CN114225919B

CN114225919B - 一种内毒素吸附剂及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN114225919B
Application number: CN202111423342.0A
Authority: CN
Inventors: 王为超; 张玉坤; 刘英姿; 吴越
Original assignee: Jiangsu Beimei Medical Technology Co ltd
Current assignee: Jiangsu Beimei Medical Technology Co ltd
Priority date: 2021-11-26
Filing date: 2021-11-26
Publication date: 2023-07-04
Anticipated expiration: 2041-11-26
Also published as: CN114225919A

Abstract

本发明公开了一种内毒素吸附剂及其制备方法与应用，属于血液净化技术领域。一方面，本发明提供了一种内毒素吸附剂，其具有如下式(I)所示的结构；其中，

表示内毒素吸附剂所用的载体；“n”的取值范围为2‑10。另一方面，本发明还提供了所述内毒素吸附剂的制备方法与应用，以及本发明还提供了一种用于清除内毒素的装置，所述装置中含有本发明所述的内毒素吸附剂。本发明提供的内毒素吸附剂对于内毒素的吸附量大，选择性好，具有较大的临床应用前景。

Description

一种内毒素吸附剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于生物技术领域。具体而言，本发明涉及一种内毒素吸附剂及其制备方法与应用。

背景技术

内毒素血症(Endotoxemia，ETM)是由于内源性或外源性内毒素(Endotoxin，ET)大量入血引起，可出现于多种疾病过程中，导致器官坏死、不可逆休克和死亡。它对全身炎症反应综合征、脓毒症、多器官功能障碍综合征的发生、发展具有促进作用，是脓毒症致死率极高的主要原因之一。同时，ET入血后通过复杂的生化过程，可激活多种细胞因子基因转录、翻译出有生物活性的细胞因子，如肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1，白介素-6、白介素-8等，这些细胞因子对组织细胞的损害远远超过内毒素本身对机体的直接影响。ETM是医学临床面临的复杂问题，药物治疗领域未能取得预期效果。

近年来，用血液/血浆灌流方法治疗内毒素血症已取得一些进展。通过直接吸附清除血液中的内毒素和致病性的细胞因子，可使其浓度降低，既减弱了其本身活性，又抑制了其它有害因子的释放。目前使用的吸附剂多数由载体和吸附配体两部分组成，其中载体主要有微球、中空纤维膜和多孔片板等。常见微球载体有聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸甲酯吸附树脂等，纤维有聚苯乙烯、聚偏氟乙烯等。吸附配体主要有胺类、多肽和蛋白类；其中，胺类吸附配体主要有聚乙烯亚胺、己二胺、乙二胺、二乙氨乙基、二乙烯三胺等，胺类配体主要是通过胺的正电性和内毒素的磷酸根负电性作用进行吸附。但胺类配体的内毒素吸附剂一般对酸性蛋白质也具有较强的吸附能力，故不能从酸性蛋白溶液中选择性吸附内毒素。而且由于一般胺类的毒性较大，其脱落具有一定的风险，从而限制了其在血液净化领域中的应用。多肽和蛋白质中，多粘菌素B是一种常见的吸附剂配体，例如日本东丽生产的用于血液净化的

吸附柱就是以多粘菌素B作为配体的，但如果多粘菌素B从吸附剂上脱落，可能会使病人的肾脏和神经系统产生不良反应，而且多粘菌素B的价格昂贵。

因此，开发出安全有效、吸附效果好、价格低廉且选择性强的内毒素吸附剂具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种新型的内毒素吸附剂。

