CN114231590B - 一种精子质量的评估方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种精子质量的评估方法，属于生物检测技术领域。所述评估方法以精液中蛋白酶体活性为指标，通过测定不同年龄组、不同精子活力组、不同DNA碎片组、不同形态率、不同头部畸形率组间蛋白酶体活性，发现不同精液质量指标组间蛋白酶活性均无显著性差异，但是精子蛋白酶体活性表达越高，常规体外受精受精率、2PN率越高。因此，本发明对于原因不明性不育或常规体外受精率低受精率的患者，可以考虑可检测其精子蛋白酶体活性，为临床选择常规体外受精或ICSI治疗提供依据。

Description

一种精子质量的评估方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种精子质量的评估方法。
背景技术
26S蛋白酶体是泛素-蛋白酶体途径的终点，其为一个复杂的多亚单位复合体，由负责识别与展开泛素化底物的19S调控粒子(Regulatory particle,RP)和具有负责蛋白质降解的20S催化核心(Core peptidase,CP)构成。19S RP可以生化地分为“基底”和“盖子”两个部分，基底上含有6种ATP酶亚基和4种非ATP酶亚基，其中非ATP酶亚基为泛素及泛素样蛋白提供结合位点，ATP酶亚基则具有激活底物蛋白展开活性。盖子部分仅由非ATP酶亚基构成，可识别多泛素结合的蛋白底物，并具有去泛素化活性，可以解开泛素，将底物蛋白转移到核心蛋白酶中进行降解。20S CP是一种高度保守的桶状复合物，由四个堆叠的七聚体同心环组成。其中2个外环是由7个α型亚基组成，2个内环由7个β亚基组成，外环是出入口的守卫，保证只水解进入桶装结构内部的蛋白质，两个内环形成一个内室，里面具有负责蛋白质水解的活性位点，在7个β亚基中只有3个亚基(β1、β2和β5)保留了完整的蛋白降解活性位点，因此每个20S CP有6个蛋白水解活性位点，其具有谷氨酰样肽水解酶活性、类胰蛋白酶活性、类糜蛋白酶活性，能使大多数肽键断裂。
精子发生是雄性哺乳动物体内一系列复杂而有序的过程，始于精原干细胞，经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、球形精子细胞。期间发生有丝分裂、减数分裂等生物学过程。随后球形精子细胞再经历细胞核浓缩、顶体形成、鞭毛形成等变形过程成为延长形精子细胞，进一步演化为成熟精子。26S蛋白酶体在精子发生及变形过程中起重要作用。有研究证明，20S CP内环β亚基中的三种蛋白酶活性均可在人精子质膜表面可被检测到，并且应用蛋白酶体抑制剂可阻断精子分化的发生。并且精子在发生及变形并非完美的过程，期间会有异常的精子产生，为了减少异常精子的数量，体内蛋白酶体能通过降解异常精子，发挥着对精子生成过程类似质量控制的作用。人附睾内存在大量泛素化蛋白及26S蛋白酶体，提示附睾中存在着通过泛素-蛋白酶体途径降解蛋白质的过程，使得异常精子在附睾精子发生结束时被清除。哺乳动物睾丸中，有缺陷的精子，如双头精子、双尾精子、胞质残余精子等将被泛素化，继而被蛋白酶体所降解。
根据相关报道，男性精液质量下降，是导致不育的重要原因之一，并且全球范围内约15％的育龄夫妇存在生殖障碍，其中大约有50％的不育原因是由男性因素引起。其原因比较复杂,主要有生精障碍、精液异常、精卵结合障碍、全身性因素等。目前临床对于精液的质量评估，通常是通过分析精液常规，精子DNA碎片率，精子正常形态率，精浆锌浓度等来获得。但由于这些评估方法存在自身局限性，精液标本自身的多变性，临床上使用该些方法检测精液质量时无法全面揭示男性不育原因及评估男性生育能力。也有研究发现：梯度离心得到的精子，分离液中劣质精子表现出内在的蛋白酶体活性缺陷，精子蛋白酶体活性与精子活力、正常形态之间呈正相关。但是目前没有针对蛋白酶体与精液质量参数之间关系进行精子质量评估的具体方法报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种精子质量的评估方法，以解决上述现有技术存在的问题，通过试验证明男性患者精子蛋白酶体活性和精液质量参数间的关系，评估精子质量，进而为临床精子质量的检测提供了更多的参考和依据。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种精子质量的评估方法，以精液中蛋白酶体活性为评价指标。
