CN114225008A

CN114225008A - 转录因子btb-cnc同源体1在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用

Info

Publication number: CN114225008A
Application number: CN202111641635.6A
Authority: CN
Inventors: 张寒; 冯敏
Original assignee: Institute of Medical Biology of CAMS and PUMC
Current assignee: Institute of Medical Biology of CAMS and PUMC
Priority date: 2021-12-29
Filing date: 2021-12-29
Publication date: 2022-03-25
Anticipated expiration: 2041-12-29
Also published as: CN114225008B

Abstract

本发明公开了转录因子BTB‑CNC同源体1在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用。实验证明，通过减少或抑制BACH1在人非霍奇金淋巴瘤细胞系中的表达水平，可有效调控肿瘤细胞的细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡。本发明为非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一个新的靶点。

Description

转录因子BTB-CNC同源体1在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及转录因子BTB-CNC同源体1（BTB and CNChomology 1，简称BACH1）在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用。

背景技术

转录因子BACH1属于碱性亮氨酸拉链蛋白家族，广泛存在于哺乳动物的各种组织中，其涉及多种生理病理过程，包括氧化应激、细胞周期、血红素稳态、炎症和免疫等，与多种疾病的发生和发展具有紧密联系。近年来，发现BACH1可通过改变肿瘤代谢以及上皮间充质转化表型，促进肿瘤增殖转移。例如，在转移性肺癌组织中可观察到BACH1的高表达，以及BACH1通过激活己糖激酶2和3-磷酸甘油醛脱氢酶增加葡萄糖的摄取和乳酸的分泌，增加糖酵解速率，促进肺癌的恶化和转移。在乳腺癌、食管癌、结直肠癌等癌整中发现高表达的BACH1提高了肿瘤细胞的迁移活性。同时，BACH1也可通过上调转移相关趋化因子受体、基质金属蛋白酶等的表达促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。但BACH1在淋巴瘤中的作用尚无报道。

淋巴瘤是一类起源于造血系统的淋巴结和淋巴组织的恶性肿瘤。据世界卫生组织统计，淋巴瘤发病率年增长率为7.5%，近年来发病率增速较快。根据其病理学特点，淋巴瘤主要分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤两个大类。从目前的数据来看，霍奇金淋巴瘤通常治疗效果较好，治愈率较高。而非霍奇金淋巴瘤是一组高度异质性的恶性淋巴细胞增殖性疾病，在我国是男性最常见的几种恶性肿瘤之一。目前非霍奇金淋巴瘤的明确病因尚不清楚，可能与遗传、病原体感染、机体免疫异常、环境污染等因素有关。随着生活方式的改变、环境污染的加重、饮食结构的调整、精神压力增加、老龄化等因素影响，近年来发病率明显增加。目前非霍奇金淋巴瘤的主要治疗仍是以化疗或者放疗为主，经济条件较好或者有明确治疗指针的患者可同时应用免疫疗法。在治疗过程中，化疗和放疗由于其细胞毒性，在其应用过程中在杀伤肿瘤细胞的同时也会对正常细胞产生毒性作用，使患者在接受化疗和放疗期间出现各种不同程度的副作用，导致患者生存质量普遍下降，甚至因不能耐受而被迫中断治疗，严重影响了疗效与疾病的转归。而免疫疗法主要包括细胞治疗和抗体治疗两个方面，该治疗方法主要通过增加肿瘤抗原性及调控肿瘤免疫逃逸来激活人体自身免疫反应而杀灭肿瘤细胞，对非侵袭性非霍奇金淋巴瘤的治疗有所帮助，但经过初始治疗后复发或难治性非霍奇金淋巴瘤患者的预后仍然很差。因此，面对目前肿瘤治疗的局限性及个体异质性的现状，迫切需要开发特异性的靶点，用于非霍奇金淋巴瘤的治疗。

综上所述，BACH1在肿瘤方面的作用已越来越受到重视，但是现有报道中尚无BACH1与非霍奇金淋巴瘤相关的内容，也无BACH1在非霍奇金淋巴瘤治疗方面的用途。

发明内容

本发明在现有技术的基础上，提供了转录因子BTB-CNC同源体1（即BACH1）及其抑制剂在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用。

本发明首次发现了BACH1与非霍奇金淋巴瘤之间具有关联性，为非霍奇金淋巴瘤的治疗提供新的靶点。

本发明的技术方案如下：

转录因子BTB-CNC同源体1（即BACH1）在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用，其氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。

