杆菌神经毒素的液体组合物，从而减少中度至重度眉间纹的出现。液体组合物可以对应于上文第II部分中公开的任何前述实施方案。
在一些实施方案中，向受试者施用1至100单位之间的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，向受试者施用10至75单位之间的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，向受试者施用25至75单位之间的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，向受试者施用10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100单位的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，向受试者施用50至250单位的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，向受试者施用75至200单位之间的肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，施用于受试者的液体组合物的浓度为1至300单位之间的肉毒杆菌毒素/mL，例如1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300单位/mL。
在一些实施方案中，通过注射施用组合物。在一些实施方案中，注射是皮下、透皮、皮内或肌内。在一些实施方案中，该方法包括在眉间区域多次注射。在一些实施方案中，相邻注射部位相隔约0.5至10cm。在一些实施方案中，相邻注射部位相隔约1.5至3cm。
在一些实施方案中，在面部各侧上的降眉间肌和皱眉肌中进行注射，并且在一些实施方案中，注射以特定的顺序进行，例如，在面部各侧上上，从降眉间肌开始，然后是皱眉肌，从中间向外移动。在一些实施方案中，所有注射都在上眶缘上方约1cm处并且在瞳孔中线内部。
在一些实施方案中，该方法还包括在注射时对上眶缘施加压力以最小化神经毒素的区域效应的风险。
在一些实施方案中，所有注射都在眉毛中央或眉弓骨上方至少1cm处。
在一些实施方案中，可以施用组合物以治疗、预防或改善外眦纹(LCL)。在一些实施方案中，治疗可以包括约三次注射(每个注射部位一次注射)。例如，治疗可以包括1、2、3、4或5次注射。注射的位置可以根据个体受试者的LCL纹路型态(LCL pattern of rhytids)进行调整。根据个体受试者的纹路型态，如果LCL区域中的纹位于外眦的上方和下方，则例如如图12A中所述进行注射。或者，如果个体受试者的LCL中的纹主要位于外眦下方，则例如如图12B中所述进行注射。在一些实施方案中，注射点可以在眼轮匝肌的外部，并且在适用时，在距眶缘约1-2cm处。一些实施方案可以包括向面部各侧施用的三次等体积(100μl)注射(即，共计六次注射)。
在一些实施方案中，可以同时(即，在同一时间)施用组合物以治疗、预防或改善GL和LCL。在一些实施方案中，治疗可以包括例如向GL区域(五次注射)和LCL区域(向面部各侧注射三次)施用11次等体积(100μ1)注射(每个注射部位一次注射)。在一些实施方案中，同时治疗GL和LCL可以包括5、6、7、8、9、10、11、12、13或14次或更多次注射。例如，对于GL，5个注射部位可以包括在每个皱眉肌中2次注射，以及在降眉间肌中1次注射，对于LCL，注射位置可以根据个体受试者的LCL纹路型态进行调整。根据个体受试者的纹路型态，如果LCL区域中的纹位于外眦的上方和下方，则可以按照图12A中所述进行注射。或者，如果个体受试者的LCL中的纹主要位于外眦下方，则可以按照图12B中所述进行注射。在一些实施方案中，用于治疗LCL的注射点可以在眼轮匝肌的外部，并且在适用时，在距眶缘约1-2cm处。
在一些实施方案中，以约3个月至约6个月的间隔重复该方法以抑制复发。在一些实施方案中，以约4个月的间隔重复该方法以抑制复发。
本文提供的方法暂时减少了受试者的眉间纹和/或外眦纹的出现。可通过本领域技术人员已知的方法评估治疗的功效。示例性评估方法在下文和实施例中提供。
a.眉间纹严重程度的4分照片量表：研究者实况评估(GL-ILA)
经验证的眉间纹严重程度的4分照片量表包括两套分级系统：一套为最大皱眉时的研究者实况评估，另一套为静息时的研究者实况评估。该量表代表了眉间纹的严重程度，从无(0级)、轻度(1级)、中度(2级)到重度眉间纹(3级)。各等级还由一张个人照片和说明文字来描述。研究者将接受使用4分照片量表的培训。研究者将使用4分照片量表对筛选时的基线(治疗前)和所有治疗后回访时就受试者的面部进行直接、实况的比较。受试者将独立于研究者的评估对眉间纹严重程度进行他们的评估。将要求受试者使用静态4分分类量表对筛选时基线(治疗前)和所有治疗后回访时他们在最大皱眉时的眉间纹进行评价。
等级 眉间纹的严重程度 描述
0 无皱纹 皮肤光滑
1 轻度皱纹 皮肤比较光滑
2 中度皱纹 皱眉纹
3 重度皱纹 皱眉纹较深
b.整体美观改善量表(GAIS)
受试者将使用以下分类量表在所有的治疗后回访时对他们在最大皱眉时的眉间纹相较于他们的治疗前外观的整体美观改善进行评级。
评级
改善非常多
改善较多
有改善
无变化
恶化
恶化较严重
恶化非常严重
受试者将被询问：“与即将注射前相比，您对您在最大皱眉时的眉间纹(眉毛之间的线)的外观变化如何评级？”
将指示受试者依据其在最大皱眉时眉间纹相对于基线外观变化选择最符合该程度的一个等级。受试者可以查看基线照片以帮助评估。
c.日记卡
从治疗当日(第1天)到第7天(研究回访3)，将要求受试者在日记卡中记录他们对研究治疗反应的评估。他们将被要求对以下问题回答“是”或“否”：“自注射以来，您是否注意到您的眉间纹(双眉间的纹路)的外观有所改善？”受试者每天完成日记卡，并在第7天回访时将日记交回研究中心。
d.FACE-Q
FACE-Q是一种患者报告结果工具，用于从受试者的角度评价面部美容程序的体验和结果。FACE-Q由40多个量表组成，涵盖四个领域(对面部外观的满意度、与健康相关的生活质量、不良反应和护理过程)。每个领域都有一个或多个独立功能量表(functioningscale)。出于本研究的目的并考虑到所治疗的症状，选择了心理功能量表，由受试者在评估计划表中指明的时间点完成。
e.面部皱纹治疗满意度问卷
这些问题要求受试者考量他们最近一次透过程序(procedure)治疗的面部区域。受试者选择最符合他们对给定陈述的同意程度的回答。下面提供了一个示例性问卷。每个问题只能有一个答复。
Figure BDA0003496575660000181
Figure BDA0003496575660000191
总体上，我对我最近一次透过程序治疗的面部区域的看法
Figure BDA0003496575660000192
f皱纹满意度(SWL)问卷
在基线(治疗前)和所有治疗后回访时，受试者将被要求完成由Galderma开发的经过验证的SWL问卷。
g.独立照片评审员(IPR)
三名IPR(其对受试者的随机治疗不知情)将使用经验证的眉间纹严重程度的4分照片量表对每个受试者在最大皱眉时的GL进行照片评估。在研究结束时对所有受试者进行IPR评估。IPR将利用该量表比较对基线和每次治疗后回访时每名受试者最大皱眉时的GL照片。取三位评审员给分的中位数确定为IPR得分。IPR不参与研究的任何其他方面。
实施例
实施例1治疗中度至极重度眉间纹(GL)
进行了多中心、随机、双盲、安慰剂对照研究，以评价不同剂量的肉毒杆菌神经毒素对中度至重度上面部皱纹，包括眉间纹(GL)、外眦纹(LCL)和GL/LCL组合的治疗。GL患者接受4个剂量(10、25、50和75单位)的治疗。LCL患者接受3个剂量(30、60和90单位)的治疗。GL/LCL组合患者接受2个剂量(50/60和50/90单位)的治疗。
进行1期研究以调查治疗的安全性和耐受性。本次研究中没有重度不良事件(SAE)，也没有受试者因AE或任何其他原因退出。大多数AE为轻度。所有剂量均是安全且耐受性良好的。
在所有剂量水平下，肉毒杆菌神经毒素有效降低最大皱眉和静息时的GL严重程度长达28天。在所有剂量水平下，肉毒杆菌神经毒素有效降低最大皱眉和静息时的LCL严重程度长达28天。在所有剂量水平下，肉毒杆菌神经毒素有效降低最大皱眉时的GL和LCL(当组合治疗时)的严重程度长达28天。静息时效果不太明显。
进行2期研究以评价在第14天分别由研究者和受试者对3种剂量(30、45和60单位)的BoNT对GL的治疗功效。如图2所示，与安慰剂相比，肉毒杆菌神经毒素的所有剂量水平都达到了主要目标。在每个剂量水平下，治疗组的响应率水平显着高于安慰剂组。
肉毒杆菌神经毒素治疗组中最常见的TEAE包括注射部位疼痛(15.9％)、头痛(10.4％)、眼睑下垂(3.9％)和注射部位肿胀(1.3％)。
表1-II期试验中的TEAE
Figure BDA0003496575660000201
总之，II期研究表明肉毒杆菌神经毒素在所有剂量水平下均是安全的且有效降低GL。中位响应持续时间约为6个月，如图3所示。患者满意度高。
第III期研究
使用Merz美观严重程度量表(MAS)在静息和最大皱眉(动态)时进行眉间纹评估。
主要资格标准包括：
1.年龄18岁或以上，依据受试者和研究者使用MAS(动态)评估为最大皱眉时具有中度至极重度GL，且使用MAS(静息时)评估为在静息时至少具有轻度GL。
2.之前没有接受任何肉毒杆菌神经毒素(BoNT)的治疗，眉间区域没有通过手动分开皮肤而无法消除的的皱纹。
3.之前没有在眉间区域插入任何永久性或半永久性材料、透明质酸或胶原蛋白填充物，也没有眶下缘以上的面部手术史，在研究期间没有计划中的面部手术或美容程序，或者在过去12个月或研究期间在眶下缘以上没有进行非剥脱性皮肤磨削术(ablative skinresurfacing)或化学换肤。
4.无眼睑或眉毛下垂或弱视病史。
研究人群在下表2中描述。
表2-研究人群
年龄 23-79岁(54％为≤50岁)
性别 87％女性，13％男性
人种 98％白种人，＜2％黑种人/非裔美国人，＜0.5％亚洲人
种族 21％西班牙人/拉丁美洲人
Fitzpatrick 2％I，34％II，45％III，17％IV，1％V，1％VI
基线人口统计
表3-基线MAS得分
Figure BDA0003496575660000211
Figure BDA0003496575660000221
在基线时，受试者和研究者评估的平均MAS动态得分相似，但受试者评估的平均MAS静息得分高于研究者评估。
主要疗效指标(Primary Endpoint)
表4-主要疗效指标的评估
Figure BDA0003496575660000222
如上表4中所示，与安慰剂相比，60单位、45单位和30单位肉毒杆菌神经毒素在第14天的MAS动态响应率的差异对于这两项协同主要变量(co-primary variables)都具有统计学显著性(p＜0.001)。
次要疗效指标
MAS动态：对于次要功效分析，响应者被定义为分别由受试者和研究者使用MAS动态评估，GL严重程度比基线降低至少2分的受试者。对所有肉毒杆菌神经毒素治疗组进行受试者评估，直到第6个月。对30单位和45单位的治疗组进行研究者评估，直到第5个月，对60单位的治疗组进行研究者评估，直到第6个月。
MAS静息：对于次要功效分析，响应者被定义为使用MAS静息评估，GL严重程度比基线降低至少1分的受试者。对所有肉毒杆菌神经毒素治疗组进行受试者评估，直到第6个月。对30单位和45单位的治疗组进行研究者评估，直到第4个月，对60单位的治疗组进行研究者评估，直到第5个月。
结果：为此研究专门明确定义响应持续时间。对于研究者和受试者使用MAS动态评估GL严重程度，响应持续时间(如本研究中所定义)分别测量为首次出现至少2分降低和回到基线得分之间的时间。
对于研究者评估，30单位和45单位治疗组的中位响应持续时间(如上所定义)接近6个月，而在60单位治疗组中，53％的有响应的受试者在第6个月没有回到基线。在安慰剂组中，中位响应持续时间为约3.5个月。
对于受试者评估，肉毒杆菌神经毒素治疗组和安慰剂之间的差异不太明显，肉毒杆菌神经毒素治疗组的中位响应持续时间为约6个月，而安慰剂治疗组为4.5个月。
对于研究者和受试者使用MAS动态评估GL严重程度，起效时间(如本研究中所定义)分别测量为与基线相比首次降低1分的时间和与基线相比首次降低2分的时间。
结果显示，当使用研究者和受试者评估时，在肉毒杆菌神经毒素治疗组中，达到首次降低至少1分的时间过程是相似的，中位数为8天。当使用研究者评估和受试者评估时，在肉毒杆菌神经毒素治疗组中，达到首次降低至少2分的时间过程是相似的，中位数为8或9天。
此外，在所有时间点，肉毒杆菌神经毒素治疗组中“非常满意”或“满意”的受试者比例均高于安慰剂组。反过来也是如此，即肉毒杆菌神经毒素治疗组中“不满意”或“非常不满意”的受试者比例均低于安慰剂组。治疗满意度最高水平出现在第1个月。剂量和治疗满意度水平之间似乎没有任何关系。
安全性
在这项研究中，肉毒杆菌神经毒素在所有剂量水平下都是安全且耐受良好的。观察到的与治疗相关的治疗中出现的不良事件(TEAE)的类型与其他毒素在GL治疗中所报告的类型相似。最常见的(任何肉毒杆菌神经毒素治疗组中至少1％的受试者)与治疗相关的TEAE是注射部位疼痛、头痛、眼睑下垂、注射部位肿胀、注射部位瘙痒和视力受损。这些与治疗相关的TEAE中的大多数都存在剂量效应趋势。大多数的治疗相关的TEAE为轻度或中度。
治疗相关的眼睑下垂出现在：30单位治疗组中的3名受试者(2.9％)；45单位治疗组中的4名受试者(3.9％)；60单位治疗组中的5名受试者(4.9％)。没有与治疗相关的TEAE表明毒素的更远传播效应。
没有与治疗相关的重度不良事件(SAE)。研究中发生了四例不相关的SAE，包括一例产前唐氏综合征检测呈阳性(30单位)、一例重度抑郁症(45单位)、一例腭裂活产儿(45单位)和一例胰腺炎(60单位)。研究期间并无死亡或导致退出的AE案例。
总之，第14天的主要疗效指标证实了所有肉毒杆菌神经毒素剂量(30、45和60单位)与安慰剂相比的疗效。与安慰剂(6％至8％)相比，所有肉毒杆菌神经毒素治疗组(73％至91％)在第14天的MAS动态响应率都很高。结果还证实肉毒杆菌神经毒素有效降低GL严重程度。具体而言，在最大皱眉时，与安慰剂治疗相比，根据研究者评估在直至第6个月的所有时间点以及根据研究者评估对于30单位和45单位治疗组在直至第5个月以及对于60单位治疗组在直至第6个月的所有时间点。在静息时，与安慰剂相比，所有肉毒杆菌神经毒素剂量水平，根据受试者评估在直至第6个月的所有时间点，根据研究者评估对于30单位和45单位治疗组在直至第4个月以及对于60单位治疗组在直至第5个月的所有时间点。使用MAS量表的GL严重程度降低的起效也显示出与本研究中受试者的治疗满意度相似的趋势。