优选的是，所述精液中蛋白酶体活性的测定包括以下步骤：
(1)收集新鲜精液标本，采用梯度离心法处理所述精液标本，分离得到精子标本；
(2)将所述精子标本混匀，用PBS溶液将所述精子标本稀释并计数，再取稀释后计数为2-106/mL的精子标本与蛋白酶体检测试剂混合均匀；
(3)将标准品20S proteasome试剂按照比例稀释，并将稀释后的20S proteasome与蛋白酶体检测试剂混合均匀；
(4)经步骤(2)处理后的混合液以及经步骤(3)处理后的标准品分别用多功能酶标仪检测精子和标准品中蛋白酶体荧光强度；
(5)根据所述标准品的荧光强度值制作标准曲线，并根据所述标准曲线所得公式计算精子标本中蛋白酶体活性。
优选的是，步骤(1)中，梯度离心法处理精液标本具体包括以下步骤：
S1：将已液化的精液加入梯度分离液顶部，于300-400g离心10-20min，收集底层精子沉淀；
S2：将所述精子沉淀加入Fertilization Medium培养液中，充分混匀后，300-400g离心3-8min；
S3：经S2离心后弃去上清液，加入Fertilization Medium培养液调整精子浓度至20×106/mL，于6％CO2、37℃培养，备用。
优选的是，经过梯度离心法处理精液标本后，精子活力平均值为90.8±8.81％。
优选的是，步骤(2)中，稀释后计数为2-106/mL的精子标本与蛋白酶体检测试剂按照等体积比混合。
优选的是，步骤(3)中，所述标准品20S proteasome试剂按照比例稀释后分别为2500ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml。
优选的是，步骤(4)中，测定荧光强度的激发波长为380nm，发射波长为460nm。
本发明还提供一种检测精子中蛋白酶体含量的试剂在制备评估精子质量的试剂盒中的应用，所述试剂盒包括用于测定精子中蛋白酶体含量的试剂，通过所述蛋白酶体含量评估精子质量。
优选的是，所述试剂盒包括蛋白酶体缓冲液、荧光素检测试剂、Suc-LLVY-GloTM底物以及标准品。
优选的是，所述标准品为20S Proteasome。
本发明公开了以下技术效果：
本发明通过试验评估了精子中蛋白酶体活性与精液质量相关参数间存在如下关系：精子蛋白酶体活性在男方患者不同年龄组，不同活力组，不同DNA碎片率、不同形态率、不同头部畸形率组间均无显著性差异。按精子头部畸形率分为90％-94％、95％-96％、97％-100％三组间，虽然各组间无显著性差异(p＞0.05)，但精子头部畸形率为90％-94％组蛋白酶体活性明显高于头部畸形率为95％-96％、97％-100％两组。考虑可能因为精子中蛋白酶体存在于精子顶体质膜表面及内部，精子头部异常时常导致顶体缺陷，降低了精子中蛋白酶体活性，这可能与精子形态率异常而体外受精率低或受精失败有关。通过本发明公开的上述蛋白酶体与不同精子质量参数间的关系，可为临床精子质量的检测提供了更多的参考，同时还能为常规体外受精和ICSI后受精情况的评估提供依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为由标准品20S Proteasome构建的标准曲线；
图2为年龄组间蛋白酶体活性比较；
图3为是否弱精子症组间蛋白酶体活性比较；
图4为正常形态率组间蛋白酶体活性比较；
图5为头部畸形率组间蛋白酶体活性比较；
图6为精子DNA碎片率组间蛋白酶体活性比较；
