CN114259555B - 一种中西医结合复合制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种中西医结合复合制剂，应用于预防和/或治疗女性性功能障碍，包括以下组分：表皮生长因子，雌激素和甘油。本申请还提供了复合制剂的用途，即在改善女性性唤起、增强性欲望及在其产品中的应用、在改善女性阴道润滑障碍、减轻阴道干涩及在其产品中的应用、在改善女性性交痛、提高性满意度及在其产品中的应用以及在预防和/或治疗女性性功能障碍及在其产品中的应用。本申请对于直接利用复合制剂预防和治疗女性性功能障碍提供了依据。

Description

一种中西医结合复合制剂及其应用

技术领域

本申请涉及复合制剂制备及用途技术领域，尤其涉及一种中西医结合复合制剂及其应用。

背景技术

女性性功能障碍（female sexual dysfunctions,FSD）是一种身心疾病，由生理和心理因素共同介导，导致女性无法完成正常的性生活，目前已影响着全球数百万女性的身心健康。FSD指持续或反复出现的性欲障碍、性唤起障碍、性高潮障碍和性交痛，并且给患者或者性伴侣带来心理上的痛苦。FSD是女性的常见病，发病率很高，在美国有40%-45%的成年女性至少存在1种形式的性功能障碍，12%的女性在性生活中有痛苦的体验。性学家Douki通过调查1500例妇科就诊患者时发现，98%的调查对象存在性功能方面的问题，其中87%的患者存在性欲低下，83%有性高潮障碍，72%有性交疼痛障碍，5%有阴道润滑不足。我国关于FSD的研究相对滞后，最新的调查研究显示我国FSD的总发生率为53.17%，其中性欲望障碍和性满意度障碍发生率较高，分别为46.17%和46.97%。因此，对于FSD的研究任重而道远。

然而，目前对于FSD的具体致病机制还不清楚。既往研究表明FSD与围绝经期雌激素减退有关，但仅仅用雌激素减退并不能解释所有症状，外源性雌激素补充治疗对FSD患者的治疗也有限，而且好多女性在30岁左右就出现性功能障碍。最近的研究发现FSD与生殖器及相关性器官发生的某些病变紧密相关，这主要包括血管、神经和终末性器官的损伤等，因此临床对FSD的治疗仍然以补充雌激素为主，没有好的预防和治疗方法，也有学者建议行物理治疗如盆底功能训练来改善相关症状，但这种方法耗时长且效果并不明确，尽管近年来关于FSD的药物研发取得一定进展，但因为药物单一、疗效不确定且副作用大等弊端，一直未能得到临床医师和患者的满意。由于FSD的发病率越来越高，使得人们对副作用小、疗效确切的药物越来越期待，这是一个非常大的医疗需求，随着对女性性问题观念的转变以及对FSD病理生理机制的深入研究，迫切需要研发更好的药物来解决这一问题。

本申请在前期研究中通过筛选和实验验证，寻找出一种可用于改善女性性功障碍的新物质——表皮生长因子，以及以表皮生长因子为主要成分的一种用于治疗FSD的新型复合制剂。迄今为止，尚没有表皮生长因子及该复合制剂对女性性功能障碍有预防和治疗作用的报道。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种用于预防和/或治疗女性性功能障碍的复合制剂及其应用，以解决目前尚未见关于表皮生长因子及由表皮生长因子制备的复合制剂在女性性功能障碍中应用的问题。

第一方面，本申请提供了一种中西医结合复合制剂，应用于预防和/或治疗女性性功能障碍，包括以下组分：表皮生长因子，雌激素和甘油。

可选的，所述复合制剂还包括嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、加氏乳杆菌和沙棘籽油中的一种或多种。

第二方面，本申请提供了一种中西医结合复合制剂，应用于预防和/或治疗女性性功能障碍，包括以下组分：表皮生长因子10-20%，雌激素5-15%，嗜酸乳杆菌1-3%，发酵乳杆菌1-3%，加氏乳杆菌1-3%，沙棘籽油提取物5-15%和甘油41-77%。