本发明包括一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物和/或药物组合物，其含有能够抑制BACH1表达的抑制物。本发明的抑制物包括但不限于抑制BACH1蛋白活性的物质、降低BACH1蛋白含量的物质、沉默或敲除或突变BACH1基因的物质或者抑制BACH1基因表达的物质。药物组合中还以进一步包含可药用载体，以及其他包含BACH1抑制剂协同作用的其他非霍奇金淋巴瘤治疗剂。

本发明包括BACH1抑制物在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用。本发明通过BACH1的RNA干扰慢病毒感染非霍奇金淋巴瘤细胞系后，可降低BACH1的蛋白表达量，并检测了BACH1低表达细胞系与表达量无变化的对照细胞系的细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡情况。结果表明，RNA干扰慢病毒感染后，可将BACH1的蛋白表达量大约降低90%以上；BACH1低表达的两种非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875和REC-1/BACH1^KD-875细胞周期分布发生明显变化，细胞增殖显著变少，细胞凋亡明显增加。

本发明证明BACH1抑制剂在非霍奇金淋巴瘤细胞系中可调控细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡，从而影响肿瘤细胞的生长，为非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一个新的靶点。

附图说明

图1为RNA干扰稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞中BACH1蛋白量的Western Blot检测结果；

其中，Jeko和REC-1细胞对应的第一排为以BACH1单克隆抗体为一抗检测BACH1蛋白量，第二排为以beta-Actin单克隆抗体为一抗检测内参beta-Actin蛋白量。其中，#875、#876、#877分别代表用三个不同的RNA干扰慢病毒感染人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko和REC-1；Con代表用阴性对照慢病毒感染人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko和REC-1。

图2为BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875、REC-1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con的生长曲线图；

图中设置第0天的细胞计数（1×10⁴个）为1倍，计算培养后不同时间点（1、2、3、4、5、6、7、8天）的细胞计数的变化倍数。

图3为流式细胞仪检测BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875、REC-1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con的细胞周期分布情况图；

图中包括G0-G1、S和G2-M期。

图4为流式细胞仪检测BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875、REC-1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con的细胞增殖情况图；

图中以对照细胞系为单位“1”将数据进行标准化后进行比较。其中，BACH1^KD-875代表BACH1低表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系，BACH1^Con代表对照细胞系；**表示p值小于0.001。

图5为流式细胞仪检测BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875、REC-1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con的细胞凋亡情况图；

图中，7-AAD(-)/Annexin V(+)与7-AAD(+)/Annexin V(+)分别表示早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例。其中，BACH1^KD-875代表BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系，BACH1^Con代表对照细胞系。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。

下述实施例中的实验均设置三次重复，结果取平均值±标准差。统计分析采用t检验。*表示p值小于0.05，**表示p值小于0.001。

下述实施例中的人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko和REC-1分别购买于中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所和北京北纳创联生物技术研究院。并通过细胞STR鉴定确认。

下述实施例中的BACH1的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.1，编码基因序列为序列表中SEQ ID No.2；来源于NCBI数据库。

下述实施例中的shRNA慢病毒LV-BACH1-RNAi(875)、LV-BACH1-RNAi(876)、 LV-BACH1-RNAi(877)，以及相应的阴性对照慢病毒（不影响BACH1的mRNA表达量）均为中国上海吉凯基因公司产品。其中，shRNA慢病毒LV-BACH1-RNAi(875)的成熟反义链序列：TAATGACACAAGCATATGGGC（SEQ ID No. 3）；LV-BACH1-RNAi(876)的成熟反义链序列：TTTCTTGGGCATTCTTGCTGG（SEQ ID No. 4）；LV-BACH1-RNAi(877)的成熟反义链序列：ATATCATGGATACAATCCAGC（SEQ ID No. 5）。

下述实施例中的细胞培养条件均为：用含有10% FBS的RPMI-1640培养基在T-25或T-75透气细胞培养瓶、37℃和5% CO₂条件下培养。

实施例1、BACH1的RNA干扰稳转细胞系构建

（1）BACH1的RNA干扰稳转细胞系的筛选与建立

首先用三个不同的shRNA慢病毒（875#、876#、877#）及阴性对照慢病毒分别感染人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko和REC-1。