最常见的与治疗相关的TEAE是：注射部位疼痛、头痛、眼睑下垂、注射部位肿胀、注射部位瘙痒和视力受损。与治疗相关的TEAE的发生率在45单位(33％)和60单位(36％)肉毒杆菌神经毒素剂量组中最高。本研究中眼睑下垂的发生率为3％至5％。
没有与治疗相关的SAE(研究中发生了4例不相关的SAE，并被输入到安全性数据库中)，也没有死亡。在研究期间没有导致退出的AE。研究期间报告了3例怀孕：30单位剂量组中1例怀孕，45单位剂量组中2例怀孕。
结果总汇在下表中。
Figure BDA0003496575660000261
Figure BDA0003496575660000271
Figure BDA0003496575660000281
Figure BDA0003496575660000291
Figure BDA0003496575660000301
Figure BDA0003496575660000311
Figure BDA0003496575660000321
Figure BDA0003496575660000331
Figure BDA0003496575660000341
Figure BDA0003496575660000351
Figure BDA0003496575660000361
实施例2-随机、双盲、安慰剂对照、单次治疗、剂量递增研究，以评价QM1114-DP在具有中度至重度上面部皱纹的健康男性和女性受试者中的安全性和功效
临床前研究
支持I期临床试验的临床前药理学-毒理学方案包括临床前药理学研究，为该产品用于该适应症的首次人体(FIM)给药提供概念验证。临床前方案还包括适当的毒理学研究，以支持QM1114-DP的首次人体给药的安全性。
已在小鼠后肢麻痹测定中进行了使用QM1114-DP的概念验证药理学研究，以证明该产品的肌内(IM)给药以类似于目前上市的BoNT-A产品的方式诱导局部注射部位的部分肌肉麻痹。还使用早期版本的小鼠LD50测定(评估BoNT-A效力的标准测定)和小鼠后肢测定进行了临床前药理学研究。
对QM1114-DP没有进行安全性药理学或药代动力学研究，因为使用临床研究建议的剂量对特定面部肌肉进行单次IM给药，预计不会全身暴露于该产品。此外，BoNT-A在局部注射部位的神经元突触处以高亲和力结合(Montecucco et al.，2004)。因此，产品的任何代谢和消除都将发生在局部注射部位。
对QM1114-DP进行了一般毒理学研究，包括在Wistar大鼠和比格犬中进行的实验性单次IM剂量给药毒性研究。这些是非GLP(良好实验室规范)研究，其实施目的是确定QM1114-DP的最大耐受剂量，以便为关键GLP毒理学研究设定适当的剂量水平。这些初步毒理学研究的结果清楚地表明，Wistar大鼠对QM1114-DP的毒性作用比狗更敏感，因此关键GLP毒理学研究仅在Wistar大鼠中进行。
对QM1114-DP没有进行单独的局部耐受性研究。相反，通过作为Wistar大鼠关键GLP毒理学研究的一部分，对局部注射部位的临床观察和组织病理学评价仔细评价了局部耐受性。根据这些表明产品存在耐受性问题的其他观察结果确定没有非预期数据。
临床研究
在该临床研究的实施例1(仅GL)中，(43QM1302[n＝30])评价了10、25、50和75单位的QM1114-DP的安全性和耐受性。在23名受试者中报告了共计48例不良事件(AE)，其中没有一例是严重的，并且大多数是轻度的。研究者将16名受试者中的三十二(32)例AE评估为与治疗相关。在这32例与治疗相关的AE中，大多数(17例事件)是在75单位QM1114-DP剂量水平下报告的，其中一般疾病和给药部位状况是最常报告的AE，其次是皮肤和皮下组织病症。眼部病症、一般疾病和给药部位状况以及皮肤和皮下组织病症的频率似乎与剂量有关。在10单位和25单位QM1114-DP剂量水平下，任何受试者均未报告眼部病症，例如眼疲劳；然而，50单位和75单位QM1114-DP剂量水平与眼部病症频率的适度增加有关。类似地，对于一般疾病和给药部位状况也观察到了这种趋势。除了这些趋势之外，没有任何具有临床意义的安全性发现，包括任何治疗的临床实验室值、生命体征、体格检查和心电图(ECG)参数。
功效
在本临床研究43QM1302(n＝30)的第1部分中，使用Merz 5分照片量表(Merz美观量表：MAS)，就研究者和受试者对静息和最大皱眉时眉间区域皱纹的严重程度的评估，评价了10、25、50和75单位的QM1114-DP的功效。量表对GL的严重程度使用以下等级：0(无)、1(轻度)、2(中度)、3(重度)和4(极重度)。功效分析显示，与安慰剂治疗组中的那些受试者相比，在所有剂量水平下，QM1114-DP有效降低最大皱眉时GL的严重程度，长达28天。与安慰剂治疗组相比，如研究者和受试者所评估的，静息时的GL严重程度在活性药治疗组中降低。这种效果可以维持长达28天。受试者对GL满意度的评估表明除了一名受试者外，活性药治疗组中的所有受试者直到第28天对治疗都非常满意或满意。此外，直到第28天，所有剂量水平的皱纹严重程度的降低仍然是明显的。总之，功效数据表明，与安慰剂治疗组中评价的那些受试者相比，QM1114-DP在所有剂量水平下有效降低最大皱眉时GL的严重程度。
在本实施例中公开的研究之前，尚未研究QM1114-DP在降低外眦纹的皱纹严重程度方面的功效。
研究目标
主要目标：评价每个剂量水平的QM1114-DP的安全性和耐受性。
次要目标：评估每个剂量水平的QM1114-DP对暂时改善眉间纹(GL)和外眦纹(LCL)的功效；以及评估每个剂量水平的QM1114-DP在组合治疗时暂时改善GL和LCL的功效。
研究疗效指标
安全性：AE的发生率和严重程度。
功效：
·通过使用Merz美观量表(MAS)LCL-动态的实况评估，研究者对直到第28天(第4周)的最大微笑时LCL严重程度的评级；
·通过使用MAS LCL-静息(静态)的实况评估，研究者对直到第28天(第4周)的静息时LCL严重程度的评级；
·通过使用MAS LCL-动态的实况评估，受试者对直到第28天(第4周)的最大微笑时LCL严重程度的评级；
·通过使用MAS LCL-静息(静态)的实况评估，受试者对直到第28天(第4周)的静息时LCL严重程度的评级；和
·使用4分评级量表受试者对直到第28天(第4周)的满意度的评估。
探索性的：
·通过使用MAS LCL-动态的实况评估，研究者对最大微笑时LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线或直到6个月；
·通过使用MAS LCL-静息的实况评估，研究者对静息时LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线或直到6个月；
·通过使用MAS LCL-动态的实况评估，受试者对最大微笑时LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线或直到6个月；
·通过使用MAS LCL-静息的实况评估，受试者对静息时LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线或直到6个月；和
·使用4分评级量表受试者对满意度的评估。
参与本研究探索性阶段的受试者每月回访临床药理学单位(CPU)。本实施例中不包括探索性疗效指标。
研究计划
总体研究设计和计划
本临床I期研究实施例仅涉及LCL。I期研究还包括在一个单独的部分(队列1-4)中，如先前报道的那样对GL进行递增剂量的治疗。在实施例3中单独报告了评价GL与LCL的组合的治疗的单独阶段(队列8和9)。
本研究是一项随机、双盲、安慰剂对照设计，以评价对具有中度至重度LCL的18至65岁健康男性和女性受试者施用递增剂量的A型肉毒杆菌毒素(QM1114-DP；活性药)的安全性和功效。共计24名受试者被纳入3个队列(队列5、6和7)，每个队列中有8名受试者(6名接受活性药：2名接受安慰剂)。
在签署ICF之前，每个健康受试者都收到口头(来自研究医师)和书面信息。受试者在第1天的研究治疗之前28天内进行资格筛选，并参加研究回访以进行安全性和功效评估，直到第28天(第4周)的随访。所有受试者在第-1天进入CPU，并在第1天给药前一天过夜。每个剂量水平都使用前哨组以降低对受试者的风险。因此，队列5、6和7中的前2名受试者(1名活性药受试者和1名安慰剂受试者)需要在CPU中住院更长时间。这些受试者在第-1天入住CPU，在第1天接受治疗，在第2天从CPU中出院，然后参加研究回访，直到第28天(第4周)的随访。研究包括以下回访：筛选、第-1天、第1、2、3、7、14、21和28天。
研究者和受试者在筛选、治疗前和所有治疗后回访时使用Merz量表LCL动态和静息评估LCL的外观。受试者还在所有治疗后回访时使用4分评级量表评估他们对其LCL外观的满意度(Ascher et al.，2009)。
受试者随机接受一种研究药物治疗(QM1114-DP或安慰剂)。每种治疗包括施用于面部各侧的3次等量(100μl)注射。注射位置根据个体受试者的LCL纹路型态进行调整。在所有情况下，注射点都在眼轮匝肌的外部，并且适用时，在距离眶缘约1-2cm处。
QM1114-DP的剂量水平是：
·队列5，剂量1：QM1114-DP，每个注射部位5单位(每次治疗总共30单位)；
·队列6，剂量2：QM1114-DP，每个注射部位10单位(每次治疗总共60单位)；和
·队列7，剂量3：QM1114-DP，每个注射部位15单位(每次治疗总共90单位)。
在表12中根据研究回访呈现本研究期间进行的程序和评估。临床研究包括筛选和直到第4周(随访)的回访。如果根据研究者的评估，得分(最大微笑)已回到基线，则受试者在第28天(第4周)最后一次回访CPU。此时，根据这些受试者的主要疗效指标完成研究。根据研究者的评估，在第28天(第4周)时，其皱纹严重程度得分(最大微笑)未回到基线的受试者参加了本研究的探索性阶段，并每月回访CPU，直到皱纹评分回到基线。来自这种功效探索性随访的数据将单独报告，而不是在本CSR中报告。
本研究以随机、安慰剂对照设计进行，以评估每个剂量水平的QM1114-DP的安全性和耐受性，并评估每个剂量水平的QM1114-DP对暂时改善左右外眦区域的面部皱纹的功效。选择标准被定义为使得被选择参与研究的受试者没有任何疾病。
研究人群的选择
在研究开始前28天内，受试者经历了表12中所述的全面筛选程序。
表12-研究流程图
Figure BDA0003496575660000411
Figure BDA0003496575660000421
a给药前，1小时，4小时，8小时和12小时。
b在第-1天进行简化的身体检查，自筛选后关注任何健康变化。
c重点眼睛和面部检查。
d给药之前给予便餐。住院期间的所有其他时间在标准单位时间下食用标准餐。
e所有受试者在第-1天早晨住院。队列5、6和7的前哨组中的受试者住院直到第2天。所有其他受试者在第1天离开CPU。
f在第1周允许计划回访(scheduled visit)±1天，从第2周开始允许计划回访±2天。
g如果在第4周功效得分(研究者“实况”评估，最大微笑)没有回到基线，该受试者每月在CPU参加探索性随访(follow up visits)，直到得分回到基线(根据研究者对最大微笑时的评估)。对于其评分回到基线的受试者，第4周是他们到CPU的最后一次回访。
纳入标准
为了符合纳入研究的第2部分的资格，每个受试者都满足以下每个标准：
·筛选时年龄在18至65岁(含)之间的健康男性或女性。
·先前没有接受过BoNT-A或B治疗。
·根据研究者在筛选和基线回访时使用经验证的照片量表(MAS LCL-动态)评估，在面部两侧最大微笑期间具有中度至重度(2级或3级)LCL。
·根据研究者在筛选和基线回访时使用经验证的照片量表(MAS LCL-静息)评估，面部两侧在静息时具有轻度至重度(1、2或3级)LCL。
·受试者同意使用几种可接受的避孕方法中的一种。
·能够理解并遵守方案的要求，并在进行任何研究相关程序之前签署ICF。
·根据筛选回访或入住CPU时进行的病史、身体检查或其他评价确定，没有临床上显著的疾病或异常的实验室、ECG或生命体征值。
排除标准
如果受试者符合以下任何标准，则不具备纳入本研究的资格：
·先前接受过BoNT-A或B治疗。
·LCL区域具有通过手动将皮肤铺展开来无法实质拉平的皱纹。
·先前曾在LCL纹路区域插入任何永久性或半永久性材料或进行过真皮填充物治疗。
·在基线回访前14天内LCL区域有过感染。
·目前有眼睑或眉毛下垂的病史。
·有干眼症、突出的眼袋或早晨眼睑浮肿。
·有癌变或癌前病变、活动性或慢性皮肤病、炎症或相关状况，包括眉间区域附近或眉间区域上有疤痕。
·先前接受过面部整容手术(例如，眼睑成形术、眶周手术、面部拉提、提眉、眼睑拉提或眉毛手术)。
·在本研究筛选前6个月内进行过面部激光或光治疗、微晶磨皮(microdermabrasion)或浅度剥脱(superficial peels)。
·有面神经麻痹病史。
·在研究药物施用前7天内使用过声称具有抗皱活性的局部制剂，或计划在研究期间使用此类制剂。
·受试者计划在研究期间进行面部整容手术或程序。
·在注射日之前14天内患有流感样综合征。
·目前接受或已经接受氨基糖苷类抗生素疗法、箭毒类药物、奎尼丁、琥珀胆碱、多粘菌素、抗胆碱酯酶、硫酸镁或林可酰胺类。只要不对受试者的安全性或研究数据的完整性产生负面影响，任何其他处方药或非处方药均可由研究者自行决定。
·处于怀孕或哺乳期(有生育能力的女性受试者在随机化之前的妊娠试验[血清]必须呈阴性)。
·证实表明药物滥用的尿液药物筛查呈阳性，包括：阿片类药物、巴比妥类药物、可卡因代谢物、美沙酮、苯二氮卓类、大麻素或苯丙胺。
·有酗酒或药物滥用的病史或临床证据。酗酒被定义为女性每周定期摄入超过14单位，男性每周摄入超过21单位(使用酒精追踪器nhs.uk/Tools/Pages/NHSAlcoholtracker.aspx)；药物滥用被定义为强迫性、重复性和/或长期使用药物或其他物质，无论是否出现与其使用相关的问题且/或停止或减少剂量将会导致戒断症状。
·乙型肝炎筛查呈阳性，包括HBsAG(乙型肝炎表面抗原)、抗HCV(丙型肝炎病毒抗体)和人类免疫缺陷病毒(HIV)。
·有吞咽困难、误吸或吸入性肺炎病史。
·有出血性病症史。
·有可能干扰研究结果的自身免疫性疾病病史。
·患有可能影响安全性或研究结果评估的活动性多系统疾病(activemultisystem disease)；包括但不限于具有临床意义的心血管、呼吸、肝/胆、肾、胃肠、内分泌、精神或神经系统病症。
·有重症肌无力或其他神经传递疾病病史。
·患有可能干扰受试者结果的神经肌肉病症。
·在本研究筛选前90天内接受过任何研究产品。
·每天吸烟超过10支或等量的烟草，并且在CPU中不能停止吸烟。
·有任何在主要研究者(PI)看来会损害受试者的安全性或阻止受试者完成研究的状况。
