CN114208666A - 利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法 - Google Patents

利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法。包括授粉和胚胎挽救步骤。本发明以因幼胚败育而无法获得杂交种的文心兰材料组合为亲本，经杂交授粉后，在败育前将幼胚取出进行幼胚挽救培养，使幼胚发育成为幼苗，最终获得文心兰及近缘属的杂交后代。克服了文心兰及其近缘属间杂交因幼胚败育而无法获得杂种F1代的问题，为其育种工作的开展提供了有利的技术保障，对文心兰的种质资源创新具有积极的意义。

Description

利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法
技术领域
本发明涉及育种技术领域，更具体的说是涉及利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法。
背景技术
文心兰(Oncidium)属兰科文心兰属的多年生花卉植物，其花型独特，颜色靓丽，被插花界誉为切花“五美人”之一，极具观赏经济价值，深受国内外市场青睐，成为洋兰类新宠之一。然而文心兰原产于南美洲如墨西哥、巴西和玻利维亚等热带区域，市场上品种主要依赖进口，制约了国内文心兰产业发展。
文心兰背景复杂，不同文心兰材料间杂交或自交大部分存在不亲和性，杂交或自交成功率低，而且经人工杂交授粉后，部分组合果荚在生长一段时间后便出现早衰现象，胚胎发生败育，从而不能获得杂交后代，这极大地阻碍了文心兰种质创新及杂交育种工作。
为了提高文心兰种质创新的效率，推进拥有自主知识产权的文心兰品种的育种进程，急需一套文心兰杂种幼胚挽救技术以获得新的文心兰杂交种质资源，但在此之前还没有关于其杂交幼胚挽救及杂交种质获得方法。
因此，如何提供利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法。有效地促进文心兰及其近缘属杂交幼胚的发育，在离体组织培养条件下能发育成幼苗，提高文心兰种质创新效率，推进拥有自主知识产权的文心兰新品种选育进程。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)授粉：选择因幼胚败育而无法获得杂交种的文心兰、文心兰近缘属材料为亲本，进行人工辅助杂交授粉；
(2)胚胎挽救：
21)取授粉后第60～90d果荚；
22)果荚消毒；
23)幼胚接种：在无菌条件下，将果荚内未成熟的幼胚取出，并接种于幼胚挽救培养基上；
24)幼胚萌发培养：将步骤23)接种后的幼胚进行离体培养；
25)幼胚分化培养：将步骤24)获得的萌发的幼胚转接至未使用的幼胚挽救培养基上，进行分化培养，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
进一步的，步骤23)具体使用手术刀切开果荚，用镊子取出果荚内未成熟的幼胚；
步骤24)置于无菌人工气候培养室中进行离体培养；
步骤25)置于无菌人工气候培养室中进行分化培养。
优选的：步骤(1)中幼胚败育的标准：受精后障碍导致幼胚发育受阻无法自然结实。
优选的：步骤(1)中人工辅助杂交授粉，具体方法：选择当天或即将开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，并去除没有授粉的花朵。
优选的：步骤21)中果荚的采收时期：发生早衰之前，果荚顶部还未出现黄化时。
优选的：步骤22)中消毒方法：将采收的果荚置于巴士消毒液和水1：1配置的混合溶液中，于37℃、190rpm摇床处理20～30min，然后用无菌水清洗2～3次，备用。
进一步的：备用前用灭菌的吸水纸吸干无菌水。
优选的：步骤(2)中幼胚挽救培养基，配方如下：KNO3 1800～2000mg/L、NH4NO31500～1800mg/L、KH2PO4 150～200mg/L、MgSO4·7H2O 350～400mg/L、CaCl2·2H2O 420～460mg/L、MnSO4·H2O 14～20mg/L、ZnSO4·7H2O 6～10mg/L、H3BO3 5～10mg/L、KI 0.5～1mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.1～0.5mg/L、CoCl2·6H2O 0.01～0.05mg/L、CuSO4·5H2O 0.01～0.05mg/L、FeSO4·7H2O 16～35mg/L、Na2EDTA 30～40mg/L、盐酸硫胺素0.05～0.2mg/L、烟酸0.1～0.9mg/L、盐酸吡哆醇0.1～0.8mg/L、甘氨酸0.5～5mg/L、肌醇60～120mg/L、蔗糖30～45g/L、琼脂4～10g/L、活性炭0.2～0.6g/L、椰子汁80～150ml/L、6-苄氨基嘌呤0.4～0.6mg/L、1-萘乙酸0.1～0.3mg/L。
