CN114258985A

CN114258985A - 一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料及其制备方法

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Publication number: CN114258985A
Application number: CN202111590059.7A
Authority: CN
Inventors: 王国艳; 京伟; 党文庆
Original assignee: Loufan Wanshunyuan Agriculture And Animal Husbandry Development Co ltd
Current assignee: Loufan Wanshunyuan Agriculture And Animal Husbandry Development Co ltd
Priority date: 2021-12-23
Filing date: 2021-12-23
Publication date: 2022-04-01

Abstract

本发明公开了一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料及其制备方法。所述饲料包括复合益生菌菌剂和犊牛精补料；所述犊牛精补料包括以下重量百分比的组分：玉米40‑45％、豆粕30‑35％、麸皮18‑20％、干甜菜渣2‑2.5％、磷酸氢钙1‑1.2％、石粉1‑1.5％、食盐1‑1.2％；所述复合益生菌菌剂包括枯草芽孢杆菌和乳酸菌。本发明的包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料能够降低腹泻率，减少腹泻的发生；升高犊牛血液中免疫蛋白及抗氧化酶的含量，降低血液中促炎因子的含量，从而提高机体免疫力；可以提高犊牛粪便微生物菌群相对丰度，增加有益菌的含量，稳定肠道健康屏障，维持肠道健康。

Description

一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料及其制备方法

技术领域

本发明涉及饲料领域，特别涉及一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料及其制备方法。

背景技术

一般将出生到断奶阶段的小牛成为犊牛，即0至6月龄阶段，在此阶段的犊牛因其组织器官未发育完全、免疫力差、消化道和呼吸系统易被病原菌侵袭，易发生腹泻，使其生产性能降低。所以，提出一种能帮助宿主改善肠道菌群健康、促进机体生长发育，还能提高机体免疫力并降低腹泻疾病发生的犊牛饲料是非常有必要的。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料及其制备方法。

本发明是通过以下技术方案得以实现的。

一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料，包括复合益生菌菌剂和犊牛精补料；所述犊牛精补料包括以下重量百分比的组分：玉米40-45％、豆粕30-35％、麸皮18-20％、干甜菜渣2-2.5％、磷酸氢钙1-1.2％、石粉 1-1.5％、食盐1-1.2％；所述复合益生菌菌剂包括枯草芽孢杆菌和乳酸菌。

进一步的，所述犊牛精补料包括以下重量百分比的组分：玉米40％、豆粕35％、麸皮18％、干甜菜渣2.5％、磷酸氢钙1％、石粉1.5％、食盐 1％。

进一步的，所述枯草芽孢杆菌和乳酸菌的混合比例为(5-7):(3-5)。

进一步的，所述复合益生菌菌剂的接种量为精补料质量的15-20％。

一种上述包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料的制备方法，包括以下步骤：

S1.称取规定量的玉米、豆粕、麸皮、干甜菜渣、磷酸氢钙、石粉、食盐；

S2.将枯草芽孢杆菌和乳酸菌按照比例混合后，按接种量接入步骤 S1的精补料中；

S3.向步骤S2的混合物中加入水，使含水量为30-40％；

S4.在36-38℃的条件下发酵72-75h，既得。

本发明具有以下有益效果。

本发明的包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料能够降低腹泻率，减少腹泻的发生；升高犊牛血液中免疫蛋白及抗氧化酶的含量，降低血液中促炎因子的含量，从而提高机体免疫力；可以提高犊牛粪便微生物菌群相对丰度，增加有益菌的含量，稳定肠道健康屏障，维持肠道健康。本发明为肉用犊牛的健康养殖提供科学的理论依据，且为开发复合益生菌菌剂在肉用犊牛绿色健康高效的养殖中提供科学合理的理论依据。

具体实施方式

1材料与方法

1.1益生菌培养物

益生菌培养物由犊牛精补料(豆粕、麸皮、玉米等)组成，将枯草芽孢杆菌和乳酸菌的比例分别按照7：3和5：5的比例混合，均以20％接种量接入饲料中，加水使含水量为40％，发酵72h后制成A、B两种复合菌培养物，饲料组成及营养水平详见表1。

