CN114245748A - 包含活微生物的凝胶组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含油凝胶的组合物，所述油凝胶包含油、油基增粘剂和至少一种活微生物。

Description

包含活微生物的凝胶组合物
技术领域
本发明涉及包含活微生物的新型凝胶组合物。特别地，本发明涉及在皮肤或粘膜上局部使用的包含至少一种活的益生微生物的新型组合物。
背景技术
益生菌的使用引起了相当大的兴趣。益生菌是活的微生物，当以足够的水平给药时，可以为宿主带来健康益处(FAO WHO，2006年)。然而，为了发挥这些益处，微生物必须在含有活益生菌的产品的加工和储存过程中保持活力，已经进行了大量研究以稳定口服益生菌并确保对胃肠液的抗性。由于益生菌对许多因素敏感，包括氧气和酸性介质的存在，因此已将微胶囊化作为提高益生细胞活力的一种方法进行研究。益生菌的微胶囊化的过程是将益生微生物包裹在聚合物膜中的过程，保护它们，在某些情况下，允许它们在特定条件下释放。通常用于封装益生菌的技术是在淀粉颗粒中挤出、雾化或喷雾干燥、乳化、凝聚和固定化(Favaro-Trindade等，2011)。藻酸盐、结冷胶、K-卡拉胶和淀粉等多糖是双歧杆菌和乳酸杆菌微胶囊化中最常用的材料。
为了满足包含活微生物的护肤产品的需求，有必要开发用于局部使用的稳定组合物，其在应用于皮肤或粘膜时能够保持微生物的活力以及确保微生物的活化。
微生物的微胶囊化在本领域中是众所周知的，但是，这些技术不是为局部使用而开发的，并且微胶囊被设计成溶解在肠道中，从而在肠道中释放微生物。当现有技术的微胶囊应用于皮肤时，皮肤上的条件不会溶解胶囊并释放活的微生物。
用于药物或化妆品目的的局部制剂和产品的开发具有较长的保质期，并且对微生物引起的污染和腐败稳定。因此，这些局部制剂中活益生菌的稳定性非常有限，但是，如果可以在制剂中保持活力，益生菌在局部制剂中的使用可能具有巨大的潜力。局部制剂如霜剂、乳液、凝胶、喷雾剂本身含有大量的水，即为了适当地配制成凝胶、霜剂、泡沫、乳液、软膏等。显然，这些存在高度水的配方中，益生菌在其代谢不活跃状态下的储存存在问题。在这种局部制剂中出现的第二个问题是，它们通常含有与微生物存活不相容的试剂；例如防腐剂、表面活性剂、乳化剂和其他成分，以保护此类制剂，阻止有害微生物的生长以及形成稳定的乳液。这些试剂，防腐剂，自然会成为有益的活微生物制剂中的主要问题。WO18002248公开了在两隔室系统中配制微生物的概念，保护内核隔室的微生物免受外隔室中的成分的影响，一旦两个隔室的内容物结合，这种微囊用于局部使用，然而，这种包囊包括大小可与皮肤接触的微胶囊，需要将其揉入皮肤以破坏胶囊。不会因摩擦而破裂的胶囊不会将活微生物释放到皮肤表面。另一个问题将是当胶囊破裂并且活的益生菌与其他隔室中的成分(所述成分可以包括使益生菌菌株失活的防腐剂)一起释放到皮肤时在皮肤上的存活或活化。
局部应用活益生菌的使用非常有限，大多数产品基于益生菌菌株的裂解物(灭活的死细菌)，以克服维持局部用组合物中微生物活力的问题。当在凝胶、乳液、洗剂等中配制用于哺乳动物皮肤局部应用的活益生菌菌株时观察到的问题是缺乏活力和稳定性。因此，本发明的目的是提供一种允许活微生物长期储存的系统，该系统在使用时基本上不会伤害这些微生物，并且当施用于皮肤或粘膜时确实释放活微生物。
令人惊讶地发现，将微生物包裹在油凝胶中显著稳定了微生物的生存能力，并且进一步令人惊讶的益处是与油相比，使用油凝胶能够使微生物在皮肤上均匀分布。
本发明的优点是在油凝胶中包埋或混合或分散或包裹或包覆益生微生物能够实现长期稳定性。
因此，改进的稳定性将是有利的，尤其是增加的生存力将是有利的。
同样有利的是微生物在油凝胶中的优化分布，使微生物更均匀地分布在皮肤表面或粘膜上。
进一步优点是油凝胶与油相比的改进应用。
本发明的优点是油凝胶可以固化，从而使活微生物稳定包埋到油凝胶中并在固体或部分固体凝胶中保持活力。凝胶结构的这种稳定化减少了微生物在储存过程中的沉淀。这是一种新型有利制剂，用于将活微生物施用至粘膜，例如，阴道。
发明内容
因此，本发明的目的涉及包含活微生物的油凝胶。
特别地，本发明涉及包含油、油基增粘剂和活微生物的油凝胶。
特别地，本发明的目的是提供一凝胶，其通过活微生物的稳定性和活力解决现有技术的上述问题。
本发明的一方面，油基增粘剂是氢化油。
因此，本发明的一个方面涉及包含油、聚氨酯聚合物和至少一种活微生物的组合物。
本发明的组合物至少包含以下3种成分：油、聚氨酯聚合物和活微生物。
本发明的另一方面涉及基于植物油的聚氨酯聚合物的组合物。本发明的另一方面，聚合物的植物油是蓖麻油。更优选地，聚氨酯聚合物包含至少10％w/w蓖麻油。
在本发明的另一方面，油选自下列植物油中的至少一种；荷荷巴油、杏仁油、葵花籽油、巴西莓油(acai oil)或杏仁甜油(almond sweet oil)。
本发明的另一方面，该组合物是凝胶。
本发明的另一方面，该组合物是不透明的凝胶。
本发明的又一方面，活微生物是冻干微生物。
本发明的另一方面，冻干微生物以块状包埋在油中。
在本发明的又一方面，冻干微生物以直径小于120μm的块包埋。
并且在本发明的另一方面，该组合物用于治疗或预防失调或疾病。
本发明的另一方面是该组合物作为预防药物或用于治疗疾病、功能障碍或失调的药物的用途。
下面将更详细地描述本发明。
具体实施方式
定义
在进一步详细讨论本发明之前，首先定义以下术语和惯例：
“包埋”或“混合”或“分散”或“包裹”或“包覆”是指益生微生物分散在油凝胶内并被油凝胶完全包封。“包封”是指完全封闭或包裹在油中。油凝胶的特点是为固体或部分固体或液体。
在优选的实施例中，油凝胶在低于37摄氏度的温度下是固体或部分固体。