图7为正常与异常精液组间蛋白酶体活性比较；
图8为IVF受精率与蛋白酶体活性间关系；
图9为IVF 2PN率与蛋白酶体活性间关系；
图10为IVF卵裂率与蛋白酶体活性间关系；
图11为IVF正常卵裂率与蛋白酶体活性间关系；
图12为IVF优胚率与蛋白酶体活性间关系；
图13为ICSI受精率与蛋白酶体活性间关系；
图14为ICSI 2PN率与蛋白酶体活性间关系；
图15为ICSI卵裂率与蛋白酶体活性间关系；
图16为ICSI正常卵裂率与蛋白酶体活性间关系；
图17为ICSI优胚率与蛋白酶体活性间关系。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例
一、材料与方法
1、主要试验试剂
Figure BDA0003415116620000071
2、主要试剂的制备
1.蛋白酶体检测试剂制备
①购买Promega公司的Proteasome-GloTM Chymotrypsin-Like Assay试剂盒检测糜蛋白酶体活性。
②试剂盒中包括：10ml蛋白酶体缓冲液、1瓶bottle荧光素检测试剂、50μl Suc-LLVY-GloTM底物。
③将10ml蛋白酶体缓冲液与1瓶bottle荧光素检测试剂混匀，得到10ml蛋白酶体荧光素检测缓冲液。使用1.5ml棕色EP管将其按照500μl一份，分装成20份，保存至-20℃冰箱中。
④将50μl Suc-LLVY-GloTM底物，按照2.5μl一份，分装成20份至PCR管中，保存至-20℃冰箱中。
⑤使用时将蛋白酶体荧光素检测缓冲液与Suc-LLVY-GloTM底物平衡至室温，按照200：1的比例配置，并混匀于室温下平衡30分钟。
2.标准品的制备
购买LifeSensors公司的20S Proteasome试剂。使用PCR管将其按照1μg一份，分装成50份，保存至-80℃冰箱中。使用时将其平衡至室温，现有20S Proteasome浓度为1㎎/ml，按照以下步骤将其制成标准品的浓度梯度：
①取1μl 1mg/ml的20S Proteasome加入9μl PBS溶液中，配成浓度为0.1mg/ml的20SProteasome。
②取2μl 0.1㎎/ml的20S Proteasome放入78μl PBS中，配成浓度为2500ng/ml的20S Proteasome。
③取1μl 0.1㎎/ml的20S Proteasome放入99μl PBS中，配成浓度为1000ng/ml的20S Proteasome。
④取1μl 0.1㎎/ml的20S Proteasome放入199μl PBS中，配成浓度为500ng/ml的20S Proteasome。
⑤取1μl 0.1㎎/ml的20S Proteasome放入399μl PBS中，配成浓度为250ng/ml的20S Proteasome。
⑥取1μl 0.1㎎/ml的20S Proteasome放入799μl PBS中，配成浓度为125ng/ml的20S Proteasome。
⑦最终取浓度梯度为：2500ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml。
3.研究对象
研究精子蛋白酶体活性与精液质量参数间关系：选取115例2020年07月-2021年02月我院行常规体外受精或ICSI助孕的男性作为研究对象。入选标准：经密度梯度离心后精子浓度＞2×106/ml，显微镜下观察精液中白细胞数＜1×106/ml。排除标准：染色体异常者，遗传性家族病史者，急性生殖系统感染者。患者年龄：最小为25周岁，最大为57周岁，平均年龄为(36.17±6.29)岁。
研究精子蛋白酶体活性与体外受精胚胎结局间关系：选取2020年7月-2021年02月我院行常规体外受精或ICSI助孕的男性作为研究对象。
入选标准：