表1精饲料组成及营养水平(风干基础，％)

1.2试验动物与试验设计

本试验在山西省娄烦县万顺源农牧发展有限公司养殖园区内进行。根据体重相近的原则，采用对照试验设计，选择5月龄的健康肉牛45 只，随机分为3个处理组，包括空白对照处理组和试验处理I组、试验处理II组，每组15个重复，每个重复1只犊牛。各组的试验肉用犊牛饲喂于同一撞牛舍中。对照组饲喂未发酵的精补料，编号为C组，试验 I组为A组、试验II组为B组。

试验前每组肉用犊牛统一打上耳号，对环境进行消毒并对试验牛进行驱虫和防疫。试验期共22d，每天自由采食，饮水。

1.3腹泻率测定

在每天饲喂肉用犊牛的同时仔细观察犊牛的腹泻情况，每天观察3 次，若有2次出现腹泻(犊牛排出的粪便呈稀软不成形或水样状时，或尾部被粪便污染时)，则认为此犊牛在当天腹泻。腹泻率＝试验期腹泻犊牛数×腹泻天数/(试验犊牛只数/试验天数)×100％。

1.4血液指标测定

1.4.1血液样本采集

在试验期第21天晨饲前，每组随机选取12只犊牛，进行尾静脉采血，使用真空采血管采集5mL，斜侧静置25min后2000r/min离心15min，取上清液分装保存于－80℃冰箱中，用于免疫因子和炎症因子含量的检测。

1.4.2血清免疫因子及炎症因子含量的测定

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定免疫球蛋白A、G、M (IgA、IgG、IgM)、总超氧化物歧化酶(SOD)等免疫因子，促炎因子白细胞介素－lβ(IL-1β)、IL-6、白细胞介素－8(IL-8)和TNF-α 及IL-2的含量。以上指标测定所用试剂盒均购自上海派诺森生物科技有限公司，测定仪器为SynergyTM多功能酶标仪，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。

1.5粪便微生物多样性测定

1.5.1粪便样品采集

在试验期第21天，每组随机采集4头犊牛的无污染新鲜粪便，装入3ml无菌冻存管中，置于液氮中保存，送回实验室后-80℃保存备用。

1.5.2微生物多样性测序分析

粪样微生物DNA的提取与高通量测序由上海派诺森生物科技有限公司进行。

1.6数据计算和统计方法

试验数据采用Excel2021加强版进行初步处理后，采用SPSS18统计软件进行单因素方差分析，并用Duncan法进行多重比较，试验结果用平均值±标准差表示。P＜0.05时有显著差异，P＜0.01时差异极显著。

2.结果与分析

2.1益生菌对肉用犊牛腹泻率的影响

空白对照组有3头犊牛腹泻，用药后3天症状消失，其腹泻率为2％，试验组每组有一头牛轻微腹泻，用药后症状消失，其腹泻率为0.7％。

2.2益生菌对肉用犊牛血清抗氧化及免疫功能参数的影响

益生菌对肉用犊牛血清抗氧化及免疫功能参数的影响见表2。由表 2可知，试验组总超氧化物歧化酶(SOD)含量极显著高于对照组(P ＜0.01)，两个试验组差异不显著；试验A组IgA显著高于对照组(P ＜0.05),IgG、IgM极显著高于对照组(P＜0.01)。

表2益生菌对肉用犊牛血清抗氧化及免疫功能参数的影响

同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著(P＞0.05)，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)。下表同。

本发明采用的益生菌培养物是经过枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌与肉用犊牛的精补料混合发酵制成的。益生菌能够激活机体免疫系统，提高机体抗体水平,增强巨噬细胞的活性，刺激免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的产生，提升机体免疫力。免疫球蛋白又称抗体，是机体受到抗原刺激后在体内产生的一类能与抗原发生特异性作用的蛋白质，是反映机体免疫力高低的重要指标。超氧化物歧化酶(SOD)通过清除机体内超氧阴离子自由基，使机体细胞得到保护，达到保护机体的作用，是评价机体抗氧化能力的重要指标。本发明中,试验组IgA、IgG、IgM、SOD的含量均有所提高，且差异显著(P<0.05)，这表明在反刍动物日粮中添加益生菌可提高机体免疫蛋白及抗氧化酶的含量，从而提高机体免疫力和抗氧化力。