本发明的另一个目的在于提供所述内毒素的制备方法。

本发明的另一个目的在于提供所述内毒素的应用。

本发明还提供了一种用于清除内毒素的装置。

本发明发现，通过选用正丁胺和甜菜碱作为吸附配基，能够提高内毒素吸附剂的对于内毒素的吸附量和选择性，从而，本发明提供了如下的技术方案：

一方面，本发明提供了一种内毒素吸附剂，其具有如下式(I)所示的结构：

其中，

表示内毒素吸附剂所用的载体；“n”的取值范围为2-10。

优选地，所述载体包括壳聚糖微球、胺化聚苯乙烯微球或胺化聚乙烯醇微球。

优选地，“n”的取值范围为3-8；优选为4-6；更优选为5。

另一方面，本发明还提供了所述的内毒素吸附剂的制备方法，其包括：

载体与间隔臂的连接反应：将内毒素吸附剂所用的载体与间隔臂之间进行连接，得到“载体-间隔臂”化合物；

吸附配体的制备：将5-氨基异酞酸单甲酯分别与甜菜碱和正丁胺反应，得到吸附配体；

将制备得到的“载体-间隔臂”化合物与吸附配体进行连接反应，得到本发明所述的内毒素吸附剂。

优选地，所述载体与间隔臂的连接反应包括：

将无水的载体微球悬浮于适量的溶剂中，加入

和催化剂，在回流状态下反应5-6h，反应结束后冷却至室温，后在冰浴条件下进行还原，得到“载体-间隔臂”化合物，其中，试剂/>

的用量为载体微球表面氨基的摩尔量的1-1.5倍，还原剂的用量为载体微球表面氨基的摩尔量的2-2.5倍。

优选地，其中，吸附配体的制备按照以下方法制备得到：

将5-氨基异酞酸单甲酯溶解于适量的溶剂中，加入正丁胺和催化剂，在回流条件下反应8-10h，反应结束后提纯，得到第一产物，将第一产物再次溶解到适量的溶剂当中，加入甜菜碱和催化剂，进行反应，反应完成后提纯，得到吸附配体；其中，

正丁胺的用量为5-氨基异酞酸单甲酯摩尔量的1.2-1.5倍；

甜菜碱的用量为第一产物摩尔量的1.2-1.5倍。

优选地，将“载体-间隔臂”化合物与吸附配体进行连接的反应的具体操作为：

将“载体-间隔臂”化合物溶于适量的溶剂中，加入吸附配体，两者之间通过氨解反应进行连接；其中，吸附配体的用量为

摩尔量的1-1.2倍。

优选地，所述方法还包括壳聚糖微球载体的制备过程：

将壳聚糖粉溶于质量分数为2％-10％的乙酸水溶液中，得到质量分数为4％-6％的壳聚糖乙酸溶液，然后将壳聚糖乙酸溶液喷入8％-10％的NaOH溶液中固化而成。

此外，本发明还提供了所述的内毒素吸附剂在制备用于血液灌流清除内毒素的吸附材料和/或装置中的应用。

进一步，本发明还提供了一种用于清除内毒素的装置，所述装置包括

一进样口；

一出样口，及

一分离装置，包括：

第一腔体、第二腔体、第三腔体和分离膜；

所述第一腔体、第二腔体分别与进样口相通，不与出样口相通；所述第三腔体与出样口相通但是不与进样口相通；

所述第一腔体与第三腔体、第二腔体与第三腔体之间通过分离膜隔开，所述分离膜为本发明所述的内毒素吸附剂，该内毒素吸附剂所使用的载体为壳聚糖膜。

综上所述，本发明提供了一种新型的内毒素吸附剂及其制备方法与应用，本发明还提供了含有所述内毒素吸附剂的用于清除内毒素的装置。本发明提供的内毒素吸附剂相比现有技术中的内毒素吸附剂具有以下优势：

(1)本发明提供的内毒素吸附剂中同时采用正丁胺和甜菜碱作为吸附配体，能够增强内毒素吸附剂对于内毒素的吸附量和选择性；相较于单独使用一种吸附配体而言，本发明提供的内毒素吸附剂具有更好的应用前景；

(2)本发明提供的制备方法简单，使用的试剂价廉易得，并且收率高，不需要复杂的提纯手段；

(3)本发明提供的用于清除内毒素的装置简单易操作，尤其使用与医疗卫生条件较差的偏远地区；

(4)本发明选用5-氨基异酞酸单甲酯作为连接正丁胺和甜菜碱的“桥梁”，一方面，选其作为桥梁所用的化学合成方法均为成熟的方法，因此带来了操作简单的优势；另一方面，5-氨基异酞酸单甲酯的结构中含有一个苯环，苯环是一个较大的疏水基团，能够增强内毒素吸附剂对于内毒素的疏水作用，也就能增强对于内毒素的吸附。

附图说明

图1为本发明中提供的用于清除内毒素的装置的示意图。

图中，11：进样口；12：第一腔体；13：第二腔体；14：分离膜；15：第三腔体；16：出样口。

具体实施方式

为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。

本发明中，除有特别说明之外，所使用的实验试剂均可通过商购获得。

本发明中用到的提纯方法、检测反应是否完成的方法均是本领域熟知的常规技术手段。

本发明中，一些试剂的用量如没有特别说明的话，均是本领域技术人员可以根据现有技术合理确定的，例如“催化量”所使用的试剂的量是本领域技术人员熟知的公知常识。

[术语解释]