进一步的，调节培养基pH至5.6～6.5。
优选的：步骤24)中的幼胚萌发条件：温度20～25℃、光照强度800～1000lux、光周期8～16h/d。
优选的：步骤25)中的分化培养条件：温度20～25℃、光照强度1200～1800lux、光周期8～16h/d。
优选的：步骤25)还包括将剩下的未萌发的幼胚重复步骤24)～25)，直至不再有新的幼胚萌发。
本发明还提供了上述方法获得的文心兰及近缘属间杂交后代在育种中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，本发明以因幼胚败育而无法获得杂交种的文心兰或近缘属材料为亲本进行杂交授粉，在幼胚发育早期(败育前)将其取出进行人工离体挽救培养，使杂交幼胚得以发育，从而获得文心兰及其近缘属杂交种后代。该方法有效地实现发育早期的杂种胚的挽救，不同的组合萌发率在20～60％不等，幼胚的分化率可达70％以上，为其种质创新及育种工作的开展提供了有利的技术保障。可操作性强，简单实用，胚抢救的效果显著，可以广泛应用于文心兰及其近缘属杂交F1代幼胚的挽救，对文心兰的种质资源创新具有积极意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的幼胚挽救离体诱导萌发图，其中，A-授粉后15d的果荚，B-授粉后30d果荚，C-授粉后60d果荚，D-授粉后90d果荚。
图2附图为本发明提供的‘老虎尾’ב老虎尾’杂种F1幼胚萌发的分化培养图。
图3附图为本发明提供的‘老虎尾’ב老虎尾’杂种F1幼苗图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法。
实施例中，材料Oncidium Jairak Fragance'Pra-Lak'、Oncidium JairakFragrance'Mon-Tho'、月下美人’(Howeara Chian-Tzy lovely'CT-Moon Beauty'为申请人单位保存的材料，仅用于验证技术效果。并非对具体来源与品种进行限定。未提及的实验方法为常规实验方法，在此不再赘述。
实施例中，文心兰及其近缘属具体为：实施例1、2、3、4‘老虎尾’(Gomesa MoonShadow'Tiger Tai')为宫美兰属；实施例6中‘月下美人’(Howeara Chian-Tzy lovely'CT-Moon Beauty')为光唇兰属(Leochilus)×文心兰属(Oncidium)×凹萼兰属(Rodriguezia)三属人工杂交种。
实施例1
一种利用幼胚挽救技术获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)亲本材料：母本选择‘老虎尾’(Gomesa Moon Shadow'Tiger Tai')，父本选择‘老虎尾’(Gomesa Moon Shadow'Tiger Tai')；
(2)亲本自交：选择当天开放或即将开放的花朵，去掉花苞和非当天开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，挂牌并记录；
(3)果荚采收和消毒：分别选择杂交授粉后80～90d的果荚，在超净工作台中将果荚置于巴氏消毒液与无菌水1：1比例配置的溶液中，并在37℃110rpm摇床中消毒20～30分钟，在超净工作台中用无菌水清洗2～3次，再用无菌的滤纸吸干表面水分；
(4)幼胚获取：在无菌的培养皿上用手术刀切开果荚，用镊子轻轻将未成熟的幼胚剥离；
(5)幼胚萌发培养：在无菌条件下，将步骤(4)中得到的幼胚接种到幼胚挽救培养基中，在温度20℃、光照强度800lux、光周期8h/d的无菌人工气候培养室中培养120d，诱导幼胚萌发；