优选地，本文公开的益生培养产品基本上保持干燥，并且它们包含不超过痕量的水。在加工中使用大量的水通常与包覆油和产品稳定性不相容。
包埋活微生物的油可作为油组合物直接用于局部应用。
可以将油加工成液体油凝胶、部分固体油凝胶或固体油凝胶，其中微生物以组合物的0.01至95％的浓度包埋。
可以将油凝胶包埋的活益生菌进一步加工成乳液，该乳液包含占组合物的0.01至5％的亲水相。
在本发明的一个优选实施例中，组合物是由疏水油相组成的油凝胶，其中疏水相包含包埋的微生物。
在本发明的实施例中，油凝胶可以是有机凝胶(organogel)或凝胶油(oleogel)。
优选地，油凝胶包含有机凝胶因子。
在本发明的实施例中，油基增粘剂可以是有机凝胶因子。
用有机凝胶因子构建食用油在食品工业中用于替代反式脂肪，而不会增加饱和脂肪的含量。有机凝胶，也称为凝胶油，是由有机凝胶因子形成的三维网络固定的液态有机相制成的一类凝胶。
虽然已经开发了多种类型的有机凝胶因子，但植物蜡(plant waxes)和氢化植物油如菜籽蜡(氢化菜籽油)、小烛树蜡(Euphorbia cerifera cera)、米糠蜡(Oryza SativaBran Cera)、浆果蜡(Rhus Verniciflua peel cera/Rhus Succedanea fruit cera)、Oliwax(氢化橄榄油)、茶蜡(camellia sinensis cera)、杨梅果蜡(myrica ceriferafruit wax)、向日葵蜡(水解葵花籽蜡)、向日葵籽蜡(Helianthus Annuus Seed cera、抗坏血酸棕榈酸酯、生育酚)、蓖麻蜡(氢化蓖麻油)、巴西棕榈蜡(Copernicia cerifera cera)或任何其他植物基蜡(氢化植物油)由于它们的可用性、低成本和良好的胶凝能力而备受关注。当用作有机凝胶因子时，可以将蜡混合以形成具有特定物理特性的凝胶。
优选以油的0.1至40％(w/w)的浓度使用有机凝胶因子。有机凝胶因子的浓度更优选为0.5至20％，甚至更优选为1至17％。
一些植物蜡已显示出潜在的健康益处。例如，当大鼠喂食含有高达1％向日葵蜡的饮食时，它们的血清胆固醇水平会降低。还发现油有机凝胶因子的凝胶化可以控制脂质释放到血液中，这反过来又减弱了由急性摄入脂肪引起的甘油三酯、游离脂肪酸和胰岛素水平的餐后增加。因此，人们可以从使用有机凝胶构建的食品中期待多种健康益处。
此外，大多数植物蜡是副产品。例如，向日葵蜡是在向日葵油精炼过程中产生的。因此，开发含有蜡基有机凝胶的产品有助于这些农业副产品的利用。
聚合物和合成蜡也可用于使油凝胶化。适用于本发明的聚合物是氢化油和能够使油凝胶化的聚氨酯聚合物和共聚物。WO18185432中公开了此类聚氨酯聚合物的实例。只有少数聚氨酯聚合物能够使油凝胶化，这些聚氨酯聚合物的例子是Lubrisol的Oilkemia 5S聚合物和Polymerexpert的EstoGel M聚合物。这些聚氨酯聚合物包含辛酸/癸酸甘油三酯(蓖麻油)并且通常是蓖麻油和聚氨酯的共聚物。本发明的聚合物是基于植物油的聚氨酯。一些用于生产聚氨酯的植物油可能需要在聚合前进行化学改性。
在本发明的优选实施例中，聚氨酯聚合物是基于蓖麻油。
在优选的实施例中，聚合物包含超过10％w/w的蓖麻油，在更优选的实施例中，聚氨酯聚合物包含超过20％w/w的蓖麻油。
本发明不限于这两种市售聚氨酯产品，而是任何能够使油凝胶化的聚氨酯聚合物/共聚物产品。
辛酸/癸酸甘油三酯和聚氨酯聚合物在油中使用的浓度为0.1％(w/w)至20％(w/w)。优选的浓度为0.3％(w/w)至10％(w/w)，更优选为0.5％(w/w)至6％(w/w)。
合成蜡包括微晶蜡，它是通过作为其精炼过程的一部分而将凡士林脱油而生产的。石蜡也来源于石油。地蜡(ozokerite)、纯地蜡(ceresin)和褐煤蜡最初是源自煤和页岩的矿物蜡。
如今用于化妆品的地蜡是由石油合成的，就像微晶蜡一样。地蜡降低了棒状制剂的脆性，并增加了凝胶的强度(硬度)和稳定性。
乳化剂可用于稳定组合物，用于局部乳液的乳化剂是本领域已知的并且可以选自磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺或两者中富含的分级卵磷脂；其甘油单酯和甘油二酯；食用脂肪或油的甘油单酯和甘油二酯的磷酸一钠衍生物；甘油和丙二醇的乳酸化脂肪酸酯；羟基化卵磷脂；脂肪酸的聚甘油酯；丙二醇；脂肪和脂肪酸的单酯和二酯；DATEM(甘油单酯和甘油二酯的二乙酰酒石酸酯)；PGPR(聚甘油聚蓖麻油酸酯)；聚山梨醇酯20、40、60、65和80；脱水山梨糖醇单硬脂酸酯；脱水山梨糖醇三硬脂酸酯、燕麦提取物；等等。乳化剂不受此列表的限制。
在本发明的优选实施例中，油凝胶不包含任何乳化剂。
在本发明的另一优选实施例中，油凝胶组合物在微生物周围提供缺氧环境。在本发明的实施例中，油凝胶组合物可以是缺氧组合物。
在本发明的优选实施例中，油凝胶组合物不包含防腐剂。
在本发明的另一优选实施例中，油凝胶组合物不包含表面活性剂。
优选地，本发明的油凝胶组合物不包含防腐剂、和表面活性剂；或防腐剂、表面活性剂、和乳化剂；或防腐剂、和乳化剂；或表面活性剂、和乳化剂。
本发明涉及活微生物，其包括任何细菌、古细菌、噬菌体、病毒、酵母或真菌或其任何组合。
合适的益生微生物的实例包括酵母(例如酵母属、德巴利氏酵母、念珠菌、毕赤酵母属和球拟酵母属)、霉菌(例如曲霉属、根霉属、毛霉属、和青霉和球拟酵母属)和细菌(例如双歧杆菌属、拟杆菌属、梭菌属、梭杆菌属、蜜蜂球菌、丙酸菌属、链球菌属、肠球菌属、乳球菌属、葡萄球菌属、消化链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、微球菌属、明串珠菌属、魏斯氏菌属、气球菌属、酒球菌属、Cutibacterium属和乳杆菌属)。
最常用的益生菌是乳酸菌(LAB)菌株。
