CN114286622A - 含纳他霉素和至少一种杀虫剂的抗真菌组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种组合物，该组合物包含纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂。本发明进一步涉及使用纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂(优选所述组合物)用于保护植物或植物部分，用于改善农业植物的发育和/或产量，及用于保护土壤和/或生长基质的方法。

Description

含纳他霉素和至少一种杀虫剂的抗真菌组合物
技术领域
本发明涉及控制植物和植物部分上的真菌病害的组合物以及涉及提高植物发育和产量的组合物。
背景技术
植物会受到多种植物病原真菌的侵袭，这在世界范围内给作物造成巨大的损失。真菌的生长还可导致营养物质的损失、异味的形成和组织的破坏，导致加工后质量损失。在许多情况下，真菌感染发生在田间，然后如果条件有利，真菌在储存期间发展，导致收获后损失(例如谷物、种子、花球、种薯、水果和蔬菜)或加工食品(例如早餐谷物、果汁或水果切块)霉变。
土壤、田间(农业植物部分(例如种子、鳞茎)和植物)和收获后(例如谷物、蔬菜和水果)的植物中，病原真菌通常由杀菌剂(尤其是合成杀菌剂)控制。然而，许多杀菌剂由于长期重复使用而失去活性，使得产生真菌抗药性。这种情况甚至出现在上市时间很短的新杀菌剂中(例如，在相关真菌中发生了一个单点突变，影响了甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的性能)。更常见的是，耐药性逐渐发展，使得病原体种群变得越来越不敏感(例如叶枯病菌对唑类杀菌剂产生耐药性)。抗药性的发展总是会产生越来越多的处理及更高剂量和/或不止一种杀菌剂的应用。
目前市场上的许多杀菌剂会通过造成有害影响(例如通过污染水源或由于对非目标生物的不良影响)来破坏自然生态系统。除了环境污染外，人体健康问题尤其是工人的安全问题也是一个重要的问题。此外，有害杀菌剂在农产品上的高残留水平，甚至超过最大残留限量，是一个严重的问题。消费者和政府监管机构越来越担心，使得在例如欧盟、美国、日本和许多其他国家实施更严格的监管。
能得出结论，尽管有许多商业杀菌剂可供使用并得到广泛使用，真菌仍然在几乎所有的作物和收获的农产品上发展。此外，能得出的结论是，在农业中，非常需要环境友好的替代品来取代目前使用的有害合成杀菌剂。
几十年来，多烯大环内酯类抗真菌纳他霉素一直用于防止食品(主要是奶酪和干发酵香肠)上的真菌生长。纳他霉素于1957年首次被描述，是通过使用链霉菌种(例如纳塔尔链霉菌)而发酵生产的。目前，这种天然抗菌剂作为食品添加剂在世界范围内被广泛使用。
纳他霉素有很长的安全使用历史，更重要的是，到目前为止，在自然界中从未发现过耐药真菌。多年来，相当多的文献已经发表，描述了纳他霉素在许多农业应用中的潜在用途。然而，能观察到，这几乎从未使得纳他霉素在农业中的商业使用。这可能是由于在使用前进行常规提纯的纳他霉素的价格对于农业用途，尤其是田间用途较高。
需要用于对抗真菌和减少农业经济损失的天然解决方案，特别是用于提高纳他霉素的功效以允许其在农业中的商业用途的的天然解决方案。
发明内容
本发明提供一种抗真菌组合物，所述抗真菌组合物包含纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂。所述至少一种杀虫剂优选是文件“IRAC作用模式分类方案”(2019年6月；9.3版)中确认的第2、3、4、6和/或28亚组的杀虫剂。
称为漏斗蜘蛛肽(funnel spider peptide)或“SPEAR生物杀虫剂”的生物杀虫剂可提供例外。这种肽被认为是针对烟碱乙酰胆碱受体的，最近被发现其有新的“神经和肌肉”作用模式。漏斗蜘蛛肽被插入到新的第32类中，它也可以作为干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂而被包括在内。
已经发现，干扰昆虫神经或肌肉活动的杀虫剂可提高纳他霉素对病原真菌的功效。在与具有其他作用模式(例如生长调节、昆虫中肠的微生物破坏剂、能量代谢(呼吸)或者未知或非特异的作用模式的杀虫剂(参见“IRAC作用模式分类方案”(2019年6月；9.3版))组合使用时，未被发现纳他霉素功效的这种增强。
多烯类杀菌剂(例如纳他霉素)已被报道与质膜相互作用，特别是与真菌膜甾醇相互作用。尽管据报道纳他霉素的作用方式与其他多烯类杀菌剂不同，但一些报道也描述了纳他霉素与主要真菌甾醇(麦角甾醇)的相互作用(te Welscher et al.,2008.J BiolChem 283:6393–6401)，从而调节膜流动性和膜结合酶的功能。麦角甾醇是真菌细胞膜中含量最丰富的甾醇，在那里它调节膜的通透性和流动性(Douglas and Konopka,2014.AnnuRev Microbiol 68:377–393)。
不受理论束缚，干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂的组对纳他霉素活性的显著刺激是基于这些杀虫剂在真菌或真菌孢子中影响细胞膜和/或受体，从而使这些真菌或真菌孢子更容易受到纳他霉素的影响的机制。在这些更脆弱的细胞膜中，纳他霉素能更有效地干扰细胞膜中的麦角甾醇。因此，纳他霉素能更有效地抑制真菌的孢子和菌丝的发育。
值得注意的是，诸如丙环唑的三唑抑制麦角甾醇的合成。因此，三唑化合物不太可能与第2、3、4、6和/或28亚组的杀虫剂产生协同作用，因为三唑杀菌剂不直接干扰细胞膜的组分。
根据本发明的抗真菌组合物优选地包含1％-98％(w/w)的纳他霉素，优选6％-60％(w/w)的纳他霉素和1％-99％(w/w)，优选5-50％(w/w)的所述至少一种杀虫剂。纳他霉素与第2、3、4、6和/或28亚组的所述至少一种杀虫剂的比例优选在1:1至1:5000(w/w)之间。
根据本发明的优选的抗真菌组合物包含纳他霉素及来自氟虫腈、λ-氯氟氰菊酯、啶虫脒、噻虫胺、吡虫啉、噻虫啉、噻虫嗪、abamectin和氯虫苯甲酰胺的至少一种杀虫剂。根据本发明的进一步优选的抗真菌组合物包含来自氟虫腈、λ-氯氟氰菊酯、啶虫脒、噻虫胺、吡虫啉、噻虫啉、噻虫嗪、abamectin和氯虫苯甲酰胺的至少两种杀虫剂。
根据本发明的抗真菌组合物可进一步包含农业上可接受的载体。
根据本发明的抗真菌组合物优选为水性或油性组合物。
在一个实施方案中，根据本发明的抗真菌组合物中的纳他霉素是通过发酵生物来发酵生物质来生产的。
根据本发明的抗真菌组合物中的纳他霉素优选被分级(例如通过研磨)至0.5-3微米的平均粒度(体积粒度)。
根据本发明的组合物优选进一步包含相对量在1:2至60:1(w/w)之间的聚阴离子(如木质素化合物)和聚阳离子的(例如壳聚糖或聚烯丙基胺)的不溶性聚电解质复合物。
本发明进一步提供一种用于保护农业植物或植物部分的方法，所述方法包括：提供根据本发明的抗真菌组合物，以及将所述组合物应用于所述农业植物或植物部分。优选的植物部分是种子、鳞茎、果实或蔬菜。
本发明进一步提供一种用于改善农业植物的发育和/或产量的方法，所述方法包括：提供根据本发明的组合物，以及将植物与所述组合物接触。
本发明进一步提供一种用于保护土壤和/或生长基质的方法，所述方法包括：将根据本发明的组合物应用于所述土壤和/或生长基质。优选的生长基质是蘑菇生长基质。
根据本发明的优选方法，使用的所述组合物要么未经稀释，要么在水性溶液或油中稀释至多106倍。使用的抗真菌组合物要么未经稀释，要么在将所述组合物提供给种子之前将其在水性溶液中稀释至多100倍。将所述组合物提供给植物、植物部分、土壤和/或生长基质之前，所述组合物可被稀释(优选在10-106倍之间)在水性溶液或油中。
本发明进一步提供根据本发明的抗真菌组合物在保护植物、植物部分、土壤和/或生长基质对抗真菌中的用途。
具体实施方式
定义
如本文所使用的，术语“悬浮浓缩物”是指在液体中的固体颗粒悬浮物，用于在使用前用水稀释。
如本文所使用的，术语“可溶性液体”是指用于在使用前用水稀释的液体溶液。所述液体可以是水性液体或非水性液体(例如石油基溶剂(如二甲苯或煤油))。
如本文所使用的，术语“悬浮乳状液”是指悬浮在水中固体颗粒与油相结合的乳状液形式，用于在使用前用水稀释。
如本文所使用的，术语“分散浓缩物”是指固体颗粒在液体中的分散，用于在使用前用水稀释。
如本文所使用的，术语“水分散颗粒”是指颗粒形式的制剂，其可分散在水中形成分散体(例如悬浮液或溶液)。
如本文所使用的，术语“可湿性粉剂”是指在使用前用于与水或另一种液体混合的粉剂制剂。
如本文所使用的，术语“水可浆化粉末”是指在使用前在水中制成浆料的粉末制剂。
如本文所使用的，术语“表面活性剂”是指离子型或非离子型表面活性剂。表面活性剂的示例是烷基封端的乙氧基化物二醇、烷基封端的烷基嵌段烷氧基化物二醇、磺基琥珀酸二烷基酯、磷酸酯、烷基磺酸盐、烷基芳基磺酸盐、三苯乙烯基苯酚烷氧基化物、天然或合成脂肪酸烷氧基化物、天然或合成脂肪醇烷氧基化物、烷氧基化醇(例如正丁醇聚乙二醇醚)、嵌段共聚物(例如环氧乙烷-环氧丙烷嵌段共聚物和环氧乙烷-环氧丁烷嵌段共聚物)或它们的组合。
如本文所使用的，术语“增加生物活性”是指改善活性成分的治疗、预防和/或持久性能。
如本文所使用的，术语“植物部分”是指单细胞、细胞团和植物组织，包括组织培养物。植物部分的示例包括但不限于花粉、胚珠(ovules)、叶、胚芽(embryos)、根、根尖、花药、花、果实、芽、接穗、根茎、种子、原生质体、愈伤组织等，优选种子。
抗真菌组合物
本发明提供一种抗真菌组合物，该抗真菌组合物包含纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂。所述至少一种杀虫剂优选属于以下亚组：第2(GABA门控氯离子通道阻滞剂)、3(钠通道调节剂)、4(烟碱乙酰胆碱受体的竞争性调节剂)、6(谷氨酸门控氯离子通道的变构调节剂)和/或28(利阿诺定受体调节剂)，这些亚组确定在文件“IRAC作用模式分类方案”(2019年6月；版本9.3)中。已经发现一种或更多种所述杀虫剂和纳他霉素的组合出人意料地增加了所述纳他霉素的生物活性，即纳他霉素的杀真菌活性。
优选的杀虫剂是GABA门控氯离子通道阻滞剂。GABA门控氯离子通道阻滞剂被认为作用于昆虫的神经系统。优选的GABA门控氯离子通道阻滞剂是环二烯、有机氯和/或苯基吡唑。优选的GABA门控氯离子通道阻滞剂是氟虫腈((±)-5-氨基-1-(2,6-二氯-α,α,α-三氟-对甲苯基)-4-三氟甲基亚磺酰基吡唑-3-腈)。
优选的杀虫剂是钠通道调节剂。钠通道调节剂被认为作用于昆虫的神经系统。优选的钠通道调节剂是拟除虫菊酯和/或除虫菊酯。优选的钠通道调节剂是氯氟氰菊酯([氰基-(3-苯氧基苯基)甲基]3-[(Z)-2-氯-3,3,3-三氟丙-1-烯基]-2,2-二甲基环丙烷-1-羧酸盐)，优选λ-氯氟氰菊酯([(R)-氰基-(3-苯氧基苯基)甲基](1S,3S)-3-[(Z)-2-氯-3,3,3-三氟丙-1-烯基]-2,2-二甲基环丙烷-1-羧酸盐)。
