CN114533861A - 苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用 - Google Patents

苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用 Download PDF

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张寒
李桂兰
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Abstract

本发明公开了苯丙氨酰‑tRNA合成酶α亚基在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用。实验证明，通过降低或者提高FARSA在非霍奇金淋巴瘤细胞系中的表达水平，可有效调控肿瘤细胞的细胞周期及增殖。本发明为非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一个新的靶点。

Description

苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基（简称FARSA）在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用。
背景技术
氨酰tRNA合成酶（aminoacyl-tRNA synthetase, aaRS）是一类可识别其对应氨基酸，并催化氨基酸和对应的tRNA结合的酶，在生物蛋白质合成翻译过程中起重要作用。总体来看aaRS在进化过程中是高度保守的，但结构相关研究发现，相比细菌而言，脊椎动物体内的aaRS在其核心结构的N-或C-端出现了新的特定结构域。此外，在高等真核生物中还发现了由9种aaRS和3种辅助蛋白组成的复杂的氨酰tRNA合成酶复合物。这些在进化中出现的特定结构域和复合物除辅助aaRS实现经典功能外，可能更多的参与了真核生物体内的多种生命活动。近二十年来的研究表明aaRS是一类具有多种功能的蛋白质，广泛参与多种生理病理过程。目前已有报道aaRS可参与调节细胞生长和分化、细胞因子活性、RNA剪接和血管生成等，可调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移等，是肿瘤发生的关键因素。通过癌症和正常组织的基因组和转录组测序数据分析，发现在不同类型的癌症组织中包括多个aaRS表达异常，进一步证实aaRS可能在肿瘤的的发生中具有某些特定的作用，可促进或抑制肿瘤的发生和发展。苯丙氨酰tRNA合成酶 (PheRS，也称为 FARS) 是一种典型的异源四元蛋白，分别由两个α亚基（FARSA）和两个β亚基（FARSB）组成。除组成苯丙氨酰tRNA合成酶帮助蛋白质合成外，α和β亚基还各自具有不同的功能。在不同类型的癌症中发现FARSA与FARSB 具有不同的转录谱。但FARSA在淋巴瘤中的作用尚无报道。
淋巴瘤是一类起源于造血系统的淋巴结和淋巴组织的恶性肿瘤。据世界卫生组织统计，淋巴瘤发病率年增长率为7.5%，近年来发病率增速较快。根据其病理学特点，淋巴瘤主要分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤两个大类。从目前的数据来看，霍奇金淋巴瘤通常治疗效果较好，治愈率较高。而非霍奇金淋巴瘤是一组高度异质性的恶性淋巴细胞增殖性疾病，在我国是男性最常见的几种恶性肿瘤之一。目前淋巴瘤的明确病因尚不清楚，可能与遗传、病原体感染、机体免疫异常、环境污染等因素有关。随着生活方式的改变、环境污染的加重、饮食结构的调整、精神压力增加、老龄化等因素影响，近年来淋巴瘤发病率明显增加，已经逐渐成为严重威胁我国人民身体健康的一类主要肿瘤。目前淋巴瘤的主要治疗仍是以化疗或者放疗为主，经济条件较好或者有明确治疗指针的患者可同时应用免疫疗法。在治疗过程中，化疗和放疗由于其细胞毒性，在其应用过程中在杀伤肿瘤细胞的同时也会对正常细胞产生毒性作用，使患者在接受化疗和放疗期间出现各种不同程度的副作用，导致患者生存质量普遍下降，甚至因不能耐受而被迫中断治疗，严重影响了疗效与疾病的转归。而免疫疗法主要包括细胞治疗和抗体治疗两个方面，该治疗方法主要通过增加肿瘤抗原性及调控肿瘤免疫逃逸来激活人体自身免疫反应而杀灭肿瘤细胞，对非侵袭性非霍奇金淋巴瘤的治疗有所帮助，但经过初始治疗后复发或难治性非霍奇金淋巴瘤患者的预后仍然很差。因此，面对目前肿瘤治疗的局限性及个体异质性的现状，迫切需要开发特异性的靶点，用于非霍奇金淋巴瘤的治疗。
发明内容
本发明在现有技术的基础上，提供了苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基（FARSA）表达调节剂在治疗非霍奇金淋巴瘤方面的应用。
本发明发现了FARSA与非霍奇金淋巴瘤之间具有关联性，为非霍奇金淋巴瘤的治疗提供新的靶点。
本发明的技术方案如下：
FARSA在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用，其氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示，其编码的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示。