这些被认为是非致病性的，通常用作益生菌以改善胃肠道菌群和治疗胃肠道症状。本发明涉及使用的组合物中任何活细菌的稳定化。细菌优选选自乳杆菌属、明串珠菌属、双歧杆菌属、片球菌属、乳球菌属、链球菌属、气球菌属、肉杆菌属、肠球菌属、酒球菌属、芽孢乳杆菌属、四联球菌属、漫游球菌属和魏斯氏菌属。
优选的微生物特别是细菌。益生菌优选选自乳酸乳球菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、瑞士乳杆菌、詹氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、噬淀粉乳杆菌、解淀粉乳杆菌、消化乳杆菌、鸟类乳杆菌、德氏乳杆菌、食二酸乳杆菌、香肠乳杆菌、母鸡乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌、希氏乳杆菌、产马乳酒乳杆菌、高加索酸奶乳杆菌、粘膜乳杆菌、面包乳杆菌、类植物乳杆菌、桥乳杆菌、清酒乳杆菌、唾液乳杆菌、旧金山乳杆菌、类干酪乳杆菌、戊糖乳杆菌、纤维二糖乳杆菌、丘状菌落乳杆菌、棒状乳杆菌、卷曲乳杆菌、弯曲乳杆菌、短乳杆菌、布氏乳杆菌、食果糖乳杆菌、希氏乳杆菌、发酵乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、果囊乳杆菌(Lactobacillus ingluviei)、绿色魏斯氏菌、两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌、广布肉杆菌(Carnobacterium divergens)、谷氨酸棒杆菌、柠檬明串珠菌、乳酸明串珠菌、肠膜明串珠菌、假肠膜明串珠菌、酒类酒球菌、Pasteuria nishizawae、乳酸片球菌、糊精乳杆菌、小片球菌、戊糖片球菌、费氏丙酸杆菌、产酸丙酸杆菌、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、嗜热链球菌、解淀粉芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、弯曲芽孢杆菌、梭形芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、摩加夫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、史氏芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、死亡谷芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌或其突变体。
在本发明的另一方面，益生微生物可选自与天然健康皮肤微生物组相关的属，包括丙酸杆菌属、Cutibacterium属、葡萄球菌属、棒状杆菌属、马拉色菌属、曲霉属、隐球菌属、红酵母属和/或黑附菌(Epicoccum)属。
在本发明的实施例中，益生菌菌株可以是表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌(Cutibacterium acnes,Propionibacterium acnes)或其任意组合。
在本发明的优选实施例中，益生菌菌株是革兰氏阳性菌。
在本发明的优选实施方案中，组合物包含至少一种选自由以下组成的组的菌株：植物乳杆菌LB356R(DSM 33094)、绿色魏斯氏菌LB10G(DSM 32906)、植物乳杆菌LB113R(DSM32907)、植物乳杆菌LB244R(DSM 32996)、类干酪乳杆菌LB116R(DSM 32908)、类干酪乳杆菌LB28R(DSM 32994)、短乳杆菌LB152G(DSM 32995)和肠膜明串珠菌LB276R(DSM 32997)或突变株。
在优选实施例中，油凝胶包埋的微生物选自但不限于以下列表：乳双歧杆菌DSM10140、乳双歧杆菌LKM512、乳双歧杆菌DSM 20451、两歧双歧杆菌BB-225、青春双歧杆菌BB-102、短双歧杆菌BB-308、来自Zaidanhojin Nihon Bifizusukin Senta(日本双歧杆菌中心(Japan Bifidus Bacteria Center))的长双歧杆菌BB-536、EP2823822中描述的双歧杆菌NCIMB 41675、两歧双歧杆菌BB-225、青春双歧杆菌BB-102、短双歧杆菌BB-308、可从杜邦营养生物科技有限公司(DuPont Nutrition Biosciences ApS)获得的乳双歧杆菌HN019(Howaru)、可从达能集团(Groupe Danone)获得的乳双歧杆菌DN 173 010、可从科汉森公司(Chr.Hansen A/S)获得的乳双歧杆菌Bb-12、可从杜邦营养生物科技有限公司获得的乳双歧杆菌420、短双歧杆菌Bb-03、乳双歧杆菌BI-04、可从杜邦营养生物科技有限公司获得的乳双歧杆菌Bi-07、两歧双歧杆菌Bb-02、两歧双歧杆菌Bb-06、长双歧杆菌KC-1和长双歧杆菌913(杜邦营养生物科技有限公司)、短双歧杆菌M-16V(森永(Morinaga))和/或具有益生作用的乳杆菌，并且可以是以下任何菌株；鼠李糖乳杆菌LGG(科汉森)、嗜酸乳杆菌NCFM(杜邦营养生物科技有限公司)、保加利亚乳杆菌1260(杜邦营养生物科技有限公司)、类干酪乳杆菌Lpc-37(杜邦营养生物科技有限公司)、可从杜邦营养生物科技有限公司获得的鼠李糖乳杆菌HN001(Howaru)、可从杜邦营养生物科技有限公司获得的嗜热链球菌715和嗜热链球菌ST21、类干酪乳杆菌类干酪亚种CRL431(ATCC 55544)、来自医药股份有限公司(Medipharm,Inc.)