优选的杀虫剂是烟碱乙酰胆碱受体的竞争性调节剂。烟碱乙酰胆碱受体的竞争性调节剂被认为作用于昆虫的神经系统。优选的烟碱乙酰胆碱受体的竞争性调节剂是新烟碱。优选的烟碱乙酰胆碱受体的竞争性调节剂是啶虫脒(N-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-N'-氰基-N-甲基硫酰胺)、吡虫啉(N-[1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-4,5-二氢咪唑-2-基]硝胺)、噻虫啉([3-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-1,3-噻唑-2-亚基]氰胺)和/或噻虫嗪(N-[3-[(2-氯-1,3-噻唑-5-基)甲基]-5-甲基-1,3,5-恶二嗪-4-亚基]硝酰胺)。
优选的杀虫剂是谷氨酸门控氯离子通道的变构调节剂。谷氨酸门控氯离子通道的变构调节剂被认为作用于昆虫的神经系统。优选的谷氨酸门控氯离子通道的变构调节剂是avermectin和/或米尔贝霉素。优选的谷氨酸门控氯离子通道的变构调节剂是abamectin((1'R,2R,3S,4'S,6S,8'R,10'E,12'S,13'S,14'E,16'E,20'R,21'R,24'S)-2-丁-2-基-21',24'-二羟基-12'-[(2R,4S,5S,6S)-5-[(2S,4S,5S,6S)-5-羟基-4-甲氧基-6-methyloxan-2-基]氧基-3,11',13',22'-四甲基螺[2,3-二氢吡喃-6,6'-3,7,19-三氧杂四环[15.6.1.14,8.020,24]pentacosa-10,14,16,22-四烯]-2'-酮；(1'R,2R,3S,4'S,6S,8'R,10'E,12'S,13'S,14'E,16'E,20'R,21'R,24'S)-21',24'-二羟基-12'-[(2R,4S,5S,6S)-5-[(2S,4S,5S,6S)-5-羟基-4-甲氧基-6-methyloxan-2-基]氧基-4-甲氧基-6-methyloxan-2-基]氧基-311',13',22'-四甲基-2-丙烷-2-螺[2,3-二氢吡喃-6,6'-3,7,19-三氧杂四环[15.6.1.14,8.020,24]pentacosa-10,14,16,22-四烯]-2'-酮)、甲维菌素苯甲酸盐([(2S,3S,4S,6S)-6-[(2S,3S,4S,6R)-6-[(1'R,2R,3S,4'S,6S,8'R,10'E,12'S,13'S,14'E,16'R,20'R,21'R,24'S)-2-[(2S)-丁烷-2-基]-21',24'-二羟基-3,11',13',22'-四甲基-2'-氧代螺[2,3-二氢吡喃-6,6'-3,7,19-三氧杂环四环[15.6.1.14,8.020,24]pentacosa-10,14,16,22-四烯]-12'-基]氧基-4-甲氧基-2-methyloxan-3-基]氧基-4-甲氧基-2-methyloxan-3-基]-甲基氮铵；苯甲酸盐)、雷皮菌素([(1R,4S,5'S,6R,6'R,8R,10E,12R,13S,14E,20R,21R,24S)-6'-乙基-21,24-二羟基-5',11,13,22-四甲基-2-氧代螺环[3,7,19-三氧杂环[15.6.1.14,8.020,24]pentacosa-10,14,16,22-四烯-6,2'-氧烷]-12-基](2Z)-2-甲氧基亚氨基-2-苯乙酸盐)和/或弥拜菌素((1R,4S,5'S,6R,6'R,8R,10E,13R,14E,16E,20R,21R,24S)-21,24-二羟基-5',6',11,13,22-五甲基螺[3,7,19-三氧杂环[15.6.1.14,8.020,24]pentacosa-10,14,16,22-四烯-6,2'-氧烷]-2-酮)。
优选的杀虫剂是利阿诺定受体调节剂。利阿诺定受体调节剂被认为作用于昆虫的神经系统。优选的利阿诺定受体调节剂是二酰胺。优选的二酰胺是氯虫苯甲酰胺(5-溴-N-[4-氯-2-甲基-6-(甲基氨基甲酰基)苯基]-2-(3-氯吡啶-2-基)吡唑-3-甲酰胺)。
本发明的组合物优选包含1％-98％(w/w)的纳他霉素，优选6％-60％(w/w)的纳他霉素。本发明的组合物优选包含1％-99％(w/w)(优选5-50％(w/w))的所述至少一种杀虫剂。本发明的未经稀释的组合物包含1％-98％(w/w)(优选6％-60％(w/w))的纳他霉素和1％-90％(w/w)(优选5％-50％(w/w))的所述至少一种杀虫剂。
在广泛的杀虫剂浓度范围中观察到第2、3、4、6和/或28亚组的杀虫剂(参见IRAC作用模式分类方案)对纳他霉素杀菌活性的协同作用。引起这种情况的原因可能是所述杀虫剂影响真菌细胞膜中的蛋白质，这使得这些膜更容易受到纳他霉素的影响。由此，纳他霉素更有效地抑制了孢子和菌丝的发育。
优选地，组合物通过纳他霉素:杀虫剂的比例(w/w)表征。值得注意的是，所述至少一种杀虫剂的上限难以确定，因为杀虫剂本身在较高浓度下开始具有杀真菌活性。实验表明，所述杀虫剂可能不存在上限。实施例显示，能在1:2500甚至1:7520(w/w)(纳他霉素:杀虫剂)的比例下观察到关于纳他霉素的杀真菌活性的协同作用。纳他霉素和2、3、4、6和/或28亚组的杀虫剂(优选纳他霉素和选自氟虫腈、λ-氯氟氰菊酯、啶虫脒、噻虫胺、吡虫啉、噻虫啉、噻虫嗪、abamectin和氯虫苯甲酰胺的至少一种杀虫剂)之间的优选比例在(纳他霉素:杀虫剂)1:1(w/w)和1:10000(w/w)之间(例如在1:2和1:250之间(例如在1:50和1:100之间))。优选的比例包括1:2、1:3、1:4和1:5。
本领域技术人员将理解，对于种子和土壤应用，所述比率优选在(纳他霉素:杀虫剂)1:1和1:100(w/w)之间。其原因是需要用大量杀虫剂处理种子，以使杀虫剂的保护作用延长到胚芽，最好甚至在幼苗阶段。
优选将本发明的组合物分级，优选通过研磨(例如使用珠磨机(例如
Figure BDA0003503380350000061
))。纳他霉素的基于体积的平均粒度优选为0.2-10微米之间，优选0.5-5微米之间，更优选0.5-2微米之间。用于确定根据本发明的组合物的基于体积的平均粒度的方法是技术人员所知晓的。例如，Hukkanen and Braatz,2003.Sensors and Actuators B 96:451–459讨论了可用于确定组合物平均粒度的各种方法，包括前向光散射和超声波消光。优选的方法基于激光衍射分析，例如使用Analysette 22-MicroTec plus激光粒度仪(Fritsch,Idar-Oberstein,Germany)。
根据本发明的抗真菌组合物可以包括细胞物质。根据本发明的组合物中的所述纳他霉素优选通过发酵生物发酵生物质而产生，并且组合物中存在的细胞物质来自所述产生纳他霉素的发酵生物。所述产生纳他霉素的发酵生物包括例如纳塔尔链霉菌和褐黄孢链霉菌。
所述细胞物质优选包括作为产生纳他霉素的细菌的残余物的化合物，或由产生纳他霉素的细菌排泄的化合物。此类化合物的示例是细菌细胞包膜的化合物，其包括产生纳他霉素的细菌的细胞膜和细胞壁。此类化合物包括磷脂(例如磷脂和糖脂)它们在水解(例如通过添加氢氧化钠)时，产生脂肪酸(例如C16-C18脂肪酸)。
用于通过发酵生物(例如纳塔尔链霉菌和褐黄孢链霉菌)发酵生物质来生产纳他霉素的方法是本领域公知的。从大部分生物质中纯化产生的纳他霉素的方法是本领域公知的。例如，生物质的分解可能使得生产生物的所有细胞的溶解和破坏。可以过滤所得的包含纳他霉素的发酵液以获得滤饼，随后用醇，优选甲醇和/或乙醇，对其进行处理，以分解生物质并溶解至少一部分纳他霉素。如有必要，可增加pH值以溶解纳他霉素。随后的中和将使得至少一部分纳他霉素沉淀。
本发明的组合物优选是水性或非水性(优选油性)的浓缩原液组合物，其可以用合适的稀释剂(例如水或油在使用前；或用水性或非水性即用组合物)稀释。
本发明的组合物可用于土壤处理以准备种子处理，如种子敷料或种子包衣、包衣乳剂(例如用于田间的水果或植物)、应用于水果(例如菠萝、橘子或苹果)的蜡、通过喷洒田间的植物(例如香蕉)而应用的油。本发明的组合物还包括浓缩的干燥组合物(例如能用于制备用于浸泡、喷洒或浸渍农产品的组合物的颗粒、粉末和/或片剂)。
本发明的抗真菌组合物优选为悬浮浓缩物(SC)、水分散粒剂(WG)、可湿性粉剂(WP)、悬乳剂(油性)(SE)、油分散体(OD)、分散浓缩物(DC)、干粉种子处理组合物(DS)、水可浆化粉末(WS)、可流动种子处理组合物(FS)、水分散粒剂种子处理组合物(WG)、悬乳剂(SE)或可溶性液体(SL)。
本发明的抗真菌组合物优选包含如公开的国际专利申请WO2013/133706中所描述的聚阴离子和聚阳离子的聚电解质复合物，该申请以引用方式并入本文，或本领域公知的任何其他封装技术(例如，脂质体、脂质结构或空细胞(例如其中包封有本发明的组合物的酵母)。
所述聚电解质复合物是形成强静电连接的带相反电荷的聚电解质(聚阴离子和聚阳离子)的复合物。所述聚电解质复合物为不溶性复合物。这种复合物本身不具有抗菌功效。聚电解质复合物具有粘性并包含极性部分(带电)和非极性部分。复合物中的芳族部分可以对抗微生物化合物(例如纳他霉素)具有亲和力。结合聚电解质复合物的粘性特性，对于农业、园艺和蘑菇种植上的使用，抗菌化合物将最佳地沉积并粘附在土壤上。
聚电解质复合物包含聚阴离子(例如木质素化合物(如木质素磺酸盐、腐植酸、硫酸软骨素和聚(丙烯酸))及聚阳离子(例如壳聚糖、ε聚(L)赖氨酸和聚烯丙胺)，它们的相对量在1:2和60:1(w/w)之间，更优选在1:1和50:1之间，更优选在2:1和30:1之间(例如约2:1、约5:1、约10:1；约15:1、约20:1、约25:1和约30:1(w/w))。聚电解质复合物中聚阴离子(优选木质素化合物)和聚阳离子(优选壳聚糖)的相对量最优选为约5:1(w/w)。
聚电解质复合物优选以本发明组合物的5-800g/l、更优选50-500和最优选75-250g/l的浓度存在于本发明的组合物中。
根据本发明的抗真菌组合物可进一步包含一种或更多种农业上可接受的载体。所述农业上可接受的载体优选为或包括稳定剂、润湿剂、分散剂、防冻剂、消泡剂和/或增稠剂。添加少量一种或更多种农业上可接受的载体可影响，优选地改善根据本发明的组合物的参数(例如稳定性和/或功效)添加少量一种或更多种农业上可接受的载体优选地增加根据本发明的组合物的稳定性、功效和/或耐雨性。
在存在稳定剂的情况下，稳定剂优选选自羧酸(例如柠檬酸、乙酸和/或十二烷基苯磺酸)、正磷酸十二烷基苯磺酸及它们的合适的盐。本发明的组合物还可包括两种或更多种不同的稳定剂。稳定剂优选以0至最多10％(w/v)之间，更优选0.01至最多5％(w/v)之间，更优选0.02至最多1％(w/v)之间，更优选约5％(w/v)之间的量存在。