一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物和/或药物组合物，其活性成分为FARSA蛋白表达量的调节物质，其中FARSA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。
一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物和/或药物组合物，其含有氨基酸序列如SEQID No. 1所示的FARSA蛋白。
一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物和/或药物组合物，其含有FARSA蛋白表达量的调节物质。
本发明中所指的调节物质包括抑制或激活FARSA蛋白活性的物质、降低或增加FARSA蛋白含量的物质、沉默或敲出或过表达FARSA基因的物质或者抑制或激活FARSA基因表达的物质。
本发明涉及调节FARSA表达量的物质（即FARSA表达调节剂）在制备预防和治疗非霍奇金淋巴瘤的药物产品中的应用。
本发明包括了调节FARSA表达的一种或多种方法，包括将细胞与有效调节一种或多种调节剂的接触。
本发明包括利用FARSA表达调节剂抑制非霍奇金淋巴瘤肿瘤细胞增殖的方法，FARSA表达量调节剂在抑制非霍奇淋巴瘤肿瘤细胞增殖中的用途，以及FARSA表达量调节剂在制备用于抑制非霍奇金淋巴瘤肿瘤细胞增殖的药物组合物或试剂盒中的用途。
本发明包括以FARSA蛋白质或其表达调控序列为靶点，设计、筛选以及制备用于在非霍奇金淋巴瘤预防或治疗肿瘤的活性物质以及所包含所述活性物质的药物组合物。
在本发明的应用或产品中， FARSA蛋白的氨基酸序列为序列表中的SEQ ID No.1，所述FARSA基因的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID No. 2。
本发明通过FARSA的RNA干扰慢病毒感染非霍奇金淋巴瘤细胞系后，可降低FARSA的蛋白表达量，并检测了FARSA表达量降低的细胞系与表达量无变化的对照细胞系的细胞周期和细胞增殖情况。结果表明，RNA干扰慢病毒感染后，可将FARSA蛋白的表达量大约降低50%-70%，FARSA表达量降低的细胞增殖变多，细胞周期位于S期的细胞比例增加。
本发明通过FARSA过表达慢病毒感染非霍奇金淋巴瘤细胞系，增加FARSA的蛋白表达量，并检测了FARSA表达量增加的细胞系与表达量无变化的对照细胞系的细胞周期和细胞增殖情况。结果表明，FARSA过表达病毒感染后，可将FARSA蛋白的表达量增加2-3倍，FARSA表达量增加的细胞增殖变少，细胞周期位于S期的细胞比例减少，位于G2-M期的细胞比例增加。
本发明证明调节FARSA在人非霍奇金淋巴瘤细胞中的表达量，可调控肿瘤细胞的增殖及细胞周期变化，影响肿瘤细胞的生长，为非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一个新的靶点。
附图说明
图1为RNA干扰稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞中FARSA蛋白量的Western Blot检测结果；
图中，第一排为以FARSA多克隆抗体为一抗检测FARSA，第二排为以beta-Actin单克隆抗体为一抗检测内参beta-Actin。其中，FARSAKD代表稳转非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko-1/FARSAKD；FARSAKD-Con代表对照细胞Jeko-1/FARSAKD-Con。
图2为实施例2的结果图；
图中A为流式细胞仪检测RNA干扰稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞周期分布情况包括G0-G1、S和G2-M期；图中B为三次重复流式细胞仪检测实验结果的统计分析，图中的数值分别表示G0-G1、S和G2-M期在整个细胞周期中所占百分比。其中，FARSAKD代表稳转非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko-1/FARSAKD；FARSAKD-Con代表对照细胞Jeko-1/FARSAKD-Con；*表示p值小于0.05，**表示p值小于0.001。
图3为实施例3的结果图；
图中A为流式细胞仪检测RNA干扰稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞的增殖情况，Edu阳性的细胞为处于增殖期的细胞。图中B为三次重复流式细胞仪检测实验结果的统计分析，以对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con为单位“1”将数据进行标准化后进行比较。其中，FARSAKD代表稳转非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko-1/FARSAKD；FARSAKD-Con代表对照细胞Jeko-1/FARSAKD-Con；*表示p值小于0.05，**表示p值小于0.001。
图4为FARSA过表达非霍奇金淋巴瘤细胞中FARSA蛋白量的Western Blot检测结果；
图中，第一排为以FARSA多克隆抗体为一抗检测FARSA，第二排为以beta-Actin单克隆抗体为一抗检测内参beta-Actin。其中，FARSAOE代表FARSA过表达非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko-1/FARSAOE；FARSAOE-Con代表其对照细胞Jeko-1/FARSAOE-Con。