的类干酪乳杆菌菌株F-19、类干酪乳杆菌LAFTI 126(DSM FoodSpecialties)和类干酪乳杆菌CRL 431(科汉森)、嗜热乳杆菌PTA-4797、唾液乳杆菌Ls-33和弯曲乳杆菌853(杜邦营养生物科技有限公司)。芬兰专利92498,Valio Oy中描述了类干酪乳杆菌鼠李糖亚种LC705，乳杆菌DSM15527(Bifodan)，乳杆菌DSM15526(Bifodan)，鼠李糖乳杆菌GG(LGG)(ATCC 53103)描述于美国专利5,032,399和鼠李糖乳杆菌LC705(DSM7061)，丙酸细菌(例如费氏丙酸杆菌谢氏亚种)PJS(DSM 7067)在芬兰专利92498,Valio Oy中有更详细的描述、亚硝化单胞菌D23(ABIome)、人葡萄球菌A9、C2、AMT2、AMT3、AMT4-C2、AMT4-Gl和/或AMT4-D12菌株(均来自Matrisys Bioscience)、鼠李糖乳杆菌PB01、加氏乳杆菌EB01、弯曲乳杆菌EB10、嗜酸乳杆菌5、动物双歧杆菌乳亚种12、长双歧杆菌536(均可从Bifodan A/S获得)，表皮葡萄球菌M034、M038、All、AMT1、AMT5-C5和/或AMT5-G6菌株(均来自Matrisys Bioscience)、植物乳杆菌YUN-V2.0(BCCM LMG P-29456)、戊糖乳杆菌YUN-V1.0(BCCN LMG P-29455)、鼠李糖乳杆菌YUN-S1.0(BCCM LMG P-2961)、绿色魏斯氏菌LB10G(DSM 32906)、类干酪乳杆菌LB113R(DSM 32907)、植物乳杆菌LB244R(DSM 32996)、类干酪乳杆菌LB116R(DSM 32908)、短乳杆菌LB152G(DSM 32995)、类干酪乳杆菌LB28R(DSM32994)、屎肠球菌LB276R(DSM 32997)、肠膜明串珠菌LB349R(DSM 33093)、植物乳杆菌LB316R(DSM 33091)、植物乳杆菌LB356R(DSM 33094)、植物乳杆菌LB312R(DSM 33098)；和/或其任何组合。
局部应用活益生菌的使用非常有限，大多数产品基于灭活益生菌菌株的裂解物，以克服维持局部用组合物中微生物活力的问题。当在凝胶、血清、乳液、洗剂等中配制活益生菌菌株用于哺乳动物皮肤的局部应用时观察到的问题是缺乏活力和稳定性。
用于局部应用的组合物通常在室温下稳定数月，这是维持护肤产品中活益生微生物活力的主要问题。
另一个问题是当应用于哺乳动物皮肤上时益生菌菌株的活化。如果益生菌菌株按照口服益生菌的稳定化程序进行微胶囊化，那么微胶囊旨在保护胃肠液中的活益生菌菌株，因此不会溶解在皮肤表面上。因此，益生菌菌株将不会从封装中释放，从而不能在皮肤表面或粘膜上建立益生菌菌株的结合、代谢或定植。
本发明解决了在皮肤或粘膜上局部使用的油凝胶中稳定活益生菌菌株的问题。
完全出乎意料的是，将微生物包埋入油凝胶中会维持活力并促进对皮肤或粘膜的益生作用。
应当理解，在下文中，与本发明的一个宽泛方面相关的优选实施例同样适用于上述本发明的其他宽泛方面中的每一个。将进一步理解的是，除非上下文另有说明，否则可以组合以下描述的优选实施例。
当在本文中使用时，术语局部包括指适用于身体表面(例如皮肤或粘膜)的制剂。在这方面可以提及的粘膜包括阴道、阴茎、尿道、膀胱、肛门、鼻子和耳朵的粘膜。
在优选的实施例中，油凝胶被配制用于阴道应用。
在优选的实施例中，油凝胶被配制用于鼻部应用。
本发明公开了在局部用于粘膜的组合物中稳定活益生菌菌株的新组合物和方法。
这些包含益生菌的组合物的利用进一步促进了对人和动物皮肤的益生作用。
本发明公开了用于配制包含活微生物的油凝胶的方法。
本发明进一步提供了用于治疗或预防皮肤病的治疗组合物，其包含治疗有效浓度的一种或多种活的物种或菌株或活的生物治疗产品，其包含适合在哺乳动物的皮肤或粘膜上局部给药的药学上可接受的载体内，其中所述益生菌菌株具有在室温下在组合物中保持活力并在应用于皮肤表面时被释放的能力。
在另一方面，本发明涉及包含药学上或美容上可接受的载体或赋形剂的组合物。优选组合物以固体、液体或粘性形式存在。
该组合物优选为凝胶形式。更优选的组合物是油凝胶。
该组合物优选为包含少于10％水的凝胶形式，更优选该组合物为包含少于5％水的油凝胶，更优选该组合物为包含少于1％水的油凝胶，更优选该组合物是包含少于0.5％水的油凝胶，更优选该组合物是包含少于0.1％水的油凝胶，更优选该组合物是包含少于0.05％水的油凝胶。
在一个优选的实施例中，本发明涉及一种用于人或动物皮肤的局部用组合物。
在进一步优选的实施例中，油凝胶组合物包含至少一种碳水合物和至少一种脂肪包埋的微生物。
所述组合物还可有利地进一步包含其他益生菌、益生元或其他活性物质和/或还可优选包含一种或多种选自以下的物质：抗氧化剂、维生素、辅酶、脂肪酸、氨基酸和辅助因子。
在本发明的优选实施例中，组合物是局部用药物、兽用、美容、阴道护理或皮肤护理产品。
根据本发明的组合物可适用于预防或治疗粘膜的疾病、功能障碍或失调。
在本发明的一个实施例中，粘膜可以是阴道、阴茎、尿道、膀胱、肛门、鼻子和耳朵。
根据本发明的组合物可适用于治疗或预防皮肤病，优选地，皮肤病选自湿疹、皮炎、特应性皮炎、痈、蜂窝织炎、酒渣鼻、牛皮癣、尿布疹、脓疱病、牛皮癣、痤疮和伤口。
该组合物优选包含一种或多种益生元来源，用于益生菌菌株以恢复皮肤或粘膜上的代谢。
在本发明的一优选实施例中，组合物包含至少一种用于治疗皮肤或粘膜失调或功能障碍的活益生菌菌株。