在存在润湿剂的情况下，润湿剂优选选自二辛基琥珀酸酯、聚氧乙烯/聚丙烯和三硬脂磺酸酯/磷酸酯。本发明的组合物还可包括两种或更多种不同的润湿剂。润湿剂优选以0至最多10％(w/v)之间，更优选0.01至最多5％(w/v)之间，更优选0.02至最多1％(w/v)之间，更优选约5％(w/v)之间的量存在。
在存在分散剂的情况下，分散剂优选选自
Figure BDA0003503380350000071
D425、木质素磺酸盐、烷基多糖、苯乙烯丙烯酸聚合物、丙烯酸共聚物和乙氧基化三苯乙烯苯酚磷酸盐(例如聚乙氧基化膦酸)。本发明的组合物还可包括两种或更多种不同的分散剂。分散剂优选以0至最多10％(w/v)之间，更优选0.01至最多5％(w/v)之间，更优选0.02至最多1％(w/v)之间，更优选约5％(w/v)之间的量存在。
在存在防冻剂的情况下，防冻剂优选选自甘油、乙二醇、己二醇和丙二醇。本发明的组合物还可包括两种或更多种不同的防冻剂。防冻剂优选以0至最多10％(w/v)之间，更优选0.01至最多5％(w/v)之间，更优选0.02至最多1％(w/v)之间，更优选约5％(w/v)之间的量存在。
在存在消泡剂的情况下，消泡剂优选选自聚甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、二甲基硅油辛醇和硅油。本发明的组合物还可包括两种或更多种不同的消泡剂。消泡剂优选以0至最多10％(w/v)之间，更优选0.05至最多5％(w/v)之间，更优选0.1至最多1％(w/v)之间，更优选约5％(w/v)之间的量存在。
在存在增稠剂的情况下，增稠剂优选选自琼脂、海藻酸、海藻酸盐、角叉菜胶、结冷胶、黄原胶、琥珀聚糖胶、瓜尔胶、乙酰化己二酸二淀粉、乙酰化氧化淀粉、阿拉伯半乳聚糖、乙基纤维素、甲基纤维素、刺槐豆胶、淀粉辛烯基琥珀酸钠和柠檬酸三乙酯。本发明的组合物还可包括两种或更多种不同的增稠剂。增稠剂优选以0至最多10％(w/v)之间，更优选0.01至最多5％(w/v)之间，更优选0.02至最多1％(w/v)之间，更优选约5％(w/v)之间的量存在。
根据本发明的组合物提供了稳定的水悬浮液，该悬浮液包含高浓度的纳他霉素和所述至少一种杀虫剂，最高约30％(w/v)，在存在作为农业上可接受的载体的相对少量的佐剂的情况下，与所述纳他霉素的市售制剂相比，具有改善的杀真菌活性。
在一些实施方案中，组合物进一步包含一种或更多种物理稳定剂和/或添加剂(例如缓冲剂、酸化剂和漂移阻滞剂)、颜料、安全剂和防腐剂。
使用方法
本发明进一步提供了一种保护农业植物或农业植物部分的方法，该方法包括提供纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，以及将所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂应用于农业植物或植物部分，从而使得农业植物或农业植物部分与足量的所述纳他霉素和至少一种杀虫剂接触。
保护农业植物或农业植物部分的优选方法包括提供根据本发明的组合物，以及将所述组合物应用于农业植物或植物部分，从而使得农业植物或农业植物部分与足量的所述组合物接触。
所述方法优选地用于保护植物或植物部分免受真菌的侵害，优选地免受霉菌的侵害。
如本文所使用的，术语“植物”和“作物”均指为食物、衣服、牲畜饲料、生物燃料、医药或其他用途而栽培的植物、树木或真菌。
所述植物部分优选为叶、茎、种子、鳞茎(bulb)、球茎(flower bulb)、种薯、根、块茎、果实和/或蔬菜，最优选种子、鳞茎、果实或蔬菜。
本发明进一步提供一种用于改善农业植物的发育和/或产量的方法，所述方法包括提供纳他霉素和干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，以及将植物与所述纳他霉素和及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂接触。
用于改善农业植物发育和/或产量的优选方法包括提供根据本发明的组合物，以及将植物与所述组合物接触。
含纳他霉素的组合物及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂的组合物，优选本发明的组合物能以许多不同的方式应用。例如，所述一种或多种组合物能通过以下方式应用：(1)喷洒田间或温室中的植物，可选地使用载体(例如蜡或油)；(2)浸渍种子、鳞茎或种薯；(3)添加(例如通过土壤)到植物部分(例如种子或根系)；(4)通过种子包衣或种子敷料添加到植物部分(例如种子、种薯或鳞茎)；(5)添加到种子将被种植或者发芽和/或植物或者蘑菇正在发育的土壤或者生长基质中；(6)添加到水或浇水系统(例如应用于温室或田间的)中；(7)处理(例如浸渍或喷洒)收获的植物部分(例如鳞茎、种子、谷类、大豆、花、果实、蔬菜或植物)。
本发明的组合物能不稀释或稀释后应用。通常，本发明的组合物将通过水或油稀释、通过敷料、包衣或蜡来应用。根据本发明的组合物优选未经稀释或经稀释。对于种子处理，根据本发明的组合物优选未经稀释或经稀释至最多10倍或100倍。对于本发明的方法中的其他应用，根据本发明的组合物优选在水性溶液或油中经稀释10-106倍之间。容易理解的是，由于不同的应用可能需要不同的处理，本发明组合物的需要量在每种应用中将不同。然而，通常，处理产品(例如生长基质、土壤、种子、鳞茎、田间植物或收获的果实)所需的即用组合物(例如浸渍或喷雾悬浮液)中的组合物的量，按组合物中纳他霉素的量计算，将为10-100000ppm纳他霉素，更优选30-50000ppm纳他霉素，最优选50-5000ppm纳他霉素。
土壤或生长培养基中、植物上或收获的植物部分上纳他霉素的最终量能以不同方式表示。作为第一个示例，纳他霉素的量在例如通过例如种子敷料或种子包衣应用的种子上为每公斤种子0.01-20.0克纳他霉素，更优选每公斤种子0.05-5.0克纳他霉素，最优选每公斤种子0.1-2.0克纳他霉素。
作为第二个示例，用于浸渍或喷洒产品(例如球茎、种薯、洋葱、苹果、梨、香蕉和菠萝)的本发明组合物通常包含0.01g/l至100g/l，优选0.03g/l至50g/l，最优选0.05g/l至5g/l纳他霉素。
处理产品(例如球茎、种薯、洋葱、苹果、梨、香蕉和菠萝)后，通常产品上的纳他霉素的量是0.01-20.0mg/dm2，优选地0.1-10.0mg/dm2。
在生长基质(例如蘑菇生长基质)的处理的情况下，每次喷洒处理将增加每m2生长基质0.01-5.0克纳他霉素，更优选每m2生长基质0.02-1.0克纳他霉素。
在处理土壤(例如种植蔬菜或观赏植物的土壤)的情况下，应用的纳他霉素为0.01-5.0克每m2，优选混合在土壤的上层，更优选纳他霉素为0.1-1.0克每m2。在田间作物上喷洒的情况下，典型的纳他霉素的剂量是每公顷纳1-5000克，更优选每公顷50-2000克。然而，对于诸如香蕉的作物，纳他霉素的最佳剂量是每公顷5-500克，更优选每公顷10-100克。
纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，优选本发明的组合物，能在任何合适的时间使用任何合适的方法添加到生长培养基、土壤、植物或植物部分；例如，在种植例如种子、鳞茎、种薯、插条或幼苗种植之前、期间或之后；在田间生长期间，果实、蔬菜、坚果或球茎的收获或者储存期间。
本发明的一个方面提供了干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂的用途，用于增加纳他霉素的生物活性。根据本发明的所述用途可使得所述纳他霉素的施用率降低和/或所述纳他霉素的生物活性增加。
本发明的一个方面提供了干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂的用途，用于增加存在于植物上、植物部分上或土壤中的纳他霉素的生物活性。所述杀虫剂可提高所述纳他霉素的生物活性。所述至少一种杀虫剂优选为文件“IRAC作用模式分类方案”(2019年6月；版本9.3)中所确定的以下亚组：第2(GABA门控氯离子通道阻滞剂)、3(钠通道调节剂)、4(烟碱乙酰胆碱受体的竞争性调节剂)、6(谷氨酸门控氯离子通道的变构调节剂)和/或28(利阿诺定受体调节剂)。
术语“减少的施用率”和“增加的生物活性”可以指在与不使用所述至少一种杀虫剂的纳他霉素的施用率相比的情况下，纳他霉素的施用率的减少超过10％以上，优选超过30％。
所述减少的施用率可指5mg活性成分(a.i.)/ha至2.5kg a.i./ha，优选1g a.i./ha至2kg a.i./ha的施用率(例如100-750g a.i./ha(包括600g a.i./ha、500g a.i./ha、400g a.i./ha、300g a.i./ha、200g a.i./ha和100g a.i./ha))。
本发明的抗真菌组合物适用于防治园艺、农业和林业中遇到的害虫。该抗真菌组合物对通常敏感和抗性的害虫物种以及在所有或个别发育阶段都具有活性。在使用之前，含根据本发明的抗真菌组合物的组合物优选溶解或分散在水中，或用水稀释，以提供含0.001至10w/v％的生物活性的纳他霉素的水性组合物。如果需要，将农业上可接受的载体(例如粘附剂)加入到经稀释的水性组合物。
在用组合物接触植物、植物部分或土壤之前，将根据本发明的组合物用水性溶剂(优选水)优选稀释2-5000倍(优选约200倍)以含有0.0001至10％(w/v)的纳他霉素。
为了防治农业害虫，本发明提供纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂的用途，优选用于保护植物或植物部分免受病原体侵害的含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物。为了实现这种效果，使所述植物或植物部分或者土壤与所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂接触，优选与所述组合物(包括上文中描述的稀释的水性组合物)接触。所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选所述组合物，用于例如控制食物/饲料作物(例如树果、蔬菜作物、田间作物、葡萄、观赏植物和草皮农场)的白粉病和灰霉菌感染。进一步的用途(例如控制赤霉病(包括马铃薯上的普通赤霉病、苹果黑星病和黑赤霉病；梨黑星病及粉状赤霉病)、桃子的褐腐病、醋栗和鹅莓叶斑病、镰刀菌病、花生叶斑病及玫瑰霉病。其他用途包括保护温室种植的花卉和观赏植物、家庭菜园和住宅草坪。此外，所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选所述组合物，包括经稀释的水性组合物，可以与分离的种子、果实、坚果、蔬菜和/或花接触。