·不能可靠地与研究者沟通。
·素食者、纯素食者或有与研究标准化菜单相冲突的医疗饮食限制的受试者。
从疗法或评估中移除受试者
使用根据国家癌症研究所通用术语标准(NCI CTC，4.0版)的标准毒性分级对AE进行分级。这是因为这些是唯一可用的一套标准化综合标准，并且已被证明可用于健康志愿者的I期研究。应用当地实验室正常值。在分级之前总是重复异常的实验室和其他测试，以确保一致性并排除技术错误。在评估异常是否构成药物相关毒性时以及分级时(如果适用)，实验室参数和其他测量值的昼夜变化以及基线状态和病况(例如Gilbert综合征)总是被考虑在内。
AE的CTC(CTCAE)显示I到V级，并根据该一般指南对每例AE的严重程度进行详细的临床描述。等级定义描述如下：
I级：轻度；无症状或轻微症状；仅临床或诊断观察；未指示干预。
II级：中度；指示最小的、局部的或非侵入性的干预；有限度的适合年龄的工具性ADL*。
*工具性日常生活活动(ADL)是指准备饭菜、购买杂货或衣服、使用电话、管理金钱等。
III级：重度或有医学意义但不会立即危及生命；指示住院或延长住院时间；失能；有限制度的自我护理ADL**。
**自我护理ADL是指洗澡、穿衣和脱衣、自己吃饭、如厕、服药且未卧床不起。
IV级：危及生命的后果；指示紧急干预。
V级：与AE相关的死亡。
CTCAE标准及其解释与临床试验期间AE的标准强度分级一致：I级：轻度，II级：中度，III级：重度或具有医学意义但不会立即危及生命，可能构成严重不良事件(SAE)/疑似非预期严重不良反应(SUSAR)。IV级和V级构成SAE/SUSAR。
如果某些不良事件发生且与IMP存在合理可能的因果关系，则该研究将停止。
受试者的退出
根据赫尔辛基宣言，受试者可以随时退出，但一旦进行了治疗或给药，将尽一切努力继续评估以确保受试者的安全。受试者退出的具体原因是：
·受试者自愿中止，受试者可以随时自由地中止他或她对研究的参与。
·被研究者和/或主办方判断为重度不依从或严重偏离方案。
·不正确的纳入，即事后看来，受试者在纳入时不满足研究所需的资格标准。
·PI判断的其他原因。
受试者可以在任何时间自由地退出研究，不影响其权益(撤回同意)。此类受试者总是被询问原因和是否存在任何AE。如果可能，在给药后且在完成第4周回访之前退出研究的受试者由PI或代表当面查看，并接受为随访安排的评估和程序。如果已经确定了是因与研究无关的原因，则应尽可能追踪AE直至消退、回到基线或稳定。
更换受试者
每个队列必须由计划的受试者人数完成，以评估给定剂量的QM1114-DP或安慰剂(治疗后7天)的安全性和耐受性。如果完成的受试者数量少于给定队列的最低要求，为了做出剂量递增的决定，主办方和PI可以决定更换这些受试者，并在下一次剂量递增之前对这些受试者进行相应的治疗和评估。
治疗
施用的治疗
受试者接受施用于LCL区域的30单位、60单位或90单位的QM1114-DP或等体积(100μl)安慰剂中的一种治疗。每种治疗包括三次注射(每个注射部位注射一次)。注射的位置根据个体受试者的LCL纹路型态进行调整。取决于个体受试者的纹路型态，如果LCL区域中的皱纹位于外眦上方和下方，则如图12A中所述施用注射。或者，如果个体受试者的LCL中的皱纹主要位于外眦下方，则如图12B中所述施用注射。在所有情况下，注射点都在眼轮匝肌(orbicularis oculi)的外部，并且适用时，在距离眶缘约1-2cm处。
将受试者分配至治疗组
受试者签署研究知情同意书并随后接受筛选程序，在此期间以其独特的RPL ID编号(来自RPL志愿者数据库的标识号)和筛选编号来识别。
在第1天早上给药前为符合资格标准的受试者分配受试者编号。受试者编号从201到208(队列5)、221到228(队列6)和241到248(队列7)。受试者编号按连续顺序分配，并对应于计算机生成的随机列表上的编号，该编号决定了治疗顺序。如果受试者中止研究，则该受试者编号不再使用并且该受试者不允许重新进入研究。
剂量选择
任何首次进入临床研究的新BoNT-A产品必须使用可用于相同血清型和来源的现有产品的临床知识来确定FIM方法。
LCL适应症的起始剂量为每次注射5单位(共计30单位)，随后剂量递增(在SRC决定后)至每次注射10单位(共计60单位)，然后每次注射15单位(共计90单位)。研究中用于治疗LCL的最大剂量是基于先前的研究的，这些研究考查了将15、30和45单位的BoNT施用于各侧以治疗LCL(共计施用30、60和90单位)。所有研究剂量的治疗引起的AE的发生率相似。
剂量的选择和施用时机
在本研究中，受试者在研究第1天的早上接受了30、60或90单位的QM1114-DP或安慰剂治疗一次。
研究程序
对于筛选、研究天数和随访，请参阅表12。
获得的所有研究测量值如下所述。
如果基于对个体受试者的安全性数据的审查存在任何安全性问题，则可以采集额外的生命体征、ECG记录和/或实验室安全性样品。研究期间抽取的血液总量不应超过每位受试者300ml。
生命体征
血压、心率、鼓室温度和呼吸频率
使用具有合适袖带尺寸(cuff size)的半自动BP记录装置(Critikon
Figure BDA0003496575660000471
监测器)测量仰卧血压(BP)和心率(HR)。对于呼吸频率测量，受试者需要在呼吸频率测量之前以仰卧姿势静息至少10分钟。有关个体测量的时机，请参阅研究流程图(表12)。根据对安全性和耐受性数据的持续审查，研究期间进行的所有测量的时机可能发生变化。在研究流程图(表12)中指示的时间使用自动温度计测量(单次测量)体温(鼓室温度)，用摄氏度表示。PI或代表可能会出于安全性考虑进行额外的温度评估。
ECG测量
使用通过固定网络连接到
Figure BDA0003496575660000473
心脏病信息系统(MUSE)的GE Marquette
Figure BDA0003496575660000472
记录仪记录一式三份的12导联ECG。研究期间记录的所有ECG都以电子方式存储在MUSE信息系统中。只有以电子方式记录的ECG才是用于安全性评估以外的任何目的的有效ECG。ECG打印输出已存档在受试者的CRF中以进行医疗安全性审查。
如果可能，对任何一个受试者都使用相同的记录器。每个ECG记录器都按照所需的技术规范进行设置，并包含识别记录所需的信息。每个ECG记录都被清楚地识别(受试者ID、相对于剂量的预定时间和ECG记录的实际时间)。
在受试者在仰卧位静息至少10分钟后，在研究流程图(表12)中指示的时间点进行12导联ECG记录。受试者在ECG记录期间避免姿势变化，临床工作人员确保受试者在ECG记录期间保持清醒。
所有记录的ECG都被研究医师持续审查，审查记录在CRF中。如果受试者在任何阶段显示异常ECG，将进行额外的安全性记录(包括使用5或12导联动态心电图(Holter)设备)，并在需要时追踪异常直到消退。
根据对安全性和耐受性数据的持续审查，研究期间进行的所有测量的时机可能发生变化。
临床实验室安全性测量
临床实验室安全性参数列于下表13中。
表13-临床实验室安全性参数
Figure BDA0003496575660000481
Figure BDA0003496575660000491
*如果认为有必要，基于具有临床意义的阳性尿分析试验，由The DoctorsLaboratory(TDL)进行沉积物和/或培养物的显微镜检查。
a在筛选和入院时进行血清β-HCG(β-人绒毛膜促性腺激素)。
血液学和生物化学
在研究流程图(表12)中给出的时间采集用于测定血液学和生化参数的血样。收集的日期和时间记录在适当的CRF上。使用常规方法，在TDL进行分析。将用于测定标准血液学参数的血样收集在4ml K3 EDTA管中，并将用于测定标准生化参数的血样收集在5ml血清分离管(SST)中。
被怀疑具有任何临床意义的超出参考限值的实验室值将被重复。在重复采样中被证实有可疑临床意义的受试者不被包括在研究中，或者如果已经包括在内，可能已经退出研究的进一步参与和/或被随访直到正常化，或者只要研究者或代表认为有必要。
血清学
如研究流程图(表12)中详述的那样进行血清学检查。在筛选回访时，对所有受试者测试表13中列出的参数。这样做是为了研究人员的安全，并且测试结果不输入到研究数据库中。如果发现受试者对这些测试中的任何一项呈阳性，则他或她将被转诊进行进一步检查和治疗，并且不被包括在研究中。在用于临床化学的相同血样(收集在5ml SST管中)中分析血清学测试。通过TDL分析样品。
β-HCG
为排除妊娠，如表12中所述进行血清β-HCG血样，并在怀疑妊娠时进行。任何妊娠试验呈阳性的受试者将被排除或退出研究。
尿分析
在研究流程图(表12)中给出的时间采集用于测定尿分析参数的尿液样本。通过RPL使用试纸法对表13中描述的参数进行尿分析。如果认为有必要，基于具有临床意义的阳性测试，由TDL对沉积物和/或培养物进行显微镜检查。
滥用药物
在表12中描述的时间在RPL就滥用药物测试尿液。如果受试者未通过药物滥用筛查，他/她将被排除在研究之外。只有在方法学原因被认为导致假阳性的情况下才进行重复药物筛查。除非上述条件涵盖，否则临界阳性结果将被视为阳性并且受试者被排除在研究之外。如果发现受试者由于药物而呈阳性，例如流感/感冒药，如果受试者仍在筛选窗口内，则进行重复药物筛查。测试结果不输入到数据库中。
酒精呼气测试
使用酒精检测仪进行酒精呼气测试(时间点参见研究流程图表12)。该测试的结果不输入到临床研究数据库中。如果受试者的酒精呼气测试呈阳性，他们就会被排除在研究之外。
身体检查、身高和体重
个体检查的时机在研究流程图(表12)中示出。在筛选和随访(第28天)时进行的身体检查包括对以下各项的全面身体检查：一般外观、皮肤、头部、颈部、淋巴结、甲状腺、腹部、肌肉骨骼、心血管、呼吸和神经系统。
在第-1天进行的身体检查是一个简短的检查，主要针对筛选后的任何变化。
身高用厘米表示，体重用千克表示。对于所有测量，使用校准度量器在受试者穿着轻便衣服且不穿鞋的情况下进行。根据身高和体重计算体重指数(BMI)。
重点身体检查
使用标准化评分系统对眼睛和面部进行重点身体检查(时间点见表12)以监测局部发热、瘙痒、疼痛、水肿/硬结、红斑和瘀伤。评分系统如下：
·微小的变化；或
·中度变化。
功效评估
在研究流程图(表12)中指定的时间点进行功效评估。
研究者和受试者对皱纹严重程度的评估
在每次回访时，研究者和受试者独立地评价受试者“静息时”和“最大微笑时”的皱纹的严重程度。研究者根据以下等级使用动态和静息MAS LCL评估皱纹(使用高分辨率照片作为量表分级指南)：
表14
等级 LCL的严重程度
0 无
1 轻度
2 中度
3 重度
4 极重度
受试者的满意度评估
在每次治疗后回访时，受试者使用如下4分评级量表评估他/她对治疗的满意程度：
表15
等级 受试者满意度
0 非常满意
1 满意
2 不满意
3 非常不满意
摄影
在研究流程图(表12)中指定的时间点拍摄标准化的数码照片。这些照片仅用于说明IMP的效果，不用于评估功效。指示受试者在到达诊所之前或在诊所时在任何摄影之前除去任何化妆品。
拍摄了以下照片：
·静息时(没有微笑)的全脸；和
·LCL区域的照片(一张在最大微笑时，一张在静息时)。
样品收集
临床免疫原性测定：后面将开发用于测量QM1114-DP中和抗体的测定法。在研究流程图(表12)中指定的时间点收集血样，以便在测定法可用时测量抗体。
不良事件
AE、药物不良反应(ADR)、SAE和疑似非预期严重不良反应(SUSAR)的定义在下文给出。最重要的是，所有参与临床研究实施的工作人员都熟悉本节的内容。
定义：
不良事件(AE)-AE是在暴露于药物产品之后或期间出现不良医学状况或先前存在的医学状况恶化，无论是否被认为与该产品有因果关系。不良医学状况可以是症状(例如恶心、胸痛)、体征(例如心动过速、肝脏肿大)或检查的异常结果(例如实验室发现、ECG)。在临床研究中，AE可以包括从签署知情同意书之日起直到他们参与研究结束的任何时间发生的不良医学状况，即受试者已经停止或完成了研究(第28天)。
AE的因果关系(即它们与研究治疗的关系)由研究者评估，他们在填写相关病例报告表时必须对以下问题回答“是”或“否”，“您是否认为该事件有合理的可能性是由以下任何一种引起的-研究药物-其他药物？”。
请注意，还应报告可能与任何研究程序相关的SAE。
药物不良反应(ADR)-ADR是与IMP存在因果关系的任何AE，至少是合理的可能性。
严重不良事件(SAE)-SAE是在任何研究阶段(即，导入、治疗、洗脱和/或随访)期间和任何剂量的IMP或安慰剂下发生的AE，其满足以下一项或多项标准：
·导致死亡。
·危及生命。
·需要患者住院或延长现有住院时间。
·导致持续或显著的失能或无能力。
·先天性异常或出生缺陷。
·可能危及受试者或可能需要医疗干预以防止上面所列结果之一的重要医疗事件。
以与非严重AE相同的方式评估SAE的因果关系(即它们与研究治疗的关系)。请注意，还应报告可能与任何研究程序相关的SAE。
疑似非预期严重不良反应(SUSAR)-SUSAR是与IMP至少可能存在因果关系但未在研究者手册和/或产品特性概述中列出的任何SAE。
测量的适当性
本研究中使用的所有功效和安全性测量都是标准的、广泛使用的并且被认为是可靠和准确的。
功效数据分析
使用经验证的5分MAS和受试者满意度评估的评级量表评价功效。功效数据分别使用时间点和治疗组在静息和最大微笑时的描述性统计(n、平均值、SD、最小值、中位值和最大值)进行总汇。
使用重复测量模型(混合模型)分别评价在研究者和受试者对静息和最大皱眉/微笑时的皱纹严重程度的评估中相对于基线的变化。使用SAS PROC MIXED进行分析。混合模型包括作为固定效应的治疗、时间、治疗和时间相互作用，以及作为协变量的基线测量值。时间用作模型中的重复效应，并且受试者识别出相关数据组。基线定义为第-1天。
基于混合模型，给出了每个剂量组在不同天数的最小二乘均值，以及不同剂量在不同天数之间的差异以及95％的置信区间。
每队列n＝8名受试者的样本量被认为足以确定单剂量QM1114-DP用于暂时改善健康男性和女性受试者LCL区域的面部皱纹的安全性和耐受性。
研究受试者
对于这项研究，24名健康受试者(6名男性和18名女性)根据CSP随机分配和给药。所有人都完成了研究，并进行了安全性和功效分析。
人口统计学参数的描述性统计在下表16中给出。二十三(23)名受试者是白种人，一名是非洲黑人，每个队列的平均年龄在42.2至51.0岁(含)之间。十八(18)名受试者为女性，6名受试者为男性。所有受试者的平均体重介于66.8-71.7kg之间，BMI平均值介于24.0-26.4kg/m2之间。在研究开始时，受试者的病史或手术史中没有现有的有临床意义的发现。研究期间个体受试者的身体检查也没有值得注意的发现。
表16
Figure BDA0003496575660000541
功效评价