第三方面，本申请提供了一种中西医结合复合制剂在改善女性性唤起、增强性欲望及在其产品中的应用。

第四方面，本申请提供了一种中西医结合复合制剂在改善女性阴道润滑障碍、减轻阴道干涩及在其产品中的应用。

第五方面，本申请提供了一种中西医结合复合制剂在改善女性性交痛、提高性满意度及在其产品中的应用。

第六方面，本申请提供了一种中西医结合复合制剂在预防和/或治疗女性性功能障碍及在其产品中的应用。

可选的，所述产品包括药物。

可选的，所述药物的剂型包括凝胶、软胶囊、滴丸、乳剂、片剂、洗剂、搽剂、软膏剂或栓剂等。

由以上技术方案可知，本申请提供了一种中西医结合复合制剂，应用于预防和/或治疗女性性功能障碍，包括以下组分：表皮生长因子，雌激素和甘油。本申请还提供了复合制剂的用途，即在改善女性性唤起、增强性欲望及在其产品中的应用、在改善女性阴道润滑障碍、减轻阴道干涩及在其产品中的应用、在改善女性性交痛、提高性满意度及在其产品中的应用以及在预防和/或治疗女性性功能障碍及在其产品中的应用。本申请对于直接利用复合制剂预防和治疗女性性功能障碍提供了依据。

附图说明

为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为不同剂量组中小鼠体重的变化示意图；

图2为不同剂量组小鼠动情周期的变化示意图；

图3为本申请提供的实验流程示意图；

图4为本申请提供的技术路线示意图；

图5为不同组小鼠阴道组织的HE染色与Masson染色；

图6A为检测小鼠阴道润滑程度的具体方法的示意图；

图6B为不同组小鼠阴道的润滑程度的示意图；

图7为不同组小鼠血清中多巴胺的含量示意图；

图8为小鼠各种性行为的记录示意图；

图9为不同组小鼠阴道表面张力的变化的示意图。

具体实施方式

下面将详细地对实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下实施例中描述的实施方式并不代表与本申请相一致的所有实施方式。仅是与权利要求书中所详述的、本申请的一些方面相一致的系统和方法的示例。

本申请提供了一种中西医结合复合制剂，应用于预防和/或治疗女性性功能障碍，包括以下组分：表皮生长因子，雌激素和甘油。其中，表皮生长因子，雌激素和甘油为主成分。进一步，复合制剂还包括辅成分，其中，辅成分包括嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、加氏乳杆菌和沙棘籽油中的一种或多种。需要说明的是，复合制剂也可以仅有主成分组成。主成分和辅成分的具体含量可根据实际情况进行设置和调整。

进一步，本申请提供了一种中西医结合复合制剂，应用于预防和/或治疗女性性功能障碍，包括以下组分：表皮生长因子10-20%，雌激素5-15%，嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）1-3%、发酵乳杆菌（L. fermentum）1-3%、加氏乳杆菌（L. gasseri）1-3%，沙棘籽油提取物（沙棘多酚）5-15%，甘油41-77%。

上述复合制剂的制备方法为将上述成分按照比例混合制成凝胶状。并进行以下筛选过程：在筛选过程中，根据各种成分在体内的药代动力学特点，将复合制剂分为低、中、高三个剂量组来确定出最佳的配制比例。其中，低剂量组包括以下重量百分比的物质：表皮生长因子10%，雌激素5%，嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）1%、发酵乳杆菌（L. fermentum）1%、加氏乳杆菌（L. gasseri）1%，沙棘籽油提取物（沙棘多酚）5%，甘油77%。

中剂量组包括以下重量百分比的物质：表皮生长因子15%，雌激素10%，嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）2%、发酵乳杆菌（L. fermentum）2%、加氏乳杆菌（L. gasseri）2%，沙棘籽油提取物（沙棘多酚）10%，甘油59%。