2.3益生菌对肉用犊牛血清炎性因子参数的影响

益生菌对肉用犊牛血清炎性因子参数的影响见表3。由表3可知，试验组IL-8、ILβ-b、IL-6、TNF-α均低于对照组，且试验A极显著低于对照组(P＜0.01)。

表3益生菌对肉用犊牛血清炎性因子参数的影响

血液中的细胞因子是机体细胞免疫功能的表征，对免疫细胞的分化和机体炎症有一定作用，在机体炎症和抗炎过程起重要作用。IL1-β、 IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α为促炎性因子，TNF-ɑ是一种由巨噬细胞分泌的内源性细胞因子，可以通过调控T细胞等其他杀伤细胞对肿瘤细胞进行杀伤，其在血液中的含量降低时，表明机体炎症反应的减弱，免疫力提高。本发明中，试验组TNF-α的含量低于空白对照组，试验Ⅰ组极显著低于空白对照组(P<0.01)。促炎细胞因子IL1-β、IL-2、IL-6、IL-8 过量分泌能够造成组织损伤进而降低机体的免疫功能，但少量分泌可局部作用于免疫细胞，增强免疫反应，以缓解应激对机体造成的损伤。本发明中，试验组血液中促炎细胞因子IL1-β、IL-2、IL-6、IL-8的含量均有不同程度减少，各组IL-2的含量变化不显著，试验Ⅰ组的IL1-β、IL-6、 IL-8显著低于空白对照组，这可能推测为IL1-β、IL-6、IL-8含量过高时会引起机体的损伤。这表明在反刍动物日粮中添加益生菌可降低促炎性因子的含量，减少机体损伤，增加机体免疫力。

2.4粪便微生物群结构多样性分析

微生物群落丰富度指数Chao1指数倾向于预测低丰度的物种，指数 Simpson反映生物群落多样性均匀度，指数Shannon侧重反映生物群落的丰富度和均匀度。由表4可知：C组的Chao1指数显著高于其他组(P ＜0.01)，但Simpson指数和Shannon指数与A组差异不显著(P>0.05)，说明C组的低丰度物种数高于A组、B组。

表4微生物多样性指数

2.5益生菌对肉用犊牛粪便微生物区系的影响

2.5.1益生菌对肉用犊牛粪便微生物门水平的影响

在门分类水平上，各组肉用犊牛粪便中排名前9的优势菌门包括厚壁菌门(Firmicutes，59.1％)、拟杆菌门(Bacteroidetes,25.9％)、变形菌门(Proteobacteria,11.2％)、螺旋体菌门(Spirochaetes,2.4％)、疣微菌门(Verrucomicrobia，0.5％)、TM7菌门、放线菌门(Actinobacteria)、蓝菌门(Cyanobacteria)、柔膜菌门(Tenericutes)、迷踪菌门 (Elusimicrobia)，上述菌门占总菌门的99％以上。

组间存在显著差异的菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes)、螺旋体菌门(Spirochaetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、蓝菌门(Cyanobacteria) (表5)。A组的拟杆菌菌门相对丰度极显著低于C组(P＜0.01)，疣微菌门显著低于C组，与B组差异不显著；而螺旋体门相对丰度极显著高于 C组(P＜0.01)，与B组差异不显著(P＜0.05)；蓝菌门相对丰度极显著低于C组(P＜0.01)，并显著低于B组(P＜0.05)。

表5肉用犊牛粪便微生物门水平的丰度％

2.5.2益生菌对肉用犊牛粪便微生物科水平的影响

犊牛粪便中排名前10的优势菌科分别为:瘤胃菌科 (Ruminococcaceae，53.1％)；莫拉氏菌科(Moraxellaceae，16.1％)；动性球菌科(Planococcaceae，6.9％)；拟杆菌科(Bacterae，4.8％)；消化链球菌科(Peptostreptococcaceae，4.8％)；毛螺菌科(Lachnospiraceae， 4.4％)；螺旋体科(Spirochaetaceae，3.8％)；梭菌科(Clostridiaceae， 2.3％)；理研菌科(Rikenellaceae，2.0)；S24-7菌科(S24-7，1.9％)；以上菌科之和所占总菌科的比例为64.0％。