本发明进一步提供了一种保护植物或植物部分免受病原体侵害的方法，该方法包括将所述植物或所述植物部分与纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂接触，优选地与经稀释的根据本发明的水性组合物，该水性组合物包含纳他霉素及神经和肌肉杀虫剂，优选地在文件“IRAC作用模式分类方案”(2019年6月；版本9.3)中确定的第2、3、4、6和/或28亚组的杀虫剂。
本发明进一步提供了一种预防、减少和/或消除植物或植物部分上的病原体存在的方法，该方法包括将所述植物或所述植物的部分与纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选地根据本发明的水性组合物)接触。
对于所述用途和所述方法，纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选所述组合物(包括经稀释的水性组合物)，优选喷洒在植物或其部分上。喷洒应用，包括使用自动喷洒系统，公知可以减少劳动力成本，并具有成本效益。本领域技术人员熟知的方法和设备能用于该目的。在感染风险高时，能定期喷洒纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选所述组合物，包括经稀释的水性组合物。如本领域技术人员公知的，在感染风险低时，喷洒间隔可能更长。
适用于将植物或其部分与纳他霉素和及扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选本发明的组合物)接触的其他方法也是本发明的一部分。这些方法包括但不限于浸渍、浇水、淋水、进入倾倒槽、汽化、雾化(atomizing/fogging)、熏蒸、油漆、刷洗、雾化、除尘、起泡、铺开、包装和涂层(例如通过蜡或静电方式)。此外，纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选本发明的组合物，包括经稀释的含水组合物，可以注射到土壤中。
例如，通过将植物或其部分浸入纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选地根据本发明的稀释的水性组合物)中，植物部分可以用纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选含纳他霉素和至少一种杀虫剂的经稀释的根据本发明的水性组合物)包被，以保护其植物部分免受病原体的侵害和/或防止、减少和/或消除植物或植物部分上存在的病原体。
用纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选根据本发明的组合物或其稀释液)包被的优选的植物部分是种子。用纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选根据本发明的组合物或其稀释液)包被的进一步优选的植物部分是果实，优选收获后的果实(例如柑橘类水果(例如橘子、柑橘和酸橙)、梨果水果(例如苹果和梨)、核果类水果(例如杏仁、杏、樱桃、达森、油桃、番茄、西瓜)、热带水果(例如香蕉、芒果、荔枝和橘(tangerine))。优选的水果是柑橘类水果(例如橘子)和/或热带水果(例如香蕉)。
本发明进一步提供了一种控制由植物或其繁殖材料中的植物病原真菌引起的疾病的方法，该方法包括将植物或其繁殖材料与纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选根据本发明的组合物，包括经稀释的水性组合物)接触。
本发明进一步提供一种控制害虫的方法，该方法包括用纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选用含纳他霉素和至少一种杀虫剂的本发明的组合物来与害虫会侵染的(i)害虫或其所在地、(ii)植物或其所在地或繁殖材料、(iii)土壤和/或(iv)区域接触。
本发明进一步提供一种改进害虫防治的方法，该方法包含将纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选本文所述的组合物，应用至植物/或土壤。
本发明进一步提供了一种用于延长纳他霉素对植物、土壤的植物部分的防治效果的方法，该方法包含将纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂(优选地本发明的组合物或其稀释液)应用于植物、植物部分或土壤。
在一些实施方案中，靶标是植物、植物部分、土壤或生长基质。在一些实施方案中，靶标是真菌。
本发明还提供了一种通过预防、治疗或持续处理由植物病原真菌引起的植物病害来控制害虫的方法，该方法包含将植物、其所在地或其繁殖材料与有效量的纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂接触，优选地与含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物接触。
所描述的含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物可被应用于健康或患病植物。所描述的组合物能用于各种植物(包括但不限于作物、种子、鳞茎、繁殖材料或观赏物种)。
本发明提供了一种控制由植物或其繁殖材料上的植物病原真菌引起的疾病的方法，该方法包含将植物、其所在地或其繁殖材料与纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂接触，优选地与含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物。
在一些实施方案中，该真菌是小麦叶斑病菌(小麦叶枯菌Mycosphaerellagraminicola；真菌的无性状态：Septoria tritici)、小麦褐锈病(Puccinia triticina)、条锈病(Puccinia striiformis f.sp.tritici)、苹果黑星病(Venturia inaequalis)、玉米黑穗病(Ustilago maydis)、葡萄白粉病(Uncinula necator)、大麦烫伤病(Rhynchosporium secalis)、稻瘟病(Magnaporthe grisea)、大豆锈病(Phakopsorapachyrhizi)、小麦颖枯病(Leptosphaeria nodorum)、小麦白粉病(Blumeria graminisf.sp.tritici)、大麦白粉病(Blumeria graminis f.sp.hordei)、葫芦科白粉病(Erysiphecichoracearum)、葫芦科炭疽病(Glomerella lagenarium)、甜菜叶斑病(Cercosporabeticola)、番茄早疫病(Alternaria solani)和大麦网斑病(Pyrenophora teres)。
在一些实施方案中，纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物，以有效防治害虫的速率应用。在一些实施方案中，纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物以有效预防害虫侵染的速率应用。在一些实施方案中，纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选含纳他霉素和至少一种杀虫剂的根据本发明的组合物以有效治愈害虫侵染的速率应用。
在一些实施方案中，本发明的方法对于预防害虫的侵染是有效的。在一些实施方案中，该方法对于治愈害虫的侵扰是有效的。在一些实施方案中，该方法对于增加纳他霉素的杀虫活性是有效的。在一些实施方案中，该方法对于延长纳他霉素的杀虫效果是有效的。
在一些实施方案中，本发明的方法对于降低纳他霉素的半数最大有效浓度(EC50)是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将EC50降低至少10％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将EC50降低至少25％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将EC50降低至少35％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将EC50降低至少50％是有效的。
在一些实施方案中，本发明的方法对于降低纳他霉素的LC50是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC50降低至少10％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC50降低至少25％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC50降低至少50％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC50降低至少75％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC50降低至少90％是有效的。
在一些实施方案中，本发明的方法对于降低纳他霉素的LC90是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC90降低至少10％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC90降低至少25％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC90降低至少50％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC90降低至少75％是有效的。在一些实施方案中，该方法对于将LC90降低至少90％是有效的。
在一些实施方案中，本发明的方法进一步包含将至少一种另外的农用化学品应用于害虫、植物部分、植物、场所或其繁殖材料。所述另外的农用化学品可以在罐中混合，或与纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的杀虫剂，优选地与含纳他霉素和至少一种杀虫剂的组合物，一起应用于植物、植物部分、土壤或生长基质。
本发明通过以下实施例进行说明，但不以此为限。
实施例
通用
1.实验中使用的纳他霉素配方。
以0(对照)、50ppm、100ppm和200ppm的浓度在苹果上测试纳他霉素。纳他霉素的配方如表1所示：
表1实施例中使用的纳他霉素配方。
Figure BDA0003503380350000131
2.实验中使用的杀虫剂配方。