具体步骤为：取培养的Jeko和REC-1细胞按1×10⁶个/孔接种于六孔板，每孔加入3ml含有10% FBS的RPMI-1640培养基，放置37℃，5% CO2细胞培养箱中培养。1小时后取出细胞，加入50 μl病毒液，室温2500 rpm离心1小时，将细胞转移至T-25透气细胞培养瓶中，置于37℃，5% CO2细胞培养箱中继续培养24小时。将慢病毒感染后的细胞去除培养基，加入10ml新鲜的含有10% FBS的RPMI-1640培养基重悬细胞，继续放置37℃，5% CO2细胞培养箱中培养。48小时后，将T-25培养瓶中的细胞转移至T-75透气细胞培养瓶中，补充10 ml新鲜的含有10% FBS的RPMI-1640培养基继续培养。24小时后，去除培养基，更换20 ml新鲜培养基重悬细胞，同时加入1 μg/ml嘌呤霉素（puromycin）对细胞株进行筛选，每隔2-3天更换培养基，筛选10-14天。

（2）Western Blot检测RNA干扰稳转细胞系中BACH1的表达

取步骤（1）建立的稳转细胞系Jeko/BACH1^KD-875、Jeko/BACH1^KD-876 、Jeko/BACH1^KD-877 、REC1/BACH1^KD-875、REC-1/BACH1^KD-876、REC-1/BACH1^KD-877及各自对应的对照细胞系Jeko/BACH1^Con 和REC-1/BACH1^Con提取总蛋白。具体步骤为：90 g离心5分钟收集细胞，用预冷1×PBS缓冲液洗两遍，加150～300 μl RIPA裂解液，冰上裂解30分钟，4℃，12000rpm离心10分钟；吸取上清，利用Pierce BCA法进行蛋白定量；各取10 μg总蛋白进行Western blot检测。

Western blot检测的具体方法为：第一步进行电泳及转膜：对待测蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，先在电压80V下电泳30分钟，待染料前沿进入分离胶后，将电压提高到120V继续电泳约1-1.5小时，直至溴酚蓝到达分离胶的底部。电泳结束后，用电转移法将分离的蛋白样品转移至PVDF膜，400mA，2小时。第二步为封闭膜：用PBS-T溶液洗（1×PBS缓冲液中加入2 ml Tween-20，定容至1L）PVDF膜10-15分钟。将PVDF膜放入含5％BSA的PBS-T溶液中，室温封闭1小时。第三步为免疫杂交：先进行一抗孵育，将购买于美国Santa CruzBiotechnology公司的BACH1（分子量92KDa）单克隆抗体（或购买于美国Cell SignalingTechnology公司的beta-Actin抗体）按1 : 1000稀释于PBS-T溶液中，4℃冷室中与PVDF膜在摇床上孵育过夜，用5 ml PBS-T溶液洗膜10分钟，重复3次。后进行二抗孵育，将结合辣根过氧化物酶的羊抗兔IgG抗体按1 : 5000稀释在PBS-T溶液中，室温下与PVDF膜在摇床上一起孵育约45分钟，用5ml PBS-T溶液洗膜10分钟，重复3次。第四步为ECL试剂显色：使用ECL蛋白杂交检测试剂盒（美国BioRad公司），参照操作说明进行PVDF膜显色反应。

结果：如图1所示。采用Lenti-BACH1-shRNA-875#慢病毒感染后建立的稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875与REC-1/BACH1^KD-875中BACH1的蛋白表达量均明显低于阴性对照慢病毒感染后建立的对照细胞系Jeko/BACH1^Con 和REC-1/BACH1^Con。

实施例2、BACH1低表达的稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系及对照细胞系的生长曲线比较

取实施例1中建立的BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/BACH1^KD-875、REC1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko-1/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con作为供试细胞，分别培养在1 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的24孔板中，细胞密度为1×10⁴个/孔，分别于培养后不同时间点（1、2、3、4、5、6、7、8天）收集一个孔内的所有细胞进行计数，设置第0天的细胞计数（1×10⁴个）为“1”倍，计算培养后不同时间点的细胞计数的变化倍数。

结果：图2为BACH1低表达的稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875与REC-1/BACH1^KD-875和各自对照细胞系Jeko/BACH1^Con 和REC-1/BACH1^Con的生长曲线图；可见降低BACH1在人非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko和REC-1中的蛋白表达量后，与对照细胞系相比，细胞生长受到明显的抑制。

实施例3、BACH1低表达的稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系及对照细胞系的细胞周期比较