胚挽救培养基为：KNO3 1800mg/L、NH4NO3 1500mg/L、KH2PO4 150mg/L、MgSO4·7H2O350mg/L、CaCl2·2H2O 420mg/L、MnSO4·H2O 14mg/L、ZnSO4·7H2O 6mg/L、H3BO3 5mg/L、KI0.5mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、FeSO4·7H2O 27.0mg/L、Na2EDTA 36mg/L、盐酸硫胺素0.09mg/L、烟酸0.45mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、蔗糖30g/L、琼脂4g/L、活性炭0.2g/L、椰子汁80ml/L、6-苄氨基嘌呤0.4mg/L、1-萘乙酸0.1mg/L，pH5.6；
(6)幼胚分化培养：在无菌条件下，将萌发的幼胚挑出，转接到未使用的幼胚挽救培养基上，置于无菌人工气候培养室中进行分化培养，培养条件为温度20℃、光照强度1200lux、光周期8h/d，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
实施例2
一种利用幼胚挽救技术获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)亲本材料：母本选择Oncidium Jairak Fragance'Pra-Lak'，父本选择‘老虎尾’(Gomesa Moon Shadow'Tiger Tai')；
(2)亲本自交：选择当天开放或即将开放的花朵，去掉花苞和非当天开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，挂牌并记录；
(3)果荚采收和消毒：分别选择杂交授粉后80～90d的果荚，在超净工作台中将果荚置于巴氏消毒液与无菌水1：1比例配置的溶液中，并在37℃110rpm摇床中消毒20～30分钟，在超净工作台中用无菌水清洗2～3次，再用无菌的滤纸吸干表面水分；
(4)幼胚获取：在无菌的培养皿上用手术刀切开果荚，用镊子轻轻将未成熟的幼胚剥离；
(5)幼胚萌发培养：在无菌条件下，将步骤(4)中得到的幼胚接种到幼胚挽救培养基中，在温度21℃、光照强度900lux、光周期9h/d的无菌人工气候培养室中培养250d，诱导幼胚萌发；
胚挽救培养基为：KNO3 1850mg/L、NH4NO3 1600mg/L、KH2PO4 160mg/L、MgSO4·7H2O360mg/L、CaCl2·2H2O 430mg/L、MnSO4·H2O 15mg/L、ZnSO4·7H2O 7mg/L、H3BO3 6.2mg/L、KI0.6mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.2mg/L、CoCl2·6H2O 0.02mg/L、CuSO4·5H2O 0.02mg/L、FeSO4·7H2O 18mg/L、Na2EDTA 32mg/L、盐酸硫胺素0.08mg/L、烟酸0.2mg/L、盐酸吡哆醇0.2mg/L、甘氨酸1mg/L、肌醇70mg/L、蔗糖33g/L、琼脂5g/L、活性炭0.3g/L、椰子汁90ml/L、6-苄氨基嘌呤0.45mg/L、1-萘乙酸0.1mg/L，pH6.0；
(6)幼胚分化培养：在无菌条件下，将萌发的幼胚挑出，转接到未使用的幼胚挽救培养基上，置于无菌人工气候培养室中进行分化培养，培养条件为温度21℃、光照强度1300lux、光周期9h/d，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
实施例3
一种利用幼胚挽救技术获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)授粉：母本选择Oncidium Jairak Fragrance'Mon-Tho'，父本选择‘老虎尾’(Gomesa Moon Shadow'Tiger Tai')；
(2)亲本自交：选择当天开放或即将开放的花朵，去掉花苞和非当天开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，挂牌并记录；
(3)果荚采收和消毒：取授粉后80～90d的果荚，果荚顶部仍为青色；在超净工作台中将果荚置于巴氏消毒液与无菌水1：1比例配置的溶液中，并在37℃190rpm摇床中消毒25分钟，然后在超净工作台中用无菌水清洗2～3次，再用无菌的滤纸吸干表面水分；
(4)幼胚获取：在无菌条件下，用手术刀切开果荚，用镊子将果荚内未成熟的幼胚取出，
(5)幼胚萌发培养：在无菌条件下，将步骤(4)中得到的幼胚接种到幼胚挽救培养基中，在温度23℃、光照强度850lux、光周期12h/d的无菌人工气候培养室中培养200d，诱导幼胚萌发；
