CN114174315A

CN114174315A - 一种具有生发促进活性的肽及其用途

Info

Publication number: CN114174315A
Application number: CN201980098805.5A
Authority: CN
Inventors: 郑镕池; 金银美; 李应智; 金敏雄
Original assignee: Caregen Co Ltd
Current assignee: Caregen Co Ltd
Priority date: 2019-08-20
Filing date: 2019-10-10
Publication date: 2022-03-11
Anticipated expiration: 2039-10-10
Also published as: WO2021033830A1; CN114174315B; JP7323706B2; JP2022545242A; EP4019532A4; EP4019532A1; KR20210022406A; US20220259263A1; KR102265431B1

Abstract

本申请涉及一种具有生发促进活性的肽及其用途，并且提供一种由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽、一种用于改善脱发或促进生发的、包括所述肽的化妆品组合物以及一种用于预防或治疗脱发的、包括所述肽的药物组合物。

Description

一种具有生发促进活性的肽及其用途

技术领域

本申请涉及一种具有生发促进活性的肽及其用途。

背景技术

随着老龄化社会的发展，担心脱发的人口越来越多，并且过去这是一种中年男性的主要问题，但是最近年轻人和女性对预防脱发和养发也越来越感兴趣。同时，脱发被认为是一系列衰老现象，但是最近有研究表明，脱发是由于各种原因造成的，例如遗传因素、压力、饮食习惯的西化、营养失衡以及社交活动的变化等。

目前，米诺地尔(6-氨基-1,2-二氢-1-羟基-2-亚氨基-4-苯氧基嘧啶)(美国专利第3,382,247号)和非那斯特莱(finasteride)(美国专利第5,215,894号)被美国FDA批准为具有生发效果的药物。米诺地尔在1970年代初期被开发为用于治疗高血压的血管扩张剂，但是由于副作用被报道为多毛症，因此其被用作生发促进剂，并且呈现出毛孔变粗、头发直径变大，从而头发粗细变大的效果。此外，非那斯特莱被开发为良性前列腺增生症的治疗剂，但是目前其被用作脱发治疗剂，并且呈现出减缓脱发的进展和生发效果。

但是，在米诺地尔的情况下，其被报告为有体重增加、浮肿、皮炎、心率增加等副作用，在非那斯特莱的情况下，其需要连续使用，并且有男性性功能障碍、孕妇生下畸形儿的副作用，因此仍然需要开发一种无副作用的脱发治疗剂。

在这种技术背景下，通过激素控制、代谢控制等机制改善脱发的各种研究正在进行中(韩国专利公报第2002-0005332号)，但仍未完成。

发明内容

技术问题

一方面是提供一种由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽。

另一方面是提供一种用于改善脱发或促进生发的、包括所述肽的化妆品组合物。

再一方面是提供一种用于预防或治疗脱发的、包括所述肽的药物组合物。

本申请的另一目的和优点将根据所附的权利要求书、附图和以下详细说明变得更加明确。由于本申请的技术领域或类似技术领域的技术人员可以充分认识和推断本说明书中未描述的内容，因此将省略其说明。

技术方案

本申请中公开的每个描述和实施方式也可以适用于每个其他描述和实施方式。即，本申请中公开的各种要素的所有组合都属于本申请的范围。此外，不能看出本申请的范围限于以下描述的详细描述。

一方面提供一种由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽。

在本说明书中所用的术语“肽”可以是指通过肽的结合将氨基酸残基相互结合而形成的线型分子。所述肽可以根据本领域公知的化学合成方法，尤其是固相合成技术(solid-phase synthesis techniques；Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85:2149-54(1963)；Stewart,et al.,Solid Phase Peptide Synthesis,2nd.ed.,Pierce Chem.Co.:Rockford,111(1984))或液相合成技术(US授权专利第5,516,891号)制备。作为努力开发具有生物学上有效的活性的肽的结果，本发明人表明了由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽。这里，所述生物学上有效的活性可以显示选自诸如(a)促进毛囊细胞的活性；(b)促进毛囊细胞的增殖；(c)促进毛囊细胞的生长；(d)抑制毛囊细胞的凋亡；以及(e)抑制DKK-1(Dickkopf-related protein 1)的表达之类的特性中的任何一种或多种。因此，所述肽可以用于改善脱发或促进生发的用途和预防或治疗脱发的用途。