功效分析集由接受单剂量QM1114-DP或安慰剂且存在给药后功效数据的所有受试者(24名受试者)组成。
本研究的目标之一是评估QM1114-DP在每个剂量水平对暂时改善外眦区域面部皱纹的功效。图13和图14显示了治疗组中研究者和受试者评估的在静息和最大微笑时随时间的左眦和右眦区域的平均皱纹得分。表17至表20中给出了研究者和受试者对静息和最大微笑时皱纹严重程度的评价的剂量组建模统计。使用经验证的MAS进行研究者和受试者对皱纹严重程度的评估来评价功效。量表对严重程度使用以下等级：0(无)、1(轻度)、2(中度)、3(重度)和4(极重度)。
静息时皱纹的严重程度
功效数据显示，在施用QM1114-DP后，与安慰剂治疗组相比，如研究者和受试者所评估的，活性药治疗组中静息时LCL的严重程度降低(图13和图14)。对于用于LCL的30和60单位QM1114-DP剂量水平，从第2天起，皱纹严重程度的变化就很明显了。
对于90单位QM1114-DP剂量水平，在第3天至第7天之间皱纹严重程度开始降低。研究者对皱纹严重程度的评估表明，对于该剂量水平，在第21天至第28天之间达到了静息时的最大效果。在第21天达到最大效果，该效果保持直到第28天。对于受试者对皱纹严重程度的评估，更快达到最大效果。左侧LCL区域的皱纹严重程度可见这一点。受试者对左侧区域皱纹严重程度的评估表明，对于30和90单位QM1114-DP剂量水平，在第14天达到最大效果(根据MAS，平均得分为0.7[30单位QM1114-DP]和1.0[90单位QM1114-DP])。对于60单位QM1114-DP剂量水平，在第7天达到最大效果(根据MAS，平均得分为0.5)，并且该效果保持直到第28天。到第28天，30单位QM1114-DP治疗组中的受试者根据MAS的平均得分为0.7，而60单位QM1114-DP治疗组中的受试者根据MAS的平均得分在0.2-0.8之间。到第28天，90单位QM1114-DP治疗组中的受试者的平均MAS值在0.8-1.0之间。
最大微笑时的皱纹严重程度
对于研究者和受试者对最大微笑时LCL严重程度的评估，也观察到类似的下降趋势(图13和图14)。在最大微笑时，研究者在活性药治疗组中评估的LCL的严重程度从第2天开始下降(图13)。采用受试者对皱纹严重程度的评估也观察到类似的模式(图14)。对于30单位QM1114-DP剂量水平，在第14天达到研究者评估的最大效果(根据MAS，平均得分为1.0)。对于60单位QM1114-DP剂量水平，在第7天达到最大效果(根据MAS，平均得分为0.7[左侧LCL]和0.8[右侧LCL])，直到第28天仍有一些效果(根据MAS，平均得分为1.0[左侧LCL]和0.8[右侧LCL])。对于90单位QM1114-DP剂量水平，在第7天(根据MAS，平均得分为1.3[左侧LCL])和第21天(根据MAS，平均得分为1.2[右侧LCL])达到最大效果。对于受试者对皱纹严重程度的评估也观察到这种趋势，除了所有受试者在第28天达到最大效果(根据MAS，平均得分在0.7-1.5之间)之外。到第28天，30单位QM1114-DP治疗组中的受试者根据MAS的平均得分为1.0，而60单位QM1114-DP治疗组中的受试者根据MAS的平均得分在0.7-1.0之间。到第28天，90单位QM1114-DP治疗组中的受试者的平均MAS得分值在1.2-1.5之间。
受试者的满意度评估
在每次治疗后回访时，受试者使用四分评级量表评估他/她对治疗的满意程度。该量表使用以下满意度等级：0(非常满意)、1(满意)、2(不满意)和3(非常不满意)。
受试者对满意度的评估表明，除了30单位QM1114-DP治疗组中的一个受试者(受试者208，在第2天)不满意以及90单位治疗组中的一名受试者(受试者246，在第7天和第14天)对治疗非常不满意之外，30、60和90单位QM1114-DP治疗组中的所有受试者从第2天至第28天对治疗都非常满意或满意。在安慰剂治疗组中，从第2天至第28天，每次研究回访时，2至3名受试者对治疗非常不满意或不满意。在第2天、第3天和第21天观察到对安慰剂治疗非常不满意或不满意的受试者比例最高(50％)。
混合模型分析
使用重复测量模型(混合模型)分别评价在研究者和受试者对静息和最大微笑时皱纹严重程度量表的评估中相对于基线的变化。研究者对皱纹严重程度的评价(不同天数不同剂量之间的差异)列于表17-18中(静息时和最大微笑时)。受试者对皱纹严重程度的评价(不同天数不同剂量之间的差异)列于表19-20中(静息时和最大微笑时)。本节中分析和呈现的变量分别是在研究者和受试者对静息和最大微笑时的皱纹严重程度的评估中相对于基线的变化。
研究者对最大微笑时左侧和右侧外眦区域皱纹的评价显示，从第3天到第28天，当与安慰剂治疗组的得分相比时，30、60和90单位QM1114-DP治疗组的平均MAS评分相对于基线的变化显示出统计学上显著性差异(P≤0.05)(表17)。对于受试者对最大微笑时面部左侧和右侧皱纹的评价(表19)，从第3天或第1周到第28天，对于30和60单位QM1114-DP治疗组，报告了相比于安慰剂的统计学显著性差异(P≤0.05)。相比之下，当将90单位QM1114-DP治疗组与安慰剂治疗组对于左侧LCL的得分进行比较时，没有报告具有统计学显著性的得分。然而，对于右侧LCL，当将90单位QM1114-DP治疗组与安慰剂进行比较时，在第28天报告了统计学显著性结果(P＝0.012)。
研究者对静息时外眦区域皱纹的评价显示，30单位QM1114-DP治疗组第1周至第4周(第28天)的LCL(左侧和右侧)得分当与安慰剂治疗组的得分相比时显示出统计学显著性(P≤0.05)。除了第28天(左侧LCL)，60单位QM1114-DP治疗组也报告了从第1周至第4周的类似结果。对于最大剂量水平(90单位QM1114-DP治疗组)，与安慰剂得分相比，从第3天(右侧LCL)或第1周(左侧LCL)至第4周的得分也具有统计学差异(P≤0.05)(表18)。
对于受试者对静息时皱纹的评价，对于右侧上的LCL，当与安慰剂组的得分相比时，30单位和60单位QM1114-DP治疗组从第3天到第28天的得分具有统计学显著性(P≤0.05)(表20B)。对于左侧上的LCL，当与安慰剂组的得分相比时，除了第3天(60单位QM1114-DP治疗组)和第1周(30单位QM1114-DP治疗组)之外，30单位和60单位QM1114-DP治疗组从第3天到第28天的得分也具有统计学显著性(表20A)。对于90单位QM1114-DP治疗组，结果有所变化。对于面部右侧上的LCL，从第14天到第28天观察到皱纹严重程度的统计学显著性得分(表20B)。相比之下，对于左侧LCL，仅在第14天和第28天观察到与安慰剂相比具有统计学显著性的得分。
表17-皱纹的严重程度：研究者对最大微笑时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，LCL适应症[左]；B，LCL适应症[右])
A：适应症：LCL(左)，最大微笑，研究者评价
Figure BDA0003496575660000571
Figure BDA0003496575660000581
B：适应症：LCL(右)，最大微笑，研究者评价
Figure BDA0003496575660000582
表18-皱纹的严重程度：研究者对静息时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，LCL适应症[左]；B，LCL适应症[右])
A：适应症：LCL(左)，静息，研究者评价
Figure BDA0003496575660000583
Figure BDA0003496575660000591
B：适应症：LCL(右)，静息，研究者评价
Figure BDA0003496575660000592
Figure BDA0003496575660000601
表19-皱纹的严重程度：受试者对最大微笑时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，LCL适应症[左]；B，LCL适应症[右])
A：适应症：LCL(左)，最大微笑，受试者评价
Figure BDA0003496575660000602
B：适应症：LCL(右)，最大微笑，受试者评价
Figure BDA0003496575660000603
Figure BDA0003496575660000611
表20-皱纹的严重程度：受试者对静息时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，LCL适应症[左]；B，LCL适应症[右])
A：适应症：LCL(左)，静息，受试者评价
Figure BDA0003496575660000612
Figure BDA0003496575660000621
B：适应症：LCL(右)，静息，受试者评价
Figure BDA0003496575660000622
功效结论
除了受试者的LCL评估(90单位QM1114-DP治疗组)外，根据研究者和受试者对最大微笑时LCL的评估所测量的功效结果清楚地表明，对照于安慰剂治疗组中进行评价的那些受试者，QM1114-DP有效降低最大微笑时LCL的严重程度。皱纹严重程度的降低保持直到随访(第28天)。类似地，根据研究者和受试者的评估，在静息时，活性药治疗组中LCL严重程度的降低大于安慰剂治疗组，但有一些例外。受试者对LCL满意度的评估表明，除两名受试者外，活性药治疗组中的所有受试者直到第28天对治疗都非常满意或满意。在安慰剂治疗组中，最多50％的受试者对治疗不满意或非常不满意。
安全性评价
安全性分析包括24名受试者全部接受单剂量随机研究药物。
六名受试者接受了30单位的QM1114-DP，六名受试者接受了60单位的QM1114-DP，六名受试者接受了最大剂量90单位。六名受试者接受了安慰剂治疗。出于AE分析的目的，本节主要涉及治疗中出现的那些AE，即在服用IMP后开始，以及ADR，即与IMP存在至少合理可能的因果关系。研究期间没有报告SAE，没有SUSAR，也没有受试者因安全原因退出研究。
表21中给出了治疗组的AE概览。针对每个剂量水平报告了AE。在24名受试者中的18名(75.0％)中报告了四十四(44)例AE，其中24名受试者中的15名(62.5％)中的31例AE被研究者判断为可能或很可能与治疗相关。对于30单位的QM1114-DP，6名受试者中的5名报告了十四(14)例AE，对于60单位的QM1114-DP，6名受试者中的5名报告了9例AE，在最大剂量水平(90单位QM1114-DP)下，6名受试者中的3名(50.0％)报告了14例AE。对于安慰剂治疗组，6名受试者中有5名报告了7例AE。表22中给出了按SOC分配和PT分类的AE概览。表23中列出了按SOC分配和PT分类的相关AE。
表21-AE概览
Figure BDA0003496575660000631
Figure BDA0003496575660000641
E＝事件数量；N＝受试者数量
表22-根据系统器官类别、优选术语和治疗分类的具有AE的受试者的概览
Figure BDA0003496575660000642
Figure BDA0003496575660000651
仅概括了治疗中出现的AE。
*根据受试者SOC的多次出现按每个SOC计数一次。
**根据受试者PT的多次出现按每个PT计数一次。
表23-根据系统器官类别、优选术语和治疗分类的具有相关AE的受试者的概览
Figure BDA0003496575660000652
Figure BDA0003496575660000661
仅概括了治疗中出现的AE；*根据受试者SOC的多次出现按每个SOC计数一次；**根据受试者PT的多次出现按每个PT计数一次。
安全性结论
总体而言，治疗组中最常报告的AE是神经系统病症和一般疾病以及给药部位状况。这同样适用于治疗相关的AE。受试者中最频繁的神经系统病症是头痛，有五名受试者报告，最频繁的一般疾病和给药部位状况是注射部位红斑和压力感。
本I期研究的主要目标是确定每个剂量水平的QM1114-DP在健康男性和女性受试者中用于治疗眉间和外眦区域皱纹的安全性和耐受性。在涉及LCL的这部分研究中，没有出现SAE，也没有因AE或任何其他原因而发生的退出。24名受试者中的18名(75.0％)报告了四十四(44)例AE，其中15名(62.5％)受试者的31例AE被研究者判断为可能或很可能与治疗相关。所有其他AE被研究者判断为与治疗无关。除了一例中等强度的AE(头痛，90单位QM1114-DP治疗组)外，所有其他AE均为轻度。在每个剂量水平下报告AE，其中在最大(90单位)和最低(30单位)剂量水平下报告的数量最高。安慰剂治疗组报告的AE数量最少(7例AE)。
治疗组中最常报告的SOC AE是神经系统病症和一般疾病以及给药部位状况。这也适用于治疗相关的AE。受试者中最频繁的神经系统病症是的头痛，有七名受试者报告，最频繁的一般疾病和给药部位状况是注射部位红斑和压力感。60单位QM1114-DP治疗组未报告神经系统病症。
研究期间血液学、生物化学和尿分析参数没有具有临床意义的变化，也没有具有临床意义的身体检查结果。生命体征和ECG记录偏离正常范围的个例被研究者认为没有临床意义并且与研究药物无关。
讨论和总体结论
本I期研究的主要目标是评价每个剂量水平的QM1114-DP的安全性和耐受性，次要目标是评估每个剂量水平的QM1114-DP用于暂时改善健康男性和女性受试者的眉间和外眦区域的面部皱纹的功效。
在个体受试者中，最常报告的AE是神经系统病症。这也与治疗相关的AE相关。被研究者认为是与治疗相关的个体最常发生的AE是总共在7名受试者中报告的头痛(8例治疗相关的AE)。这与第1部分(仅GL)中观察到的结果相当，在第1部分中总共有六名受试者报告了六例治疗相关的头痛。除了一例中等强度的AE(头痛)外，所有AE均为轻度，没有SAE或因AE而发生的任何退出。研究期间血液学、生物化学和尿分析参数没有具有临床意义的变化。而且，没有具有临床意义的身体检查发现。受试者的生命体征在参考范围内，并且在研究期间进行的ECG记录中没有观察到具有临床意义的发现。
总之，大多数治疗相关的AE与神经系统病症和一般疾病以及给药部位状况有关。根据参考安全性信息，这些治疗相关的AE在预期范围内，并且与以前使用其他BoNT-A产品的临床研究观察到的AE一致。
本研究中的功效数据显示，与安慰剂治疗组中评价的那些受试者相比，QM1114-DP在所有剂量水平下都有效降低最大微笑时LCL的严重程度。用于研究者评价最大微笑时左侧和右侧外眦区域皱纹的混合模型分析显示，当与安慰剂治疗组的得分相比时，从第3天到第28天，30、60和90单位QM1114-DP治疗组中的平均MAS得分相比于基线的变化显示出统计学显著性差异(P≤0.05)。对于受试者对最大微笑时面部左侧和右侧皱纹的评价，从第3天或第1周到第28天，30和60单位QM1114-DP治疗组报告相比于安慰剂的统计学显著性差异(P≤0.05)。相比之下，对于左侧LCL，当将90单位QM1114-DP治疗组与安慰剂治疗组的得分进行比较时，没有报告具有统计学显著性的得分。受试者对LCL满意度的评估表明，除两名受试者外，活性药治疗组中的所有受试者对治疗直到第28天都非常满意或满意。