①男方患者：经密度梯度离心后精子浓度＞2×106/ml，显微镜下观察精液中白细胞数＜1×106/ml。②女方患者：无染色体异常者，无遗传性家族病史者，取卵数≥5枚，卵母细胞MII率≥70％。排除标准：①男方患者：染色体异常者，遗传性家族病史者，急性生殖系统感染者。②女方患者：卵子形态学异常。最终入选实验样本为66例，其中男方患者年龄：最小为25周岁，最大为47周岁，平均年龄为(33.62±4.99)岁。女方患者年龄：最小为24周岁，最大为42周岁，平均年龄为(31.86±4.29)岁。
4.试验方法
①精液标本收集及检查：取精液标本前男方需禁欲2-7天，取精前排空膀胱，采用手淫法留取精液于准备好的无菌杯中，将标本放入37℃温箱中等待完全液化。取一部分精液行常规检查。采用计算机辅助精子质量分析系统(CASA)，检查结果参照《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册第五版》。其余精子检查结果(如精子DNA碎片率、精子正常形态率等)统计整理该患者我院最近一次检查结果。
②精液密度梯度离心实验室处理方法：1)以女方姓名标记15ml尖底试管。2)吸取1mL上层分离液(50％Isolate)加入15mL尖底试管底部；然后吸取含1mL下层分离液(90％Isolate)小心置于试管底部，注意保持与上层液清晰分层。3)取已液化精液约1.2～1.5mL从已做好的梯度分离液顶部小心加入。350g离心15min分层。4)以女方姓名标记1支新的15ml尖底试管。取1ml Fertilization Medium培养液至新移液管中，吸取底层精子沉淀(体积不大于0.1mL)，加入其中充分混匀，350g离心5min。5)弃去上清液，再加FertilizationMedium培养液1mL，350g离心5min。6)弃去上清液，加适量Fertilization Medium培养液调整精子浓度至20×106/mL。7)松盖，放置于6％CO2、37℃培养箱内待用。8)密度梯度离心后观察精子活力平均值为90.8±8.81％，可排除因密度梯度离心后精子活力差对蛋白酶体活性的影响。
③精子蛋白酶体活性检测：1)将经密度梯度离心后的精子标本混匀，取10μl精子于精子计数板，正置显微镜计数，使用PBS溶液将精子浓度逐步稀释至2-4×106/ml。2)取50μl计数后精子标本及50μl蛋白酶体检测试剂加入96孔白板中，摇床充分混匀5分钟。3)将20S Proteasome试剂按照比例稀释，取50μl稀释后20S Proteasome及50μl蛋白酶体检测试剂加入96白板中，摇床充分混匀5分钟。4)将混匀后的标本放入多功能酶标仪中检测精子及标准品中蛋白酶体荧光强度(激发光波长为380nm，发射光波长为460nm)。5)根据标准品所得发光值制作标准曲线，标准曲线R2≥0.98(若标准曲线R2＜0.98则放弃本次实验结果)。根据标准曲线所得公式计算对应精子中蛋白酶体活性(标准曲线见图1)。
④对卵冠丘复合体(Oocyte corona cumulus complexes,OCCC)成熟度判断：OCCC回收后需要对其进行观察以了解卵母细胞的成熟情况。排除实验中因卵母细胞异常而导致的误差。1)I期，即前期I，此期为不成熟的时期，无第一极体，周围细胞紧紧包裹着卵丘细胞，无松散。有时可看到一个大核即GV期卵母细胞，透明带看不清，体外培养通常需要24小时以上，且成熟率很低。2)II期，为前期I与中期II之间，该期生发泡消失，无第一极体(MI期卵母细胞)，外周大量卵丘细胞紧紧包裹，一层紧密的放射冠细胞围绕卵母细胞，透明带不清，需要培养6～12小时。3)III期，即中期II，第一极体已排出(MII期卵母细胞)，此期为最常见和最易授精成功的成熟卵母细胞，放射冠细胞呈放射状排列，卵丘细胞呈松散状，透明带清晰看见。上述试验2)中需保证卵母细胞MII率≥70％。
⑤常规体外受精：1)将OCCC进行4-6小时成熟培养后，转移至FertilizationMedium授精皿中(2-3个/皿)。2)加入已准备好的精子约2000条，放入培养箱内培养。3)培养l6～20小时，取出培养皿，用直径150μm毛细玻璃管吹打卵母细胞/受精卵直至颗粒细胞脱落。将卵母细胞/受精卵转移到胚胎培养皿内孵育。