所述肽可以是肽的N-或C-端结合有保护基，以获得化学稳定性、增强的药理特性(半衰期、吸收性、效价、效能等)、改变的特异性(例如，广泛的生物学上的活性光谱)以及降低的抗原性。在一具体例中，所述肽的N-端可以与选自由乙酰基(acetyl group)、芴基甲氧基羰基(fluoreonylmethoxycarbonyl group)、甲酰基(formyl group)、棕榈酰基(palmitoyl group)、肉豆蔻基(myristyl group)、硬脂基(stearyl group)、丁氧基羰基(butoxycarbonyl group，Boc)、烯丙氧基羰基(allyloxycarbonyl group，Alloc)以及聚乙二醇(polyethylene glycol；PEG)组成的组中的任何一种保护基结合；和/或所述肽的C-端可以与选自由氨基(amino group,-NH₂)、叔烷基(tertiary alkyl group)以及叠氮化合物(azide,-NHNH₂)组成的组中的任何一种保护基结合。此外，所述肽可选地进一步包括靶向序列、标签(tag)、标记的残基、为特定目的制备的氨基酸序列以增加半衰期或肽的稳定性。

在本说明书中所用的术语“稳定性”不仅可以是指保护所述肽免受体内蛋白裂解酶攻击的体内稳定性，还可以是指储存稳定性(例如，常温储存稳定性)。

另一方面提供一种化妆品组合物，其包括作为活性成分的、包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽；药剂学组合物，其包括作为活性成分的、包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽；以及包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽的用途，其用于制备化妆品或药剂学组合物，或用作化妆品或药剂学组合物。

另一方面提供一种用于防止脱发或促进生发的、包括所述肽的化妆品组合物。

在所述肽的描述中所提及的术语或组成要素中，与已经提及的相同的术语或组成要素与上述相同。

在本说明书种所用的术语“改善”可以是指至少减轻与状态的缓解或治疗相关的参数(例如，症状的严重程度)的所有行为。

在本说明书中所用的“改善脱发”可以广泛是指用于治疗、减轻、缓解脱发状态的过程或其效果等，并且可以是指抑制脱发进展的所有作用，例如再生毛囊细胞、恢复毛囊细胞的活性、抑制毛囊细胞的凋亡以及抑制诸如DKK-1之类的脱发诱发因子的表达等。

在本说明书中所用的“促进生发”可以是指增加毛囊中生长的毛发的所有行为，并且可以是指增加毛发总量的所有作用，例如促进毛囊细胞的增殖、毛囊细胞的活性或毛囊细胞的生长的效果等。

尽管传统的功能性肽具有有效的生物学上的活性，但是由于肽本身的大小，其不能有效地导入到靶向组织或细胞，或由于其半衰期较短，因此具有在短时间内从体内消失的缺点。另一方面，根据一实施例的化妆品组合物包括由10个或更少个氨基酸组成的肽作为活性成分，因此，活性成分的皮肤渗透率非常优异，例如，当局部地涂覆在皮肤上时，可以有效地防止脱发并促进生发。

根据一实施例，所述肽可以促进毛乳头细胞、毛母细胞或外根鞘细胞的活性。此外，所述肽还呈现出促进毛乳头细胞的增殖机制的效果、促进毛乳头细胞的生长的效果、抑制毛乳头细胞的凋亡的效果以及抑制脱发相关因子的表达的效果。因此，所述肽可以用作用于改善脱发或促进生发的化妆品组合物的活性成分。