图5为实施例5的结果图；
图中A为流式细胞仪检测FARSA过表达人非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞周期分布情况包括G0-G1、S和G2-M期。图中B为三次重复流式细胞仪检测实验结果的统计分析，图中的数值分别表示G0-G1、S和G2-M期在整个细胞周期中所占百分比。其中，FARSAOE代表FARSA过表达非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko-1/FARSAOE；FARSAOE-Con代表其对照细胞Jeko-1/FARSAOE-Con；*表示p值小于0.05。
图6为实施例6的结果图；
图中A为流式细胞仪检测RNA干扰稳转人非霍奇金淋巴瘤细胞的增殖情况，Edu阳性的细胞为处于增殖期的细胞。图中B为三次重复流式细胞仪检测实验结果的统计分析，以对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con为单位“1”将数据进行标准化后进行比较。其中，FARSAOE代表FARSA过表达非霍奇金淋巴瘤细胞Jeko-1/FARSAOE；FARSAOE-Con代表其对照细胞Jeko-1/FARSAOE-Con；*表示p值小于0.05。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。
下述实施例中的实验均设置三次重复，结果取平均值±标准差。统计分析采用t检验。*表示p值小于0.001。
下述实施例中的人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1购买于中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所，并通过细胞STR鉴定确认。
下述实施例中的shRNA慢病毒LV-FARSA-RNAi、FARSA过表达慢病毒LV-FARSA(73641-1)，以及相应的阴性对照慢病毒（不影响FARSA表达量）均为中国上海吉凯基因公司产品。其中，shRNA慢病毒LV-FARSA-RNAi的成熟反义链序列：AATGACCGACACGTTCTCGGG；FARSA过表达慢病毒在目的基因片段的获取时使用引物为：FARSA(73641-1)-p1：GAGGATCCCCGGGTACCGGTCGCCACCATGGCGGATGGTC，FARSA(73641-1)-p2：TCCTTGTAGTCCATACCGGTCGCAGCCTCCTGTGTGGGAGGGG。
下述实施例中的FARSA的氨基酸序列为序列表中的SEQ ID No. 1，编码基因序列为序列表中的SEQ ID No. 2，来源于NCBI数据库。
下述实施例中的细胞培养条件均为：用含有10% FBS的RPMI-1640培养基在T-25透气细胞培养瓶、37℃和5% CO2条件下培养。
下述实施例中的慢病毒感染细胞实验方法为：取培养的Jeko-1细胞按1×106个/孔接种于六孔板，每孔加入3 ml含有10% FBS的RPMI-1640培养基，放置37℃，5% CO2细胞培养箱中培养。1小时后取出细胞，加入50 μl病毒液，室温2500 rpm离心1小时，将细胞转移至T-25透气细胞培养瓶中，置于37℃，5% CO2细胞培养箱中继续培养24小时。
下述实施例中的稳转细胞系的筛选方法为：将慢病毒感染后的细胞去除培养基，加入10 ml新鲜的含有10% FBS的RPMI-1640培养基重悬细胞，继续放置37℃，5% CO2细胞培养箱中培养。48小时后，将T-25培养瓶中的细胞转移至T-75透气细胞培养瓶中，补充10 ml新鲜的含有10% FBS的RPMI-1640培养基继续培养。24小时后，去除培养基，更换20 ml新鲜培养基重悬细胞，同时加入1 μg/ml嘌呤霉素（puromycin）对细胞株进行筛选，每隔2-3天更换培养基，筛选10-14天。
下述实施例中细胞周期检测的方法为：将供试细胞分别培养在3 mL含有10% 胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）的RPMI-1640培养基的6孔板中，细胞密度为1×106个/孔，48小时后收获细胞。用PBS清洗细胞后，使用70%无水乙醇固定细胞1小时后，去除乙醇并加入1ml PI/RNase Staining Buffer（美国Biosciences公司），室温避光孵育15 分钟后用流式细胞仪进行检测，结果使用FlowJo软件进行分析。
下述实施例中细胞增殖检测使用中国碧云天公司的BeyoClick™ EdU细胞增殖检测试剂盒。检测方法为：将供试细胞分别培养在3 mL含有10% 胎牛血清（Fetal BovineSerum，FBS）的RPMI-1640培养基的6孔板中，细胞密度为1×106个/孔，48小时后收获细胞。首先用4%多聚甲醛固定细胞，清洗后加入浓度为0.1%的Triton X-100 PBS溶液使细胞透化，再次清洗细胞后加入含有荧光指示剂的反应激活剂于室温避光反应30分钟，清洗后用PBS重悬细胞并用流式细胞仪进行检测，结果使用FlowJo软件进行分析。
下述实施例中的提取总蛋白的方法为：90 g离心5分钟收集细胞，用预冷1×PBS缓冲液洗两遍，加150～300 μl RIPA裂解液，冰上裂解30 min，4℃，12000rpm离心10min；吸取上清，利用Pierce BCA法进行蛋白定量；各取10 μg总蛋白进行Western blot检测。