如本文所用，并且如本领域所熟知，“治疗”是用于获得有益的或期望的结果(包括临床结果)的方法。出于本主题的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于一种或多种症状的减轻或改善、疾病程度的减轻、疾病状态的稳定(即，不恶化)、疾病的预防、延迟或减缓疾病进展，和/或改善或缓解疾病状态。降低可以是并发症或症状的严重程度降低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％。
此外，本发明涉及在用于局部使用的产品中包含这些油凝胶包埋微生物的组合物，其特别是用于治疗皮肤或粘膜失调，或皮肤或粘膜疾病，或皮肤或粘膜微生物群功能障碍。
在优选的实施例中，油凝胶包埋微生物用于治疗疾病，所述疾病选自由以下皮肤病组成的组：包括牛皮癣、特应性皮炎、干性皮肤、敏感皮肤、易长粉刺的皮肤、痤疮、色素沉着过度的皮肤、老化的皮肤、过敏症、湿疹、皮疹、受紫外线刺激的皮肤、受光损伤的皮肤、洗涤剂刺激的皮肤(包括洗涤剂中使用的酶和十二烷基硫酸钠引起的刺激)、酒渣鼻、变薄皮肤(例如老年人和儿童的皮肤)、细菌性阴道病、尿路感染。
在一优选的实施例中，该组合物用于阴道护理。
在本发明的一优选实施例中，将根据本发明的包含至少一种油凝胶包埋的益生微生物的组合物用于患有炎性皮肤病的患者的皮肤上。
在本发明的一优选实施例中，皮肤病与特应性皮炎、湿疹、脓疱疮、痤疮、烧伤、尿布疹、创伤有关。
本发明的组合物可用于治疗或预防，例如，作为皮肤或粘膜的益生菌治疗。
在本发明的一个优选实施例中，在阴道粘膜上使用根据本发明的包含至少一种油凝胶包埋的益生微生物的组合物。
植物油含有天然抗氧化剂，在本发明的一个优选实施例中，进一步的抗氧化剂被加入到组合物中。抗氧化剂是优选的维生素E(0.25至10重量％)和/或迷迭香提取物(0.1至0.75重量％)。
与配制组合物时确定的活力相比，活力的“降低”可能是“统计学上显著的”。降低以对数降低来测量并且可以包括对数降低0.1、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5。微生物的“活力”以菌落形成单位CFU/ml来测量。微生物活力的“降低”可以确定为与配制组合物时的CFU/ml相比CFU/ml的差异。
根据本发明的微生物优选为分离的或纯化的形式，其中术语“分离的”特别是指微生物作为单一培养物培养并且源自培养基，例如包括它们的天然培养基。术语“纯化”不限于绝对纯度。
微生物可以有利地以活的喷雾干燥和/或冻干形式存在。
在本发明的优选实施例中，益生菌菌株用作干燥形式的活的分离微生物。用于冷冻保护的合适方法是本领域技术人员已知的并且包括涉及不同冷冻保护剂的冷冻干燥或冻干。
冷冻干燥(freeze drying)，也称为冻干(lyophilization)或低温冷冻干燥(cryodesiccation)，是一种低温脱水过程，通常涉及冷冻产品，降低压力，然后通过升华去除冰。微生物的冻干保持微生物的活力。
在本发明的一优选实施例中，菌株用作活的分离的菌株。
在本发明的优选实施例中，菌株用作活的分离的冻干菌株。
此外，优选微生物以0.001重量％至20重量％，优选0.005重量％至10重量％，特别优选0.01重量％至5重量％的量存在于组合物中。
本发明的一优选实施例涉及每克组合物施用大约1×103到1×1014CFU的活细菌，更优选地大约1×104到1x1010，并且最优选地每克组合物大约1×105到1×109CFU活细菌。
在本发明的一个优选实施例中，组合物中活益生菌的剂量高于每克组合物约1×104CFU活细菌，优选高于约1×105。
活的、冻干的微生物以块状包埋入油凝胶中，每块有超过10个活细胞。
油中的块直径小于100μm，通常直径在5μm到95μm之间。
优选地，块具有10μm至90μm的直径。
块可以在油凝胶中形成簇。簇包含超过一个块，每个块的直径约为5μm至100μm。
当待治疗的病症涉及对失调具有治疗作用的活生物治疗产品(益生微生物)时，组合物中活微生物的浓度为获得益生微生物的治疗作用所需的浓度。
优选组合物的另一个令人惊奇的优点是微生物能够在皮肤上活化并重新建立代谢活性。
本领域技术人员将清楚，这里以及在本发明中给出的范围的所有陈述中，以诸如“大约”或“大致”等术语为特征，用诸如“大约”或“大致”或“大概”之类的表达方式不需要指明精确的数值范围，但反而是关于所指明的数字的向上或向下的微小偏差仍然在本发明的范围内。
“哺乳动物”包括但不限于人类、灵长类动物、农场动物、运动动物(sportanimal)、啮齿动物和宠物。非人类动物受试者的非限制性实例包括啮齿动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠；兔子；狗；猫；绵羊；猪；仔猪；母猪；家禽；火鸡；肉鸡；貂；山羊；牛；马；以及非人类灵长类动物，例如猿和猴子。
优选地，该组合物用于在人皮肤或人粘膜上局部使用。
“有效量”取决于其应用的上下文。在皮肤或粘膜表面上局部施用包含活微生物的组合物的情况下，有效量是活微生物的数量，以CFU/克确定，其对皮肤或粘膜具有益生作用。
在本发明的一方面，组合物包含微生物和益生元。“益生元”是促进特定微生物生长的成分。“合生元”是包含至少一种益生菌和至少一种益生元的组合物。此类组合物被理解为促进有益微生物(例如益生菌)的生长。因此，强大的合生元基于益生微生物的特定菌株与精心挑选的益生元的组合。它们可以为哺乳动物带来重要的健康益处。
根据本发明的另一方面，提供了包含益生微生物和至少一种更多活性的成分的益生菌组合物。
益生元是指诱导微生物群(例如细菌和真菌)的共生微生物的生长和/或活性的化学产品，这些微生物群有助于宿主的健康。益生元刺激定植于皮肤的有益细菌的生长和/或活性。
一些用作益生元的低聚糖是低聚果糖(FOS)、低聚木糖(XOS)、聚葡萄糖、果胶、低聚半乳糖(GOS)或人乳低聚糖(HMO)。此外，双糖如乳果糖、乳糖或一些单糖如塔格糖也可用作益生元。