取实施例1中建立的BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/BACH1^KD-875、REC1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko-1/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×10⁶个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞周期检测。检测步骤为：用PBS清洗细胞后，使用70%无水乙醇固定细胞1小时后，去除乙醇并加入1ml PI/RNase StainingBuffer（美国Biosciences公司），室温避光孵育15 分钟后用流式细胞仪进行检测，结果使用FlowJo软件进行分析。

结果：图3为流式细胞分析检测获得的BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875与REC-1/BACH1^KD-875和各自的对照细胞系Jeko/BACH1^Con、REC-1/BACH1^Con的细胞周期结果图。BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875在G0-G1期的细胞占总细胞计数的值为58.7%，S期占总细胞计数的值为29.9%，G2-M期细胞占总细胞计数的值为11.3%；其对照细胞系Jeko/BACH1^Con在G0-G1期的细胞占总细胞计数的值为46.2%，S期占总细胞计数的值为48.4%，G2-M期细胞占总细胞计数的值为4.76%。与之类似，BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系REC-1/BACH1^KD-875在G0-G1期的细胞占总细胞计数的值为44.6%，S期占总细胞计数的值为36.4%，G2-M期细胞占总细胞计数的值为19.0%；其对照细胞系REC-1/BACH1^Con在G0-G1期的细胞占总细胞计数的值为47.0%，S期占总细胞计数的值为43.8%，G2-M期细胞占总细胞计数的值为9.2%。可见BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko/BACH1^KD-875、REC-1/BACH1^KD-875与各自的对照细胞系相比，均表现出分布于S期的细胞比例明显减少，而分布于G2-M期的细胞明显增加，说明降低BACH1的蛋白表达量可以影响人非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞周期，从而抑制肿瘤细胞的生长。

实施例4、BACH1低表达的稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系及对照细胞系的细胞增殖比较

取实施例1中建立的BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875、REC1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko-1/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×10⁶个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞增殖检测。检测使用美国BDBiosciences公司的APC BrdU Flow Kit细胞增殖检测试剂盒，按照试剂盒说明书进行细胞的处理和标记后，用流式细胞仪进行检测，结果使用FlowJo软件进行分析。

结果：图4为流式细胞分析检测获得的BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875与REC-1/BACH1^KD-875和各自的对照细胞系Jeko/BACH1^Con的细胞增殖（即分布于S期的细胞）数量为对照细胞系Jeko-1/FARSA^KD-Con的84%、REC-1/BACH1^Con的细胞增殖结果图；以对照细胞系为单位“1”将数据进行标准化后进行比较，结果显示BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875分布于S期的增殖细胞数量的平均值为对照细胞系Jeko/BACH1^Con的61.8%；另一个BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系REC-1/BACH1^KD-875分布于S期的增殖细胞数量的平均值为对照细胞系REC-1/BACH1^Con的75.8%。说明减少BACH1的蛋白表达量可以显著影响人非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞增殖，从而抑制肿瘤细胞生长。

实施例5、BACH1低表达的稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系及对照细胞系的细胞凋亡比较

取实施例1中建立的BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875、REC1/BACH1^KD-875及各自的对照细胞系Jeko-1/BACH1^Con和REC-1/BACH1^Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×10⁶个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞凋亡检测。细胞凋亡检测试剂盒为美国BD Biosciences公司的7-AAD/Annexin V细胞凋亡试剂盒。按照试剂盒说明书进行细胞的处理和标记后，用流式细胞仪进行检测，结果使用FlowJo软件进行分析。

结果：如图5所示BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko/BACH1^KD-875与对照细胞系Jeko/BACH1^Con的早期凋亡比例分别为28.2%和4.88%；晚期凋亡比例分别为22.7%和0.62%；总体凋亡比例分别为50.9%和5.5%；另一个BACH1低表达稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞系REC-1/BACH1^KD-875和其对照细胞系REC-1/BACH1^Con的早期凋亡比例分别为2.87%和1.47%；晚期凋亡比例分别为1.33%和0.09%；总体凋亡比例分别为4.2%和1.56%。说明减少BACH1的蛋白表达量可以显著增加人非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞凋亡。

以上结果表明，减少或抑制BACH1在人非霍奇金淋巴瘤细胞系中的表达量可调控细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡，从而影响肿瘤细胞的生长，可作为非霍奇金淋巴瘤治疗的靶点。

序列表

<110>中国医学科学院医学生物学研究所

<120>转录因子BTB-CNC同源体1在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用

<160> 5

<210> 1

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Met Ser Leu Ser Glu Asn Ser Val Phe Ala Tyr Glu Ser Ser Val His