术语“间隔臂”可以理解成本发明提供的内毒素吸附剂中用来连接载体和吸附配体的物质，也可以解释成连接臂等。

术语“吸附配体”：本发明中的吸附配体是指将5-氨基异酞酸单甲酯分别与甜菜碱和正丁胺反应后的得到的物质。

术语“载体-间隔臂”是指将本发明中的载体与间隔臂通过化学反应连接后得到的物质。

术语“分离膜”可以理解成本发明中的内毒素吸附剂，因为载体使用的膜而不是微球故成为分离膜。

本发明的发明人在研究过程中发现，通过一定的方式，在同一个吸附剂载体上同时固定正丁胺和甜菜碱这两种配基，能够提高内毒素吸附剂对于内毒素的吸附选择性和吸附量。基于以上发现，本发明提供了如下的技术方案：

其中，

表示内毒素吸附剂所用的载体；“n”的取值范围为2-10。

在一些具体的实施方案中，所述“n”的取值为2、3、4、5、6、7、8、9、10中的任一值或者它们组成的范围。

在一些具体的实施方案中，所述载体一般而言只要是含有伯氨基的球形多孔载体即可；在本发明中，所述载体优选为壳聚糖微球、胺化聚苯乙烯微球或胺化聚乙烯醇微球；更优选为壳聚糖微球。此外，本发明中也可以选用其他常见的血液灌流中用的载体作为本发明中的吸附配基的载体；例如聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸甲酯吸附树脂、纤维有聚苯乙烯和聚偏氟乙烯等，只要能够用于血液灌流且能够通过合适的方式将本发明提供的吸附配体引入即可。

在一些具体的实施方式中，载体与间隔臂之间发生如下的化学反应：

在选用壳聚糖微球作为载体时，将壳聚糖微球悬浮于适量的溶剂中，加入上述反应式中的化合物2和催化剂，在回流的状态下进行反应，反应5-6h后，冷却至室温，接着进行还原反应，得到所述的“载体-间隔臂”化合物3。在一些具体的实施方案中，所述溶剂为有机溶剂，例如选自无水四氢呋喃、无水二氧六环、无水甲苯、无水乙醇、无水甲醇等中的一种或它们组成的群组。在另一些具体的实施方案中，上述反应中所用的催化剂可以采用酸催化剂，酸催化剂例如可以选自盐酸、硫酸、磷酸等无机酸或者甲酸、醋酸、苯甲酸等有机酸以及无机酸与有机酸之间的组合。所述催化剂的用量可以由本领域技术人员根据相关的化学知识进行确定，一般添加量为底物摩尔量的10％-20％即可。

在一些具体的实施方案中，上述式(II)的反应体系中还可以添加适量的分子筛，所述分子筛能够去除反应体系中生成的水，能够保证反应更加彻底。

在一些具体的实施方案中，上述式(II)中使用的还原剂可以选用硼氢化钠，氰基硼氢化钠中的一种或多种，还原剂的用量为壳聚糖微球表面氨基的摩尔量的2-2.5倍。反应式(II)中，底物2的用量为壳聚糖微球表面氨基的摩尔量的1-1.5倍。本发明中，壳聚糖微球载体表面的氨基的量可以采用凯氏定氮法进行确定。

在一些具体的实施方式中，吸附配体的制备按照以下式(III)中的反应进行：

按照上述式(III)中的反应，将5-氨基异酞酸单甲酯(化合物4)溶解于适量的有机溶剂中，加入正丁胺(化合物5)和催化剂，在回流条件下反应8-10h，反应完成后提纯，得到第一产物(化合物6)；正丁胺的用量为5-氨基异酞酸单甲酯摩尔量的1.2-1.5倍；

将第一产物(化合物6)溶解于适量的有机溶剂中，加入甜菜碱(化合物7)和催化剂，甜菜碱的用量为第一产物摩尔量的1.2-1.5倍。反应后提纯，得到吸附配体(化合物8)。需要说明的是，在5-氨基异酞酸单甲酯上连接正丁烷和甜菜碱的先后顺序没有特别要求，既可以先进行式(III)中的“step1”在进行“step2”，也可以先进行式(III)中的“step 2”然后再进行“step 1”。进一步说明的是，式(III)中所示的化学反应是化学领域中已知的技术很成熟的反应，反应条件相对温和简单，产率高，不需要复杂的提纯方式，特别是对于第一步反应而言，再产率高达95％以上的条件下，基本无需提纯即可用于下一步反应，当然也可以采取打浆的方式进行简单提纯再进行下一步反应；其中，打浆是本领域熟知的提纯手段。