在安慰剂治疗组中，最多50％的受试者对治疗不满意或非常不满意。
总之，数据表明，与安慰剂治疗组中的那些受试者相比，QM1114-DP有效降低最大微笑时LCL的严重程度。
总体结论：
·所有剂量都是安全且耐受性良好的。
·本研究中没有SAE。
·没有受试者因AE或任何其他原因退出。
·除了一例中等强度的AE之外，所有AE都是轻度的。
·临床实验室测试、身体检查、生命体征和12导联ECG参数没有具有临床意义的变化。
·根据研究者和受试者的评估，与安慰剂治疗组相比，在活性药治疗组中，静息时，LCL的严重程度从第7天开始降低。这种效果保持多达28天。
·除了受试者对最大微笑时LCL的评估(90单位QM1114-DP治疗组)，与安慰剂治疗组相比，根据研究者和受试者的评估，在活性药治疗组中LCL的严重程度降低。这种效果保持长达28天。
·受试者对LCL满意度的评估表明，活性药治疗组中的大多数受试者对治疗直到第28天都非常满意或满意。
实施例3-随机、双盲、安慰剂对照、单一治疗、剂量递增研究，以评价QM1114-DP在具有中度至重度上面部皱纹的健康男性和女性受试者中的安全性和功效
临床前研究
除了上面实施例2中讨论的临床前研究之外，还对QM1114-DP进行了一般毒理学研究，包括在Wistar大鼠和比格犬中进行的初步单次IM给药毒性研究。这些是非GLP(良好实验室规范)研究，其实施目的是确定QM1114-DP的最大耐受剂量，以便为关键的GLP毒理学研究设定适当的剂量水平。这些初步毒理学研究的结果清楚地表明，Wistar大鼠对QM1114-DP的毒性作用比犬更敏感，因此关键GLP毒理学研究仅在Wistar大鼠中进行。
对QM1114-DP没有进行单独的局部耐受性研究。相反，通过作为Wistar大鼠关键GLP毒理学研究的一部分，对局部注射部位的临床观察和组织病理学评价仔细评价了局部耐受性。根据这些表明产品存在耐受性问题的其他观察结果确定没有非预期数据。
临床研究
在实施例1和2中，受试者接受QM1114-DP以治疗眉间或外眦区域的中度至重度皱纹。
实施例1-眉间纹
实施例1(仅GL)用于评价对具有中度至重度GL的18至65岁健康男性和女性受试者施用10、25、50和75单位的QM1114-DP的安全性和耐受性。四名受试者接受了10单位，六名受试者接受了25单位，六名受试者接受了50单位，六名受试者接受了最大剂量75单位的QM1114-DP。八(8)名受试者接受安慰剂治疗。在23名受试者中共计报告了48例不良事件(AE)。
在接受QM1114-DP的17名受试者中报告了三十八(38)例AE，在接受安慰剂治疗的6名受试者中报告了10例AE，其中没有一例是严重的，并且大多数都为轻度。1例AE被评为重度强度(呕吐[受试者144，50单位QM1114-DP治疗组])，2例被评为中等强度(受试者126[25单位QM1114-DP治疗组]和受试者146[50单位QM1114-DP治疗组]在注射后立即发生血管迷走反应[先兆晕厥])。
在32例治疗相关的AE中，大多数(17)是在75单位QM1114-DP剂量水平下报告的，其中注射部位反应，即红斑、水肿、刺激、皮疹、瘙痒、疼痛、不适、刺痛和瘀伤是最常见的。研究者认为是与治疗相关的个体最常发生的AE是头痛(六例治疗相关AE)，其中一例发生在最大剂量下。
在研究期间，临床实验室安全性测试、身体检查、生命体征和12导联心电图(ECG)参数也没有具有临床意义的变化。
实施例2-外眦纹
在研究43QM1302的第二部分(仅LCL)中，将30、60或90单位的QM1114-DP施用于具有中度至重度LCL的18至65岁健康男性和女性受试者。六名受试者接受了30单位，六名受试者接受了60单位，6名受试者接受了最大剂量90单位的QM1114-DP。六(6)名受试者接受安慰剂治疗。在本研究中，18名受试者共报告了44例AE。
接受QM1114-DP的13名受试者报告了三十七(37)例AE，接受安慰剂治疗的5名受试者报告了7例AE，没有一例是严重的，除了一例AE为中等强度(头痛，受试者246，90单位QM1114-DP治疗组)；所有AE均为轻度。
在31例治疗相关的AE中，治疗组中最常报告的AE是神经系统病症以及一般疾病和给药部位状况。受试者中最频繁的神经系统病症是头痛，有七名受试者报告，最频繁的一般疾病和给药部位状况是注射部位红斑和压力感。
除了这些趋势之外，对于任何治疗，没有具有临床意义的安全性发现，包括临床实验室安全性值、生命体征、身体检查和ECG参数。
功效
在研究43QM1302(实施例1和2)中评估了QM1114-DP用于治疗健康男性和女性受试者的GL(n＝22)和LCL(n＝18)的功效。使用经验证的Merz5分照片量表(Merz美观量表：MAS)进行研究者和受试者对静息和最大皱眉/微笑时皱纹严重程度的评估，来评价功效。这些结果表明，与安慰剂治疗组的受试者进行比较，肌肉注射高达75单位(GL适应症)或高达90单位(LCL适应症)的QM1114-DP有效降低最大皱眉(GL适应症)或最大微笑(LCL适应症)时的GL或LCL严重程度。此外，受试者对GL或LCL满意度的评估表明QM1114-DP治疗组中的所有受试者对治疗直到第28天都非常满意或满意。
总之，来自实施例1和2的功效数据证明，与在安慰剂治疗组中评价的那些受试者相比，QM1114-DP在所有剂量水平下都有效降低最大皱眉时的GL严重程度和最大微笑时的LCL严重程度。
研究目标
主要目标：评价每个剂量水平的QM1114-DP在组合治疗时用于暂时改善眉间纹(GL)和外眦纹(LCL)的安全性和耐受性。
次要目标：评估每个剂量水平的QM1114-DP对暂时改善GL和LCL的功效；以及评估每个剂量水平的QM1114-DP在组合治疗时暂时改善GL和LCL的功效。
研究疗效指标
安全性：AE的发生率和严重程度。
功效：
·通过使用MAS GL-动态和LCL-动态的实况评估，研究者对直到第28天(第4周)的最大皱眉时GL严重程度和最大微笑时LCL严重程度的评级；
·通过使用MAS GL-静息和LCL-静息(静态)的实况评估，研究者对直到第28天(第4周)的静息时GL和LCL严重程度的评级；
·通过使用MAS GL-动态和LCL-动态的实况评估，受试者对直到第28天(第4周)的最大皱眉时GL严重程度和最大微笑时LCL严重程度的评级；和
·通过使用MAS GL-静息和LCL-静息(静态)的实况评估，受试者对直到第28天(第4周)的静息时GL和LCL严重程度的评级·使用4分评级量表受试者对直到第28天(第4周)的满意度的评估。
探索性：
·通过使用MAS GL-动态和LCL-动态的实况评估，研究者对最大皱眉时GL严重程度和最大微笑时LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线；
·通过使用MAS GL-静息和LCL-静息的实况评估，研究者对静息时GL和LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线；·通过使用MAS GL-动态和LCL-动态的实况评估，受试者对最大皱眉时GL严重程度和最大微笑时LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线；
·通过使用MAS GL-静息和LCL-静息的实况评估，受试者对静息时GL和LCL严重程度的评级，直到皱纹评分回到基线；和
·使用4分评级量表受试者对满意度的评估。
参与本研究探索性阶段的受试者每月回访临床药理学单位(CPU)。本CSR中不包括探索疗效指标。
研究计划
本实施例详细评估了当组合治疗时，QM1114-DP用于暂时改善LCL和GL的安全性和有效性。该研究还包括单独的部分：队列1-4(实施例1[GL])和队列5-7(实施例2[LCL])，如上文以前报道的GL和LCL剂量递增治疗。
该研究是一项随机、双盲、安慰剂对照设计，以评价对具有中度至重度GL和LCL的18至65岁健康男性和女性受试者施用递增剂量的A型肉毒杆菌毒素(QM1114-DP；活性药)的安全性和功效。共计16名受试者被纳入2个队列(队列8和9)，每个队列中有8名受试者(6名接受活性药：2名接受安慰剂)。
在签署ICF之前，每个健康受试者都收到口头(来自研究医师)和书面信息。受试者在第1天的研究治疗之前28天内进行资格筛选，并参加研究回访以进行安全性和功效评估，直到第28天(第4周)的随访。所有受试者在第-1天进入CPU，并在第1天给药前一天过夜。每个剂量水平都使用前哨组以降低受试者的风险降。因此，队列8和9中的前2名受试者(1名活性药受试者和1名安慰剂受试者)需要在CPU中住院更长时间。这些受试者在第-1天入住CPU，在第1天接受治疗，在第2天从CPU中出院，然后参加研究回访，直到第28天(第4周)的随访。研究包括以下回访：筛选、第-1天、第1、2、3、7、14、21和28天。
研究者和受试者在筛选、治疗前和所有治疗后回访时使用MAS GL和LCL动态和静息评估GL和LCL的外观。受试者还在所有治疗后回访时使用4分评级量表评估他们对其GL和LCL外观的满意度(Ascher et al.，2009)。
受试者随机接受一种研究药物治疗(QM1114-DP或安慰剂)。每种治疗包括施用于GL区域(五次注射)和LCL区域(对面部各侧进行三次注射)的11次等量(100μl)注射。对于GL，五个注射部位包括在每个皱眉肌中注射两次，以及在降眉间肌中注射一次。对于LCL，注射位置根据个体受试者的LCL纹路型态进行调整。在所有情况下，注射点都在眼轮匝肌的外部，并且适用时，在距离眶缘约1-2cm处。
QM1114-DP的剂量水平是：
·队列8，剂量1：每次治疗共计110单位QM1114-DP(每个注射部位10单位[GL区域共计50单位，LCL区域共计60单位])。
·队列9，剂量2：每次治疗共计140单位QM1114-DP(对于GL，每个注射部位10单位[GL区域共计50单位]，对于LCL，每个注射部位15单位[LCL区域共计90单位])。
在表1中根据研究回访呈现本研究期间进行的程序和评估。临床研究包括筛选和直到第4周(随访)的回访。如果根据研究者的评估，得分(最大皱纹[对于GL]和最大微笑[对于LCL])已回到基线，则受试者在第28天(第4周)最后一次回访CPU。此时，正式完成了研究。根据研究者的评估，在第28天(第4周)时，其皱纹严重程度得分(最大皱纹[GL]和最大微笑[LCL])未回到基线的受试者参加了本研究的探索性阶段，并每月回访CPU，直到皱纹评分回到基线。来自这种功效探索性随访的数据将单独报告，而不是在本CSR中报告。
研究人群的选择
本研究以随机、安慰剂对照设计进行，以评估每个剂量水平的QM1114-DP的安全性和耐受性，并评估每个剂量水平的QM1114-DP用于暂时改善左侧和右侧外眦以及眉间区域的面部皱纹的功效。选择标准被定义为使得被选择参与研究的受试者没有任何重大疾病。
在研究开始前28天内，受试者经历了表24中所述的全面筛选程序。
表24-研究流程图
Figure BDA0003496575660000731
Figure BDA0003496575660000741
a给药前，1小时，4小时，8小时和12小时。
b在第-1天进行简化的身体检查，自筛选后关注任何健康变化。
c重点眼睛和面部检查。
d给药之前给予便餐。住院期间的所有其他时间在标准单位时间下食用标准餐。
e所有受试者在第-1天早晨住院。队列5、6和7的前哨组中的受试者住院直到第2天。所有其他受试者在第1天离开CPU。
f在第1周允许计划回访±1天，从第2周开始允许计划回访±2天。
g如果在第4周功效得分(研究者“实况”评估，最大皱纹/微笑)没有回到基线，该受试者每月在CPU参加探索性随访，直到得分回到基线(根据研究者对最大皱纹/微笑时的评估)。对于其评分回到基线的受试者，第4周是他们到CPU的最后一次回访。
纳入标准
为了符合纳入本研究的资格，每个受试者都满足以下每个标准：
·筛选时年龄在18至65岁(含)之间的健康男性或女性。
·先前没有接受过BoNT-A或B治疗。
·根据研究者在筛选和基线回访时使用经验证的照片量表(MAS GL-动态)评估，在最大皱眉时皱纹严重程度得分为至少中度严重程度(2级)。
·根据研究者在筛选和基线回访时使用经验证的照片量表(MAS LCL-动态)评估，在面部两侧最大微笑期间具有中度至重度(2级或3级)LCL。
·根据研究者在筛选和基线回访时使用经验证的照片量表(MAS GL-静息)评估，静息时皱纹严重程度得分为至少轻度严重程度(1级)。
·根据研究者在筛选和基线回访时使用经验证的照片量表(MAS LCL-静息)评估，面部两侧在静息时具有轻度至重度(1、2或3级)LCL。
·受试者同意使用可接受的避孕方法。
·能够理解并遵守方案的要求，并在进行任何研究相关程序之前签署ICF。
·根据筛选回访或入住CPU时进行的病史、身体检查或其他评价确定，没有具有临床意义的疾病或异常的实验室、ECG或生命体征值。
排除标准
如果受试者符合以下任何标准，则不具备纳入本研究第3部分的资格：
·先前接受过BoNT-A或B治疗。
·GL和/或LCL区域具有通过手动将皮肤铺展开来无法实质拉平的皱纹。
·先前曾在GL和/或LCL纹路区域插入任何永久性或半永久性材料或进行过真皮填充物治疗。
·在基线回访前14天内GL和/或LCL区域有过感染。
·目前有眼睑或眉毛下垂的病史。
·有干眼症、突出的眼袋或早晨眼睑浮肿。
·有癌变或癌前病变、活动性或慢性皮肤病、炎症或相关状况，包括眉间区域附近或眉间区域上有疤痕。
·先前接受过面部整容手术(例如，眼睑成形术、眶周手术、面部拉升、提眉、眼睑拉提或眉毛手术)。
·在本研究筛选前6个月内进行过面部激光或光治疗、微晶磨皮或浅度剥脱。
·有面神经麻痹病史。
·在研究药物施用前7天内使用过声称具有抗皱活性的局部制剂，或计划在研究期间使用此类制剂。
·受试者计划在研究期间进行面部整容手术或程序。
·在注射日之前14天内患有流感样综合征。
·目前接受或已经接受氨基糖苷类抗生素疗法、箭毒类药物、奎尼丁、琥珀胆碱、多粘菌素、抗胆碱酯酶、硫酸镁或林可酰胺类。只要不对受试者的安全性或研究数据的完整性产生负面影响，任何其他处方药或非处方药均可由研究者自行决定。
·处于怀孕或哺乳期(有生育能力的女性受试者在随机化之前的妊娠试验[血清]必须呈阴性)。
·证实表明药物滥用的尿液药物筛查呈阳性，包括：阿片类药物、巴比妥类药物、可卡因代谢物、美沙酮、苯二氮卓类、大麻素或苯丙胺。
·有酗酒或药物滥用的病史或临床证据。
·乙型肝炎筛查呈阳性，包括HBsAG(乙型肝炎表面抗原)、抗HCV(丙型肝炎病毒抗体)和人类免疫缺陷病毒(HIV)。