5 10 15

Ser Thr Asn Val Leu Leu Ser Leu Asn Asp Gln Arg Lys Lys Asp Val

20 25 30

Leu Cys Asp Val Thr Ile Phe Val Glu Gly Gln Arg Phe Arg Ala His

35 40 45

Arg Ser Val Leu Ala Ala Cys Ser Ser Tyr Phe His Ser Arg Ile Val

50 55 60

Gly Gln Ala Asp Gly Glu Leu Asn Ile Thr Leu Pro Glu Glu Val Thr

65 70 75 80

Val Lys Gly Phe Glu Pro Leu Ile Gln Phe Ala Tyr Thr Ala Lys Leu

85 90 95

Ile Leu Ser Lys Glu Asn Val Asp Glu Val Cys Lys Cys Val Glu Phe

100 105 110

Leu Ser Val His Asn Ile Glu Glu Ser Cys Phe Gln Phe Leu Lys Phe

115 120 125

Lys Phe Leu Asp Ser Thr Ala Asp Gln Gln Glu Cys Pro Arg Lys Lys

130 135 140

Cys Phe Ser Ser His Cys Gln Lys Thr Asp Leu Lys Leu Ser Leu Leu

145 150 155 160

Asp Gln Arg Asp Leu Glu Thr Asp Glu Val Glu Glu Phe Leu Glu Asn

165 170 175

Lys Asn Val Gln Thr Pro Gln Cys Lys Leu Arg Arg Tyr Gln Gly Asn

180 185 190

Ala Lys Ala Ser Pro Pro Leu Gln Asp Ser Ala Ser Gln Thr Tyr Glu

195 200 205

Ser Met Cys Leu Glu Lys Asp Ala Ala Leu Ala Leu Pro Ser Leu Cys

210 215 220

Pro Lys Tyr Arg Lys Phe Gln Lys Ala Phe Gly Thr Asp Arg Val Arg

225 230 235 240

Thr Gly Glu Ser Ser Val Lys Asp Ile His Ala Ser Val Gln Pro Asn

245 250 255

Glu Arg Ser Glu Asn Glu Cys Leu Gly Gly Val Pro Glu Cys Arg Asp

260 265 270

Leu Gln Val Met Leu Lys Cys Asp Glu Ser Lys Leu Ala Met Glu Pro

275 280 285

Glu Glu Thr Lys Lys Asp Pro Ala Ser Gln Cys Pro Thr Glu Lys Ser

290 295 300

Glu Val Thr Pro Phe Pro His Asn Ser Ser Ile Asp Pro His Gly Leu

305 310 315 320

Tyr Ser Leu Ser Leu Leu His Thr Tyr Asp Gln Tyr Gly Asp Leu Asn

325 330 335

Phe Ala Gly Met Gln Asn Thr Thr Val Leu Thr Glu Lys Pro Leu Ser

340 345 350

Gly Thr Asp Val Gln Glu Lys Thr Phe Gly Glu Ser Gln Asp Leu Pro

355 360 365

Leu Lys Ser Asp Leu Gly Thr Arg Glu Asp Ser Ser Val Ala Ser Ser

370 375 380

Asp Arg Ser Ser Val Glu Arg Glu Val Ala Glu His Leu Ala Lys Gly

385 390 395 400

Phe Trp Ser Asp Ile Cys Ser Thr Asp Thr Pro Cys Gln Met Gln Leu

405 410 415

Ser Pro Ala Val Ala Lys Asp Gly Ser Glu Gln Ile Ser Gln Lys Arg

420 425 430

Ser Glu Cys Pro Trp Leu Gly Ile Arg Ile Ser Glu Ser Pro Glu Pro

435 440 445

Gly Gln Arg Thr Phe Thr Thr Leu Ser Ser Val Asn Cys Pro Phe Ile

450 455 460

Ser Thr Leu Ser Thr Glu Gly Cys Ser Ser Asn Leu Glu Ile Gly Asn

465 470 475 480

Asp Asp Tyr Val Ser Glu Pro Gln Gln Glu Pro Cys Pro Tyr Ala Cys

485 490 495

Val Ile Ser Leu Gly Asp Asp Ser Glu Thr Asp Thr Glu Gly Asp Ser

500 505 510

Glu Ser Cys Ser Ala Arg Glu Gln Glu Cys Glu Val Lys Leu Pro Phe

515 520 525

Asn Ala Gln Arg Ile Ile Ser Leu Ser Arg Asn Asp Phe Gln Ser Leu

530 535 540

Leu Lys Met His Lys Leu Thr Pro Glu Gln Leu Asp Cys Ile His Asp

545 550 555 560

Ile Arg Arg Arg Ser Lys Asn Arg Ile Ala Ala Gln Arg Cys Arg Lys

565 570 575

Arg Lys Leu Asp Cys Ile Gln Asn Leu Glu Ser Glu Ile Glu Lys Leu

580 585 590

Gln Ser Glu Lys Glu Ser Leu Leu Lys Glu Arg Asp His Ile Leu Ser