所述化妆品组合物可以包括所述肽的化妆品学有效量(cosmetically effectiveamount)；和/或在化妆品上接受的载体，但不限于此。

在本说明书中所用的术语“化妆品学有效量”可以是指足以实现所述化妆品组合物的改善脱发或促进生发作用的量。

所述肽和在化妆品上接受的载体的重量比可以是例如500:1至1:500，作为一例，所述重量比可以是450:1至1:450、400:1至1:400、350:1至1:350、300:1至1:300、250:1至1:250、200:1至1:200、150:1至1:150、100:1至1:100、80:1至1:80、60:1至1:60、40:1至1:40、20:1至1:20、10:1至1:10、8:1至1:8、6:1至1:6、4:1至1:4或2:1至1:2，但不限于此。

所述化妆品组合物可以制备成本发明所属领域中通常制备的任何剂型，例如，可以剂型化为溶液、悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、乳霜、乳液、粉、肥皂、含有表面活性剂的洁面剂、油、粉状粉底、乳浊液粉底、蜡粉底和喷雾剂等，但不限于此。例如，可以制备成柔肤化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、洁面霜、洗面奶、卸妆水、面膜、喷雾剂或粉的剂型。

当所述化妆品组合物的剂型是糊剂、乳霜或凝胶时，可以利用动物性油、植物性油、蜡、石蜡、淀粉、胺黄树胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等作为载体成分。

当所述化妆品组合物的剂型是粉或喷雾剂时，可以利用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉作为载体成分，例如，当其是喷雾剂时，可以进一步包括诸如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚之类的推进剂。

当所述化妆品组合物的剂型是溶液或乳浊液时，利用溶剂、增溶剂或乳化剂作为载体成分，例如可以包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或山梨糖醇的脂肪酸酯。

当所述化妆品组合物的剂型是悬浮液时，可以利用诸如水、乙醇或丙二醇之类的液相稀释剂、诸如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯和聚氧乙烯脱水山梨醇酯之类的悬浮剂、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或胺黄树胶等作为载体成分。

当所述化妆品组合物的剂型是含有表面-活性剂的洁面剂时，可以利用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物性油、养发脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等作为载体成分。

包括在所述化妆品组合物中的成分除了作为活性成分的肽和载体成分之外，包括通常用于化妆品组合物的成分，例如，可以包括诸如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、颜料和香料之类的通常的助剂。

再一方面提供一种改善脱发的方法或促进生发的方法，其包括将包括由SEQ IDNO:1的氨基酸序列组成的肽作为活性成分的化妆品组合物涂覆在个体的皮肤上。

在所述化妆品组合物的描述中所提及的术语或组成要素中，与已经提及的相同的术语或组成要素与上述相同。

在本说明书中所用的术语“适用”、“施用”和“涂覆”可以互换使用，并且可以是指将根据一实施例的组合物至少部分局部化在期望的部位上，或通过施用途径将根据一实施例的组合物布置在个体中。

再一方面提供一种用于预防或治疗脱发的药物组合物，其包括由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽作为活性成分。

在所述肽的描述中所提及的术语或要素中，与已经提及的相同的术语与上述相同。

在本说明书中所用的“预防”是指通过施用所述组合物抑制或延迟疾病的发生的所有行为。

在本说明书中所用的“治疗”是指向患有疾病或处于发生疾病的风险中的个体提供包括以下效果的任何形式的治疗，例如改善所述个体的状态(例如，一个或多个症状)、延迟疾病的进展、延迟症状的发生或减缓症状的进展等。因此，所述“治疗”和“预防”并不意味着治愈或完全消除症状。