⑥经卵胞质内单精子注射：1)安装好显微注射针，调试系统。2)处理之前先核对ICSI患者信息。将适量精子加入ICSI皿左边的PVP液滴中。3)洗针，在PVP液滴中反复吹吸注射针，使其易于控制并去除针管壁上可能残存的有害物质。4)吸取ICSI皿中的精子，选择活力好、外观形态好的精子，用注射针在精子尾部切割，将其制动精子，注意操作应轻柔，并避免损伤精子颈部及中段。5)将制动的精子从尾部吸入注射针，反复进出2次确保精子在ICSI针内运行顺畅。6)取4-8个消化好的卵细胞，转移至预平衡的ICSI皿右边的G-MOPS培养液微滴中。7)用持卵针固定卵母细胞，使极体处于12:00或6:00位置，注射针在3:00位置，避免损伤纺锤体。8)注射时应回吸卵母细胞，确保其破膜后再将精子注入。9)注射后卵母细胞在FM培养液中清洗4-5遍，转入授精培养皿中孵育。
⑦受精结果的判读：1)原核的观察：通常于授精后16-20小时于倒置显微镜下观察，正常受精卵可见2个清晰原核(Pronucleus,PN)，观察到1PN或≥3PN皆为异常受精。2)受精后体外培养第2天及第3天，观察胚胎卵裂情况。(优胚评判标准见表1)。3)受精率＝受精卵子数/获卵数×100％；2PN率＝形成2PN数/获卵数×100％；卵裂率＝卵裂胚胎数/受精卵子数×100％；正常卵裂率＝正常卵裂胚胎数/受精卵子数×100％；优胚率＝优质胚胎数/正常受精卵子数×100％。
表1卵裂胚分级(根据ASEBIR共识，表中1级和2级胚胎为优胚)
Figure BDA0003415116620000121
Figure BDA0003415116620000131
5.统计方法
应用Prism 6.0软件，对所得实验数据进行统计分析，并使用均数±标准误
Figure BDA0003415116620000132
表示。采用单个样本K-S检验判断各变量均符合正态分布，故多组间比较采用One-way ANOVA方差分析，两组间比较采用t检验。各参数与蛋白酶体活性之间的相关性采用Pearson相关性检验来分析，以P<0.05为差异性、相关性有统计学意义。
二、结果与分析
(一)精子蛋白酶体活性与精液质量参数间关系
1.各年龄组间蛋白酶体活性比较
将标本按男方患者年龄分为≤35周岁、＞35周岁两组的精子蛋白酶体活性平均值分别为(663.3±50.93)、(676.3±62.95)，两组间蛋白酶体活性无显著性差异(p>0.05)，见图2。
2.不同精子活力组间蛋白酶体活性比较
将标本按精子PR＜32％、≥32％分为弱精组及非弱精组，两组的精子蛋白酶体活性平均值分别为(735.8±106.7)、(652.4±41.87)，两组间蛋白酶体活性无显著性差异(p>0.05)，见图3。
3.不同精子形态率组蛋白酶体活性比较
将标本按精子正常形态率分＜4％和精子正常形态率分≥4％，分为畸精组及非畸精组，两组的精子蛋白酶体活性平均值分别为(673.4±50.30)、(673.3±66.21)，两组间蛋白酶体活性无显著性差异(p>0.05)，详见图4。
4.不同精子头部畸形率间蛋白酶体活性比较
按精子头部畸形率分为90％-94％、95％-96％、97％-100％三组，每组精子蛋白酶体活性平均值分别为(713.4±81.55)、(611.3±58.04)、(622.2±62.73)，各组间蛋白酶体活性无显著性差异(p>0.05)，但精子头部畸形率为95％-96％、97％-100％两组的蛋白酶体活性低于头部畸形率为90％-94％组，见图5。
5.不同精子DNA碎片率间蛋白酶体活性比较
按精子DNA碎片率分为＜10％、10％-25％、＞25％三组，每组精子蛋白酶体活性平均值分别为(678.8±59.81)、(708.4±60.16)、(461.6±85.36)，各组间无显著性差异(p>0.05)，见图6。
6.正常精子及异常精子间蛋白酶体活性比较