下述实施例中Western blot检测的具体方法为：（1）电泳及转膜：对待测蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，先在电压80V下电泳30分钟，待染料前沿进入分离胶后，将电压提高到120V继续电泳约1-1.5小时，直至溴酚蓝到达分离胶的底部。电泳结束后，用电转移法将分离的蛋白样品转移至PVDF膜，400mA，2小时。（2）封闭膜：用PBS-T溶液洗（1×PBS缓冲液中加入2 ml Tween-20，定容至1L）PVDF膜10-15分钟。将PVDF膜放入含5％BSA的PBS-T溶液中，室温封闭1小时。（3）免疫杂交：先进行一抗孵育，将购买于美国Abcam公司的FARSA（分子量58KDa）抗体（或购买于美国Cell Signaling Technology公司的beta-Actin抗体）按1 :1000稀释于PBS-T溶液中，4℃冷室中与PVDF膜在摇床上孵育过夜，用5 ml PBS-T溶液洗膜10分钟，重复3次。后进行二抗孵育，将结合辣根过氧化物酶的羊抗兔IgG抗体按1 : 5000稀释在PBS-T溶液中，室温下与PVDF膜在摇床上一起孵育约45分钟，用5ml PBS-T溶液洗膜10分钟，重复3次。（4）ECL试剂显色：使用ECL蛋白杂交检测试剂盒（美国BioRad公司），参照操作说明进行PVDF膜显色反应。
实施例1、FARSA的RNA干扰稳转细胞系构建
分别用shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1，建立稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD和对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con，分别提取总蛋白，以beta-Actin为内参，进行Western blot检测。
结果：如图1所示。采用shRNA慢病毒建立的稳转重组非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD中的FARSA蛋白表达水平均明显低于对照Jeko-1/FARSAKD-Con。
实施例2、稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con的细胞周期比较
取实施例1中建立的稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×106个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞周期检测。
结果：图2A为流式细胞分析检测获得的稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con细胞周期结果图；图2B为三次实验后统计分析的数据结果，对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con在G0-G1期的细胞占总细胞计数的平均值为52%，S期占总细胞计数的平均值为34.3%，G2-M期细胞占总细胞计数平均值为13.8%；FARSA表达量较低的细胞系Jeko-1/FARSAKD在G0-G1期的细胞占总细胞计数的平均值为46.4%，S期占总细胞计数的平均值为42.5%，G2-M期细胞占总细胞计数的平均值为11.1%；统计分析显示Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Co在S和G2-M期的细胞分布上具有显著差异，说明调控FARSA的表达量可以影响非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞周期，从而影响肿瘤细胞的生长。
实施例3、稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con的细胞增殖比较
取实施例1中建立的稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×106个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞增殖检测。
结果：图3A为流式细胞分析检测获得的稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAKD及对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con细胞增殖的结果图；图3B为三次实验后统计分析的数据结果，以对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con为单位“1”将数据进行标准化后进行比较， 细胞系Jeko-1/FARSAKD的细胞增殖数量是对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con的约1.16倍，具有显著差异。说明调控FARSA的表达量可以影响非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞增殖，从而影响肿瘤细胞的生长。
实施例4、FARSA过表达稳转细胞系构建