高剂量组包括以下重量百分比的物质：表皮生长因子20%，雌激素15%，嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）3%、发酵乳杆菌（L. fermentum）3%、加氏乳杆菌（L. gasseri）3%，沙棘籽油提取物（沙棘多酚）15%，甘油41%。

进一步地，本申请将8周龄的C57小鼠分为5组，即对照组（sham组）、模型组（FSD组）、低剂量组（LDG组）、中剂量组（MDG组）和高剂量组（HGD组）。通过对每组连续给药48天，同时以预设天数对小鼠进行持续的体重监测和动情周期变化的检测。图1为不同剂量组中小鼠体重的变化示意图，图中横坐标代表天数，纵坐标代表体重，sham-对照组，FSD-模型组，LDG-低剂量组，MDG-中剂量组，HDG-高剂量组。如图1所示，中等剂量组的小鼠体重最接近正常小鼠。图2为不同剂量组小鼠动情周期的变化示意图，图中纵坐标代表各个周期的百分比，横坐标代表四个动情周期，Proestrus-动情前期，Estrus-动情期，Metstrus-动情后期，Diestrus-间期，sham-对照组，FSD-模型组，LDG-低剂量组，MDG-中剂量组，HDG-高剂量组。如图2所示，在动情周期方面，尽管三种剂量的治疗对小鼠动情周期的紊乱都有改善，但中等剂量组的小鼠改善最明显，维持的时间最长。综上所述，本申请提供的一种中西医结合复合制剂，在维持体重和动情周期方面均有所提高和改善。进一步地，可将中等剂量组的各成分剂量作为复合制剂优选的剂量配比。

本申请首次证实以表皮生长因子为主要成分的复合制剂具有完全不同于以往的新功能：（1）可以有效预防和/或治疗女性性功能障碍；（2）可以预防和/或治疗因绝经引起的阴道萎缩和性交痛，使阴道上皮增生，肌肉含量增多，黏液层增厚，改善阴道润滑程度；（3）可以提高性反应，增加性行为的成功率；（4）通过改善阴道表面张力调节阴道肌肉收缩。本申请对于直接利用复合制剂预防和/或治疗女性性功能障碍提供了依据。

本申请公开以表皮生长因子为主要成分的复合制剂的新用途，新用途包括在改善女性性唤起、增强性欲望及在其产品中的应用；在改善女性阴道润滑障碍、减轻阴道干涩及在其产品中的应用；在改善女性性交痛、提高性满意度及在其产品中的应用以及在预防和/或治疗女性性功能障碍及在其产品中的应用。

为了证实复合制剂具有上述新用途，本申请进行了如下实验。

技术方案

（1）建立女性性功能障碍的小鼠模型：

图3为本申请提供的实验流程示意图，参见图3，本申请通过卵巢切除和阴道扩张来模拟临床上的绝经和分娩过程中第二产程延长来建立FSD小鼠模型。通过双侧卵巢切除和使用F8尿管行阴道扩张，饲养一个月后成功建立FSD小鼠模型，然后通过阴道给药来验证本申请复合制剂的效果。

（2）技术路线

图4为本申请提供的技术路线示意图，参见图4，本申请采用8周龄雌性C57小鼠，分为5组，即假手术组（sham组）、模型组（FSD组）、雌激素治疗组（E2组）、表皮生长因子治疗组（EGF组）、复合制剂组（Compound drug preparation，CDP组）。