胚挽救培养基为：KNO3 1900mg/L、NH4NO3 1700mg/L、KH2PO4 170mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MnSO4·H2O 17mg/L、ZnSO4·7H2O 8mg/L、H3BO3 8mg/L、KI0.8mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.4mg/L、CoCl2·6H2O 0.04mg/L、CuSO4·5H2O 0.03mg/L、FeSO4·7H2O 25mg/L、Na2EDTA 35mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2.5mg/L、肌醇80mg/L、蔗糖40g/L、琼脂35g/L、活性炭0.4g/L、椰子汁110ml/L、6-苄氨基嘌呤0.55mg/L、1-萘乙酸0.25mg/L，pH6.1；
(6)幼胚分化培养：在无菌条件下，将萌发的幼胚挑出，转接到未使用的幼胚挽救培养基上，置于无菌人工气候培养室中进行分化培养，培养条件为温度24℃、光照强度1700lux、光周期13h/d，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
实施例4
一种利用幼胚挽救技术获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)亲本材料：母本选择扇形文心兰(Erycina pusilla)，父本选择‘老虎尾’(Gomesa Moon Shadow'Tiger Tai')；
(2)亲本自交：选择当天开放或即将开放的花朵，去掉花苞和非当天开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，挂牌并记录；
(3)果荚采收和消毒：分别选择杂交授粉后60～70d的果荚，在超净工作台中将果荚置于巴氏消毒液与无菌水1：1比例配置的溶液中，并在37℃110rpm摇床中消毒20～30分钟，在超净工作台中用无菌水清洗2～3次，再用无菌的滤纸吸干表面水分；
(4)幼胚获取：在无菌的培养皿上用手术刀切开果荚，用镊子轻轻将未成熟的幼胚剥离；
(5)幼胚挽救离体诱导培养：在无菌条件下，将步骤(4)中得到的幼胚接种到幼胚挽救培养基中，在温度20～25℃、光照强度950lux、光周期15h/d的无菌人工气候培养室中培养110d，诱导幼胚萌发；
幼胚挽救培养基为：KNO3 1900mg/L、NH4NO3 1750mg/L、KH2PO4 180mg/L、MgSO4·7H2O 390mg/L、CaCl2·2H2O 450mg/L、MnSO4·H2O 17mg/L、ZnSO4·7H2O 6～10mg/L、H3BO3 5～10mg/L、KI 0.5～1mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.4mg/L、CoCl2·6H2O 0.04mg/L、CuSO4·5H2O0.04mg/L、FeSO4·7H2O 30mg/L、Na2EDTA 36mg/L、盐酸硫胺素0.15mg/L、烟酸0.6mg/L、盐酸吡哆醇0.7mg/L、甘氨酸3mg/L、肌醇100mg/L、蔗糖40g/L、琼脂8g/L、活性炭0.5g/L、椰子汁110ml/L、6-苄氨基嘌呤0.5mg/L、1-萘乙酸0.25mg/L，pH6.0；
(6)幼胚分化培养：在无菌条件下，将萌发的幼胚挑出，转接到未使用的幼胚挽救培养基上，置于无菌人工气候培养室中进行分化培养，培养条件为温度24℃、光照强度1600lux、光周期15h/d，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
实施例5
一种利用幼胚挽救技术获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)亲本材料：母本选择‘小樱桃’(Oncidium Kutoo'Little Cherry')，父本选择香水文心兰(Oncidium Sharry Baby'Sweet Fragrance')；
(2)亲本自交：选择当天开放或即将开放的花朵，去掉花苞和非当天开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，挂牌并记录；