组间存在显著差异的菌科为瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、螺旋体科(Spirochaetaceae)、拟杆菌科(Bacteroidaceae)、毛螺菌科 (Lachnospiraceae)(表6)。A组的瘤胃菌科、螺旋体科相对丰度极显著高于C组(P＜0.01)；拟杆菌科、毛螺菌科相对丰度显著低于C组(P＜ 0.05)。

表6肉用犊牛粪便微生物科水平的丰度％

2.5.3益生菌对肉用犊牛粪便微生物属水平的影响

肉用犊牛粪便中排名前10的优势菌属分别为不动菌属 (Acinetobacter，44.1％)、密螺旋体属(Treponema，10.5％)、5-7N15 菌属(5-7N15，9.6％)、颤螺菌属(Oscillospira，6.1％)、瘤胃球菌属 (Ruminococcus，6.1％)、梭菌属(Clostridium，6.1％)、土壤芽孢杆菌属(Solibacillus，5.7％)、梭状芽孢杆菌属(Clostridiaceae-Clostridium， 4.4％)、芽孢杆菌属(Bacillaceae-Bacillus，3.1％)、芽孢杆菌(Planococcaceae-Bacillus，3.1％)，以上菌属之和所占总菌属的比例为 22.9％。

组间存在显著差异的菌科为瘤胃球菌属(Ruminococcus)、密螺旋体属(Treponema)、芽孢杆菌属(Bacillaceae Bacillus)(表7)。A组的瘤胃球菌属、密螺旋体属相对丰度极显著高于C组(P＜0.01)；芽孢杆菌属相对丰度显著高于C组(P＜0.05)。

表7肉用犊牛粪便微生物属水平的丰度％

在健康的个体中，免疫系统、肠道菌群、肠黏膜屏障之间存在着稳定的动态平衡。本发明中发现，试验组粪便中的厚壁菌门显著增加 (P<0.05)，拟杆菌门比例有所下降，差异不显著。本发明发现，试验组的瘤胃菌科高于空白对照组，试验Ⅰ组粪便中的瘤胃菌科极显著高于空白对照组(P<0.01)，瘤胃菌科与碳水化合物分解及纤维素降解有关，是反刍动物肠道及粪便中最丰富的核心菌群之一，可以稳定肠道屏障，逆转腹泻。本发明结果表明，给犊牛饲喂经过三天发酵的精补料能够影响犊牛粪便微生物区系结构，从而维持肠道健康。

本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料，其特征在于：包括复合益生菌菌剂和犊牛精补料；所述犊牛精补料包括以下重量百分比的组分：玉米40-45％、豆粕30-35％、麸皮18-20％、干甜菜渣2-2.5％、磷酸氢钙1-1.2％、石粉1-1.5％、食盐1-1.2％；所述复合益生菌菌剂包括枯草芽孢杆菌和乳酸菌。

2.根据权利要求1所述的一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料，其特征在于：所述犊牛精补料包括以下重量百分比的组分：玉米40％、豆粕35％、麸皮19％、干甜菜渣2.5％、磷酸氢钙1％、石粉1.5％、食盐1％。

3.根据权利要求1所述的一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌和乳酸菌的混合比例为(5-7):(3-5)。

4.根据权利要求1所述的一种包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料，其特征在于：所述复合益生菌菌剂的接种量为精补料质量的15-20％。

5.一种权利要求1-4任一所述的包含复合益生菌菌剂的肉用犊牛饲料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S2.将枯草芽孢杆菌和乳酸菌按照比例混合后，按接种量接入步骤S1的精补料中；

S3.向步骤S2的混合物中加入水，使含水量为30-40％；

S4.在36-38℃的条件下发酵72-75h，既得。