其中，Sham组为单纯的对照组，小鼠只需打开腹腔后随即用丝线缝合。FSD组为女性性功能障碍模型组，即对小鼠进行卵巢切除和阴道扩张处理。Sham组和FSD组每天给予相同剂量的甘油通过阴道涂抹给药。E2组为雌激素治疗组，给予雌激素软膏0.1g/天（雌激素含量为97.5μg），通过给药器按确定好的剂量将药物送到小鼠阴道近端1/3处，连续给药28天。EGF组为表皮生长因子治疗组，给予重组人表皮生长因子0.2g/天（含表皮生长因子2550μg），通过给药器确定好剂量后将药物送到小鼠阴道近端1/3处，连续给药28天。CDP为复合制剂治疗组，给予复合制剂0.5g/天。其中，复合制剂包括以下重量百分比的物质：表皮生长因子15%，雌激素10%，嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）2%、发酵乳杆菌（L. fermentum）2%、加氏乳杆菌（L. gasseri）2%，沙棘籽油提取物（沙棘多酚）10%，甘油59%。需要说明的是，本申请不对复合制剂的成分含量进行具体限定，本实施例采用的是优选方案。可根据实际情况自行对成分含量进行选择，只需在本申请限定的范围内即可。

所有组小鼠在第29天取材，进行以下操作：（1）在取材前用摄像机观察小鼠性行为；（2）取材时通过刺激盆神经阴道支来激发性唤起，用吸水纸检测阴道润滑程度的变化、多道生理记录仪检测阴道表面张力，（3）取材后对子宫、阴道进行称重，对阴道组织进行多种染色观察形态学改变，（4）检测血清雌激素、雄激素和多巴胺的含量。

主要技术

参见图4，进行如下测试：

1）建立FSD小鼠模型

用5%水合氯醛10g/0.1ml麻醉小鼠，麻醉完成后固定于动物手术台上，在耻骨联合上方正中做2cm切口，充分暴露，显露子宫角，沿着两侧子宫角向上追踪到卵巢，结扎卵巢血管后切除卵巢；采用8Fr尿管行阴道扩张，剪去尿管尖端多余的部分插入阴道，用4-0缝线固定于阴道口，向球囊内注入0.6ml温生理盐水扩张阴道，在尿管的另一端悬吊一个10g的重物使尿管处于紧张状态。

2）小鼠性行为检测

将检测的小鼠放入鼠笼中，放入一只8周龄雄性C57BL6J小鼠，将摄像机固定在笼壁上，通过摄像机记录小鼠性行为。

3）小鼠阴道润滑度检测

本申请首次使用自制吸水纸（0.3*1.0cm）来直观记录小鼠阴道润滑程度的变化：将带有刻度的实验用吸水纸剪成0.3cm*1cm长条，一端插入阴道的同一深度，停留3分钟，先观察不做任何刺激下阴道润滑度，然后刺激盆神经阴道支观察刺激状态下阴道润滑度的变化。

4）HE染色和Masson染色观察阴道组织的形态学变化和肌层变化

取材后的阴道组织在4%的多聚甲醛溶液中固定至少24小时，梯度酒精（70%、80%、90%、95%、100%）脱水后用石蜡包埋，4mm连续切片，观察阴道的形态学（阴道上皮、阴道肌层）改变；Masson染色：常规脱水后用试剂盒中的Masson复合染色液染色5min，0.125%醋酸水溶液稍加清洗后放入5%磷钨酸染液中染色5min，用0.125%醋酸水溶液清洗2次，每次3min，在用亮绿染液染色5min后0.125%醋酸水溶液清洗2次，脱水至封片。

5）阴道表面张力

使用MD3000生物信息采集系统检测阴道表面张力，给予相应脉宽、频率、能量的电刺激，在小鼠信道中央缓慢置入阴道记录电极，调整电极位置使金属片紧贴阴道壁，使用刺激电极通过刺激小鼠盆神经阴道支来使其性唤起，观察阴道表面张力的变化。

3.实验结果

3.1 本申请的复合制剂可以预防和治疗小鼠阴道上皮损伤，增加肌层肌肉组织含量

更年期女性绝经后由于雌激素水平降低，导致阴道失去营养作用而萎缩，出现临床中常见的萎缩性阴道炎。萎缩性阴道炎表现为阴道上皮变薄、阴道皱褶减少，肌肉含量较少，而完整的阴道上皮结构和充分的肌肉组织含量是维持阴道正常功能的基础。患者最初感受到的症状为性交时阴道缺乏润滑，最后发展到阴道持续干燥导致性交痛；除了雌激素，还有像雄激素、孕激素等性激素的减少，也加剧了阴道萎缩的进程，使阴道上皮结构受损，肌层减少，导致阴道逐渐失去弹性和顺应性。