杀虫剂的活性成分噻虫嗪(Merck；37924)、吡虫啉(Merck；37894)、Abamectin(Merck；31732)和毒死蜱(Merck；45395)配制成如表2所示的组合物。
表2用作活性成分的噻虫嗪、吡虫啉、Abamectin和毒死蜱的杀虫剂配方。
Figure BDA0003503380350000132
Figure BDA0003503380350000141
Figure BDA0003503380350000142
Figure BDA0003503380350000143
Figure BDA0003503380350000144
对于活性成分氟虫腈、λ-氯氟氰菊酯、α-氯氰菊酯、啶虫脒、甲维菌素苯甲酸酯、氯虫苯甲酰胺、氟苯二胺、芬氧威、苏云金芽孢杆菌、氯苯吡菌胺和印苦楝素，使用了商业产品(参见表3)。
3.实施例中使用的杀虫剂的剂量率。
在实施例中，纳他霉素与杀虫剂的标准标签剂量率相组合。实施例中使用的杀虫剂活性成分的量提供在表3中。
表3在与纳他霉素组合的实施例中使用的杀虫剂浓度。
Figure BDA0003503380350000151
*所使用的量是通过杀虫剂产品在植物组织或种子上使用AI的剂量率。
4.协同作用的确定
在一些情况下，发现杀虫剂对纳他霉素抗真菌活性的刺激具有协同作用。Colby方程(Colby,1967.Weeds 15:20–22)计算含超过一种活性成分的组合物的预期抗真菌活性(E，以％为单位)：
其中，XE＝X+Y-[(X·Y)/100]和Y分别是单个活性成分x和y的观察到的抗真菌活性(以％为单位)。如果观察到的组合物的抗真菌活性(O，以％为单位)超过了组合的预期抗真菌活性(E，以％为单位)，因此协同因子O/E>1.0，则活性成分的组合应用产生协同抗真菌的影响。
实施例1杀虫剂对于纳他霉素对人为感染植物组织的杀菌作用的功效测试。
材料和方法
苹果cv Elstar来自有机来源并通过了SKAL认证。SKAL是一个半官方的荷兰组织，控制荷兰的有机生产。
使用含有～105繁殖体(孢子)/ml的灰葡萄孢孢子悬浮液。
果皮被直径为0.6cm、深度约0.5cm的软木钻孔器损坏，每个苹果果实有2个伤口。用移液管将30微升新鲜制备的灰葡萄孢孢子悬浮液(～105孢子/ml)应用在每个伤口上。随后，将孢子悬浮液风干3小时。通过移液管将如下表4和5中所示的50微升纳他霉素和/或杀虫剂应用于每个伤口。
所有果实都保存在室温(20℃)下。每天检查伤口并在10天后记录。
所有处理均在6个单独的苹果上执行，每个苹果有2个伤口，每次处理产生12个伤口。记录的观察到的抗真菌活性是与未处理对照的腐烂表面积相比，在12个伤口中观察到的腐烂平均表面积的减少(百分比)。
结果
结果列于表4和表5。单个字母表示不同的感染率(表面积)，其中A为最高感染区域，B、C、D为递减感染区域(B显著低于A；C显著低于B；D显著低于C)。这些结果清楚地显示，杀虫剂本身不具有杀真菌活性，但作用模式是通过昆虫的神经或肌肉系统的表4的杀虫剂，刺激纳他霉素对苹果植物组织的杀真菌作用，而表5的杀虫剂的作用方式不是通过昆虫的神经或肌肉系统，其不能刺激纳他霉素对苹果植物组织的杀真菌作用。
表4活性杀虫剂
Figure BDA0003503380350000161
Figure BDA0003503380350000171
表5非活性杀虫剂
Figure BDA0003503380350000172
实施例2纳他霉素加和不加杀虫剂对人为感染土壤中种子病原真菌的杀菌作用的功效测试。
材料和方法
在存在或不存在如表2所描述的杀虫剂组合物的情况下，种子用如表1所描述的纳他霉素配方包被。将大豆种子放置在人为感染的土壤中(方法参见下文)。
土壤感染是通过将土壤与受感染的、死亡的高粱种子一起孵育来获得的。为此，将100g高粱种子和100ml水放入500ml瓶中，高压灭菌两次(121℃，15分钟，15psi)。死高粱种子用感染Fusarium graminearum片段(圆形片段，在5毫米琼脂上有高度，完全生长有新鲜的Fusarium graminearum菌丝体，这些菌丝体是用直径6毫米的软木钻孔器从培养皿中切下的)。十个F.graminearum琼脂片段放置在25℃下的500ml瓶中，瓶中含有100g经高压灭菌的(死)高粱种子，溶于100ml水中，并在25℃下孵育两周(16小时日光，8小时黑暗)。为了制备受感染的土壤，将土壤(Lentse potgrond类型821201030，从Horticoop购买)和沙子(瓦赫宁根的van Leusden公司的河沙)以1:1混合放置在穴盘中(盘的尺寸为52cm乘以30cm，有40个直径为5cm、深度为4.5cm的圆形孔(Modiform；Leusden,the Netherlands)。)。
三颗受感染的高粱种子，作为F.graminearum的载体，散布在每个含有沙土混合物的穴中。盘在温室中放置一周(白天光照16小时，白天20℃，并且夜间温度18℃，湿度60％)。
然后，大豆种子用70％乙醇冲洗，并用水彻底洗掉。
将纳他霉素(每1kg种子0.06、0.12或0.24g活性成分)和指定的杀虫剂(剂量率参见表3)悬浮或溶解在30ml水中以制备使用溶液。接下来，将250克种子放入旋转包衣机中，并将使用溶液应用于种子。将种子与各自的溶液一起旋转45秒。溶液通过旋转包衣机的旋转盘均匀地分布在种子上。然后，将种子从旋转包衣机中取出并放入温度为25℃的干燥器中15分钟。
将种子播种到2cm深的含有土壤/沙子混合物的穴盘的孔(穴)中，每种处理20颗种子，每个孔1颗种子。播种后14天评估幼苗的出苗和幼苗的质量评估。
结果
在表6和表7中显示了纳他霉素加和不加对昆虫的神经或肌肉系统(表6)或昆虫的其他系统(表7)有活性的杀虫剂，对大豆种子的种子发育质量的影响。播种后14天，确定健康幼苗(与未感染土壤中的大豆种子发育相比)、异常幼苗(例如发育迟缓、小变色植物、畸形叶子)和死种子的百分比。表6和表7中的结果代表健康幼苗的百分比。
表6纳他霉素与对昆虫神经或肌肉系统有活性的杀虫剂组合对大豆种子发育质量的影响。展示的是健康种子的百分比。
Figure BDA0003503380350000181
Figure BDA0003503380350000191
表7纳他霉素与对昆虫神经或肌肉系统无活性的杀虫剂组合对大豆种子发育质量的影响。展示的是健康种子的百分比。
Figure BDA0003503380350000192
结果
在表6和7中，单个字母表示不同的健康苗百分比，其中A代表最低的健康苗率，B、C、D是增加的健康苗率(B显著高于A；C显著高于B；D显著高于C)。
这些结果清楚地显示，杀虫剂本身不具有杀真菌活性，但作用模式是通过昆虫的神经或肌肉系统的表6的杀虫剂，刺激纳他霉素对种子的杀真菌作用，而表7的杀虫剂的作用方式不是通过昆虫的神经或肌肉系统，其不能刺激纳他霉素对种子的杀真菌作用。
实施例3单独的纳他霉素和杀虫剂或它们的组合对玉米种子的杀真菌作用的影响。
材料和方法
杀虫剂的剂量率提供在表3。用于处理玉米种子的方法与实施例2中处理大豆种子的方法相同。播种后14天，确定健康幼苗(与未感染土壤中的玉米种子发育相比)、异常幼苗(例如发育迟缓、小变色植株、畸形叶片)和死种子的百分比。表8中的结果代表健康幼苗的百分比。
在表8中展示了纳他霉素与对昆虫神经或肌肉系统有活性的杀虫剂组合对玉米种子发育质量的影响。
表8单独的纳他霉素和作用模式是通过神经或肌肉系统的杀虫剂对杀真菌Fusarium graminearum的作用的影响。
Figure BDA0003503380350000201
表8的结果表明，通过神经或肌肉组织起作用的杀虫剂本身不具有杀菌作用，但其刺激了纳他霉素对玉米种子的杀菌作用，从而产生更健康的幼苗。
在表9中显示了纳他霉素与对昆虫神经或肌肉系统无活性的杀虫剂结合对经它们的处理的玉米种子的发育质量的影响。
表9单独的纳他霉素和不通过神经或肌肉系统作用的杀虫剂对杀真菌Fusariumgraminearum作用的影响。
Figure BDA0003503380350000202
Figure BDA0003503380350000211
表9的结果表明，不通过神经或肌肉系统起作用的杀虫剂本身不具有杀菌活性，也不刺激纳他霉素对种子的杀菌作用。
实施例4单独的纳他霉素和Abamectin(对昆虫神经系统有活性)和它们的组合对不同病原真菌攻击玉米种子的影响。
材料和方法
方法如实施例2中的种子实验所描述的。Fusarium graminearum替代为表10中提到的病原真菌。纳他霉素和杀虫剂的组合物提供在表1和表2。
表10纳他霉素加Abamectin和不加Abamectin对不同类型病原真菌的影响。
Figure BDA0003503380350000212
结果
表10的结果清楚地显示，作用模式是通过神经或肌肉系统起作用的杀虫剂abamectin本身并不具有杀菌作用，但是其刺激纳他霉素对种子上不同真菌病原体的杀菌作用使得产生更健康的幼苗。
实施例5单独的纳他霉素和吡虫啉(对昆虫神经系统有活性)或它们的组合对不同类型种子的影响。
材料和方法
如实施例2所描述的，在人为感染的土壤(Fusarium culmorum)中种植不同类型的种子，不同之处在于使用75克甜菜种子、75克草坪草种子和25克番茄种子。在孵育14天后评估健康幼苗植物的百分比。
结果
表11的结果清楚地显示，吡虫啉本身不具有杀菌活性，但它刺激了纳他霉素对不同植物种子的杀菌作用，使得产生更多的健康幼苗。
表11纳他霉素加吡虫啉和不加吡虫啉对不同类型种子健康苗百分率的影响。
Figure BDA0003503380350000221
实施例6氟虫腈对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
实施例6-19的材料和方法
制备琼脂培养基是通过在100ml Duran瓶中混合来自Carl-Roth(Carl-Roth GmbH+Co.KG,Karlsruhe,Germany)的3.9g马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)与100ml去离子水并且在120℃下高压灭菌Duran瓶15分钟。高压灭菌后，将溶液放入48℃的烘箱中冷却约两小时。然后将半液体PDA溶液与纳他霉素和/或杀虫剂以表12中列明的剂量小心混合。使用25ml血清移液管(
Figure BDA0003503380350000222
Carl-Roth)将Duran瓶中的培养基分装到5个培养皿(90x15mm)中，每个培养皿20ml。每种纳他霉素和/或杀虫剂处理执行五次。
通过用无菌水浸透完全生长的培养皿来制备真菌孢子悬浮液。将真菌刮下并通过Miracloth(孔径：22-25μm)(Merck KGaA，Darmstadt，Germany；catalogue number:475855)过滤。用血细胞计数器计数孢子数，并将真菌悬浮液调整为每毫升106个孢子。之后，将5μl制备的孢子悬浮液加入到琼脂板的中心。平板在25℃孵育。在不同的时间点用卡尺测量真菌的生长。