用FARSA过表达慢病毒感染人非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1，建立FARSA过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con，分别提取总蛋白，以beta-Actin为内参，进行Western blot检测。
结果：如图4所示。采用FARSA过表达慢病毒建立的稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE中的FARSA蛋白表达水平均明显高于对照Jeko-1/FARSAOE-Con。
实施例5、FARSA过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con的细胞周期比较
取实施例4中建立的FARSA过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×106个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞周期检测。
结果：图5A为流式细胞分析检测获得的过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con结果图；图5B为三次实验后统计分析的数据结果，对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con在G0-G1期的细胞占总细胞计数的平均值为44.7%，S期占总细胞计数的平均值为33.2%，G2-M期细胞占总细胞计数平均值为21.6%；FARSA表达量较高的细胞系Jeko-1/FARSAOE在G0-G1期的细胞占总细胞计数的平均值为46%，S期占总细胞计数的平均值为26.9%，G2-M期细胞占总细胞计数的平均值为26.6%；统计分析显示Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con在S和G2-M期的细胞分布上具有显著差异，说明调控FARSA的表达量可以影响非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞周期，从而影响肿瘤细胞的生长。
实施例6、FARSA过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con的细胞增殖比较
取实施例4中建立的FARSA过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con作为供试细胞，分别培养在3 mL含有普通培养基（含有10% FBS的RPMI-1640培养基）的6孔板中，细胞密度为1×106个/孔，培养48小时后收获细胞，进行细胞增殖检测。
结果：图6A为流式细胞分析检测获得的过表达稳转非霍奇金淋巴瘤细胞系Jeko-1/FARSAOE及对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con细胞增殖的结果图；图6B为三次实验后统计分析的数据结果，以对照细胞系Jeko-1/FARSAOE-Con为单位“1”将数据进行标准化后进行比较，细胞系Jeko-1/FARSAOE的细胞增殖数量为对照细胞系Jeko-1/FARSAKD-Con的84%，具有显著差异。说明调控FARSA的表达量可以影响非霍奇金淋巴瘤细胞的细胞增殖，从而影响肿瘤细胞的生长。
以上结果表明，调控FARSA在非霍奇金淋巴瘤细胞系中的表达量可调控细胞周期及细胞增殖，从而影响肿瘤细胞的生长，可作为非霍奇金淋巴瘤治疗的靶点。
序列表
<110> 中国医学科学院医学生物学研究所
<120> 苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基在非霍奇金淋巴瘤治疗中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Ala Asp Gly Gln Val Ala Glu Leu Leu Leu Arg Arg Leu Glu Ala
5 10 15
Ser Asp Gly Gly Leu Asp Ser Ala Glu Leu Ala Ala Glu Leu Gly Met
20 25 30
Glu His Gln Ala Val Val Gly Ala Val Lys Ser Leu Gln Ala Leu Gly
35 40 45
Glu Val Ile Glu Ala Glu Leu Arg Ser Thr Lys His Trp Glu Leu Thr
50 55 60
Ala Glu Gly Glu Glu Ile Ala Arg Glu Gly Ser His Glu Ala Arg Val
65 70 75 80
Phe Arg Ser Ile Pro Pro Glu Gly Leu Ala Gln Ser Glu Leu Met Arg
85 90 95
Leu Pro Ser Gly Lys Val Gly Phe Ser Lys Ala Met Ser Asn Lys Trp
100 105 110
Ile Arg Val Asp Lys Ser Ala Ala Asp Gly Pro Arg Val Phe Arg Val
115 120 125
Val Asp Ser Met Glu Asp Glu Val Gln Arg Arg Leu Gln Leu Val Arg
130 135 140