其他活性成分(或其他成分)不受任何限制。在一个优选的方面，至少一种益生元化合物包含在本发明的组合物中，即作为其他成分。在一个非常广泛的概念中，益生元是所有可以被益生菌代谢的化合物。因此，益生元可以作为益生菌的食物来源。益生元是本领域众所周知的，并且当用于本发明时，对益生元本身没有特别限制。在优选的实施例中，组合物中的至少一种益生元产品选自以下化合物和组合物：碳水化合物、葡聚糖、α-葡聚糖、β-葡聚糖、甘露寡糖、菊粉、低聚果糖、人乳低聚糖(HMO)、低聚半乳糖(GOS)、乳果糖、低聚乳果糖、半乳糖三糖、低聚果糖(FOS)、纤维二糖、纤维糊精、环糊精、麦芽糖醇、乳糖醇、葡糖基蔗糖(glycosilsucrose)、甜菜碱、维生素E或其变体(其中变体选自α、β、γ、δ生育酚，生育三烯酚和生育单烯酚)。任选地，可以优选甘露寡糖和/或菊粉。
HMO包括乳-N-四糖、乳-N-岩藻糖五糖、乳-N-丙糖、3'-唾液酸乳糖、乳-N-新岩藻糖五糖、唾液酸、L-岩藻糖、2-岩藻糖基乳糖、6'-唾液酸乳糖、乳-N-新四糖和3-岩藻糖基乳糖。
在一个优选实施例中，至少一种以下益生元化合物用于本发明的局部组合物中；乳糖、β-葡聚糖、甘露寡糖、菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖(GOS)、乳果糖、乳糖、低聚乳果糖、半乳三糖、低聚果糖(FOS)、纤维二糖、纤维糊精、环糊精、麦芽糖醇、乳糖醇、葡糖基蔗糖、甜菜碱、维生素E或其变体(其中变体选自α、β、γ、δ生育酚，生育三烯酚和生育单烯酚)、乳-N-四糖、乳-N-岩藻糖五糖、乳-N-丙糖、3'-唾液酸乳糖、乳-N-新岩藻糖五糖、唾液酸、2-岩藻糖基乳糖、6'-唾液酸乳糖、乳-N-新四糖和3-岩藻糖基乳糖。任选地，可以优选乳糖和/或甘露寡糖和/或菊粉。
岩藻糖，特别是L-岩藻糖被认为加强皮肤的天然防御、刺激表皮免疫防御和/或预防和/或治疗皮肤自身免疫疾病。在本发明的一个优选实施例中，组合物包含L-岩藻糖和/或D-岩藻糖。
在本发明的一个优选实施例中，该组合物进一步包含在该组合物中浓度为10mM至500mM的L-岩藻糖和/或D-岩藻糖。
根据所描述的优选实施例中的更进一步特征，包含本发明的微生物的组合物进一步包含至少一种选自细菌、古细菌、噬菌体、病毒、酵母或霉菌的另外的益生微生物。
在一优选的实施例中，至少一种另外的益生微生物是细菌。
在本发明的一个实施例中，油凝胶用作乳液中的疏水相。乳液是两种或多种通常不混溶的液体(即：油和水)的混合物。乳液是物质两相系统的一种更普遍分类的一部分，称为胶体。尽管术语胶体和乳液有时可以互换使用，但当分散相和连续相都是液体时使用乳液。在乳液中，一种液体(分散相)分散在另一种(连续相)中。
在本发明的一优选实施例中，将脂肪包埋微生物悬浮在油凝胶中并进一步掺入到包含水相和任选的第二油或脂肪相的乳液中，其中油凝胶相包含包埋在凝胶化油中的微生物。
本发明的“油”是在储存温度下为液体的油，因此该液体油具有低于25摄氏度的凝固点。更优选凝固点低于5摄氏度，甚至更优选凝固点低于0摄氏度。
本发明的油不是固化的油(黄油或脂肪)。根据本发明，黄油和脂肪不被认为是适合油凝胶的油。黄油在凝胶化之前需要经过液体分级成油。例如椰子、可可或乳木果油。
在一优选的实施例中，油是可以被皮肤或粘膜吸收的植物油。
在本发明的一优选实施例中，油是选自以下的植物油：杏仁油(almond oil)、葵花油、大麻油(hemp oil)、CBD油、火麻油(cannabis oil)、月见草油、琉璃苣油、巴西莓油、杏仁甜油、玫瑰果油、荷荷巴油、荷荷巴金油(Jojoba Golden oil)、甘菊油、金盏花油、沙棘油、红花油、蓖麻油、橄榄油、亚麻油、杏仁油(apricot kernel oil)、摩洛哥坚果油、荠蓝油、紫草油、葡萄籽油、猕猴桃籽油、毛蕊花油、桃仁油、蓟油和芝麻油。
在本发明的一个优选实施例中，组合物包含至少一种油凝胶包埋的益生微生物，其中油选自葵花油、霍霍巴油和杏仁油(almond oil)。
植物油可以包括以下中的至少一种：巴西莓(acai)、巴西莓(acai berry)、杏仁甜、芦荟、酸渣树、杏仁、山金车、摩洛哥坚果、鳄梨、巴巴苏仁(babassu)、猴面包树、黑莓籽、黑孜然、黑醋栗籽、蓝莓、琉璃苣、巴西坚果、西兰花籽、布里奇果(buriti)、金盏花、山茶籽、大麻油(包括CBD和THC)、芥花(canola)、苦配巴香脂、角栗(Cape Chestnut)(yangu)、胡萝卜(daucus carta)、蓖麻、霞多丽葡萄、大风子(chaulmoogra)、樱桃仁、奇亚籽、繁缕(Chickweed)、椰子、椰子分馏、棉籽、聚合草、玉米、海甘蓝籽、蔓越莓籽、黄瓜籽、蓝蓟籽、月见草、鸸鹋、亚麻籽、葡萄籽、榛子、大麻籽、七叶树籽、荷荷巴油、卡那其(karanj)籽、猕猴桃籽、夏威夷果、澳洲坚果、马鲁拉(Marula)、药蜀葵(marshmallow)、曼杰提树(manketti)、绣线菊、奶蓟籽、辣木、毛蕊花、芥菜籽、印度苦楝树、橄榄、棕榈、木瓜籽、西番莲籽、桃仁、花生、紫苏、石榴、大裂叶五桤木、南瓜籽、覆盆子籽、米糠、玫瑰果、圣约翰草油、红花、沙棘果肉、乳木果油、烤芝麻、芝麻籽、大豆、向日葵、琼崖海棠(Calophyllum In-ophyllum)、蓟、番茄、火鸡红、血竭(sangre de drago)、核桃、西瓜籽、小麦胚芽、阿比西尼亚(Abyssinian)、欧洲油菜(colza)、蜂蜡、羊毛脂、亚麻籽、被孢霉油、ongokea、石蜡液、豌豆、Pegui、罂粟籽、巴卡斯、油菜籽、大豆、妥尔(tall)、桐树、婆婆纳、小麦胚芽、角栗(yangu)籽及其任意组合。
在本发明的优选实施例中，油凝胶组合物用作局部用组合物，组合物中基本不含水。
在本发明的优选实施例中，具有油凝胶稳定的微生物的油凝胶组合物用作油凝胶包埋微生物的另外的制剂中的成分。