在这个实施例中，BASF的产品
Figure BDA0003503380350000223
含有活性成分氟虫腈(氟虫腈属于IRAC第2组)用于测试与纳他霉素的协同作用。使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂0.94g杀虫剂产品。0.5N为0.47g。在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：氟虫腈的比例是1:7520(w/w)和1:3760(w/w)。在25℃的炉子中孵育7天后评估功效。使用Colby方程进行协同计算。
结果
表12氟虫腈对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 2977.66 0.00
纳他霉素 1865.54 37.35
氟虫腈1N 1437.02 51.74
氟虫腈0.5N 1742.33 41.49
纳他霉素+氟虫腈1N 529.80 82.21 69.76 1.18 协同作用
纳他霉素+氟虫腈0.5N 381.43 87.19 63.34 1.38 协同作用
实施例7λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第3组的活性成分λ-氯氟氰菊酯的Syngenta的KARATE
Figure BDA0003503380350000231
产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂20μl杀虫剂产品。0.5N为每100ml PDA琼脂10μl。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：λ-氯氟氰菊酯的比例是1:50(w/w)和1:25(w/w)。在25℃的炉子中孵育7天后评估功效。
结果
表13λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 2977.66 0.00
纳他霉素 1865.54 37.35
氯氟氰菊酯1N 2702.22 9.25
氯氟氰菊酯0.5N 2546.95 14.46
纳他霉素+氯氟氰菊酯1N 1108.92 62.76 43.14 1.45 协同作用
纳他霉素+氯氟氰菊酯0.5N 1077.66 63.81 46.41 1.37 协同作用
实施例8λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗Alternaria solani功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第3组的活性成分λ-氯氟氰菊酯的Syngenta的KARATE
Figure BDA0003503380350000241
产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂500μl经水稀释25倍的杀虫剂溶液2N为每100mlPDA琼脂1000μl经水稀释的溶液。5N为在100毫升PDA琼脂中100μl未经稀释的Karate zeon产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为0.5ppm。纳他霉素:λ-氯氟氰菊酯的比例为1:100(w/w)、1:200(w/w)和1:500(w/w)。在25℃的炉中孵育4天后评估功效。
结果
表14λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗Alternaria solani功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 1632.81 0.00
纳他霉素 722.91 55.73
λ-氯氟氰菊酯1N 1109.53 32.05
λ-氯氟氰菊酯2N 871.89 46.60
λ-氯氟氰菊酯5N 722.71 55.74
λ-氯氟氰菊酯1N+纳他霉素 467.37 71.38 69.91 1.02 协同作用
λ-氯氟氰菊酯2N+纳他霉素 365.15 77.64 76.36 1.02 协同作用
λ-氯氟氰菊酯5N+纳他霉素 265.18 83.76 80.40 1.04 协同作用
实施例9λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗Sclerotinia sclerotiorum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第3组的活性成分λ-氯氟氰菊酯的Syngenta的KARATE
Figure BDA0003503380350000242
产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)是每100ml PDA琼脂中500μl经水稀释25倍的杀虫剂溶液。2N是每100mlPDA琼脂1000μl经水稀释的溶液。5N为在100毫升PDA琼脂中100μl未经稀释的产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为0.5ppm。纳他霉素：λ-氯氟氰菊酯的比例为1:100(w/w)、1:200(w/w)和1:500(w/w)。在25℃的炉中孵育4天后评估功效。
结果
表15λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗Sclerotinia sclerotiorum功效的影响。
Figure BDA0003503380350000243
Figure BDA0003503380350000251
实施例10λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗灰葡萄孢(Botrytis cinerea)功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第3组的活性成分λ-氯氟氰菊酯的Syngenta的KARATE
Figure BDA0003503380350000252
产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂20μl杀虫剂产品。0.5N为每100ml PDA琼脂10μl产品。0.25N为100ml PDA琼脂中5μl未经稀释的Karate zeon产品而0.125N为每100ml PDA琼脂2.5μl杀虫剂产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素:λ-氯氟氰菊酯的比例为1:12.5(w/w)、1:25(w/w)和1:50(w/w)。在25℃的炉子中孵育6天后评估功效。
结果
表16λ-氯氟氰菊酯对纳他霉素抗灰葡萄孢功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 3251.01 0.00
纳他霉素(Nata) 2361.79 27.35
氯氟氰菊酯1N 3295.33 -1.36
氯氟氰菊酯0.5N 3366.17 -3.54
氯氟氰菊酯0.25N 3544.50 -9.03
纳他霉素+氯氟氰菊酯1N 914.08 71.88 26.36 2.73 协同作用
纳他霉素+氯氟氰菊酯0.5N 899.02 72.35 24.78 2.92 协同作用
纳他霉素+氯氟氰菊酯0.25N 2188.53 32.68 20.79 1.57 协同作用
实施例11吡虫啉对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，属于IRAC第4组的活性杀虫剂成分吡虫啉与表17中所示的另外的化合物一起配制。
表17吡虫啉的配方。
物质 [％]
吡虫啉 39.9
Atlox 4913 2.2
Atlox 4894 2.2
消泡剂 0.1
杀生剂 0.2
水 50.0
XG 0.4
丙二醇 5.2
共计 100
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂5μl杀虫剂配方。0.5N为每100mlPDA琼脂2.5μl产品。在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：吡虫啉的比例为1:20(w/w)和1:10(w/w)。在25℃的炉子中孵育8和12天后评估功效。
结果
表18 8天后吡虫啉对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 3263.44 0.00
纳他霉素 2225.44 31.81
吡虫啉1N 4635.62 -42.05
吡虫啉0.5N 2779.54 14.83
纳他霉素+吡虫啉1N 2198.67 32.63 3.13 10.41 协同作用
纳他霉素+吡虫啉0.5N 1847.38 43.39 41.92 1.04 协同作用
表19 12天后吡虫啉对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 4852.57 0.00
纳他霉素 3962.08 18.35
吡虫啉1N 5273.80 -8.68
吡虫啉0.5N 4606.42 5.07
纳他霉素+吡虫啉1N 3849.55 20.67 11.26 1.84 协同作用
纳他霉素+吡虫啉0.5N 3408.44 29.76 22.49 1.32 协同作用
实施例12噻虫嗪对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，属于IRAC第4组的活性杀虫剂成分噻虫嗪与水混合以制作1000ppm溶液。使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂5ml杀虫剂溶液。2N为每100mlPDA琼脂10ml噻虫嗪溶液。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为0.5pm。纳他霉素与噻虫嗪的比例为1:100(w/w)和1:200(w/w)。在25℃的炉子中孵育4天后评估功效。
结果
表20噻虫嗪对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 935.83 0.00
纳他霉素 789.92 15.59
噻虫嗪1N 897.35 4.11
噻虫嗪0.5N 875.68 6.43
纳他霉素+噻虫嗪1N 657.81 29.71 19.06 1.56 协同作用
纳他霉素+噻虫嗪0.5N 677.09 27.65 21.02 1.32 协同作用