Gly Gly Gln Ala Glu Lys Leu Gly Glu Lys Glu Arg Ser Glu Leu Arg
145 150 155 160
Lys Arg Lys Leu Leu Ala Glu Val Thr Leu Lys Thr Tyr Trp Val Ser
165 170 175
Lys Gly Ser Ala Phe Ser Thr Ser Ile Ser Lys Gln Glu Thr Glu Leu
180 185 190
Ser Pro Glu Met Ile Ser Ser Gly Ser Trp Arg Asp Arg Pro Phe Lys
195 200 205
Pro Tyr Asn Phe Leu Ala His Gly Val Leu Pro Asp Ser Gly His Leu
210 215 220
His Pro Leu Leu Lys Val Arg Ser Gln Phe Arg Gln Ile Phe Leu Glu
225 230 235 240
Met Gly Phe Thr Glu Met Pro Thr Asp Asn Phe Ile Glu Ser Ser Phe
245 250 255
Trp Asn Phe Asp Ala Leu Phe Gln Pro Gln Gln His Pro Ala Arg Asp
260 265 270
Gln His Asp Thr Phe Phe Leu Arg Asp Pro Ala Glu Ala Leu Gln Leu
275 280 285
Pro Met Asp Tyr Val Gln Arg Val Lys Arg Thr His Ser Gln Gly Gly
290 295 300
Tyr Gly Ser Gln Gly Tyr Lys Tyr Asn Trp Lys Leu Asp Glu Ala Arg
305 310 315 320
Lys Asn Leu Leu Arg Thr His Thr Thr Ser Ala Ser Ala Arg Ala Leu
325 330 335
Tyr Arg Leu Ala Gln Lys Lys Pro Phe Thr Pro Val Lys Tyr Phe Ser
340 345 350
Ile Asp Arg Val Phe Arg Asn Glu Thr Leu Asp Ala Thr His Leu Ala
355 360 365
Glu Phe His Gln Ile Glu Gly Val Val Ala Asp His Gly Leu Thr Leu
370 375 380
Gly His Leu Met Gly Val Leu Arg Glu Phe Phe Thr Lys Leu Gly Ile
385 390 395 400
Thr Gln Leu Arg Phe Lys Pro Ala Tyr Asn Pro Tyr Thr Glu Pro Ser
405 410 415
Met Glu Val Phe Ser Tyr His Gln Gly Leu Lys Lys Trp Val Glu Val
420 425 430
Gly Asn Ser Gly Val Phe Arg Pro Glu Met Leu Leu Pro Met Gly Leu
435 440 445
Pro Glu Asn Val Ser Val Ile Ala Trp Gly Leu Ser Leu Glu Arg Pro
450 455 460
Thr Met Ile Lys Tyr Gly Ile Asn Asn Ile Arg Glu Leu Val Gly His
465 470 475 480
Lys Val Asn Leu Gln Met Val Tyr Asp Ser Pro Leu Cys Arg Leu Asp
485 490 495
Ala Glu Pro Arg Pro Pro Pro Thr Gln Glu Ala Ala
500 505
<210> 2
<211> 1811
<211> RNA
<213> 人工序列
<400> 2
ACACTGGAAG GAGTCATGGC GGATGGTCAG GTGGCGGAAC TGCTGCTCCG GCGGCTGGAG 60
GCGTCTGATG GCGGCCTGGA CAGCGCCGAG TTGGCGGCTG AGCTGGGCAT GGAGCACCAG 120
GCGGTGGTGG GCGCCGTGAA GAGCCTTCAG GCGCTGGGCG AGGTCATCGA GGCTGAACTT 180
CGGTCCACCA AGCACTGGGA GCTTACTGCG GAGGGCGAGG AGATTGCCCG GGAGGGCAGC 240
CATGAGGCCC GTGTGTTTCG AAGCATTCCC CCAGAGGGCC TGGCCCAGAG CGAGCTTATG 300
CGACTGCCCA GTGGCAAAGT GGGCTTCAGC AAGGCCATGT CCAACAAGTG GATTCGGGTG 360
GACAAGAGTG CGGCTGACGG GCCCCGGGTG TTCCGAGTGG TGGACAGCAT GGAGGATGAG 420
GTGCAGCGGC GGCTCCAGCT GGTCCGGGGG GGACAGGCTG AGAAGCTGGG GGAGAAGGAG 480