在一优选的实施例中，另外的制剂的组合物是由亲水相和疏水相组成的乳液，其中疏水相包含油凝胶包埋的活微生物。
根据所描述的优选实施例中的更进一步特征，益生微生物能够在哺乳动物皮肤或粘膜上和/或内增殖和定殖。
本发明成功地解决了目前已知的局部使用组合物的缺点。用于局部使用的已知组合物不能保持微生物的活力或微生物不能在皮肤表面上活化。
本发明提供了几个优点。特别地，即使在室温下储存，微生物的生存力也能在组合物中保持。当油被皮肤吸收时，被皮肤的温度和水分活化的微生物从油凝胶中释放微生物。
在另一方面，本发明提供了制备包含油凝胶包埋的活微生物的局部用组合物的方法。
在优选的变体中，微生物是冻干培养物。此外，优选油凝胶的游离水分低(即，Aw小于0.4)，从而最小化干燥的活微生物暴露于水分并避免微生物的活化。
可以进一步加工包含油凝胶包埋微生物的油组合物。
该方法还可包括以下步骤。包含油凝胶包埋微生物的油组合物可以与允许乳化的亲水组合物混合，任选地与任何补充的可溶性成分一起。油凝胶中包埋的微生物会留在油凝胶中。油凝胶可以是乳液的连续相或非连续相。优选地，油凝胶可以是连续相。
还提供了一种生产用于局部使用的包含油包埋微生物的组合物的方法。
本发明的发明人惊奇地发现，提供根据本发明的油凝胶可以保持包埋微生物的活力的显著改善。改善的活力可以提供超过1个月，例如至少2个月，例如至少4个月，例如至少6个月，例如至少8个月，例如至少12个月，例如至少11/2年，例如至少2年。
优选地，相对于最初添加到油凝胶组合物中的微生物的量，维持的活力可以涉及至少50％的微生物是有活力的；例如至少75％；例如至少85％；例如至少90％；例如至少95％。
在本发明的一优选实施例中，提供本发明油凝胶组合物的方法可以包括以下步骤；
a.冻干活微生物产生至少102CFU/g生物质的冻干生物质；
b.将冻干的生物质包埋入油和有机凝胶因子的混合物中；
c.将冻干的生物质固定在由有机凝胶因子形成的三维网络中。
在本发明的一个实施例中，可以通过搅拌油、有机凝胶因子(油基增粘剂)和活微生物来形成三维网络。优选地，可以在100-800rpm的范围内进行搅拌；例如在300-650rpm的范围内；例如在450-550rpm的范围内；例如大约510rpm。
应当注意，在本发明的一个方面的上下文中描述的实施例和特征也适用于本发明的其他方面。
本申请中引用的所有专利和非专利参考文献均通过引用整体并入本文。
现在将在以下非限制性示例中更详细地描述本发明。
示例
示例1。
冷压有机荷荷巴油(希蒙得木籽油)获自丹麦Hedenhus。有机精制甜杏仁油获自Nardos Cosemeceuticals并且有机葵花籽油(向日葵籽油)获自丹麦Hedenhus。
Oilkemia 5S聚合物获自Lubrizol。
冻干鼠李糖乳杆菌LGG获自可商购产品Culturelle Probiotics Pro-Well，批号18024CGM15(DSM)。口服胶囊被打破，冻干的活鼠李糖乳杆菌LGG菌株作为冻干粉用于油凝胶中，菌株在MRS琼脂板上在37摄氏度下过夜生长24小时，并作为新鲜培养的活菌株用于油中。
植物乳杆菌LB244R(DSM 32996)在MRS肉汤中在37摄氏度下过夜生长24小时并通过离心收获，使用脱脂奶或山梨糖醇作为冷冻保护剂将细胞冻干过夜。
油凝胶使用以下程序生产：
步骤1将每种油与1％(w/w)的Oilkemia 5S聚合物一起加热，直到聚合物溶解(大约85摄氏度)
步骤2在搅拌的同时将油冷却至低于30度
步骤3将活的益生菌菌株以冻干粉或以新鲜过夜培养的琼脂板上的菌落形式混合到油中。
确定每种油的菌落形成单位(CFU)。将油静置(不搅拌)并产生包含活益生菌菌株的油凝胶。油凝胶在以下温度下储存用于稳定性测试：20、25和37摄氏度。
表1：分别在时间＝0和1、4、8和12周时确定的活菌株的稳定性。显示20摄氏度的存储温度。细胞计数测量为CFU/g油凝胶。(三次CFU测定的平均值)
Figure BDA0003407253850000151
Figure BDA0003407253850000161
所有菌株都包括不含聚合物的对照油。新鲜和冻干菌株均沉淀在未凝胶化的油中，对于所有菌株，与油凝胶相比，在油中确定了较低的CFU。当油未凝胶化时，新鲜培养的细胞在3种不同的油中只能存活4周。对于冻干油，在不含聚合物的对照油中观察到1-2log的对数减少。
当使用1％w/w的Oilkemia 5S聚合物时，所有三种油都形成半固体凝胶。
示例2：
用于凝胶化的油：
样品1：杏仁油(Almond oil)
样品2：琉璃苣油
样品3：杏仁甜油
样品4：玫瑰果油
样品5：荷荷巴金油
样品6：甘菊油
样品7：金盏花油
样品8：沙棘油
样品9：红花月见草油
样品10：芝麻油
Oilkemia 5S聚合物购自Lubrizol
EstoGel M购自PolymerExpert
油凝胶按照以下步骤制备：
步骤1：加热油和其中一种聚合物直至溶解
步骤2：搅拌油-聚合物混合物，同时冷却至室温
第三步：加入冻干的LB244R。
两种聚合物的使用浓度为：0.1％、1％和5％w/w。
油凝胶的粘度取决于油和聚合物的浓度，大多数含有5％w/w聚合物的油凝胶是固体或部分固体油凝胶。
2周后确定冻干LB244R在油凝胶中的活力，并且对于所有凝胶，油凝胶中的活力在2周后没有变化，与油相比，在油凝胶中获得了更好的活力。
示例3
使用与示例2相同的程序制备油凝胶。在本实验中，将肠膜明串珠菌LB349R(DSM33093)和绿色魏斯氏菌LB10G(DSM32906)两种菌株在MRS肉汤中在37摄氏度下过夜培养24小时并通过离心收获，将细胞冻干过夜。
两种菌株都获得了显著的稳定性，因此油凝胶在37摄氏度下储存2周后仍保持100％的活力。
示例4
用于凝胶化的油：