按精液常规、精子形态率及精子DNA碎片率分析，将其分为正常精子及异常精子两组，两组间精子蛋白酶体活性平均值分别为(702.7±75.43)、(649.4±45.07)，两组间蛋白酶体活性无显著性差异(p>0.05)，见图7。
(二)精子蛋白酶体活性与体外受精胚胎结局相关性
1.精子蛋白酶体活性与常规体外受精后胚胎结局相关性
按照实验纳入及排除标准，最终入选实验样本为45例。其中男方平均年龄为(33.76±5.35)岁，女方平均年龄为(31.69±3.90)岁。蛋白酶体活性与常规体外受精受精率呈显著性相关性，其中r＝0.4499(p＜0.05)，见图8。蛋白酶体活性与常规体外受精2PN率呈显著性相关性，其中r＝0.4125、p＜0.05，见图9。蛋白酶体活性与常规体外受精卵裂率、正常卵裂率、优胚率无明显相关性，p＞0.05，见图10、图11、图12。
2.精子蛋白酶体活性与ICSI后胚胎结局的相关性
按照实验纳入及排除标准，最终入选实验样本为21例。其中男方平均年龄为(33.33±4.22)岁，女方平均年龄为(32.24±5.11)岁。蛋白酶体活性与ICSI后受精率、2PN率、卵裂率、正常卵裂率、优胚率无明显相关性，p＞0.05，见图13、图14、图15、图16、图17。
现有技术中有通过研究健康供精者，发现不同精液参数间蛋白酶体活性的差异，但是没有对不育男性精子中蛋白酶体与精液相关参数及受精情况进行评估。本发明通过上述试验评估精子中蛋白酶体活性与精液质量相关参数间关系得到：精子蛋白酶体活性在男方患者不同年龄组，不同活力组，不同DNA碎片率，不同形态率，不同头部畸形率组间均无显著性差异。但是按精子头部畸形率分为90％-94％、95％-96％、97％-100％三组间，虽然各组间无显著性差异(p﹥0.05)，但精子头部畸形率为90％-94％组蛋白酶体活性明显高于头部畸形率为95％-96％、97％-100％两组。考虑可能因为精子中蛋白酶体存在于精子顶体质膜表面及内部，精子头部异常时常导致顶体缺陷，降低了精子中蛋白酶体活性，这可能与精子形态率异常而体外受精率低或受精失败有关。
通过评估精子中蛋白酶体活性与常规体外受精和ICSI后受精情况的相关性得到：蛋白酶体活性与常规体外受精受精率、2PN率呈显著相关性(p＜0.05)。蛋白酶体活性与常规体外受精卵裂率、正常卵裂率、优胚率无明显相关性(p＞0.05)。蛋白酶体活性与ICSI后受精率、2PN率、卵裂率、正常卵裂率、优胚率无明显相关性(p＞0.05)。通过对行常规体外受精及ICSI精子蛋白酶体活性的均数分析(分别为：681.0±57.13、644.6±84.53)，行常规体外受精精子蛋白酶体活性略高于行ICSI方法的患者。
综合上述，本发明研究表明精子蛋白酶体活性在男方患者不同年龄组，不同活力组，不同DNA碎片率、不同形态率、不同头部畸形率组间均无显著性差异。但精子蛋白酶体活性表达越高，常规体外受精受精率、2PN率越高。精子蛋白酶体活性与常规体外受精卵裂率、正常卵裂率、优胚率无明显相关性，与ICSI后受精率、2PN率、卵裂率、正常卵裂率、优胚率无明显相关性。因此，对于原因不明性不育或常规体外受精低受精率的患者，可考虑检测其精子蛋白酶体活性，为临床选择常规体外受精或ICSI治疗提供依据。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (1)

1.一种检测精子中20S蛋白酶体活性的试剂在制备评估常规体外受精胚胎结局的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括用于测定精子中20S蛋白酶体活性的试剂，精子20S蛋白酶体活性越高，常规体外受精的受精率、2PN率越高；
所述试剂盒包括蛋白酶体缓冲液、荧光素检测试剂、Suc-LLVY-Glo底物以及20S蛋白酶体标准品。
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