AGGAGCGAGC TGAGGAAGAG GAAGCTGTTG GCTGAAGTGA CTCTGAAGAC CTACTGGGTG 540
AGCAAAGGCA GTGCCTTTAG TACCAGCATC TCCAAGCAAG AGACAGAGCT GAGCCCAGAG 600
ATGATCTCCA GTGGCTCTTG GCGGGACCGG CCCTTCAAGC CCTACAACTT CTTGGCCCAC 660
GGTGTCCTCC CCGACAGCGG CCACCTTCAC CCGCTGCTCA AGGTCCGCTC CCAGTTCCGA 720
CAGATCTTCC TGGAGATGGG GTTCACCGAG ATGCCGACTG ATAACTTCAT TGAGAGCTCC 780
TTCTGGAACT TTGACGCCCT CTTCCAGCCC CAGCAGCACC CAGCCCGTGA CCAGCACGAC 840
ACCTTCTTCC TTCGAGATCC AGCGGAGGCC CTGCAGCTCC CAATGGACTA TGTCCAGCGG 900
GTCAAGCGGA CCCACTCTCA GGGCGGCTAC GGCTCACAGG GGTACAAGTA TAACTGGAAG 960
CTGGACGAGG CCCGGAAAAA CCTACTGCGA ACCCACACCA CATCAGCCAG CGCCCGTGCG 1020
CTCTACCGCC TTGCCCAGAA GAAGCCCTTC ACTCCGGTCA AGTACTTCTC CATCGACCGC 1080
GTATTCCGGA ATGAGACCCT GGACGCCACG CACCTGGCTG AGTTCCACCA GATCGAGGGC 1140
GTGGTGGCGG ATCATGGTCT CACCTTGGGC CACCTCATGG GCGTTCTGCG GGAGTTCTTC 1200
ACCAAGCTGG GTATCACGCA ACTCCGCTTC AAGCCAGCCT ACAACCCATA CACAGAGCCC 1260
AGCATGGAGG TGTTCAGCTA CCACCAAGGC CTGAAGAAGT GGGTGGAGGT CGGAAACTCG 1320
GGGGTCTTCC GTCCAGAGAT GCTGCTGCCC ATGGGGCTTC CCGAGAACGT GTCGGTCATT 1380
GCCTGGGGCC TCTCCCTGGA GCGCCCAACG ATGATCAAAT ATGGCATCAA CAATATCCGG 1440
GAGCTGGTGG GCCACAAGGT GAACCTGCAG ATGGTGTATG ACAGTCCCCT GTGCCGCCTG 1500
GATGCCGAGC CGAGGCCCCC TCCCACACAG GAGGCTGCGT GACATGGGCC ACTCTAGGAC 1560
AGGTCATCCT CCCCGAGTCC CTGCTGCTGC GCTCCTTTGC ATCCCTGGCC AGTGACCTTG 1620
TATTTATGAG GCCTCTGTGA GGCCAGCCCC CACCTTCCTC TTTCCCACCT GTCCCAGGAC 1680
CAGAATCCCA GGGACAGAGG ACTGGGTAGC AGGTTCCTTC TGTTGTCCTG TGTGGTGTGT 1740
CTACTGTGAG GGTGGGCCCT GAGGAGACCT GTGGGCCACC TATTGTCTAA TAAAGTGGGC 1800
AGTTGCCCCC A 1811

Claims (7)

1. FARSA在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用，其氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。
2. 一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物，其活性成分为FARSA蛋白表达量的调节物质，其中FARSA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。
3.根据权利要求2所述的药物，其中所述调节物质包括抑制或激活FARSA蛋白活性的物质、降低或增加FARSA蛋白含量的物质、沉默或敲出或过表达FARSA基因的物质或者抑制或激活FARSA基因表达的物质。
4. 一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物组合物，其含有氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示的FARSA蛋白。
5. 一种能够治疗非霍奇金淋巴瘤的药物组合物，其含有FARSA蛋白表达量的调节物质，其中蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述调节物质包括抑制或激活FARSA蛋白活性的物质、降低或增加FARSA蛋白含量的物质、沉默或敲出或过表达FARSA基因的物质或者抑制或激活FARSA基因表达的物质。
7.FARSA表达调节剂在制备治疗非霍奇金淋巴瘤药物中的应用，其中FARSA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示。
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