荷荷巴油(Natura-Tec)
精制有机杏仁油(Gustavheess)
葵花籽油(Bressmer&Francke)
混合霍霍巴向日葵油1:1
混合荷荷巴杏仁油1:1
用于凝胶化的蜡：
向日葵蜡(Kahlwax 6607H)
混合植物蜡、Phytowax(Kahlwax 2225)
菜籽蜡(Kahlwax 6237)
橄榄油蜡(Natura-Tec OC蜡)
微生物：
植物乳杆菌LB244R(DSM 32996)
冻干植物乳杆菌LB244R(DSM 32996)
冻干植物乳杆菌LB356R(DSM 33094)
根据以下程序制备油凝胶：
将蜡熔化并与油混合，使用0.5、1、5、10、15、20、25或30％(w/w)的蜡。轻轻搅拌，同时冷却至25摄氏度。如示例1中所述制备细菌细胞并添加至约108CFU/g凝胶的浓度，在稳定性储存之前使凝胶在室温下结构稳定化24小时。
为每种油-蜡-细菌组合生产油凝胶，并在5、25和37摄氏度下储存。24小时后和此后每两周测定每钟凝胶中菌株的活力。
对于油、蜡和细菌的所有组合，当使用25％和30％的油蜡进行凝胶化时，会获得固体凝胶。对于0.5％和1％的油蜡，所有组合都导致凝胶化油仍然是液体。
冻干细胞在凝胶中比非冻干细胞明显更稳定，并保持活力+12个月，而非冻干细胞在2周后活力下降，10周后死亡。观察到3种油或2种油混合物之间没有显著差异。
活力的最重要参数是凝胶中的水含量。在形成凝胶之前通过冻干细胞去除水对活力有影响。
对于平板计数，在稀释缓冲液(PBS)中使用5％聚山梨醇酯作为洗涤剂从油凝胶中提取细胞。将流动的凝胶离心以沉淀微生物，从沉淀中去除流动的凝胶，将沉淀重新悬浮在PBS中并稀释用于平板计数。
示例5：
对于示例4中的组合物，使用oCelluScope(BioSense Solution，丹麦)通过对比相显微镜和图像分析确定包埋微生物的分布和大小。
对于稳定性和在油中的分散性，经测量，直径为5-100μm大小的冻干微生物块的分散在油凝胶中产生了最佳分布，并提高了微生物的活力。
块的大小可以通过混合速度控制，取决于混合设备和混合温度下油凝胶的粘度。
分析了来自示例4的油凝胶，图像示例在图1中。
图1显示了获得的油块的尺寸范围。块示于油凝胶中，该油凝胶包含1:1荷荷巴油和杏仁油、20％橄榄油蜡和冻干植物乳杆菌LB244R(如示例4中所述)。使用VelpScientific MST数字磁力搅拌器以510rpm的速度生成直径为5-100μm大小的块。
示例4中测试的所有组合物中所有大小的块具有小于100μm的单个块的大小。在油中观察到的所有较大的微生物块都与形成单个块簇的块有关(图2)，其中每个块的尺寸小于100μm。团的聚集不影响块中微生物的活力。
通过oCelluScope中的图像分析确定块中微生物的活力。将油凝胶涂在10-20μm厚的6孔微量滴定板中的薄层中，并在凝胶顶部添加一层薄薄的液体MRS培养基，从块中生长出来，然后进行图像分析。
参考文献：
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WO18185432

Claims (15)

1.一种包含油凝胶的组合物，所述油凝胶包含油、油基增粘剂和至少一种活微生物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中油基增粘剂是有机凝胶因子。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中油具有低于20摄氏度的熔点。
4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中油具有低于15摄氏度的熔点。
5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物是在20摄氏度下的油凝胶。
6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述油是植物油。
7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述活微生物是冻干微生物。
8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述有机凝胶因子选自以下：植物蜡、植物油蜡、氢化植物蜡或聚氨酯聚合物。
9.根据权利要求7所述的组合物，其中所述冻干微生物是乳酸菌。
10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中冻干微生物以小于100μm大小的块分布在组合物中。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的组合物，用于治疗或预防失调或疾病。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的组合物，用于预防或治疗粘膜的疾病、功能障碍或失调。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中粘膜是阴道、阴茎、尿道、膀胱、肛门、鼻子和耳朵。
14.一种用于治疗或预防皮肤病的组合物，优选地，皮肤病选自湿疹、皮炎、特应性皮炎、痈、蜂窝织炎、酒渣鼻、牛皮癣、尿布疹、脓疱病、牛皮癣、痤疮和创伤。
15.一种提供根据权利要求1-10中任一项所述的油凝胶组合物的方法，所述方法包括以下步骤：
a.冻干活微生物产生至少102CFU/g生物质的冻干生物质
b.将冻干的生物质包埋入油和有机凝胶因子的混合物中
c.将冻干的生物质固定在由有机凝胶因子形成的三维网络中。
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