在一些具体的实施方案中，上述式(III)中的反应步骤中的“step1”、“step2”这两步中的催化剂均可采用DCC(二环己基碳二亚胺)，采用DCC作为催化剂能够提升两步反应的产率，经TLC检测，底物全部反应完全，且基本无杂质生成。

在一些具体的实施方式中，将制备得到的“载体-间隔臂”与吸附配体进行连接的反应如下式(IV)所示：

将式(IV)中的化合物3和化合物8溶解或悬浮于适量的有机溶剂中，加入催化量的碱性催化剂，进行氨解反应，其中，吸附配体的用量为

摩尔量的1-1.2倍。氨解反应结束后，提纯得到化合物9，也就是内毒素吸附剂。在一些具体的实施方案中，提纯的方式可以采用透析袋透析的方式进行，也可以采用纯水反复冲洗的方式进行纯化。

进一步，需要指出的是，本发明中，将载体、间隔臂和吸附配体三者进行连接的方式也可以不按照上述“将载体与间隔臂之间进行连接、制备吸附配体和将载体-间隔臂与吸附配体连接”的方法进行，也可以采用下述的方式：

(1)先将间隔臂与吸附配体中的5-氨基异酞酸单甲酯进行连接；然后再在5-氨基异酞酸单甲酯上连接正丁胺和甜菜碱，其中，正丁胺和甜菜碱的连接顺序没有要求；最后将制得的“间隔臂-吸附配体”与载体进行连接。

(2)也可以先将间隔臂与吸附配体中的5-氨基异酞酸单甲酯进行连接；然后将连接后得到的化合物与载体之间进行连接；最后再修饰正丁胺和甜菜碱。

上述方法均与本发明要求保护的方法等同。

在一些具体的实施方案中，本发明还提供了所述内毒素吸附剂在制备用于血液灌流清除内毒素的吸附材料和/或装置中的应用。在一些具体的实施方案中，本发明制备得到的内毒素吸附剂能够用于临床中内毒素血症患者的治疗。

此外，本发明还提供了一种用于清除内毒素的装置，如图1所示，所述装置包括：

一进样口11；

一出样口16，及

一分离装置，包括：

第一腔体12、第二腔体13、第三腔体15和分离膜14；

所述第一腔体12、第二腔体13分别与进样口11相通，不与出样口16相通；所述第三腔体15与出样口16相通但是不与进样口11相通；

所述第一腔体12与第三腔体15、第二腔体13与第三腔体15之间通过分离膜14隔开，所述分离膜14为本发明所述的内毒素吸附剂，该内毒素吸附剂所使用的载体为壳聚糖膜。图中的箭头表示使用时需要除内毒素的样品的流动方向，使用过程中，样品从进样口11流入，接着流入第一腔体12和第二腔体13，然后通过分离膜14后进入第三腔体15，能够对样品中的内毒素进行特异性地吸附。被处理过后的样品进入第三腔体15，经出样口16流出，完成清除。

在一些具体的实施方案中，所述分离膜14可以包括多层，每层之间留有一定的间隙，这样能够多次对内毒素进行吸附，从而具有更好的清除效果。此外，所述用于清除内毒素的装置还包括用于支撑所述分离膜14的支撑件，在一些更为具体的实施方案中，所述支撑件可以是带孔的柱形支撑物。

实施例1

本实施例提供了一种内毒素吸附剂，其按照以下方法进行制备：

S1：采用相转移法制备壳聚糖微球载体：将壳聚糖粉5g溶于95g 2％的乙酸溶液中，得到浓度为5％的壳聚糖乙酸溶液，在高压氮气流作用下，通过19号注射器针头将前述壳聚糖乙酸溶液喷入质量浓度为8％的氢氧化钠水溶液中。喷射速度根据需要制备的壳聚糖微球载体的粒径大小进行选择，调节喷射速度可得到粒径均匀、大小合适的壳聚糖微球，用蒸馏水将微球洗至中性备用。此壳聚糖微球载体的含水量为94％，依次用乙醇、丙酮、四氢呋喃和无水四氢呋喃淋洗，将微球中的水分逐渐替换掉，得到不含水分的壳聚糖微球。