·有吞咽困难、误吸或吸入性肺炎病史。
·有出血性病症史。
·有可能干扰研究结果的自身免疫性疾病病史。
·患有可能影响安全性或研究结果评估的活动性多系统疾病；包括但不限于具有临床意义的心血管、呼吸、肝/胆、肾、胃肠、内分泌、精神或神经系统病症。
·有重症肌无力或另一神经传递疾病病史。
·患有可能干扰受试者结果的神经肌肉病症。
·在本研究筛选前90天内接受过任何研究产品。
·每天吸烟超过10支或等量的烟草，并且在CPU中不能停止吸烟。
·有任何在主要研究者(PI)看来会损害受试者的安全性或阻止受试者完成研究的状况。
·不能可靠地与研究者沟通。
·素食者、纯素食者或有与研究标准化菜单相冲突的医疗饮食限制的受试者。
从疗法或评估中移除受试者
使用根据国家癌症研究所通用术语标准(NCI CTC，4.0版)的标准毒性分级对AE进行分级。这是因为这些是唯一可用的一套标准化综合标准，并且已被证明可用于健康志愿者的I期研究。应用当地实验室正常值。在分级之前总是重复异常的实验室和其他测试，以确保一致性并排除技术错误。在评估异常是否构成药物相关毒性时以及分级时(如果适用)，实验室参数和其他测量值的昼夜变化以及基线状态和病况(例如Gilbert综合征)总是被考虑在内。
AE的CTC(CTCAE)显示I到V级，并根据该一般指南对每例AE的严重程度进行详细的临床描述。等级定义描述如下：
I级：轻度；无症状或轻微症状；仅临床或诊断观察；未指示干预。
II级：中度；指示最小的、局部的或非侵入性的干预；有限度的适合年龄的工具性ADL*。
*工具性日常生活活动(ADL)是指准备饭菜、购买杂货或衣服、使用电话、管理金钱等。
III级：重度或有医学意义但不会立即危及生命；指示住院或延长住院时间；失能；有限度的自我护理ADL**。
**自我护理ADL是指洗澡、穿衣和脱衣、自己吃饭、如厕、服药且未卧床不起。
IV级：危及生命的后果；指示紧急干预。
V级：与AE相关的死亡。
CTCAE标准及其解释与临床试验期间AE的标准强度分级一致：I级：轻度，II级：中度，III级：重度或具有医学意义但不会立即危及生命，可能构成严重不良事件(SAE)/疑似非预期严重不良反应(SUSAR)。IV级和V级构成SAE/SUSAR。
如果某些不良事件发生且与IMP存在合理可能的因果关系，则该研究将停止。
受试者的退出
根据赫尔辛基宣言，受试者可以随时退出，但一旦进行了治疗或给药，将尽一切努力继续评估以确保受试者的安全。受试者退出的具体原因是：
·受试者自愿中止，受试者可以随时自由地中止他或她对研究的参与。
·被研究者和/或主办方判断为重度不依从或严重偏离方案。
·不正确的纳入，即事后看来，受试者在纳入时不满足研究所需的资格标准。
·PI判断的其他原因。
受试者可以在任何时间自由地退出研究，不影响其权益(撤回同意)。此类受试者总是被询问原因和是否存在任何AE。如果可能，在给药后且在完成第4周回访之前退出研究的受试者由PI或代表当面查看，并接受为随访安排的评估和程序。如果已经确定了是因与研究无关的原因，则应尽可能追踪AE直至消退、回到基线或稳定。
更换受试者
每个队列必须由计划的受试者人数完成，以评估给定剂量的QM1114-DP或安慰剂(治疗后7天)的安全性和耐受性。如果完成的受试者数量少于给定队列的最低要求，为了做出剂量递增的决定，主办方和PI可以决定更换这些受试者，并在下一次剂量递增之前对这些受试者进行相应的治疗和评估。
治疗
施用的治疗
受试者随机接受一种研究药物治疗(QM1114-DP或安慰剂)。每种治疗包括施用于GL区域(五次注射)和LCL区域(对面部各侧进行三次注射)的11次等量(100μl)注射(每个注射部位一次注射)。对于GL，五个注射部位包括在每个皱眉肌中注射两次，以及在降眉间肌中注射一次。对于LCL，注射位置根据个体受试者的LCL纹路型态进行调整。取决于个体受试者的纹路型态，如果LCL区域中的皱纹位于外眦上方和下方，则如图12A中所述施用注射。或者，如果个体受试者的LCL中的皱纹主要位于外眦下方，则如图12B中所述施用注射。在所有情况下，注射点都在眼轮匝肌的外部，并且适用时，在距离眶缘约1-2cm处。
将受试者分配至治疗组
受试者签署研究知情同意书并随后接受筛选程序，在此期间以其独特的RPL ID编号(来自RPL志愿者数据库的标识号)和筛选编号来识别。
在第1天早上给药前为符合资格标准的受试者分配受试者编号。受试者编号从301到308(队列8)和321到328(队列9)。受试者编号按连续顺序分配，并对应于计算机生成的随机列表上的编号，该编号决定了治疗顺序。如果受试者中止研究，则该受试者编号不再使用并且该受试者不允许重新进入研究。
本研究中的剂量选择
对于GL，可用的临床数据被认为是QM1114-DP的剂量选择的代表性剂量。QM1114-DP的FIH研究的剂量选择基于治疗相同面部区域的临床经验，但使用迄今为止生成的药理学和毒理学数据作为等效作用方式、总体反应和可逆作用的支持。治疗GL的标准临床剂量为5次注射，每次注射10单位(共计50单位，也称为Speywood单位，sU)。在实施例1(仅GL)中，作为安全性预防措施，QM1114-DP的建议起始剂量为每次注射2单位(共计10单位)，随后分三步进行剂量递增(在SRC决定后)至每次注射5单位(共计25单位)，然后每次注射10单位(共计50单位)，然后每次注射15单位(共计75单位)。
LCL(实施例2)适应症的起始剂量为每次注射5单位(共计30单位)，随后剂量递增(在SRC决定后)至每次注射10单位(共计60单位)，然后每次注射15单位(共计90单位)。研究中用于治疗LCL的最大剂量基于以前的研究。早期的BoNT研究考查了施用于每侧的15、30和45单位以治疗LCL(共计施用30、60和90单位)。对于所有研究的剂量，治疗中出现的AE的发生率相似。
剂量的选择和施用时机
在本研究中，受试者在研究第1天的早上接受了110或140单位QM1114-DP或安慰剂中的一种治疗。
研究程序
对于筛选、研究天数和随访，请参阅表24。
获得的所有研究测量值如下所述。
如果基于对个体受试者的安全性数据的审查存在任何安全性疑虑，则可以采集额外的生命体征、ECG记录和/或实验室安全性样品。研究期间抽取的血液总量不应超过每位受试者300ml。
生命体征
血压、心率、鼓室温度和呼吸频率
使用具有合适袖带尺寸的半自动BP记录装置(Critikon
Figure BDA0003496575660000791
监测器)测量仰卧血压(BP)和心率(HR)。对于呼吸频率测量，受试者需要在呼吸频率测量之前以仰卧姿势静息至少10分钟。有关个体测量的时机，请参阅研究流程图(表24)。根据对安全性和耐受性数据的持续审查，研究期间进行的所有测量的时机可能发生变化。在研究流程图(表24)中指示的时间使用自动温度计测量(单次测量)体温(鼓室温度)，用摄氏度表示。PI或代表可能会出于安全性考虑进行额外的温度评估。
ECG测量
使用通过固定网络连接到
Figure BDA0003496575660000792
心脏病信息系统(MUSE)的GE Marquette
Figure BDA0003496575660000793
记录仪记录一式三份的12导联ECG。研究期间记录的所有ECG都以电子方式存储在MUSE信息系统中。只有以电子方式记录的ECG才是用于安全性评估以外的任何目的的有效ECG。ECG打印输出已存档在受试者的CRF中以进行医疗安全性审查。
如果可能，对任何一个受试者都使用相同的记录器。每个ECG记录器都按照所需的技术规范进行设置，并包含识别记录所需的信息。每个ECG记录都被清楚地识别(受试者ID、相对于剂量的预定时间和ECG记录的实际时间)。
在受试者在仰卧位静息至少10分钟后，在研究流程图(表24)中指示的时间点进行12导联ECG记录。受试者在ECG记录期间避免姿势变化，临床工作人员确保受试者在ECG记录期间保持清醒。
所有记录的ECG都被研究医师持续审查，审查记录在CRF中。如果受试者在任何阶段显示异常ECG，将进行额外的安全性记录(包括使用5或12导联动态心电图(Holter)设备)，并在需要时追踪异常直到消退。
根据对安全性和耐受性数据的持续审查，研究期间进行的所有测量的时机可能发生变化。
临床实验室安全测量
临床实验室安全性参数列于下表25中。
表25-临床实验室安全性参数
Figure BDA0003496575660000801
Figure BDA0003496575660000811
*如果认为有必要，基于具有临床意义的阳性尿分析测试，由The DoctorsLaboratory(TDL)进行沉积物和/或培养物的显微镜检查。
a在筛选和入院时进行血清β-HCG(β-人绒毛膜促性腺激素)。
血液学和生物化学
在研究流程图(表24)中给出的时间采集用于测定血液学和生化参数的血样。收集的日期和时间记录在适当的CRF上。使用常规方法，在TDL进行分析。将用于测定标准血液学参数的血样收集在4ml K3 EDTA管中，并将用于测定标准生化参数的血样收集在5ml血清分离管(SST)中。
被怀疑具有任何临床意义的超出参考限值的实验室值将被重复。在重复采样中被证实有可疑的临床意义的受试者不被包括在研究中，或者如果已经包括在内，可能已经退出研究的进一步参与和/或被随访直到正常化，或者只要研究者或代表认为有必要。
血清学
如研究流程图(表24)中详述的那样进行血清学检查。在筛选回访时，对所有受试者测试表25中列出的参数。这样做是为了研究人员的安全，并且测试结果不输入到研究数据库中。如果发现受试者对这些测试中的任何一项呈阳性，则他或她将被转诊进行进一步检查和治疗并且不被包括在研究中。在用于临床化学的相同血样(收集在5ml SST管中)中分析血清学测试。通过TDL分析样品。
β-HCG
为排除妊娠，如表24中所述进行血清β-HCG血样，并在怀疑妊娠时进行。任何妊娠试验呈阳性的受试者将被排除或退出研究。
尿分析
在研究流程图(表24)中给出的时间采集用于测定尿分析参数的尿液样本。通过RPL使用试纸法对表25中描述的参数进行尿分析。如果认为有必要，基于具有临床意义的阳性测试，由TDL对沉积物和/或培养物进行显微镜检查。
滥用药物
在表24中描述的时间在RPL就滥用药物测试尿液。如果受试者未通过药物滥用筛查，他/她将被排除在研究之外。只有在方法学原因被认为导致假阳性的情况下才进行重复药物筛查。除非上述条件涵盖，否则临界阳性结果将被视为阳性并且受试者被排除在研究之外。如果发现受试者由于药物而呈阳性，例如流感/感冒药，如果受试者仍在筛选窗口内，则进行重复药物筛查。测试结果不输入到数据库中。
酒精呼气测试
使用酒精检测仪进行酒精呼气测试(时间点参见研究流程图表24)。该测试的结果不输入到临床研究数据库中。如果受试者的酒精呼气测试呈阳性，他们就会被排除在研究之外。
身体检查、身高和体重
个体检查的时机在研究流程图(表24)中示出。在筛选和随访(第28天)时进行的身体检查包括对以下各项的全面身体检查：一般外观、皮肤、头部、颈部、淋巴结、甲状腺、腹部、肌肉骨骼、心血管、呼吸和神经系统。
在第-1天进行的身体检查是一个简短的检查，主要针对筛选后的任何变化。
身高用厘米表示，体重用千克表示。对于所有测量，使用校准度量器在受试者穿着轻便衣服且不穿鞋的情况下进行。根据身高和体重计算体重指数(BMI)。
重点身体检查
使用标准化评分系统对眼睛和面部进行重点身体检查(时间点见表24)以监测局部发热、瘙痒、疼痛、水肿/硬结、红斑和瘀伤。评分系统如下：
·微小的变化；或
·中度变化。
功效评估
在研究流程图(表24)中指定的时间点进行功效评估。
研究者和受试者对皱纹严重程度的评估
在每次回访时，研究者和受试者独立地对受试者“静息时”、“最大皱眉”(对于GL适应症)和“最大微笑时”(对于LCL适应症)的皱纹的严重程度进行评级。研究者根据以下等级使用动态和静息MAS LCL评估皱纹(使用高分辨率照片作为量表分级指南)：
表26
等级 GL的严重程度
0 无
1 轻度
2 中度
3 重度
4 极重度
表27
Figure BDA0003496575660000831
Figure BDA0003496575660000841
受试者的满意度评估
在每次治疗后回访时，受试者使用如下4分评级量表评估他/她对治疗的满意程度：
表28
等级 受试者满意度
0 非常满意
1 满意
2 不满意
3 非常不满意
摄影
在研究流程图(表24)中指定的时间点拍摄标准化的数码照片。这些照片仅用于说明IMP的效果，不用于评估功效。指示受试者在到达诊所之前或在诊所时在任何摄影之前除去任何化妆品。
拍摄了以下照片：
·静息时(没有微笑)的全脸；和
·GL区域和/或LCL区域的照片(一张在最大皱眉时[用于GL适应症]或在最大微笑时[用于LCL适应症]，一张在静息时)。
样品收集
临床免疫原性测定：后面将开发用于测量QM1114-DP中和抗体的测定法。在研究流程图(表24)中指定的时间点收集血样，以便在测定法可用时测量抗体。
不良事件
AE、药物不良反应(ADR)、SAE和疑似非预期严重不良反应(SUSAR)的定义在下文给出。最重要的是，所有参与临床研究实施的工作人员都熟悉本节的内容。
定义：
不良事件(AE)-AE是在暴露于药物产品之后或期间出现不良医学状况或先前存在的医学状况恶化，无论是否被认为与该产品有因果关系。不良医学状况可以是症状(例如恶心、胸痛)、体征(例如心动过速、肝脏肿大)或检查的异常结果(例如实验室发现、ECG)。在临床研究中，AE可以包括从签署知情同意书之日起直到他们参与研究结束的在任何时间发生的不良医学状况，即受试者已经停止或完成了研究(第28天)。
AE的因果关系(即它们与研究治疗的关系)由研究者评估，他们在填写相关病例报告表时必须对以下问题回答“是”或“否”，“您是否认为该事件有合理的可能性是由以下任何一种引起的-研究药物-其他药物？。
请注意，还应报告可能与任何研究程序相关的SAE。
药物不良反应(ADR)-ADR是与IMP存在因果关系的任何AE，至少是合理的可能性。
严重不良事件(SAE)-SAE是在任何研究阶段(即，导入、治疗、洗脱和/或随访)期间和任何剂量的IMP或安慰剂下发生的AE，其满足以下一项或多项标准：
·导致死亡。
·危及生命。
·需要患者住院或延长现有住院时间。
·导致持续或显著的失能或无能力。
·先天性异常或出生缺陷。
·可能危及受试者或可能需要医疗干预以防止上面所列结果之一的重要医疗事件。
以与非严重AE相同的方式评估SAE的因果关系(即它们与研究治疗的关系)。请注意，还应报告可能与任何研究程序相关的SAE。
疑似非预期严重不良反应(SUSAR)-SUSAR是与IMP至少台理可能地存在因果关系但未在研究者手册和/或产品特性概述中列出的任何SAE。
测量的适当性
本研究中使用的所有功效和安全性测量都是标准的、广泛使用的并且被认为是可靠和准确的。
研究受试者
对于这项研究，16名健康受试者(6名男性和10名女性)根据临床研究方案(CSP)随机分配和给药。所有人都完成了研究，并进行了安全性和功效分析。