实施例13 abamectin对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第6组的活性成分abamectin的
Figure BDA0003503380350000271
(Syngenta)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂75μl杀虫剂产品。0.5N为每100mlPDA琼脂37.5μl产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素:abamectin的比例为1:13.5(w/w)和1:6.75(w/w)。在25℃的炉子中孵育8和12天后评估功效。
结果
表21 8天后abamectin对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 3263.44 0.00
纳他霉素 2225.44 31.81
abamectin 1N 2475.61 24.14
abamectin 0.5N 2881.30 11.71
纳他霉素+abamectin 1N 889.12 72.76 48.27 1.51 协同作用
纳他霉素+abamectin 0.5N 1399.83 57.11 39.79 1.44 协同作用
表22 12天后abamectin对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 4852.57 0.00
纳他霉素 3962.08 18.35
abamectin 1N 3944.95 18.70
abamectin 0.5N 4282.74 11.74
纳他霉素+abamectin 1N 2635.97 45.68 33.62 1.36 协同作用
纳他霉素+abamectin 0.5N 3383.67 30.27 27.94 1.08 协同作用
实施例14 abamectin对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第6组的活性成分abamectin的
Figure BDA0003503380350000281
(Syngenta)产品。使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂75μl杀虫剂产品。0.5N为每100mlPDA琼脂37.5μl产品。在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素:abamectin的比例为1:13.5(w/w)和1:6.75(w/w)。在25℃的炉子中孵育7天后评估功效。
结果
表23 abamectin对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 2977.66 0.00
纳他霉素 1865.54 37.35
abamectin 1N 453.27 84.78
abamectin 0.5N 764.44 74.33
纳他霉素+abamectin 1N 145.33 95.12 90.46 1.05 协同作用
纳他霉素+abamectin 0.5N 277.63 90.68 83.92 1.08 协同作用
实施例15氯虫苯甲酰胺对纳他霉素抗灰葡萄孢功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第28组的活性成分氯虫苯甲酰胺的Dupontd的
Figure BDA0003503380350000282
产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂125μl杀虫剂产品。每100mlPDA琼脂中浓度0.25N含有31.25μL coragen；0.5N含有62.5μL coragen；2N含有250μLcoragen；5N含有625μL coragen；而10N含有1250μL coragen产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素与氯虫苯甲酰胺的配比为1:62.5(w/w)、1:125(w/w)、1:250(w/w)、1:500(w/w)、1:1250(w/w)和1:2500(w/w)。在25℃的炉子中孵育4和5天后评估功效。
表24 4天后氯虫苯甲酰胺对纳他霉素抗灰葡萄孢功效的影响。
空白 2521.56 0.00
纳他霉素 1456.89 42.22
氯虫苯甲酰胺0.25N 2762.05 -9.54
氯虫苯甲酰胺0.5N 2841.26 -12.68
氯虫苯甲酰胺1N 2897.46 -14.91
氯虫苯甲酰胺2N 2599.18 -3.08
氯虫苯甲酰胺5N 1270.26 49.62
氯虫苯甲酰胺10N 344.05 86.36
纳他霉素+氯虫苯甲酰胺0.25N 1105.40 56.16 36.71 1.53 协同作用
纳他霉素+氯虫苯甲酰胺0.5N 1020.49 59.53 34.90 1.71 协同作用
纳他霉素+氯虫苯甲酰胺1N 1153.50 54.25 33.61 1.61 协同作用
纳他霉素+氯虫苯甲酰胺2N 1396.45 44.62 40.44 1.10 协同作用
纳他霉素+氯虫苯甲酰胺5N 665.61 73.60 70.89 1.04 协同作用
纳他霉素+氯虫苯甲酰胺10N 101.46 95.98 92.12 1.04 协同作用
表25 5天后氯虫苯甲酰胺对纳他霉素抗灰葡萄孢功效的影响。
Figure BDA0003503380350000291
Figure BDA0003503380350000301
实施例16 hydropene对纳他霉素抗灰葡萄孢功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第7组的活性成分hydropene的
Figure BDA0003503380350000303
IGR(Zoecon；Syngenta)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为300μl 2.49ml Gentrol溶于50ml水中的溶液，添加到50ml PDA琼脂中。0.5N：每100mlPDA琼脂150μl杀虫剂溶液杀虫剂产品，0.25N：每100mlPDA琼脂75μl杀虫剂溶液杀虫剂产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：hydroprene的比例为1:3.4(w/w)、1:6.75(w/w)和1:13.5(w/w)。在25℃的炉子中孵育4天后评估功效。
结果
表26 hydropene对纳他霉素抗灰葡萄孢功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 2931.10 0.00
纳他霉素 11.51 99.61
hydropene0.25N 287.31 90.20
hydropene0.5N 270.12 90.78
hydropene1N 251.05 91.43
纳他霉素+hydropene 0.25N 16.19 99.45 99.96 0.99 无协同作用
纳他霉素+hydropene 0.5N 19.63 99.33 99.96 0.99 无协同作用
纳他霉素+hydropene 1N 13.59 99.54 99.97 1.00 -
实施例17 hydropene对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有活性成分hydroprene的
Figure BDA0003503380350000302
IGR(Zoecon；Syngenta)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为300μl 2.49ml Gentrol溶于50ml水中的溶液，添加到50ml PDA琼脂中。0.5N：每100mlPDA琼脂150μl杀虫剂溶液杀虫剂产品，0.25N：每100mlPDA琼脂75μl杀虫剂溶液杀虫剂产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：hydroprene的比例分别为1:3.4(w/w)、1:6.75(w/w)和1:13.5(w/w)。在25℃的炉子中孵育5天后评估功效。
结果
表27 hydropene对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 853.29 0.00
纳他霉素 811.66 4.88
hydropene 0.25N 410.28 51.92
hydropene 0.5N 371.59 56.45
hydropene 1N 291.67 65.82
纳他霉素+hydropene 0.25N 463.37 45.70 54.26 0.84 无协同作用
纳他霉素+hydropene 0.5N 369.31 56.72 58.58 0.97 无协同作用
纳他霉素+hydropene 1N 342.58 59.85 67.49 0.89 无协同作用
实施例18 hydropene对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第7组的活性成分hydroprene的
Figure BDA0003503380350000311
IGR(Zoecon；Syngenta)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为300μl 2.49ml Gentrol溶于50ml水中的溶液，添加到50ml PDA琼脂中。0.5N：每100mlPDA琼脂150μl杀虫剂溶液杀虫剂产品，0.25N：每100mlPDA琼脂75μl杀虫剂溶液杀虫剂产品。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：hydroprene的比例为1:3.4(w/w)、1:6.75(w/w)和1:13.5(w/w)。在25℃的炉子中孵育5天后评估功效。
结果
表28 hydropene对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 2671.90 0.00
纳他霉素 1294.81 51.54
hydropene 0.25N 644.65 75.87
hydropene 0.5N 434.19 83.75
hydropene 1N 301.52 88.72
纳他霉素+hydropene 0.25N 436.98 83.65 88.31 0.95 无协同作用
纳他霉素+hydropene 0.5N 244.54 90.85 92.13 0.99 无协同作用
纳他霉素+hydropene 1N 139.06 94.80 94.53 1.00 无协同作用