595 600 605

Thr Leu Gly Glu Thr Lys Gln Asn Leu Thr Gly Leu Cys Gln Lys Val

610 615 620

Cys Lys Glu Ala Ala Leu Ser Gln Glu Gln Ile Gln Ile Leu Ala Lys

625 630 635 640

Tyr Ser Ala Ala Asp Cys Pro Leu Ser Phe Leu Ile Ser Glu Lys Asp

645 650 655

Lys Ser Thr Pro Asp Gly Glu Leu Ala Leu Pro Ser Ile Phe Ser Leu

660 665 670

Ser Asp Arg Pro Pro Ala Val Leu Pro Pro Cys Ala Arg Gly Asn Ser

675 680 685

Glu Pro Gly Tyr Ala Arg Gly Gln Glu Ser Gln Gln Met Ser Thr Ala

690 695 700

Thr Ser Glu Gln Ala Gly Pro Ala Glu Gln Cys Arg Gln Ser Gly Gly

705 710 715 720

Ile Ser Asp Phe Cys Gln Gln Met Thr Asp Lys Cys Thr Thr Asp Glu

725 730 735

<210> 2

<211> 5618

<211> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

agtcagtcgg gccgcgccgc gcctcagctc tggttgatga taattagaag catgctttcc 60

actgaacttc ccgacaacat ttgttatgca gaatgtctct gagtgagaac tcggtttttg 120

cctatgaatc ttctgtgcat agcaccaatg ttttactcag ccttaatgac cagcggaaga 180

aagatgtgct gtgcgatgtc accatctttg tggagggaca gcggttccgc gctcaccggt 240

ccgtgctggc ggcatgcagc agttacttcc actcaagaat cgtaggccag gctgatggag 300

agctgaacat tactcttcca gaagaggtga cagttaaagg atttgaacct ttaattcagt 360

ttgcctacac tgctaaactg attttaagta aagagaatgt ggatgaagtg tgcaaatgtg 420

tggagttttt aagtgtacat aatattgagg aatcctgctt tcagtttctg aaatttaagt 480

ttttggactc cactgcagac cagcaagaat gcccaagaaa aaaatgcttt tcatcacact 540

gtcagaaaac agaccttaaa ctttcacttt tggaccagag ggatctagaa actgatgaag 600

tggaggaatt tctggaaaat aaaaatgttc agactcctca gtgtaaactc cgcaggtatc 660

aaggaaatgc aaaagcctca cctcctctac aagacagtgc cagtcagaca tatgagtcca 720

tgtgcttaga gaaggatgct gctctggcct tgccttcttt atgccccaaa tacagaaaat 780

tccaaaaagc atttggaact gacagagtcc gtactgggga atctagtgtc aaagacattc 840

atgcttctgt tcagccaaat gaaaggtctg aaaatgaatg cctgggagga gtcccggagt 900

gtagagattt gcaggtgatg ttaaaatgtg acgaaagtaa attagcaatg gaacctgaag 960

aaacgaagaa agatcctgct tctcagtgcc caactgaaaa atcagaagtg actcctttcc 1020

cccacaattc ttccatagac cctcatggac tttattcttt gtctctttta cacacatatg 1080

accaatatgg tgacttgaat tttgctggta tgcaaaacac aacagtgtta acagaaaagc 1140

ctttgtcagg tacagacgtc caagaaaaaa catttggtga aagtcaggat ttacctttga 1200

aatccgactt gggcaccagg gaagatagta gtgttgcatc tagtgatagg agtagtgtgg 1260

agcgagaagt ggcagaacac ctagcaaaag gcttctggag tgacatttgc agcacggaca 1320

ctccttgcca aatgcagtta tcacctgctg tggccaaaga tggctcagaa cagatctcac 1380

agaaacggtc tgagtgtccg tggttaggta tcaggattag tgagagccca gaaccaggtc 1440

aaaggacttt cacaacatta agttctgtca actgcccttt tataagtact ctgagtactg 1500

aaggctgttc aagcaatttg gaaattggaa acgatgatta tgtttcagaa ccccagcaag 1560

aaccttgccc atatgcttgt gtcattagct tgggagacga ctctgagacg gacaccgaag 1620

gagacagtga atcctgttca gccagagaac aagaatgtga ggtaaaactg ccattcaatg 1680

cacaacggat aatttcactg tctcgaaatg attttcagtc cttgttgaaa atgcacaagc 1740