本申请通过不同组的治疗发现，表皮生长因子在阴道中也有类似雌激素的作用：图5为不同组小鼠阴道组织的HE染色与Masson染色。如图5所示，在HE染色中，对照组（即sham组）小鼠阴道上皮全层及肌层结构完整，上皮细胞排列整齐，未见明显的脱落或裂伤；模型组（即FSD）小鼠的阴道发生了明显萎缩，即阴道上皮厚度变薄，上皮细胞层数明显减少，肌层中肌纤维出现断裂，全层出现均匀萎缩；雌激素治疗组（即E2组）小鼠的阴道上皮完整性较FSD组有所改善，表现为上皮细胞层数增加，肌层组织结构较完整；表皮生长因子治疗组（及EGF组）的阴道形态也有所改善，阴道的萎缩情况较正常组有所改善，其中肌层改善最明显，表现为肌层厚度增加，上皮层完整性改善；复合制剂组（即CDP组）的改善作用最明显，其上皮层和上皮细胞的完整性几乎接近对照组，基层组织明显增厚，阴道组织的整体形态也与对照组相近。通过Masson染色我们发现，sham组小鼠阴道组织肌层未见明显的减少，上皮层和肌层的结构形态完整；FSD组阴道出现了明显的萎缩，肌层变薄，肌肉组织含量减少，这不仅表现在肌层，而且在阴道上皮层的上方，出现了一层角质层，这是严重萎缩的表现，肌层显著减少；E2组小鼠的肌层较FSD组有所增多，但在肌层和上皮层还是存在明显的萎缩，且肌层组织的厚度明显变薄；EGF组中阴道的肌层厚度改善明显，上皮层几乎未出现萎缩，所有的萎缩只局限于肌层；CDP的肌肉层最完整最轻，其中上皮层未见明显的萎缩，只有在肌层存在轻微的肌纤维断裂，整体上接近对照组，这表明该复合制剂能显著增加肌层的含量，改善阴道的萎缩程度。

3.2 复合制剂可以改善小鼠阴道的润滑程度

本申请首创性的使用实验专用吸水试纸来检测阴道润滑程度的变化。图6A为检测小鼠阴道润滑程度的具体方法的示意图，参见图6A，将带有刻度的吸水纸剪成0.3*1cm的形状，放置在小鼠阴道的同一深度来观察试纸浸润的深度，浸润的深度越短，表明阴道润滑障碍越严重。图6B为不同组小鼠阴道的润滑程度的示意图，图中纵坐标代表吸水纸浸润的深度，单位厘米（cm）。参见图6B，正常对照组（及sham组）小鼠将吸水纸的浸润深度约为1.4cm，而FSD组小鼠阴道浸润的程度明显减少，仅有约0.8cm,给予雌激素、表皮生长因子和复合制剂后阴道润滑程度都有明显改善（p<0.05），且这种改善作用在复合制剂组表现的更为明显。

3.3 复合制剂可以增加小鼠血清多巴胺水平，提高性唤起和性反应

多巴胺是引起性反应的重要激素，生理水平的多巴胺对维持性欲和性唤起有着重要作用。图7为不同组小鼠血清中多巴胺的含量示意图，图中纵坐标代表含量，单位ng/L。FSD组小鼠血清中的多巴胺含量较sham组显著较少，表明我们的模型中小鼠多巴胺水平降低，但雌激素治疗后E2组小鼠血清的多巴胺含量与FSD组相似，未见明显的升高，表明雌激素对多巴胺的含量没有显著影响。而经过表皮生长因子和复合制剂治疗后小鼠血清多巴胺含量显著上升，其中单纯的表皮生长因子治疗对多巴胺的产生影响更大。