所述”个体“是指需要治疗疾病的目标，更具体地，是指哺乳动物，例如人类或非人类灵长类、小鼠(mouse)、狗、猫、马和牛等。

所述根据药剂学组合物的预防或治疗目标疾病“脱发”是指在应该正常存在的毛发的区域没有毛发的状态，具体地，可以是指头皮的成毛(粗黑的毛发)脱落。脱发的原因不受限制，但可能由遗传原因、激素失衡、精神压力、暴露于空气污染、摄取加工食品和环境影响等引起。例如，脱发包括遗传性雄激素性脱发(秃发)、圆形脱发、真菌感染引起的头癣、休止期脱发、拔毛癖、生发障碍疾病等，并且形成伤痕的瘢痕性脱发可以是指狼疮引起的脱发、秃发性毛囊炎、毛孔性扁平苔藓、烧伤和外伤引起的脱发。

根据一实施例，所述肽呈现出促进毛囊细胞的增殖、活性或生长的效果、抑制毛囊细胞的凋亡的效果和抑制脱发相关因子的表达的效果。因此，所述肽可以用作用于预防或治疗脱发的药剂学组合物的活性成分。

所述药剂学组合物可以包括所述肽的药剂学有效量(pharmaceuticallyeffective amount)；和/或在药剂学上接受的载体，但不限于此。

在本说明书中所用的术语“药剂学有效量”可以是指足以实现所述药剂学组合物的预防或治疗脱发作用的量。

所述肽和在药剂学上接受的载体的重量比可以是例如500:1至1:500，作为一例，所述重量比可以是450:1至1:450、400:1至1:400、350:1至1:350、300:1至1:300、250:1至1:250、200:1至1:200、150:1至1:150、100:1至1:100、80:1至1:80、60:1至1:60、40:1至1:40、20:1至1:20、10:1至1:10、8:1至1:8、6:1至1:6、4:1至1:4或2:1至1:2，但不限于此。

所述在药剂学上接受的载体是在制剂时通常利用的物质，其包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油等，但不限于此。合适的在药剂学上接受的载体和制剂在Remington'sPharmaceutical Sciences(19th ed.,1995)中有详细描述。

所述药剂学组合物除了所述成分之外，还可以包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂和保鲜剂等，但不限于此。

所述药剂学组合物可以以口服或非口服的方式，优选地以非口服的方式施用，当以非口服的方式施用时，可以以肌肉注射、静脉注射、皮下注射、腹腔注射、局部施用、透皮施用等方式施用，但不限于此。

所述药剂学组合物的1日施用量可以是0.0001至1000μg(微克)、0.001至1000μg、0.01至1000μg、0.1至1000μg或1.0至1000μg，但不限于此，其可以根据制剂化方法、施用方式、患者的年龄、体重、性别、病理状态、饮食、施用时间、施用途径、排泄速度和反应感应性等因素进行多样的处方。

所述药剂学组合物通过本发明所属技术领域的普通技术人员可容易实施的方法，利用在药剂学上接受的载体和/或赋形剂来进行制剂化，从而能够以单位容量的形态制备或内入于多容量容器内来制备。

再一方面提供一种预防或治疗脱发的方法，其包括将药剂学组合物施用于个体，其中所述药剂学组合物包括治疗有效量的、由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽作为活性成分。

在所述药剂学组合物的描述中所提及的术语或组成要素中，与已经提及的相同的术语或组成要素与上述相同。

再一方面提供一种用于防止脱发或促进生发的食品组合物，其包括由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽作为活性成分。

所述食品组合物中所含的作为活性成分的肽的含量可以根据食品的形态、期望的用途等适当地、不受限制地选择，例如，可以以食品总重量的0.01至15wt％添加。此外，例如，健康饮料组合物可以基于100ml以0.02至10g，优选地0.3至1g的比率添加。

有益效果

根据一方面的肽，可以通过抑制毛囊细胞的凋亡，并且抑制脱发相关因子(DKK-1)的表达，从而适用于改善、预防或治疗脱发。

根据一方面的肽，可以通过促进毛囊细胞的活性、增殖或生长，从而适用于促进生发和促进毛发生长等。

根据一方面的肽，因此，所述肽可以包括在化妆品组合物或药剂学组合物中，作为用于改善脱发或促进生发的活性成分。

附图说明

图1示出由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊细胞增殖的效果，确认增加与毛乳头细胞增殖相关的因子β-连环蛋白从细胞质到细胞核的移动的结果。