人口统计学参数的描述性统计在下表29中给出。十四(14)名受试者是白种人，一名是亚洲人，以及一名被认为是其他混合的人种。受试者的年龄在35至57岁(含)之间。所有受试者的体重范围介于55.1-103.7kg之间，BMI介于20.5-32.7kg/m2之间。在研究开始时，受试者的病史或手术史中没有现有的有临床意义的发现。研究期间个体受试者的身体检查也没有值得注意的发现。
表29-人口统计学数据概览
Figure BDA0003496575660000861
功效评价
功效分析集由接受单剂量QM1114-DP或安慰剂且存在给药后功效数据的所有受试者(16名受试者)组成。
本研究的目标之一是评估每个剂量水平的QM1114-DP在组合治疗时对暂时改善眉间和外眦区域面部皱纹的功效。图15和图16显示了治疗组中研究者和受试者评估的在静息、最大皱眉(对于GL)和最大微笑(对于LCL)时随时间的眉间和外眦区域(左侧和右侧)的平均皱纹得分。研究者和受试者对静息、最大皱眉(对于GL)和最大微笑(对于LCL)时皱纹严重程度的评价的混合模型分析呈现在表30、表31(研究者的评价)、表32和表33(受试者的评价)中。使用经验证的MAS评级量表进行研究者和受试者对皱纹严重程度的评估来评价功效。量表对严重程度使用以下等级：0(无)、1(轻度)、2(中度)、3(重度)和4(极重度)。
静息时皱纹严重程度
眉间纹(GL)：
功效数据显示，在施用QM1114-DP后，与安慰剂治疗组相比，根据研究者和受试者的评估，活性药治疗组中眉间区域静息时皱纹的严重程度降低了(图15和图16)。研究者对皱纹严重程度的评估表明，50/60单位QM1114-DP治疗组(根据MAS，平均得分为0.5)在第28天达到静息时最大效果，而50/90单位QM1114-DP治疗组更快地(第3天至第14天之间)达到最大效果，根据MAS的平均得分在0.5-0.7之间。在第28天，50/90单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分为0.7。对于受试者对静息时皱纹严重程度的评估，50/60单位QM1114-DP治疗组在第21天达到最大效果(根据MAS，平均得分为0.2)，并保持直到第28天。对于50/90单位QM1114-DP治疗组，在第28天达到最大效果(根据MAS，平均得分为0.3)。
外眦纹(LCL)：
施用QM1114-DP后，与安慰剂治疗组相比，根据研究者和受试者的评估，活性药治疗组的静息时LCL严重程度降低了(图15和图16)。研究者对皱纹严重程度的评估表明，治疗组在第14天至第28天之间达到了最大效果，根据MAS的平均得分范围为0.7至0.8(左LCL)和0.8(右LCL)。对于受试者对皱纹严重程度的评估，注意到类似的降低趋势。治疗组在第14天至第21天之间达到最大效果，根据MAS的平均评分范围为0.5至0.8(左LCL)和0.7至0.8(右LCL)。
最大皱眉时皱纹严重程度(GL适应症)
在最大皱眉时，根据研究者和受试者的评估，活性药治疗组中的眉间区域皱纹的严重程度从第2天开始降低(图15和图16)。根据研究者评估的，50/60单位QM1114-DP治疗组的最大效果(根据MAS的平均得分为0.7)在第14天达到，直到第28天仍有效果(根据MAS的平均评分为0.7)。对于50/90单位QM1114-DP治疗组，在第7天达到最大效果，根据MAS GL-动态的平均得分为0.5，并保持直到第28天。对于受试者的皱纹严重程度评估，50/60单位QM1114-DP治疗组在第14天达到最大效果(根据MAS的平均得分为0.5)，并保持直到第28天(根据MAS的平均得分为0.5))。对于50/90单位QM1114-DP治疗组，达到最大效果的时间更长(第28天，根据MAS的平均得分为0.3)。
最大微笑时皱纹严重程度(LCL适应症)
与GL一样，对于研究者和受试者对最大微笑时LCL严重程度的评估也观察到类似的降低趋势(图15和图16)。对于50/60单位QM1114-DP治疗组中的受试者，根据研究者的评估，对于左侧LCL在第14天(根据MAS的平均得分为0.8)和对于右侧LCL在第21天(根据MAS的平均得分为1.0)达到最大效果，直到第28天仍有一些作用(根据MAS的平均得分为0.8[左侧LCL]和1.0[右侧LCL])。相比之下，对于50/90单位QM1114-DP剂量水平，最大效果在第7天达到(根据MAS的平均得分为1.0[左侧LCL]和1.0[右侧LCL]，并且这种效果保持直到第28天(根据MAS的平均得分为1.0[左侧LCL]和1.0[右侧LCL])。对于受试者对皱纹严重程度的评估也观察到类似的降低模式(图16)。50/60单位QM1114-DP治疗组中的受试者在第14天对左侧LCL(根据MAS的平均得分为0.8)观察到皱纹严重程度的最大效果，直到第28天(根据MAS的平均得分为1.2)仍有一些作用。对于右侧LCL中的皱纹，在第14天达到最大效果(根据MAS的平均得分为1.0)，并且在第28天仍有一些效果(根据MAS的平均得分为1.3)。对于50/90单位QM1114-DP治疗组中的受试者，对于左侧LCL在第21天(根据MAS的平均得分为1.0)和对于右侧LCL在第28天(根据MAS的平均得分为0.8)达到最大效果。
受试者的满意度评估
在每次治疗后回访时，受试者使用四分评级量表评估他/她对治疗的满意程度。该量表使用以下满意度等级：0(非常满意)、1(满意)、2(不满意)和3(非常不满意)。
受试者的满意度评估显示，50/60和50/90单位QM1114-DP治疗组中的大多数受试者对治疗从第2天至第28天都非常满意(0)或满意(1)。50/60治疗组中的一些受试者，例如受试者301(第7至28天)和受试者305(第28天)对治疗非常不满意(3)或不满意(2)。此外，发现50/90治疗组中的一名受试者(受试者324)对治疗非常不满意(第21天)或不满意(第28天)。可能导致不满意的一个可能因素可能是由于受试者301、305和324经历了AE。在安慰剂治疗组中，从第14天到第28天，三名受试者对治疗不满意。
混合模型分析
使用重复测量模型(混合模型)分别评价在研究者和受试者对静息和最大皱眉/微笑时皱纹严重程度量表的评估中相对于基线的变化。研究者对皱纹严重程度的评价(不同天数不同剂量之间的差异)列于表30-31中(静息时和最大皱眉/微笑时)，受试者对皱纹严重程度的评价(不同天数不同剂量之间的差异)列于表32-33中(静息时和最大皱眉/微笑时)。本节中分析和呈现的变量分别是在研究者和受试者对静息和最大微笑时的皱纹严重程度的评估中相对于基线的变化。
眉间纹(GL)：
研究者对最大皱眉时皱纹的评价表明，从第2天到第28天，50/60单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分相比于基线的变化与安慰剂治疗组的得分相比显示出统计学显著性差异。当将50/90单位QM1114-DP治疗组中平均MAS得分相比于基线的变化与安慰剂治疗组中的得分进行比较时，从第3天到第28天也报告了显著性结果(P≤0.05)(表30A)。对于受试者对最大皱眉时皱纹的评价也报告了类似的模式(表32A)，在这两个QM1114-DP剂量水平下，从第2天或第3天到第28天相比于安慰剂都具有统计学显著性差异。对于研究者对静息时皱纹的评估，当与安慰剂治疗组中的得分相比时，50/60单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分随时间相比于基线的变化没有显著性差异(表31A)。然而，在第3天、第21天和第28天，50/90单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分相对于基线的变化与安慰剂治疗组的得分相比显示出统计学显著性差异(P≤0.05)(表31A)。对于受试者对静息时皱纹的评价，50/60单位和50/90QM1114-DP治疗组从第7天到第28天平均MAS得分相比于基线的变化与安慰剂组的得分相比具有统计学显著性(P≤0.05)(表33A)。
外眦纹(LCL)：
研究者对最大微笑时左侧外眦区皱纹的评价表明，从第2天到第28天，50/60单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分相比于基线的变化与安慰剂治疗组的得分相比显示出统计学上显著性差异。此外，除了第2天和第14天，这种模式也见于50/90单位QM1114-DP治疗组(表30B)。相比之下，对于研究者对最大微笑时右侧外眦区域皱纹的评价，这种趋势并不那么明显。对于研究者对右侧LCL皱纹的评价，50/60单位QM1114-DP治疗组在第7天和第28天报告了相比于安慰剂的统计学显著性差异。对于50/90单位QM1114-DP治疗组，从第3天到第7天以及在第28天注意到相比于安慰剂的统计学显著性差异(表30C)。对于受试者对最大微笑时左侧LCL皱纹的评价，50/60单位QM1114-DP治疗组从第14天至第28天以及50/90单位QM1114-DP治疗组从第7天至第28天，注意到相比于安慰剂的统计学显著性差异(P≤0.05)(表32B)。对于最大微笑时右侧LCL，治疗组中也注意到类似的差异。对于右侧LCL，50/60单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分相比于基线的变化显示，从第14天到第28天以及在50/90单位QM1114-DP治疗组中从第3天到第28天，相比于安慰剂具有统计学显著性差异(表32C)。
研究者对静息时面部左侧外眦区域皱纹的评价表明，在50/60和50/90单位QM1114-DP治疗组中，从第3周(第21天)到第4周(第28天)相比于安慰剂治疗组的得分显示出统计学显著性差异(P≤0.05)(表31B)。然而，研究者对静息时面部右侧外眦区域皱纹的评价表明，对于50/60和50/90单位QM1114-DP治疗组，平均MAS得分相比于基线的变化仅在第4周(第28天)与安慰剂得分显著不同(表31C)。
对于受试者对静息时皱纹的评估，当将50/90单位QM1114-DP治疗组与安慰剂进行比较时，除了第7天，对于左侧LCL从第2天到第28天报告了具有统计学显著性的结果(P≤0.05)(表33B)。然而，当将50/60单位QM1114-DP治疗组与安慰剂治疗组左侧LCL的得分进行比较时，报告平均MAS得分相比于基线的变化不具有统计学显著性(表33B)。对于受试者对右侧LCL静息时皱纹的评价，在50/60单位QM1114-DP和安慰剂治疗组之间未观察到平均MAS得分相比于基线的变化具有统计学显著性(表7C)。相比之下，50/90单位QM1114-DP治疗组在第21天和第28天报告了与安慰剂相比具有统计学显著性的MAS得分(表33C)。
表30-皱纹的严重程度：研究者对最大皱眉/微笑时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，GL适应症；B，LCL适应症[左侧]；C，LCL适应症[右侧])
A：适应症：GL，最大皱眉，研究者的评价
Figure BDA0003496575660000911
B：适应症：LCL(L)，最大微笑，研究者的评价
Figure BDA0003496575660000912
Figure BDA0003496575660000921
C：适应症：LCL(R)，最大微笑，研究者的评价
Figure BDA0003496575660000922
*平均值差异为负值表示比较的组中的第一组的皱纹严重程度具有更大的改善，反之亦然。
表31-皱纹的严重程度：研究者对静息时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，GL适应症；B，LCL适应症[左侧]；C，LCL适应症[右侧])
A：适应症：GL，静息，研究者的评价
Figure BDA0003496575660000931
B：适应症：LCL(L)，静息，研究者的评价
Figure BDA0003496575660000932
Figure BDA0003496575660000941
C：适应症：LCL(R)，静息，研究者的评价
Figure BDA0003496575660000942
*平均值差异为负值表示比较的组中的第一组的皱纹严重程度具有更大的改善，反之亦然。
表32-皱纹的严重程度：受试者对最大皱眉/微笑时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，GL适应症；B，LCL适应症[左侧]；C，LCL适应症[右侧])
A：适应症：GL，最大皱眉，受试者的评价
Figure BDA0003496575660000951
B：适应症：LCL(L)，最大微笑，受试者的评价
Figure BDA0003496575660000952
Figure BDA0003496575660000961
C：适应症：LCL(R)，最大微笑，受试者的评价
Figure BDA0003496575660000962
*平均值差异为负值表示比较的组中的第一组的皱纹严重程度具有更大的改善，反之亦然。
表33-皱纹的严重程度：受试者对静息时的评价：QM1114-DP剂量和安慰剂在相比于基线的变化方面存在的差异-混合模型(A，GL适应症；B，LCL适应症[左侧]；C，LCL适应症[右侧])
A：适应症：GL，静息，受试者的评价
Figure BDA0003496575660000971
B：适应症：LCL(L)，静息，受试者的评价
Figure BDA0003496575660000972
Figure BDA0003496575660000981
C：适应症：LCL(R)，静息，受试者的评价
Figure BDA0003496575660000982
功效结论
由研究者和受试者对最大皱眉时GL外观变化和最大微笑时LCL外观变化的评估所测量的功效结果表明，对照于安慰剂治疗组中进行评价的那些受试者，QM1114-DP在这两个剂量水平下有效降低最大皱眉/微笑时GL和LCL严重程度(对后者注意到一些例外)。然而，对于在静息时进行的GL和LCL评价，两种QM1114-DP剂量不如在最大皱眉和最大微笑时的评价有效，并且在研究者和受试者的评估中显示出不同的模式。受试者对GL和LCL满意度的评估表明，活性药治疗组中的大多数受试者对治疗直到第28天都非常满意或满意。在安慰剂治疗组中，三名受试者对治疗不满意。
安全性评价
安全性分析包括16名受试者全部接受单剂量随机研究药物。
六名受试者接受了110单位(用于GL共计50单位，用于LCL共计60单位)的QM1114-DP，六名受试者接受了140单位(用于GL共计50单位，用于LCL共计90单位)的QM1114-DP。四名受试者接受安慰剂治疗。
或出于AE分析的目的，本节主要涉及治疗中出现的那些AE，即在服用IMP后开始的，以及ADR，即与IMP存在至少合理可能的因果关系。研究期间没有报告SAE，没有SUSAR，也没有受试者因安全性原因退出研究。