(3)果荚采收和消毒：分别选择杂交授粉后60～80d的果荚，在超净工作台中将果荚置于巴氏消毒液与无菌水1：1比例配置的溶液中，并在37℃110rpm摇床中消毒20～30分钟，在超净工作台中用无菌水清洗2～3次，再用无菌的滤纸吸干表面水分；
(4)幼胚获取：在无菌的培养皿上用手术刀切开果荚，用镊子轻轻将未成熟的幼胚剥离；
(5)幼胚挽救离体诱导培养：在无菌条件下，将步骤(4)中得到的幼胚接种到幼胚挽救培养基中，在温度25℃、光照强度1000lux、光周期16h/d的无菌人工气候培养室中培养150d，诱导幼胚萌发；
胚挽救培养基为：KNO3 2000mg/L、NH4NO3 1800mg/L、KH2PO4 200mg/L、MgSO4·7H2O400mg/L、CaCl2·2H2O 460mg/L、MnSO4·H2O 20mg/L、ZnSO4·7H2O 10mg/L、H3BO3 10mg/L、KI1mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.5mg/L、CoCl2·6H2O 0.05mg/L、CuSO4·5H2O 0.05mg/L、FeSO4·7H2O 35mg/L、Na2EDTA 40mg/L、盐酸硫胺素0.2mg/L、烟酸0.9mg/L、盐酸吡哆醇0.8mg/L、甘氨酸5mg/L、肌醇120mg/L、蔗糖45g/L、琼脂10g/L、活性炭0.6g/L、椰子汁150ml/L、6-苄氨基嘌呤0.6mg/L、1-萘乙酸0.3mg/L，pH6.5；
(6)幼胚分化培养：在无菌条件下，将萌发的幼胚挑出，转接到未使用的幼胚挽救培养基上，置于无菌人工气候培养室中进行分化培养，培养条件为温度25℃、光照强度1800lux、光周期16h/d，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
实施例6
一种利用幼胚挽救技术获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，包括如下步骤：
(1)亲本材料：母本选择‘月下美人’(Howeara Chian-Tzy lovely'CT-MoonBeauty')，父本选择‘白梦香’(Oncidium Twinkle'White Fantasy')；
(2)亲本自交：选择当天开放或即将开放的花朵，去掉花苞和非当天开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，挂牌并记录；
(3)果荚采收和消毒：分别选择杂交授粉后80～90d的果荚，在超净工作台中将果荚置于巴氏消毒液与无菌水1：1比例配置的溶液中，并在37℃110rpm摇床中消毒20～30分钟，在超净工作台中用无菌水清洗2～3次，再用无菌的滤纸吸干表面水分；
(4)幼胚获取：在无菌的培养皿上用手术刀切开果荚，用镊子轻轻将未成熟的幼胚剥离；
(5)幼胚挽救离体诱导培养：在无菌条件下，将步骤(4)中得到的幼胚接种到幼胚挽救培养基中，在温度25℃、光照强度900lux、光周期10h/d的无菌人工气候培养室中培养140d，诱导幼胚萌发；
胚挽救培养基为：KNO3 2000mg/L、NH4NO3 1500mg/L、KH2PO4 200mg/L、MgSO4·7H2O400mg/L、CaCl2·2H2O 460mg/L、MnSO4·H2O 18mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 9mg/L、KI0.5mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.5mg/L、CoCl2·6H2O 0.05mg/L、CuSO4·5H2O 0.01mg/L、FeSO4·7H2O 35mg/L、Na2EDTA 35mg/L、盐酸硫胺素0.2mg/L、烟酸0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.1mg/L、甘氨酸5mg/L、肌醇100mg/L、蔗糖35g/L、琼脂5g/L、活性炭0.4g/L、椰子汁130ml/L、6-苄氨基嘌呤0.4mg/L、1-萘乙酸0.3mg/L，pH5.6；
(6)幼胚分化培养：在无菌条件下，将萌发的幼胚挑出，转接到未使用的幼胚挽救培养基上，置于无菌人工气候培养室中进行分化培养，培养条件为温度24℃、光照强度1600lux、光周期14h/d，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