3.4复合制剂可以改善小鼠的性行为

图8为小鼠各种性行为的记录示意图，参见图8，小鼠对性行为的反应是观察治疗效果最直接的指标，通过用摄像机连续的进行检查发现并记录，参见表1，FSD小鼠对雄性小鼠的求爱行为表现出激烈的反抗，当雄鼠靠近他们时会表现出撕咬、尖叫和逃跑等行为，而经过治疗后雌性小鼠表现的温顺许多，对雄性小鼠的交配行为不再反抗；在表皮生长因子组我们惊奇的发现，当雄鼠出现后，雌鼠表现出一系类兴奋的动作，如耳朵摆动、跳跃等。对小鼠的性行为进行量化后如下表所示，与对照组相比，FSD组小鼠对性反应的整体表现较为淡漠，性行为的次数明显减少，对雄鼠的交配行为拒绝次数明显提高；经雌激素治疗后，小鼠对性反应的拒绝次数有所减少，性行为的接受次数增加；单纯表皮生长因子对小鼠性反应的接受和拒绝变化都不是很明显，当与雄鼠相遇后也未表现出明显的兴奋；复合制剂治疗后小鼠的性行为改善最明显，其中对雄鼠的性反应接受次数增加最明显，拒绝次数显著减少，表明该复合制剂对小鼠的性行为有明显的改善作用。

表1

3.5复合制剂可以提高阴道表面张力，增加性反应

在性反应过程中，女性的阴道表面开始有规律收缩，阴道表面张力发生规律变化，随着性交过程的不断进展，这种紧张性收缩的频率逐渐增加，收缩峰也上调，到达性高潮时这种收缩呈短暂、规律的持续性收缩，随着性高潮逐渐减退，这种收缩也消退，阴道表面张力恢复到正常。因此通过检测阴道表面张力可以客观反映阴道收缩的变化。

图9为不同组小鼠阴道表面张力的变化的示意图，参见图9，sham组小鼠在盆神经阴道支的刺激下表现为间断的有规律的收缩，收缩峰也规律的出现且相对较密；FSD小鼠阴道的表面张力无任何规律可循，收缩峰明显较少，且峰值显著降低，相比之下，通过雌激素和表皮生长因子治疗后，小鼠阴道的张力发生很大变化，在通过刺激盆神经人为唤起小鼠性反应时，小鼠阴道呈规律的持续性收缩，且收缩峰显著上升，这种现象在复合制剂治疗后表现的更为明显，即收缩峰密集的出现且很有规律。

由以上技术方案可知：

本申请提供的复合制剂可以改善小鼠阴道上皮的变化，减轻了阴道上皮萎缩。

本申请提供的复合制剂可以增加阴道肌层肌肉组织的含量，维持阴道的正常结构和功能。

本申请提供的复合制剂可以提高血清中多巴胺的水平，提高性唤起水平。

本申请提供的复合制剂可以改善小鼠的性行为。

本申请提供的复合制剂可以提高阴道表面张力，增加性反应。

本申请提供的实施例之间的相似部分相互参见即可，以上提供的具体实施方式只是本申请总的构思下的几个示例，并不构成本申请保护范围的限定。对于本领域的技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下依据本申请方案所扩展出的任何其他实施方式都属于本申请的保护范围。

Claims (3)

1.一种中西医结合复合制剂，其特征在于，所述复合制剂的有效成分由以下组分组成：表皮生长因子10-20%，雌激素5-15%，嗜酸乳杆菌1-3%，发酵乳杆菌1-3%，加氏乳杆菌1-3%，沙棘籽油提取物5-15%和甘油41-77%。

2.权利要求1所述的中西医结合复合制剂在制备预防和/或治疗女性性功能障碍的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括凝胶、洗剂、搽剂、软膏剂或栓剂。