图2是作为由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊细胞的活性的效果，确认增加与毛乳头细胞的活性和生长相关的因子Lef-1、细胞周期蛋白D1和c-Myc的表达的结果。

图3示出由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊细胞的生长的效果，确认增加与毛乳头细胞的生长相关的因子VEGF、bFGF、KGF和HGF的表达的结果。

图4是作为由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽抑制毛囊细胞的细胞凋亡的效果，确认在减少毛乳头细胞的细胞凋亡蛋白Bax、切割的PARP-1、切割的半胱天冬酶-3和Bcl2的表达的同时，增加抗-细胞凋亡蛋白Bcl2的表达的结果。

图5是作为由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽抑制毛囊细胞的毛囊细胞中脱发相关因子的表达的效果，确认通过DHT处理抑制DKK-1表达途径的结果。

图6是作为由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊毛母细胞的活性的效果，确认增加毛母细胞的活性标志MSX2的表达的结果。

图7是作为由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊外根鞘细胞的活性的效果，确认增加外根鞘细胞的活性标志HA3-Ⅱ、角蛋白5、角蛋白14和角蛋白19的表达的结果。

具体实施方式

以下，将通过实施例更详细地描述。然而，这些实施例仅用于示例性描述，因此本发明的范围不限于这些实施例。

实施例1：肽的合成

通过使用自动肽合成仪(Milligen 9050，Millipore，美国)对如下表1所示的具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽进行合成，并且通过使用C18反相高效液相色谱(HPLC)(Waters Associates，美国)对这些合成的肽进行纯化分离。作为色谱柱，使用了ACQUITYUPLC BEH300 C18(2.1㎜×100㎜，1.7μm Waters Co，美国)。

[表1]

氨基酸序列	SEQ ID NO:
		TKVFPQD	1

实施例2：确认肽促进毛囊细胞的增殖或活性的效果

1、确认促进毛乳头细胞(dermal papilla cell)的增殖机制的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊细胞的增殖的效果。具体地，将人毛囊毛乳头细胞(Human hair follicle dermal papilla cells)以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照组，使用用作脱发治疗剂的米诺地尔(Minoxidil)5μM进行处理。收获细胞，并且使用细胞核蛋白提取试剂盒(Merck，USA)分离细胞核。通过利用β-连环蛋白(β-catenin)抗体(santacruz biotechnology，USA)对与毛乳头细胞的增殖相关的因子β-连环蛋白进行蛋白质印迹。

结果，如图1所示，确认了通过处理由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽，β-连环蛋白从细胞质到细胞核的移动得到增加。通过所述结果，可以确认由于移动到细胞核的β-胡萝卜素增加，毛乳头细胞的增殖机制被激活。

2、确认促进毛乳头细胞的活性的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊细胞的活性的效果。具体地，将人毛囊毛乳头细胞以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照，使用米诺地尔5μM进行处理。收获细胞和分离RNA后，通过使用cDNA合成试剂盒和PCR pre-mix(Intron，韩国)对cDNA进行合成。使用如下表2所示的Lef-1、细胞周期蛋白D1和c-Myc引物进行PCR。

[表2]

结果，如图2所示，确认了通过处理由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽，与毛囊毛乳头细胞的活性和生长相关的因子Lef-1、细胞周期蛋白D1和c-Myc的表达得到增加。

3、确认促进毛乳头细胞的生长的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊细胞的生长因子的表达的效果。具体地，将人毛囊毛乳头细胞以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照，使用米诺地尔5μM进行处理。收获细胞和分离RNA后，通过使用cDNA合成试剂盒和PCR pre-mix对cDNA进行合成，并且通过使用如下表3所示的VEGF、bFGF、KGF和HGF引物进行PCR。

[表3]