实施例19苏云金芽孢杆菌对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第11组的活性成分苏云金芽孢杆菌(15000IU/mg(IU＝国际单位))的
Figure BDA0003503380350000321
(Bayer)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为31.25mg Xentari产品加入到100ml PDA琼脂中。0.5N：15.63mg Xentari产品加入到100ml PDA琼脂中。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：苏云金芽孢杆菌的比例为1:156.25和1:312.5(w/w基于Xentari产品)。在25℃的炉子中孵育8天后评估功效。
结果
表29苏云金芽孢杆菌对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 3263.44 0.00
纳他霉素 2225.44 31.81
苏云金芽孢杆菌1N 3502.39 -7.32
苏云金芽孢杆菌0.5N 1653.92 49.32
纳他霉素+苏云金芽孢杆菌1N 2395.34 26.60 26.81 0.99 无协同作用
纳他霉素+苏云金芽孢杆菌0.5N 2528.66 22.52 65.44 0.34 无协同作用
实施例20氯苯吡菌胺对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第13组的活性成分氯苯吡菌胺的
Figure BDA0003503380350000322
(Adama)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为1ml Spectre产品加入到100ml PDA琼脂中。0.5N：每100ml PDA琼脂中0.5ml Spectre而0.25N为每100ml PDA琼脂中0.25ml Spectre。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素与氯苯吡菌胺的比例为1:536(w/w)、1:1072(w/w)和1:2145(w/w)。在25℃的炉子中孵育7天后评估功效。
结果
表30氯苯吡菌胺对纳他霉素抗Fusarium culmorum功效的影响。
Figure BDA0003503380350000323
Figure BDA0003503380350000331
实施例21印苦楝素对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于目前为止的IRAC组的活性成分印苦楝素(含有217g/L印苦楝素(配制为达到浓度26g/L印苦楝素-A))的
Figure BDA0003503380350000332
(Certis)产品。
使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为31μl Azatin产品加入到100ml PDA琼脂中。0.5N：37.5μl Azatin加入到100ml PDA琼脂中。
在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为1ppm。纳他霉素：印苦楝素的比例基于印苦楝素-A，为1:9.75(w/w)和1:19.5(w/w)。在25℃的炉子中孵育8天后评估功效。
结果
表31印苦楝素对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
处理 面积mm<sup>2</sup> O％ E％ O/E 相互作用
空白 3263.44 0.00
纳他霉素 2225.44 31.81
印苦楝素1N 3303.19 -1.22
印苦楝素0.5N 2262.22 30.68
纳他霉素+印苦楝素1N 2323.71 28.80 30.98 0.93 无协同作用
纳他霉素+印苦楝素0.5N 1630.22 50.05 52.73 0.95 无协同作用
实施例22甲维菌素苯甲酸酯对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
材料和方法
参见实施例6。在这个实施例中，使用含有属于IRAC第6组的活性成分甲维菌素苯甲酸酯的
Figure BDA0003503380350000333
Cockroach Gel Bait,(Syngenta)产品。使用的杀虫剂浓度“N”(参见下文)为每100ml PDA琼脂250mg杀虫剂产品。0.5N为每100mlPDA琼脂125mg产品。在含有纳他霉素的孵育中纳他霉素的浓度为0.25ppm。纳他霉素：甲维菌素苯甲酸酯的比例为1:10和1:5(w/w)。在25℃的炉子中孵育3天后评估功效。
结果
表32甲维菌素苯甲酸酯对纳他霉素抗Fusarium graminerum功效的影响。
Figure BDA0003503380350000334
Figure BDA0003503380350000341

Claims (15)

1.一种抗真菌组合物，所述抗真菌组合物包含纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，优选文件“IRAC作用模式分类方案”(9.3版)中确认的第2、3、4、6和/或28亚组的至少一种杀虫剂。
2.根据权利要求1所述的抗真菌组合物，包含1％-98％(w/w)的纳他霉素，优选6％-60％(w/w)的纳他霉素和1％-99％(w/w)，优选5-50％(w/w)的所述至少一种杀虫剂。
3.根据权利要求1或2所述的抗真菌组合物，其中，纳他霉素与所述至少一种杀虫剂的比例在1:1-1:5000(w/w)之间。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗真菌组合物，包含纳他霉素及来自氟虫腈、λ-氯氟氰菊酯、啶虫脒、噻虫胺、吡虫啉、噻虫啉、噻虫嗪、abamectin和氯虫苯甲酰胺的至少一种杀虫剂。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗真菌组合物，进一步包含农业上可接受的载体。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗真菌组合物，其为水性或油性组合物。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中，纳他霉素被研磨成平均粒度在0.5至3微米之间。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，进一步包含相对量在1:2至60:1(w/w)之间的聚阴离子及聚阳离子的不溶性聚电解质复合物，所述聚阴离子例如是木质素化合物，所述聚阳离子例如是壳聚糖或聚烯丙基胺。
9.一种用于保护农业植物或植物部分的方法，所述方法包括：提供纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，优选根据权利要求1-8中任一项所述的组合物；以及将所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，优选所述组合物，应用于所述农业植物或植物部分。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述植物部分是种子、鳞茎、果实或蔬菜，优选种子。
11.一种用于改善农业植物的发育和/或产量的方法，所述方法包括：提供纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，优选根据权利要求1-8中任一项所述的组合物；以及将所述植物与所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂接触，优选与所述组合物接触。
12.一种用于保护土壤和/或生长基质的方法，所述方法包括将纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂，优选根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，应用于所述土壤和/或生长基质。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述生长基质是蘑菇生长基质。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的方法，其中，在将所述组合物在提供给植物、植物部分、土壤和/或生长基质之前，所述组合物未稀释或稀释于水性溶液或油中。
15.纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂在保护植物、植物部分、土壤和/或生长基质免受真菌侵害中的用途，优选地，所述纳他霉素及干扰昆虫和线虫的神经系统和/或肌肉系统的至少一种杀虫剂是根据权利要求1-8中任一项所述的组合物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9155317B2 (en) * 2011-02-09 2015-10-13 Dsm Ip Assets B.V. Antifungal compositions
WO2012117058A1 (en) * 2011-03-03 2012-09-07 Dsm Ip Assets B.V. New antifungal compositions
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EP2836073A1 (en) 2012-03-05 2015-02-18 Ceradis B.V. Polyelectrolyte complexes for biocide enhancement
CN105109231B (zh) * 2015-09-07 2017-01-11 王璐 一种金融票据干燥防霉抗菌处理剂
WO2017043972A1 (en) * 2015-09-09 2017-03-16 Arec Crop Protection B.V. An antifungal composition comprising natamycin and c4-c22 fatty acids, monoglycerides of these fatty acids and/or derivatives of these fatty acids
CN105950011A (zh) * 2016-06-29 2016-09-21 王乔 一种高层建筑用电梯门板阻燃涂层

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