ttactccaga acagctggat tgtatccatg atattcgaag aagaagtaaa aacagaattg 1800

ctgcacagcg ctgtcgcaag agaaaacttg actgtataca gaatcttgaa tcagaaattg 1860

agaagctgca aagtgaaaag gagagcttgt tgaaggaaag agatcacatt ttgtcaactc 1920

tgggtgagac aaagcagaac ctaactggac tttgccagaa agtttgtaaa gaagcagctc 1980

tgagtcaaga acaaatacag atactcgcca agtactcagc tgcagattgc ccactttcat 2040

ttttaatttc tgaaaaagat aaaagtactc ctgatggtga actggcgtta ccatcaattt 2100

tcagtttatc tgaccggcct ccagcagtgc tgcctccctg tgccagagga aacagtgagc 2160

ctggctacgc gcgagggcag gagtcccagc agatgtccac agccacctct gagcaagctg 2220

ggcctgcgga acagtgtcgt cagagtggtg ggatctcaga tttctgtcag cagatgactg 2280

ataaatgtac tactgatgag taaacttgca ttcacttcct tcaaaccatc taattttctc 2340

ctgaagtttt ggcagcgtct tgaaagccta atatgaccat ctgttgctca acaatactgt 2400

ttttttcctt tagtagttta ccataaggga atttccttta agtcaaccat gatttctcct 2460

tgatttctac aagagacaaa gaaatgattt tgcctcctgg atatcagaaa aatccatgtg 2520

aaaatgtagt aaacctttaa aactcatgtt ttaaagaata ataactctag taataactct 2580

tcctgctatt cagaataagt aggagaatga aaactgcagc atatcagaca gcaatttaac 2640

agcttgaaac atctacagat agttcctact aaaagaagtg gcctgcagaa gtttaataat 2700

ttgacttttt tctaatattt tagtttgaaa gaaaatttct tcccaagcaa tgctaataga 2760

gttctattct tagaagcagg gtgtcagcta ctgggaatat ttttgtagag ctgcattgtg 2820

aaaaaaagat ggtcttacct gaatcttagg gctttgttct tcggctccta aaatcaggct 2880

ttaagctaca ttgggaagat ttagtaaata ggcaagtggt tggcctaaga cgggggctgc 2940

ttctcctctt cagtatggac tctagaaagt ctggctacat gaatagattt aagtgtcact 3000

ttccctccct gccccccgct tcagtctcta ccatatctgg tcccatcatg gacttcctat 3060

ttcctggcat ttttgtccct ttggaagaag aaataggact cagaatacag tggcatgagt 3120

gattacactg gcagcattat ctcaggctcc ctagaatctg gagagcttac caacatgtaa 3180

agctgttcat ttttccaccg tgggtcacca atgccagaaa accagacatc acggggaaag 3240

aatgttgctt actttttacc aggagtgcag ttcatttttt tcaccctgtt tttgaagtcg 3300

tattattcac ttgtaaaaat gattgtaaca gataaaaaat gtatctgcag caactctgca 3360

ggtttgtgaa ataggatgaa actcaatctt tttctattgt gggtttgcat ttgaaaagca 3420

ggttgaatcc ttgctctctt ctccaaattt ggtgtggtat aaagacacac aaatcatttt 3480

aacttggaca tttaaagatc agtcttagtg tttgttcagt cctgttacaa aatagataac 3540

tgagcaccta tcgcataaca ttttgcggtg gcttttagcc atgctggggt tagatgtgtt 3600

tgagagtcaa atgaaagcta tggatcttct cagcaattaa aaaaaatgca tatattcaca 3660

ttcacagaaa cattggcaga acccagtttt aatggtacag aggagtagtt tatagtgttg 3720

atttcaccaa aatcagaggg ctgaaagaga cacttctata gactgcatcc tgagcctagt 3780

gcagggcttg tctagctaat gtgggcagcc accacccact gtgtatgaac aagtctgaag 3840

caagttggcc ttgcccttga gagtatatgg ggaccagtct tcatgtcttg gagtaatttg 3900

tcaaatgtta ccctttttga tcagggtgta gggggaggat attgctagta tattttcagt 3960

ggtttgtatg ttctctctgt cactgactta tttgtaagag aaaattagtt ggacttgttt 4020

attttctagt agcttttata agtacactca agaatttgtc agggagaata attctgatag 4080

tgcatcccat actgcaaaag aatttgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgta 4140