对比实验
分组实验如下表1，实验中，文心兰材料‘老虎尾’ב老虎尾’(参见图1～3)和Oncidium Jairak Fragance'Pra-Lak'ב老虎尾’杂交后代F1幼胚生长时间在90d时，幼胚挽救的成功率最高，实验结果表明表明幼胚生长时间越长，越有利于提高幼胚挽救的成功率，而不同材料间的组合胚挽救成功率存在差异，萌发率在20～60％不等，幼胚的分化率可达70％以上，这可能与材料本身特性有关。
表1不同时期的果荚萌发率和分化率情况
Figure BDA0003372892530000111
注：萌发率＝萌发的果荚数量/播种果荚数×100％，分化率＝可分化出幼苗的幼胚/转接萌发幼胚的数量×100％。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)授粉：选择因幼胚败育而无法获得杂交种的文心兰、文心兰近缘属材料为亲本，进行人工辅助杂交授粉；
(2)胚胎挽救：
21)取授粉后第60～90d果荚；
22)果荚消毒；
23)幼胚接种：在无菌条件下，将果荚内未成熟的幼胚取出，并接种于幼胚挽救培养基上；
24)幼胚萌发培养：将步骤23)接种后的幼胚进行离体培养；
25)幼胚分化培养：将步骤24)获得的萌发的幼胚转接至未使用的幼胚挽救培养基上，进行分化培养，直至幼胚发育成杂种F1幼苗。
2.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(1)中所述幼胚败育的标准：受精后障碍导致幼胚发育受阻无法自然结实。
3.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(1)中所述人工辅助杂交授粉，具体方法：选择当天或即将开放的花朵，用父本新鲜的花粉团授粉，并去除没有授粉的花朵。
4.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤21)中所述果荚的采收时期：发生早衰之前，果荚顶部还未出现黄化时。
5.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤22)中所述消毒方法：将采收的果荚置于巴士消毒液和水1：1配置的混合溶液中，于37℃、190rpm摇床处理20～30min，然后用无菌水清洗2～3次，备用。
6.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤(2)中所述幼胚挽救培养基，配方如下：KNO3 1800～2000mg/L、NH4NO3 1500～1800mg/L、KH2PO4 150～200mg/L、MgSO4·7H2O 350～400mg/L、CaCl2·2H2O420～460mg/L、MnSO4·H2O 14～20mg/L、ZnSO4·7H2O 6～10mg/L、H3BO35～10mg/L、KI 0.5～1mg/L、Na2MoO2·2H2O 0.1～0.5mg/L、CoCl2·6H2O 0.01～0.05mg/L、CuSO4·5H2O 0.01～0.05mg/L、FeSO4·7H2O 16～35mg/L、Na2EDTA 30～40mg/L、盐酸硫胺素0.05～0.2mg/L、烟酸0.1～0.9mg/L、盐酸吡哆醇0.1～0.8mg/L、甘氨酸0.5～5mg/L、肌醇60～120mg/L、蔗糖30～45g/L、琼脂4～10g/L、活性炭0.2～0.6g/L、椰子汁80～150ml/L、6-苄氨基嘌呤0.4～0.6mg/L、1-萘乙酸0.1～0.3mg/L。
7.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤24)中所述的幼胚萌发条件：温度20～25℃、光照强度800～1000lux、光周期8～16h/d。
8.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤25)中所述的分化培养条件：温度20～25℃、光照强度1200～1800lux、光周期8～16h/d。
9.根据权利要求1所述的一种利用幼胚离体挽救获得文心兰及其近缘属间杂交后代的方法，其特征在于，步骤25)还包括将剩下的未萌发的幼胚重复步骤24)～25)，直至不再有新的幼胚萌发。
10.权利要求1～9任一所述方法获得的文心兰及近缘属间杂交后代在育种中的应用。
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