结果，如图3所示，确认了通过处理由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽，与毛囊毛乳头细胞的生长相关的因子VEGF、bFGF、KGF和HGF的表达得到增加。

4、确认抑制毛乳头细胞的凋亡的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽调节与毛囊细胞的细胞凋亡相关的蛋白的表达的效果。具体地，将人毛囊毛乳头细胞以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照，使用米诺地尔5μM进行处理。收获细胞和准备细胞溶解物后，通过利用Bax、切割的PARP-1、切割的半胱天冬酶-3或Bcl2抗体(santacruzbiotechnology，USA)对Bax、切割的PARP-1、切割的半胱天冬酶-3或Bcl2进行蛋白质印迹。

结果，如图4所示，确认了通过处理由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成的肽，在毛囊毛乳头细胞的细胞凋亡蛋白Bax、切割的PARP-1、切割的半胱天冬酶-3和Bcl2的表达得到减少的同时，抗-细胞凋亡蛋白Bcl2的表达得到增加。通过所述结果，确认了由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成的肽可以抑制毛囊细胞的凋亡。

5、确认抑制毛乳头细胞中脱发相关因子的表达的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽是否抑制毛囊细胞中脱发相关因子DKK-1的表达。具体地，将人毛囊毛乳头细胞以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用作为刺激剂(stimulator)的10μg/ml的双氢睾酮(DHT：dihydrotestosterone)和0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照，使用抑制雄性激素的药物非那斯特莱(finasteride)50μM进行处理。所述DHT被认为是脱发激素，其通过激活雄激素受体来增加脱发诱发因子DKK-1(Dickkopf-related protein 1)的表达。收获细胞和分离RNA后，通过使用cDNA合成试剂盒和PCR pre-mix对cDNA进行合成，并且通过使用所述表2所示的GAPDH引物和如下表4所示的DKK-1引物进行PCR。

[表4]

结果，如图5所示，确认了由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽可以通过DHT处理抑制脱发诱发因子DKK-1的表达途径。

6、确认促进毛母细胞(germinal matrix cell)的活性的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊毛母细胞(germinalmatrix cell)的活性的效果。具体地，将人毛囊毛母细胞以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照，使用40μM的EGF进行处理。收获细胞和分离RNA后，通过使用cDNA合成试剂盒和PCR pre-mix对cDNA进行合成，并且通过使用所述表2所示的GAPDH引物和如下表5所示的MSX2引物进行PCR。

[表5]

结果，如图6所示，确认了由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽可以增加人毛囊毛母细胞的活性标志MSX2的表达。

7、确认促进外根鞘细胞(outer root sheath cell)的活性的效果

这旨在确认由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽促进毛囊外根鞘细胞(outerroot sheath cell)的活性的效果。具体地，将人毛囊外根鞘细胞以4×10⁵细胞/孔的密度接种在96-孔板，然后培养16小时。更换为无血清培养基后，分别使用0.5μM、5μM或50μM浓度的所述肽进行处理，并且培养1天。作为阳性对照，使用40μM的EGF进行处理。收获细胞和分离RNA后，通过使用cDNA合成试剂盒和PCR pre-mix对cDNA进行合成，并且通过使用所述表2所示的GAPDH引物、如下表6所示的HA3-Ⅱ、角蛋白5、角蛋白14和角蛋白19引物进行PCR。

[表6]

结果，如图7所示，确认了由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽可以增加人毛囊外根鞘细胞的活性标志HA3-Ⅱ、角蛋白5、角蛋白14和角蛋白19的表达。

本发明的上述描述仅用于示例目的，并且本发明所属领域的普通技术人员可以理解，在不改变本发明的技术思想或必要特征的情况下，能够容易地修改为其他具体形式。因此，应当理解，上述实施例在所有方面都是示例性的，而不是限定性的。

序列表

<110> CAREGEN CO., LTD.