tgtgtatgta tacatatata tctctccata taggtatttc tttgatactt gtaattttaa 4200

atttcagctt cacgatataa aataatataa gaacttctgg tttacaaaat gtaaaatctt 4260

aagccaatgg aacccttgat ttcctacctc agtgtacacc caactattgg ttgtatcagt 4320

ttgtgtatgt gcaaatgtca aataatcttt tgctttaatt gctactgtac ttgctttgaa 4380

agattaccta ctattttatg ataaaatgta gttgtctcca gagcttaaat ataatttgta 4440

aagcacttgg tttaaatttc tctctaccta taaacagttt agcattaagg gtttctatta 4500

atgacacaga attattggcc aagtgtaatt tcttaaaatt tagcattact ttaaatagcc 4560

agcatgtaat acaagtaact acactacctc atatctacat gattttcaag ttgtaatgca 4620

gatggacaga taaaaaagat tttacgtttg tcttttggcc ataagtggga aagttttctg 4680

tatattgcat agcattacac atttatgcct attttaacat taacttctaa agaagttttt 4740

tctaagaaaa tgtttcaagg caatattttt tttgaggctg ccgaagacaa atgacaggat 4800

tatgagtata cagtgtatgc cttttccttc atgcagaatt ttgaaatgtt ttcagtttgt 4860

atattgcata ttcacatgat cattgttcac tattttatga actggccttc tcaatgtttg 4920

atgatttttt aaaagctgtt atgttgaatt cagtaaaata acattacctt attttttttc 4980

ttattcaaat tctggaacta tagcaaataa ttcgttaaat tgtcatattc aaaacaaatg 5040

tggatacagt cttggttctc catctgtaat tttttttaac agtttgctat agcttactgc 5100

ttaactaatt ttaaataagg aaataagtat gttagatgca gtagacgata caggttgcat 5160

gtggacactc agtcacatta acaacttggg aaaaaaatgg caatgttacg gtgaattctc 5220

aggtgaactt ttttcagtta taaaacatct attttgaatc tgtaaatatt ttaaatgttt 5280

tattaaggca tgtaataaac tattctttga aacttgttgg gtagaatgaa aattaaagcc 5340

ataatggtag aagatggcat actgattata aaagaagcag aaaaacattg atttttttat 5400

atctttcata atataatttt ctaacaatgc aataaaacca ctaaactttt gtgtccatat 5460

tttactgaga ccatgtttca ttaaaagcat agtttcatag tatttaattt acatttctcc 5520

ctaatgttct tacccaaatg tacctgaact aaaaaatgtt agatgttggt gataagttga 5580

cagttaaata aaattctcta aaattgcttc taattgaa 5618

<210> 3

<211> 21

<211> RNA

<213> 人工序列

<400> 3

TAATGACACAAGCATATGGGC 21

<210> 4

<211> 21

<211> RNA

<213> 人工序列

<400>4

TTTCTTGGGCATTCTTGCTGG 21

<210> 5

<211> 21

<211> RNA

<213> 人工序列

<400>5

ATATCATGGATACAATCCAGC 21

Claims

1.BACH1在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用，其氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。

2.一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物，其活性成分为BACH1的抑制物，其中BACH1的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。

3.根据权利要求2所述的药物，其中所述的抑制物为抑制BACH1蛋白活性的物质、降低BACH1蛋白含量的物质、沉默或敲除或突变BACH1基因的物质或者抑制BACH1基因表达的物质，所述BACH1的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。

4.一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物组合物，其含有能够抑制BACH1表达的抑制物，其的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述的抑制物为抑制BACH1蛋白活性的物质、降低BACH1蛋白含量的物质、沉默或敲除或突变BACH1基因的物质或者抑制BACH1基因表达的物质，所述BACH1的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。

6.BACH1的抑制物在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用，其氨基酸序列如SEQ IDNo. 1所示。