S2：通过凯氏定氮法确定壳聚糖微球表面的氨基数量，然后取适量的无水壳聚糖微球，加入无水四氢呋喃中，接着加入5-氨基戊醛(用量为壳聚糖表面氨基数的摩尔量的1.2倍)和甲酸(摩尔量的20％)，在回流的条件下反应5h左右，反应完成后自然冷却至室温，然后在冰浴条件下加入硼氢化钠(用量为壳聚糖微球表面氨基的摩尔量的2倍)，控制硼氢化钠的加入速度，防止剧烈反应。加完后撤除冰浴，室温反应2-3h。反应完成后加水淬灭反应，反应物过滤，滤饼用蒸馏水反复冲洗后干燥，得到“载体-间隔臂”化合物。

S3：取适量的5-氨基异酞酸单甲酯，溶解于适量的四氢呋喃溶剂中，加入正丁胺和DCC，其中正丁胺的用量为5-氨基异酞酸单甲酯摩尔量的1.2倍，DCC的用量为5-氨基异酞酸单甲酯摩尔量的1倍。回流条件下进行反应8h左右，TLC(薄层色谱分析)检测，显示底物完全后停止反应，冷却至室温，在旋转蒸发仪的下除去有机溶剂，得到第一产物。直接用于下一步反应。将得到的第一产物再次溶解于适量的四氢呋喃中，加入甜菜碱(用量为第一产物的摩尔量的1.2倍)和DCC(第一产物的摩尔量的1倍)，回流条件下反应8h左右，TLC检测第一产物反应完全后，停止反应。蒸干有机溶剂，将蒸干后的固体溶解于适量的乙酸乙酯中，加水进行萃取2-3次，萃取后的母液用无水硫酸钠进行干燥。然后再次除去乙酸乙酯，将得到固体用乙酸乙酯：乙醇＝3:1的有机溶剂进行打浆提纯，得到吸附配体。

S4：将得到的“载体-间隔臂”悬浮于无水四氢呋喃中，加入S3中制备得到的吸附配体和少量的氢氧化钠，在40-50℃条件下进行氨解反应，吸附配体的用量为

摩尔量的1.2倍，将载体-间隔臂与吸附配体之间进行连接。反应完成后，将产物用纯水反复冲洗，得到了内毒素吸附剂，将内毒素吸附剂置于水中贮存待用。

对比例1

本对比例提供了一种内毒素吸附剂，该吸附剂与实施例1的区别仅在于5-氨基异酞酸单甲酯上仅连接有正丁胺，没有连接甜菜碱。

对比例2

本对比例提供了一种内毒素吸附剂，该吸附剂按照下述方法进行制备：

S1：采用相转移法制备壳聚糖微球载体，同实施例1。

S2：将5-氨基戊醛与甜菜碱进行连接反应，将5-氨基戊醛溶解于适量的四氢呋喃中，加入甜菜碱(5-氨基戊醛的摩尔量的1.2倍)和DCC(1倍)，回流反应5h，之后通过乙酸乙酯-水萃取的方式进行提纯，得到间隔臂-甜菜碱；

S3：将S2中制备得到的载体间隔臂-甜菜碱与S1中的壳聚糖微球进行连接，方法基本同实施例1，得到本对比例提供的内毒素吸附剂。

测试例

1.动态吸附去除人血浆体系中的内毒素

取2mL实施例1和对比例1-2中的吸附剂分别装入层析柱中，室温下恒流泵控制流速2mL/min，用20mL含内毒素的人血浆灌流2h，取上清液测各成分浓度。结果见表1。

表1人血浆中的内毒素和主要蛋白质浓度在吸附前后的变化

从表1中的结果可以看出，相比较于只采用正丁胺或甜菜碱作为吸附配基，本发明通过一定的方式，同时采用正丁胺和甜菜碱作为吸附配基能够提高内毒素吸附剂对于内毒素的吸附量和选择性。在同时引入正丁胺和甜菜碱作为配体时，其对于内毒素的吸附率能够达到78％以上，而单独采用正丁胺或者甜菜碱对于内毒素的吸附率在60％以下，远低于实施例1中的吸附率。