<120> 一种具有生发促进活性的肽及其用途

<130> PX060015

<150> KR 10-2019-0101878

<151> 2019-08-20

<160> 31

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽

<400> 1

Thr Lys Val Phe Pro Gln Asp

1 5

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Lef-1正向引物

<400> 2

ccagctattg taacacctca 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Lef-1反向引物

<400> 3

ttcagatgta ggcagctgtc 20

<210> 4

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 细胞周期蛋白D1正向引物

<400> 4

accttcgttg ccctctgtgc cacagatg 28

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 细胞周期蛋白D1反向引物

<400> 5

aggcccggag gcagtccggg t 21

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> c-Myc正向引物

<400> 6

accagcagcg actctgagga ggaac 25

<210> 7

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> c-Myc反向引物

<400> 7

tgaccctctt ggcagcagga tagtcc 26

<210> 8

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GAPDH正向引物

<400> 8

ggtgtgaacg gatttggccg tattg 25

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GAPDH反向引物

<400> 9

ccgttgaatt tgccgtgagt ggagt 25

<210> 10

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VEGF正向引物

<400> 10

atgaactttc tgctgtcttg ggt 23

<210> 11

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VEGF反向引物

<400> 11

tggccttggt gaggtttgat cc 22

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> bFGF正向引物

<400> 12

tgctggtgat gggagttgta 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> bFGF反向引物

<400> 13

cctccaagta gcagccaaag 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> KGF正向引物

<400> 14

tctgtcgaac acagtggtac 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> KGF反向引物

<400> 15

gtgtgtccat ttagctgatg 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HGF正向引物

<400> 16

caatgcctct ggttcccctt 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HGF反向引物

<400> 17

cccctcgagg atttcgacag 20

<210> 18

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GAPDH正向引物

<400> 18

ggtgtgaacg gatttggccg tattg 25

<210> 19

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GAPDH反向引物

<400> 19

ccgttgaatt tgccgtgagt ggagt 25

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> DKK-1正向引物

<400> 20

tgatgagtac tgcgctagtc 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> DKK-1反向引物

<400> 21

ctcctatgct tggtacacac 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> MSX2正向引物

<400> 22

cggtcaagtc ggaaaattca 20

<210> 23

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> MSX2反向引物

<400> 23

gaggagctgg gagtggtaa 19

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HA3-II正向引物

<400> 24

gatcatcgag ctgagacgca 20

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HA3-II反向引物

<400> 25

ctggccccag ggtatctagt 20

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 角蛋白5正向引物

<400> 26

ccctcaagga tgccaggaac 20

<210> 27

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 角蛋白5反向引物

<400> 27

cactgctacc tccggcaag 19

<210> 28

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 角蛋白14正向引物

<400> 28

ccaagacaga ggagctgaac c 21

<210> 29

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 角蛋白14反向引物

<400> 29

gactgcgatc cagaggagac c 21

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 角蛋白19正向引物

<400> 30

cgcggcgtat ccgtgtcctc 20

<210> 31

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 角蛋白19反向引物

<400> 31

agcctgttcc gtctcaaact tggt 24

Claims

1.一种由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的肽。

2.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽的N-端是与选自由乙酰基、芴基甲氧基羰基、甲酰基、棕榈酰基、肉豆蔻基、硬脂基、丁氧基羰基、烯丙氧基羰基以及聚乙二醇组成的组中的任何一种保护基结合的。

3.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽的C-端是与选自由氨基、叔烷基以及叠氮化合物组成的组中的任何一种保护基结合的。

4.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽显示选自以下特性中的任何一种或多种：

(a)促进毛囊细胞的活性；

(b)促进毛囊细胞的增殖；

(c)抑制毛囊细胞的凋亡；以及

(d)抑制DKK-1的表达。

5.一种用于改善脱发或促进生发的化妆品组合物，其包括权利要求1至4中任何一项的肽作为活性成分。

6.一种用于预防或治疗脱发的药剂学组合物，其包括权利要求1至4中任何一项的肽作为活性成分。