表34中给出了按治疗组分类的AE概览。报告了每个剂量水平的AE。16名受试者中的11名(68.8％)报告了三十二(32)例AE，其中10名(62.5％)受试者中的24例AE总体上被研究者判断为可能或很可能与治疗相关。50/60单位QM1114-DP治疗组中的6名受试者中的4名报告了十四(14)例AE，50/90单位QM1114-DP治疗组中的6名受试者中的4名报告了9例AE。对于安慰剂治疗组，4名受试者中的3名报告了9例AE。表35中显示了按SOC分配和PT分类的AE概览。对于眼睑下垂，发作时间介于3天22小时(受试者301)和14天(受试者304)之间。眼睑下垂的持续时间从67天到87天不等。最频繁的治疗相关神经系统病症是头痛，发作时间为9小时(受试者305)至23小时(受试者301)。头痛的持续时间从2天(受试者302)到13天(受试者305)不等。
表34-AE概览
Figure BDA0003496575660001001
E＝事件数量；N＝受试者数量
表35-根据系统器官类别、优选术语和治疗分类的具有AE的受试者的概览
Figure BDA0003496575660001002
Figure BDA0003496575660001011
仅概括了治疗中出现的AE。
*根据受试者SOC的多次出现按每个SOC计数一次。
**根据受试者PT的多次出现按每个PT计数一次。
安全性结论
总体而言，治疗组中最常报告的SOC AE是神经系统病症和一般疾病以及给药部位状况。这同样适用于治疗相关的AE。受试者中最频繁的神经系统病症是头痛，有四名受试者报告，最频繁的一般疾病和给药部位状况是注射部位瘀伤，有两名受试者报告。根据这些发现，在以下部分中，将重点关注与神经系统病症以及一般疾病和给药部位状况相关的AE，以便在治疗之间就这些AE方面进行比较。
本I期研究的主要目标是确定每个剂量水平的QM1114-DP在健康男性和女性受试者中用于治疗眉间和外眦区域的皱纹的安全性和耐受性。在涉及GL和LCL组合治疗的这部分研究中，没有出现SAE，也没有因AE或任何其他原因而导致的退出。16名受试者中的11名报告了三十二(32)例AE，其中10名受试者中的24例AE总体上被研究者判断为可能或很可能与治疗相关。其他AE(8例AE)被研究者判断为与治疗无关。所有AE都为轻度。在每个剂量水平下都报告了AE，其中50/60 QM1114-DP治疗组中的受试者报告的数量最多(14例AE)。
在最高剂量水平(50/90单位QM1114-DP)下，AE的数量(9例AE)与4名受试者的组合安慰剂组报告的相同。治疗组中最常报告的AE是神经系统病症以及一般疾病和给药部位状况。这也适用于与治疗相关的AE，其中神经系统病症以及一般疾病和给药部位状况最为常见。最频繁的神经系统病症是头痛，有四名受试者报告，最频繁的一般疾病和给药部位状况是注射部位瘀伤。在活性药治疗组(受试者301和304[50/60单位QM1114-DP治疗组]和受试者324[50/90单位QM1114-DP治疗组])中的三个受试者中观察到三例轻度的眼睑下垂。
注意到一些受试者在研究期间的特定日期出现生化参数升高。然而，这些被研究者判断为与治疗无关。总之，研究期间血液学、生物化学和尿液分析参数没有具有临床意义的变化，也没有具有临床意义的身体检查发现。在研究期间，没有受试者在他们对眼睛和面部的重点身体检查中就局部发热、瘙痒、疼痛、水肿/硬结、红斑或瘀伤具有有临床意义的发现。除了一名受试者(304)的鼓室温度测量值略低外，所有受试者的生命体征均具有正常值。ECG结果显示，在研究期间，一些受试者的PR间期有所增加和减少。在研究期间，一些受试者的QTcB也有所增加。然而，ECG记录中偏离正常范围的个例被研究者认为没有临床意义且与研究药物无关。
讨论和总体结论
本I期研究的主要目标是评价每个剂量水平的QM1114-DP的安全性和耐受性，次要目标是评估每个剂量水平的QM1114-DP用于暂时改善健康男性和女性受试者的眉间和外眦区域的面部皱纹的功效。在临床使用中，在接受BoNT-A治疗以矫正面部上三分之一面部皱纹的人中，大约50％的人同时接受GL和LCL治疗(Rzany et al.，2007)。
在这项研究中，在活性药治疗组中，总共有三名受试者(50/60单位QM1114-DP治疗组中的两名受试者和50/90单位QM1114-DP治疗组中的一名受试者)报告三例轻度眼睑下垂。这与实施例1(仅GL)相比，在实施例1中，轻度眼睑下垂的发生率仅在施用最大剂量水平的受试者中有报告(75单位QM1114-DP治疗组中的两名受试者的两例事件)。
在个体受试者中，最常报告的AE是神经系统病症。这也与治疗相关的AE相关。最常见的神经系统病症是头痛(在四名受试者中报告)，其次是眼睑下垂(在三名受试者中报告)。所有AE均为轻度，没有出现SAE或因AE导致的退出。在研究过程中，血液学、生物化学和尿液分析参数没有有临床意义的变化。此外，没有有临床意义的身体发现。受试者的生命体征在正常范围内，并且在研究期间进行的ECG记录中没有观察到有临床意义的发现。
总之，绝大多数与治疗相关的AE与神经系统病症以及一般疾病和给药部位状况有关。根据参考安全性信息，这些治疗相关的AE在预期范围内，眼睑下垂除外，与第1部分(GL)、第2部分(LCL)和以前使用其他BoNT-A产品的临床研究中大体上观察到的AE一致。
在这项研究中，功效数据表明，与安慰剂治疗组中评价的那些受试者相比，当组合使用时，QM1114-DP在这两个剂量水平下有效降低最大皱眉/微笑时GL和LCL的严重程度。研究者对GL评价的混合模型分析表明，从第2-3天到第28天，50/60和50/90单位的平均MAS得分相比于基线的变化与安慰剂治疗组的得分相比显示出统计学上显著性差异(P≤0.05)。受试者对最大皱眉时皱纹的评价也报告了类似的模式，在这两个QM1114-DP剂量水平下，从第2天或第3天到第28天，相比于安慰剂具有统计学显著性差异。
除了一些例外，研究者对最大微笑时外眦区域皱纹的评价还表明，50/60和50/90单位QM1114-DP治疗组的平均MAS得分(左侧)相比于基线的变化与安慰剂治疗组的得分相比显示出统计学显著性差异。对于右侧，QM1114-DP治疗组和安慰剂治疗组之间的差异不太明显。受试者对GL和LCL满意度的评估表明，活性药治疗组中的大多数受试者对治疗直到第28天都非常满意或满意，除非他们具有可能导致活性药治疗组中一些受试者不满意的AE。在安慰剂治疗组中，报告3名受试者对治疗不满意。
总体结论：
·当组合治疗时，两种剂量用于暂时改善GL和LCL均被认为是安全且耐受性良好。
·本研究中没有SAE。
·没有受试者因AE或任何其他原因退出。
·所有AE均为轻度。
·研究者和受试者对最大皱眉时皱纹严重程度的评价表明与安慰剂相比，QM1114-DP在两种剂量水平下均有效降低GL的严重程度。效果持续直到第28天。
·研究者和受试者对最大微笑时皱纹严重程度的评价表明，与安慰剂相比，主要地，QM1114-DP在这两个剂量水平下均有效降低LCL严重程度。
·受试者对静息时皱纹严重程度的评价表明，与安慰剂相比，QM1114-DP在这两个剂量水平下均有效降低GL严重程度。效果持续直到第28天。然而，根据研究者的评估，功效并不明显。
·研究者对静息时皱纹严重程度的评价表明，首先在第21天和第28天，与安慰剂相比，QM1114-DP在这两个剂量水平下均有效降低LCL严重程度。受试者评价显示，较高剂量(QM1114-DP 50/90单位)仅在几个时间点起效。
·受试者对GL和LCL满意度的评估表明，活性药治疗组中的大多数受试者对治疗直到第28天都非常满意或满意。

Claims (40)

1.一种治疗人类受试者的中度至重度眉间纹(GL)和/或外眦纹(LCL)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的包含肉毒杆菌神经毒素的液体组合物，从而减少中度至重度GL和/或LCL的外观，其中所述液体组合物还包含1至5种缓冲剂、至少一种稳定剂和至少一种表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述液体组合物包含至少4种缓冲剂。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述液体组合物包含以约100至约300mM的浓度或以约0.1-10mg/mL的浓度存在的第一缓冲剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述液体组合物包含以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在的第二缓冲剂。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述液体组合物包含以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在的第三缓冲剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述液体组合物包含以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在的第四缓冲剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述液体组合物包含以约1至约25mM的浓度或以约0.1-1.0mg/mL的浓度存在的第五缓冲剂。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂选自氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钠脱水物和磷酸二氢钠脱水物。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂是氨基酸。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述氨基酸选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述氨基酸为D亚型或L亚型。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的方法，其中所述氨基酸以约0.1至约3.0mg/mL的浓度存在。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述至少一种表面活性剂是非离子表面活性剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述非离子表面活性剂以约0.01％(v/v)至约5.0％(v/v)的浓度或以约0.1至约3.0mg/mL的浓度存在。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述肉毒杆菌神经毒素选自A、B、C、D、E、F和G型肉毒杆菌神经毒素。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述肉毒杆菌神经毒素是A型肉毒杆菌神经毒素。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述液体组合物的pH值在6.6至6.9之间。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述肉毒杆菌神经毒素的分子量为约150kDa。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述液体组合物的摩尔渗透压浓度在270mosm/kg至310mosm/kg之间。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用1至100单位之间的肉毒杆菌毒素。
21.根据权利要求20所述的方法，其中向所述受试者施用10至75单位之间的肉毒杆菌毒素。
22.根据权利要求20所述的方法，其中向所述受试者施用25至75单位之间的肉毒杆菌毒素。
23.根据权利要求20所述的方法，其中向所述受试者施用10、25、30、45、50、60、75或90单位的肉毒杆菌毒素。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述液体组合物通过注射施用。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述注射是皮下、透皮、皮内或肌内注射。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中在所述受试者的眉间区域进行多次注射。
27.根据权利要求26所述的方法，其中相邻的注射相隔约0.5至约10cm。
28.根据权利要求26所述的方法，其中相邻的注射相隔约1.5至约3cm。
29.根据权利要求26-28中任一项所述的方法，其中，在每侧面部的降眉间肌和皱眉肌中进行所述注射。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，首先在每侧面部的降眉间肌中，然后在皱眉肌中，从中间向外移动，进行注射。
31.根据权利要求26-30中任一项所述的方法，其中，所有注射都在上眶缘上方约1cm处并且在瞳孔中线内部。
32.根据权利要求26-31中任一项所述的方法，其中，所有注射都在眉毛中央或眉弓骨上方至少1cm处。
33.根据权利要求26-32中任一项所述的方法，还包括在注射时在上眶缘上施加压力以最小化所述肉毒杆菌神经毒素的区域效应的风险。
34.根据权利要求26或27所述的方法，其中，在受试者的外眦下方、眼轮匝肌的外部和/或距眶缘1-2cm处进行多次注射。
35.根据权利要求26-33中任一项所述的方法，其中，进一步在所述受试者的外眦下方、眼轮匝肌的外部和/或距眶缘1-2cm处进行多次注射。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中以约1个月至约6个月的间隔重复所述方法以抑制复发。
37.根据权利要求36所述的方法，其中以约3个月至约6个月的间隔重复所述方法以抑制复发。
38.根据权利要求36所述的方法，其中以约4个月的间隔重复所述方法以抑制复发。
39.一种液体组合物，其包含肉毒杆菌神经毒素和1至5种缓冲剂、至少一种稳定剂和至少一种表面活性剂，用于治疗受试者的眉间纹和/或外眦纹。
40.包含肉毒杆菌神经毒素和1至5种缓冲剂、至少一种稳定剂和至少一种表面活性剂的液体组合物用于治疗眉间纹和/或外眦纹的用途，包括向有需要的受试者施用所述液体组合物。
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