同时，也可以看到，在选用正丁胺和甜菜碱同时作为吸附配体时，其对于白蛋白和球蛋白的吸附量均相比于对比例有所下降，猜想其中的原因可能在于在同时引入正丁胺和甜菜碱时，内毒素吸附剂对于内毒素的选择性进一步加强，因此在对于内毒素的吸附量增加的同时，也就会导致对于像白蛋白和球蛋白的吸附减少。

同时，本发明中，选用5-氨基异酞酸单甲酯作为同时连接正丁胺和甜菜碱的“桥梁”，其本身结构中含有苯环，苯环是一个较大的疏水基团，因此也能够增加内毒素吸附剂对于内毒素的疏水作用，进而也会增强对于内毒素的吸附。

实施例2

本实施例提供了一种用于清除内毒素的装置，如图1所示，所述装置包括：

一进样口11；

一出样口16，及

一分离装置，包括：

第一腔体12、第二腔体13、第三腔体15和分离膜14；

所述第一腔体12与第三腔体15、第二腔体13与第三腔体15之间通过分离膜14隔开，所述分离膜14为本发明提供的内毒素吸附剂，其中的载体为壳聚糖膜。图中的箭头表示使用时需要除内毒素的样品的流动方向，使用过程中，样品从进样口11流入，接着流入第一腔体12和第二腔体13，然后通过分离膜14后进入第三腔体15，能够对样品中的内毒素进行特异性地吸附。被处理过后的样品进入第三腔体15，经出样口16流出，完成清除。

此外，本实施例中的用于清除内毒素的装置还包括用于支撑分离膜的支撑部件(图中未示出)，所述支撑部件可以是带孔的柱形支撑物。

本实施例中，所述分离膜可设置为多层，各层之间留有一定的空隙。这样吸附效果更佳。

本发明提供的吸附装置，使用操作方便，对于内毒素的吸附效果好，适用于一些医疗设施较差的偏远地区或者是灾后地区的紧急使用。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在不偏离本发明要求保护的精神和实质的前提下，可以对本发明的各个技术特征进行替代、修改和组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种内毒素吸附剂，其具有如下式(I)所示的结构：

其中，

表示内毒素吸附剂所用的载体；“n”的取值范围为2-10；

其中，所述载体包括壳聚糖微球、胺化聚苯乙烯微球或胺化聚乙烯醇微球；

吸附配体是将5-氨基异酞酸单甲酯分别与甜菜碱和正丁胺反应得到。

2.根据权利要求1所述的内毒素吸附剂，其中，“n”的取值范围为3-8。

3.根据权利要求2所述的内毒素吸附剂，其中，“n”的取值范围为4-6。

4.根据权利要求2所述的内毒素吸附剂，其中，“n”的取值范围为5。

5.权利要求1-4中任一项所述的内毒素吸附剂的制备方法，其包括：

将制备得到的“载体-间隔臂”化合物与吸附配体进行连接反应，得到权利要求1-4中任一项所述的内毒素吸附剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述载体与间隔臂的连接反应包括：

将无水的载体微球悬浮于适量的溶剂中，加入

7.根据权利要求5所述的制备方法，其中，吸附配体的制备按照以下方法制备得到：

正丁胺的用量为5-氨基异酞酸单甲酯摩尔量的1.2-1.5倍；

甜菜碱的用量为第一产物摩尔量的1.2-1.5倍。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其中，将“载体-间隔臂”化合物与吸附配体进行连接的反应的具体操作为：

将“载体-间隔臂”化合物悬浮于适量的溶剂中，加入吸附配体，两者之间通过氨解反应进行连接；其中，吸附配体的用量为

摩尔量的1-1.2倍。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述方法还包括壳聚糖微球载体的制备过程：

将壳聚糖粉溶于质量分数为2％-10％的乙酸水溶液中，得到质量分数为4％-6％的壳聚糖乙酸溶液，然后将壳聚糖乙酸溶液喷入质量浓度为8％-10％的NaOH溶液中固化而成。

10.权利要求1-4中任一项所述的内毒素吸附剂在制备用于血液灌流清除内毒素的吸附材料和/或装置中的应用。

11.一种用于清除内毒素的装置，所述装置包括

一进样口；

一出样口，及

一分离装置，包括：

第一腔体、第二腔体、第三腔体和分离膜；

所述第一腔体与第三腔体、第二腔体与第三腔体之间通过分离膜隔开，所述分离膜为权利要求1-4中任一项所述的内毒素吸附剂，该内毒素吸附剂所使用的载体为壳聚糖膜。